本發(fā)明涉及藥物合成技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一類具有抗腫瘤活性的橙皮素肉桂酸酯化合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
腫瘤是一種嚴重威脅人類健康的疾病，腫瘤在本質(zhì)上是基因病。各種環(huán)境的和遺傳的致癌因素以協(xié)同或序貫的方式引起dna損害，從而激活原癌基因和(或)滅活腫瘤抑制基因，加上凋亡調(diào)節(jié)基因和(或)dna修復(fù)基因的改變，繼而引起表達水平的異常，使靶細胞發(fā)生轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的細胞先多呈克隆性的增生，經(jīng)過一個漫長的多階段的演進過程，其中一個克隆相對無限制的擴增，通過附加突變，選擇性地形成具有不同特點的亞克隆(異質(zhì)化)，從而獲得浸潤和轉(zhuǎn)移的能力(惡性轉(zhuǎn)化)，形成惡性腫瘤,主要是由于不合理飲食、遺傳因素、環(huán)境因素等誘發(fā)。抗腫瘤藥物的作用機理以及藥物的作用靶點是多種多樣的，而由于腫瘤細胞易產(chǎn)生多藥耐藥往往導(dǎo)致治療的失敗。尋找有效安全、毒副作用小的抗腫瘤藥物一直是腫瘤藥物研發(fā)工作者孜孜以求的目標。
橙皮素以其廣泛的來源和安全無副作用的口碑，獨特的電子特性和優(yōu)越的生物活性，已發(fā)展成為許多藥物中必不可少的母核結(jié)構(gòu)，它的多功能性引起人們的關(guān)注，對橙皮素其衍生物的合成與結(jié)構(gòu)修飾已成為當(dāng)今新藥研發(fā)的熱點，各種結(jié)構(gòu)多樣性的橙皮素衍生物應(yīng)運而生。實際上，橙皮素本身就具有較多的藥學(xué)性質(zhì)，如它有抗高血糖，抗癌，抗菌，抗真菌，抗病毒等作用。橙皮素來源較為廣泛,主要是從橙皮苷水解而來,而橙皮苷可從柑橘等水果果皮果肉中提取得到,因此橙皮素。最近發(fā)明人通過查閱相關(guān)信息得知橙皮素還具有抗腫瘤的作用。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的一個目的是提供一種具有抗腫瘤活性的橙皮素氮雜肉桂酸酯類化合物及其制備方法。
本發(fā)明的實現(xiàn)過程如下：
結(jié)構(gòu)通式(i)所示的化合物：
其中，r1為氫基，c1-c4的烷基；r2選自氫基，c1-c4的烷基，羥基、鹵素、硝基、烷氧基、硝基或任意兩者的組合。
結(jié)構(gòu)通式(i)所示化合物的合成方法，以橙皮苷或其衍生物，氮雜肉桂酸酯或其衍生物為原料，在有機溶劑下進行合成，具體包含如下步驟：
(1)將橙皮苷或其衍生物用1％的有機溶劑水溶液溶解，置于反應(yīng)器中，滴加酸，加熱到90～110℃，保溫反應(yīng)1～3小時，調(diào)節(jié)水解液ph＝4～6左右，靜置過濾，沉淀物烘干得中間體1橙皮素或其衍生物；
(2)將反應(yīng)得到的中間體1與
步驟(1)中的橙皮素或其衍生物析晶條件為ph＝5。
步驟(1)和(2)中所述的有機溶劑選自dmso、乙腈、dmf或丙酮；步驟(1)所述的酸選自鹽酸或硫酸；步驟(2)中所述的堿選自碳酸鉀、氫氧化鉀或碳酸鈉。
步驟(1)和(2)中所述的有機溶劑優(yōu)選為dmso。
步驟(1)中所述的酸優(yōu)選為硫酸。
步驟(2)中的中間體1與
步驟(2)中的反應(yīng)時間優(yōu)選為5小時。
步驟(2)中所述的堿優(yōu)選為碳酸鈉。
本說明書中所述的dcc為n,n'-二環(huán)己基碳二亞胺；dmso為二甲基亞砜；dmf為二甲基甲酰胺。
孿藥(twindrug)是指將兩個相同或不同的先導(dǎo)化合物或藥物經(jīng)共價鍵連接，綴合成的新分子，在體內(nèi)代謝生成以上兩種藥物而產(chǎn)生協(xié)同作用，增強活性或產(chǎn)生新的藥理活性，或者提高作用的選擇性。
