專利名稱：用于治療疾病的氨基脲敏感性胺氧化酶(ssao)和vap－1介導的粘著的抑制劑的制作方法
技術領域：
本申請涉及用于抑制氨基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)、也稱作血管粘著蛋白1(VAP-1)的組合物和方法，它們用于治療炎癥、炎性疾病和自身免疫病。
背景技術：
人血管粘著蛋白-1(VAP-1)為2型180kD的同二聚化內皮細胞粘著分子。對VAP-1的克隆和測序揭示出VAP-1cDNA序列與以前已知的蛋白質氨基脲-敏感性胺氧化酶(SSAO)，即一種含銅的胺氧化酶的序列相同。尚未測定膜結合VAP-1粘著蛋白與可溶性SSAO酶之間的精確差異(如果有的話)；一種推定表明膜結合VAP-1分子的蛋白酶剪切產生可溶性SSAO酶。膜結合VAP-1蛋白質和可溶性SSAO酶都具有胺氧化酶酶促活性。因此，膜結合VAP-1可以作為胺氧化酶和細胞粘著分子起作用。
氨基脲-敏感性胺氧化酶是一組酶的成員；該組一般稱作氨基脲-敏感性胺氧化酶(SSAOs)。SSAOs是催化伯胺類氧化脫氨基的主要可溶性酶。該反應導致形成相應的醛并且釋放H2O2和銨。這些酶在其底物、抑制劑、輔因子、亞細胞定位和功能方面不同于單胺氧化酶A和B(分別為MAO-A和MAO-B)。迄今為止，尚沒有生理功能確定地與SSAOs相關，并且甚至生理底物的性質沒有得到穩(wěn)定地建立(Buffoni F.和Ignesti G.(2000)在《分子遺傳學與代謝》(Mol.Genetics Metabl.)71559-564中綜述)。然而，它們涉及外源性和內源性胺類的代謝和調節(jié)葡萄糖運輸。
SSAO分子在種類間高度保守；與人蛋白質最接近的同源物為牛血清胺氧化酶(約85％的同一性)。底物特異性和組織分布在不同物種之間變化很大。在人中，在大部分組織中檢測到了SSAO特異活性，但沒有顯著差異(在主動脈和肺中)。人和嚙齒動物血漿具有的SSAO活性與反芻動物相比極低。缺失研究提示SSAO/VAP-1占細胞和血清SSAO活性的～90％(Jaakkola K.等(1999)《美國病理學雜志》(Am.J.Pathol.)1551953)。
膜結合VAP-1主要在淋巴器官的高內皮細胞(ECs)、肝的竇狀隙ECs和許多其它組織的小口徑小靜脈中表達。此外，還在生發(fā)中心的樹突細胞中發(fā)現(xiàn)了SSAO/VAP-1并且它在脂肪細胞、周皮細胞和平滑肌細胞中大量存在。然而，它在毛細管、大血管的Ecs、上皮細胞、成纖維細胞和白細胞中不存在(Salmi M.等(2001)《免疫學趨勢》(Trends Immunol.)22211)。在臨床樣品中的研究揭示出SSAO/VAP-1在許多炎癥，諸如滑膜炎、過敏性和其它皮膚炎癥以及炎性腸病(IBD)部位處的脈管系統(tǒng)上得到增量調節(jié)。然而，表達看起來受到其它機制控制。動物研究表明腔SSAO/VAP-1僅在引起炎癥時得到誘導。因此，在Ecs中，SSAO/VAP-1儲存在胞內顆粒中并僅易位至炎癥部位的腔表面上。
在健康成年人血清中，發(fā)現(xiàn)了濃度為80ng/ml的SSAO/VAP-1的可溶性形式?？扇苄許SAO/VAP-1水平在某些肝病和糖尿病中增加，而在許多其它炎性病癥中保持正常?？扇苄許SAO/VAP-1具有與SSAO/VAP-1膜結合形式的鄰近胞外序列相同的N-末端氨基酸序列。此外，存在良好的證據(jù)，即至少大部分可溶性分子通過竇狀隙VAP-1的蛋白酶剪切在肝中產生(Kurkijarvi R.等(2000)《胃腸病學》(Gastroenterology)1191096)。
SSAO/VAP-1調節(jié)與Ecs的白細胞-亞型-特異性粘著。研究證實SSAO/VAP-1涉及部位上的粘著級聯(lián)，在所述部位中發(fā)生選擇蛋白、趨化因子、免疫球蛋白超家族分子和整聯(lián)蛋白的誘導/活化。盡管如此，但是在合適的背景技術中，SSAO/VAP-1功能的失活對所有外滲過程具有獨立和顯著的作用。近期研究表明SSAO/VAP-1的直接粘著和酶功能涉及粘著級聯(lián)(Salmi M.等(2001)《免疫》(Immunity)14265)。在該項研究中，提出VAP-1的活性直接涉及白細胞與內皮細胞粘著的途徑，通過包括與存在于白細胞表面上表達的VAP-1配體的胺底物的直接相互作用來實現(xiàn)。在生理層切應力下，看起來當淋巴細胞開始在Ecs上滾動時，SSAO/VAP-1首先在粘連后起作用(通過選擇蛋白與其配體結合進行)。因此，抗-VAP-1單克隆抗體抑制～50％的淋巴細胞滾動并且顯著減少緊密結合的細胞數(shù)量。此外，SSAO抑制劑抑制VAP-1酶活性還使得滾動的和緊密結合的淋巴細胞數(shù)量減少＞40％。因此，SSAO/VAP-1酶活性的抑制劑可以減少炎癥區(qū)域中白細胞的粘著且由此減少白細胞輸送入發(fā)炎區(qū)，并且由此減少炎癥自身的過程。
已經I型和II型糖尿病患者和動物模型的血漿和胰島以及充血性心力衰竭后和動脈粥樣硬化小鼠模型中發(fā)現(xiàn)了增加的SSAO活性(Salmi M，.等(2002)《美國病理學雜志》(Am.J.Pathol.)1612255；Bono P.等(1999)《美國病理學雜志》(Am.J.Pathol.)1551613；Boomsma F.等(1999)《糖尿病學》(Diabetologia)42233；Gronvall-Nordquist J.等(2001)《糖尿病并發(fā)癥雜志》(J.Diabetes Complications)15250；Ferre I.等(2002)《神經科學通訊》(Neurosci.Lett.)15；32121；ConklinD.J.等(1998)《毒理學科學》(Toxicological Sciences)46386；Yu P.H.和Deng Y.L.(1998)《動脈粥樣硬化》(AtherosC1erosis)140357；Vidrio H.等(2002)《普通藥理學》(GeneralPharmacology)35195；Conklin D.J.(1999)《毒理學》(Toxicology)138137)。除AP-1在類風濕性關節(jié)炎(RA)患者的發(fā)炎關節(jié)和來自IBD患者的固有膜的小靜脈和派伊爾斑中的表達得到增量調節(jié)外，還在慢性皮膚炎癥和肝病中發(fā)現(xiàn)了VAP-1的合成增加(Lalor P.F.等(2002)《免疫學雜志》(J.Immunol.)169983；Jaakkola K.等(2000)《美國病理學雜志》(Am.J.Pathol.)157463；Salmi M.和Jalkanen S.(2001)《免疫學雜志》(J.Immunol.)1664650；Lalr P.F.等(2002)《免疫細胞生物學》(Immunol CellBiol)8052；Salmi M等(1997)《臨床研究雜志》(J.Cin.Invest.)992165；Kurkijarvi R.等(1998)《免疫學雜志》(J.Immunol.)1611549)。
概括地說，SSAO/VAP-1是調節(jié)白細胞-亞型-特異性粘粘著并且介導淋巴細胞與發(fā)炎血管之間的相互作用的誘導型內皮酶。SSAO/VAP-1具有酶和粘著活性及其在許多炎癥病癥增量調節(jié)之間的顯著相關性這一事實使得它能夠成為所有上述疾病情況的治療靶。
本發(fā)明的公開內容SSAO抑制劑可以阻斷炎癥和自身免疫過程以及其它與增加水平的SSAO的循環(huán)胺底物和/或產物相關的病理情況。本發(fā)明在一個實施方案中涉及抑制炎癥反應的方法，通過施用化合物以便抑制SSAO酶活性(其中這種酶活性因可溶性SSAO酶或膜結合VAP-1蛋白質或因它們兩者所致)和/或抑制結合VAP-1蛋白質來進行。在另一個實施方案中，所述的炎癥反應為急性炎癥反應。本發(fā)明在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及治療至少部分由SSAO或VAP-1介導的疾病，正如通過SSAO和/或VAP-1的異常水平或SSAO和/或VAP-1的異?；钚灾械囊环N或多種所表現(xiàn)出的(其中VAP-1的異常活性可以影響其結合功能、其胺氧化酶功能或它們兩者)，通過施用治療量的SSAO抑制劑或施用治療有效量的SSAO抑制劑的組合來進行。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療免疫疾病的方法，通過施用治療有效量的SSAO抑制劑或施用治療有效量的SSAO抑制劑的組合來進行。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療多發(fā)性硬化(包括慢性多發(fā)性硬化)的方法，通過施用治療有效量的SSAO抑制劑或施用治療有效量的SSAO抑制劑的組合來進行。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療缺血性疾病(例如中風)和/或其后遺癥(例如炎癥反應)的方法，通過施用治療有效量的SSAO抑制劑或施用治療有效量的SSAO抑制劑的組合來進行。所施用的SSAO抑制劑可以抑制可溶性SSAO的SSAO活性、與膜結合VAP-1結合的膜結合VAP-1的SSAO活性或這些活性中的任意兩種或這些活性中的所有三種。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用本文提供的化合物在體外抑制SSAO活性或抑制結合VAP-1的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用本文提供的化合物在體內，即活的生物，諸如脊椎動物、哺乳動物或人體內抑制SSAO活性或抑制結合VAP-1的方法。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及用于抑制SSAO酶活性(其中這種酶活性因可溶性SSAO酶或膜結合VAP-1蛋白或因它們兩者所致)和/或抑制與膜結合VAP-1蛋白質結合的不同化合物。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用多種化合物抑制SSAO酶活性(其中這種酶活性因可溶性SSAO酶或膜結合VAP-1蛋白質或因它們兩者所致)和/或抑制與VAP-1蛋白質結合的方法。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療炎癥的方法，通過施用SSAO抑制劑來進行，該抑制劑具有的對SSAO抑制的特異性是對MAO-A和/或MAO-B的約10倍，約100倍或約500倍。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療免疫或自身免疫病的方法，通過施用SSAO抑制劑來進行，該抑制劑具有的對SSAO抑制的特異性是對MAO-A和/或MAO-B的約10倍，約100倍或約500倍。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療炎癥的方法，通過施用治療有效量的或足以治療炎癥用量的本文在通式I、I-P、I-A、I-AP、I-B、I-C、II、III、III-A、III-B或III-C中所述化合物中的一種或多種來進行。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療免疫或自身免疫病的方法，通過施用治療有效量的或足以治療免疫或自身免疫病用量的本文在通式I、I-P、I-A、I-AP、I-B、I-C、II、III、III-A、III-B或III-C中所述化合物中的一種或多種來進行。
本發(fā)明在一個實施方案中涉及化合物通式I的化合物，包括其所有的立體異構體、其所有的E/Z(順式/反式)異構體、其所有的溶劑合物和水合物、其所有的晶形和非晶形及其所有的鹽，特別是藥學上可接受的鹽
其中R1獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基、C5-C14取代的雜芳基、R4-(CH2)n-和R5-Y1-CH2-組成的組；n獨立地為1或2；Y1獨立地為S或O；R2獨立地選自H、C1-C4烷基、Cl、F或CF3；X獨立地選自O或NR6；R3獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；R4獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；R5獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；且R6獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基。通式I化合物的代謝物和前體藥物也包括在本發(fā)明中。在一個優(yōu)選的實施方案中，R1為未被取代的苯基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R1為被取代的苯基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R1為帶有一個取代基的被取代的苯基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R1為帶有兩個取代基的被取代的苯基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R2為H。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R2為F。在另一個實施方案中，X為O。在另一個優(yōu)選的實施方案中，X為NR6。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R3為H或C1-C4烷基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R6為H或C1-C4烷基。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I的化合物抑制SSAO酶活性(無論這種酶活性因可溶性SSAO酶或膜結合VAP-1蛋白質還是因它們兩者所致)和/或抑制與VAP-1蛋白質結合的方法。這些化合物可以用于在體外抑制SSAO酶活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過在體外環(huán)境中提供足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。這些化合物還可以用于在體內，即活的生物，諸如脊椎動物、哺乳動物或人體內抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過對生物體施用足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I的化合物治療炎癥或免疫疾病的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I的化合物抑制或減輕炎癥或抑制或減輕炎癥反應的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療炎癥的方法，通過施用治療有效量的或足以治療炎癥用量的通式I中所述化合物中的一種或多種來進行。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療免疫或自身免疫病的方法，通過施用治療有效量的或足以治療免疫或自身免疫病用量的通式I中所述化合物中的一種或多種來進行。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及通式I-P的化合物，包括其所有的立體異構體、其所有的E/Z(順式/反式)異構體、其所有的溶劑合物和水合物、其所有的晶形和非晶形及其所有的鹽，特別是藥學上可接受的鹽 其中R1p獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基、C5-C14取代的雜芳基、R4-(CH2)n-和R5-Y1-CH2-組成的組；n獨立地為1或2；Y1獨立地為S或O；R2獨立地選自H、C1-C4烷基、Cl、F或CF3；
