4-甲氧基苯甲醇在制備trpm7抑制劑類藥物中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及4-甲氧基苯甲醇在制備TRPM7抑制劑類藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 缺血性腦血管?。↖CVD)是嚴(yán)重危害人類健康的疾病之一。ICVD的病理過程比較 復(fù)雜，其中鈣超載占據(jù)中心地位，細(xì)胞內(nèi)鈣濃度（[Ca2+])升高是引起神經(jīng)細(xì)胞損傷的最后 共同通路，因而研究和開發(fā)鈣通道拮抗劑是缺血性腦病治療的熱點(diǎn)之一。TRPM7(transient rec印torpotential，TRP)屬于一類陽(yáng)離子通道蛋白，TRPM7通道是細(xì)胞膜上瞬時(shí)受體電位 通道的家族之一，參與細(xì)胞的生存、增殖與粘附等過程。研究發(fā)現(xiàn)，在腦缺血發(fā)生后，TRPM7 通道受鈣離子和氧化應(yīng)激等調(diào)控而異常開放，TRPM7的蛋白和基因水平均有過度表達(dá)。在 體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)中通過抑制TRPM7通道，均表現(xiàn)出腦神經(jīng)元保護(hù)作用，表明TRPM7通道有望 成為一種潛在的腦保護(hù)治療靶點(diǎn)。
[0003] 目前，TRPM7通道尚無選擇性的抑制劑，現(xiàn)有的一些非選擇性抑制劑有Gd3+，La3， 2-APB等尚處于實(shí)驗(yàn)階段。
[0004] 4-甲氧基苯甲醇具有略帶甜味的茴香香氣，常用于配制茉莉、紫丁香等香精，適于 調(diào)配香水。4-甲氧基苯甲醇是我國(guó)GB2760-86規(guī)定為允許使用的食用香料。主要用以配制 香草、巧克力、可可、杏仁、桃子等香精，也用于有機(jī)合成和用作溶劑。未見4-甲氧基苯甲醇 抑制TRPM7通道或者用于腦保護(hù)的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供4-甲氧基苯甲醇在制備TRPM7通道抑制劑類藥物中的用 途，以降低細(xì)胞內(nèi)鈣濃度，用于腦保護(hù)治療缺血性腦血管病。
[0006] 本發(fā)明首先提供了 4-甲氧基苯甲醇在制備TRPM7抑制劑類藥物中的用途。
[0007]TRPM7屬于一類陽(yáng)離子通道蛋白。
[0008]TRPM7通道抑制劑：抑制TRPM7的蛋白表達(dá)的物質(zhì)。
[0009] 本發(fā)明還提供了 4-甲氧基苯甲醇在制備腦保護(hù)藥物中的用途。
[0010] 腦保護(hù)藥物：能保護(hù)腦組織免受損傷，或阻斷損傷后腦神經(jīng)元壞死、增強(qiáng)神經(jīng)元生 存能力、促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)的藥物。
[0011] 其中，所述腦保護(hù)藥物是提高腦神經(jīng)細(xì)胞存活率的藥物。
[0012] 其中，所述腦保護(hù)藥物是降低神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的藥物。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述 藥物是抑制TRPM7通道蛋白表達(dá)水平的藥物。
[0013] 其中，所述藥物是預(yù)防和/或治療缺氧導(dǎo)致的腦損傷的藥物。
[0014] 其中，所述藥物是預(yù)防和/或治療缺血性腦血管疾病的藥物。
[0015] 其中，所述藥物是以4-甲氧基苯甲醇為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料制備 而成的制劑。
[0016] 本發(fā)明還提供了一種神經(jīng)保護(hù)藥物，它是以4-甲氧基苯甲醇為活性成分，加上藥 學(xué)上可接受的輔料制備而成的制劑。
[0017] 4-甲氧基苯甲醇能抑制TRMP7的表達(dá)，是一種TRMP7抑制劑，可以降低神經(jīng)細(xì)胞內(nèi) 鈣離子濃度，提高神經(jīng)細(xì)胞存活率，預(yù)防和/或治療缺氧導(dǎo)致的神經(jīng)損傷或者腦損傷，可以 制備成為腦保護(hù)藥物，預(yù)防和/或治療缺血性腦血管疾病，臨床應(yīng)用前景良好。
[0018] 下面通過【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明，但是并不是對(duì)本發(fā)明的限 制，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述 基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
