T(四噻唑藍(lán)）：Sigma公司，溶于PBS溶液中，制成5mg/mL的溶液，過濾除菌后 使用，避光保存；
[0074] 阿霉素（ADR):北京華豐聯(lián)合技術(shù)有限公司。
[0075] DMSO :二甲基亞楓，Sigma 公司；
[0076] (5)試驗(yàn)方法
[0077] MCF-7、U-118MG 細(xì)胞選用 DMEM 培養(yǎng)基，U-87MG 細(xì)胞選用 MEM 培養(yǎng)基、MDA-MB-468 細(xì)胞選用L-15培養(yǎng)基，HCT 116細(xì)胞選用McCoy's 5A培養(yǎng)基，其他細(xì)胞選用RPMI-1640培 養(yǎng)基。培養(yǎng)基中均含10%滅火的胎牛血清和80U · mL 1青霉素和0. 08mg · mL 1鏈霉素。
[0078] 將生長狀態(tài)良好、處于對(duì)數(shù)生長期的MCF-7、SK-BR-3、A549、HCT 116、U-118MG、 U-87MG、MDA-MB-468細(xì)胞按I X IO4個(gè)/mL的密度接種于96孔板，每孔100 μ 1。置于37°C、 5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12小時(shí)待貼壁。加藥細(xì)胞孔按預(yù)設(shè)的濃度梯度加入待測(cè)、經(jīng)滅菌處 理的溶于培養(yǎng)基的化合物8,每孔200 μ 1，空白細(xì)胞孔加入等體積的培養(yǎng)基，對(duì)照細(xì)胞孔按 預(yù)設(shè)的濃度梯度加入等體積溶于培養(yǎng)基的阿霉素（ADR)，平行6孔。在37°C、5% CO2培養(yǎng) 箱中培養(yǎng)48小時(shí)后，每孔加入10 μ 1濃度為5mg/mL的MTT溶液，繼續(xù)置于37°C、5% 0)2培 養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時(shí)。小心吸出上清液，每孔加入150 μ I DMSO溶解紫色殘留物（甲瓚），平 板振蕩10分鐘使沉淀全部溶解，于酶標(biāo)儀上測(cè)定〇. D.值（吸光度），波長570nm。
[0079] 按照公式"相對(duì)生存率=(D含藥-D空白）AD對(duì)照-D空白）X 100% "計(jì)算每一 個(gè)樣品濃度下的樣品對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率。
[0080] 實(shí)驗(yàn)平行重復(fù)3次，以抑制率對(duì)化合物濃度作圖，計(jì)算本發(fā)明化合物8的IC5。（半 數(shù)有效抑制濃度）值。同時(shí)采用阿霉素（ADR)作為陽性對(duì)照藥物。
[0081] (6)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0082] 表1化合物8LU1501抗腫瘤細(xì)胞增殖活性（IC5Q±SD μ M)
[0084] 如表1所示，給出了化合物8抗腫瘤細(xì)胞增殖活性的測(cè)試結(jié)果，結(jié)果表明所制備的 新型喹唑啉衍生物對(duì)上述腫瘤細(xì)胞具有抑制作用，可用于制備抗腫瘤制劑。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種新型喹唑啉衍生物L(fēng)U1501，其化學(xué)命名為N-[(4-氟苯基）甲基]-4-N-{7-甲 氧基-6-[(2-吡咯烷-1-基）羥乙基]喹唑啉_4_基}苯-1，4_二胺，及該化合物的藥學(xué) 上可接受的鹽、溶劑化物或者藥物前體或者立體異構(gòu)體或者互變異構(gòu)體或者代謝物。2. 權(quán)利要求1所述的新型喹唑啉衍生物L(fēng)U1501的制備方法，其特征在于，包括如下步 驟： 51 :在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，向S0C12中緩慢滴加DMF催化，然后加入7-甲氧基-4-氧-3, 4-二 氫喹唑啉-6-基乙酸酯，60~100°C加熱3~6小時(shí)，反應(yīng)生成化合物（1)，即4-氯-7-甲 氧基喹唑啉-6-基乙酸酯； 52 :將化合物（1)在冰浴下邊攪拌邊緩慢滴加氨甲醇溶液，反應(yīng)液在10°C以下，邊攪拌 邊反應(yīng)30分鐘以上，過濾，濾渣用乙醚洗滌，得到還原產(chǎn)物化合物（2)，即4-氯-7-甲氧基 喹唑啉-6-醇； 53 :在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將化合物（2)與N-(2-羥乙基）吡咯烷、PPh3溶解于四氫呋喃， 在冰浴下邊攪拌邊分批加入DTAD，反應(yīng)6小時(shí)以上，生成化合物（3)，即4-氯-7-甲氧 基-6-[ (2-吡咯烷-1-基）羥乙基]喹唑啉； 54 :氬氣保護(hù)下，將1-氟-4-硝基苯、4-氟苯基甲胺和碳酸鈉以DMSO溶解，100~ 120°C攪拌反應(yīng)4~12小時(shí)，生成化合物（4)，即N-[ (4-氟苯基）甲基]-4-硝基苯胺； 55 :在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，以二氯甲烷為溶劑，在冰浴條件下將化合物（4)分批加入Boc20， 然后加入DMAP催化，攪拌反應(yīng)4~12小時(shí)，進(jìn)行仲胺基Boc保護(hù)，生成化合物（5)，即 N_[ (4-氟苯基）甲基]-N-(4-硝基苯基）氨基甲酸叔丁酯； 56 :將化合物（5)溶于甲醇，加入10%Pd/C催化，通入H2，攪拌反應(yīng)4~12小時(shí)，還原 成化合物（6)，即N-(4-氨基苯基）-N-[ (4-氟苯基）甲基]氨基甲酸叔丁酯； 57 :氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將化合物（6)與化合物（3)溶于異丙醇，在對(duì)甲苯磺酸催化下，80~ 100°C攪拌反應(yīng)3~12小時(shí)，生成化合物（7)，即N-[(4-氟苯基）甲基]-N-4-{7-甲氧 基-6-[ (2-吡咯烷-1-基）羥乙基]喹唑啉-4-基}氨基苯氨基甲酸叔丁酯； 58 :將化合物（7)溶于二氯甲烷/三氟乙酸混合溶劑，25~45°C下攪拌1~6小時(shí)，脫 除Boc，生成化合物（8)，即N- [ (4-氟苯基）甲基]-4-N- {7-甲氧基-6- [ (2-吡咯烷-1-基） 羥乙基]喹唑啉-4-基}苯-1，4-二胺。