異補(bǔ)骨脂查耳酮在制備抗缺氧藥物、食品或保健品中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)計(jì)異補(bǔ)骨脂查耳酮在制備抗缺氧藥物、食品或保健品中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 異補(bǔ)骨脂查耳酮（IBC)是一種黃酮類物質(zhì)，具有C6-C3-C6的基本骨架。IBC于 1968年首次從補(bǔ)骨脂（Psoraleacorylifolia)中被分離提取出來(lái)【V.Kuete，L.P.Sandjo. Isobavachalcone：anoverview.Chinesejournalofintegrativemedicine,2012(18)： 543-547.】。IBC抗菌、抗癌、抗逆轉(zhuǎn)錄酶以及抗氧化活性。普遍認(rèn)為，抗氧化與抗缺氧存 在某種關(guān)系【E.Szliszka，D.Jaworska，M.Ksek，Z.P.Czuba，W.Krol.TargetingDeath ReceptorTRAIL-R2byChalconesforTRAIL-InducedApoptosisinCancerCells. Internationaljournalofmolecularsciences. 2012(13) :15343-15359.】。本課題組 一直致力于探討缺氧預(yù)適應(yīng)可能的發(fā)生機(jī)制，因此IBC的抗氧化活性引起本課題組的關(guān) 注。Xiao等采用電子自旋共振的方法測(cè)得IBC是一種抗氧化物質(zhì)。IBC濃度在17iimol/ L時(shí)可以抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮（NO)【H.Jing，X.Zhou，X.Dong，J.Cao， H.Zhu,J.Lou,YHu,Q.He,B.Yang.AbrogationofAktsignalingbyIsobavachalcone contributestoitsanti-proliferativeeffectstowardshumancancercells. Cancerletters. 2010(294) :167-177.】。IBC在大鼠肝微粒體和線粒體上表現(xiàn)出廣泛的抗 氧化活性，包括抑制NADPH、抗壞血酸、叔丁基氫過(guò)氧化物（t-BuOOH)以及四氯化碳（CCl4) 誘導(dǎo)的肝微粒體脂質(zhì)過(guò)氧化，也可以抑制NADH依賴性和抗壞血酸鹽誘導(dǎo)的線粒體脂質(zhì) 過(guò)氧化?！京?Ohno，T.Watabe，K.Nakamura，M.Kawagoshi，N.Uotsu，T.Chiba，M.Yamada， K.Yamaguchi,K.Yamada,K.Miyamoto,D.Uemura.Inhibitoryeffectsofbakuchiol, bavachin,andisobavachalconeisolatedfromPiperlongumonmelaninproduction inB16mousemelanomacells.Bioscience,biotechnology,andbiochemistry. 2010(74)： 1504-1506.】。分化的大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤克隆化的細(xì)胞株（PC12細(xì)胞）經(jīng)常被體外缺 氧研究。因此本發(fā)明使用分化的PC12細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本
【發(fā)明內(nèi)容】
的目的是提供異補(bǔ)骨脂查耳酮的新通途。
[0004] 本發(fā)明所提供的異補(bǔ)骨脂查耳酮的新用途是其在制備抗缺氧藥物和/或食品和/ 或保健品中的應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明采用CCK-8法，通過(guò)測(cè)定分化的PC12細(xì)胞的存活率，對(duì)異補(bǔ)骨脂查耳酮進(jìn) 行了細(xì)胞毒性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)和抗缺氧活性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)。
[0006] 本發(fā)明實(shí)驗(yàn)證明，異補(bǔ)骨脂查耳酮對(duì)分化的PC12細(xì)胞具有缺氧保護(hù)作用，因此可 用于制備抗缺氧藥物或食品。
[0007] 具體實(shí)施方法
[0008] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。
[0009] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0010] 下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明，但本發(fā)明并不局限于此。
[0011] 實(shí)施例1、異補(bǔ)骨脂查耳酮對(duì)分化PC12細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。
[0012] 1 ?材料和方法
[0013] 1.1試劑配制
[0014] 標(biāo)準(zhǔn)品異補(bǔ)骨脂查耳酮由南京澤郎公司提供。精密稱取異補(bǔ)骨脂查耳酮0. 01296g 置于ImL容量瓶中，用DMSO充分溶解配制成40mM的母液，再將母液用1640分化培養(yǎng)基（1% 胎牛血清，50ng/100mLNGF，1 %青霉素鏈霉素混合液，1 % 2mM谷氨酰胺溶液）稀釋成所需 檢測(cè)的給藥濃度，所需檢測(cè)的給藥濃度為50iiM，10iiM，2iiM，0. 4iiM。
[0015] I. 2 方法
[0016] 取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的PC12細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。按照細(xì)胞密度5XIO3個(gè)每孔接種于96 孔板中（已用PLL包被），用分化1640培養(yǎng)基進(jìn)行分化培養(yǎng)。分化48h后，進(jìn)行給藥實(shí)驗(yàn)。 每個(gè)給藥濃度設(shè)置6個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照孔（只加入分化1640培養(yǎng)液），置于培養(yǎng) 箱中在37°C、5%CO2條件下全濕培養(yǎng)。48h后小心棄去培養(yǎng)基，每孔加入IOOiiL含有10% CCK-8的1640分化培養(yǎng)液，放置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。2h后用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450nm下 檢測(cè)吸光度OD值。
[0017] 2數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