本發(fā)明的優(yōu)點及積極效果：發(fā)明人根據(jù)孿藥(twindrug)的思想將氮雜肉桂酸與橙皮素結(jié)合設(shè)計了一組橙皮素氮雜肉桂酸酯類化合物，即通式所示結(jié)構(gòu)，期望通過合成這一類新穎的化學(xué)實體影響其與受體結(jié)合位點的結(jié)合，提高生物利用度和生物活性，降低藥物的不良反應(yīng)。并且基于這一設(shè)想，發(fā)明人發(fā)明了一類以橙皮素為關(guān)鍵原料的合成路線，并簡便地合成了所設(shè)計的橙皮素氮雜肉桂酸酯化合物及其衍生物(通式所示結(jié)構(gòu))，該反應(yīng)路線具有原料環(huán)保易得，生產(chǎn)成本低，操作安全性高，反應(yīng)步驟少，反應(yīng)原料利用充分，適用于工業(yè)化生產(chǎn)的優(yōu)點。經(jīng)初步的體外抗腫瘤活性測試，這類結(jié)構(gòu)的化合物擁有較好的腫瘤抑制活性，其中部分化合物的體外活性明顯優(yōu)于已知化合物橙皮素，這為我們尋找更多的以橙皮素為母核的抗腫瘤化合物開辟了新的領(lǐng)域。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步闡述。這些實施例僅是出于解釋說明的目
的，而不限制本發(fā)明的范圍和實質(zhì)。
本發(fā)明部分優(yōu)選實施方案中的化合物結(jié)構(gòu)式如下所示：
實施例1
化合物(s,e)-5-羥基-2-(3-羥基-4-甲氧基苯基)-4-氧代苯并二氫吡喃-7-基3-(吡啶-2-基)丙烯酸酯(化合物a)的制備
將100mg(0.16mmol)橙皮苷置于反應(yīng)容器中，加入50ml1％dmso的水溶液中，然后滴入0.5ml硫酸于100℃下磁力攪拌2小時，調(diào)節(jié)水解液ph＝5左右，靜置過濾，沉淀物烘干后加入30mg(0.2mmol)(e)-3-(吡啶-2-基)丙烯酸和滴入50ml充分溶解了20mgdcc的dmf，然后加入0.45g碳酸鈉于60℃～100℃下回流反應(yīng)5小時，得到的溶液冷卻至室溫，用適量水洗滌，乙酸乙酯萃取，靜置分離油層，干燥濃縮得到目標化合物(35.3mg，收率：81.5％)其結(jié)構(gòu)式如下所示。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.45(1h,d),7.83(1h,d,j＝7.5hz)，7.43-7.29(3h,m),7.01(1h,s),6.92(1h,d,j＝7.5hz),6.81-6.75(2h,m),6.54(1h,s),6.46(1h,s),5.52(1h,t),5.33(2h,s),3.85(3h,s),3.38-3.13(2h,m)；13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):197.0,164.1,162.7,157.8,154.7,148.9,147.1,142.0,137.2,131.0,124.5,122.4,121.4,120.0,113.4,107.0,102.9,83.0,56.3,43.1；ms(esi)for(m+h)+:434.1.
實施例2
化合物(s,e)-5-羥基-2-(3-羥基-4-甲氧基苯基)-4-氧代苯并二氫吡喃-7-基3-(5-甲基吡啶-2-基)丙烯酸酯(化合物b)的制備
將100mg(0.16mmol)橙皮苷置于反應(yīng)容器中，加入50ml1％dmf的水溶液中，然后滴入0.5ml硫酸于100℃下磁力攪拌2小時，調(diào)節(jié)水解液ph＝5左右，靜置過濾，沉淀物烘干后加入32.6mg(0.2mmol)(e)-3-(5-甲基吡啶-2-基)丙烯酸和滴入40ml充分溶解了20mgdcc的dmso，然后加入0.45g碳酸鈉于60℃～100℃下回流反應(yīng)4～6小時，得到的溶液冷卻至室溫，用適量水洗滌，乙酸乙酯萃取，靜置分離油層，干燥濃縮得到目標化合物(35.6mg,收率：79.6％)其結(jié)構(gòu)式如下所示。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.35(1h,s),7.83(1h,d,j＝7.5hz)，7.45(1h,d,j＝7.6hz),7.32(1h,d,j＝7.6hz),7.01(1h,s),6.92(1h,d,j＝7.5hz),6.81-6.75(2h,m),6.54(1h,s),6.46(1h,s),5.52(1h,t),5.33(2h,s),3.85(3h,s),3.38-3.13(2h,m),2.32(3h,s)；13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):197.0,164.1,162.7,157.8,152.6,149.3,147.5,142.0,136.3,132.6,130.6,121.4,120.0,113.4,107.2,103.3,102.5,83.0,56.3,43.1,18.2；ms(esi)for(m+h)+:448.1.