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的新型喹唑啉衍生物L(fēng)U1501的制備方法，其特征在于，步驟S1 中，DMF的滴速為2~3ml/min，S0C12、DMF、7-甲氧基-4-氧-3, 4-二氫喹唑啉-6-基乙酸 酯的用量比為500~1000mL:10~20mL:100~150g;步驟S2中，所述氨甲醇溶液的濃度 為7M，氨甲醇溶液的滴速為3~10ml/min，氨甲醇溶液的用量為每克化合物（1)加入10~ 20ml〇4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的新型喹唑啉衍生物L(fēng)U1501的制備方法，其特征在于，步驟S3 中，所述的DTAD分3~6批加入，間隔2~4小時(shí)/次，其中，N- (2-羥乙基）吡咯烷、PPh3、 DTAD、化合物（2)的摩爾用量比為1:1:1:0.8~1.4。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的新型喹唑啉衍生物L(fēng)U1501的制備方法，其特征在于，步驟S4 中，1-氟-4-硝基苯、4-氟苯基甲胺、碳酸鈉的摩爾用量比為1:1:0. 8~1. 4。6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的新型喹唑啉衍生物L(fēng)U1501的制備方法，其特征在于，步驟S5 中，所述的化合物（4)分3~6批加入Boc20,間隔5~10分鐘/次，其中，化合物（4)與 Boc20的摩爾用量比為1:0. 8~1. 5 ;化合物⑷與DMAP的摩爾用量比為1:0. 8~1. 5。7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的新型喹唑啉衍生物L(fēng)U1501的制備方法，其特征在于，步驟S6 中，10%Pd/C的加入量為每lOmmol化合物（5)加入0· 6~1. 5g10%Pd/C。8. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的新型喹唑啉衍生物L(fēng)U1501的制備方法，其特征在于，步驟S7 中，化合物（6)、化合物（3)、對(duì)甲苯磺酸的摩爾用量比為1:1:1. 1~1. 5。9. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的新型喹唑啉衍生物L(fēng)U1501的制備方法，其特征在于，步驟S8 中，所述的二氯甲烷/三氟乙酸混合溶劑為二氯甲烷與三氟乙酸按照體積比2~5:1混合 得到，其用量為每lg化合物（7)加混合溶劑10~20mL。10. -種藥物組合物，包括上述權(quán)利要求1中所述的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。11. 權(quán)利要求1所述的化合物，或者權(quán)利要求10所述的藥物組合物在制備藥劑中的用 途。12. 權(quán)利要求1所述的新型喹唑啉衍生物L(fēng)U1501或者該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、 溶劑化物或者藥物前體或者立體異構(gòu)體或者互變異構(gòu)體或者代謝物在制備抗腫瘤劑中的 應(yīng)用。13. 權(quán)利要求1所述的新型喹唑啉衍生物L(fēng)U1501或者該化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、 溶劑化物或者藥物前體或者立體異構(gòu)體或者互變異構(gòu)體或者代謝物與一種或多種抗癌藥 劑結(jié)合在制備用于治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種新型喹唑啉衍生物L(fēng)U1501及其制備方法和應(yīng)用，其化學(xué)命名為N-[(4-氟苯基)甲基]-4-N-{7-甲氧基-6-[(2-吡咯烷-1-基)羥乙基]喹唑啉-4-基}苯-1,4-二胺。本發(fā)明的喹唑啉衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物和水合物對(duì)MCF-7、SK-BR-3、A549、HCT？116、U-118MG、U-87MG、MDA-MB-468具有優(yōu)秀的抗腫瘤體內(nèi)外活性，在制備抗腫瘤藥物的上具有較好的應(yīng)用前景。
【IPC分類】C07D239/94, A61P35/00, A61K31/517
【公開號(hào)】CN105384699
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510698580
【發(fā)明人】盧光明, 張卓立, 潘璟
【申請(qǐng)人】中國人民解放軍南京軍區(qū)南京總醫(yī)院
【公開日】2016年3月9日
【申請(qǐng)日】2015年10月23日