本發(fā)明涉及一類新型紫杉醇側(cè)鏈3′-N衍生的新型紫杉烷抗腫瘤化合物及其合成方法和抗腫瘤活性應(yīng)用，屬于醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域。
技術(shù)背景
癌癥已成為繼心腦血管疾病之后人類的第二大致死疾病，同時(shí)，隨著環(huán)境的惡化以及人口老齡化，這一問題會更加突出。2013年發(fā)布的中國腫瘤登記年報(bào)稱，全國范圍內(nèi)癌癥發(fā)病形勢十分嚴(yán)峻，發(fā)病率與死亡率均呈持續(xù)上升趨勢。預(yù)計(jì)到2020年，中國每年癌癥患病總數(shù)將達(dá)到660萬，死亡總數(shù)將達(dá)300萬左右。因此，在全球范圍內(nèi)抗腫瘤藥物具有很大的市場需求。據(jù)IMS數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，自2007年超越降血脂藥物后，抗腫瘤藥物一直是全球醫(yī)藥市場的領(lǐng)頭羊。
事實(shí)證明，天然產(chǎn)物是最具潛力的抗腫瘤藥物源泉。在過去的二十多年間，有63%的抗腫瘤藥物直接或間接的來源于天然產(chǎn)物。作為天然產(chǎn)物家族中的重要一員，紫杉醇及其半合成產(chǎn)物多烯紫杉醇和卡巴他賽無疑是最成功也是最具代表性的抗腫瘤藥物。
1966年，紫杉醇首次被Wall和Wani從太平洋紅豆杉樹皮中提取得到，并將其命名為Taxol。因其良好的抗腫瘤活性和獨(dú)特的作用機(jī)理，紫杉醇在1992年被美國FDA批準(zhǔn)用于治療晚期卵巢癌，兩年后又被批準(zhǔn)用于治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌。直到目前，紫杉醇和多烯紫杉醇已被證實(shí)是最為有效的抗腫瘤藥物，在臨床上被廣泛用于卵巢癌、乳腺癌、小細(xì)胞肺癌、與AIDS相關(guān)的卡波劑氏肉瘤、膀胱癌、前列腺癌、食道癌、腦瘤、喉癌、宮頸癌以及子宮內(nèi)膜癌等多種類型癌癥的治療。隨著研究的深入，其臨床適應(yīng)癥必將會進(jìn)一步擴(kuò)大。
2010年6月，美國FDA批準(zhǔn)的紫杉烷卡巴他賽是目前唯一治療前列腺癌的臨床用藥。從化學(xué)結(jié)構(gòu)上分析，卡巴他賽與多烯紫杉醇的唯一差異是，后者巴卡亭環(huán)上的C7和C10連接自由羥基，而卡巴他賽則是甲氧基。結(jié)構(gòu)上的唯小差異卻導(dǎo)致了臨床上的不同用途。
盡管紫杉醇和多烯紫杉醇是非常重要的抗腫瘤藥物，但是，由于水溶性差及其在化療過程中腫瘤細(xì)胞自身發(fā)展的多藥耐藥問題（MDR）而限制了他們在臨床上的廣泛運(yùn)用。為了解決腫瘤細(xì)胞耐藥的問題，擴(kuò)大紫杉醇和多烯紫杉醇在臨床上的應(yīng)用。同時(shí)，為了獲得具有選擇性的高活性紫杉醇衍生物，就需要對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種原料易得，合成簡便，具有抗腫瘤活性的一類紫杉烷衍生物及其制備方法。
本發(fā)明的實(shí)現(xiàn)過程如下：
結(jié)構(gòu)通式（I）所示化合物，
R為H或乙?；?/p>
R′選自H、-CH3、-NO2、-CN、CH3O-、鹵素基。
上述化合物優(yōu)選為：
。
上述化合物的制備方法，包括以下步驟：
（1）以天然產(chǎn)物10-去乙酰基巴卡亭（10-DAB）為原料，用三氯乙氧基甲酰氯（TrocCl）同時(shí)保護(hù)7-OH和10-OH，或者先使10-OH乙?；?，接著用TrocCl保護(hù)7-OH；
（2）用三氯乙醛保護(hù)側(cè)鏈2′-OH和3′-NH2，或者用對甲氧基苯甲醛保護(hù)2′-OH和3′-NHBoc；
（3）在DCC和DMAP存在下，步驟（1）和（2）的產(chǎn)物進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)；
（4）在鋅粉存在下同時(shí)脫去側(cè)鏈和巴卡亭環(huán)上的保護(hù)基；
（5）在堿性介質(zhì)中和DMAP存在下，取代苯基異噁唑羧酸酰氯與步驟（4）的產(chǎn)物反應(yīng)得到結(jié)構(gòu)通式（I）所示的化合物。
具體地說，7,10-diTroc巴卡亭和10-Ac-7-Troc巴卡亭的合成路線如（式1）和（式2）所示。
紫杉醇側(cè)鏈3′-N衍生的新型紫杉烷的合成路線如方法1所示。首先以苯基異絲氨酸甲酯4為原料與保護(hù)基三氯乙醛反應(yīng)得到苯基噁唑啉羧酸甲酯5，后者水解后與7,10-diTroc巴卡亭1或7-Troc-10-Ac巴卡亭3偶聯(lián)生成7，在鋅粉存在下還原同時(shí)除去側(cè)鏈和巴卡亭環(huán)上的脫保護(hù)基，再在堿性介質(zhì)中和催化劑的存在下與苯基（或取代苯基）異噁唑甲酰氯反應(yīng)最終得到紫杉醇側(cè)鏈3′-衍生的新型紫杉烷[1]。
方法1：
本發(fā)明使用的苯基（或取代苯基）異噁唑甲酰氯的結(jié)構(gòu)如下式所示。
注：在方法1中紫杉醇側(cè)鏈3′-N衍生的紫杉烷的合成，從6→7若用7-Troc-10-Ac-巴卡亭3代替7,10-diToc-巴卡亭1時(shí)，則最終產(chǎn)物是：