實施例3
化合物(s,e)-5-羥基-2-(3-羥基-4-甲氧基苯基)-4-氧代苯并二氫吡喃-7-基3-(5-氯吡啶-2-基)丙烯酸酯(化合物c)的制備。
將100mg(0.16mmol)橙皮苷置于反應(yīng)容器中，加入50ml1％dmso水溶液，然后滴入0.5ml硫酸于100℃下磁力攪拌2小時，調(diào)節(jié)水解液ph＝5左右，靜置過濾，沉淀物烘干后加入36.7mg(0.2mmol)(e)-3-(5-氯吡啶-2-基)丙烯酸和50ml充分溶解了20mgdcc的dmf，然后加入0.45g碳酸鈉于60℃～100℃下回流反應(yīng)6小時，得到的溶液冷卻至室溫，用適量水洗滌，乙酸乙酯萃取，靜置分離油層，干燥濃縮得到目標化合物(36.62mg，收率：78.4％)其結(jié)構(gòu)式如下所示。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.53(1h,s),7.83(1h,d,j＝7.5hz),7.75(1h,d,j＝7.6hz),7.60(1h,d,j＝7.6hz),7.01(1h,s),6.92(1h,d,j＝7.5hz),6.81-6.75(2h,m),6.54(1h,s),6.46(1h,s),5.52(1h,t),5.33(2h,s),3.85(3h,s),3.38-3.13(2h,m)；13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):197.0,164.1,162.7,157.8,153.1,151.5,149.3,147.5,142.0,135.8,132.6,130.6,121.4,120.0,113.4,107.2,103.3,102.5,83.0,56.3,43.1；ms(esi)for(m+h)+:468.1.
實施例4
化合物(s,e)-5-羥基-2-(3-羥基-4-甲氧基苯基)-4-氧代苯并二氫吡喃-7-基3-(5-氟吡啶-2-基)丙烯酸酯(化合物d)的制備
將100mg(0.16mmol)橙皮苷置于反應(yīng)容器中，加入50ml1％dmso水溶液，然后滴入0.5ml硫酸于100℃下磁力攪拌2小時，調(diào)節(jié)水解液ph＝5左右，靜置過濾，沉淀物烘干后加入33.4mg(0.2mol)(e)-3-(5-氟吡啶-2-基)丙烯酸和40ml充分溶解了20mgdcc的丙酮，然后加入0.45g碳酸鈉于60℃～100℃下回流反應(yīng)4小時，得到的溶液冷卻至室溫，用適量水洗滌，乙酸乙酯萃取，靜置分離油層，干燥濃縮得到目標化合物(37.67mg,收率：83.5％)其結(jié)構(gòu)式如下所示。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.36(1h,d),7.83(1h,d,j＝7.5hz),7.41-7.32
(2h,m),7.01(1h,s),6.92(1h,d,j＝7.5hz),6.81-6.75(2h,m),6.54(1h,s),6.46(1h,s),5.52(1h,t),5.33(2h,s),3.85(3h,s),3.38-3.13(2h,m)；13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ
(ppm):197.0,164.1,162.7,157.8,156.0,151.0,149.3,147.5,142.0,133.8,130.6,121.4,120.0,113.4,107.2,102.9,83.0,56.3,43.1；ms(esi)for(m+h)+:452.1.
