專(zhuān)利名稱：光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及檢測(cè)試劑技術(shù)領(lǐng)域，屬于醫(yī)學(xué)臨床診斷，是一種光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方。
背景技術(shù)：
谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)是一種非血漿特異酶，廣泛存在于機(jī)體內(nèi)各器官組織中，尤其以肝臟含量為最多。當(dāng)這些富含谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)的組織細(xì)胞受損時(shí)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)就從細(xì)胞中釋放增加，導(dǎo)致血液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活力迅速上升，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平的測(cè)定即可反映這些組織的受損情況。
病毒性肝炎在世界范圍內(nèi)廣泛傳播，已經(jīng)嚴(yán)重威脅著人類(lèi)身體健康。谷丙轉(zhuǎn)氨酶升高已普遍被認(rèn)為是目前臨床診斷肝炎活動(dòng)性最靈敏的指標(biāo)之一，是目前肝臟疾病診斷和健康體檢應(yīng)用最多的酶類(lèi)測(cè)定項(xiàng)目，也是獻(xiàn)血者篩選的一個(gè)非特異性指標(biāo)。酮體粉法、賴氏法是應(yīng)用了很久的、最為普遍的檢測(cè)方法。但酮體粉法因沒(méi)有嚴(yán)格的測(cè)定條件，試劑干擾因素較多，判定結(jié)果的反應(yīng)是定性反應(yīng)，假陽(yáng)性率高且誤差較大，已被衛(wèi)生部明令淘汰；而賴氏法測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)只能用常規(guī)的手工操作，費(fèi)工、費(fèi)時(shí)(一次測(cè)定需要30min)、且檢測(cè)試劑很容易受血清中脂肪、溶血、黃疸等因素的影響，推廣普及難度較大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)測(cè)試方法的不足，向臨床提供一種穩(wěn)定可靠、反應(yīng)速度快、內(nèi)源性干擾小、試劑用量少、測(cè)試結(jié)果準(zhǔn)確、線性測(cè)試范圍大，方便配制且成本較低、優(yōu)于常規(guī)檢測(cè)方法且與常規(guī)方法有較高相關(guān)性的測(cè)試試劑，從而建立一種方便快速的谷丙轉(zhuǎn)氨酶現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)方法，可解決血站、基層醫(yī)療單位及大批量標(biāo)本體檢的衛(wèi)生醫(yī)療工作。
本發(fā)明的再一目的是提供一種測(cè)試試劑配方，該試劑可用于醫(yī)學(xué)臨床定量測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶，適宜于干法測(cè)試；可進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)，滿足醫(yī)學(xué)體檢的需要并能有效的消除個(gè)體間的交叉感染。
為達(dá)到以上目的，本發(fā)明的技術(shù)解決方案是提供一種光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其包括至少一種酶反應(yīng)試劑，至少一種還原性顏色指示劑，至少一種輔基輔酶類(lèi)酶促進(jìn)劑，至少一種有機(jī)表面活性劑，至少一種堿金屬或堿土金屬鹽類(lèi)穩(wěn)定劑和至少一種中性緩沖劑。
所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其所述酶反應(yīng)試劑，是由L-丙胺酸、α-酮戊二酸、磷酸鈉、丙酮酸氧化酶、過(guò)氧化物酶等組成。
所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其所述酶反應(yīng)試劑中，L-丙胺酸濃度范圍在50.0～200.0mM/L，優(yōu)選為90.0mM/L；α-酮戊二酸濃度范圍在1.0～50.0mM/L，優(yōu)選為4.0mM/L；磷酸鈉濃度范圍10.0～50.0mM/L，優(yōu)選為30mM/L；丙酮酸氧化酶濃度范圍100.0～500.0U/mL，優(yōu)選為300.0U/mL；過(guò)氧化物酶濃度范圍50.0～1000.0U/mL，優(yōu)選為600.0U/mL。
所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其所述還原性顏色指示劑，是從1-氨基-8-萘酚-2，4-二磺酸、苯酚、1，3，5-三硝基苯、4-胺基安替吡啉、3，3-雙(4-羥苯基)-1(3H)-異苯并呋喃酮、2，4-二氯酚、對(duì)二甲氨基偶氮苯磺酸鈉、焦培酸、對(duì)硝基苯酚、N，N-二甲基苯胺、二苯基卡巴阱中至少選取一種組成。
所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其所述還原性顏色指示劑，其濃度范圍在0.5～50.0mM/L，優(yōu)選為40.0mM/L。
