一種人參葉中人參皂苷Rg1和Re的測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[00011本發(fā)明涉及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)領(lǐng)域，特別是一種人參葉中人參皂苷Rgl和Re的測(cè)定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 2015年藥典記載：取本品粉末約0.2g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷 30ml，加熱回流1小時(shí)，棄去三氯甲烷液，藥渣揮去三氯甲烷，加甲醇30ml，加熱回流3小時(shí)， 提取液低溫蒸干，加水l〇ml使溶解，加石油醚(30~60 °C )提取2次，每次10ml，棄去醚液，水 液通過(guò)D101型大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑為1.5cm，柱長(zhǎng)為15cm)，以水50ml洗脫，棄去水液。再用 20 %乙醇50ml洗脫，棄去20 %乙醇洗脫液，繼用80 %乙醇80ml洗脫，收集洗脫液70ml，蒸干， 殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至l〇ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。LC測(cè)試的 條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-〇. 05 %磷酸溶液(20:80)為流動(dòng)相;檢 測(cè)波長(zhǎng)為203nm。理論板數(shù)按人參皂苷Re峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。
[0003] 藥典的方法操作過(guò)程復(fù)雜，洗脫次數(shù)多，對(duì)操作人員的操作技能要求高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種人參葉中人參皂苷Rgl和Re的測(cè)定方法，該方法操作簡(jiǎn) 單，測(cè)定精度高。
[0005] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案為:一種人參葉中人參皂苷Rg 1和Re的測(cè)定方法，其特征在 于，包括以下步驟：
[0006] 步驟1:將人參葉粉碎后米用ASE萃取法得到萃取液；
[0007] 步驟2:將萃取液在石墨碳SPE柱存在的條件下離心，對(duì)離心后的液體過(guò)濾得到濾 液；
[0008] 步驟3:將濾液采用液相色譜法分析；
[0009] 液相色譜分析條件為：
[0010] a)儀器:雙三元液相色譜儀
[0011] b)色譜柱：50X2.1mml.7ym
[0012] c)柱溫:40 °C
[0013] d)流速:0.3mL/min
[0014] e)流動(dòng)相：乙腈-水;梯度洗脫；
[0015] 其中梯度洗脫具體為在o-lmin時(shí)流動(dòng)相為乙腈:水，其體積比為60:40;l-3min時(shí) 流動(dòng)相為乙腈:水，其體積比為70:30; 3-8min時(shí)流動(dòng)相為乙腈:水，其體積比為80:20;
[0016] f)檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm〇
[0017] 在上述的人參葉中人參皂苷Rgl和Re的測(cè)定方法中，所述的步驟1具體為：
[0018] S11:將人參葉粉碎后，過(guò)篩；
[0019] S12:稱取0.2重量份羅漢果粉，與1重量份硅藻土混合均勻待用；
[0020] S13:在預(yù)先放好過(guò)濾膜的萃取池中加入步驟2所得到的混合物，加入適量的硅藻 土至達(dá)到萃取池的池口；蓋上萃取池的蓋子進(jìn)行靜態(tài)萃取;萃取結(jié)束后得到萃取液；
[0021]萃取條件為：萃取溶劑為甲醇；萃取溫度110°C;靜態(tài)萃取時(shí)間7min;沖洗體積 80%;靜態(tài)循環(huán)次數(shù)3次。
[0022]在上述的人參葉中人參阜苷Rgl和Re的測(cè)定方法中，所述的萃取池的體積為10ml。 [0023]在上述的人參葉中人參皂苷Rgl和Re的測(cè)定方法中，所述的靜態(tài)萃取的壓力為 1500psi〇
[0024]在上述的人參葉中人參皂苷Rgl和Re的測(cè)定方法中，所述的靜態(tài)萃取的吹掃時(shí)間 為 60s。
[0025]在上述的人參葉中人參皂苷Rgl和Re的測(cè)定方法中，所述的步驟2具體為將萃取液 稀釋后加入到離心管中凈化，然后過(guò)濾后得到濾液，所述的離心管中加有石墨碳SPE柱。 [0026]在上述的人參葉中人參皂苷Rgl和Re的測(cè)定方法中，所述的雙三元液相色譜儀為 Thermo U3000UHPLC液相色譜儀。
[0027]在上述的人參葉中人參皂苷Rgl和Re的測(cè)定方法中，所述的色譜柱為Thermo Syncronis Dim.(mm)AQ色譜柱。