實施例5
化合物(s,e)-5-羥基-2-(3-羥基-4-甲氧基苯基)-4-氧代苯并二氫吡喃-7-基3-(5-硝基吡啶-2-基)丙烯酸酯(化合物e)的制備
將100mg(0.16mmol)橙皮苷置于反應(yīng)容器中，加入50ml1％的乙腈水溶液，然后滴入0.5ml鹽酸于100℃下磁力攪拌2小時，調(diào)節(jié)水解液ph＝5左右，靜置過濾，沉淀物烘干后加入38.8mg(0.2mmol)(e)-3-(5-硝基吡啶-2-基)丙烯酸和40ml充分溶解了20mgdcc的dmf，然后加入0.45g碳酸鈉于60℃～100℃下回流反應(yīng)4～6小時，得到的溶液冷卻至室溫，用適量水洗滌，乙酸乙酯萃取，靜置分離油層，干燥濃縮得到目標化合物(36.53mg,收率：76.4％)其結(jié)構(gòu)式如下所示。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):9.30(1h,s),8.45(1h,d,j＝7.8hz),7.83(1h,d,j＝7.5hz),7.70(1h,d,j＝7.8hz),7.01(1h,s),6.92(1h,d,j＝7.5hz),6.81-6.75(2h,m),6.54(1h,s),6.46(1h,s),5.52(1h,t),5.33(2h,s),3.85(3h,s),3.38-3.13(2h,m)；13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):197.0,164.1,162.7,160.6,157.8,149.3,147.5,146.2,144.2,142.0,133.0,130.6,121.4,120.0,113.4,107.2,102.9,83.0,56.3,43.1；ms(esi)for(m+h)+:479.1.
實施例6
化合物(s,e)-5-羥基-2-(3-羥基-4-甲氧基苯基)-4-氧代苯并二氫吡喃-7-基3-(5-羥基-6-甲氧基吡啶-2-基)丙烯酸酯(化合物f)的制備
將100mg(0.16mmol)橙皮苷置于反應(yīng)容器中，加入50ml1％dmso的水溶液，然后滴入0.5ml硫酸于100℃下磁力攪拌2小時，調(diào)節(jié)水解液ph＝5左右，靜置過濾，沉淀物烘干后加入39mg(0.2mol)(e)-3-(5-羥基-6-甲氧基吡啶-2-基)丙烯酸和40ml充分溶解了20mgdcc的dmf，然后加入0.45g碳酸鉀于60℃～100℃下回流反應(yīng)4～6小時，得到的溶液用適量水洗滌，乙酸乙酯萃取，靜置分離油層，干燥濃縮得到目標化合物(39.24mg，收率：81.9％)其結(jié)構(gòu)式如下所示。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):7.83(1h,d,j＝7.5hz),7.17(1h,d,j＝7.8hz),7.01(1h,s),6.92(1h,d,j＝7.5hz),6.81-6.75(2h,m),6.60(1h,d,j＝7.8hz),6.54(1h,s),6.46(1h,s),5.52(1h,t),5.33(3h,s),4.07(3h,s),3.85(3h,s),3.38-3.13(2h,m)；13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):197.0,164.1,162.7,160.0,157.8,149.3,147.5,146.2,144.2,142.0,130.6,126.8,121.4,120.0,113.4,109.3,107.2,102.9,83.0,56.3,54.6,43.1；ms(esi)for(m+h)+:480.1.
實施例7
化合物(s,e)-2-(3,4-二甲氧基苯基)-5-羥基-4-氧代苯并二氫吡喃-7-基3-(吡啶-2-基)丙烯酸酯(化合物g)的制備
將100mg(0.16mmol)橙皮苷置于反應(yīng)容器中，加入50ml1％dmso的水溶液，然后滴入0.5ml硫酸于100℃下磁力攪拌2小時，調(diào)節(jié)水解液ph＝5左右，將反應(yīng)液冷卻至室溫，靜置過濾，所得沉淀物加入40ml溶有2ml碳酸二甲酯的甲苯溶液中回流8小時，減壓濃縮后的沉淀物烘干后加入30g(0.2mol)(e)-3-(吡啶-2-基)丙烯酸和40ml充分溶解了20mgdcc的dmf，然后加入0.45g氫氧化鉀于60℃～100℃下回流反應(yīng)4～6小時，得到的溶液用適量水洗滌，乙酸乙酯萃取，靜置分離油層，干燥濃縮得到目標化合物(36.08mg,收率：80.7％)其結(jié)構(gòu)式如下所示。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.45(1h,d),7.83(1h,d,j＝7.5hz),7.41-7.30(3h,m),7.05(1h,s),6.92(1h,d,j＝7.5hz),6.81(2h,d),6.54(1h,s),6.46(1h,s),5.52(1h,t),5.33(1h,s),3.85(6h,s),3.38-3.13(2h,m)；13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):197.0,164.1,162.7,157.8,154.7,150.1,148.8,142.4,137.1,130.6,124.5,122.9,121.4,120.0,112.8,109.3,107.2,102.9,83.0,56.3,43.1.ms(esi)for(m+h)+:448.1.
