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構(gòu)建彩葉欒樹品種指紋圖譜的SSR引物、所構(gòu)建的指紋圖譜及其應(yīng)用的制作方法

文檔序號:12743911閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.用于構(gòu)建彩葉欒樹品種指紋圖譜的SSR引物,其特征在于,選自以下13對引物中的任意一對或多對:

引物對1:由核苷酸序列為SEQ ID No.1所示上游引物和SEQ ID No.2所示下游引物組成;

引物對2:由核苷酸序列為SEQ ID No.3所示上游引物和SEQ ID No.4所示下游引物組成;

引物對3:由核苷酸序列為SEQ ID No.5所示上游引物和SEQ ID No.6所示下游引物組成;

引物對4:由核苷酸序列為SEQ ID No.7所示上游引物和SEQ ID No.8所示下游引物組成;

引物對5:由核苷酸序列為SEQ ID No.9所示上游引物和SEQ ID No.10所示下游引物組成;

引物對6:由核苷酸序列為SEQ ID No.11所示上游引物和SEQ ID No.12所示下游引物組成;

引物對7:由核苷酸序列為SEQ ID No.13所示上游引物和SEQ ID No.14所示下游引物組成;

引物對8:由核苷酸序列為SEQ ID No.15所示上游引物和SEQ ID No.16所示下游引物組成;

引物對9:由核苷酸序列為SEQ ID No.17所示上游引物和SEQ ID No.18所示下游引物組成;

引物對10:由核苷酸序列為SEQ ID No.19所示上游引物和SEQ ID No.20所示下游引物組成;

引物對11:由核苷酸序列為SEQ ID No.21所示上游引物和SEQ ID No.22所示下游引物組成;

引物對12:由核苷酸序列為SEQ ID No.23所示上游引物和SEQ ID No.24所示下游引物組成;

引物對13:由核苷酸序列為SEQ ID No.25所示上游引物和SEQ ID No.26所示下游引物組成。

2.按照權(quán)利要求1所述的SSR引物,其特征在于,所述彩葉欒樹品種選自錦葉欒、晉欒1號、晉欒2號或晉欒3號。

3.權(quán)利要求1所述的SSR引物在彩葉欒樹品種鑒定中的應(yīng)用。

4.權(quán)利要求1所述的SSR引物在構(gòu)建彩葉欒樹品種指紋圖譜中的應(yīng)用。

5.按照3或4所述的應(yīng)用,其特征在于,所述彩葉欒樹品種選自錦葉欒、晉欒1號、晉欒2號或晉欒3號。

6.一種彩葉欒樹品種指紋圖譜的構(gòu)建方法,其特征在于,包括以下步驟:(1)提取彩葉欒樹樣品的DNA;(2)以提取的DNA為模板,以權(quán)利要求1所述SSR引物為擴增引物,建立PCR反應(yīng)體系并進行PCR擴增;(3)將擴增產(chǎn)物進行毛細(xì)管電泳,根據(jù)毛細(xì)管電泳結(jié)果對彩葉欒樹每個品種的樣品DNA的擴增結(jié)果形成引物字母編號加擴增條帶長度數(shù)字的帶型編號,即得。

7.按照權(quán)利要求6所述的構(gòu)建方法,其特征在于,所述PCR反應(yīng)體系包括:反應(yīng)體系的總體積為25μL,其中,2×PCR MIX 12.5μl,DNA模板2μl,上游引物2μl,下游引物0.5μl,ddH2O 3μl,M13蛋白5μl;

其中,在上游引物5‘端添加核苷酸序列為SEQ ID No.27所示的序列,然后再進行PCR擴增;

所述PCR擴增的程序包括:94℃,3min;94℃,30s;每對引物的退火溫度+1℃,30s;72℃,40s;94℃,30s;每對引物的退火溫度+0.5℃,30s;72℃,40s;[94℃,30s;每對引物的退火溫度,30s;72℃,40s],35個循環(huán);72℃,7min;

每對引物的退火溫度為:引物對1的退火溫度為53℃;引物對2的退火溫度為52℃;引物對3的退火溫度為55℃;引物對4的退火溫度為54℃;引物對5的退火溫度為56℃;引物對6的退火溫度為54℃;引物對7的退火溫度為52℃;引物對8的退火溫度為55℃;引物對9的退火溫度為55℃;引物對10的退火溫度為55℃;引物對11的退火溫度為53℃;引物對12的退火溫度為53℃;引物對13的退火溫度為52℃。

8.權(quán)利要求6或7所述的構(gòu)建方法構(gòu)建得到的彩葉欒樹品種指紋圖譜,其中,所述彩葉欒樹品種是錦葉欒、晉欒1號、晉欒2號和晉欒3號。

9.按照權(quán)利要求8所述的彩葉欒樹品種指紋圖譜,其特征在于,

所述錦葉欒的指紋圖譜為:

C243-249D291-293F302H241I232L256;

所述晉欒1號的指紋圖譜為:

B128-194C249D291-293F302H247I232L256;

所述晉欒2號的指紋圖譜為:

B128-134-194-203C243-247D291-293F302H247-256I232L256;

所述晉欒3號的指紋圖譜為:

B128-134-194-203C249D293F302H241-256I232L256;

其中,B為權(quán)利要求1的引物對2的字母編號,C為權(quán)利要求1的引物對3的字母編號,D為權(quán)利要求1的引物對4的字母編號,F(xiàn)為權(quán)利要求1的引物對6的字母編號,H為權(quán)利要求1的引物對8的字母編號,I為權(quán)利要求1的引物對9的字母編號,L為權(quán)利要求1的引物對12的字母編號;各字母后的阿拉伯?dāng)?shù)字為采用該引物所擴增的DNA條帶的長度,單位為bp。

10.一種用于鑒別彩葉欒樹品種的PCR試劑盒,包括:PCR擴增引物,2×PCR MIX和ddH2O,其特征在于,所述PCR擴增引物為權(quán)利要求1所述的SSR引物。

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