一種新的克羅烷型二萜類化合物及其制備方法和醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從小豆蔻的干燥成熟果實(shí)中分離得到的一種 具有治療慢性粒細(xì)胞白血病作用的克羅烷型二萜類化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 植物小豆蔻為多年生草本。根莖粗壯，棕紅色。葉兩列，葉片狹長(zhǎng)披針狀，葉鞘具 棕黃色柔毛。穗狀花序由莖基部抽出?；ㄐ蝻@著伸長(zhǎng)，花排列稀疏，花冠白色。果實(shí)長(zhǎng)卵圓 形，果皮質(zhì)韌，不易開(kāi)裂。種子團(tuán)分3瓣，每瓣種子5~9枚，種子氣味芳香而峻烈。主產(chǎn)越 南、斯里蘭卡和印度南部的馬拉巴（Malabar)海岸。實(shí)成熟時(shí)收采，除去殘留的果柄，曬干。 使用部分為姜科植物小豆蔻的干燥果實(shí)。
[0003] 藥材小豆蔻為姜科植物小豆蔻Elettaria cardamomum(L.)Maton的干燥成熟果 實(shí)，是藏醫(yī)與維吾爾醫(yī)用藥，以"加素"之名始載于《四部醫(yī)典》，現(xiàn)被多國(guó)藥典收載。小豆蔻 是世界著名的植物藥與香料，被稱為"香料之后"，原產(chǎn)于印度南部、斯里蘭卡及瓜地馬拉等 地，在印度傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中使用歷史超過(guò)兩千年，具有祛風(fēng)、健胃的功效。目前中醫(yī)很少使用，小 豆蔻曾以"豆蔻"之名收載于1953年版中國(guó)藥典。
[0004] 小豆蔻已報(bào)道的成分主要為揮發(fā)油，以及多糖與蛋白質(zhì)，推測(cè)還含有黃酮類化合 物，但目前尚未見(jiàn)黃酮類成分單體的分離與鑒定。揮發(fā)油是小豆蔻中重要的活性成分，含量 高達(dá)7%，超聲提取得到的揮發(fā)油以α-乙酸松油脂、桉油精、芳樟醇、α-松油醇、乙酸芳 樟酯為主，與超臨界CO 2提取所得成分類似；如以正己烷提取，揮發(fā)油組分有所不同，為檸檬 烯、桉油精、萜品油烯、月桂烯。此外，還含有麝香草醇、橙花基醋酸酯、蒎烯、橙花叔醇、香檜 烯等。
[0005] 小豆蔻藥理活性多樣，尤以抗腫瘤活性報(bào)道最多，涉及皮膚、肺、結(jié)腸等多個(gè)部位 的腫瘤，對(duì)胃腸道也有較好的保護(hù)作用，此外，還具有抗菌、抗氧化、抗炎、鎮(zhèn)痛等作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種從小豆蔻的干燥成熟果實(shí)中分離得到的一種具有治療 慢性粒細(xì)胞白血病作用的克羅烷型二萜類化合物及其制備方法。
[0007] 本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0008] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I )，
[0009]
[0010] 所述的化合物（I )的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將小豆蔻的干燥成熟果 實(shí)粉碎，用75~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b) 步驟（a)中乙酸乙酯萃取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用75%乙 醇洗脫10個(gè)柱體積，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗脫物浸膏；（c)步驟（b) 中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1、40:1、20 :1、12:1和1:1的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次 用體積比為20:1、12:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中 組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗 脫，收集8~10個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I )。
[0011] 進(jìn)一步地，步驟（a)中，用80%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0012] 進(jìn)一步地，所述大孔樹(shù)脂為AB-8型大孔吸附樹(shù)脂。
[0013] 藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I )和藥學(xué)上可接受的載體。
[0014] 所述的化合物（I )在制備治療慢性粒細(xì)胞白血病的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 所述的藥物組合物在制備治療慢性粒細(xì)胞白血病的藥物中的應(yīng)用。
[0016] 本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0017] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I )，其余為藥物學(xué)上可接受的、 對(duì)人和動(dòng)物無(wú)毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0018] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過(guò)口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無(wú)菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說(shuō)明】
[0019] 圖1為化合物（I )結(jié)構(gòu)式；