方法1的優(yōu)點(diǎn)是路線短，易于操作，但在7→8的步驟中轉(zhuǎn)化率低，產(chǎn)品8還需要柱層析純化。為解決上述問題，發(fā)明人發(fā)明了第二條合成路線（方法2）。雖然比方法1多一步反應(yīng)，但反應(yīng)總產(chǎn)率更高，而且更易操作，也便于放大生產(chǎn)。
方法2：
方法2與方法1的主要區(qū)別是保護(hù)基不同，前者使用三氯乙醛作保護(hù)基，后者是對甲氧基苯甲醛。因此，首先用(Boc)2O選擇性保護(hù)苯基異絲氨酸的氨基（4→9），然后再用對甲氧基苯甲醛保護(hù)-NHBoc和-OH。
本發(fā)明在保持紫杉醇整體骨架包括C13側(cè)鏈的(2′R,3′S)立體構(gòu)型不變的情況下，通過酯化作用在C-13側(cè)鏈3′-N位引入生物活性的小分子異噁唑片段得到一系列新的紫杉烷衍生物，并在體外通過MTT方法評估其對不同腫瘤細(xì)胞（正常的和耐藥株）的抗增殖活性，篩選出具有較高活性的紫杉烷衍生物作為候選藥物。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1 7,10-diTroc巴卡亭1的合成
于63-95℃條件下，將三氯乙氧基羰酰氯（TrocCl）20.5 mmol緩慢滴加到用吡啶溶解的10-DAB（10 mmol）1中，磁力攪拌，TLC監(jiān)測反應(yīng)完全后將反應(yīng)液冷卻至室溫并減壓除去吡啶，剩余物用AcOEt/H2O溶解稀釋后用HCl調(diào)溶液pH為中性。溶液靜置分層，分出有機(jī)相，水相用AcOEt萃取，合并有機(jī)相并依次用H2O、飽和食鹽水洗滌、無水MgSO4干燥，經(jīng)減壓除去溶劑得粗品，經(jīng)柱層析得到7,10-diTroc-巴卡亭2，產(chǎn)率：87.4%，m.p. 233.1-234.2℃。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.13 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.63 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.50 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 6.40 (s, 1H), 5.73 – 5.55 (m, 2H), 5.05 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 5.00 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.82 (dd, J = 9.6, 2H), 4.63 (dd, J = 9.6, 2H), 4.34 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.17 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.03 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.54 – 3.46 (m, 1H), 2.72 – 2.59 (m, 1H), 2.31 (s, 5H), 2.14 (s, 3H), 2.09 – 2.01 (m, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.71 (s, 1H), 1.15 (s, 3H), 1.10 (s, 3H).13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 170.77, 166.96, 153.24, 153.18,146.52, 133.77, 130.09, 129.22, 128.68, 94.57, 94.40, 83.82, 80.46, 78.68, 77.15, 77.08, 76.60, 76.36, 74.28, 67.83, 60.57, 56.19, 42.75, 38.46, 33.25, 26.68, 22.56, 21.12, 20.18, 15.31, 14.27, 10.64. HRMS(FAB): calcd for C35H38Cl6O14 (M+NH4+): 912.0707, found: 912.0709。
實(shí)施例2 10-Ac-巴卡亭2的合成
將醋酸酐0.2 mol加入用無水THF 80 mL溶解的10-DAB 10 mmol和ZnCl2 20 mmol溶液中，室溫條件下反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)完全后向其中加入AcOEt/H2O并用糊狀NaHCO3調(diào)溶液pH為堿性。靜置分層，分出有機(jī)相，水相用AcOEt萃取，合并有機(jī)相并依次用H2O、飽和食鹽水洗滌、無水MgSO4干燥，經(jīng)減壓除去溶劑得粗品，重結(jié)晶后得到10-Ac-巴卡亭13純品，系白色固體，產(chǎn)率：93%。