本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一類青藤堿衍生物及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：：青藤堿具有抗炎、免疫、鎮(zhèn)痛、降壓、抗心律失常等多種生理活性，用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及心律失常等疾病。青藤堿對光、熱不穩(wěn)定，且用藥劑量偏大，具有白細(xì)胞減少及胃腸道反應(yīng)等副作用，因此，對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾與優(yōu)化研究具有實(shí)際的應(yīng)用價值。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的之一是提供一種青藤堿衍生物。本發(fā)明所提供的青藤堿衍生物，其結(jié)構(gòu)式如式i所示：上述式i中，r具體可為h、3,4-二氯、2,4-二氯、2-氯、4-氟、3,4-二甲氧基、2-甲基、3-氯或4-甲氧基。上述式i所示的青藤堿衍生物是按照包括下述步驟的方法制備得到的：使式iii所示二酮類底物及式ii所示酰肼類底物與醋酸銨反應(yīng)，得到上述式i所示的青藤堿衍生物；式ii中，r具體可為h、3,4-二氯、2,4-二氯、2-氯、4-氟、3,4-二甲氧基、2-甲基、3-氯或4-甲氧基。上述方法中，式iii所示二酮類底物及式ii所示酰肼類底物與醋酸銨的摩爾比依次可為1：0.5-2.0：5.0-20.0，具體可為1:1:10。所述反應(yīng)在乙酸中進(jìn)行。所述反應(yīng)在微波作用下進(jìn)行。所述反應(yīng)的溫度可為80-150度，具體可為120度；時間可為1-15min，具體可為4min、8min。本發(fā)明的另一目的是提供上述式i所示的青藤堿衍生物的應(yīng)用。本發(fā)明所提供的式i所示的青藤堿衍生物的應(yīng)用是其在下述方面的應(yīng)用：1)在制備真核生物腫瘤細(xì)胞增殖抑制劑中的應(yīng)用；2)在制備預(yù)防和/或治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。上述應(yīng)用中，所述真核生物為哺乳動物；所述腫瘤細(xì)胞為癌細(xì)胞；所述癌細(xì)胞可為胃癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞和胎盤絨毛癌細(xì)胞；所述胃癌細(xì)胞具體可為人胃癌細(xì)胞株sgc-7901或人胃癌細(xì)胞株(hgc-27)；所述肺癌細(xì)胞具體可為人肺癌細(xì)胞株(h446)；所述胎盤絨毛癌細(xì)胞具體可為人胎盤絨毛癌細(xì)胞(bewo)。所述腫瘤為癌；所述癌為胃癌、肺癌和胎盤絨毛癌。本發(fā)明還提供一種真核生物腫瘤細(xì)胞增殖抑制劑或預(yù)防和/或治療腫瘤藥物，其包含式i所示的青藤堿衍生物。本發(fā)明提供了一種新型的青藤堿衍生物及其制備方法，該工藝反應(yīng)條件溫和，操作方便，成本低，有著廣泛的工業(yè)應(yīng)用前景。本發(fā)明所提供的青藤堿衍生物顯示一定的抗人胎盤絨毛癌、抗人胃癌和抗人肺癌活性，為新藥篩選及開發(fā)奠定了基礎(chǔ)，具有較好的實(shí)用價值。附圖說明圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中化合物1-3a的合成路線圖。具體實(shí)施方式下面通過具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行說明，但本發(fā)明并不局限于此。下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法；下述實(shí)施例中所用的試劑、材料等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。下述實(shí)施例中所使用的式iii所示二酮原料化合物由青藤堿在6n鹽酸作用下，于100℃反應(yīng)制得；具體合成方法參見文獻(xiàn)(bioorganic&medicinalchemistry,2011,(19),3096–3104.)。本發(fā)明所使用的式ii所示的原料酰肼由相應(yīng)的芳香乙酸酯類化合物和水合肼在乙醇溶劑中，于回流反應(yīng)制得；具體合成方法參見文獻(xiàn)(bioorganic&medicinalchemistry,2012,(20),903–909)。