實施例8
化合物(s,e)-2-(3,4-二甲氧基苯基)-5-羥基-4-氧代苯并二氫吡喃-7-基3-(5-甲基吡啶-2-基)丙烯酸酯(化合物h)的制備
將100mg(0.16mmol)橙皮苷置于反應(yīng)容器中，加入50mldmso，然后滴入0.5ml硫酸于100℃下磁力攪拌2小時，調(diào)節(jié)水解液ph＝5左右,將反應(yīng)液冷卻至室溫，靜置過濾，所得沉淀物加入40ml溶有2ml碳酸二甲酯的甲苯溶液中回流8小時，減壓濃縮后的沉淀物烘干后加入32.6mg(0.2mmol)(e)-3-(5-甲基吡啶-2-基)丙烯酸和40ml充分溶解了20mgdcc的dmf，然后加入0.45g碳酸鈉于60℃～100℃下回流反應(yīng)4～6小時，得到的溶液用適量水洗滌，乙酸乙酯萃取，靜置分離油層，干燥濃縮得到目標化合物(36.25mg,收率：78.6％)其結(jié)構(gòu)式如下所示。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.40(1h,s),7.83(1h,d,j＝7.5hz),7.41(1h,d,j＝7.8hz),7.32(1h,d,j＝7.8hz)，7.05(1h,s),6.92(1h,d,j＝7.5hz),6.81(2h,d),6.54(1h,s),6.46(1h,s),5.52(1h,t),5.33(1h,s),3.85(6h,s),3.38-3.13(2h,m)，2.33(3h,s)13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):197.0,164.1,162.7,157.8,152.7,150.1,149.7,148.5,142.4,136.3,132.5,130.6,121.4,120.0,119.1,112.8,109.3,107.2,102.9,83.0,56.3,43.1,18.1.ms(esi)for(m+h)+:462.2.
實施例9
化合物(s,e)-2-(3,4-二甲氧基苯基)-5-羥基-4-氧代苯并二氫吡喃-7-基3-(5-氯吡啶-2-基)丙烯酸酯(化合物i)的制備
將100mg(0.16mmol)橙皮苷置于反應(yīng)容器中，加入50ml1％dmso水溶液，然后滴入0.5ml硫酸于100℃下磁力攪拌2小時，調(diào)節(jié)水解液ph＝5左右,將反應(yīng)液冷卻至室溫，靜置過濾，所得沉淀物加入40ml溶有2ml碳酸二甲酯的甲苯溶液中回流8小時，減壓濃縮后的沉淀物烘干后加入36.7g(0.2mol)(e)-3-(5-氯吡啶-2-基)丙烯酸和40ml充分溶解了20mgdcc的dmf，然后加入0.45g碳酸鈉于60℃～100℃下回流反應(yīng)4～6小時，得到的溶液用適量水洗滌，乙酸乙酯萃取，靜置分離油層，干燥濃縮得到目標化合物(40.03g,收率：83.2％)，其結(jié)構(gòu)式如下所示。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.53(1h,s),7.83(1h,d,j＝7.5hz),7.75(1h,d,j＝7.6hz),7.60(1h,d,j＝7.6hz),7.01(1h,s),6.92(1h,d,j＝7.5hz),6.81(2h,d),6.54(1h,s),6.46(1h,s),5.52(1h,t),5.33(1h,s),3.85(6h,s),3.38-3.13(2h,m)；13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):197.0,164.1,162.7,157.8,153.1,151.5,150.1,148.5,142.4,135.8,132.5,130.6,121.4,119.1,112.8,109.3,107.2,102.9,83.0,56.3,43.1；ms(esi)for(m+h)+:482.1.