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.12 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.63 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.50 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 6.34 (s, 1H), 5.64 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 5.00 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.90 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 4.48 (dd, J = 10.5, 6.8 Hz, 1H), 4.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.17 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 3.89 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 2.66 – 2.46 (m, 2H), 2.34 – 2.28 (m, J = 7.1 Hz, 5H), 2.26 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.95 – 1.82 (m, 2H), 1.73 (s, 1H), 1.68 (s, 3H), 1.12 (s, 6H).13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 204.19, 171.37, 170.67, 167.06, 146.45, 133.70, 131.79, 130.10, 129.32, 128.65, 84.46, 80.77, 79.08, 76.44, 76.24, 74.92, 72.30, 67.92, 58.69, 46.14, 42.70, 38.61, 35.60, 26.96, 22.59, 20.92, 15.60, 9.44。
實(shí)施例3 7-Troc-10-Ac巴卡亭3的合成
于50-93℃條件下，將三氯乙氧基羰酰氯（TrocCl）9.8 mmol緩慢滴加到用吡啶溶解的10-Ac巴卡亭2（9.3 mmol）中，磁力攪拌，TLC監(jiān)測反應(yīng)完全后將反應(yīng)液冷卻至室溫并除去吡啶，剩余物用AcOEt/H2O溶解稀釋后用HCl調(diào)解溶液pH為弱堿性。溶液靜置分層，分出有機(jī)相，水相用AcOEt萃取，合并有機(jī)相并依次用H2O、飽和食鹽水洗滌、無水MgSO4干燥，除去溶劑得粗品，經(jīng)柱層析得到7-Troc-10-Ac巴卡亭3，產(chǎn)率84.2%。m.p.154.8-158.2℃。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.11 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.63 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.50 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 6.40 (s, 1H), 5.73 – 5.55 (m, 2H), 5.05 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 5.00 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.89 (dd, J = 13.9, 5.3 Hz, 1H), 4.66 (dd, J = 12.0, 0.9 Hz, 1H), 4.34 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.17 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.03 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.54 – 3.46 (m, 1H), 2.72 – 2.59 (m, 1H), 2.31 (s, 5H), 2.18 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.09 – 2.01 (m, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.71 (s, 1H), 1.15 (s, 3H), 1.10 (s, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 201.98, 170.77, 169.20, 166.96, 153.24, 145.07, 133.77, 131.60, 130.09, 129.22, 128.68, 94.57, 83.82, 80.46, 78.68, 76.32, 75.92, 74.28, 67.83, 65.87, 56.19, 47.39, 42.75, 38.46, 33.25, 26.68, 22.56, 20.82, 20.18, 15.27, 10.64. HRMS(FAB): calcd for C34H39Cl3O13 (M+NH4+): 778.1800, found: 778.1804。