X獨立地選自O或NR6；R3獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；R4獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；R5獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；且R6獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；條件是當R1p為未被取代的苯基，R2為H且X為NH時，R3不為H。
將通式I的包括上述條件的這一亞組化合物命名為通式I的P亞組的化合物或通式I-P的化合物。通式I化合物的代謝物和前體藥物也包括在本發(fā)明中。在一個優(yōu)選的實施方案中，R1p為未被取代的苯基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R1p為被取代的苯基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R1p為帶有一個取代基的被取代的苯基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R1p為帶有兩個取代基的被取代的苯基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R2為H。在另一個實施方案中，X為O。在另一個優(yōu)選的實施方案中，X為NR6。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R3為H或C1-C4烷基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R6為H或C1-C4烷基。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I-P的化合物抑制SSAO酶活性(無論這種酶活性因可溶性SSAO酶或膜結合VAP-1蛋白質還是因它們兩者所致)和/或抑制與VAP-1蛋白質結合的方法。這些化合物可以用于在體外抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過在體外環(huán)境中提供足以抑制SSAO酶活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。這些化合物還可以用于在體內，即活的生物，諸如脊椎動物、哺乳動物或人體內抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過對生物體施用足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I-P的化合物治療炎癥或免疫疾病的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I-P的化合物抑制或減輕炎癥或抑制或減輕炎癥反應的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療炎癥的方法，通過施用治療有效量的或足以治療炎癥用量的通式I-P中所述化合物中的一種或多種來進行。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療免疫或自身免疫病的方法，通過施用治療有效量的或足以治療免疫或自身免疫病用量的通式I-P中所述化合物中的一種或多種來進行。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及通式I-A的化合物，包括其所有的立體異構體、其所有的E/Z(順式/反式)異構體、其所有的溶劑合物和水合物、其所有的晶形和非晶形及其所有的鹽，特別是藥學上可接受的鹽 其中R1a為取代或未被取代的苯基；R2獨立地選自H、C1-C4烷基、Cl、F或CF3；X獨立地選自O或NR6；R3獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；R6獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基。將通式I的這一亞組化合物命名為通式I的A亞組的化合物或通式I-A的化合物。通式I-A化合物的代謝物和前體藥物也包括在本發(fā)明中。在一個實施方案中，R1a為未被取代的苯基。在另一個實施方案中，R1a為被取代的苯基。在另一個實施方案中，R1a為帶有一個取代基的被取代的苯基。在另一個實施方案中，R1a為帶有兩個取代基的被取代的苯基。在另一個實施方案中，X為O。在另一個實施方案中，X為NR6。在另一個實施方案中，R3為H或C1-C4烷基。在另一個實施方案中，R6為H或C1-C4烷基。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I-A的化合物抑制SSAO酶活性(無論這種酶活性因可溶性SSAO酶或膜結合VAP-1蛋白質還是因它們兩者所致)和/或抑制與VAP-1蛋白質結合的方法。這些化合物可以用于在體外抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過在體外環(huán)境中提供足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。這些化合物還可以用于在體內，即活的生物，諸如脊椎動物、哺乳動物或人體內抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過對生物體施用足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I-A的化合物治療炎癥或免疫疾病的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I-A的化合物抑制或減輕炎癥或抑制或減輕炎癥反應的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療炎癥的方法，通過施用治療有效量的或足以治療炎癥用量的通式I-A中所述化合物中的一種或多種來進行。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療免疫或自身免疫病的方法，通過施用治療有效量的或足以治療免疫或自身免疫病用量的通式I-A中所述化合物中的一種或多種來進行。
本發(fā)明在一個實施方案中涉及通式I-AP的化合物，包括其所有的立體異構體、其所有的E/Z(順式/反式)異構體、其所有的溶劑合物和水合物、其所有的晶形和非晶形及其所有的鹽，特別是藥學上可接受的鹽 其中R1ap為取代或未被取代的苯基；R2獨立地選自H、C1-C4烷基、Cl、F或CF3；X獨立地選自O或NR6；R3獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；
R6獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；條件是當R1ap為未被取代的苯基，R2為H且X為NH時，R3不為H。將通式I的包括上述條件的這一亞組化合物命名為通式I的AP亞組的化合物或通式I-AP的化合物。通式I-AP化合物的代謝物和前體藥物也包括在本發(fā)明中。在一個實施方案中，R1ap為未被取代的苯基。在另一個實施方案中，R1ap為被取代的苯基。在另一個實施方案中，R1ap為帶有一個取代基的被取代的苯基。在另一個實施方案中，R1ap為帶有兩個取代基的被取代的苯基。在另一個實施方案中，X為O。在另一個實施方案中，X為NR6。在另一個實施方案中，R3為H或C1-C4烷基。在另一個實施方案中，R6為H或C1-C4烷基。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I-AP的化合物抑制SSAO酶活性(無論這種酶活性因可溶性SSAO酶或膜結合VAP-1蛋白質還是因它們兩者所致)和/或抑制與VAP-1蛋白質結合的方法。這些化合物可以用于在體外抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過在體外環(huán)境中提供足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。這些化合物還可以用于在體內，即活的生物，諸如脊椎動物、哺乳動物或人體內抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過對生物體施用足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I-AP的化合物治療炎癥或免疫疾病的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I-AP的化合物抑制或減輕炎癥或抑制或減輕炎癥反應的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療炎癥的方法，通過施用治療有效量的或足以治療炎癥用量的通式I-AP中所述化合物中的一種或多種來進行。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療免疫或自身免疫病的方法，通過施用治療有效量的或足以治療免疫或自身免疫病用量的通式I-AP中所述化合物中的一種或多種來進行。
本發(fā)明在一個實施方案中涉及通式I-B的化合物，包括其所有的立體異構體、其所有的E/Z(順式/反式)異構體、其所有的溶劑合物和水合物、其所有的晶形和非晶形及其所有的鹽，特別是藥學上可接受的鹽 其中R2獨立地選自H、C1-C4烷基、Cl、F或CF3；R91和R92獨立地選自H、F、Br、Cl、I、C1-C4烷基和C1-C4烷氧基；X獨立地選自O或NR6；R3獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；R6獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基。
將通式I的這一亞組化合物命名為通式I的B亞組的化合物或通式I-B的化合物。通式I-B化合物的代謝物和前體藥物也包括在本發(fā)明中。在一個實施方案中，X為O。在優(yōu)選的實施方案中，X為NR6。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R3為H或C1-C4烷基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R6為H或C1-C4烷基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R91為H。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R92為H。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R91和R92均為H。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I-B的化合物抑制SSAO酶活性(無論這種酶活性因可溶性SSAO酶或膜結合VAP-1蛋白質還是因它們兩者所致)和/或抑制與VAP-1蛋白質結合的方法。這些化合物可以用于在體外抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過在體外環(huán)境中提供足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。這些化合物還可以用于在體內，即活的生物，諸如脊椎動物、哺乳動物或人體內抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過對生物體施用足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I-B的化合物治療炎癥或免疫疾病的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I-B的化合物抑制或減輕炎癥或抑制或減輕炎癥反應的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療炎癥的方法，通過施用治療有效量的或足以治療炎癥用量的通式I-B中所述化合物中的一種或多種來進行。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療免疫或自身免疫病的方法，通過施用治療有效量的或足以治療免疫或自身免疫病用量的通式I-B中所述化合物中的一種或多種來進行。
本發(fā)明在一個實施方案中涉及通式I-C的化合物，包括其所有的立體異構體、其所有的E/Z(順式/反式)異構體、其所有的溶劑合物和水合物、其所有的晶形和非晶形及其所有的鹽，特別是藥學上可接受的鹽 其中R2獨立地選自H、C1-C4烷基、Cl、F或CF3；R91和R92獨立地選自H、F、Br、Cl、I、C1-C4烷基和C1-C4烷氧基；X獨立地選自O或NR6；R3獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；R6獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基。將通式I的這一亞組化合物命名為通式I的C亞組的化合物或通式I-C的化合物。通式I-C化合物的代謝物和前體藥物也包括在本發(fā)明中。在一個實施方案中，X為O。在另一優(yōu)選的實施方案中，X為NR6。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R3為H或C1-C4烷基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R6為H或C1-C4烷基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R91為H。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R92為H。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R91和R92均為H。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I-C的化合物抑制SSAO酶活性(無論這種酶活性因可溶性SSAO酶或膜結合VAP-1蛋白質還是因它們兩者所致)和/或抑制與VAP-1蛋白質結合的方法。這些化合物可以用于在體外抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過在體外環(huán)境中提供足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。這些化合物還可以用于在體內，即活的生物，諸如脊椎動物、哺乳動物或人體內抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過對生物施用足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I-C的化合物治療炎癥或免疫疾病的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I-C的化合物抑制或減輕炎癥或抑制或減輕炎癥反應的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療炎癥的方法，通過施用治療有效量的或足以治療炎癥用量的通式I-C中所述化合物中的一種或多種來進行。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療免疫或自身免疫病的方法，通過施用治療有效量的或足以治療免疫或自身免疫病用量的通式I-C中所述化合物中的一種或多種來進行。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I、I-P、I-A、I-AP、I-B，和/或I-C的化合物抑制SSAO酶活性(無論這種酶活性因可溶性SSAO酶或膜結合VAP-1蛋白質還是因它們兩者所致)和/或抑制與VAP-1蛋白質結合的方法。這些化合物可以用于在體外抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過在體外環(huán)境中提供足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。