所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其所述輔基輔酶類(lèi)酶促進(jìn)劑，是從N-苯基-N’-環(huán)己基對(duì)苯二胺、焦磷酸硫胺素、辛基化二苯胺、黃素腺嘌呤二核苷酸、2-巰基苯并咪唑鋅鹽、5’-磷酸吡哆醛中至少選取一種組成。
所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其所述的輔基輔酶類(lèi)酶促進(jìn)劑，其濃度范圍在0.10～5.0mM/L，優(yōu)選為0.30mM/L。
所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其所述有機(jī)表面活性劑，是從硬脂酸?；樗徕}、曲拉通、烷基酰氨基磺酸鈉、亞甲基二萘磺酸鈉、椰子酸二乙醇胺縮合物、十二烷基叔胺鹽中至少選取一種組成。
所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其所述有機(jī)表面活性劑，其濃度范圍在0.50～5.0g/L，優(yōu)選為3.5g/L。
所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其所述堿金屬或堿土金屬鹽類(lèi)穩(wěn)定劑，是從氯化鋇、硫酸鎂、氯化鈉、硫酸氫鈉、硝酸鉀中至少選取一種組成。
所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其所述堿金屬或堿土金屬鹽類(lèi)穩(wěn)定劑，其濃度范圍在5.0～30.0mM/L，優(yōu)選為10.0mM/L。
所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其所述中性緩沖劑，是從醋酸、氫氧化鈉、磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉、氨水、碳酸鈉-碳酸氫鈉中至少選取一種組成。
所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其所述中性緩沖劑，其濃度范圍在1.0～10.0g/L，優(yōu)選為5.0g/L。
所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其所述中性緩沖劑，能調(diào)節(jié)該光學(xué)快速檢測(cè)用試劑的pH值，其pH值范圍在6.0～8.0之間。


圖1是利用本發(fā)明試劑配方檢測(cè)人體血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶與日立7180大型生化分析儀的相關(guān)性測(cè)試示意圖。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明提出了一種光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，該試劑配方至少包括以下六種試劑至少一種酶反應(yīng)試劑，是由L-丙胺酸、α-酮戊二酸、磷酸鈉、丙酮酸氧化酶、過(guò)氧化物酶等組成。其中，L-丙胺酸濃度范圍在50.0～200.0mM/L，優(yōu)選為90.0mM/L；α-酮戊二酸濃度范圍在1.0～50.0mM/L，優(yōu)選為4.0mM/L；磷酸鈉濃度范圍10.0～50.0mM/L，優(yōu)選為30mM/L；丙酮酸氧化酶濃度范圍100.0～500.0U/mL，優(yōu)選為300.0U/mL；過(guò)氧化物酶濃度范圍50.0～1000.0U/mL，優(yōu)選為600.0U/mL。
該酶反應(yīng)試劑可與谷丙轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)生成最終產(chǎn)物，最終產(chǎn)物生成量與血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶濃度成比例。
至少一種還原性顏色指示劑，是從1-氨基-8-萘酚-2，4-二磺酸、苯酚、1，3，5-三硝基苯、4-胺基安替吡啉、3，3-雙(4-羥苯基)-1(3H)-異苯并呋喃酮、2，4-二氯酚、對(duì)二甲氨基偶氮苯磺酸鈉、焦培酸、對(duì)硝基苯酚、N，N-二甲基苯胺、二苯基卡巴阱中選取，所用濃度范圍在0.5～50.0mM/L，優(yōu)選為40.0mM/L。
該還原性顏色指示劑的存在可與最終產(chǎn)物發(fā)生顏色變化，顏色深淺與血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶濃度成比例，利用光的反射吸收原理即可定量檢測(cè)血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶。
至少一種輔基輔酶類(lèi)酶促進(jìn)劑，是從N-苯基-N’-環(huán)己基對(duì)苯二胺、焦磷酸硫胺素、辛基化二苯胺、黃素腺嘌呤二核苷酸、2-巰基苯并咪唑鋅鹽、5’-磷酸吡哆醛中選取，所用濃度范圍在0.10～5.0mM/L，優(yōu)選為0.30mM/L。
該輔基輔酶類(lèi)酶促進(jìn)劑可有效提高反應(yīng)試劑中酶的活性，從而加快反應(yīng)速度，縮短反應(yīng)時(shí)間。
至少一種有機(jī)表面活性劑，是從硬脂酸?；樗徕}、曲拉通、烷基酰氨基磺酸鈉、亞甲基二萘磺酸鈉、椰子酸二乙醇胺縮合物、十二烷基叔胺鹽中選取，所用濃度范圍在0.50～5.0g/L，優(yōu)選為3.5g/L。