實(shí)施例1、的制備1-3a:(6s,6as,12ar)-10-benzyl-2-methoxy-15-methyl-6,6a,7,12-tetrahydro-5h-6,12a-(epiminoethano)phenanthro[3,2-e][1,2,4]triazin-1-ol根據(jù)附圖1的化合物1-3a的合成路線圖制備化合物1-3a。將原料二酮2(式iii所示二酮化合物，0.0743g，0.2356mmol)，苯乙酰肼1-2a(0.035g，0.2431mmol)，醋酸銨(0.1815g，2.3546mmol)，乙酸15ml加到50ml圓底燒瓶中，微波下反應(yīng)4min。加入氫氧化鈉溶液調(diào)ph至8-9；二氯甲烷萃取四次，合并有機(jī)層，后加入飽和食鹽水，無水硫酸鈉除水；減壓濃縮，柱層析純化，得到淡黃色固體粉末1-3a(0.03937g，39％)。rf＝0.33(vch2cl2：vch3oh＝15：1)。結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)：1hnmr(500mhz，cdcl3)：δ＝7.29(d，j＝7.4hz，2h，ar)，7.20～7.17(m，2h，ar)，7.14～7.09(m，1h，ar)，6.67～6.68(m，2h，ar)，4.90(d，j＝18.0hz，1h)，4.29(d，j＝13.8hz，1h)，4.21(d，j＝13.8hz，1h)，3.59(s，3h，ch3)，3.20～3.15(m，2h)，3.04～2.85(m，3h)，2.71(d，j＝18.0hz，1h)，2.51～2.40(m，2h)，2.33(s，3h，ch3)，2.20～2.12(m，1h)，2.03(d，j＝12.5hz，1h)，1.83(td，j＝12.5，4.1hz，1h)。實(shí)施例2、的制備1-3c：(6s,6as,12ar)-10-(3,4-dichlorobenzyl)-2-methoxy-15-methyl-6,6a,7,12-tetrahydro-5h-6,12a-(epiminoethano)phenanthro[3,2-e][1,2,4]triazin-1-ol將原料二酮2(1.3334g，4.2279mmol)，3,4-二氯苯乙酰肼1-2c(1.0060g,4.5789mmol)，醋酸銨(4.3383g，0.05628mol)乙酸30ml加到100ml圓底燒瓶中，微波下反應(yīng)8min。加入氫氧化鈉溶液調(diào)ph至8-9；二氯甲烷萃取四次，合并有機(jī)層，后加入飽和食鹽水，無水硫酸鈉除水；減壓蒸餾，柱層析純化，得到淡黃色固體粉末1-3c(0.6519g，31％)。結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)：1hnmr(500mhz，cdcl3)：δ＝7.37～7.35(m，1h)，7.17～7.16(m，2h)，6.17(d，j＝8.4hz，1h，ar)，6.67(d，j＝8.4hz，1h)，6.13(s，1h)，4.80(d，j＝18hz，1h)，4.44(s，2h，ch2)，3.82(s，3h，ch3)，3.36～3.15(m，5h)，3.14～2.97(m，2h)，2.90(s，3h，ch3)，2.75～2.66(m，2h)，2.26～2.12(m，2h)。實(shí)施例3、的制備1-3d：(6s,6as,12ar)-10-(2,4-dichlorobenzyl)-2-methoxy-15-methyl-6,6a,7,12-tetrahydro-5h-6,12a-(epiminoethano)phenanthro[3,2-e][1,2,4]triazin-1-ol將原料二酮2(0.6624g，2.1003mmol)，2,4-二氯苯乙酰肼1-2d(0.5574g，2.5443mmol)，醋酸銨(1.6189g，0.02100mol)，乙酸20ml加到50ml圓底燒瓶中，微波下反應(yīng)7min。加入氫氧化鈉溶液調(diào)ph至8-9；二氯甲烷萃取四次，合并有機(jī)層，后加入飽和食鹽水，無水硫酸鈉除水；減壓蒸餾，柱層析純化，得到淡黃色固體粉末1-3d(0.3447g，33％)。結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)：1hnmr(500mhz，cdcl3)：δ＝7.39～7.37(m，1h，ar)，7.18(dd，j＝8.2，1.9hz，1h，ar)，7.17(s，1h，ar)，6.72(d，j＝8.4hz，1h，ar)，6.68(d，j＝8.4hz，1h，ar)，6.07(s，1h)，4.81(d，j＝18.0hz，1h)，4.46(s，2h，ch2)，3.83(s，3h，ch3)，3.43(dd，j＝19.8，6.7hz，1h)，3.33(dd，j＝18.0，6.5hz，1h)，3.17～3.02(m，3h)，2.95～2.88(m，2h)，2.85(s，3h,，ch3)，2.69～2.50(m，3h)，2.19(d，j＝13.0hz，1h)。