這些化合物還可以用于在體內，即活的生物，諸如脊椎動物、哺乳動物或人體內抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過對生物體施用足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I、I-P、I-A、I-AP、I-B，和/或I-C的化合物治療炎癥或免疫疾病的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式I、I-P、I-A、I-AP、I-B，和/或I-C的化合物抑制或減輕炎癥或抑制或減輕炎癥反應的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療炎癥的方法，通過施用治療有效量的或足以治療炎癥用量的通式I、I-P、I-A、I-AP、I-B，和/或I-C中所述化合物中的一種或多種來進行。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療免疫或自身免疫病的方法，通過施用治療有效量的或足以治療免疫或自身免疫病用量的通式I、I-P、I-A、I-AP、I-B，和/或I-C中所述化合物中的一種或多種來進行。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及通式II的化合物，包括其所有的立體異構體、其所有的E/Z(順式/反式)異構體、其所有的溶劑合物和水合物、其所有的晶形和非晶形及其所有的鹽，特別是藥學上可接受的鹽 R11和R12獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基組成的組；R13和R14獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基組成的組。通式II化合物的代謝物和前體藥物也包括在本發(fā)明中。在一個實施方案中，R11為H。在另一個實施方案中，R12為未被取代的苯基。在另一個實施方案中，R12為被取代的苯基。在另一個實施方案中，R13為H或C1-C4烷基。在另一個實施方案中，R14為H或C1-C4烷基。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式II的化合物抑制SSAO酶活性(無論這種酶活性因可溶性SSAO酶或膜結合VAP-1蛋白質還是因它們兩者所致)和/或抑制與VAP-1蛋白質結合的方法。這些化合物可以用于在體外抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過在體外環(huán)境中提供足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。這些化合物還可以用于在體內，即活的生物，諸如脊椎動物、哺乳動物或人體內抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過對生物體施用足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式II的化合物治療炎癥或免疫疾病的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式II的化合物抑制或減輕炎癥或抑制或減輕炎癥反應的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療炎癥的方法，通過施用治療有效量的或足以治療炎癥用量的通式II中所述化合物中的一種或多種來進行。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療免疫或自身免疫病的方法，通過施用治療有效量的或足以治療免疫或自身免疫病用量的通式II中所述化合物中的一種或多種來進行。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及通式III的化合物，包括其所有的立體異構體、其所有的E/Z(順式/反式)異構體、其所有的溶劑合物和水合物、其所有的晶形和非晶形及其所有的鹽，特別是藥學上可接受的鹽 其中R27獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基、C5-C14取代的雜芳基、R23-(CH2)n-和R24-Y2-(CH2)-；R22獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；n獨立地為1或2；n3獨立地為0、1或2；Y2獨立地為S或O；且R23和R24獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基。通式III化合物的代謝物和前體藥物也包括在本發(fā)明中。在一個實施方案中，R27為未被取代的苯基。在另一個實施方案中，R27為取代的苯基。在一個實施方案中，R22為H或C1-C4烷基。在另一個實施方案中，R22不為H。在另一個實施方案中，R22為C1-C4烷基。在另一個實施方案中，R22為甲基或乙基。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式III的化合物抑制SSAO酶活性(無論這種酶活性因可溶性SSAO酶或膜結合VAP-1蛋白質還是因它們兩者所致)和/或抑制與VAP-1蛋白質結合的方法。這些化合物可以用于在體外抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過在體外環(huán)境中提供足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。這些化合物還可以用于在體內，即活的生物，諸如脊椎動物、哺乳動物或人體內抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過對生物體施用足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式III的化合物治療炎癥或免疫疾病的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式III的化合物抑制或減輕炎癥或抑制或減輕炎癥反應的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療炎癥的方法，通過施用治療有效量的或足以治療炎癥用量的通式III中所述化合物中的一種或多種來進行。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療免疫或自身免疫病的方法，通過施用治療有效量的或足以治療免疫或自身免疫病用量的通式III中所述化合物中的一種或多種來進行。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及通式III-A的化合物，包括其所有的立體異構體、其所有的E/Z(順式/反式)異構體、其所有的溶劑合物和水合物、其所有的晶形和非晶形及其所有的鹽，特別是藥學上可接受的鹽 其中R21獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基、C5-C14取代的雜芳基、R23-(CH2)n-和R24-Y2-(CH2)-；
R22獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；n獨立地為1或2；Y2獨立地為S或O；且R23和R24獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基。通式III-A化合物的代謝物和前體藥物也包括在本發(fā)明中。在一個實施方案中，R21為未被取代的苯基。在另一個實施方案中，R21為取代的苯基。在另一個實施方案中，R22為H或C1-C4烷基。在另一個實施方案中，R22不為H。在另一個實施方案中，R22為C1-C4烷基。在另一個實施方案中，R22為甲基或乙基。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式III-A的化合物抑制SSAO酶活性(無論這種酶活性因可溶性SSAO酶或膜結合VAP-1蛋白質還是因它們兩者所致)和/或抑制與VAP-1蛋白質結合的方法。這些化合物可以用于在體外抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過在體外環(huán)境中提供足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。這些化合物還可以用于在體內，即活的生物，諸如脊椎動物、哺乳動物或人體內抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過對生物體施用足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式III-A的化合物治療炎癥或免疫疾病的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式III-A的化合物抑制或減輕炎癥或抑制或減輕炎癥反應的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療炎癥的方法，通過施用治療有效量的或足以治療炎癥用量的通式III-A中所述化合物中的一種或多種來進行。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療免疫或自身免疫病的方法，通過施用治療有效量的或足以治療免疫或自身免疫病用量的通式III-A中所述化合物中的一種或多種來進行。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及通式III-B的化合物，包括其所有的立體異構體、其所有的E/Z(順式/反式)異構體、其所有的溶劑合物和水合物、其所有的晶形和非晶形及其所有的鹽，特別是藥學上可接受的鹽 其中R25獨立地選自C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；且R22獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基。通式III-B化合物的代謝物和前體藥物也包括在本發(fā)明中。在一個實施方案中，R25為未被取代的苯基。在另一個實施方案中，R25為取代的苯基。在另一個實施方案中，R22為H或C1-C4烷基。在另一個實施方案中，R22不為H。
在另一個實施方案中，R22為C1-C4烷基。在另一個實施方案中，R22為甲基或乙基。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式III-B的化合物抑制SSAO酶活性(無論這種酶活性因可溶性SSAO酶或膜結合VAP-1蛋白質還是因它們兩者所致)和/或抑制與VAP-1蛋白質結合的方法。這些化合物可以用于在體外抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過在體外環(huán)境中提供足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。這些化合物還可以用于在體內，即活的生物，諸如脊椎動物、哺乳動物或人體內抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過對生物體施用足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式III-B的化合物治療炎癥或免疫疾病的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式III-B的化合物抑制或減輕炎癥或抑制或減輕炎癥反應的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療炎癥的方法，通過施用治療有效量的或足以治療炎癥用量的通式III-B中所述化合物中的一種或多種來進行。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療免疫或自身免疫病的方法，通過施用治療有效量的或足以治療免疫或自身免疫病用量的通式III-B中所述化合物中的一種或多種來進行。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及通式III-C的化合物，包括其所有的立體異構體、其所有的E/Z(順式/反式)異構體、其所有的溶劑合物和水合物、其所有的晶形和非晶形及其所有的鹽，特別是藥學上可接受的鹽 其中R26獨立地選自C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；且R22獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基。通式III-C化合物的代謝物和前體藥物也包括在本發(fā)明中。在一個實施方案中，R26為未被取代的苯基。在另一個實施方案中，R26為取代的苯基。在另一個實施方案中，R22為H或C1-C4烷基。在另一個實施方案中，R22不為H。
在另一個實施方案中，R22為C1-C4烷基。在另一個實施方案中，R22為甲基或乙基。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式III-C的化合物抑制SSAO酶活性(無論這種酶活性因可溶性SSAO酶或膜結合VAP-1蛋白質還是因它們兩者所致)和/或抑制與VAP-1蛋白質結合的方法。這些化合物可以用于在體外抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過在體外環(huán)境中提供足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。這些化合物還可以用于在體內，即活的生物，諸如脊椎動物、哺乳動物或人體內抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的方法，通過對生物體施用足以抑制SSAO活性或抑制與VAP-1結合的用量的所述化合物來實現(xiàn)。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式III-C的化合物治療炎癥或免疫疾病的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及使用通式III-C的化合物抑制或減輕炎癥或抑制或減輕炎癥反應的方法。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療炎癥的方法，通過施用治療有效量的或足以治療炎癥用量的通式III-C中所述化合物中的一種或多種來進行。本發(fā)明在另一個實施方案中涉及治療免疫或自身免疫病的方法，通過施用治療有效量的或足以治療免疫或自身免疫病用量的通式III-C中所述化合物中的一種或多種來進行。
在另一個實施方案中，由本發(fā)明通式I、I-P、I-A、I-AP、I-B、I-C、II、III、III-A、III-B和/或III-C化合物中的一種或多種治療的炎性疾病或免疫疾病選自下列疾病組成的組多發(fā)性硬化(包括慢性多發(fā)性硬化)；滑膜炎；全身炎性膿毒癥；炎性腸病；克羅恩?。粷冃越Y腸炎；阿爾茨海默氏??；血管性癡呆；動脈粥樣硬化；類風濕性關節(jié)炎；青少年類風濕性關節(jié)炎；肺部炎性病癥；哮喘；皮膚炎性病癥和疾??；接觸性皮炎；肝炎性和自身免疫??；自身免疫性肝炎；原發(fā)性膽汁性肝硬變；硬化性膽管炎；自身免疫性膽管炎；酒精性肝病；I型糖尿病和/或其并發(fā)癥；II型糖尿病和/或其并發(fā)癥；動脈粥樣硬化；慢性心力衰竭；充血性心力衰竭；缺血性疾病，諸如中風和/或其并發(fā)癥；和心肌梗死和/或其并發(fā)癥。在另一個實施方案中，由本發(fā)明治療的炎性疾病或免疫疾病為多發(fā)性硬化(包括慢性多發(fā)性硬化)。在另一個實施方案中，由本發(fā)明治療的炎性疾病或免疫疾病為因中風導致的炎性并發(fā)癥。
