本發(fā)明涉及中藥制劑的質(zhì)量控制方法，特別是涉及一種用高效液相色譜法對婦女痛經(jīng)顆粒制劑指紋圖譜的構(gòu)建方法。

背景技術：

婦女痛經(jīng)顆粒由丹參、五靈脂、延胡索、蒲黃四味藥制成的純中藥制劑。具有活血，調(diào)經(jīng)，止痛的作用。用于氣血凝滯，小腹腫痛，經(jīng)期腹痛?，F(xiàn)行標準中婦女痛經(jīng)顆粒的質(zhì)量控制方法主要是含量測定，僅僅是選取其中一兩種成分的含量來說明產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，這些控制方法不足以代表其質(zhì)量整體，具有一定的局限性?，F(xiàn)行的婦女痛經(jīng)顆粒的質(zhì)量控制標準已不能真實反映其內(nèi)在品質(zhì)及批次之間產(chǎn)品質(zhì)量的一致性。近年來科技發(fā)展迅速，指紋圖譜技術、遠紅外在線控制技術等多種新技術用于中藥的生產(chǎn)和質(zhì)量控制等方面，取得了很好的效果，極大的提高了中藥生產(chǎn)和質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)的科技含量。而現(xiàn)行參照西藥的質(zhì)量控制模式的質(zhì)量標準不能恰當有效的反映中藥內(nèi)在的質(zhì)量。宏觀的鑒別和主要有效成分含量測定結(jié)合才是質(zhì)量控制模式的發(fā)展趨勢。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術問題是克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種婦女痛經(jīng)顆粒指紋圖譜的建立方法，該方法用于評價和控制婦女痛經(jīng)顆粒的質(zhì)量，以確保婦女痛經(jīng)顆粒的質(zhì)量穩(wěn)定性、一致性和可控性，從而提高婦女痛經(jīng)顆粒的安全性和有效性。

為了解決上述技術問題，本發(fā)明采用如下的技術方案。

一種婦女痛經(jīng)顆粒指紋圖譜的建立方法：取婦女痛經(jīng)顆粒用甲醇超聲波提取，以延胡索乙素、丹酚酸B為對照品，照高效液相色譜法建立指紋圖譜，洗脫過程為梯度洗脫。

上述婦女痛經(jīng)顆粒指紋圖譜的建立方法如下：

（a）供試品溶液的制備：取婦女痛經(jīng)顆粒1.5～2.5g，充分研細后加入甲醇10～50ml，超聲處理20～40分鐘，取出放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量；搖勻，濾過，取續(xù)濾液為供試品溶液，所述濾過為采用0.45μm微孔濾頭濾過；

（b）對照品溶液的制備：精密稱取延胡索乙素對照品適量、丹酚酸B對照品適量，加甲醇制成每1ml含胡索乙素0.05mg和丹酚酸B 0.10mg的混合溶液，即得；

（c）色譜條件為：ODS C18色譜柱，以甲醇-乙腈（1：1）為流動相A，以0.1%磷酸水溶液（用三乙胺調(diào)pH值=6.0）為流動相B，梯度洗脫，流速0.5～1.5ml/min，柱溫25～35℃，檢測波長：260～300nm；

（d）測定：精密吸取供試品溶液、對照品溶液各5μl，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到婦女痛經(jīng)顆粒的指紋圖譜。

進一步地，前述婦女痛經(jīng)顆粒指紋圖譜的方法優(yōu)選方案如下：

（a）供試品溶液的制備：取本品5袋，研細，取2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，取出放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量。搖勻，濾過，取續(xù)濾液為供試品溶液；所述濾過為采用0.45μm微孔濾頭濾過；

（b）對照品溶液的制備：分別精密稱取延胡索乙素對照品5mg和丹酚酸10mg，置同一100ml容量瓶中，加甲醇充分溶解，定容，作為對照品溶液；

（c）色譜條件為： ODS C18色譜柱，以甲醇-乙腈（1：1）為流動相A，以0.1%磷酸水溶液（用三乙胺調(diào)pH值=6.0）為流動相B，梯度洗脫，流速1.0ml/min，柱溫30℃，檢測波長：280nm；

