一種新的克羅烷型二萜化合物及其制備方法和醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及從構(gòu)樹的干燥根中分離得到的一種具有治療 神經(jīng)膠質(zhì)瘤作用的二祗類化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 構(gòu)樹jOa/w'i/era化.）Vent.為?？茦?gòu)樹屬植物，分布于中國黃 河、長江和珠江流域，日本、越南、印度等國亦有分布，資源十分豐富。構(gòu)樹的根、葉、果實(shí)和 樹皮在中醫(yī)里皆有使用。構(gòu)樹皮能利尿消腫，桂風(fēng)濕，還可W用于治療神經(jīng)性皮炎及癖癥； 樹液可W利水解毒，治水腫癖疾和蛇、蟲、蜂、蝸、狗咬；構(gòu)樹葉具有清熱涼血、利濕和殺蟲作 用，可用于鼻贓，腸炎，頻疾。構(gòu)樹果實(shí)也是中東地區(qū)重要的民間藥材。
[0003] 構(gòu)樹在我國分布廣泛，是一種藥用價(jià)值很高的植物，其葉、樹皮、根皮和果實(shí)在臨 床均有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。構(gòu)樹的化學(xué)成分復(fù)雜，國內(nèi)外研究者主要關(guān)注的化學(xué)成分包括黃酬 類、木脂素類和祗類。其中祗類又W二祗研究較多。二祗廣泛分布于植物界，植物分泌的乳 汁、樹脂等均W二祗類衍生物為主，尤W松柏科植物最為普遍，是一類由4個(gè)異戊二締單位 構(gòu)成、含20個(gè)碳原子的化合物類群。結(jié)構(gòu)顯示多樣性，主要類型有貝殼杉燒、克羅燒、松 香燒、烏頭燒等。許多二祗的含氧衍生物具有多方面的生物活性，如紫杉醇、穿屯、蓮內(nèi)醋、關(guān) 附甲素、雷公藤內(nèi)醋、甜菊巧等都具有較強(qiáng)的生物活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種從構(gòu)樹的干燥根中分離得到的一種具有治療神經(jīng)膠質(zhì) 瘤作用的二祗類化合物及其制備方法。 陽〇化]本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得W實(shí)現(xiàn)的： 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0006] 所述的化合物（I)的制備方法，包含W下操作步驟：（a)將構(gòu)樹的干燥根粉碎，用 75~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水飽和的 正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步驟（a)中乙 酸乙醋萃取物用大孔樹脂除雜，先用5%乙醇洗脫10個(gè)柱體積，再用75%乙醇洗脫8個(gè)柱體 積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（C)步驟（b)中75%乙醇洗脫物 浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為90:1、55:1、25:1、8:1和2:1的二氯甲燒-甲醇梯度 洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為12:1、 8:1和4:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分2用十八烷基娃 燒鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為65%的甲醇水溶液等度洗脫，收集9~10個(gè)柱體 積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)。
[0007] 進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0008] 進(jìn)一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為80%。
[0009] 一種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學(xué)上可接受的載 體。
[0010] 所述的化合物（I)在制備治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藥物中的應(yīng)用。
[0011] 所述的藥物組合物在制備治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤的藥物中的應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可W直接使用，或者W藥物組合物的形式使用。
[0013] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、 對人和動(dòng)物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0014] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 W及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物W單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。 陽〇1引說明書附圖 圖1為化合物（I)結(jié)構(gòu)式； 圖2為化合物（I)理論ECD值與實(shí)驗(yàn)ECD值比較。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不W此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可W對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0017] 實(shí)施例1 :化合物（I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證 試劑來源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲燒為分析純，購自上海凌峰化學(xué)試 劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。 陽01引制備方法：（a)將構(gòu)樹的干燥根（IOkg)粉碎，用80%乙醇熱回流提?。?