可以以治療有效量單獨施用如上所述的通式I、I-P、I-A、I-AP、I-B、I-C、II、III、III-A、III-B或III-C的化合物?？梢詫⑷缟纤龅耐ㄊ絀、I-P、I-A、I-AP、I-B、I-C、II、III、III-A、III-B或III-C的化合物與通式I、I-P、I-A、I-AP、I-B、I-C、II、III、III-A、III-B或III-C的一種或多種其它化合物以治療有效量施用。當以組合方式施用時，可以以治療有效量施用這些化合物，所述量為單獨施用所述化合物時的量。或者，當以組合方式施用時，可以以單獨施用所述化合物時并非治療有效，而在組合時治療有效的用量施用任意或所有的化合物。還可以將通式I、I-P、I-A、I-AP、I-B、I-C、II、III、III-A、III-B或III-C的一種或多種化合物與其它未包括在通式I、I-P、I-A、I-AP、I-B、I-C、II、III、III-A、III-B或III-C中的化合物一起施用；這些化合物的施用量在作為單一藥物使用時是治療上有效的，或該用量在作為單一藥物時并非治療上有效，而在組合時是治療上有效的。還提供了藥學上可接受的組合物及其人體用的單位劑量，所述組合物包含治療有效量的本文公開的化合物中的一種或多種或本文公開的化合物中的兩種或多種的治療有效組合，包括上述通式I、I-P、I-A、I-AP、I-B、I-C、II、III、III-A、III-B和/或III-C的化合物及其藥學上可接受的載體。
可以將如上所述的通式I、I-P、I-A、I-AP、I-B、I-C、II、III、III-A、III-B和/或III-C的化合物制成分離的藥物組合物，并且以分離的藥物組合物與載體或其它分離的化合物一起施用。即可以從其它化合物中分離如上所述的通式I、I-P、I-A、I-AP、I-B、I-C、II、III、III-A、III-B和/或III-C的化合物(例如，可以將在文庫篩選試驗中發(fā)現(xiàn)的化合物從該庫中純化出來或作為單一化合物重新合成)。純化程度可以為90％、95％、99％，或無論如何的純度百分比為該化合物的藥物應用所需的。然后可以將分離的化合物與藥學上可接受的載體組合，或可以將其與通式I、I-P、I-A、I-AP、I-B、I-C、II、III、III-A、III-B和/或III-C中一種或多種分離的化合物組合，或與另一種治療性物質組合?？梢詫⑷缟纤龅耐ㄊ絀、I-P、I-A、I-AP、I-B、I-C、II、III、III-A、III-B和/或III-C的化合物以人用藥物單位劑量制劑經口施用。
在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I的化合物在療法中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I的化合物在制備用于治療炎性疾病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I的化合物在制備用于治療免疫或自身免疫病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I的化合物在制備用于治療多發(fā)性硬化或慢性多發(fā)性硬化的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I的化合物在制備用于治療缺血性疾病(諸如中風)或缺血性疾病后遺癥的藥物中的應用。
在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-P的化合物在療法中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-P的化合物在制備用于治療炎性疾病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-P的化合物在制備用于治療免疫或自身免疫病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-P的化合物在制備用于治療多發(fā)性硬化或慢性多發(fā)性硬化的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-P的化合物在制備用于治療缺血性疾病(諸如中風)或缺血性疾病后遺癥的藥物中的應用。
在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-A的化合物在療法中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-A的化合物在制備用于治療炎性疾病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-A的化合物在制備用于治療免疫或自身免疫病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-A的化合物在制備用于治療多發(fā)性硬化或慢性多發(fā)性硬化的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-A的化合物在制備用于治療缺血性疾病(諸如中風)或缺血性疾病后遺癥的藥物中的應用。
在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-AP的化合物在療法中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-AP的化合物在制備用于治療炎性疾病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-AP的化合物在制備用于治療免疫或自身免疫病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-AP的化合物在制備用于治療多發(fā)性硬化或慢性多發(fā)性硬化的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-AP的化合物在制備用于治療缺血性疾病(諸如中風)或缺血性疾病后遺癥的藥物中的應用。
在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-B的化合物在療法中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-B的化合物在制備用于治療炎性疾病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-B的化合物在制備用于治療免疫或自身免疫病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-B的化合物在制備用于治療多發(fā)性硬化或慢性多發(fā)性硬化的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-B的化合物在制備用于治療缺血性疾病(諸如中風)或缺血性疾病后遺癥的藥物中的應用。
在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-C的化合物在療法中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-C的化合物在制備用于治療炎性疾病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-C的化合物在制備用于治療免疫或自身免疫病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-C的化合物在制備用于治療多發(fā)性硬化或慢性多發(fā)性硬化的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I-C的化合物在制備用于治療缺血性疾病(諸如中風)或缺血性疾病后遺癥的藥物中的應用。
在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式II的化合物在療法中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式II的化合物在制備用于治療炎性疾病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式II的化合物在制備用于治療免疫或自身免疫病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式II的化合物在制備用于治療多發(fā)性硬化或慢性多發(fā)性硬化的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式II的化合物在制備用于治療缺血性疾病(諸如中風)或缺血性疾病后遺癥的藥物中的應用。
在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III的化合物在療法中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III的化合物在制備用于治療炎性疾病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III的化合物在制備用于治療免疫或自身免疫病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III的化合物在制備用于治療多發(fā)性硬化或慢性多發(fā)性硬化的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III的化合物在制備用于治療缺血性疾病(諸如中風)或缺血性疾病后遺癥的藥物中的應用。
在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III-A的化合物在療法中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III-A的化合物在制備用于治療炎性疾病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III-A的化合物在制備用于治療免疫或自身免疫病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III-A的化合物在制備用于治療多發(fā)性硬化或慢性多發(fā)性硬化的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III-A的化合物在制備用于治療缺血性疾病(諸如中風)或缺血性疾病后遺癥的藥物中的應用。
在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III-B的化合物在療法中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III-B的化合物在制備用于治療炎性疾病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III-B的化合物在制備用于治療免疫或自身免疫病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III-B的化合物在制備用于治療多發(fā)性硬化或慢性多發(fā)性硬化的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III-B的化合物在制備用于治療缺血性疾病(諸如中風)或缺血性疾病后遺癥的藥物中的應用。
在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III-C的化合物在療法中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III-C的化合物在制備用于治療炎性疾病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III-C的化合物在制備用于治療免疫或自身免疫病的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III-C的化合物在制備用于治療多發(fā)性硬化或慢性多發(fā)性硬化的藥物中的應用。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括通式III-C的化合物在制備用于治療缺血性疾病(諸如中風)或缺血性疾病后遺癥的藥物中的應用。
附圖簡述附

圖1A描繪了實施例2的化合物((2-苯基烯丙基)肼)與磷酸緩沖鹽水(PBS)對照品和甲氨蝶呤相比較對如通過關節(jié)炎評分評價的單克隆抗體誘導的關節(jié)炎疾病發(fā)展的作用。
附圖1B描繪了實施例2的化合物((2-苯基烯丙基)肼)與PBS對照品和甲氨蝶呤相比較對如通過爪測量結果評價的單克隆抗體誘導的關節(jié)炎疾病發(fā)展的作用。
附圖1C描繪了實施例2的化合物((2-苯基烯丙基)肼)與PBS對照品和甲氨蝶呤相比較對如通過發(fā)病率百分比評價的單克隆抗體誘導的關節(jié)炎疾病發(fā)展的作用。
附圖2A描繪了實施例18的烯丙胺(AA)化合物(莫非吉蘭(mofegiline))與載體對照品和甲氨蝶呤相比較對如通過臨床嚴重程度評價的實驗性自身免疫性腦炎(EAE)發(fā)展的作用。
附圖2B描繪了實施例18的烯丙胺(AA)化合物(莫非吉蘭)與載體對照品和甲氨蝶呤相比較對如通過發(fā)病率百分比評價的EAE發(fā)展的作用。
附圖2C描繪了實施例18的烯丙胺(AA)化合物(莫非吉蘭)與載體對照品和甲氨蝶呤相比較對如通過體重評價的EAE發(fā)展的作用。
附圖3A描繪了實施例2((2-苯基烯丙基)肼)與載體對照品相比較對如通過發(fā)病率百分比評價的EAE發(fā)展的作用。
附圖3B描繪了實施例2((2-苯基烯丙基)肼)與載體對照品相比較對如通過臨床嚴重程度評價的EAE發(fā)展的作用。
附圖4A描繪了實施例2和8的化合物與PBS相比較對誘導的爪炎癥的作用。該附圖中的各種三角形、正方形和菱形符號表示各測試動物。
附圖4B描繪了實施例2和8的化合物與磷酸緩沖鹽水相比較對誘導的爪炎癥的作用。該附圖中的符號代表各小鼠。
附圖5A和5B描繪了小鼠和大鼠中的口服有效性研究。附圖5A描繪了在小鼠中的口服有效性研究；附圖5B描繪了在大鼠中的口服有效性研究。通過經口管飼法將磷酸緩沖鹽水(PBS)中的濃度為50mg/kg的化合物施用于小鼠和大鼠。在附圖中所示的時間處采集血漿，并且使用實施例14中所述的SSAO比色測定法測定抑制劑濃度。
附圖6描繪了SSAO活性的體內抑制。單一經口劑量施用實施例8化合物在治療后4小時對大鼠主動脈和肺中SSAO活性的劑量反應作用(平均值S.E.M.)。Ed50值主動脈-5mg/kg；肺-0.72mg/kg；n＝5。
附圖7描繪了阻斷SSAO/VAP-1對外周血單核細胞(PBMCs)和肥厚內皮細胞(HEC)之間結合的影響。附圖7A是對照實驗，顯示了用于處理的多種化合物對PBMCs與VAP-1轉染的肥厚內皮細胞粘著的影響；包括未處理的對照用于比較(MNT)。附圖7B為表示用于處理的不同化合物對PBMCs與用VAP-1轉染的肥厚內皮細胞粘著的作用的對照實驗；包括未處理的對照組用于比較(VNT)。MNT模擬轉染的細胞，未處理；VNTVAP-1-轉染的細胞，未處理；VAP-1用抗-VAP1抗體處理的細胞；Ex2用實施例2的化合物處理的細胞；Ex8用實施例8化合物處理的細胞；Semic用氨基脲處理的細胞；Clog用氯吉靈處理的細胞；Parg用帕吉林處理的細胞。IC100值氨基脲(SSAO)-500μM；氯吉靈(MAO-A)-250μM；帕吉林(MAO-B)-200μM；實施例2的化合物-150nM；實施例8的化合物-250nM；n＝6。
附圖8表示來自小鼠爪樣品的18SrRNA和TNFα的RT-PCR擴增。附圖8A來自有代表性的動物的爪和趾的cDNA的RT-PCR擴增。附圖8B從來自三個不同組的所有動物取下右后爪并分離總RNA且用于如實施例17所述的定性RT-PCR研究。對每一樣品測定來自TNF和18S帶的光密度單位(DU)并且將它們的比值平均(±SD)?！寤衔?″表示實施例2的化合物。
附圖9表示在慢性多發(fā)性硬化模型中施用(2-苯基烯丙基)肼的改善作用。附圖9A描繪了用PBS(磷酸緩沖鹽水)治療的小鼠與用(2-苯基烯丙基)肼治療的小鼠的平均臨床評分比較。附圖9B描繪了用PBS(磷酸緩沖鹽水)治療與用(2-苯基烯丙基)肼治療的小鼠的疾病發(fā)病率的百分比比較。附圖9C描繪了用PBS(磷酸緩沖鹽水)治療的小鼠與用(2-苯基烯丙基)肼治療的小鼠的小鼠中患慢性疾病百分比的比較。附圖9D描繪了用PBS(磷酸緩沖鹽水)治療的小鼠與用(2-苯基烯丙基)肼治療的小鼠中復發(fā)總數(shù)的比較。
附圖10表示治療施用后SSAO抑制對爪水腫減輕的作用。動物在角叉菜膠注射(箭頭)后1小時接受實施例2的化合物((2-苯基烯丙基)肼，30mg/kg，口服)、吲哚美辛(3mg/kg，口服)或PBS。在所示的時間處記錄爪體積并且將其表示為注射前體積的百分比。N＝8只動物/組；*p＜0.05。