實(shí)施例4 (2′R,3′S)-N-Boc苯基異絲氨酸甲酯9的合成
將用CH2Cl2溶解的(Boc)2O 50 mmol加入用CH2Cl2/H2O溶解的(2′R,3′S)-苯基異絲氨酸甲酯50 mmol和氫氧化鉀3.58 g溶液中，室溫下反應(yīng)進(jìn)行，TLC監(jiān)測反應(yīng)完全后向反應(yīng)液中加入H2O，靜置分層，分出有機(jī)相，水相用CH2Cl2萃取，合并有機(jī)相并用水洗滌、無水MgSO4干燥。除去溶劑得粗品，重結(jié)晶得到(2′R,3′S)-N-Boc-苯基異絲氨酸甲酯 9，產(chǎn)率93.2%。
實(shí)施例5 苯基噁唑啉羧酸甲酯10的合成
將46.4 mmol化合物 9、對甲氧基苯甲醛51 mmol和對甲苯磺酸吡啶嗡0.1 g用甲苯溶解、回流，TLC監(jiān)測反應(yīng)完全后冷卻至室溫，除去溶劑得到苯基噁唑啉羧酸甲酯10。
實(shí)施例6 苯基噁唑啉羧酸11的合成
將上述產(chǎn)物10用MeOH溶解，加入稀NaOH，室溫下攪拌，TLC監(jiān)測反應(yīng)完全后除去MeOH，剩余物用AcOEt/H2O溶解稀釋，靜置分層。向水相中加入AcOEt，并用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH為酸性?；旌弦红o置分層，分出有機(jī)相，水相用AcOEt萃取，合并有機(jī)相并水洗滌、無水MgSO4干燥，除去溶劑，得到苯基噁唑啉羧酸11，兩步總產(chǎn)率92%，m.p.132-133℃。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.50 – 7.31 (m, 7H), 6.94 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.41 (s, 1H), 5.42 (s, 1H), 4.64 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 172.73, 160.44, 151.71, 128.89, 128.33, 128.17, 126.32, 114.00, 92.44, 82.57, 81.14, 63.68, 55.32, 27.82。
實(shí)施例7 苯基噁唑啉羧酸7,10-diTroc-巴卡亭酯12的合成
將5.5 mmol苯基噁唑啉羧酸11、5 mmol 7,10-diTroc-巴卡亭1、10 mmol DCC和0.5 mmol DMAP用適量CH2Cl2溶解，室溫條件下反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)完全。反應(yīng)結(jié)束后濾出不溶物，濾液經(jīng)減壓除去溶劑得到偶聯(lián)產(chǎn)物12，產(chǎn)率：95.4%。m.p.151.9-154.2℃。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.65 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.56 – 7.37 (m, 9H), 6.95 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.64 (s, 1H), 6.38 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 6.29 (s, 1H), 5.71 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.60 (dd, J = 10.7, 7.1 Hz, 1H), 5.52 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.04 – 4.90 (m, 3H), 4.81 (s, 2H), 4.77 – 4.61 (m, 3H), 4.31 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.16 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 3.95 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.50 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 2.69 – 2.59 (m, 1H), 2.38 – 2.21 (m, 2H), 2.13 (s, 3H), 2.11 – 2.04 (m, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.87 (s, 3H), 1.79 (s, 1H), 1.32 (s, 3H), 1.23 (s, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 200.66, 170.22, 166.88, 160.38, 153.22, 152.52, 142.04, 138.21, 133.94, 132.35, 130.07, 129.11, 128.93, 128.73, 128.55, 127.29, 113.93, 94.19, 91.78, 83.68, 80.50, 79.04, 78.91, 76.37, 75.21, 74.20, 71.55, 65.86, 64.12, 56.20, 55.36, 46.88, 43.17, 35.43, 33.24, 26.36, 21.80, 21.01, 15.29, 14.92, 10.74. HRMS(FAB): calcd for C55H54Cl9NO19 (M+NH4+): 1369.0772, found: 1369.0784。