【附圖說明】
[0019] 圖IMOBA對(duì)缺糖缺氧/復(fù)糖復(fù)氧（0GD/R)損傷的原代皮層神經(jīng)元TRMP7通道蛋 白表達(dá)的影響
[0020] 圖2MOBA對(duì)0GD/R損傷的原代皮層神經(jīng)元TRMP7通道蛋白表達(dá)的影響（x±s，n =3)〇
[0021] 注：與空白對(duì)照組比較，AAP〈0. 01 ;與模型組比較，*P〈0. 05。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 實(shí)驗(yàn)例1 4-甲氧基苯甲醇（MOBA)對(duì)皮層神經(jīng)元TRPM7通道的阻斷作用
[0023] 1實(shí)驗(yàn)材料
[0024] I. 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0025] 健康SD大鼠，SPF級(jí)，體重250_300g，四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，合 格證號(hào)SCK(川）2013-24。取妊娠18~19d大鼠的胚胎供實(shí)驗(yàn)用。
[0026] 1. 2主要試劑和材料
[0027]2-APB、Gd，美國(guó)Sigma公司；甲基噻唑基四唑溴鹽（MTT)、二甲基亞砜（DMSO)，美 國(guó)Amresco公司；連二亞硫酸鈉（Na2S2O4)，汕頭市西隴化工有限公司；Flu〇-3/AM、Actin抗 體、BCA試劑盒，碧云天生物技術(shù)研究所；LTRPC7抗體，美國(guó)santacruz公司；無血清培養(yǎng) 液（B-27Serum_FreeSupplement)、DMEM高糖液體培養(yǎng)基，美國(guó)Invitrogen公司；4-甲氧 基苯甲醇（MOBA)，百靈威科技有限公司。
[0028] 1. 4主要儀器
[0029] 酶標(biāo)儀（InfiniteM200PR0)，瑞士Tecan公司；流式細(xì)胞儀，美國(guó)BD公司；UVP凝 膠成像分析系統(tǒng)（BioSpectrum)，美國(guó)Spectrum公司。
[0030] 1. 5藥物的配制
[0031] MOBA先用DMSO溶解，用前以無血清培養(yǎng)液稀釋至所需濃度。
[0032] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0033] 2. 1M0BA對(duì)缺糖缺氧/復(fù)糖復(fù)氧（0GD/R)損傷的原代皮層神經(jīng)元存活率的影響
[0034] 將原代皮層神經(jīng)元按5XIO5cells/mL的密度接種于96孔板上，每孔180yL，置 于37°C、5% (：02培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
[0035] 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞設(shè)為空白對(duì)照組、模型組、系列梯度濃度MOBA給藥組，給藥組濃度為 100、50、25yg/mL〇
[0036]培養(yǎng)至第7d于造模前Ih給藥，空白對(duì)照組和模型組加入完全培養(yǎng)基，給藥組加入 含不同梯度濃度的MOBA的培養(yǎng)基。給藥Ih后開始造模。
[0037] 造模：用含32mMNa2S2O4的無糖已&46'8液替換原培養(yǎng)液，置于37°(：、5%0) 2、95% 空氣及飽和濕度條件的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)lh，進(jìn)行缺糖缺氧損傷，然后替換為原培養(yǎng)液ISOuL 置于CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)Ih復(fù)糖復(fù)氧。
[0038] 造模結(jié)束后，每孔加MTT溶液20yL(終濃度0. 5mg/mL)，放入培養(yǎng)箱孵育4h，然后 棄上清液，每孔加150yLDMS0,將培養(yǎng)板置于搖床上振蕩lOmin，使MTT反應(yīng)的結(jié)晶物充分 溶解。選擇570nm波長(zhǎng)，在酶標(biāo)儀上測(cè)定各孔吸光度（以O(shè)D表示），計(jì)算細(xì)胞相對(duì)存活率， 計(jì)算公式如下：細(xì)胞存活率（％) = (實(shí)驗(yàn)組OD值-空白組OD值V(正常組OD值-空白 組OD值）X100%。
[0039] 2. 2M0BA對(duì)OGD/R損傷的原代皮層神經(jīng)元胞內(nèi)鈣離子濃度的影響
[0040] 將原代皮層神經(jīng)元按2. 1節(jié)濃度和體積接種于24孔板上，培養(yǎng)、給藥及造模處理 如前。造模結(jié)束后，每孔加入Hanks液清洗細(xì)胞2