附圖11表示指出SSAO抑制劑減小爪體積(附圖11A)和爪滲出物中PGE2的水平(附圖11B)的數(shù)據(jù)。8只動物/組在右側后足墊中注射0.5％角叉菜膠前1小時接受(通過經口施用)PBS、吲哚美辛(3mg/kg)或實施例2的化合物((2-苯基烯丙基)肼，50mg/kg)。還在注射角叉菜膠前1小時經腹膜內施用地塞米松(3mg/kg)。在注射角叉菜膠后3小時，處死動物，采集其爪的滲出物并通過ELISA測定PGE2水平。星號表示下列p值*p＜0.05；**p＜0.01。
附圖12表示顯示SSAO/VAP-1抑制在鼠結腸炎模型中延長存活、減輕疾病癥狀和提高的組織學評分的數(shù)據(jù)。唑酮誘導的結腸炎為模擬人潰瘍性結腸炎的小鼠模型。用3％唑酮使小鼠預先致敏(presensitize)(第0天)，并且在5天后經直腸內用1％唑酮攻擊(第5天)。用實施例2的化合物((2-苯基烯丙基)肼，10mg/kg，每天兩次，腹膜內)或PBS(每天兩次，腹膜內)在第0天開始治療。對EtOH組中的動物用3％唑酮預先致敏，隨后在第5天時直腸內施用50％EtOH(載體)。附圖12A表示對存活率的影響，而附圖12B表示對體重的影響。在附圖12A中，n＝10，p＜0.05；正方形表示EtOH組，三角形表示PBS組，圓形表示接受實施例2化合物的組。在附圖12B中，n＝10，星號*表示p＜0.05的p值；正方形表示EtOH組，正三角形表示PBS組，倒三角形表示接受實施例2化合物的組。
附圖13表示直腸內施用1％唑酮后2天患有唑酮誘導的結腸炎的小鼠中結腸炎的組織學評價(第7天)。將結腸固定并用H/E染色。在第0天用實施例2的化合物((2-苯基烯丙基)肼，20mg/kg/天)或PBS開始處理。N＝10只動物/治療組。數(shù)據(jù)針對的是來自切片2的評分。使用GraphPadPrism軟件(San Diego，CA)計算不配對t檢驗。雙星號**表示p＜0.01。
附圖14表示治療施用后SSAO抑制劑延長存活。用3％唑酮使小鼠預先致敏(第0天)，并且在5天后經直腸內用1％唑酮攻擊(第5天)。用實施例2的化合物((2-苯基烯丙基)肼，10mg/kg，每天兩次，腹膜內)或PBS(每天兩次，腹膜內)在第6天開始治療。N＝10，p＜0.05；正方形表示接受PBS的動物的數(shù)據(jù)點；菱形表示接受實施例2化合物的動物的數(shù)據(jù)點。
附圖15表示用SSAO抑制劑口服施用減少了LPS-誘導的細胞因子產生和致死率。8只雌性小鼠/組腹膜內接受5mg/kg LPS注射。在LPS施用前1小時經口服施用載體(PBS)和實施例2的化合物((2-苯基烯丙基)肼，50mg/kg)。同時經腹膜內施用地塞米松(3mg/kg)。在LPS注射后1、2、4和8小時采血并通過ELISA(R & D Systems)測定循環(huán)TNF-α和IL-6水平。星號*表示p＜0.01。PBS數(shù)據(jù)如空框中所示，實施例2化合物的數(shù)據(jù)如灰色陰影框中所示，地塞米松的數(shù)據(jù)如黑色填充框中所示。
附圖16表示實驗結果，其中雌性小鼠接受腹膜內施用的LPS(2mg/kg)與300mg/kg D-半乳糖胺。在攻擊時通過口腔管飼法遞送實施例2的化合物((2-苯基烯丙基)肼)(1X)或在LPS注射后0和8小時時施用兩次(2X)。列出了前14小時的存活率數(shù)據(jù)。用PBS治療的小鼠的存活率為40％，而用實施例2化合物治療一次或兩次的小鼠的存活率分別為60和80％。
本發(fā)明的實施方式本發(fā)明涉及用于抑制SSAO活性(其中酶活性是因可溶性SSAO酶或膜結合的VAP-1蛋白質或它們兩者所致)和/或抑制與膜結合VAP-1蛋白質結合的多種化合物。本發(fā)明還涉及使用多種化合物抑制SSAO活性(其中酶活性是因可溶性SSAO酶或膜結合VAP-1蛋白質或它們兩者所致)和/或抑制與膜結合VAP-1蛋白質結合的方法。本發(fā)明還涉及使用多種化合物治療炎癥或免疫疾病和減輕或抑制炎癥和/或炎癥反應的方法。
可以通過下文實施例14中的方案檢測用于本發(fā)明的化合物的SSAO抑制活性。SSAO與單胺氧化酶的底物特異性相比部分重疊。因此，優(yōu)選使用對SSAO的特異性抑制超過單胺氧化酶的化合物?？梢酝ㄟ^下文實施例15中的方案檢測所述化合物對SSAO的抑制活性與對MAO-A和MAO-B抑制活性相比較的特異性。用于本發(fā)明的具有的對SSAO的抑制活性(IC50)約＜1μM，更優(yōu)選為約100nM，并且更優(yōu)選約10nM。優(yōu)選用于本發(fā)明的化合物對SSAO具有的特異性與對MAO-A具有的特異性相比約為10，更優(yōu)選約為100，更優(yōu)選約為500(其中將對SSAO具有的特異性與對MAO-A具有的特異性相比定義為化合物對MAO-A的IC50與相同化合物對SSAO的IC50的比值；即具有對MAO-A的IC50為10μM和對SSAO具有IC50為20nM的化合物對SSAO具有的特異性與對MAO-A具有的特異性之比為500)。用于本發(fā)明的化合物對SSAO具有的特異性與對MAO-B具有的特異性相比為約10，更優(yōu)選為約100，更優(yōu)選為約500(其中將對SSAO具有的特異性與對MAO-B具有的特異性相比定義為化合物對MAO-B的IC50與相同化合物對SSAO的IC50的比值)。下表1中提供了用于本發(fā)明的幾種化合物的實驗值。
術語″抑制與VAP-1蛋白質的結合″意在指出抑制(可以包括部分到完全抑制)例如在表面上表達SSAO/VAP-1蛋白質的細胞與SSAO/VAP-1蛋白質結合配偶體之間的結合。例如，當在表面上表達SSAO/VAP-1蛋白質的細胞與表達SSAO/VAP-1蛋白質的結合配偶體的另一種細胞，諸如肥厚內皮細胞(HEC)發(fā)生相互作用時發(fā)生這類結合。因此，″抑制與VAP-1蛋白質的結合″包括抑制在表面上表達SSAO/VAP-1蛋白質的細胞與表達SSAO/VAP-1蛋白質的結合配偶體的另一種細胞之間的粘著。這類粘著包括例如細胞滾動。如本說明書公開內容(包括實施例)中清楚地表明的，這類抑制可以在體外或體內發(fā)生。
本發(fā)明包括本文所述化合物的所有鹽以及使用這類化合物的鹽的方法。本發(fā)明還包括本文命名的化合物的任意鹽的所有純(非鹽)化合物以及本文命名的化合物的任意鹽的其它鹽。在一個實施方案中，化合物的鹽包括藥學上可接受的鹽。藥學上可接受的鹽為保留游離化合物的生物活性并且不是生物或者不希望的那些鹽?？梢酝ㄟ^本領域技術人員公知的方法，通過用酸處理化合物來制備所希望的堿性化合物的鹽。無機酸的實例包括，但不限于氫氯酸、氫溴酸、硫酸、硝酸和磷酸。有機酸的實例包括，但不限于甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、磺酸和水楊酸。還可以制備堿性化合物與氨基酸形成的鹽，諸如天冬氨酸鹽和谷氨酸鹽。可以通過本領域技術人員公知的方法，通過用堿處理化合物來制備所希望的酸性化合物的鹽。酸性化合物的無機鹽的實例包括，但不限于堿金屬和堿土金屬鹽，諸如鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽和鈣鹽；銨鹽；和鋁鹽。酸性化合物的有機鹽的實例包括，但不限于普魯卡因、二芐胺、N-乙基哌啶、N，N′-二芐基乙二胺和三乙胺。還可以制備酸性化合物與氨基酸形成的鹽，諸如賴氨酸鹽。
本發(fā)明還包括所述化合物的所有立體異構體，包括非對映體和對映體；以及立體異構體的混合物，包括，但不限于外消旋混合物。除非化學結構或化學名中明確表示了立體化學，否則化學結構或化學名用以包括所示化合物的所有可能的立體異構體。此外，盡管畫出的通式I、I-P、I-A、I-AP、I-B和I-C僅帶有所繪制的順反異構體之一(其中將R1和R2描繪為彼此為順式)，但是該圖用以包括具有順式位置的R1和R2和反式位置的R1和R2的化合物(即單個圖用于代表E和Z異構體，盡管僅畫出了一種異構體)。
術語″烷基″指的是飽和脂族基團，包括直鏈、支鏈、環(huán)狀基團及其組合，它們帶有指定的碳原子數(shù)，或如果未指定碳原子數(shù)，那么帶有至多12個碳原子。″直鏈烷基(straight-chain alkyl)″或″線性烷基(linear alkyl)″指的是既非環(huán)狀又非支鏈的烷基，通常命名為″正-烷基″。烷基的實例包括，但不限于這類基團，諸如甲基、乙基、正丙基、異丙基、丁基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、正戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一基、十二基、新戊基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和金剛烷基。環(huán)烷基可以由一個環(huán)組成，包括，但不限于這類基團，諸如環(huán)庚基；或由多稠合環(huán)組成，包括，但不限于這類基團，諸如金剛烷基或降冰片基。
″取代的烷基″指的是被一個或多個取代基取代的烷基，所述取代基包括，但不限于諸如鹵素(氟、氯、溴和碘)、烷氧基、酰氧基、氨基、羥基、巰基、羧基、芐氧基、苯基、芐基、氰基、硝基、硫代烷氧基、醛(carboxaldehyde)、烷氧羰基和酰胺的基團；或如果對本發(fā)明的目的必要，可以適當被保護基封閉的官能團。取代的烷基的實例包括，但不限于-CF3、-CF2-CF3和其它全氟和全鹵代基團；-CH2-OH；-CH2CH2CH(NH2)CH3等。
術語″鏈烯基″指的是不飽和的脂族基團，包括直鏈(線性)、支鏈、環(huán)狀基團及其組合，它們帶有指定的碳原子數(shù)，或如果未指定碳原子數(shù)，那么帶有至多12個碳原子，它們含有至少一個雙鍵(-C＝C-)。鏈烯基的實例包括，但不限于-CH2-CH＝CH-CH3；和-CH2-CH2-環(huán)己烯基，其中乙基可以以任意可利用的碳原子價連接環(huán)己烯基部分。術語″炔基″指的是不飽和的脂族基團，包括直鏈(線性)、支鏈、環(huán)狀基團及其組合，它們帶有指定的碳原子數(shù)，或如果未指定碳原子數(shù)，那么帶有至多12個碳原子，它們含有至少一個三鍵(-C≡-C-)?！鍩N鏈″或″烴基″指的是直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基、烯基或炔基的任意組合及其任意的組合。″取代的鏈烯基″、″取代的炔基″和″取代的烴鏈″或″取代的烴基″指的是被一個或多個取代基取代的各自基團，所述的取代基包括，但不限于諸如鹵素、烷氧基、酰氧基、氨基、羥基、巰基、羧基、芐氧基、苯基、芐基、氰基、硝基、硫代烷氧基、醛、烷氧羰基和酰胺的基團；或如果對本發(fā)明的目的必要，可以適當被保護基封閉的官能團。
″芳基″或″Ar″指的是帶有單環(huán)(包括，但不限于諸如苯基的基團)或二或多稠合環(huán)(包括，但不限于諸如萘基或蒽基的基團)的芳族碳環(huán)基，并且包括未被取代和取代的芳基。除非另有說明，芳基在環(huán)部分中含有6-12個碳原子。芳基的優(yōu)選范圍為在環(huán)部分中有6-10個碳原子?！迦〈姆蓟逯傅氖潜灰粋€或多個取代基取代的芳基，所述的取代基包括，但不限于諸如烷基、鏈烯基、炔基、烴鏈、鹵素、烷氧基、酰氧基、氨基、羥基、巰基、羧基、芐氧基、苯基、芐基、氰基、硝基、硫代烷氧基、醛、烷氧羰基和酰胺的基團；或如果對本發(fā)明的目的必要，可以適當被保護基封閉的官能團。″芳烷基″表示烷基-取代的芳基，其中任意的芳基可以與烷基連接；烷基部分為1-6個碳原子的直鏈或支鏈，優(yōu)選烷基鏈含有1-3個碳原子。當將芳烷基表示為取代基時，該芳烷基可以以任意可利用的化合價連接到分子的剩余部分的烷基部分或芳基部分上；例如甲苯基芳烷基可以通過用分子剩余部分取代芳環(huán)部分上5個氫中任意一個或通過用分子的剩余部分取代甲基部分上的α-氫之一而與分子的剩余部分連接。優(yōu)選芳烷基通過烷基部分與分子的剩余部分連接。
優(yōu)選的芳基為苯基，它可以被取代或未被取代。被取代的苯基的優(yōu)選取代基為低級烷基(-C1-C4烷基)或鹵素(氯(-Cl)、溴(-Br)、碘(-I)或氟(-F)；苯基的優(yōu)選鹵素取代基為氯和氟)、羥基(-OH)或低級烷氧基(-C1-C4烷氧基)，諸如甲氧基、乙氧基、丙氧基(propyloxy)(丙氧基(propoxy))(正-丙氧基或異-丙氧基)和丁氧基(正丁氧基、異-丁氧基、仲-丁氧基或叔-丁氧基)；優(yōu)選的烷氧基取代基為甲氧基。被取代的苯基優(yōu)選帶有一個或兩個取代基；更優(yōu)選一個取代基。
″雜烷基″、″雜烯基″和″雜炔基″指的是分別含有指定碳原子數(shù)(或如果不指定碳原子數(shù)，那么帶有至多12個碳原子)、在基團的主鏈、支鏈或環(huán)狀鏈上含有一個或多個雜原子的烷基、烯基和炔基。雜原子包括，但不限于N、S、O和P；優(yōu)選N和O。雜烷基、雜烯基和雜炔基可以在雜原子(如果化合價可利用)或碳原子上與分子的剩余部分連接。雜烷基的實例包括，但不限于諸如-O-CH3、-CH2-O-CH3、-CH2-CH2-O-CH3、-S-CH2-CH2-CH3、-CH2-CH(CH3)-S-CH3、-CH2-CH2-NH-CH2-CH2-、1-乙基-6-丙基哌啶子基和嗎啉基的基團。雜烯基的實例包括，但不限于諸如-CH＝CH-NH-CH(CH3)-CH2-的基團?！咫s芳基″或″HetAr″指的是帶有單環(huán)(包括，但不限于諸如吡啶基、咪唑基、噻吩或呋喃基這類實例)或兩個或多個稠合環(huán)(包括，但不限于諸如中氮茚基或苯并噻吩基的實例)和在環(huán)上帶有至少一個雜原子的芳族碳環(huán)基，所述的雜原子為諸如N、O、P或S。除非另有說明，雜烷基、雜烯基、雜炔基和雜芳基帶有1-5個雜原子和1-12個碳原子?！迦〈碾s烷基″、″取代的雜烯基″、″取代的雜炔基″和″取代的雜芳基″指的是被一個或多個取代基取代的雜烷基、雜烯基、雜炔基和雜芳基，所述的取代基包括，但不限于這類基團諸如烷基、鏈烯基、炔基、芐基、烴鏈、鹵素、烷氧基、酰氧基、氨基、羥基、巰基、羧基、芐氧基、苯基、芐基、氰基、硝基、硫代烷氧基、醛、烷氧羰基和酰胺；或如果對本發(fā)明的目的必要，可以適當被保護基封閉的官能團。這類取代的雜烷基的實例包括，但不限于在氮或碳上被苯基或芐基取代并且通過碳或氮上的任意可利用的化合價與分子剩余部分連接的哌嗪、-NH-SO2-苯基、-NH-(C＝O)O-烷基、-NH-(C＝O)O-烷基-芳基和-NH-(C＝O)-烷基。如果在化學上可能，那么基團的雜原子和/或碳原子可以被取代。如果在化學上可能，那么雜原子可以為氧化形式。
本文所用的術語″烷氧基″指的是與氧原子連接并且?guī)в兄付ㄌ荚訑?shù)或如果未指定碳原子數(shù)，那么帶有至多12個碳原子的烷基、鏈烯基、炔基或者烴鏈。烷氧基的實例包括，但不限于這類基團，諸如甲氧基、乙氧基、丙氧基(propyloxy)(丙氧基(propoxy))(正-丙氧基或異-丙氧基)和丁氧基(正丁氧基、異-丁氧基、仲-丁氧基或叔-丁氧基)。上句中所列的基團為優(yōu)選的烷氧基；特別優(yōu)選的烷氧基取代基為甲氧基。
本文所用的術語″鹵″和″鹵素″指的是VIIa族元素(在1990 IUPAC周期表中的第17族元素，IUPAC Nomenclature of Inorganic Chemistry，Recommendations 1990)并且包括Cl、Br、F和I取代基。優(yōu)選的鹵素取代基為Cl和F。
″保護基″指的是表現(xiàn)出如下特性的化學基團1)以良好產率與所希望的官能團選擇性反應而得到被保護的對希望保護的計劃反應穩(wěn)定的底物；2)選擇性地從被保護底物中除去以產生所希望的官能團；和3)可用與存在于這類計劃反應或在其中產生的其它官能團相容的試劑以良好產率除去。合適的保護基的實例可以在Greene等(1991)《有機合成中的保護基》(Protective Groups in Organic Synthesis)，3rd Ed.(John Wiley & Sons，Inc.，New York)中找到。氨基保護基包括，但不限于均三甲苯磺酰基(Mts)、芐氧羰基(CBz或Z)、叔丁氧羰基(Boc)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS或TBDMS)、9-芴基甲氧羰基(Fmoc)、甲苯磺酰基、苯磺酰基、2-吡啶基磺?；蚝线m的對光不安的保護基，諸如6-硝基藜蘆基氧基羰基(Nvoc)、硝基胡椒基、芘基甲氧羰基、硝基芐基、二甲基二甲氧基偶苯酰、5-溴-7-硝基二氫吲哚基等。羥基保護基包括，但不限于Fmoc、TBS、對光不安的保護基(諸如硝基藜蘆基氧基甲基醚(Nvom))、Mom(甲氧基甲基醚)和Mem(甲氧基乙氧基甲基醚)、NPEOC(4-硝基苯乙基氧基羰基)和NPEOM(4-硝基苯乙基氧基甲氧羰基)。