實(shí)施例8 苯基異絲氨酸10-去乙酰基巴卡亭酯13的合成
將4.8 mmol偶聯(lián)產(chǎn)物12、Zn粉143 mmol和AcOH 29 mL用AcOEt 70 mL溶解，室溫條件下反應(yīng)，TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn)。濾出Zn粉，濾液用飽和NaHCO3溶液調(diào)節(jié)為弱堿性。混合液靜置分層，分出有機(jī)相，向有機(jī)相中加入H2O并用烯HCl調(diào)混合液為弱酸性?；旌弦红o置分層，分出水相并用乙醚充分洗滌至水相中不含有機(jī)雜質(zhì)為止（TLC監(jiān)測）。向水相中加入AcOEt并用飽和NaHCO3溶液調(diào)節(jié)為弱堿性。混合液靜置分層，分出有機(jī)相，水相用AcOEt萃取，合并有機(jī)相并用飽和食鹽水洗滌、無水MgSO4干燥，經(jīng)減壓除去溶劑得到偶聯(lián)化合物13，系白色粉末，產(chǎn)率：93.5%。m.p.（166.2-167.6℃）。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.95 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 7.73 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.42 (d, J = 4.3 Hz, 4H), 7.28 – 7.19 (m, 1H), 5.85 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 5.40 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.09 (s, 1H), 5.04 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 4.97 (s, 1H), 4.89 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.53 (s, 1H), 4.22 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.16 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.10 – 3.96 (m, 3H), 3.63 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 2.33 – 2.20 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.74 (s, 3H), 1.69 – 1.62 (m, 1H), 1.51 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.97 (s, 3H).13C NMR (100 MHz, DMSO) δ 214.55, 177.74, 174.90, 170.41, 141.99, 141.07, 138.65, 135.24, 134.72, 133.89, 133.53, 133.09, 132.81, 88.93, 85.48, 82.06, 80.63, 80.37, 79.95, 78.97, 75.98, 75.04, 63.33, 62.18, 51.14, 48.09, 41.66, 40.19, 31.73, 27.64, 26.02, 18.94, 15.01.HRMS(FAB):calcd for C38H45NO12(M+H+)708.3015, found708.3005。
實(shí)施例9 紫杉醇側(cè)鏈C3′-N衍生的紫杉烷[1]-A的合成
將0.1 mmol 3-(2′-氰基苯基)基異噁唑-5-甲酰氯、0.1 mmol偶聯(lián)化合物13和DMAP 10 mg用適量吡啶溶解并在室溫下反應(yīng)大約1-5 h（TCL監(jiān)控反應(yīng)）。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液用CH2Cl2稀釋并依次用稀HCl、H2O和飽和食鹽水洗滌，無水MgSO4干燥，減壓除去溶劑得到粗品，經(jīng)柱層析得到C3′-N-芳基異噁唑紫杉醇[1]-A純品，系白色固體，產(chǎn)率74.2%，產(chǎn)率74.2%。m.p. 202-203.1℃。