專利名稱：一種中藥組合物的氣相色譜指紋圖譜檢測方法
技術領域：
本發(fā)明屬于中藥分析領域，涉及一種中藥組合物的氣相色譜指紋圖譜檢測方法，具體涉及對一種由桂枝、茯苓、白芍、牡丹皮、桃仁為原料藥制成的中藥組合物進行氣相色譜指紋圖譜檢測的方法。
背景技術：
桂枝茯苓藥物組合物由中藥桂枝、茯苓、白芍、牡丹皮、桃仁五味原料藥材制成，具有活血化瘀、緩消癥塊的功效，臨床主要用于治療慢性盆腔炎、痛經、子宮肌瘤等疾病。該中藥組合物的膠囊制劑已獲得中國國家食品藥品監(jiān)督管理局批準上市銷售，藥品的通用名稱為桂枝茯苓膠囊，藥品批準文號為國藥準字Z10950005。
本發(fā)明的申請人對桂枝茯苓藥物組合物的制備工藝進行了研究，并申請中國發(fā)明專利，申請?zhí)枮?00310116836. X，公開號為CN1546129。之后申請人對該桂枝茯苓藥物組合物的質量檢測方法進行了研究，并也申請了中國發(fā)明專利，申請?zhí)枮?00410000136. 9，公開號為 CN1556404。2010版《中國藥典》一部在984頁至986頁中提供了桂枝茯苓丸和桂枝茯苓膠囊制備方法，還提供了采用高效液相色譜法對桂枝茯苓膠囊(丸)中肉桂酸、丹皮酚、芍藥苷、苦杏仁苷進行含量測定的方法，此外，還提供了采用高效液相色譜法對桂枝茯苓膠囊進行指紋圖譜檢測的方法。馮燕芹等人于1994年在《中國藥科大學學報》上發(fā)表論文《氣相色譜法測定桂枝茯苓膠囊中丹皮酚的含量》，該論文提供了采用一種氣相色譜法，以正十五烷為內標物對桂枝茯苓膠囊中的丹皮酚進行含量測定的方法。賴文豪于2007年在《海峽藥學》雜志社發(fā)表論文《毛細管氣相色譜法測定桂枝茯苓膠囊中丹皮酚含量》，該論文提供了一種采用毛細管氣相色譜法測定桂枝茯苓膠囊中丹皮酚含量的方法。郭曉玲于1999年在《中藥材》雜志社發(fā)表論文《桂枝茯苓膠囊中桂皮醛和丹皮酚的含量》，該論文提供了一種采用毛細管氣相色譜法，以正十八烷為內標物，對桂枝茯苓膠囊中桂皮醛和丹皮酚的含量同時進行測定的方法。綜上，現有技術中已有對桂枝茯苓藥物組合物進行高效液相色譜指紋圖譜的檢測方法，在該方法中盡管可以對藥物組合物中揮發(fā)性成分進行檢測，但并不全面。對于揮發(fā)性成分的檢測，比較好的方法是采用氣相色譜法。同時，現有技術中，雖也有對該藥物進行氣相色譜法檢測的方法，但是所檢測的成分都比較單一，一般是一種或兩種成分，如桂皮醛或丹皮酚，僅僅依靠這兩種成分不能全面反映桂枝茯苓藥物組合物的實際質量。為了更全面地反應桂枝茯苓藥物組合物實際質量，本發(fā)明將指紋圖譜技術和氣相色譜檢測方法相結合，建立了一種采用氣相色譜法對桂枝茯苓藥物組合物進行指紋圖譜檢測的方法，該方法可以更為全面檢測藥物的質量，提高產品的質量控制水平。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種對由中藥桂枝、茯苓、白芍、牡丹皮、桃仁為原料藥制成的中藥組合物進行氣相色譜指紋圖譜檢測的方法。本發(fā)明是通過以下技術方案來實現本發(fā)明目的的一種由桂枝、茯苓、白芍、牡丹皮、桃仁為原料藥制成的中藥組合物的氣相色譜指紋圖譜檢測的方法，該方法的色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗為選用毛細管柱；進樣口溫度為220 240°C ;檢測器為氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度為230 250°C ;柱溫為70 90°C，保持2 4min，以15 25°C /min速度升溫至150 170°C，保持5 7min，以25 350C /min速度升溫至240 260°C，保持13 15min ;分流比為20 30 I ；N2流速為0. 5 2. OmL/min ;理論塔板數按參照物丹皮酚計算不得低于3000 ；參照物溶液的制備方法為取丹皮酚對照品加乙醚配制成參照物溶液；供試品溶液的制備方法為取供試品加入水和乙醚，水浴回流，分離出乙醚層溶液 和水層溶液，乙醚層溶液備用；水層溶液用乙醚萃取，萃取液與之前得到的乙醚層溶液合并，制成供試品溶液；進樣檢測的方法為分別吸取對照品溶液與供試品溶液，注入氣相色譜儀，測定。