[0020] 圖2為化合物（I )理論E⑶值與實(shí)驗(yàn)E⑶值比較。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0022] 實(shí)施例1 :化合物（I )分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0023] 試劑來(lái)源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購(gòu)自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購(gòu)自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0024] 制備方法：（a)小豆蔻的干燥成熟果實(shí)（IOkg)粉碎，用80 %乙醇熱回流提取 (25LX3次），合并提取液，濃縮至無(wú)醇味（3L)，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3 次）和水飽和的正丁醇（3LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（398g) 和正丁醇萃取物；(b)步驟（a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔樹(shù)脂除雜，先用10%乙醇 洗脫8個(gè)柱體積，再用75 %乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75% 乙醇洗脫物浸膏（163g) ; (c)步驟（b)中75%乙醇洗脫浸膏用200-300目正相硅膠分離，依 次用體積比為85:1 (8個(gè)柱體積）、40:1 (8個(gè)柱體積）、20:1 (8個(gè)柱體積）、12:1 (10個(gè)柱體 積）和1:1 (5個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（c)中組分 4 (49g)用200-300目正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1 (8個(gè)柱體積）、12:1 (10個(gè) 柱體積）和5:1 (5個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟（d)中 組分2(25g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠0DS-C18分離，用體積百分濃度為70%的甲 醇水溶液等度洗脫，收集8~10個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I ) (244mg)。
[0025] 結(jié)構(gòu)確證：HR-ES頂S顯示[M+Na]+為m/z 411. 1120，結(jié)合核磁特征可得分子式 為 C2qH2qO8，不飽和度為 11。核磁共振氫譜數(shù)據(jù) δΗ(ΡΡπι，DMS0-d6,500MHz) :H-1(2.92, m)， Η-1(2·81，m)，Η-3(7·01，br，s)，Η-6(4·64, br，s)，H-10(L91，m)，Η-11(2·92, dd，J = 13·2,7·8)，H-ll(1.89, m)，H-12(5.24, t，J = 8.4)，H-14(6.41，br，s)，H-15(7.28, br， s)，H-16 (7.35, br，s)，H-17 (1.21，s)，H-19 (1.25, s)，H-20 (5.41，s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù) δ c(ppm，DMS0-d6,125MHz) :34. 7(CH2,1-C)，197. 8(C，2-C)，137. 6(CH，3-C)，132. 2(C，4-C)， 38. 8 (C，5-C)，94. 4 (CH，6-C)，201. I (C，7-C)，72. 2 (C，8-C)，58. 7 (C，9-C)，45. 2 (CH，10-C)， 37. 2 (CH2, 11-C)，74. I (CH，12-C)，128. 3 (C，13-C)，109. I (CH，14-C)，143. 2 (CH，15-C)， 139. 9 (CH，16-C)，24. I (CH3,17-C)，169. 9 (C，18-C)，29. 4 (CH3,19-C)，103. 7 (CH，20-C);碳原 子標(biāo)記參見(jiàn)圖1。IR光譜顯示該化合物含有羥基和內(nèi)酯基團(tuán)（3477cm 1和1768cm 4。NMR譜 數(shù)據(jù)表明該化合物含有一個(gè)典型的β -單取代呋喃環(huán)[δ H6. 41 (br，s，H-14)，7. 28 (br，s， H-15)和 7· 35 (br，s，H-16) ; δ C128. 3 (C-13)，109. I (C-14)，143. 2 (C-15)和 139. 9 (C-16)〕， 一個(gè)酯羰基[S C169. 9 (C-18)]，兩個(gè)酮羰基[δ C197. 8 (C-2)，201. I (C-7)]，一個(gè)三取代雙 鍵[δΗ7· 01(br，s，H-3) ; δ C137. 6(C-3)和 132. 2(C-4)]，三個(gè)含氧次甲基[δ C94. 4(C-6)， 74. I (C-12)和 103. 7 (C-20)]，含氧季碳[δ C72. 2 (C-8)]，以及兩個(gè)甲基[δ HI. 21 (3H，s， H3-17)和I. 25(3H，s，H3-19)]。根據(jù)它的分子式和NMR數(shù)據(jù)，該化合物鑒定為高含氧二萜類 化合物。HMBC譜中，H3-19與C-4，C-5，C-6和C-10,以及H3-17與C-7，C-8和C-9的相關(guān)性 表明化合物為含有5, 8-二甲基雙萜化合物。HMBC譜中H-6與C-18,以及H-3與C-18的相 關(guān)性，表明存在一個(gè)γ-內(nèi)酯環(huán)。此外根據(jù)HMBC譜中，H-12與C-13, C-14和C-16的相關(guān) 性，可推斷呋喃環(huán)位于C-12位上。NOESY譜中，Η3-19與Η-6, Η-6與Η3-17, Η3-17與Η-10， 以及H-IO與Η3-19的相關(guān)性表明這些質(zhì)子均為α -構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和NOESY 譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如圖1所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通 過(guò)E⑶試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致（圖2)。
[0026] 實(shí)施例2 :化合物（I )藥理作用試驗(yàn)
[0027] -、材料和儀器
[0028] K562細(xì)胞由中科院上海生物細(xì)胞所提供。化合物（I )為自制，HPLC歸一化純