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.16 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.89 – 7.79 (m, 3H), 7.71 (td, J = 7.8, 1.2 Hz, 1H), 7.67 – 7.59 (m, 2H), 7.57 – 7.51 (m, 4H), 7.45 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.39 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 6.31 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 5.83 (dd, J = 9.2, 2.5 Hz, 1H), 5.70 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.25 (s, 1H), 4.97 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.83 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.33 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.29 – 4.22 (m, 2H), 3.93 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 3.50 (s, 2H), 2.64 – 2.53 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.37 – 2.29 (m, 2H), 2.27 – 2.22 (m, 1H), 2.09 (br, s, 1H), 1.91 (d, J = 13.9 Hz, 1H), 1.85 (s, 3H), 1.79 (s, 3H), 1.23 (s, 3H), 1.14 (s, 3H). 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 211.15, 171.94, 170.70, 166.85, 163.68, 161.05, 155.07, 137.91, 137.25, 136.29, 134.32, 133.81, 133.39, 130.91, 130.65, 130.21, 129.55, 129.32, 129.05, 128.72, 128.56, 127.11, 117.45, 110.97, 107.24, 84.26, 81.32, 78.66, 74.82, 74.53, 73.45, 72.30, 71.81, 57.72, 54.84, 50.82, 46.53, 43.05, 36.91, 35.91, 26.58, 22.61, 20.57, 14.47, 9.94. HRMS (FAB): calcd for C49H49N3O14 (M+Na+): 926.3107, found: 926.3103。
實(shí)施例10 體外抗腫瘤細(xì)胞增值活性評價(jià)
發(fā)明人在已合成的紫杉醇側(cè)鏈3′-N衍生的紫杉烷中選擇了以下5種結(jié)構(gòu)典型的化合物[1]-A，[1]-B，[1]-C，[1]-D和[1]-E進(jìn)行體外抗腫瘤細(xì)胞增值活性的試驗(yàn)。
采用不同的腫瘤細(xì)胞株Hela（宮頸癌細(xì)胞）、SK-OV-3（卵巢癌細(xì)胞）、A549（肺癌細(xì)胞）、A2780（卵巢癌細(xì)胞）、MCF-7（乳腺癌細(xì)胞）以及多藥耐藥腫瘤細(xì)胞株A2780-MDR和MCF-7-MDR等7種細(xì)胞株，以多烯紫杉醇（docetaxel）做為陽性對照，通過MTT方法評價(jià)5個(gè)新型芳基異噁唑-多烯紫杉醇衍生物對不同腫瘤細(xì)胞的抗增殖活性。腫瘤細(xì)胞株在受試化合物中培養(yǎng)72h，每個(gè)樣品濃度設(shè)三個(gè)重復(fù)，以減少誤差。所得結(jié)果如表1所示。
從表中數(shù)據(jù)可以看出，這些化合物表現(xiàn)出與多烯紫杉醇相似或較好的選擇性抑制腫瘤細(xì)胞增殖的能力。從縱向分析，對于Hela細(xì)胞，除了[1]-D，其余4個(gè)化合物都表現(xiàn)出較好的活性，其中[1]-B和[1]-E的抑制能力比多烯紫杉醇強(qiáng)2倍。對于SK-OV-3細(xì)胞，5個(gè)化合物都表現(xiàn)出較好的活性，其中[1]-E的抑制能力最強(qiáng)，比多烯紫杉醇強(qiáng)2.5倍。對于A549細(xì)胞，5個(gè)化合物均表現(xiàn)出與多烯紫杉醇相似的活性。對于A2780細(xì)胞，所有5個(gè)化合物都表現(xiàn)出優(yōu)秀的活性，其中[1]-A和[1]-E的抑制能力比多烯紫杉醇強(qiáng)4倍。對于MCF-7細(xì)胞，[1]-B表現(xiàn)出較好的活性。
從橫向分析，[1]-A表現(xiàn)出優(yōu)先抑制A2780細(xì)胞增殖的能力。[1]-B和[1]-E對所有腫瘤細(xì)胞均表現(xiàn)出較好的抑制能力。[1]-C和[1]-D對A2780細(xì)胞的抑制能力優(yōu)于其他幾種細(xì)胞。重要的是，在C3′-N位引入芳基異噁唑骨架不僅提高了多烯紫杉醇對正常腫瘤細(xì)胞的抑制能力，而且對耐藥腫瘤細(xì)胞也有很好的表現(xiàn)。這些化合物均不同程度抑制了A2780-MDR和MCF-7-MDR腫瘤細(xì)胞的增殖。