該檢測方法中參照物溶液的制備方法優(yōu)選為取丹皮酚對照品適量，精密稱定，力口乙醚配制成每ImL含0. 2 2. Omg的溶液。更為優(yōu)選的參照物溶液的制備方法為取丹皮酚對照品適量，精密稱定，加乙醚配制成每ImL含Img的溶液。該檢測方法中供試品溶液的制備方法優(yōu)選為取供試品2. 0 5. Og，加入40 60mL水和20 40mL乙醚，65 85°C水浴回流0. 5 2. Oh,分離出乙醚層溶液和水層溶液，乙醚層溶液備用；水層溶液用乙醚萃取I 3次，每次加入乙醚20 40mL，合并萃取液，并與之前得到的乙醚層溶液合并，25 45°C揮發(fā)至3 7mL，即為供試品溶液。更為優(yōu)選的供試品溶液的制備方法為取供試品3. 5g，加入50mL水和30mL乙醚，75°C水浴回流I. 5h，分離出乙醚層溶液和水層溶液，乙醚層溶液備用；水層溶液用乙醚萃取兩次，每次加入乙醚30mL，合并萃取液，并與之前得到的乙醚層溶液合并，35°C揮發(fā)至5mL，得到供試品溶液。該檢測方法中進樣口溫度優(yōu)選230°C，檢測器溫度優(yōu)選240°C，柱溫優(yōu)選為80°C，保持3min，以20°C /min速度升溫至160°C，保持6min，以30°C /min速度升溫至250°C，保持14min ;分流比優(yōu)選為25 I ；N2流速優(yōu)選為I. OmL/min。該檢測方法中進樣檢測的方法優(yōu)選為分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各0. 5 20 ii L，注入氣相色譜儀，測定。更為優(yōu)選的進樣檢測方法的為分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2 u L，注入氣相色譜儀，測定。本發(fā)明提供的氣相色譜指紋圖譜檢測的方法用于在由桂枝、茯苓、白芍、牡丹皮、桃仁為原料藥制成的中藥組合物檢測之中，其檢測結果為指紋圖譜中有11個共有峰，各共有峰的相對保留時間分別為1號峰為0. 500 0. 850,2號峰為0. 550 0. 900,3號峰為
0.600 0. 950,4號峰為0. 630 0. 970,5號峰為0. 750 0. 995、S為號峰1、6號峰為
1.010 I. 400、7 號峰為 I. 050 I. 450,8 號峰為 I. 110 — I. 600,9 號峰為 I. 250 2. 000、10號峰為I. 350 2. 100，S號峰是參照物的色譜峰。
本發(fā)明提供的氣相色譜指紋圖譜檢測的方法用于在由桂枝、茯苓、白芍、牡丹皮、桃仁為原料藥制成的中藥組合物檢測之中，其檢測結果為指紋圖譜中有11個共有峰，其中主要的I號峰、3號峰、5號峰、S號峰、9號峰、10號峰的相對峰面積分別為1號峰為0. 050 0. 180,3號峰為0. 070 0. 450,5號峰為0. 040 0. 150、S為號峰1、9號峰為0. 010 0. 060、10號峰為0. 040 0. 250，S號峰是參照物的色譜峰。對本發(fā)明的提供的桂枝茯苓中藥組合物氣相指紋圖譜的研究與說明以桂枝茯苓膠囊為例，發(fā)明人對本發(fā)明的提供的技術方案進行了實驗研究，用來證明本發(fā)明的技術效果，下述實驗用于進一步說明本發(fā)明的技術效果，但不限制本發(fā)明。I儀器與試藥Agilent6890 氣相色譜儀丹皮酚(中國藥品生物制品檢定所，批號110708-200506) 乙醚、無水乙醇分析純(AR)，南京化學試劑有限公司桂枝茯苓膠囊(090601、090701、090901、091001、091204、100201、100301、100401-1、100401-2、100501)2色譜條件 主要是考察桂枝茯苓膠囊在不同的程序升溫過程中分離的情況。取桂枝茯苓膠囊約3. 5g，精密稱定，加水50mL，乙醚30mL，75°C水浴回流I. 5h，分出乙醚層，水層用乙醚萃取兩次(30mL/次)，合并乙醚液，35°C水浴揮至適量，乙醚定容至5mL,即得。程序升溫I :80°C，保持5min，以30°C /min速度，升至250°C，保持lOmin。色譜圖見附圖I。程序升溫II :80°C，保持 3min，以 20°C /min 速度，升至 160°C，保持 6min，以 50°C /min速度，升至250°C，保持25min。