實施例10
化合物(s,e)-2-(3,4-二甲氧基苯基)-5-羥基-4-氧代苯并二氫吡喃-7-基3-(5-氟吡啶-2-基)丙烯酸酯(化合物j)的制備
將100mg(0.16mmol)橙皮苷置于反應(yīng)容器中，加入50ml1％dmso水溶液，然后滴入0.5ml硫酸于100℃下磁力攪拌2小時，調(diào)節(jié)水解液ph＝5左右,將反應(yīng)液冷卻至室溫，靜置過濾，所得沉淀物加入40ml溶有2ml碳酸二甲酯的甲苯溶液中回流8小時，減壓濃縮后的沉淀物烘干后加入33.4g(0.2mol)(e)-3-(5-氟吡啶-2-基)丙烯酸和40ml充分溶解了20mgdcc的dmf，然后加入0.45g碳酸鈉于60℃～100℃下回流反應(yīng)4～6小時，得到的溶液用適量水洗滌，乙酸乙酯萃取，靜置分離油層，干燥濃縮得到目標化合物(37.26g,收率：80.1％)其結(jié)構(gòu)式如下所示。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.36(1h,d),7.83(1h,d,j＝7.5hz),7.41-7.32(2h,m),7.01(1h,s),6.92(1h,d,j＝7.5hz),6.81(2h,d),6.54(1h,s),6.46(1h,s),5.52(1h,t),5.33(1h,s),3.85(6h,s),3.38-3.13(2h,m)；13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):197.0,164.1,162.7,157.8,156.0,150.6,149.0,142.0,133.8,130.6,121.4,119.5,112.4,109.6,107.2,102.9,83.0,56.3,43.1；ms(esi)for(m+h)+:466.1.
實施例11
化合物(s,e)-2-(3,4-二甲氧基苯基)-5-羥基-4-氧代苯并二氫吡喃-7-基3-(5-硝基吡啶-2-基)丙烯酸酯(化合物k)的制備
將100mg(0.16mmol)橙皮苷置于反應(yīng)容器中，加入50ml1％dmso水溶液，然后滴入0.5ml硫酸于100℃下磁力攪拌2小時，調(diào)節(jié)水解液ph＝5左右,將反應(yīng)液冷卻至室溫，靜置過濾，所得沉淀物加入40ml溶有2ml碳酸二甲酯的甲苯溶液中回流8小時，減壓濃縮后的沉淀物烘干后加入38.8g(0.2mol)(e)-3-(5-硝基吡啶-2-基)丙烯酸和40ml充分溶解了20mgdcc的dmf，然后加入0.45g碳酸鈉于60℃～100℃下回流反應(yīng)4～6小時，得到的溶液用適量水洗滌，乙酸乙酯萃取，靜置分離油層，干燥濃縮得到目標化合物(40.7g,收率：82.7％)其結(jié)構(gòu)式如下所示。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):9.30(1h,s),8.45(1h,d,j＝7.8hz),7.83(1h,d,j＝7.5hz),7.70(1h,d,j＝7.8hz),7.01(1h,s),6.92(1h,d,j＝7.5hz),6.81(2h,d),6.54(1h,s),6.46(1h,s),5.52(1h,t),5.33(1h,s),3.85(6h,s),3.38-3.13(2h,m)；13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):197.0,164.1,162.7,160.6,157.8,149.9,148.5,146.2,144.2,142.0,133.0,130.6,121.4,119.5,112.4,109.2,107.2,102.9,83.0,56.3,43.1；ms(esi)for(m+h)+:493.1.
實施例12
化合物(s,e)-2-(3,4-二甲氧基苯基)-5-羥基-4-氧代苯并二氫吡喃-7-基3-(5-羥基-6-甲氧基吡啶-2-基)丙烯酸酯(化合物m)的制備
將100mg(0.16mmol)橙皮苷置于反應(yīng)容器中，加入50ml1％dmso水溶液，然后滴入0.5ml硫酸于100℃下磁力攪拌2小時，調(diào)節(jié)水解液ph＝5左右,將反應(yīng)液冷卻至室溫，靜置過濾，所得沉淀物加入40ml溶有2ml碳酸二甲酯的甲苯溶液中回流8小時，減壓濃縮后的沉淀物烘干后加入39g(0.2mol)(e)-3-(5-羥基-6-甲氧基吡啶-2-基)丙烯酸和40ml充分溶解了20mgdcc的dmf，然后加入0.45g碳酸鈉于60℃～100℃下回流反應(yīng)4～6小時，得到的溶液用適量水洗滌，乙酸乙酯萃取，靜置分離油層，干燥濃縮得到目標化合物(39.40g,收率：79.9％)其結(jié)構(gòu)式如下所示。
1h-nmr(300mhz,dmso-d6)δ(ppm):7.83(1h,d,j＝7.5hz),7.17(1h,d,j＝7.8hz),7.01(1h,s),6.92(1h,d,j＝7.5hz),6.81(2h,d),6.60(1h,d,j＝7.8hz),6.54(1h,s),6.46(1h,s),5.52(1h,t),5.33(2h,s),4.07(3h,s),3.85(6h,s),3.38-3.13(2h,m)；13c-nmr(75mhz,dmso-d6)δ(ppm):197.0,164.1,162.7,159.5,157.8,149.5,148.5,146.2,144.0,142.0,130.6,126.8,121.4,119.5,112.4,109.3,107.2,102.9,83.0,56.3,54.6,43.1；ms(esi)for(m+h)+:494.1.