一般合成方法可以通過多種方法制備本文所述通式的化合物。便利的是使用1，2-取代的丙烯作為原料制備通式I的化合物(參見下文的實施例1-10)。使用良好的離去基團(LG)，例如通過溴化將丙烯的甲基衍生成3-溴-1，2-取代的丙烯。
與N-保護的羥基胺化合物HON(R3)(PG)反應，其中PG為保護基(例如N-Boc羥基胺(N-羥基氨基甲酸叔丁酯))，或與單-保護的肼化合物H(R6)N-N(R3)(PG)(例如N-Boc肼(肼基甲酸叔丁酯))反應，得到通式I的化合物，其中X分別＝O或NR6。
便利的是通過下列合成途徑，以商購苯乙酸(苯基乙酸、α-甲基苯甲酸；Aldrich；相當于如下反應方案中n＝0)或3-苯基丙酸(氫化肉桂酸；Aldrich；相當于如下反應方案中n＝1)為原料制備通式I的某些化合物(例如通式I-B或通式I-C的化合物)?？梢允褂帽交〈谋揭宜峄虮交〈?-苯基丙酸合成通式I-B和通式I-C的其它化合物。
按照Hin，B.等在《有機化學雜志》(J.Org.Chem.)677365-7368(2002)中所示的操作步驟將酸轉化成(2-芐基)丙烯酸甲酯或(2-苯乙基)丙烯酸甲酯(參見由6b制備8b的操作步驟，在7367-7368頁上的苯乙酸)。簡單的說，將在二氯甲烷中的二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)加入到苯乙酸或3-苯基丙酸、梅鐘酸(Meldrum’s acid)(2，2-二甲基-1，3-二烷-4，6-二酮)和二甲基氨基吡啶的溶液中并且在0℃下反應過夜。過濾該溶液，洗滌并干燥，酸化，且然后加入NaBH4并且使反應在0℃下過夜進行。洗滌該溶液，干燥并濃縮，并且通過重結晶或硅膠層析純化產物，從而得到5-取代的梅鐘酸中間產物。然后在65℃下將梅鐘酸中間產物與二甲基甲叉碘化銨(dimethylmethyleneimmonium iodide)在無水甲醇中一起攪拌過夜。濃縮該反應混合物，溶于二乙醚，洗滌，干燥并濃縮至得到(2-芐基)丙烯酸甲酯或(2-苯乙基)丙烯酸甲酯。
然后使上述產物(2-芐基)丙烯酸甲酯(n＝0)或(2-苯乙基)丙烯酸甲酯(n＝1)化合物進行DIBAL還原，使得所述酯類還原成醇類(2-苯乙基-2-丙烯-1-醇(n＝0)或2-(3-苯基丙基)-2-丙烯-1-醇(n＝1)) 然后使用N-(Boc-氨基)苯鄰二甲酰亞胺(N′-Boc-N，N-鄰苯二甲酰肼；購自Fluka，Switzerland)使所述醇類進行Mitsunobu反應(參見Brosse等，《四面體通訊》(Tetrahedron Lett.)41，205(2000)；Brosse等，《有機化學雜志》(J.Org.Chem.)66，2869(2001)；Brosse等，《有機化學雜志》(Journalof Organic Chemistry)，65(14)，4370-4374(2000)；另外參見下文的實施例10；還參見Hughes，D.L.《有機反應》(Org.Reac.)42335-656(1992)和Mitsunobu，O.等，《美國化學協(xié)會雜志》(J.Am.Chem.Soc.)94679(1972))，得到如下產物 隨后除去保護基而得到 (2-苯乙基烯丙基)肼(n＝0)[2-(3-苯基丙基)烯丙基]肼(n＝1)。
便利的是通過幾種方法制備通式II的化合物。一種這類方法使用1，1-二取代的環(huán)氧乙烷作為原料，它與通式HON(R14)PG的化合物反應，其中PG為保護基且R10如通式II中所示(參見下文的實施例11和12)。
然后使羥基氧進行進一步衍生并且在合成結束時除去保護基。
便利的是通過多種方法制備通式III的化合物。一種這類方法(參見下文的實施例13)使用芐基氰(苯基乙腈)原料。苯環(huán)可以任選地被取代?？梢允褂闷渌鶊F，諸如烷基、環(huán)烷基、芳基(取代的或未被取代的)或雜芳基(取代的或未被取代的)，例如2-吡啶基乙腈。用強位阻堿，諸如雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鉀處理芐基氰，隨后添加在1和2位上被良好離去基取代的乙基化合物，諸如1，2-二溴乙烷。該步驟產生1-苯基，1-氰基環(huán)丙烷化合物。
然后可以通過本領域中公知的方法還原氰基(諸如通過添加氫化鋁鋰)而得到相應的胺化合物。
可以使由此產生的氨基與多種試劑，例如烷基溴、醛類或酮類反應，隨后還原酰基化合物，隨后還原等，從而將R22基團引入氮上。
用于合成用于制備通式III-B和通式III-C化合物的通式III化合物的另一種途徑特別描述在如下方案中(其中Ar表示芳基，諸如C6-C10取代或未被取代的芳基)。使環(huán)丙烷腈(環(huán)丙基氰；Aldrich)與堿(諸如二異丙基酰胺鋰，LDA)反應，隨后與取代的烷基溴反應；然后將腈基還原成氨基 例如使(2-溴乙基)苯與堿反應，隨后與環(huán)丙烷腈反應，從而得到中間產物(1-苯乙基)環(huán)丙烷腈，將其還原成(1-苯乙基環(huán)丙基)甲胺；使芐基溴(α-溴甲苯)與堿反應，隨后與環(huán)丙烷腈反應，從而得到中間產物1-芐基環(huán)丙烷腈，將其還原成(1-芐基環(huán)丙基)甲胺。
使用方法可以以多種方式使用本文所述的化合物。一種這類用途為治療炎癥、炎性疾病、炎癥反應和某些其它疾病，如下文″疾病的治療″中更具體地描述。其它用途包括在體內還是在體外抑制SSAO活性和/或VAP-1結合活性或VAP-1胺氧化酶活性?；衔矬w外應用的實例為試驗，諸如常規(guī)試驗或高效篩選試驗中的用途。
疾病的治療本文所述的化合物用于治療炎癥和炎性疾病并且用于治療免疫和自身免疫疾病。這些化合物還用于治療由炎癥或免疫疾病導致或特征在于炎癥或免疫疾病的多種疾病中的一種或多種。因此，這些化合物可以用于治療由炎癥導致的疾病并且還可以用于治療引起炎癥的疾病。這些化合物用于治療哺乳動物，優(yōu)選人。將用本文所述的化合物″治療″疾病定義為將本文所述化合物中的一種或多種與或不與其它治療劑一起施用，以便預防、減輕或消除疾病或疾病的一種或多種癥狀，或延緩疾病或疾病的一種或多種癥狀的發(fā)展，或減輕疾病或疾病的一種或多種癥狀的嚴重程度。將用本文所述的化合物的″治療用途″定義為使用本文所述化合物中的一種或多種治療如上定義的疾病?；衔锏摹逯委熡行Я俊鍨樵摶衔锏挠昧?，在對受試者施用時，該用量足以預防、減輕或消除疾病或疾病的一種或多種癥狀，或延緩疾病或疾病的一種或多種癥狀的發(fā)展，或減輕疾病或疾病的一種或多種癥狀的嚴重程度。可以將″治療有效量″分一次或多次施用給予。
可以用本發(fā)明化合物和方法治療的受試者包括脊椎動物，優(yōu)選哺乳動物，更優(yōu)選人。
可以用本發(fā)明化合物和方法治療的疾病包括炎癥、炎癥反應、炎性疾病和免疫疾病。應注意炎性疾病可以由免疫疾病導致并且免疫疾病通常伴有炎癥，且由此可以用本發(fā)明的化合物和方法同時治療炎癥和免疫疾病?？梢杂帽景l(fā)明化合物和方法治療的疾病包括，但不限于多發(fā)性硬化(包括慢性多發(fā)性硬化)；滑膜炎；全身炎性膿毒癥；炎性腸??；克羅恩??；潰瘍性結腸炎；阿爾茨海默氏??；動脈粥樣硬化；類風濕性關節(jié)炎；青少年類風濕性關節(jié)炎；肺部炎性病癥；哮喘；皮膚炎性病癥和疾??；接觸性皮炎；肝炎和自身免疫病；自身免疫性肝炎；原發(fā)性膽汁性肝硬變；硬化性膽管炎；自身免疫性膽管炎；酒精性肝病；I型糖尿病和/或其并發(fā)癥；II型糖尿病和/或其并發(fā)癥；動脈粥樣硬化；缺血性疾病，諸如中風和/或其并發(fā)癥；和心肌梗死。在另一個實施方案中，通過本發(fā)明治療的炎性疾病或免疫疾病為多發(fā)性硬化。在另一個實施方案中，通過本發(fā)明治療的炎性疾病或免疫疾病為慢性多發(fā)性硬化。在另一個實施方案中，用本發(fā)明治療的炎性疾病或免疫病癥為因中風導致的炎癥并發(fā)癥。
施用方式可以通過本領域中公知的任意途徑將用于本發(fā)明的化合物對哺乳動物，優(yōu)選對人施用，包括，但不限于本文公開的那些途徑。施用方法包括，但不限于靜脈內、口服、動脈內、肌內、局部、通過吸入(例如作為霧或噴霧劑)、通過鼻粘膜、皮下、經皮、腹膜內、胃腸和直接針對具體或受侵襲的器官。口服施用是優(yōu)選的施用途徑?？梢砸云瑒?、丸劑、粉末混合物、膠囊劑、粒劑、注射劑、霜劑、溶液劑、栓劑、乳劑、分散體、食品預混合物的形式和其它合適的形式施用為本文用途所述的化合物。還可以以脂質體制劑的形式施用所述化合物。還可以將所述化合物作為前體藥物施用，其中前體藥物在所治療的受試者體內轉化成治療有效的形式。其它施用方法是本領域中公知的。
可以在約0.1μg/kg-約300mg/kg劑量范圍內或約1.0μg/kg-約40mg/kg體重劑量范圍內或約1.0μg/kg-約20mg/kg體重劑量范圍內，優(yōu)選約1.0μg/kg-約10mg/kg體重劑量范圍內的有效量施用本發(fā)明的化合物?？梢詫⒈景l(fā)明的化合物以單次日劑量施用，或可以將總日劑量分成每天2、3或4次分劑量施用。
便利的是將含有本文所述化合物的藥物劑型與無毒性藥物有機載體或無毒性藥物無機載體混合。典型的藥學上可接受的載體包括例如甘露糖醇、脲、葡聚糖、乳糖、馬鈴薯和玉米淀粉、硬脂酸鎂、滑石、植物油、聚亞烷基二醇類、乙基纖維素、聚(乙烯基吡咯烷酮)、碳酸鈣、油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、苯甲酸芐酯、碳酸鈉、明膠、碳酸鉀、硅酸和其它常用的可接受的載體。藥物劑型還可以含有無毒性的輔助物質，諸如乳化劑、防腐劑或濕潤劑等。合適的載體為不會導致不能忍受的副作用，但允許化合物在體內保持其藥理活性的載體。用于腸胃外和非腸胃外藥物遞送的制劑是本領域中公知的并且描述在《Remington制藥科學與實踐》(RemingtonThe Science和Practice of Pharmacy)20th Edition，Lippincott，Williams & Wilkins(2000)中?？梢允褂帽绢I域眾所周知的常用壓片機和膠囊填充機配制固體劑型，諸如片劑、膠囊劑和粉劑。固體劑型，包括用于口服施用的單位劑型呈遞形式的片劑和膠囊可以含有任意數(shù)目的本領域中公知的其它非活性組分，包括常用添加劑，如賦形劑；干燥劑；著色劑；粘合劑，例如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、西黃蓍膠或聚乙烯吡咯烷酮；填充劑，例如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸鈣、山梨醇或甘油；壓片潤滑劑，例如硬脂酸鎂?；?、聚乙二醇或二氧化硅；崩解劑，例如馬鈴薯淀粉；或可接受的潤滑劑，諸如十二烷基硫酸鈉。可以按照標準制藥實踐眾所周知的方法給片劑包衣。使用公知的液體載體，包括水性和非水性載體配制用于攝取的液體形式，所述載體為諸如無菌水、無菌鹽水、混懸液、水包油和/或油包水型乳劑等。液體制劑也可以含有任意數(shù)目的其它非活性組分，包括著色劑、芳香劑、調味劑、粘度調節(jié)劑、防腐劑、穩(wěn)定劑等。為了進行腸胃外施用，可以將用于本發(fā)明的化合物作為該化合物在生理上可接受的稀釋劑或無菌液體載體，諸如水、鹽水或油中的含有或不含其它表面活性劑或佐劑的溶液劑或混懸劑的可注射劑量施用。載體油的解釋性實例包括動物油和植物油(例如花生油、大豆油)、石油來源的油(例如礦物油)和合成的油。一般來說，就可注射的單位劑量而言，無菌液體，諸如水、鹽水、葡萄糖水溶液和相關糖溶液和乙醇和二元醇溶液，諸如丙二醇或聚乙二醇為優(yōu)選的液體載體。
優(yōu)選配制所選藥物單位劑量并將其施用以便提供藥物在血液、組織、器官或其它體內靶向區(qū)域中的確定的終濃度?？梢愿鶕?jù)經驗確定本發(fā)明化合物的最佳有效濃度且其取決于疾病的類型和嚴重程度、施用途徑、疾病的發(fā)展和健康、患者體重和身體面積。這類測定屬于本領域技術人員的范圍內?？梢詫⒂糜诒景l(fā)明的化合物作為單一活性組分施用，或可以將它們與另一種活性組分聯(lián)合施用。
藥盒本發(fā)明還提供了含有用于治療疾病的材料的制品和藥盒，所述的疾病為諸如炎性疾病；自身免疫病；多發(fā)性硬化(包括慢性多發(fā)性硬化)；滑膜炎；全身炎性膿毒癥；炎性腸??；克羅恩??；潰瘍性結腸炎；阿爾茨海默氏??；動脈粥樣硬化；類風濕性關節(jié)炎；青少年類風濕性關節(jié)炎；肺部炎性病癥；哮喘；皮膚炎性病癥和疾??；接觸性皮炎；肝炎和自身免疫??；自身免疫性肝炎；原發(fā)性膽汁性肝硬變；硬化性膽管炎；自身免疫性膽管炎；酒精性肝病；I型糖尿病和/或其并發(fā)癥；II型糖尿病和/或其并發(fā)癥；動脈粥樣硬化；缺血性疾病，諸如中風和/或其并發(fā)癥；和心肌梗死；或所述的制品或藥盒用于抑制SSAO酶活性(無論是該酶活性是因可溶性SSAO酶或膜結合的VAP-1蛋白質還是因它們兩者所致)和/或抑制與VAP-1蛋白質的結合。所述的制品包括帶有標簽的容器。合適的容器包括例如瓶、小瓶和試管。容器可以由多種材料制成，諸如玻璃或塑料。容器可以容納含有活性劑的組合物，所述的活性劑可有效治療疾病或用于抑制SSAO或VAP-1酶活性或與VAP-1蛋白質的結合。組合物中的活性劑為通式I、I-P、I-A、I-AP、I-B、I-C、II、III、III-A、III-B，和/或III-C化合物中的一種或多種。容器上的標簽表示組合物用于治療疾病，諸如炎性或自身免疫病或用于抑制SSAO或VAP-1酶活性或與VAP-1蛋白質的結合，并且還可以表示體內或體外使用，諸如如上所述的那些用途的說明書。
本發(fā)明還提供了藥盒，它包含通式I、I-P、I-A、I-AP、I-B、I-C、II、III、III-A、III-B，和/或III-C化合物中的任意一種或多種。在某些實施方案中，本發(fā)明的藥盒包含上述容器。在其它實施方案中，本發(fā)明的藥盒包含上述容器和包含緩沖劑的第二種容器。它可以進一步包括依據(jù)商業(yè)和使用者觀點所希望的物質，包括其它緩沖劑、稀釋劑、填充劑、注射針頭、注射器和帶有實施本文所述的任意方法(諸如用于治療自身免疫或炎性疾病的方法和用于抑制SSAO或VAP-1酶活性或與VAP-1蛋白質的結合的方法)的技術說明的包裝說明書。
在其它方面中，所述的藥盒可以用于本文所述的任意方法，包括，例如用于治療患有自身免疫或炎性疾病的個體，諸如多發(fā)性硬化或缺血性疾病(諸如中風)及其后遺癥。
將由鑒定的引證內容披露的所有公開文獻、專利、專利申請和公布的專利申請的全部內容引入本文作為參考。
通過下列非限制性實施例進一步理解本發(fā)明。術語″實施例X的化合物″在本文中使用時指的是實施例標題中的化合物；例如實施例8的化合物指的是N-[2-(4′-氟苯基)-烯丙基]-肼鹽酸鹽，而實施例10的化合物指的是(E)-1-氟-2-苯基-3-肼基丙烯鹽酸鹽。應注意，盡管一般將化合物描述為鹽，但是本說明書特別包括化合物的非鹽形式以及該化合物的任意其它鹽；例如N-[2-(4′-氟苯基)-烯丙基]-肼鹽酸鹽作為N-[2-(4′-氟苯基)-烯丙基]-肼的非鹽化合物披露。
實施例實施例1O-(2-苯基-烯丙基)-羥基胺鹽酸鹽將α-甲基苯乙烯(17.73g，150mmol)和N-溴琥珀酰亞胺(17.80g，100mmol)的混合物在安裝了回流冷凝器和磁性攪拌器的燒瓶內溶于CCl4(20ml)。將該體系加熱至混合物回流。使反應緩和以維持緩慢回流3小時，然后冷卻至室溫。通過過濾分離沉淀的琥珀酰亞胺。在真空中濃縮濾液。通過柱色譜法純化殘余物(硅膠，100％己烷)。得到產物α-溴甲基苯乙烯，其為油狀物(13.0g，66％)。
將HONHBoc(5.99g，45.0mmol)和NaOH(1.8g，45.0mmol)在MeOH(20ml)中的溶液在室溫下攪拌1小時。向該混合物中滴加α-溴甲基苯乙烯(5.91g，30.0mmol)在MeOH(5ml)中的溶液。將所得反應混合物在N2環(huán)境中保持緩慢回流過夜。在真空中濃縮該混合物。用H2O稀釋殘余物且然后用EtOAc(3×20ml)萃取。干燥合并的有機層(MgSO4)并過濾。在真空中濃縮濾液。通過柱色譜法純化殘余物(硅膠，10％ EtOAc/己烷)。得到N-叔丁氧羰基-O-(2-苯基烯丙基)羥基胺(4.0g)，其為白色固體。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ7.25-7.58(m，5H)，7.65(s，1H)，5.42(s，1H)，4.79(s，2H)，1.52(s，9H)。