色譜圖見附圖2。程序升溫III :90°C，保持3min，以14°C /min速度，升至160°C，保持6min，以500C /min速度，升至250°C，保持28min。色譜圖見附圖3。程序升溫IV 80°C，保持 3min，以 20°C /min 速度，升至 160°C，保持 6min，以 30°C /min速度，升至250°C，保持24min。色譜圖見附圖4。通過上述四個程序升溫對比試驗，可以看出四個程序升溫系統(tǒng)均可行，其中程序升溫IV系統(tǒng)，色譜峰數比較多，峰形較好。3參照物制備丹皮酚是桂枝茯苓膠囊中最主要的特征性成分之一，在氣相指紋圖譜中所占的比例較大且較穩(wěn)定，峰型較好，保留時間適當。因此選擇丹皮酚作為參照物。參照物丹皮酚購自中國藥品生物制品檢定所。取丹皮酚對照品適量，精密稱定，加乙醚配制成每ImL含Img的溶液。參照物(對照品)色譜圖見附圖5。4供試品溶液的制備4. I提取方法的選擇(I)取本品膠囊約3. 5g，精密稱定，加水50mL，乙醚30mL，75°C水浴回流I. 5h，分出乙醚層，水層用乙醚萃取兩次(30mL/次)，合并萃取液，并與前乙醚層合并，35°C揮至5mL，即得。色譜圖見附圖6。(2)取本品膠囊約I. Og，精密稱定，加無水乙醇50mL，75°C水浴回流lh，過濾，取續(xù)濾液，即得。色譜圖見附圖7。結果表明用乙醚和無水乙醇提取均可，其中用乙醚提取，出峰較多，峰形較好。4. 2提取時間的選擇取本品膠囊約3. 5g，3份，精密稱定，加水50mL，乙醚30mL，分別75°C水浴回流
0.5h、I. Oh、I. 5h，分出乙醚層，水層用乙醚萃取兩次(30mL/次)，合并萃取液，并與前乙醚層合并，35°C揮至5mL，即得。提取0. 5h所得供試品的色譜圖見附圖8，提取I. Oh所得供試品的色譜圖見附圖9，提取I. 5h所得供試品的色譜圖見附

圖10。由圖譜可以看出，提取0. 5h I. 5h均能達到較好的效果，其中提取時間為1.5h 時，信息表達較為完整。經過優(yōu)選確定供試品的制備方法為本品膠囊約3. 5g,精密稱定,加水50mL,乙醚30mL, 75°C水浴回流I. 5h，分出乙醚層，水層用乙醚萃取兩次(30mL/次)，合并萃取液，并與前乙醚層合并，35°C揮至5mL，即得。桂枝茯苓膠囊氣相指紋色譜圖見附圖11。5精密度試驗取本品膠囊內容物約3. 5g，精密稱定，加水50mL，乙醚30mL，75°C水浴回流I. 5h，分出乙醚層，水層用乙醚萃取兩次(30mL/次)，合并萃取液，并與前乙醚層合并，35°C揮至適量，乙醚定容至5mL，即得。精密吸取供試品2 y L，重復進樣6次，測得峰面積積分值，計算 RSD 分別為 I. 24%,0. 87%,0. 93%,7. 54 %、I. 04%,0. 98 %、I. 43%,2. 15%,2. 20%,
3.88%,2. 45%。表2精密度試驗
權利要求
1.一種由中藥桂枝、茯苓、白芍、牡丹皮、桃仁為原料藥制成的中藥組合物的氣相色譜指紋圖譜檢測的方法，其特征在于 色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗為選用毛細管柱；進樣口溫度為220 240°C ;檢測器為氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度為230 250°C ;柱溫為70 90°C，保持2 4min，以15 25V /min速度升溫至150 170°C，保持5 7min，以25 35°C /min速度升溫至240 260°C，保持13 15min ;分流比為20 30 I ；N2流速為0. 5 2. OmL/min ;理論塔板數按參照物丹皮酚計算不得低于3000 ； 參照物溶液的制備方法為取丹皮酚對照品加乙醚配制成參照物溶液； 供試品溶液的制備方法為取供試品加入水和乙醚，水浴回流，分離出乙醚層溶液和水層溶液，乙醚層溶液備用；水層溶液用乙醚萃取，萃取液與之前得到的乙醚層溶液合并，制成供試品溶液； 進樣檢測的方法為分別吸取對照品溶液與供試品溶液，注入氣相色譜儀，測定。
2.根據權利要求I所述的檢測方法，其特征在于，參照物溶液的制備方法為取丹皮酚對照品適量，精密稱定，加乙醚配制成每ImL含0. 2 2. Omg的溶液。