（d）測定：分別精密吸取供試品溶液、對照品溶液各5μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到婦女痛經(jīng)顆粒的指紋圖譜。

前述方法中所述梯度洗脫的程序以如下體積比濃度配置進行：

用前述方法建立的指紋圖譜中有9個特征峰，其中峰3為丹酚酸B，峰8為延胡索乙素，圖譜總長度為100min。

使用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)”2004版對所述指紋圖譜進行相似度評價，其相似度應大于0.950。

指紋圖譜相似度參數(shù)設置為：時間寬度為0.5秒；校正方式采用多點校正，校正色譜峰的匹配點為共有峰。

與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果如下：

（1）將本發(fā)明所提供的方法建立的婦女痛經(jīng)顆粒指紋圖譜與對照圖譜進行相似度評價，其相似度大于0.950，能有效的表征產(chǎn)品質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量。

（2）本發(fā)明采用高效液相建立標準指紋圖譜，通過多指標成分控制產(chǎn)品質(zhì)量，能更有效的保證產(chǎn)品質(zhì)量的長期穩(wěn)定性，進而保障療效的安全性和有效性。

（3）本發(fā)明具有方便、快捷、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好及適用范圍廣等優(yōu)點，可準確可靠的控制婦女痛經(jīng)顆粒的質(zhì)量。

附圖說明

圖1 婦女痛經(jīng)顆粒指紋圖譜。

圖2 10批次婦女痛經(jīng)顆粒的指紋圖譜。

圖3 丹參藥材色譜圖。

圖4 延胡索藥材色譜圖。

具體實施方式

除非另有定義，本發(fā)明使用的所有技術和科學術語的含義與本發(fā)明所屬技術領域普通技術人員通常理解的含義相同。通常，本發(fā)明使用的命名及下述實驗方法都是本領域公知的或常用的。為了使本發(fā)明所解決的技術問題、技術方案及有益效果更加清楚明白，以下結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明作進一步的說明。

儀器：Waters高效液相色譜儀（Waters2695分離單元，Waters2996二極管陣列檢測器，Empower色譜工作站）；AB104-N萬分之一天平（梅特勒-托利多）；AUW2200十萬分之一天平（SHIMADZU 島津）；KQ3200超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；Mili-Q超純水儀：（美國Milipore公司）。

試藥和試劑： 婦女痛經(jīng)顆粒（批號：120301、120701、120702、120703、120801、120802、120803、120804、120805、120806）；甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）、醋酸（分析純）。

實施例1：婦女痛經(jīng)顆?；谥讣y圖譜的質(zhì)量控制方法。

供試品溶液的制備：取婦女痛經(jīng)顆粒5袋，研細，取2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，稱定重量，超聲30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量。搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

對照品溶液的制備：取延胡索乙素對照品、丹酚酸B對照品適量，加甲醇制成每1ml含胡索乙素0.05mg和丹酚酸B 0.10mg的混合溶液，即得。

色譜條件為： ODS C18色譜柱，流動相A為甲醇-乙腈（1：1），流動相B為0.1%磷酸水溶液（用三乙胺調(diào)PH值=6.0），梯度洗脫，流速1.0ml/min，柱溫25～35℃，檢測波長：280nm。

梯度洗脫的程序以如下體積比濃度配置進行：

測定：精密吸取供試品溶液、對照品溶液各5μl，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到婦女痛經(jīng)顆粒的指紋圖譜。

實施例2：婦女痛經(jīng)顆粒指紋圖譜的建立。

采用實施例1 所述方法測定10個不同批次婦女痛經(jīng)顆粒供試品溶液進行測定（批號：120301、120701、120702、120703、120801、120802、120803、120804、120805、120806））。

采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)”2004年A版相似度軟件，對10批次婦女痛經(jīng)顆粒進行相似度評價，得到10批次的婦女痛經(jīng)顆粒相似度計算結(jié)果與婦女痛經(jīng)顆粒指紋圖譜。

10批次婦女痛經(jīng)顆粒指紋圖譜相似度計算結(jié)果

上表顯示，不同批次婦女痛經(jīng)顆粒指紋圖譜的相似度大于0.95，說明各批次的樣品色譜模式相似，其化學成分一致性較好。