一種雜質(zhì)吸附型凈化柱及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種雜質(zhì)吸附型凈化柱及其制備方法與應(yīng)用，屬于飼料質(zhì)量安全檢測(cè) 領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON)是由鐮刀菌屬真菌產(chǎn)生的一種霉菌毒素，是玉米、小 麥等谷物中污染最為嚴(yán)重的霉菌毒素之一，對(duì)人和動(dòng)物均能造成不同程度的健康危害。近 年來的研究發(fā)現(xiàn)，谷物污染的DON除其原形外，還往往伴有其乙酰化衍生物（AC-DONs)， 主要包括3-乙?；撗跹└牭毒┐迹?-AC-D0N)和15-乙?；撗跹└牭毒┐?(15-AC-D0N)，這些衍生物能夠在人或動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)化成DON。谷物中DON的測(cè)定方法很多，比 如酶聯(lián)免疫法（ELISA)、液相色譜（HPLC)法和高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS)法等。其 中，LC-MS/MS法具有靈敏、準(zhǔn)確、抗干擾能力強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)，并且能夠同時(shí)測(cè)定DON和AC-DONs。 目前，配合LC-MS/MS檢測(cè)DON和AC-DONs的樣品前處理方法，主要包括免疫親和柱（IAC)、 固相萃?。⊿PE)、和多功能凈化柱（MFC)等。但是，IAC價(jià)格很高，操作步驟繁瑣，SPE和MFC 雖然成本較低，但需要消耗大量有機(jī)溶劑，會(huì)對(duì)環(huán)境和操作人員都產(chǎn)生潛在的危害，而且操 作步驟比較復(fù)雜。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種雜質(zhì)吸附型凈化柱及其制備方法與應(yīng)用，本發(fā)明用于提 取谷物中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和/或所述脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的乙?；苌飼r(shí)，采用純 水提取，不添加有機(jī)溶劑提取，無污染且環(huán)境友好。
[0004] 本發(fā)明提供的雜質(zhì)吸附型凈化柱，該凈化柱的填料是由酸性氧化鋁填料與N-丙 基乙二胺組成的混合型填料。
[0005] 上述的凈化柱中，該凈化柱由柱管和從所述柱管的進(jìn)液口至所述柱管的出液口依 次設(shè)于所述柱管內(nèi)的上篩板、所述填料和下篩板組成。
[0006] 上述的凈化柱中，所述上篩板和所述下篩板的材質(zhì)均為聚乙烯；
[0007] 所述上篩板和所述下篩板的孔徑均可為5~10 μ m，具體可為10 μ m ;
[0008] 所述柱管的內(nèi)徑可為5~12mm，具體可為10mm，長(zhǎng)度可為50~60mm，具體可為 50mm ；
[0009] 所述酸性氧化鋁填料與所述N-丙基乙二胺的質(zhì)量比可為1:1~3 ;
[0010] 所述酸性氧化鋁的粒徑為100~200目，具體可為150目；
[0011] 所述N-丙基乙二胺的粒徑為40~60 μπι ;
[0012] 所述混合型填料的填充量可為400~500mg，具體可為500mg。
[0013] 本發(fā)明還提供了上述的凈化柱的制備方法，包括如下步驟：1)將N-丙基乙二胺和 酸性氧化鋁混合，得到混合型填料；
[0014] 2)在所述管柱的出液口端，安裝所述下篩板，然后向所述管柱內(nèi)加入所述混合型 填料，再于所述管柱的進(jìn)液端的所述混合型填料上安裝上篩板，即得到所述雜質(zhì)吸附型凈 化柱。
[0015] 上述的方法中，所述上篩板和所述下篩板的安裝方式均為過盈配合。
[0016] 本發(fā)明所述的凈化柱在純水提取用于高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定的谷物和/ 或谷物加工副產(chǎn)品中霉菌毒素的應(yīng)用。
[0017] 上述的應(yīng)用中，所述谷物為玉米、小麥、大麥或稻米；
[0018] 所述谷物加工副產(chǎn)品為玉米胚芽柏、玉米酒精糟、小麥麩或米糠；
[0019] 所述霉菌毒素為脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、3-乙酰化脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和15-乙酰 化脫氧雪腐鐮刀菌烯醇中至少一種。
[0020] 本發(fā)明進(jìn)一步提供了所述凈化柱提取用于高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定的谷物 和/或谷物加工副產(chǎn)品中霉菌毒素的方法，包括如下步驟：將待測(cè)谷物和/或谷物加工副產(chǎn) 品中加入蒸餾水，震蕩超聲，然后離心處理取上清液；將所述上清液通過所述凈化柱的進(jìn)液 口依次通過所述上篩板、所述混合型填料和所述下篩板，然后從所述凈化柱的出液口流出， 經(jīng)與凈化柱的出液口連接的微孔濾膜過濾，得到用于高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法谷物中霉菌 毒素。
[0021] 上述的方法中，所述谷物和/或谷物加工副產(chǎn)品的粒徑可為20~40目；
[0022] 所述谷物和/或谷物加工副產(chǎn)品與所述蒸餾水的質(zhì)量體積比可為Ig :4~5mL，具 體可為Ig :4mL ;