所選用的有機(jī)表面活性劑可使所滴加試樣能夠迅速鋪開(kāi)，充分與反應(yīng)試劑充分接觸，加快反應(yīng)速度。
至少一種堿金屬或堿土金屬鹽類(lèi)穩(wěn)定劑，是從氯化鋇、硫酸鎂、氯化鈉、硫酸氫鈉、硝酸鉀中選取，所用濃度范圍在5.0～30.0mM/L，優(yōu)選為10.0mM/L。
該堿金屬或堿土金屬鹽類(lèi)穩(wěn)定劑可以增加反應(yīng)試劑中酶的穩(wěn)定性，使顯色穩(wěn)定。
至少一種中性緩沖劑，是從醋酸、氫氧化鈉、磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉、氨水、碳酸鈉-碳酸氫鈉中選取，所用濃度范圍在1.0～10.0g/L，優(yōu)選為5.0g/L。
所用中性緩沖劑具有調(diào)節(jié)試劑pH的功能，調(diào)節(jié)試劑pH值在6.0～8.0之間。
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行描述實(shí)施例1從下列化合物所示濃度制備了一種試劑化合物 濃度L-丙胺酸 90.0mM/Lα-酮戊二酸4.0mM/L磷酸鈉 30mM/L丙酮酸氧化酶 300.0U/mL過(guò)氧化物酶 600.0U/mL4-胺基安替吡啉 40.0mM/L焦磷酸硫胺素 0.11mM/L黃素腺嘌呤二核苷酸 0.30mM/L5’-磷酸吡哆醛 0.50mM/L烷基酰氨基磺酸鈉 0.25g/L硫酸鎂 10.0mM/L磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉 5.0g/L將以上試劑按所示濃度進(jìn)行混合，并調(diào)節(jié)pH在6.0～8.0之間，從而制備出一種谷丙轉(zhuǎn)氨酶測(cè)試試劑。利用該試劑，通過(guò)光學(xué)檢測(cè)，在北京紅十字血液中心檢驗(yàn)科與日立7180大型生化檢測(cè)儀做對(duì)比實(shí)驗(yàn)，測(cè)試時(shí)間60s，對(duì)比結(jié)果如圖1所示，圖中橫坐標(biāo)是日立7180大型生化檢測(cè)儀測(cè)試值，屬于標(biāo)準(zhǔn)值，縱坐標(biāo)是本試劑與配套儀器的檢測(cè)值，與橫坐標(biāo)日7180大型生化檢測(cè)儀測(cè)試值做對(duì)比。兩種試劑測(cè)試結(jié)果相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.985，獲得了較好的檢測(cè)結(jié)果，可以滿足醫(yī)學(xué)臨床中現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的需要。
以上實(shí)施例只是為了說(shuō)明本發(fā)明，而不是對(duì)本發(fā)明的限制。在上述說(shuō)明的基礎(chǔ)上，可以對(duì)本發(fā)明作許多改進(jìn)和改變。在所附權(quán)利要求書(shū)的范圍內(nèi)，本發(fā)明可以有不同于上述的其它實(shí)現(xiàn)方式，選用其它同性相關(guān)試劑、改變?cè)噭舛鹊确椒ň诒景l(fā)明專(zhuān)利要求保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，適用于干法測(cè)試，包括至少一種酶反應(yīng)試劑，至少一種還原性顏色指示劑，至少一種輔基輔酶類(lèi)酶促進(jìn)劑，至少一種有機(jī)表面活性劑，至少一種堿金屬或堿土金屬鹽類(lèi)穩(wěn)定劑和至少一種中性緩沖劑。
2.如權(quán)利要求1所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，所述酶反應(yīng)試劑，是由L-丙胺酸、α-酮戊二酸、磷酸鈉、丙酮酸氧化酶、過(guò)氧化物酶組成。
3.如權(quán)利要求2所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，所選用的酶反應(yīng)試劑中，L-丙胺酸濃度范圍在50.0～200.0mM/L；α-酮戊二酸濃度范圍在1.0～50.0mM/L；磷酸鈉濃度范圍10.0～50.0mM/L；丙酮酸氧化酶濃度范圍100.0～500.0U/mL；過(guò)氧化物酶濃度范圍50.0～1000.0U/mL。
4.如權(quán)利要求3所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，所選用的酶反應(yīng)試劑中，L-丙胺酸濃度范圍為90.0mM/L；α-酮戊二酸濃度范圍為4.0mM/L；磷酸鈉濃度范圍為30mM/L；丙酮酸氧化酶濃度范圍為300.0U/mL；過(guò)氧化物酶濃度范圍為600.0U/mL。
5.如權(quán)利要求1所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，所述還原性顏色指示劑，是從1-氨基-8-萘酚-2，4-二磺酸、苯酚、1，3，5-三硝基苯、4-胺基安替吡啉、3，3-雙(4-羥苯基)-1(3H)-異苯并呋喃酮、2，4-二氯酚、對(duì)二甲氨基偶氮苯磺酸鈉、焦培酸、對(duì)硝基苯酚、N，N-二甲基苯胺、二苯基卡巴阱中至少選取一種組成。
6.如權(quán)利要求4所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，所選用的還原性顏色指示劑，其濃度范圍為0.5～50.0mM/L。
