本發(fā)明屬于中藥制劑質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種康腎顆粒指紋圖譜的構(gòu)建方法及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。

背景技術(shù)：

我國傳統(tǒng)中藥復(fù)雜，化學(xué)成分復(fù)雜，其藥效作用往往難以用分單一成分表達。我國現(xiàn)有中藥及其制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)相對較為簡單，大多局限于外觀性狀、鑒別，部分品種建立化學(xué)成分含量測定方法，即使在已經(jīng)建立化學(xué)成分測定藥材的方法中，其所測定成分也存在專屬性不強，與藥效沒有直接關(guān)系，難以對藥材和制劑的有效性與安全性進行全面的描述。對中藥的內(nèi)在質(zhì)量難以進行有效的控制，無法保證用藥的安全、有效，嚴(yán)重制約了我國中藥行業(yè)的發(fā)展。為加強對中藥的質(zhì)量控制，促進中藥規(guī)范化、現(xiàn)代化和標(biāo)準(zhǔn)化，采用先進的科學(xué)方法對中藥進行有效的質(zhì)量控制研究意義重大。

康腎顆粒由云南彝族經(jīng)驗方轉(zhuǎn)化的制劑，處方是由連錢草、忍冬藤、石韋、白茅根、石菖蒲、葛根、茜草、艾葉、生姜、陳皮、水蜈蚣、老鸛草12味藥材組成，具有補脾益腎，化濕降濁的作用，臨床上具有顯著的效果。康腎顆粒收載于國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中，其現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較為簡單，無法對康腎顆粒進行全面的質(zhì)量控制。

針對康腎顆粒，目前缺乏全面反映其質(zhì)量和真?zhèn)蔚姆椒ǎ夷壳安⑽从嘘P(guān)于康腎顆粒指紋圖譜的研究報道，因而，構(gòu)建針對康腎顆粒指紋圖譜的研究，對產(chǎn)品質(zhì)量控制具有較大的意義，能夠為康腎顆粒提供一種全面的質(zhì)量控制方法。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供了一種康腎顆粒指紋圖譜的構(gòu)建方法。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述構(gòu)建方法建立的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

本發(fā)明提供了一種康腎顆粒指紋圖譜的構(gòu)建方法，包括如下步驟：供試品溶液和對照品溶液的制備，高效液相色譜條件的確定，指紋圖譜的確定；

所述供試品溶液的制備為取康腎顆粒樣品0.5～5.0重量份，加入50％～100％的甲醇15～50體積份，提取15～60分鐘，過濾，取續(xù)濾液，即得；

所述高效液相色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長為270～290nm；柱溫為20～40℃；流速為0.8～1.2ml/min；流動相由流動相A和B組成，以乙腈為流動相A，以0.5～1.5％的甲酸水溶液為流動相B；進行線性梯度洗脫；

線性梯度洗脫條件為：

從0～35min，流動相A的體積分?jǐn)?shù)為5～12％；流動相B的體積分?jǐn)?shù)為95～88％；

從35～60min，流動相A的體積分?jǐn)?shù)為12～20％；流動相B的體積分?jǐn)?shù)為88～80％；

從60～85min，流動相A的體積分?jǐn)?shù)為20～40％；流動相B的體積分?jǐn)?shù)為80％～60％；

從85～100min，流動相A的體積分?jǐn)?shù)為40～90％；流動相B的體積分?jǐn)?shù)為60～10％；

從100～110min，流動相A的體積分?jǐn)?shù)為90～95％；流動相B的體積分?jǐn)?shù)為10～5％。

優(yōu)選地，所述提取的方法為超聲提取法或加熱回流法。

優(yōu)選地，所述供試品制備為取康腎顆粒樣品2.0重量份，加入75％的甲醇25體積份，提取30分鐘，過濾，取續(xù)濾液，即得。所述高效液相色譜條件中檢測波長為280nm；柱溫為25℃；流速為1.0ml/min；流動相由流動相A和B組成，以乙腈為流動相A，以1.0％的甲酸水溶液為流動相B。