[0028] 在上述的人參葉中人參皂苷Rgl和Re的測(cè)定方法中，所述的ASE萃取法采用的是 ASE350快速溶劑萃取儀。
[0029] 本發(fā)明在采用上述技術(shù)方案后，其具有的有益效果為：
[0030] 本發(fā)明的萃取方法操作簡(jiǎn)單，精度與藥典方法的精度一致，重復(fù)性好。
【附圖說(shuō)明】
[0031] 圖1為本發(fā)明的色譜分析人參皂苷Rgl有效性驗(yàn)證的直角坐標(biāo)圖；
[0032]圖2為本發(fā)明的色譜分析人參皂苷Re有效性驗(yàn)證的直角坐標(biāo)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0033]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但不構(gòu)成對(duì) 本發(fā)明的任何限制。
[0034] 實(shí)施例1:
[0035]將人參葉樣品經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，過(guò)三號(hào)篩，約0.2g，精密稱定，與lg硅藻土混合均勻， 待用，移入到預(yù)先放好過(guò)濾膜的ASE 10ml萃取池中再加入適量硅藻土，輕輕振搖使之與池 口在同一水平線上，擰緊萃取池上蓋。萃取結(jié)束后，把萃取液轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿中蒸干后用甲醇 溶解并定容至10mL容量瓶，吸取lml樣品液加入裝有l(wèi)OOmgGCB的2ml離心管進(jìn)行凈化，溶液 過(guò)0.22微米濾膜后進(jìn)入HPLC測(cè)定。
[0036]萃取條件(見(jiàn)表1)為：
[0037]表 1

luujv」 分機(jī)萬(wàn)沄艿lu淞《β堵沄，mffle堵分機(jī)殺懺：
[0040] a)儀器:Thermo 雙三元液相(υ-3000)
[0041] b)色譜柱：Thermo Syncronis Dim.(mm)AQ 1.7μηι 50X2.1 mm
[0042] c)柱溫:40°C
[0043] d)流速:0.3mL/min
[0044] e)流動(dòng)相：乙腈-水梯度洗脫（lmin乙腈:水的體積比為60:40; l-3min乙腈:水的體 積比為70:30; 3-8min乙腈:水的體積比為80:20)
[0045] f)檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm [0046] 色譜分析有效性驗(yàn)證：
[0047] 取人參皂苷Rgl對(duì)照品、人參皂苷Re對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每lml 含人參皂苷Rgl 〇.2mg、人參皂苷Re 0.2mg的溶液。
[0048] 取人參皂苷Rg 1對(duì)照品、人參皂苷Re對(duì)照品，精密稱定，加甲醇制成每1 m 1約含 0.2mg的混合溶液，即得，然后分別精密吸取該溶液0.5μ1、ΙμL、1.5μ1、2μ1、3μ1進(jìn)入LC測(cè)定， 并依照上述方法測(cè)定。以濃度(mg/ml)-峰面積進(jìn)行線性回歸，求得回歸方程:人參皂苷Rgl y = 1264.2χ+7·6763，R2 = 0.99979,人參皂苷Rgl y= 1148.8χ-0·96132，R2 = 0.99998,人參 皂苷Rgl在0 ·0911~0 · 5466mg/ml，人參皂苷Rgl在0 · 1013~0 · 6078mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線 性關(guān)系。表2和圖1為人參皂苷Rgl線性試驗(yàn)結(jié)果;表3和圖2為人參皂苷Re線性試驗(yàn)結(jié)果;其 中，圖1和2的橫坐標(biāo)表示濃度，縱坐標(biāo)表示峰面積。
[0049]表2人參皂苷Rgl線性試驗(yàn)結(jié)果
[QW1
[0
[0
[0053] 1.1實(shí)施例1的萃取方法的重現(xiàn)性驗(yàn)證：
[0054]取相同批號(hào)的樣品（批號(hào)：15071601)0.2g，共3份，精密稱定，按ASE提取方法提取 供試品溶液，進(jìn)樣量為lyL，以上述的色譜條件平行試驗(yàn)，測(cè)得樣品人參皂苷Rgl和人參皂苷 Re的總量見(jiàn)表1，RSD為0.5%，試驗(yàn)表明ASE提取方法重復(fù)性良好，結(jié)果詳見(jiàn)表4。
[0055] 表 4
[0056]
[0057] 1.2實(shí)施例1的萃取方法的精確度測(cè)試
[0058] 米用實(shí)施例1的ASE萃取方法和藥典的萃取方法對(duì)人參葉進(jìn)彳丁萃取，人參葉為3批， 批號(hào)分別為 15071601，120303，1407221;
[0059] 實(shí)施例1的ASE萃取方法對(duì)同一批次的人參葉采用相同規(guī)格的設(shè)備平行測(cè)試兩次， 分別為ASE1和ASE2表示。