實(shí)施例4、的制備1-3e：(6s,6as,12ar)-10-(2-chlorobenzyl)-2-methoxy-15-methyl-6,6a,7,12-tetrahydro-5h-6,12a-(epiminoethano)phenanthro[3,2-e][1,2,4]triazin-1-ol將原料二酮2(0.9874g，3.1138mmol)，鄰氯苯乙酰肼1-2e(0.5785g，3.1334mmol)，醋酸銨(2.4156g，0.03133mol)，乙酸30ml加到100ml圓底燒瓶中，微波下反應(yīng)8min。加入氫氧化鈉溶液調(diào)ph至8-9；二氯甲烷萃取四次，合并有機(jī)層，后加入飽和食鹽水，無水硫酸鈉除水；減壓蒸餾，柱層析純化，得到淡黃色固體粉末1-3e(0.3500g，25％)。結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)：1hnmr(500mhz，cdcl3)：δ＝7.38～7.34(m，1h，ar)，7.20～7.19(m，3h，ar)，6.73(d，j＝8.4hz，1h)，6.68(d，j＝8.4hz，1h)，6.08(s，1h)，4.81(d，j＝18.0hz，1h)，4.50(s，2h，ch2)，3.83(s，3h，ch3)，3.50～3.24(m，5h)，3.08～2.94(m，2h)，2.87(s，3h,，ch3)，2.69～2.57(m，3h)，2.21～2.18(m，1h)。實(shí)施例5、的制備1-3f：(6s,6as,12ar)-10-(4-fluorobenzyl)-2-methoxy-15-methyl-6,6a,7,12-tetrahydro-5h-6,12a-(epiminoethano)phenanthro[3,2-e][1,2,4]triazin-1-ol將原料二酮2(0.5900g，1.8707mmol)，對氟苯乙酰肼1-2f(0.3149g，1.8725mmol)，醋酸銨(2.0037g，0.02599mol)，乙酸25ml加到100ml圓底燒瓶中，微波下反應(yīng)9min。加入氫氧化鈉溶液調(diào)ph至8-9；二氯甲烷萃取四次，合并有機(jī)層，后加入飽和食鹽水，無水硫酸鈉除水；減壓蒸餾，柱層析純化，得到淡黃色固體粉末1-3f(0.3090g，37％)。結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)：1hnmr(500mhz，cdcl3)：δ＝7.34～7.30(m，2h，ar)，6.97～6.93(m，2h，ar)，6.64～6.61(m，2h，ar)，6.11(s，1h)，4.80(d,j＝18.0hz，1h),4.31(d,j＝13.9hz，1h),4.25(d,j＝13.9hz，1h)，3.76(s，3h，ch3)，3.21～3.16(m，2h)，3.07(d，j＝18.8hz，1h)，2.95～2.87(m，2h)，2.73(d，j＝18.0hz，1h)，2.55(dd，j＝12.8，2.4hz，1h)，2.45(s，3h，ch3)，2.43～2.39(m，1h)，2.18(td，j＝12.4，3.0hz，1h)，2.03(dt，j＝12.8，2.4hz，1h)，1.84(td，j＝12.8，4.7hz，1h)。實(shí)施例6、的制備1-3i：(6s,6as,12ar)-10-(3,4-dimethoxybenzyl)-2-methoxy-15-methyl-6,6a,7,12-tetrahydro-5h-6,12a-(epiminoethano)phenanthro[3,2-e][1,2,4]triazin-1-ol將原料二酮2(0.2704g，0.8573mmol)，3,4-二甲氧基苯乙酰肼1-2i(0.1903g,0.9051mmol)，醋酸銨(0.6700g，8.6922mmol)，乙酸30ml加到100ml圓底燒瓶中，微波下反應(yīng)6min。加入氫氧化鈉溶液調(diào)ph至8-9；二氯甲烷萃取四次，合并有機(jī)層，后加入飽和食鹽水，無水硫酸鈉除水；減壓蒸餾，柱層析純化，得到淡黃色固體粉末1-3i(0.1140g，29％)。