優(yōu)選地，所述的供試品制備方法為取康腎顆粒樣品5.0重量份，加入100％的甲醇50體積份，提取60分鐘。所述高效液相色譜條件中檢測波長為290nm；柱溫為40℃；流速為1.2ml/min；流動相由流動相A和B組成，以乙腈為流動相A，以1.5％的甲酸水溶液為流動相B。

優(yōu)選地，所述的供試品制備方法為取康腎顆粒樣品0.5重量份，加入50％的甲醇15體積份，提取15分鐘。所述高效液相色譜條件為中檢測波長為270nm；柱溫為20℃；流速為0.8ml/min；流動相由流動相A和B組成，以乙腈為流動相A，以0.5％的甲酸水溶液為流動相B。

優(yōu)選地，所述對照品溶液的制備為：分別取葛根素、咖啡酸、大豆苷、迷迭香酸、橙皮苷、大豆苷元對照品，加入甲醇，配制成濃度為葛根素90.0μg/ml、咖啡酸52.6μg/ml、大豆苷127.2μg/ml、迷迭香酸80.4μg/ml、橙皮苷19.1μg/ml、大豆苷元42.8μg/ml的對照品溶液。

優(yōu)選地，高效液相色譜條件中進樣量為10μL。

本發(fā)明中提及的重量份與體積份的關(guān)系為g/ml的關(guān)系；

中藥指紋圖譜技術(shù)是一種控制中藥質(zhì)量的現(xiàn)代化關(guān)鍵技術(shù)，能全面的反應(yīng)藥物所含化學(xué)成分的種類和數(shù)量，對藥物的物質(zhì)基礎(chǔ)進行全面的闡釋，進而更好的控制藥物內(nèi)在質(zhì)量。

而在中藥指紋圖譜的構(gòu)建方法中，為了使指紋圖譜中各特征峰具有較好的分離度、峰形等，色譜條件(柱溫、檢測波長、流動相種類、梯度洗脫程序、流速等)和供試品制備方法(制備方式、制備時間、制備溶液等)對指紋圖譜影響較大。且由于對于不同的中藥材及制劑，其中的化學(xué)成為千差萬別，不同的藥材及制劑的指紋圖譜的構(gòu)建方法并無參考價值。因此申請人在大量實驗基礎(chǔ)上，針對康腎顆粒中各種成分的特性，進行色譜條件以及供試品制備方法進行了摸索及優(yōu)化，最終確定上述條件，且獲得了顯著的分離效果。

本發(fā)明另外提供一種根據(jù)所述的構(gòu)建方法得到的康腎顆粒標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜含有27個共有峰，以葛根素峰為參照，27個共有峰相對保留時間比依次為：0.171～0.173，0.245～0.247，0.291～0.293，0.362～0.365，0.520～0.524，0.693～0.696，0.740～0.742，0.806～0.808，0.849～0.853，1.000，1.022～1.023，1.078～1.080，1.099～1.101，1.152～1.154，1.259～1.261，1.287～1.290，1.4996～1.502，1.545～1.550，1.758～1.766，1.889～1.900，1.979～1.990，2.086～2.098，2.121～2.137，2.168～2.182，2.181～2.196，2.349～2.367，2.700～2.719；

優(yōu)選地，本發(fā)明另外提供一種根據(jù)所述的構(gòu)建方法得到的康腎顆粒標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜含有27個共有峰，以葛根素峰為參照，27個共有峰相對保留時間比依次為：0.172，0.246，0.292，0.364，0.523，0.695，0.741，0.807，0.852，1.000，1.023，1.079，1.100，1.153，1.260，1.288，1.499，1.547，1.763，1.895，1.986，2.094，2.129，2.176，2.189，2.358，2.710。

本發(fā)明提供的方法，其精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性實驗中，共有峰的相對保留時間的RSD均小于5％，相對峰面積的RSD均小于5％，相似度均大于0.900，樣品在48個小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。

針對該方法所獲得康腎顆粒指紋圖譜，能全面的反應(yīng)藥物所含化學(xué)成分的種類和數(shù)量，對藥物的物質(zhì)基礎(chǔ)進行全面的闡釋，能夠準(zhǔn)確地對多批次樣品進行相似度分析，進而更好的控制藥物內(nèi)在質(zhì)量。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點及有益效果：