[0023] 所述上清液的體積可為1~I. 5mL，具體可為ImL ;
[0024] 所述上清液在所述凈化柱內(nèi)的流速可為1~I. 2mL/min，采用柱塞桿施壓使所述 上清液通過所述凈化柱和所述微孔濾膜。
[0025] 上述的方法中，所述微孔濾膜的直徑可為13~17mm，具體可為13mm，孔徑可為 0· 22 μL?ο
[0026] 本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：
[0027] 本發(fā)明的凈化柱利用混合填料的吸附原理，對(duì)流過凈化柱的液體待測(cè)樣品中雜質(zhì) 進(jìn)行選擇性吸附，提取的洗脫液為純水，不添加有機(jī)溶劑，從而使這些干擾質(zhì)譜檢測(cè)的DON 及其衍生物雜質(zhì)被吸附在凈化柱上，經(jīng)凈化的流出液再經(jīng)微孔濾膜過濾后，可直接用于液 相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行上機(jī)測(cè)定。本發(fā)明的雜質(zhì)吸附型凈化柱及其應(yīng)用方法的優(yōu)點(diǎn)在于制 作方便、操作簡(jiǎn)單、成本低廉、凈化快速、益于環(huán)保、適用范圍廣等特點(diǎn)。
【附圖說明】
[0028] 圖1為本發(fā)明雜質(zhì)吸附型凈化柱的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0029] 圖中標(biāo)記如下：1管柱；2上篩板；3混合型填料；4下篩板；5出液管。
[0030] 圖2為實(shí)施例2中空白玉米基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的定量離子色譜圖（濃度為20ng/ mL) 〇
【具體實(shí)施方式】
[0031 ] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0032] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0033] 下述實(shí)施例中所采用的標(biāo)準(zhǔn)品：脫氧雪腐鐮刀菌稀醇（Deoxynivalenol，DON)、 15-乙酰基脫氧雪腐鐮刀菌稀醇（15-AcetylDeoxynivalenol，15_AO)ON)和3-乙?；撗?雪腐鐮刀菌稀醇（3-AcetylDeoxynivalenol，3_AO)ON)均為sigma公司產(chǎn)品，純度> 99%〇
[0034] 下述實(shí)施例中所采用的柱管（內(nèi)徑10mm，長(zhǎng)度50mm，貨號(hào)：AZ003)、篩板（孔 徑ΙΟμπι，貨號(hào)：AS003-A)、酸性氧化鋁（粒度：150目，貨號(hào)：AC36570025P2110)、N-丙 基乙二胺（粒度：40-60 μπι，貨號(hào)：CP0007)、微孔濾膜（直徑13mm，孔徑0·22μπι，貨號(hào)： AS021320-PT)均購(gòu)自天津艾杰爾科技有限公司。
[0035] 實(shí)施例1、雜質(zhì)吸附型凈化柱的制備
[0036] -、混合型填料的配制
[0037] 1、準(zhǔn)確稱取酸性氧化鋁填料100g ;
[0038] 2、準(zhǔn)確稱取N-丙基乙二胺100g ;
[0039] 3、將上述稱量好的酸性氧化鋁和N-丙基乙二胺置于混合器中充分混合均勻，形 成混合型填料。
[0040] 二、雜質(zhì)吸附型凈化柱的制備
[0041] 1、取一內(nèi)徑為IOmm的柱管1 ;
[0042] 2、通過過盈連接的方式置一聚乙烯材質(zhì)的下篩板4于柱管1的出液口 5 -端；
[0043] 3、向柱管1中加入500mg上述混合型填料3 ;
[0044] 4、通過過盈連接的方式置一聚乙烯材質(zhì)的上篩板2于混合型填料3上方，即柱管 1的進(jìn)液口（圖中未標(biāo)）端，并將填料壓實(shí)，即得到雜質(zhì)吸附型凈化柱，結(jié)構(gòu)如圖1所示。
[0045] 實(shí)施例2、雜質(zhì)吸附型凈化柱在玉米中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙?；苌餀z 測(cè)中的應(yīng)用
[0046] 一、方法性能考察
[0047] 1、標(biāo)準(zhǔn)溶液制備
[0048] 標(biāo)準(zhǔn)品：脫氧雪腐鐮刀菌稀醇（Deoxynivalenol，DON)、15-乙?；撗跹└?鐮刀菌稀醇（15-AcetylDeoxynivalenol，15_AO)0N)和3-乙?；撗跹└牭毒〈?(3-AcetylDeoxynivalenol，3-ACD0N)〇
[0049] 準(zhǔn)確稱取上述標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容，配制成1000 μ g/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；準(zhǔn) 確移取各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液lmL，混合于IOOmL容量瓶中，用甲醇定容，配制成10 μ g/mL的混合標(biāo) 準(zhǔn)工作液。
[0050] 2、樣品前處理
[0051] 稱取5. 000 ±0.0IOg玉米粉樣品（粒徑20~40目）于50mL塑料離心管內(nèi)，加入 20mL蒸餾水，振蕩lmin，超聲20min，靜置10min，移取上清液ImL上清液至凈化柱內(nèi)，凈化 柱出口端連接0. 22 μ m微孔濾膜，通過柱