向N-叔丁氧羰基-O-(2-苯基烯丙基)羥基胺(2.0g，8.0mmol)在乙醚(5ml)中的溶液中加入1M HCl在乙醚中的溶液(20ml，20mmol)。將所得混合物在室溫下N2中攪拌3小時。通過過濾收集沉淀，用乙醚(3×20ml)洗滌且然后在真空中干燥。得到O-(2-苯基-烯丙基)-羥基胺鹽酸鹽(0.80g，67％)。mp 101-102℃。1H NMR(D2O，300MHz)δ7.25-7.52(m，5H)，5.75(s，1H)，5.45(s，1H)，4.89(s，2H)。
實施例22-(苯基-烯丙基)-肼鹽酸鹽“實施例2的化合物”指的是(2-苯基-2-丙烯基)肼(CAS注冊號65814-30-4)，也稱作(2-苯基烯丙基)肼，它是本實施例的產物(參見本實施例中最后的結構)。將NH2NHBoc(3.96g，30mmol)和Et3N(3.04g，30mmol)在MeOH(15ml)中的混合物在室溫下攪拌20分鐘。向該混合物中加入α-溴甲基苯乙烯(2.96g，15mmol)。將所得混合物緩慢回流并通過TLC監(jiān)測。在回流約3小時后，TLC顯示反應完成。在真空中濃縮該反應混合物。通過柱色譜法純化殘余物(硅膠，10％ EtOAc/己烷)而得到3-(N′-叔丁氧羰基肼基)-2-苯基丙烯(1.34g，39％)，其為白色固體。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.26-7.55(m，5H)，5.50(s，1H)，5.30(s，1H)，3.90(s，2H)，1.52(s，9H)。
向3-(N′-叔丁氧羰基肼基)-2-苯基丙烯(1.0g，4mmol)在乙醚(5ml)中的溶液中加入1M HCl在乙醚中的溶液(20ml，20mmol)。將該溶液在室溫下N2中攪拌5小時。TLC顯示反應未完成。因此，在真空中濃縮該混合物。將殘余物溶于無水MeOH(3ml)。向該溶液中加入1M HCl在乙醚中的溶液(20ml，20mmol)。將所得混合物在室溫下N2中攪拌3小時。TLC顯示反應完成。通過過濾收集形成的固體，用乙醚洗滌且然后在真空中干燥。得到白色結晶固體(0.36g，48％)。mp153-154.5℃。1H NMR(D2O，300MHz)δ7.25-7.42(m，5)，5.60(s，1H)，5.40(s，1H)，4.05(s，2H)。將該化合物命名為實施例2的化合物(2-苯基-2-丙烯基)肼(也稱作(2-苯基烯丙基)肼)，結構如下所示。
實施例3N-[2-(4′-氯苯基)-烯丙基]-肼鹽酸鹽將肼基甲酸叔丁酯(6.61g，50mmole)和Et3N(5.06g，50mmole)在MeOH(40ml)中的混合物在室溫下攪拌20分鐘。向該攪拌的混合物中加入4-氯-α-溴甲基苯乙烯(按照Yamanaka，M.等在《四面體通訊》(TetrahedronLett.)2002，43，2403-2406中所述的步驟制備)(6.95g，30mmol)。將所得混合物加熱至回流并通過TLC監(jiān)測。TLC顯示在回流3小時后反應完成。在真空中濃縮該混合物。通過柱色譜法純化殘余物(硅膠，5％ EtOAc/己烷)。得到3-(N′-叔丁氧羰基肼基)-2-(4′-氯苯基)丙烯，其為白色固體(2.70g，20％)。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.42(d，J＝8.4Hz，2H)，7.29(d，J＝8.4Hz，2H)，5.45(s，1H)，5.28(s，1H)，3.85(s，2H)，1.45(s，9H)。
向3-(N′-叔丁氧羰基肼基)-2-(4′-氯苯基)丙烯(0.78g，2.76mmol)在MeOH(4ml)中的溶液中加入HCl在乙醚中的溶液(2M，5.0ml，10mmol)。將該溶液在室溫下攪拌過夜。在真空中濃縮該反應混合物。用乙醚洗滌所得固體，得到2-(4′-氯苯基)-烯丙基肼鹽酸鹽，其為白色固體(0.61g，100％)。Mp124-126℃。1H NMR(D2O，300MHz)δ7.40(d，J＝9Hz，2H)，7.35(d，J＝9Hz，2H)，5.65(s，1H)，5.43(s，1H)，4.06(s，2H)。
實施例4N-[2-(4′-氯-苯基)-烯丙基]-N-甲基-肼鹽酸鹽將3-(N′-叔丁氧羰基肼基)-2-(4′-氯苯基)丙烯(參見實施例3)(1.00g，3.54mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.91g，7.08mmol)在DMF(10ml)中的混合物在室溫下和N2中攪拌20分鐘，此后滴加MeI(1.00g，7.08mmol)。將所得混合物在室溫下和N2中攪拌過夜。然后在真空中濃縮該體系。通過柱色譜法純化殘余物(硅膠，5％ EtOAc/己烷)。得到3-(N-甲基-N′-叔丁氧羰基肼基)-2-(4′-氯苯基)丙烯，其為白色固體(0.82g，78％)。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.48(d，J＝9Hz，2H)，7.26(d，J＝9Hz，2H)，5.45(s，1H)，5.23(s，1H)，3.73(br s，2H)，2.60(s，3H)，1.40(s，9H)。
向3-(N-甲基-N′-叔丁氧羰基肼基)-2-(4′-氯苯基)丙烯(0.82g，2.76mmol)在MeOH(5ml)中的混合物中加入HCl在乙醚中的溶液(2M，5ml，10mmol)。將該反應混合物在室溫下和N2中攪拌過夜。然后在真空中濃縮該體系。用乙醚洗滌殘余物。通過過濾收集形成的固體。得到N-[2-(4′-氯苯基)-烯丙基]-N-甲基-肼鹽酸鹽，其為白色固體(0.6g，94％)。Mp132-134℃。1H NMR(D2O，300MHz)δ7.27-7.52(m，4H)，5.70(s，1H)，5.50(s，1H)，4.09(s，2H)，2.76(s，3H)。
實施例5N-[2-(4′-氯苯基)-烯丙基]-N-乙基-肼鹽酸鹽將3-(N′-叔丁氧羰基肼基)-2-(4′-氯苯基)丙烯(參見實施例3)(0.42g，1.49mmole)和N，N-二異丙基乙胺(0.38g，2.97mmol)在DMF(10ml)中的混合物在室溫下和N2中攪拌20分鐘。向該攪拌的混合物中加入EtI(0.46g，2.97mmol)。將所得混合物在室溫下和N2中攪拌4天。然后在真空中濃縮該體系。通過柱色譜法純化殘余物(硅膠，5％ EtOAc/己烷)。得到3-(N-乙基-N′-叔丁氧羰基肼基)-2-(4′-氯苯基)丙烯，其為油狀物(0.38g，83％)。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ7.26-7.52(m，4H)，5.45(s，1H)，5.25(s，1H)，3.77(br s，2H)，2.80(br s，2H)，1.38(s，9H)，1.04(t，J＝6.3Hz，3H)。

向3-(N-乙基-N′-叔丁氧羰基肼基)-2-(4′-氯苯基)丙烯(0.38，1.221)在MeOH(3ml)中的混合物中加入HCl在乙醚中的溶液(2M，4ml，8mmol)。將該反應混合物在室溫下和N2中攪拌過夜。然后在真空中濃縮該體系。用乙醚洗滌殘余物。通過過濾收集形成的固體。得到N-[2-(4′-氯苯基)-烯丙基]-N-乙基-肼鹽酸鹽，其為白色固體(0.27，90％)。Mp150-151℃。1HNMR(D2O，300MHz)δ7.25-7.46(m，4H)，5.68(s，1H)，5.50(s，1H)，4.11(s，2H)，3.07(q，J＝7.2Hz，2H)，1.12(t，J＝7.2Hz，3H)。
實施例6N-[2-(4′-氯苯基)-烯丙基]-N，N′-二甲基肼鹽酸鹽向3-(N′-叔丁氧羰基肼基)-2-(4′-氯苯基)丙烯(參見實施例3)(0.42g，1.49mmol)在DMF(10ml)中的溶液中加入氫化鈉(0.11g，4.47mmol)。將該混合物在室溫下和N2中攪拌20分鐘。然后一次加入MeI(0.63g，4.47mmol)。將所得混合物在室溫下和N2中攪拌過夜。在真空中濃縮該體系。通過柱色譜法純化殘余物(硅膠，5％ EtOAc/己烷)。得到3-(N，N′-二甲基-N′-叔丁氧羰基肼基)-2-(4′-氯苯基)丙烯，其為無色油狀物(0.29g，63％)1HNMR(CDCl3，300MHz)δ7.46(d，J＝8.7，2H)，7.26(d，J＝8.7Hz，2H)，5.43(s，1H)，5.22(s，1H)，3.75(br s，2H)，2.73(s，3H)，2.59(br s，3H)，1.43(s，9H)。
向3-(N，N′-二甲基-N′-叔丁氧羰基肼基)-2-(4′-氯苯基)丙烯(0.29g，0.93mmol)在MeOH(3ml)中的混合物中加入HCl在乙醚中的溶液(2M，4ml，8mmol)。將所得混合物在室溫下和N2中攪拌過夜。然后在真空中濃縮該體系。用乙醚洗滌殘余物。通過過濾收集形成的固體。得到N-[2-(4′-氯苯基)-烯丙基]-N，N′-二甲基肼鹽酸鹽，其為白色固體(0.17g，74％)。Mp108-110℃。1H NMR(D2O，300MHz)δ7.27-7.56(m，4H)，5.60(s，1H)，5.42(s，1H)，3.93(s，2H)，2.70(s，3H)，2.58(s，3H)。
實施例7N-[2-(4′-氟苯基)-烯丙基]-N′-甲基肼鹽酸鹽向4-氟-α-甲基苯乙烯(13.62g，100mmol)和NBS(21.36g，120mmol)在CH2Cl2/THF(4∶1，50ml)中的混合物中加入Yb(OTf)3(3.1g，5mmol)和5mol％ TMSCl(0.54g)。將所得混合物在室溫下和N2中攪拌2小時。TLC顯示原料消失。在真空中濃縮該反應混合物。通過柱色譜法純化殘余物(硅膠，100％己烷)得到4-氟-α-溴甲基苯乙烯，其為油狀物(13.54g，63％)。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ，7.47(br s，2H)，7.37(br s，2H)，5.50(s，1H)，5.47(s，1H)，4.36(s，2H)。
向二叔丁基肼基二甲酸鹽(9.29g，40mmol)和NaH(0.96g，40mmol)在DMF(40ml)中的混合物中加入4-氟-α-溴甲基苯乙烯(6.45g，30mmol)。在室溫下和N2中攪拌所得反應混合物并通過TLC監(jiān)測。當TLC顯示反應完成時，在真空中濃縮該體系。通過柱色譜法純化殘余物(硅膠，0-5％ EtOAc/己烷)。得到3-(N，N′-二-叔丁氧羰基肼基)-2-(4′-氟苯基)丙烯，其為油狀物(8.33g，83％)。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.42(br s，2H)，7.01(br s，2H)，5.42(br s，1H)，5.17(s，1H)，4.50(s，2H)，1.43(s，18H)。
將3-(N，N′-二-叔丁氧羰基肼基)-2-(4′-氟苯基)丙烯(1.0g，2.73mmol)和NaH(0.11g，4.55mmol)在DMF(30ml)中的混合物在室溫下和N2中攪拌20分鐘。向該混合物中滴加MeI(0.65g，4.55mmol)。將所得混合物在室溫下和N2中攪拌過夜。在真空中濃縮該體系。通過柱色譜法純化殘余物(硅膠，0-5％ EtOAc/己烷)，得到油狀物(1.12g)。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.48(br s，2H)，7.03(br s，2H)，5.49(s，1H)，5.20(s，1H)，4.10(br s，2H)，2.75(s，3H)，1.45(s，18H)。
向3-(N，N′-二-叔丁氧羰基-N′-甲基肼基)-2-(4′-氟苯基)丙烯(1.12g，2.94mmol)在MeOH(4.0ml)中的混合物中加入HCl在乙醚中的溶液(2M，6.0ml，12mmol)。將所得混合物在室溫下和N2中攪拌過夜。在真空中除去溶劑和過量的HCl。用乙醚將殘余物洗滌幾次，然后干燥得到N-[2-(4′-氟苯基)-烯丙基]-N′-甲基肼鹽酸鹽，其為白色固體(0.56g，88％)。Mp128-129℃。1H NMR(D2O，300MHz)δ7.41(br s，2H)，7.03(br s，2H)，5.50(s，1H)，5.29(s，1H)，3.95(s，2H)，2.67(s，3H)。
實施例8N-[2-(4′-氟苯基)-烯丙基]-肼鹽酸鹽將肼基甲酸叔丁酯(6.61g，50mmole)和Et3N(5.06g，50mmole)在MeOH(40ml)中的混合物在室溫下攪拌20分鐘。向該攪拌的混合物中加入4-氟-α-溴甲基苯乙烯(參見實施例7)(6.45g，30mmol)。將所得混合物加熱至回流并通過TLC監(jiān)測。TLC顯示在回流3小時后反應完成。在真空中濃縮該混合物。通過柱色譜法純化殘余物(硅膠，5-10％ EtOAc/己烷)。得到3-(N′-叔丁氧羰基肼基)-2-(4′-氟苯基)丙烯，其為白色固體(1.9g，24％)。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ7.42-7.52(m，2H)，7.02(t，J＝8.4Hz，2H)，5.43(s，1H)，5.27(s，1H)，3.87(s，2H)，1.47(s，9H)。
將3-(N′-叔丁氧羰基肼基)-2-(4′-氟苯基)丙烯(0.8g，3.0mmol)和HCl在乙醚中的溶液(2.0M，5.0ml，10mmol)在MeOH(4.0ml)中的混合物在室溫下和N2中攪拌過夜。在真空中濃縮該體系。用乙醚將白色固體殘余物洗滌幾次，通過過濾收集，然后干燥。得到N-[2-(4′-氟苯基)-烯丙基]-肼鹽酸鹽，其為白色固體(0.55g，83％)。Mp149-150℃。1H NMR(D2O，300MHz)δ7.35-7.46(m，2H)，7.05(t，J＝8.4Hz，2H)，5.58(s，1H)，5.38(s，1H)，4.04(s，2H)。
實施例9(2-甲基-烯丙基)肼鹽酸鹽將肼基甲酸叔丁酯(1.72g，13mmol)和Et3N(1.81ml，13mmol)在MeOH(25ml)中的混合物在室溫下攪拌20分鐘。向該攪拌的混合物中加入3-溴-2-甲基丙烯(1.26ml，12.5mmol)。將所得混合物加熱至回流并通過TLC監(jiān)測。TLC顯示在回流3小時后反應完成。在真空中濃縮該混合物。通過柱色譜法純化殘余物(硅膠，20％ EtOAc/己烷)得到3-(N′-叔丁氧羰基肼基)-2-甲基-丙烯，其為油狀物(0.7g，30％)。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ4.92(br s，2H)，3.43(s，2H)，1.78(s，3H)，1.46(s，9H)。
向3-(N′-叔丁氧羰基肼基)-2-甲基-丙烯(0.7g，3.76mmol)在MeOH(5.0ml)中的溶液中加入HCl在1，4-二烷中的溶液(4M，3.8ml，15.2mmol)。將所得混合物在室溫下和N2中攪拌過夜。然后在真空中濃縮該體系而得到固體。用乙醚和EtOAc洗滌該固體，然后干燥。得到白色固體(0.4g，87％)。1H NMR(D2O，300MHz)δ5.05(s，1H)，4.95(s，1H)，3.53(s，2H)，1.65(s，3H)。
實施例10(E)-1-氟-2-苯基-3-肼基丙烯鹽酸鹽向冷卻的(E)-2-苯基-3-氟烯丙基醇(通過使用McDonald；I.A.等在《藥物化學雜志》(J.Med.Chem.)(1985)，28，186-193中所述的操作步驟合成)(1.1g，7.47mmol)、N-叔丁氧羰基氨基苯鄰二甲酰亞胺(按照Brosse；N.等在《有機化學雜志》(J.Org.Chem.)(2000)，65，4370-4374中所述的操作步驟制備)(1.95g，7.47mmol)和PPh3(2.94g，11.22mmol)在THF(120ml)中的溶液中一次加入DEAD(1.8ml，11.09mmol)。將所得混合物在室溫下和N2氣環(huán)境中攪拌過夜。然后將該體系在真空中濃縮。將殘余物在EtOAc中研磨并過濾。在真空中濃縮濾液。通過柱色譜法純化殘余物(硅膠，10％ EtOAc/己烷)而得到油狀物(1.3g，44％)。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.71-7.95(m，5H)，7.15-7.55(m，4H)，6.81(2d，J＝81.3Hz，1H)，4.64，4.55(2s，2H)，1.44，1.30(2s，9H)。