結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)：1hnmr(500mhz，cdcl3)：δ＝6.94(td，j＝11.8，1.9hz，2h，ar)，6.78(d，j＝8.0hz，1h，ar)，6.66～6.61(m，2h，ar)，5.99(s，1h)，4.83(d，j＝18.1hz，1h)，4.30(d，j＝13.6hz，1h)，4.22(d，j＝13.6hz，1h)，3.85(s,3h)，3.84(s,3h)，3.78(s，3h，ch3)，3.21～3.16(m，2h)，3.07(d，j＝18.8hz，1h)，2.96～2.91(m，2h)，2.75(d，j＝8.2hz，1h)，2.62～2.60(m，1h)，2.48(s，3h，ch3)，2.33～2.19(m，2h)，2.06～2.04(m，1h)，1.91～1.86(m，1h)。實(shí)施例7、的制備1-3p：(6s,6as,12ar)-2-methoxy-15-methyl-10-(2-methylbenzyl)-6,6a,7,12-tetrahydro-5h-6,12a-(epiminoethano)phenanthro[3,2-e][1,2,4]triazin-1-ol將原料二酮2(1.5000g，4.7561mmol)，鄰甲基苯乙酰肼1-2p(0.7810g，4.7563mmol)，醋酸銨(3.6660g，0.04756mol)，乙酸35ml加到100ml圓底燒瓶中，微波下反應(yīng)6min。加入氫氧化鈉溶液調(diào)ph至8-9；二氯甲烷萃取四次，合并有機(jī)層，后加入飽和食鹽水，無水硫酸鈉除水；減壓濃縮，柱層析純化，得到淡黃色固體粉末1-3p(0.4209g，20％)。1hnmr(500mhz，cdcl3)：δ＝7.21～7.19(m，1h，ar)，7.16～7.10(m，3h，ar)，6.65(d，j＝8.4hz，1h，ar)，6.63(d，j＝8.4hz，1h，ar)，5.99(s，1h)，4.78(d，j＝18.0hz，1h)，4.36(d，j＝14.6hz，1h)，4.32(d，j＝14.6hz，1h)，3.79(s，3h，ch3)，3.21～3.16(m，2h)，3.08(d，j＝18.8hz，1h)，2.95～2.88(m，2h)，2.74(d，j＝18.0hz，1h)，2.60～2.57(m，1h)，2.47(s，3h，ch3)，2.38(s，3h，ch3)，2.20(td，j＝12.4，2.8hz，1h)，2.05～2.03(m，1h)，1.87(td，j＝12.8，4.6hz，2h)。實(shí)施例8、的制備1-3q：(6s,6as,12ar)-10-(3-chlorobenzyl)-2-methoxy-15-methyl-6,6a,7,12-tetrahydro-5h-6,12a-(epiminoethano)phenanthro[3,2-e][1,2,4]triazin-1-ol將原料二酮2(1.8483g，5.8605mmol),間氯苯乙酰肼1-2q(1.0819g，5.8601mmol)，醋酸銨(4.5173g，0.05860mol),乙酸35ml加到100ml圓底燒瓶中，微波下反應(yīng)9min。加入氫氧化鈉溶液調(diào)ph至8-9；二氯甲烷萃取四次，合并有機(jī)層，后加入飽和食鹽水，無水硫酸鈉除水；減壓濃縮，柱層析純化，得到淡黃色固體粉末1-3q(0.6511g，24％)。結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)：1hnmr(500mhz,cdcl3)：δ＝7.35(s，1h，ar)，7.22～7.19(m，3h，ar)，6.72～6.66(m，2h，ar)，6.15(s，1h)，4.84(d，j＝18.0hz，1h)，4.35～4.28(m，2h)，3.79(s，3h，ch3)，3.49～3.25(m，4h)，3.10～3.06(m，3h)，2.87(s，3h,，ch3)，2.69～2.55(m，3h)，2.20(d，j＝12.9hz，1h)。實(shí)施例9、的制備1-3r：(6s,6as,12ar)-2-methoxy-10-(4-methoxybenzyl)-15-methyl-6,6a,7,12-tetrahydro-5h-6,12a-(epiminoethano)phenanthro[3,2-e][1,2,4]triazin-1-ol將原料二酮2(1.5200g，04.8195mmol)，對甲氧基苯乙酰肼1-2r(0.9246g，0.5131mmol)，醋酸銨(4.3774g，0.05678mol)，乙酸30ml加到100ml圓底燒瓶中，微波下反應(yīng)10min。