一種中藥組合物指紋圖譜的建立方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種中藥組合物的質(zhì)量控制方法，具體設(shè)及一種利用高效液相色譜法 對(duì)胃力康顆粒制劑指紋圖譜的構(gòu)建方法及其指紋圖譜。
【背景技術(shù)】
[0002] 中藥質(zhì)量控制是中藥現(xiàn)代化的重要內(nèi)容，中藥指紋圖譜技術(shù)被認(rèn)為是中藥質(zhì)量控 制研究的有效手段。中藥指紋圖譜是指運(yùn)用現(xiàn)代分析技術(shù)對(duì)中藥化學(xué)信息W圖形方式進(jìn)行 表征并加W描述，是某種或某幾種中藥材所共有，具有特征性的某幾類(lèi)成分的色譜或光譜 的圖譜。中藥指紋圖譜能比較全面地反映中藥中化學(xué)物質(zhì)的種類(lèi)和數(shù)量，可W用于中藥質(zhì) 量的可控性和產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性的提升。利用高效液相色譜法構(gòu)建的指紋圖譜技術(shù)在原有 指紋圖譜的方法上賦予指紋圖譜大量的定性、定量信息共同應(yīng)用于中藥質(zhì)量控制，對(duì)指紋 圖譜中多個(gè)目標(biāo)成分尤其是有效成分進(jìn)行準(zhǔn)確定量，使中藥質(zhì)量控制更加準(zhǔn)確，能從根本 上保證中藥材質(zhì)量W及批與批之間產(chǎn)品質(zhì)量的一致性。
[0003] 胃力康顆粒是由柴胡（醋炙）、赤巧、積殼（教炒）、木香、丹參、延胡索、義術(shù)、黃 連、吳榮英、大黃（酒炙）、黨參和甘草組成，具有行氣活血，泄熱和胃功效，用于主治氣滯血 疲兼肝胃郁熱所致的胃腕疼痛，脹悶，灼熱，曖氣泛酸，煩躁易怒，口干口苦，W及慢性淺表 性胃炎見(jiàn)上述證候者。目前胃力康顆粒所用的質(zhì)量控制方法是采用薄層色譜法對(duì)赤巧、延 胡索、黃連、大黃和丹參中的巧藥巧、延胡索乙素、鹽酸小築堿、大黃酸和丹參酬IIA進(jìn)行鑒 另IJ，同時(shí)對(duì)巧藥巧含量進(jìn)行測(cè)定。該標(biāo)準(zhǔn)中主要是W薄層色譜定性鑒別方法控制制劑質(zhì)量， 無(wú)法對(duì)產(chǎn)品成分進(jìn)行定量分析，因此不能保證藥材質(zhì)量的穩(wěn)定性、W及產(chǎn)品批與批之間的 質(zhì)量均一性。
[0004] 由于胃力康顆粒組分復(fù)雜，任何一種單一成分均不能反映其整體療效，測(cè)定其中 任何一種單一成分的含量多少也都反映不出其所體現(xiàn)的整體療效。中藥指紋圖譜是一種多 指標(biāo)的質(zhì)量控制模式，可W較全面的反映所含化學(xué)成分的種類(lèi)和數(shù)量，能夠更加有效地體 現(xiàn)出中藥成分的整體性和綜合作用，從而更好地評(píng)價(jià)中藥及其制劑的質(zhì)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供了一種胃力康顆粒指紋圖譜的建立方法及其指紋圖譜，克服了現(xiàn)有質(zhì) 量控制方法的不足，可W確保胃力康顆粒所用中藥材的質(zhì)量穩(wěn)定性，W及胃力康顆粒制劑 的質(zhì)量穩(wěn)定性、均一性和可控性，從而提高胃力康顆粒用藥的安全、有效、穩(wěn)定及質(zhì)量可靠。
[0006] 本發(fā)明提供了一種胃力康顆粒指紋圖譜的建立方法：胃力康顆粒加純水溶解，W 巧藥巧、抽皮巧、蘆下、丹參酪酸B、迷迭香酸、大黃素-8-0-P-D化喃葡萄糖巧、甘草酸為 對(duì)照品，照高效液相色譜法建立指紋圖譜。
[0007] 本發(fā)明提供的一種胃力康顆粒指紋圖譜的建立方法：其中，胃力康顆粒用純水溶 解配制成1.Og/mL供試品溶液；分別精密稱(chēng)定巧藥巧、抽皮巧、蘆下、丹參酪酸B、迷迭香酸、 大黃素-8-0-P-D化喃葡萄糖巧溶于甲醇溶液配制成0. 5mg/mL對(duì)照品溶液，精密稱(chēng)定甘草 酸溶于50%的甲醇溶液中配制成0. 5mg/mL對(duì)照品溶液，按照高效液相色譜法建立指紋圖 譜。