[0018] 所有數(shù)據(jù)用mean土S.D.表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS16. 0分析軟件。所有數(shù)據(jù)通 過(guò)正態(tài)性檢驗(yàn)后符合正態(tài)性，分別將不同濃度給藥組與空白對(duì)照組進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，p < 0. 05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0019] 3實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0020] 異補(bǔ)骨脂查耳酮濃度為50iimol/L和10iimol/L時(shí)，會(huì)使分化PC12細(xì)胞的存活率 下降，在濃度為2iiM和0. 4iimol/L時(shí)，對(duì)分化PC12細(xì)胞的存活率無(wú)影響。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0021] 表1異補(bǔ)骨脂查耳酮在不同濃度下對(duì)分化PC12細(xì)胞的毒性作用
[0022]
[0023] *經(jīng)過(guò)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)后，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，p< 0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0024] 4 結(jié)論
[0025] 結(jié)果表明，異補(bǔ)骨脂查耳酮濃度為2iiM及2iiM以下時(shí)對(duì)分化PC12細(xì)胞的存活率 無(wú)影響，
[0026] 因此可以選擇2iiM及2iiM以下的濃度作為缺氧保護(hù)實(shí)驗(yàn)濃度。
[0027] 實(shí)施例2.異補(bǔ)骨脂查耳酮的抗缺氧實(shí)驗(yàn)
[0028] 1材料和方法
[0029] I. 1試劑配制
[0030] 標(biāo)準(zhǔn)品異補(bǔ)骨脂查耳酮由南京澤郎公司提供。精密稱取異補(bǔ)骨脂查耳酮0. 〇1296g 置于ImL容量瓶中，用DMSO充分溶解配制成40mM的母液，再將母液用1640分化培養(yǎng)基稀 釋成所需檢測(cè)的給藥濃度，所需檢測(cè)的給藥濃度為2yM，0. 4yM。
[0031] 1.2 方法
[0032] 取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的PC12細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。按照細(xì)胞密度5XIO3個(gè)每孔接種于96 孔板中（已用PLL包被），用分化1640培養(yǎng)基進(jìn)行分化培養(yǎng)。分化48h后，進(jìn)行給藥和缺 氧實(shí)驗(yàn)。每個(gè)給藥濃度設(shè)置6個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照孔（只加入分化1640培養(yǎng)液）， 缺氧條件為37°C、5%CO2U%O2并向培養(yǎng)基中加入2mM的連二亞硫酸鈉，制造化學(xué)缺氧和 物理缺氧相結(jié)合的缺氧環(huán)境。48h后小心棄去培養(yǎng)基，每孔加入IOOiiL含有10%CCK-8的 1640分化培養(yǎng)液，放置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。2h后用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450nm下檢測(cè)吸光 度OD值。
[0033] 2數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
[0034] 所有數(shù)據(jù)用mean+S.D.表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS16. 0分析軟件。所有數(shù)據(jù)通過(guò) 正態(tài)性檢驗(yàn)后符合正態(tài)性，分別將不同濃度給藥組與缺氧組進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，p< 0. 05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0035] 3實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0036] 異補(bǔ)骨脂查耳酮濃度為2iiM和0. 4iiM時(shí)，可以提高分化PC12細(xì)胞在缺氧條件下 的細(xì)胞存活率，具有缺氧保護(hù)作用。結(jié)果見(jiàn)表2。
[0037] 表2異補(bǔ)骨脂查耳酮在不同濃度下對(duì)分化PC12細(xì)胞的缺氧保護(hù)作用
[0038]
[0039] *經(jīng)過(guò)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)后，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，p< 0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0040] 2. 4實(shí)驗(yàn)結(jié)論
[0041 ] 異補(bǔ)骨脂查耳酮在2iiM和0. 4iiM時(shí)，可以提高分化PC12細(xì)胞在缺氧條件下的細(xì) 胞存活率，對(duì)分化PC12細(xì)胞有缺氧保護(hù)作用。其中2iiM異補(bǔ)骨脂查耳酮可以使分化PC12 細(xì)胞的存活率達(dá)到與對(duì)照組的細(xì)胞存活率相似的水平。因此異補(bǔ)骨脂查耳酮在實(shí)驗(yàn)濃度范 圍內(nèi)對(duì)分化PC12細(xì)胞具有缺氧保護(hù)作用，可用于制備抗缺氧藥物、食品或保健品。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 異補(bǔ)骨脂查耳酮在制備抗缺氧藥物中的應(yīng)用。2. 異補(bǔ)骨脂查耳酮在制備抗缺氧保健品中的應(yīng)用。3. 異補(bǔ)骨脂查耳酮在制備抗缺氧食品中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了黃酮類天然活性物質(zhì)異補(bǔ)骨脂查耳酮在制備抗缺氧藥物、食品或保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)細(xì)胞水平缺氧模型，觀察了異補(bǔ)骨脂查耳酮的抗缺氧作用。結(jié)果表明異補(bǔ)骨脂查耳酮在2μM和0.4μM時(shí)，可以提高體外培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞在缺氧條件下的存活率，對(duì)體外培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞具有保護(hù)作用，提供了異補(bǔ)骨脂查耳酮在制備抗缺氧藥物、食品或保健品中的用途。
【IPC分類】A23L1/29, A61K31/12, A61P39/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105078940
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410187406
【發(fā)明人】薛明, 蘇甦, 徐平湘, 白露
【申請(qǐng)人】首都醫(yī)科大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年11月25日
【申請(qǐng)日】2014年5月5日