本發(fā)明所構(gòu)建的康腎顆粒指紋圖譜，有多個共有峰的色譜信息構(gòu)成，改變單一指標(biāo)成分進行質(zhì)量控制的技術(shù)手段，能夠系統(tǒng)全面地反映其物質(zhì)基礎(chǔ)，從而進行全面、有效的質(zhì)量控制，并且所建立的方法精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性較好，可用于康腎顆粒內(nèi)在質(zhì)量的控制。

附圖說明

圖1為精密度試驗指紋圖譜疊加圖。

圖2為重復(fù)性試驗指紋圖譜疊加圖。

圖3為穩(wěn)定性試驗指紋圖譜疊加圖。

圖4為康腎顆粒13批樣品指紋圖譜疊加圖。

圖5為混合對照品指紋圖譜。

圖6為對照指紋圖譜。

圖7為藥材與樣品指紋圖譜匹配疊加圖。

具體實施方式

以下結(jié)合具體實施例和附圖來進一步說明本發(fā)明，但實施例并不對本發(fā)明做任何形式的限定。除非特別說明，本發(fā)明采用的試劑、方法和設(shè)備為本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)試劑、方法和設(shè)備。

除非特別說明，本發(fā)明所用試劑和材料均為市購。

儀器、試劑及樣品信息如下：

1、儀器

2695-2998型waters高效液相色譜儀(waters公司)，CPA225D型電子分析天平(d＝0.01mg，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)，SB-5200D型超聲儀(寧波新芝生物科技股份有限公司)、HWS24型恒溫水浴鍋(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)、Waters Summetry C18色譜柱(4.6×250mm，5μm)(waters公司)。

2、試劑

對照品：葛根素對照品(110752-201107，中國食品藥品檢定研究院)、大豆苷元對照品(111502-200402，中國食品藥品檢定研究院)、大豆苷對照品(111738-201302，中國食品藥品檢定研究院)、橙皮苷對照品(110721-201316中國食品藥品檢定研究院)、迷迭香酸對照品(111871-2014，中國食品藥品檢定研究院)、咖啡酸對照品(110885-200102，中國食品藥品檢定研究院)

色譜甲醇購自O(shè)CEANPAK公司，色譜乙腈購自Burdick&Jackson公司，甲醇、無水乙醇、甲酸等均為色譜純，水為自制超純水。

3、樣品

單味藥材連錢草、忍冬藤、石韋、白茅根、石菖蒲、葛根、茜草、艾葉、生姜、陳皮、水蜈蚣、老鸛草經(jīng)廣州一品紅制藥有限公司質(zhì)量部鑒定為正品，其中連錢草為唇形科植物活血丹Glechoma longituba(Nakai)Kupr.的干燥地上地上部分，忍冬藤為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥莖枝，石韋為水龍骨科植物廬山石韋Pyrrasia sheareri(Bak.)Ching、石韋Pyrrosia lingua(Thunb.)Farwell或有柄石韋Pyrrosia petiolosa(Christ)Ching的干燥葉、白茅根為禾本科植物白茅Imperata cylindrical Beauv.var.major(Nees)C.E.Hubb.的干燥根莖，石菖蒲為天南星科植物石菖蒲Acorus tatarinowii Schott的干燥根莖，葛根為豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwid的干燥根，茜草為茜草科植物茜草Rubia cordifolia L.的干燥根和根莖，艾葉為菊科植物艾Artemisia argyi Levl.et Vant.的干燥葉，生姜為姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.的新鮮根莖，陳皮為蕓香科植物橘Citrus reticulat Blanco及其栽培變種的干燥成熟果實，水蜈蚣為莎草科植物水蜈蚣Kyllinga brevifolia Rottb.的干燥全草，老鸛草為牻牛兒苗植物牻牛兒苗Erodium stephanianum Wild.、老鸛草Geranium wilordii Maxim.或野老鸛草Geranium carolinianum L.的干燥地上部分。