[0008] 前述方法中所述高效液相色譜法的色譜條件為：色譜柱為AgilentZorbax EclipsePlusC18柱（4. 6X250mm，5ym)，流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為0. 2%甲酸水溶液， 梯度洗脫，流速1. 0血/min,柱溫25 °C，檢測(cè)波長(zhǎng)：0~45min，254nm;45~80min，230nm; 80 ~llSmin，254nm。
[0009] 本發(fā)明提供的一種胃力康顆粒指紋圖譜的建立方法：
[0010] (a)供試品溶液的制備：精密稱(chēng)定胃力康顆粒樣品10.Og，置lOmL容量瓶中，加入 純水定容至刻度，超聲15min，冷卻，用純水補(bǔ)足重新定容至刻度，搖勻，取ImL該溶液用微 孔濾膜過(guò)濾，14000r/min離屯、lOmin，取上清液置4°C冰箱作為供試品溶液備用；
[0011] 化）對(duì)照品溶液的制備：分別精密稱(chēng)定巧藥巧、抽皮巧、蘆T、丹參酪酸B、迷迭香 酸、大黃素-8-0-P-D化喃葡萄糖巧5mg溶于甲醇溶液，配制為0. 5mg/mL對(duì)照品溶液，-4°C 冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆?；精密稱(chēng)取甘草酸5mg，溶于50 %的甲醇中，配制為0. 5mg/mL對(duì)照品溶 液，-4°C冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆茫?br>[001引（C)色譜條件：色譜柱為AgilentZorbaxEclipsePlusC18柱(4. 6X250mm，5ym);流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為0. 2 %甲酸水溶液，梯度洗脫，流速 1.OmL?min1，柱溫25°C，檢測(cè)波長(zhǎng)：0 ~45min，254nm;45 ~80min，230nm;80 ~115min， 254nm；
[0013] (d)測(cè)定：精密吸取供試品溶液10yL注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定， 得到胃力康顆粒的指紋圖譜。
[0014] 其中，步驟（a)中微孔濾膜為0.45ym微孔濾膜；步驟（C)中梯度洗脫的程序是按 照如下體積比濃度配置進(jìn)行：
[0015]
[0016]
[0017] 本發(fā)明人通過(guò)對(duì)胃力康顆粒進(jìn)行指紋圖譜研究，建立了胃力康顆粒指紋圖譜檢測(cè) 方法，并通過(guò)方法學(xué)考察，驗(yàn)證該方法精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性均符合要求。
[0018] 精密度實(shí)驗(yàn)
[0019] 取同一批胃力康供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10yL檢測(cè)指紋圖譜，測(cè)定主要 共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，主要共有峰相對(duì)峰面積RSD小于2. 99%，相對(duì)保留 時(shí)間RSD小于0. 52%，表明儀器精密度良好，具體結(jié)果見(jiàn)表1、表2所示。
[0020] 表1同一批胃力康顆粒樣品共有峰的保留時(shí)間
[0021]
[00巧]重復(fù)性實(shí)驗(yàn)
[0026]取同一批胃力康樣品，制備6份供試品溶液，測(cè)定主要共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和 相對(duì)峰面積，結(jié)果胃力康顆粒主要共有峰峰面積的RSD小于2. 98%，保留時(shí)間的RSD小于 0. 26%，表明方法重復(fù)性好，具體結(jié)果見(jiàn)表3、表4所示。
[0027] 表3同一批胃力康顆粒樣品共有峰的保留時(shí)間
[0028]
[0032] 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
[0033] 取同一批胃力康供試品溶液分別在0、2、4、6、8、2地進(jìn)樣，每次10化檢測(cè)指紋圖 譜，測(cè)定主要共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，結(jié)果胃力康顆粒主要共有峰的峰面積 的RSD小于2. 79%，保留時(shí)間的RSD小于0. 25%，表明樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定性較好，具體結(jié)果 見(jiàn)表5、表6所不。