加入氫氧化鈉溶液調(diào)ph至8-9；二氯甲烷萃取四次，合并有機(jī)層，后加入飽和食鹽水，無水硫酸鈉除水；減壓濃縮，柱層析純化，得到淡黃色固體粉末1-3r(0.2230g，12％)。結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)：1hnmr(500mhz，cdcl3)：δ＝7.29(d，j＝8.7hz，2h，ar)，6.81(d，j＝8.7hz，2h，ar)，6.64(d，j＝8.4hz，1h，ar)，6.62(d，j＝8.4hz，1h，ar)，6.05(s，1h)，4.81(d，j＝18.1hz，1h)，4.30(d，j＝13.8hz，1h)，4.23(d，j＝13.8hz，1h)，3.78(s，3h，ch3)，3.77(s，3h，ch3)，3.20～3.15(m，2h)，3.07(d，j＝18.9hz，1h)，2.93(dd，j＝16.9，4.7hz，2h)，2.74(d，j＝18.1hz，1h)，2.60～2.58(m，1h)，2.47(s，3h，ch3)，2.33～2.18(m，2h)，2.05～2.01(m，1h)，1.86(td，j＝12.8，4.7hz，1h)。實(shí)施例10、體外抑制腫瘤細(xì)胞生長篩選實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)材料我們選取了四種癌細(xì)胞株分別為：人胃癌細(xì)胞株(sgc-7901)，人肺癌細(xì)胞株(h446)，人胃癌細(xì)胞株(hgc-27)，人胎盤絨毛癌細(xì)胞(bewo)檢測青藤堿衍生物的抗癌活性。其原理為細(xì)胞通過線粒體水解酶將噻唑蘭(mtt)分解為不溶于水的藍(lán)紫色結(jié)晶并沉積在細(xì)胞中，結(jié)晶物能被二甲基亞砜溶解，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，間接反映細(xì)胞的增殖情況和數(shù)量變化。table1實(shí)驗(yàn)試劑table2實(shí)驗(yàn)儀器實(shí)驗(yàn)步驟1樣品的準(zhǔn)備：對于可溶樣品，每1mg用20μldmso溶解，取2ul用1000μl培養(yǎng)液稀釋，使?jié)舛葹?00μg/ml，再用培養(yǎng)液連續(xù)稀釋至使用濃度。2細(xì)胞的培養(yǎng)(1)培養(yǎng)基的配制：每1000ml培養(yǎng)基中含80萬單位青霉素，1.0g鏈霉素，10％滅活胎牛血清。(2)細(xì)胞的培養(yǎng)：將腫瘤細(xì)胞接種于培養(yǎng)基中，置37℃，5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，3～5d傳代。3測定樣品對腫瘤細(xì)胞生長的抑制作用將細(xì)胞用edta-胰酶消化液消化，并用培養(yǎng)基稀釋成5×104/ml，加到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔100ul，置37℃，5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。接種24h后棄去原培養(yǎng)基，加入含樣品的培養(yǎng)基，每孔200μl，每個濃度加3孔，置37℃，5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，72h后在細(xì)胞培養(yǎng)孔中加入5mg/ml的mtt，每孔10μl，置37℃孵育4h，加入dmso，每孔150μl，用振蕩器振蕩，使甲臢完全溶解，用酶標(biāo)儀在570nm波長下比色。以同樣條件用不含樣品，含同樣濃度dmso的培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞作為對照，計算樣品對腫瘤細(xì)胞生長的半數(shù)致死濃度(ic50)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論我們以人胃癌細(xì)胞株sgc-7901等四株腫瘤細(xì)胞為模型，以順鉑為陽性對照品，測定了15個樣品體外對腫瘤細(xì)胞生長的抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本實(shí)驗(yàn)中順鉑對sgc-7901等腫瘤細(xì)胞有較強(qiáng)的抑制作用，ic50值與文獻(xiàn)報道相當(dāng)，模型成立(table3)。table3樣品對腫瘤細(xì)胞生長的抑制作用(ic50:ug/ml)當(dāng)前第1頁12當(dāng)前第1頁12