康腎顆粒(規(guī)格：12g/袋)13批，編號及批號見表1

表1樣品信息表

實施例1

1、供試品溶液的制備：取樣品約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75％甲醇25ml，稱定重量，超聲提取法提取30分鐘，放冷，再稱定重量，用75％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2、對照品溶液的制備：取葛根素、咖啡酸、大豆苷、迷迭香酸、橙皮苷、大豆苷元對照品，精密稱定，加甲醇配制成濃度為葛根素90.0μg/ml、咖啡酸52.6μg/ml、大豆苷127.2μg/ml、迷迭香酸80.4μg/ml、橙皮苷19.1μg/ml、大豆苷元42.8μg/ml的混合對照品溶液。

3、高效液相色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長為280nm；柱溫為25℃；以乙腈為流動相A，以1.0％甲酸水為流動相B；梯度洗脫；流速為1.0ml/min；梯度洗脫程序為：

0～35分鐘，流動相A從5％變?yōu)?2％，流動相B為95％變?yōu)?8％；

35～60分鐘，流動相A從12％變?yōu)?0％，流動相B為88％變?yōu)?0％；

60～85分鐘，流動相A從20％變?yōu)?0％，流動相B為80％變?yōu)?0％；

85～100分鐘，流動相A從40％變?yōu)?0％，流動相B為60％變?yōu)?0％；

100～110分鐘，流動相A從90％變?yōu)?5％，流動相B為95％變?yōu)?％；

樣品測定法，分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液10μl，注入高效液相色譜儀測定，即得指紋圖譜。

所構(gòu)建康腎顆粒指紋圖譜，共有27個共有峰，與對照品指紋圖譜對照出峰時間對比，按出峰順序確定8號峰為咖啡酸、10號峰為葛根素、15號峰為大豆苷、20號峰為橙皮苷、21號峰為迷迭香酸、22號峰為大豆苷元。以10號峰葛根素為參照峰，27個共有峰相對保留時間比依次為：0.172，0.246，0.292，0.364，0.523，0.695，0.741，0.807，0.852，1.000，1.023，1.079，1.100，1.153，1.260，1.288，1.499，1.547，1.763，1.895，1.986，2.094，2.129，2.176，2.189，2.358，2.710。

實施例2

1、供試品溶液的制備：取本品約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50％甲醇15ml，稱定重量，超聲提取法提取15分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2、對照品溶液的制備：取葛根素、咖啡酸、大豆苷、迷迭香酸、橙皮苷、大豆苷元對照品，精密稱定，加甲醇配制成濃度為葛根素90.0μg/ml、咖啡酸52.6μg/ml、大豆苷127.2μg/ml、迷迭香酸80.4μg/ml、橙皮苷19.1μg/ml、大豆苷元42.8μg/ml的混合對照品溶液。

3、高效液相色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長為270nm；柱溫為20℃；以乙腈為流動相A，以0.5％甲酸水為流動相B；梯度洗脫；流速為0.8ml/min；梯度洗過程序為：

0～35分鐘，流動相A從5％變?yōu)?2％，流動相B為95％變?yōu)?8％；

35～60分鐘，流動相A從12％變?yōu)?0％，流動相B為88％變?yōu)?0％；

60～85分鐘，流動相A從20％變?yōu)?0％，流動相B為80％變?yōu)?0％；

85～100分鐘，流動相A從40％變?yōu)?0％，流動相B為60％變?yōu)?0％；

100～110分鐘，流動相A從90％變?yōu)?5％，流動相B為95％變?yōu)?％；

樣品測定法，分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液10μl，注入高效液相色譜儀測定，即得指紋圖譜。

所構(gòu)建康腎顆粒指紋圖譜，共有27個共有峰，與對照品指紋圖譜對照出峰時間對比，按出峰順序確定8號峰為咖啡酸、10號峰為葛根素、15號峰為大豆苷、20號峰為橙皮苷、21號峰為迷迭香酸、22號峰為大豆苷元。以10號峰葛根素為參照峰，27個共有峰相對保留時間比依次為：0.171，0.245，0.291，0.362，0.520，0.693，0.740，0.806，0.849，1.000，1.022，1.078，1.099，1.152，1.259，1.287，1.4996，1.545，1.758，1.889，1.979，2.086，2.121，2.168，2.181，2.349，2.700。