[0060] 具體測(cè)試結(jié)果見(jiàn)下表5;
[0061] 表 5 [0Γ…
[0063]以上所述的僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡在本發(fā)明的精神和原則范圍內(nèi)所作的任 何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種人參葉中人參皂苷Rgl和Re的測(cè)定方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟1:將人參葉粉碎后米用ASE萃取法得到萃取液； 步驟2:將萃取液在石墨碳SPE柱存在的條件下離心，對(duì)離心后的液體過(guò)濾得到濾液； 步驟3:將濾液采用液相色譜法分析； 液相色譜分析條件為： a) 儀器:雙三元液相色譜儀 b) 色譜柱：50X2.1mml.7ym (：)柱溫:40°〇 d) 流速:0.3mL/min e) 流動(dòng)相：乙臆-水;梯度洗脫； 其中梯度洗脫具體為在〇-lmin時(shí)流動(dòng)相為乙腈:水，其體積比為60 :40; l-3min時(shí)流動(dòng) 相為乙腈:水，其體積比為70:30; 3-8min時(shí)流動(dòng)相為乙腈:水，其體積比為80:20; f) 檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm〇2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的人參葉中人參皂苷Rgl和Re的測(cè)定方法，其特征在于，所述的 步驟1具體為： S11:將人參葉粉碎后，過(guò)篩； S12:稱取0.2重量份羅漢果粉，與1重量份硅藻土混合均勻待用； S13:在預(yù)先放好過(guò)濾膜的萃取池中加入步驟2所得到的混合物，加入適量的硅藻土至 達(dá)到萃取池的池口；蓋上萃取池的蓋子進(jìn)行靜態(tài)萃取;萃取結(jié)束后得到萃取液； 萃取條件為:萃取溶劑為甲醇；萃取溫度110 °C ;靜態(tài)萃取時(shí)間7min;沖洗體積80 % ;靜 態(tài)循環(huán)次數(shù)3次。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的人參葉中人參皂苷Rg 1和Re的測(cè)定方法，其特征在于，所述的 萃取池的體積為1 〇m 1。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的人參葉中人參皂苷Rgl和Re的測(cè)定方法，其特征在于，所述的 靜態(tài)萃取的壓力為1500psi。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的人參葉中人參皂苷Rgl和Re的測(cè)定方法，其特征在于，所述的 靜態(tài)萃取的吹掃時(shí)間為60s。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的人參葉中人參皂苷Rgl和Re的測(cè)定方法，其特征在于，所述的 步驟2具體為將萃取液稀釋后加入到離心管中凈化，然后過(guò)濾后得到濾液，所述的離心管中 加有石墨碳SPE柱。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的人參葉中人參皂苷Rg 1和Re的測(cè)定方法，其特征在于，所述的 雙三元液相色譜儀為Thermo U3000UHPLC液相色譜儀。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的人參葉中人參皂苷Rg 1和Re的測(cè)定方法，其特征在于，所述的 色譜柱為Thermo Syncronis Dim.(mm)AQ色譜柱。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的人參葉中人參皂苷Rg 1和Re的測(cè)定方法，其特征在于，所述的 ASE萃取法采用的是ASE350快速溶劑萃取儀。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種人參葉中人參皂苷Rg1和Re的測(cè)定方法，包括以下步驟：步驟1：將人參葉粉碎后采用ASE萃取法得到萃取液；步驟2：將萃取液在石墨碳SPE柱存在的條件下離心，對(duì)離心后的液體過(guò)濾得到濾液；步驟3：將濾液采用液相色譜法分析；本發(fā)明提供了一種人參葉中人參皂苷Rg1和Re的測(cè)定方法，該方法操作簡(jiǎn)單，測(cè)定精度高。
【IPC分類】G01N30/88, G01N30/02, G01N30/06
【公開號(hào)】CN105651925
【申請(qǐng)?zhí)枴?br>【發(fā)明人】陳學(xué)松, 廖強(qiáng), 韋日偉, 陳佳麗, 姚泳成
【申請(qǐng)人】廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗(yàn)所
【公開日】2016年6月8日
【申請(qǐng)日】2016年4月15日