實施例13本發(fā)明化合物的抗腫瘤活性試驗
對本發(fā)明的化合物進行了腫瘤細胞增殖抑制試驗，試驗方法采用常規(guī)的mtt法(如呂秋軍主編《新藥藥理學(xué)研究方法》，2007：242-243)
細胞株選用：非小細胞肺癌細胞(a549)，人肝癌細胞(smmc-7721)，人膠質(zhì)瘤細胞(u251)，人胃腺癌細胞(sgc-7901)，人乳腺癌細胞(mcf-7)。培養(yǎng)液為dmem+15％nbs+雙抗。
樣品液的配制：用dmso(merck)溶解后，加入pbs(-)配成的100ìmol/l的溶液或者均勻的混懸液，然后用dmso的pbs(-)稀釋，最終濃度分別為0.1，1，10，20，40，60，80,100ìmol/l。
將上市的抗腫瘤藥物阿糖胞苷(ara-c)以同樣的條件配成對照品溶液。
細胞培養(yǎng)：貼壁生長腫瘤細胞細胞培養(yǎng)于含10％滅活新生牛血清和青霉素、鏈霉素(各100萬u/l)的1640培養(yǎng)液中，置于37℃，5％co2，飽和濕度的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細胞貼壁生長，每2～3天傳代1次，傳代時首先倒出培養(yǎng)液，pbs洗2次，胰酶消化后，加入新鮮的培養(yǎng)液吹打均勻，調(diào)整細胞至適當(dāng)濃度移入新的培養(yǎng)瓶中，添加培養(yǎng)液至適量。取對數(shù)生長期細胞用于實驗。
mtt法檢測細胞活性及ic50的測定；
實驗原理：活細胞線粒體中脫氫酶能將黃色的mtt還原成不溶于水的藍紫色產(chǎn)物甲臜(mttformazan)，并沉積在細胞中，生成的量與活細胞數(shù)目成正比，而死細胞沒有這種功能。dmso能溶解藍紫色結(jié)晶物，顏色深淺與所含的量成正比，因此用酶標儀測定的光吸收值可反映細胞存活率。
實驗方法：取對數(shù)生長期細胞，消化、計數(shù)，以2×104/ml的密度接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100ìl。培養(yǎng)24小時后，將待測化合物以0.1，1，10，20，40，60，80,100ìmol/l濃度處理細胞。實驗組每個濃度設(shè)5個復(fù)孔，以含0.4％dmso的培養(yǎng)液作對照。藥物作用48小時后，去上清，每孔加入100ìlmtt(2-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-3,5-二苯基-2h-四唑氫溴酸鹽)(1mg/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)4小時，棄上清，每孔加入100ìldmso，振蕩混勻，用酶標儀在570nm處測定吸光度值，采用ic50計算軟件求出半數(shù)抑制濃度(ic50)。
試驗結(jié)果詳見表，其中，樣品是指相應(yīng)實施例中制備的橙皮素氮雜肉桂酸酯類化合物，樣品編號對應(yīng)制備實施例中所得到的化合物的具體編號。
表1化合物對不同腫瘤細胞的半數(shù)抑制濃度ic50(單位：μmol/l)
以上實驗結(jié)果表明，本發(fā)明的化合物具有良好的抗腫瘤活性，化合物a、b、c、d、f、g、h、i、j、m部分細胞株中的體外抗腫瘤活性較好，因此本發(fā)明橙皮素氮雜肉桂酸酯類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的溶劑合物或者其混合物作為活性成份的藥物組合物可以用于制備抗腫瘤藥物。