實施例3

1、供試品溶液的制備：取本品約5.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入100％甲醇50ml，稱定重量，加熱回流法提取60分鐘，放冷，再稱定重量，用100％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2、對照品溶液的制備：取葛根素、咖啡酸、大豆苷、迷迭香酸、橙皮苷、大豆苷元對照品，精密稱定，加甲醇配制成濃度為葛根素90.0μg/ml、咖啡酸52.6μg/ml、大豆苷127.2μg/ml、迷迭香酸80.4μg/ml、橙皮苷19.1μg/ml、大豆苷元42.8μg/ml的混合對照品溶液。

3、高效液相色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長為290nm；柱溫為40℃；以乙腈為流動相A，以1.5％甲酸水為流動相B；梯度洗脫；流速為1.2ml/min；梯度洗過程序為：

0～35分鐘，流動相A從5％變?yōu)?2％，流動相B為95％變?yōu)?8％；

35～60分鐘，流動相A從12％變?yōu)?0％，流動相B為88％變?yōu)?0％；

60～85分鐘，流動相A從20％變?yōu)?0％，流動相B為80％變?yōu)?0％；

85～100分鐘，流動相A從40％變?yōu)?0％，流動相B為60％變?yōu)?0％；

100～110分鐘，流動相A從90％變?yōu)?5％，流動相B為95％變?yōu)?％；

樣品測定法，分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液10μl，注入高效液相色譜儀測定，即得指紋圖譜。

所構(gòu)建康腎顆粒指紋圖譜，共有27個共有峰，與對照品指紋圖譜對照出峰時間對比，按出峰順序確定8號峰為咖啡酸、10號峰為葛根素、15號峰為大豆苷、20號峰為橙皮苷、21號峰為迷迭香酸、22號峰為大豆苷元。以10號峰葛根素為參照峰，27個共有峰相對保留時間比依次為：0.173，0.247，0.293，0.365，0.520～0.524，0.696，0.742，0.808，0.853，1.000，1.023，1.080，1.101，1.154，1.261，1.290，1.502，1.550，1.766，1.900，1.990，2.098，2.137，2.182，2.196，2.367，2.719。

實施例4：

1、精密度試驗

取批號為20151201批次樣品，按實施例1方法制備供試品溶液，依據(jù)實施例1色譜條件連續(xù)進樣6次，以相對保留時間、相對峰面積、相似度為考察指標(biāo)，結(jié)果顯示，共有峰的相對保留時間的RSD均小于5％，相對峰面積的RSD均小于5％，相似度均大于0.900，符合指紋圖譜的要求，表明儀器的精密度良好。

所得指紋圖譜疊加圖見圖1。

同時，分別按照實施例2、3中條件進行上述精密度實驗，共有峰的相對保留時間的RSD均小于5％，相對峰面積的RSD均小于5％，相似度均大于0.900，表明采用實施例2、3中的方法也能符合指紋圖譜的要求。

2、重復(fù)性試驗

取批號為20151201批次樣品6份，按實施例1方法制備供試品溶液，依據(jù)實施例1色譜條件連續(xù)進樣6次，以相對保留時間、相對峰面積、相似度為考察指標(biāo)，結(jié)果顯示共有峰的相對保留時間的RSD均小于5％，相對峰面積的RSD均小于5％，相似度均大于0.900，符合指紋圖譜的要求，表明方法的重復(fù)性良好。

所得指紋圖譜疊加圖見圖2。

同時，分別按照實施例2、3中條件進行上述重復(fù)性實驗，與共有峰的相對保留時間的RSD均小于5％，相對峰面積的RSD均小于5％，相似度均大于0.900，表明采用實施例2、3中的方法也能符合指紋圖譜的要求。

3、穩(wěn)定性試驗

取精密度試驗樣品，依據(jù)實施例1下色譜條件分別在0、6、10、16、26、39、48小時進樣，以相對保留時間、相對峰面積、相似度為考察指標(biāo)，結(jié)果顯示共有峰的相對保留時間的RSD均小于5％，相對峰面積的RSD均小于5％，相似度均大于0.900，符合指紋圖譜的要求，表明樣品在48個小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。