7.如權(quán)利要求5所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，所選用的還原性顏色指示劑，其濃度范圍為40.0mM/L。
8.如權(quán)利要求1所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，所述輔基輔酶類(lèi)酶促進(jìn)劑，是從N-苯基-N’-環(huán)己基對(duì)苯二胺、焦磷酸硫胺素、辛基化二苯胺、黃素腺嘌呤二核苷酸、2-巰基苯并咪唑鋅鹽、5’-磷酸吡哆醛中至少選取一種組成。
9.如權(quán)利要求8所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，所選用的輔基輔酶類(lèi)酶促進(jìn)劑，其濃度范圍在0.10～5.0mM/L，優(yōu)選為0.30mM/L。
10.如權(quán)利要求9所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，所選用的輔基輔酶類(lèi)酶促進(jìn)劑，其濃度范圍為0.30mM/L。
11.如權(quán)利要求1所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，所述有機(jī)表面活性劑，是從硬脂酸?；樗徕}、曲拉通、烷基酰氨基磺酸鈉、亞甲基二萘磺酸鈉、椰子酸二乙醇胺縮合物、十二烷基叔胺鹽中至少選取一種組成。
12.如權(quán)利要求11所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，所選用的有機(jī)表面活性劑，其濃度范圍在0.50～5.0g/L，優(yōu)選為3.5g/L。
13.如權(quán)利要求12所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，所選用的有機(jī)表面活性劑，其濃度范圍為3.5g/L。
14.如權(quán)利要求1所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，所述堿金屬或堿土金屬鹽類(lèi)穩(wěn)定劑，是從氯化鋇、硫酸鎂、氯化鈉、硫酸氫鈉、硝酸鉀中至少選取一種組成。
15.如權(quán)利要求14所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，所選用的堿金屬或堿土金屬鹽類(lèi)穩(wěn)定劑，其濃度范圍在5.0～30.0mM/L。
16.如權(quán)利要求15所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，所選用的堿金屬或堿土金屬鹽類(lèi)穩(wěn)定劑，其濃度范圍為10.0mM/L。
17.如權(quán)利要求1所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，所述中性緩沖劑，是從醋酸、氫氧化鈉、磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉、氨水、碳酸鈉-碳酸氫鈉中選取一種或多種組成。
18.如權(quán)利要求1所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，所選用的中性緩沖劑，其濃度范圍在1.0～10.0g/L。
19.如權(quán)利要求18所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，所選用的中性緩沖劑，其濃度范圍為5.0g/L。
20.如權(quán)利要求1、18或19所述的光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，其特征在于，所選用的中性緩沖劑，能調(diào)節(jié)該光學(xué)快速檢測(cè)用試劑的pH值，其pH值范圍在6.0～8.0之間。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種光學(xué)快速檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑配方，適用于干法測(cè)試。該試劑配方包括至少一種酶反應(yīng)試劑，至少一種還原性顏色指示劑，至少一種輔基輔酶類(lèi)酶促進(jìn)劑，至少一種有機(jī)表面活性劑，至少一種堿金屬或堿土金屬鹽類(lèi)穩(wěn)定劑和至少一種中性緩沖劑。該試劑具有使用穩(wěn)定可靠、反應(yīng)速度快、內(nèi)源性干擾小、試劑用量少、測(cè)試結(jié)果準(zhǔn)確、線性測(cè)試范圍大，方便配制且成本較低等優(yōu)點(diǎn)，很適合在醫(yī)學(xué)診斷上用于谷丙轉(zhuǎn)氨酶的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)用。
文檔編號(hào)G01N33/48GK101029871SQ20061005877
公開(kāi)日2007年9月5日 申請(qǐng)日期2006年3月3日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月3日
發(fā)明者何保山, 蔡新霞, 周愛(ài)玉, 岳偉偉, 李華清, 劉春秀 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院電子學(xué)研究所