[0034] 表5同一批胃力康樣品共有峰的相對(duì)保留時(shí)間
[0035]
[0038]
[0039] 指紋圖譜的測(cè)定與分析
[0040] 按照確定的指紋圖譜檢測(cè)方法測(cè)定了 10批胃力康顆粒指紋圖譜，對(duì)10批樣品指 紋圖譜進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，確定占總峰面積90%W上的13個(gè)色譜峰為胃力康顆粒的共有峰。
[0041] 采用國(guó)家藥典委員會(huì)編的"中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004A版"，參數(shù)設(shè) 置：(a)參照?qǐng)D譜：采用1112054(S1)樣品作為相似度計(jì)算時(shí)校正的參照?qǐng)D譜?；r(shí)間窗 寬度：0. 10。（C)校正方式：多點(diǎn)校正。校正色譜峰的確定：實(shí)驗(yàn)記錄了保留時(shí)間115min的 色譜圖。（d)指紋圖譜的生成：將10批樣品色譜圖生成指紋圖譜見(jiàn)圖1，生成的對(duì)照指紋圖 譜見(jiàn)圖2,相似度計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表7,10批樣品相似度均在0. 9W上，符合要求。
[0042] 表7十批樣品相似度評(píng)價(jià)結(jié)果
[0043]
[0044] 本發(fā)明使用二極管陣列檢測(cè)器對(duì)樣品在210、230、254、360皿的波長(zhǎng)下進(jìn)行掃描， 并對(duì)各波長(zhǎng)下的色譜圖進(jìn)行分析比較。結(jié)果表明，在230nm和254nm波長(zhǎng)下檢測(cè)到的峰的 數(shù)目較多，各峰分離良好，特征峰明顯且峰形較好，從圖譜中可W盡可能的獲取色譜組分信 息W反映體系組成的全貌。并且本發(fā)明經(jīng)過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)選擇W下特定時(shí)間段 的特定檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，即0~45min時(shí)選擇254皿、45~80min時(shí)選擇230皿、80~115min 時(shí)選擇254nm，所得到的各峰分離最好，特征峰最明顯且峰形最好。
[0045] 本發(fā)明人對(duì)洗脫液進(jìn)行了系列篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)采用乙臘-水進(jìn)行梯度洗脫，獲 得的色譜峰信息較少，把有機(jī)相改為甲醇，獲得較多色譜峰W反映體系組成，后把水相改 為0. 2%甲酸水，基線漂移小，出峰數(shù)目多，峰分離情況比較理想。在此基礎(chǔ)上，調(diào)整甲醇一 0. 2 %甲酸水梯度洗脫的比例關(guān)系，最終確定了色譜洗脫條件。
[0046] 由于胃力康顆粒組分復(fù)雜，任何一種單一成分均不能反映其所體現(xiàn)的整體療效。 故通過(guò)多種分析檢測(cè)手段，測(cè)定其中任何一種單一成分的含量多少也都反映不出其所體現(xiàn) 的整體療效。中藥指紋圖譜是一種多指標(biāo)的質(zhì)量控制模式，雖然它不能代替含量測(cè)定，但它 比測(cè)定任何單一成分所提供的信息卻豐富得多，可W比較全面的反映所含化學(xué)成分的種類(lèi) 和數(shù)量，能夠更加有效地體現(xiàn)出中藥成分的整體性和綜合作用，從而更好地評(píng)價(jià)中藥及其 制劑的質(zhì)量。所W利用現(xiàn)代色譜分析技術(shù)建立胃力康顆粒的色譜指紋圖譜并對(duì)胃力康顆粒 進(jìn)行宏觀的綜合分析是非常必要的，因?yàn)樗上鄬?duì)提供關(guān)于胃力康顆粒的整體特征，保證 胃力康顆粒的安全、有效、穩(wěn)定及質(zhì)量可靠。
[0047] 相似度評(píng)價(jià)是指紋圖譜研究的一個(gè)重要組成部分，所建