所得指紋圖譜疊加圖見圖3。

同時，分別按照實施例2、3中條件進行上述穩(wěn)定性實驗，共有峰的相對保留時間的RSD均小于5％，相對峰面積的RSD均小于5％，相似度均大于0.900，表明采用實施例2、3中的方法也能符合指紋圖譜的要求。

實施例5：

1、按照實施例1條件，取康腎顆粒樣品溶液、混合對照品溶液，藥材供試品溶液(藥材供試品溶液制備：分別取處方中12味藥材，每份取約1g，精密稱定，按照實施例1中方法供試品制備方法制備藥材供試品溶液。)，依據(jù)實施例1下色譜條件進樣，記錄色譜圖。

2、對照指紋圖譜的建立

對13批樣品指紋圖譜進行數(shù)據(jù)處理：

導(dǎo)入國家藥典委員會的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》，平均值法生成對照指紋圖譜，時間窗寬度為0.1min，校正方式為多點校正。

確定了27個色譜峰為康腎顆粒共有指紋峰，結(jié)合供試品以及對照品的保留時間以及DAD色譜圖，可知共有峰中8號峰為咖啡酸、10號峰為葛根素、15號峰為大豆苷、20號峰為橙皮苷、21號峰為迷迭香酸、22號峰為大豆苷元。

13批樣品指紋圖譜、混合對照品指紋圖譜、對照指紋圖譜分別見圖4～6。

從圖4中也可以看出，利用該方法檢測到的康腎顆粒指紋圖譜中化學(xué)成分多、各特征峰高度適中，基線平穩(wěn)，分離度、峰形和柱效好。

實施例6：

采用國家藥典委員會的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》，將測定的13批樣品指紋圖譜數(shù)據(jù)與生成的對照圖譜進行相似度分析，13批樣品的相似度見表2，從表中數(shù)據(jù)來看，13批樣品相似度均在0.980以上，說明本品的質(zhì)量穩(wěn)定性較好。

表2 13批樣品相似度

實驗例7：色譜峰歸屬

取康腎顆粒供試品溶液、混合對照品溶液、藥材供試品溶液(同實施例5)。按實施例1中色譜條件進樣，記錄色譜圖。通過色譜柱匹配和分析，對共有峰進行歸屬，見表3和圖7。

其中，有10個成分歸屬到連錢草、7個成分歸屬到忍冬藤，4個成分歸屬到石韋，7個成分歸屬到陳皮，4個成分歸屬到白茅根，6個成分歸屬到石菖蒲，10個成分歸屬到葛根，6個成分歸屬到茜草，9個成分歸屬到艾葉，1個成分歸屬到生姜，5個成分歸屬到水蜈蚣，3個成分歸屬到老鸛草，其中24號色譜峰沒有藥材歸屬。

據(jù)此，得到康腎顆粒指紋圖譜，所述指紋圖譜含有27個共有峰，以葛根素峰為參照，27個共有峰相對保留時間比依次為：0.172，0.246，0.292，0.364，0.523，0.695，0.741，0.807，0.852，1.000，1.023，1.079，1.100，1.153，1.260，1.288，1.499，1.547，1.763，1.895，1.986，2.094，2.129，2.176，2.189，2.358，2.710。

表3指紋圖譜共有峰歸屬

可見，本發(fā)明所述康腎顆粒指紋圖譜的構(gòu)建方法，可全面反映康腎顆粒的物質(zhì)基礎(chǔ)信息，且方法準(zhǔn)確可行。

實施例8

分別取康腎顆粒成品三批，批號分別為20160101、20160204、20160304，按照實施例1的方法操作得到樣品指紋圖譜，導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》，采用“分析檢驗”模式，與實施例7中康腎顆粒對照指紋圖譜進行比對，計算其相似度，結(jié)果三批樣品相似度分別為0.951、0.965、0.950，說明三批康腎顆粒物質(zhì)基礎(chǔ)與對照指紋圖譜一致。

顯然，上述實施例僅僅是為清楚的說明所做的舉例，而并非對實施方式的限定。對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以作出不同形式的變化或變動。這里無需也無法對所有的實施方式予以窮舉。而由此所引申的顯而意見的變化或變動仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護范圍之中。