3.根據權利要求I所述的檢測方法，其特征在于，供試品溶液的制備方法為取供試品2.0 5. Og，加入40 60mL水和20 40mL乙醚，65 85°C水浴回流0. 5 2. 0h，分離出乙醚層溶液和水層溶液，乙醚層溶液備用；水層溶液用乙醚萃取I 3次，每次加入乙醚20 40mL，合并萃取液，并與之前得到的乙醚層溶液合并，25 45°C揮發(fā)至3 7mL，即為供試品溶液。
4.根據權利要求I所述的檢測方法，其特征在于，進樣檢測的方法為分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各0. 5 20 ii L，注入氣相色譜儀，測定。
5.根據權利要求I所述檢測方法，其特征在于進樣口溫度為230°C，檢測器溫度為240。。。
6.根據權利要求I所述檢測方法中的柱溫，其特征在于，柱溫為80°C，保持3min，以200C /min速度升溫至160°C，保持6min，以30°C /min速度升溫至250°C，保持14min。
7.根據權利要求I所述檢測方法中的分流比，其特征在于分流比為25 I。
8.根據權利要求I所述檢測方法中的N2流速，其特征在于=N2流速為I.OmL/min。
9.根據權利要求3所述檢測方法中供試品溶液的制備方法，其特征在于取供試品3.5g，加入50mL水和30mL乙醚，75°C水浴回流I. 5h，分離出乙醚層溶液和水層溶液，乙醚層溶液備用；水層溶液用乙醚萃取兩次，每次加入乙醚30mL，合并萃取液，并與之前得到的乙醚層溶液合并，35°C揮發(fā)至5mL，得到供試品溶液。
10.根據權利要求I所述的氣相色譜指紋圖譜檢測的方法，其特征在于該方法在由桂枝、茯苓、白芍、牡丹皮、桃仁為原料藥制成的中藥組合物檢測中的應用，其檢測結果為指紋圖譜中有11個共有峰，各共有峰的相對保留時間分別為1號峰為0. 500 0. 850,2號峰為0. 550 0. 900,3號峰為0. 600 0. 950,4號峰為0. 630 0. 970,5號峰為0. 750 0.995、S為號峰1、6號峰為I. 010 I. 400,7號峰為I. 050 I. 450,8號峰為I. 110 1.600,9號峰為I. 250 2. 000、10號峰為I. 350 2. 100，S號峰是參照物的色譜峰。
11.根據權利要求I所述的氣相色譜指紋圖譜檢測的方法，其特征在于該方法在由桂枝、茯苓、白芍、牡丹皮、桃仁為原料藥制成的中藥組合物檢測中的應用，其檢測結果為指紋圖譜中有11個共有峰，其中I號峰、3號峰、5號峰、S號峰、9號峰、10號峰的相對峰面積分別為1號峰為0. 050 0. 180,3號峰為0. 070 0. 450,5號峰為0. 040 0. 150、S為號峰1、9號峰為0. 010 0. 060、10號峰為0. 040 0. 250，S號峰是參照物的色譜 峰。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥分析領域，具體涉及對桂枝茯苓藥物組合物進行氣相色譜指紋圖譜檢測的方法。色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗為毛細管柱；進樣口溫度為220～240℃；氫火焰離子化檢測器，溫度為230～250℃；柱溫為70～90℃，保持2～4min，以15～25℃/min速度升溫至150～170℃，保持5～7min，以25～35℃/min速度升溫至240～260℃，保持13～15min；分流比為20～30∶1；N2流速為0.5～2.0mL/min；理論塔板數按參照物丹皮酚計算不得低于3000；該方法可以更為全面檢測藥物的質量，可以更加有利于對藥物質量的控制，且該方法精密度高、穩(wěn)定性好、重復性好。
文檔編號G01N30/88GK102735785SQ20111030836
公開日2012年10月17日 申請日期2011年9月30日 優(yōu)先權日2011年3月30日
發(fā)明者于桂芳, 孫蘭, 張帥, 徐海娟, 李家春, 李紅娟, 畢宇安, 王振中, 章晨峰, 蕭偉, 陳鳳龍 申請人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司