化X3次)， 合并提取液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油酸（3LX3次)、乙酸乙醋（3LX3次）和水飽和 的正下醇（3LX3次）萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（386g)和正下醇萃取 物；（b)步驟（a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用5%乙醇洗脫10個(gè)柱體 積，再用75%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏 (155g); (C)步驟（b)中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為90:1 (8個(gè)柱 體積)、55:1 (8個(gè)柱體積)、25:1 (8個(gè)柱體積)、8:1 (10個(gè)柱體積）和2:1 (5個(gè)柱體積）的 二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（C)中組分4 (41g)用正相硅膠進(jìn)一步 分離，依次用體積比為12:1 (8個(gè)柱體積)、8:1 (10個(gè)柱體積)和4:1 (6個(gè)柱體積）的二氯 甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分2 (17g)用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為65%的甲醇水溶液等度洗脫，收集9-10個(gè)柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I) (39mg)。
[0019] 結(jié)構(gòu)確證：HR-ESIMS顯示[M+Na]+為m/z397. 1308,結(jié)合核磁特征可得分子式 為Cz化2〇7,不飽和度為10。核磁共振氨譜數(shù)據(jù)Sh(卵m，DMSO-成，500MHz) :H-1 (3. 27,山 方3. 5)，H-2 (3. 51，m)，H-3 (2. 33，ddd，方 15. 0,5. 0，1.5)，H-3 (1.81，ddd，^15.5，12.5， 2.5)，H-4(2.59，dd，^12.5,5.0)，H-6(1.27，ddd，^11.0,3.0，1.0)，H-6(1.59，m)，H-7 (2. 06，m)，H-7 (1.60，m)，H-8 (2. 57，m)，H-ll(2. 88，dd，方 16. 0,7. 5)，H-11 (2. 04，m)， H-12 (5. 61，dd，方8. 5,1. 5)，H-14 (6. 30,m)，H-15 (7. 37,t，方I. 5)，H-16 (7. 29,m)， H-19 (4. 10,d，方8. 5)，H-19 (4. 16,dd，方8. 5,2. 0)，H-20 (I. 19,s)，2-0H(5. 40,s);核 磁共振碳譜數(shù)據(jù)Sc(卵m，DMS〇-成，12甜z):56. 0 (CH，1-C)，58. 7 (CH，2-C)，19. 6 (邸2， 3-C)，35. 8 (CH，4-C)，47.I(C，5-C)，21.I(邸2,6-〇，16. 3 (邸2,7-〇,43. 3 (CH，8-C)，41.6 (C，9-C)，73. 3 (C，10-C)，：M. 9 (邸2，11-〇,71.7 (CH，12-C)，126. 2 (C，13-C)，108. 5 (CH， 14-C)，144. 4 (CH，15-C)，138. 6 (CH，16-C)，173. 0 (C，17-C)，175. 4 (C，18-C)，70. 3 (邸2， 19-C)，26. 6 (邸3,20-〇;碳原子標(biāo)記參見圖1。IR光譜表明該化合物含有徑基（3470cmi)， 丫-和5-內(nèi)醋（1761和1735cm1)和巧喃環(huán)（877cm1)基團(tuán)。"CNMR譜顯示有20個(gè)信號， 含有一個(gè)甲基，五個(gè)亞甲基，八個(gè)次甲基和六個(gè)季碳。一維和二維核磁共振數(shù)據(jù)表明該化合 物含有環(huán)氧基（5 冊.27，5C56. 0，CH-1 和 5C73. 3，C-10)，叔甲基（5m. 19，s，5C26.6 CH3-2O)和巧喃環(huán)（5 冊.30,H-14 ;SH7. 37,H-15, 5H7. 29,H-16)。此外，還可得知該化合 物含有一個(gè)12，17-5內(nèi)醋（5冊.61，5(：71.7，邸-12;5(：173.0，（：-17)和一個(gè)18，19-丫 內(nèi)醋（5C175. 4，C-18;5H4. 16,4. 10，5C70. 3，邸2-19)。COSY譜中H-3[ (5 肥.33，ddd， 方 15. 0,5. 0,1. 5)，（ 5m. 81，ddd，方 15. 5,12. 5,2. 5)]與H-2 ( 5 冊.51，m)的相關(guān)性表明 C-2 ( 5C58. 7)位上連有一個(gè)徑基。另外，H-2與H-I( 5冊.27,d，方3. 5)的相關(guān)性表明 該化合物存在1，10-環(huán)氧基團(tuán)。HMBC譜中，H-2與C-IO( 5C73. 3)，W及H-I與C-2和C-3 (5C19. 6)的相關(guān)性驗(yàn)證了上述徑基和環(huán)氧基團(tuán)的位置。綜合氨譜、碳譜、HMBC譜和N犯SY 譜，W及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如圖1所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通 過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致（圖2)。 W20] 實(shí)施例2 :化合物（I)藥理作用試驗(yàn) 一、材料和儀器 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251購自于上海麥莎生物科技有限公司。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物裸鼠，購自南 方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中屯、，為4~6周齡的雄性BALB/c，nu/nu小鼠，體質(zhì)量12~15g?；衔?(I)自制(含量98%W上)。5-氣尿喀晚購于南通制藥廠，膜蛋白酶購于美國Amresco公司， 不完全DMEM培養(yǎng)基購于GibeoB化公司，胎牛血清購于杭州四季青公司，十二烷基硫酸鋼、 乙二胺四乙酸、過硫酸胺、甘油、二甲基亞抓購于Sigma公司，蛋白酶K(Merka公司），P-琉 基乙醇(廣州威佳公司），苯甲基橫獻(xiàn)氣(廣州威佳公司），亮抑酶膚(廣州威佳公司），抑蛋白 酶膚(廣州威佳公司），丙締獻(xiàn)胺(上海生工生物工程公司），雙丙締獻(xiàn)胺(上海生工生物工程 公司）。
[0021] 光學(xué)顯微鏡（OLYMP