技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供基于CRISPR/Cas9的外源基因敲入整合系統(tǒng)及其建立方法和應(yīng)用，系統(tǒng)包括同時(shí)具有報(bào)告/供體功能的載體及Cas9表達(dá)載體，所述報(bào)告/供體載體包括兩條目標(biāo)基因同源臂以及位于兩條目標(biāo)基因同源臂之間的外源序列片段；兩條目標(biāo)基因同源臂在目標(biāo)基因上的同源序分別列位于目標(biāo)基因靶序列的兩側(cè)并與目標(biāo)基因靶序列相接；外源序列片段包括依次排列的啟動(dòng)子、抗性基因、剪切肽序列、報(bào)告基因以及polyA尾，抗性基因內(nèi)部插入有兩段該抗性基因的SSA修復(fù)同源序列，并且在兩段SSA修復(fù)同源序列之間插入有目標(biāo)基因靶序列。本發(fā)明構(gòu)建了一套能夠高效定點(diǎn)精確靶向整合外源基因到內(nèi)源基因序列的敲入系統(tǒng)，而且能夠進(jìn)行較高效率的雙染色體等位基因的雙敲入。

技術(shù)研發(fā)人員：張智英;吳蕓;徐坤;白義春;呂慧嬌
受保護(hù)的技術(shù)使用者：西北農(nóng)林科技大學(xué)
文檔號(hào)碼：201610703246
技術(shù)研發(fā)日：2016.08.22
技術(shù)公布日：2016.12.07