將N-[(E)-2-苯基-3-氟烯丙基]-N-叔丁氧羰基氨基-苯鄰二甲酰亞胺(1.3g，3.28mmol)、H2NNHMe(0.26ml，4.72mmol)在THF(50ml)中的混合物在室溫下和N2環(huán)境中攪拌24小時，然后在真空中濃縮。用EtOAc洗滌殘余物。形成白色固體。將其過濾并用EtOAc洗滌。濃縮濾液至得到半固體(0.90g)。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.21-7.53(m，5H)，6.78(d，J＝83.1Hz，1H)，4.26(s，2H)，1.40(s，9H)。將其不經進一步純化而直接用于下一步。
將1-[(E)-2-苯基-3-氟烯丙基]-1-叔丁氧羰基肼(0.98g，3.27mmol)和在1，4-二烷(4.0ml，16mmol)中的4M HCl在MeOH(5ml)中的混合物在室溫下和N2氣環(huán)境中攪拌過夜。在真空中濃縮該混合物。用乙醚將殘余物洗滌幾次。通過過濾收集形成的固體并干燥至得到(E)-1-氟-2-苯基-3-肼基丙烯鹽酸鹽，其為白色固體(0.35g，53％)。Mp139-141℃。1H NMR(D2O，300MHz)δ7.22-7.47(m，5H)，6.96(d，J＝81.0Hz，1H)，3.89(s，2H)。
實施例112-氨基氧基-1-苯基-乙醇鹽酸鹽將HONHBoc(5.59g，42mmol)和NaOH(1.7g，42mmol)在MeOH(15ml)中的混合物在室溫下攪拌1小時。然后向該攪拌的溶液中滴加氧化苯乙烯(2.52g，21mmol)在MeOH(3ml)中的溶液。將所得混合物加熱至保持緩慢回流并通過TLC監(jiān)測。在回流3小時后，TLC顯示反應完成。在真空中濃縮該反應混合物。用H2O稀釋殘余物，用EtOAc(3×20ml)萃取。干燥合并的有機層(MgSO4)且然后過濾。在真空中濃縮濾液。通過柱色譜法純化殘余物(硅膠，15％ EtOAc/己烷)，得到2-(N-叔丁氧羰基氨基氧基)-1-苯基乙醇(0.95g，18％)。mp 97-99℃。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.25-7.35(m，5H)，4.99(dd，J＝9.9，2.4Hz，1H)，3.95(dd，J＝11.7，9.0Hz，1H)，3.77(dd，J＝11.7，9.9Hz，1H)，1.52(s，9H)。
向2-(N-叔丁氧羰基氨基氧基)-1-苯基乙醇(100mg，0.395mmol)在乙醚(5ml)中的溶液中加入1M HCl在乙醚(2.0ml，2mmol)中的溶液。將該反應混合物在室溫下和N2環(huán)境中攪拌3小時。形成固體并沉淀。通過過濾收集該固體，用乙醚洗滌且然后在真空中干燥而得到2-氨基氧基-1-苯基-乙醇，其為白色結晶固體(40mg，53％)。Mp 131-132℃。1H NMR(D2O，300MHz)δ7.30(m，5H)，4.99(t，J＝5.7Hz，1H)，4.10(d，J＝5.4Hz，2H)。
實施例122-氨基氧基-1-(3′，4′-二甲氧基苯基)-乙醇鹽酸鹽向冷卻的NaH(0.25g，10.42mmol)在THF(20ml)中的溶液中滴加碘化三甲基锍(2.08g，10mmol)在DMSO(20ml)中的溶液。將所得混合物在0℃下和N2氣環(huán)境中攪拌10分鐘，此后加入3，4-二甲氧基苯甲醛(1.66g，10.00mmol)在THF(5ml)中的溶液。將所得反應混合物在0℃下和N2氣環(huán)境中攪拌30分鐘，然后將該體系逐步升溫至室溫并在室溫下攪拌1小時。將該反應混合物傾入冰水。用己烷(3×30ml)萃取該混合物。用H2O，鹽水洗滌合并的有機層，然后干燥(MgSO4)并過濾。在真空中濃縮濾液而得到2-(3′，4′-二甲氧基苯基)-環(huán)氧乙烷，其為油狀物(1.56g，87％)。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ2.75-2.83(m，1H)，3.08-3.17(m，1H)，3.76-3.85(m，1H)，3.87(br s，6H)，6.51(s，1H)，6.75-6.91(m，2H)。
將HONHBoc(2.31g，17.35mmol)和NaOH(0.69g，17.25mmol)在MeOH(20ml)中的混合物在室溫下攪拌1小時。然后向該攪拌的溶液中滴加2-(3，4-二甲氧基-苯基)-環(huán)氧乙烷(1.56g，8.67mmol)在MeOH(3ml)中的溶液。將所得混合物緩慢回流并通過TLC監(jiān)測。在回流3小時后，TLC顯示反應完成。在真空中濃縮該反應混合物。用H2O(50ml)稀釋殘余物，用EtOAc(3×20ml)萃取。干燥合并的有機層(MgSO4)且然后過濾。在真空中濃縮濾液。通過柱色譜法純化殘余物(硅膠，20-40％ EtOAc/己烷)，得到2-(N-叔丁氧羰基氨基氧基)-1-(3′，4′-二甲氧基苯基)乙醇(0.4g，15％)。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ7.51(s，1H)，7.01(s，1H)，6.81-6.95(m，2H)，4.99(d，J＝3.0Hz，1H)，3.97(s，3H)，3.75(s，3H)，3.70-3.95(m，2H)，1.52(s，9H)。
向2-(N-叔丁氧羰基氨基氧基)-1-(3′，4′-二甲氧基苯基)乙醇(80mg，0.26mmol)在CH2C12(2ml)中的溶液中加入在1，4-二烷中的4M HCl(1.5ml，6.0mmol)中的溶液。將該反應混合物在室溫下和N2氣環(huán)境中攪拌過夜。形成固體并沉淀。通過過濾收集該固體，用乙醚洗滌且然后在真空中干燥而得到2-氨基氧基-1-(3′，4′-二甲氧基苯基)-乙醇，其為白色結晶固體(50mg，55％)。mp 100-101℃。1H NMR(D2O，300MHz)δ6.93(s，1H)，6.85-6.91(m，2H)，4.87(t，J＝5.7Hz，1H)，4.05(d，J＝5.4Hz，2H)，3.70(s，3H)，3.68(s，3H)。
實施例132-苯基-2-環(huán)丙基乙胺向2-苯基乙腈(5.85g，50mmol)在THF(200ml)中的冷卻溶液中加入雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鉀(29.92g，150mmol)。將所得混合物在0℃下和N2氣環(huán)境中攪拌30分鐘。向所得混合物中滴加1，2-二溴乙烷(10.33g，55mmol)在THF(30ml)中的溶液。在0℃下和N2氣環(huán)境中攪拌該反應混合物并將其逐步升溫至室溫。然后將該體系在室溫下攪拌過夜。在真空中濃縮該反應體系。通過蒸餾獲得1-苯基-1-環(huán)丙烷腈(3.6g，50％)。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ7.27-7.38(m，5H)，1.69-1.76(m，2H)，1.37-1.44(m，2H)。
將1-苯基-1-環(huán)丙烷腈(1.0g，6.98mmol)加入到攪拌的氫化鋁鋰(0.27g，6.98mmol)在乙醚(25ml)中的混懸液中。將所得混懸液回流小時，然后通過在外部施加冰浴將其冷卻至0℃。通過謹慎加入H2O驟冷過量的氫化物。過濾所得混合物。用乙醚洗滌固體并過濾。干燥濾液(MgSO4)并過濾。在真空中濃縮濾液而得到2-環(huán)丙基-2-苯基乙胺。1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ7.28(m，4H)，7.17(m，1H)，2.70(s，2H)，1.45(br s，2H)，0.78(dd，J＝6.2，3.8H，2H)，0.67(dd，J＝6.2，3.8Hz，2H)。
實施例14SSAO活性的體外抑制使用主要如對單胺氧化酶和相關酶所述的偶聯(lián)比色法測定SSAO活性(Holt A.等(1997)《生物化學年鑒》(Anal.Biochem.)244384)。牛血漿胺氧化酶(PAO)購自Worthington Biochemical(Lakewood，NJ)并用作用于活性測定的SSAO來源。如下在96孔微量滴定板中進行SSAO試驗。如果需要，將預定量的在0.2M pH 7.6的磷酸鉀緩沖液中稀釋的抑制劑加入到各孔中。抑制劑的量在每次試驗中可變，但一般終濃度在10nM-10μM。對照不含抑制劑。為了研究可能的抑制劑的作用，將50μl的抑制劑溶液在37℃下與0.4mU PAO一起在總體積為130μl的0.2M pH 7.6的磷酸鉀緩沖液中預保溫30分鐘。然后通過添加20μl 10mM芐胺底物開始試驗并在37℃下保溫20分鐘。然后加入下列試劑至最終反應體積為200μl，50μl新制的含有750nM香草酸(Sigma#V-2250)、400nM 4-氨基安替比林(Sigma#A-4328)和12U/ml辣根過氧化物酶(Sigma#P-8250)的顯色溶液以便使得每小時有0.5OD A490的改變。它屬于本試驗的線性響應范圍內。將平板在37℃下保溫1小時，并且在490nm處使用微量培養(yǎng)板分光光度計(Power Wave 40，Bio-Tek Inst.)測定反映出SSAO活性的吸光度增加。將抑制表示為與對背景吸光度校準后的對照品相比的抑制百分比并且使用GraphPad Prism軟件計算IC50值。
還如所述測定SSAO活性(Lizcano JM.等(1998)《生物化學雜志》(Biochem J.)33169)。簡單的說，通過將新取出的組織切成小塊并將它們在PBS中充分洗滌制備大鼠勻漿物。然后按照1∶10(w/v)在10mM磷酸鉀緩沖液(pH 7.8)中勻漿組織并在4℃下以1000g離心10分鐘；將上清液保持冷凍至備用。使用20μM14C-芐胺作為底物以放射化學方法測定100μl肺勻漿中的SSAO活性。使反應在37℃下和300μl終體積的50mM磷酸鉀緩沖液(pH 7.2)中進行并使用100μl 2M檸檬酸使反應終止。將放射性標記的產物萃取入含有0.6％(w/v)2，5-二苯基唑(PPO)的甲苯/乙酸乙酯(1∶1，v/v)，此后進行液體閃爍計數(shù)。使用這種方法還在高達50％人血清存在下測試了實施例2和8化合物的抑制活性。在有血清存在下對兩種化合物的SSAO IC50值沒有改變。
實施例15SSAO/VAP-1的SSAO活性與MAO-A和MAO-B活性的抑制比較通過測定體外抑制MAO-A和MAO-B活性的能力測試不同SSAO抑制劑的特異性。重組人MAO-A和人MAO-B酶獲自BD Biosciences(MA，USA)。按照與SSAO類似的方式測定MAO活性，但不進行用抑制劑或底物的預保溫。如果需要，向每個孔中加入預定量的在0.2M pH 7.6的磷酸鉀緩沖液中稀釋的抑制劑。抑制劑的量在每次試驗中可變，但一般終濃度在50nM-1mM。對照不含抑制劑。然后將下列試劑加入到在0.2M pH 7.6磷酸鉀緩沖液中的200μl最終反應體積中，所述的0.2M pH 7.6磷酸鉀緩沖液含有0.04mg/ml MAO-A或0.07mg/ml MAO-B酶、15μl 10mM酪胺底物(用于MAO-A)或15μl 100mM芐胺底物(用于MAO-B)和50μl新制的顯色溶液(如上所述)。將平板在37℃下保溫60分鐘。使用微量培養(yǎng)板分光光度計(Power Wave 40，Bio-Tek Inst.)在490nm處測定反映出MAO活性的吸光度增加。將抑制表示為與對背景吸光度校準后的對照品相比的抑制百分比并且使用GraphPad Prism軟件計算IC50值。分別將0.5和10μM的氯吉靈和帕吉林(分別為MAO-A和-B抑制劑)加入到一些孔中作為用于MAO抑制的陽性對照。前面實施例的化合物抑制SSAO活性與MAO活性的能力比較如表1中所示。結果表明本發(fā)明中所述的化合物為SSAO活性的特異性抑制劑。由此預計本發(fā)明中所述的化合物在治療其中SSAO/VAP-1的SSAO活性起作用的疾病和病癥，即在SSAO/VAP-1介導的疾病和病情中具有治療應用。
表1實施例1-12的功效和特異性


實施例16急性毒性研究在小鼠中測定實施例8和10的化合物以及莫非吉蘭(實施例18中所述的烯丙胺化合物)的腹膜內(i.p.)和靜脈內(i.v.)LD50值。將6周齡C57B1/6雌性小鼠分成5只一組的組并施用溶于PBS中的化合物的單次i.p或i.v.注射(在100μl中10-100mg/kg i.v.；在200μl中30-500mg/kg i.p.)。對對照組施用相同體積的PBS i.p.或i.v.。每日注意外觀和外表行為并測定體重，此后施用化合物(第1天)并在第3、5和7天施用。7天后，對動物實施安樂死并對肝、脾和腎稱重。將急性毒性研究結果概括在表2中。
表2.莫非吉蘭和實施例8和10化合物的腹膜內和靜脈內LD50(mg/kg)*值

*數(shù)字表示第7天的LD50值。
莫非吉蘭的急性毒性作用包括震顫(40mg/kg i.v.；100mg/kg i.p.)和陣攣性驚厥和呼吸吃力(100mg/kg i.v.；200mg/kg i.p.)。接受100mg/kg實施例8和10的化合物的小鼠僅表現(xiàn)震顫，而對兩種化合物僅在大于約300mg/kg劑量下觀察到了驚厥和呼吸吃力(參見表2；對實施例10的化合物而言，大于約250mg/kg劑量，對于實施例8的化合物，大于約350mg/kg的劑量)。在藥物施用后24小時內發(fā)生所有動物死亡。尸體解剖檢驗未顯示出任何肉眼損害(gross lesion)。對任意化合物而言，體重以及絕對和體重標準化器官重量與對照組相比沒有顯著差異(方差分析后通過鄧奈特檢驗(Dunnett’s test)，p＞0.05)。因此，對測試的任意化合物而言，沒有死亡原因的指征。然而，正如誘發(fā)震顫、陣攣性驚厥和呼吸吃力所需實施例8和10化合物的高得多的水平所指示的，本發(fā)明的化合物的毒性顯著低于莫非吉蘭。
實施例17小鼠中膠原蛋白誘發(fā)的關節(jié)炎的抑制在小鼠中膠原蛋白誘發(fā)的關節(jié)炎(CIA)廣泛用作在人中的類風濕性關節(jié)炎(RA)的實驗模型。CIA由針對II型膠原蛋白的特定區(qū)的自身抗體和補體介導。在本研究中使用的鼠CIA模型稱作抗體-介導的CIA，并且可以通過i.v.注射不同抗-II型膠原蛋白單克隆抗體的組合誘發(fā)(Terato K.，等(1995)《自身免疫性》(Autoimmunity.)22137)。幾種化合物已經用于成功地阻斷這一模型中的炎癥，包括抗-α1β1和抗-α2β2整聯(lián)蛋白單克隆抗體(deFougerolles A.R.(2000)《臨床研究雜志》(J.Clin.Invest.)105721)。
在本實施例中，arthrogen-膠原蛋白-誘導的關節(jié)炎抗體試劑盒購自Chemicon International(Temecula，CA)并且使用制造商的方案誘發(fā)關節(jié)炎。在第0天給小鼠i.v.注射4種抗-II型膠原蛋白單克隆抗體的混合物(各0.5mg)，隨后在第2天i.p.注射25μg脂多糖(LPS)。在LPS注射后3-4天小鼠發(fā)生腕、踝和趾腫脹，在第7天時的發(fā)病率為90％。將各肢中關節(jié)炎的嚴重程度進行如下的12天評分0＝正常；1＝輕度發(fā)紅、踝或腕輕度腫脹；2＝中度發(fā)紅和踝或腕腫脹；3＝重度發(fā)紅和某些趾、踝和爪腫脹；4＝最大程度的肢體發(fā)炎。將動物分成各6只的3組載體、甲氨蝶呤(MTX)-治療和化合物-治療的組。給載體組中的動物i.p.注射磷酸緩沖鹽水(PBS)，每天兩次，持續(xù)12天(從第0天開始)。在第0天開始經i.p.施用MTX(3mg/kg)并且在實驗期間持續(xù)每隔一天(周一、周三、周五)施用。在第0天開始施用實施例2的化合物(20mg/kg/劑量，i.p.，每天兩次劑量)并且持續(xù)至第11天。結果如附圖1A、附圖1B和附圖1C中所示。每天兩次施用20mg/kg實施例2的化合物明顯降低了該模型中最終的關節(jié)炎評分和爪腫脹。
對兩組數(shù)據(jù)中的每一組(關節(jié)炎評分和爪腫脹)進行重復測定分析以便評價治療效果。就關節(jié)炎評分而言，存在顯著的總體治療效果(p＝0.0165)。實施例2的化合物與MTX之間在治療效果方面沒有顯著性差異(p＝0.3348)。然而，實施例2的化合物在與PBS載體相比時表現(xiàn)出顯著的治療效果(p＝0.0046)。對腫脹存在顯著的總體治療效果(p＝0.0294)。實施例2的化合物與MTX之間在治療效果方面沒有顯著性差異(p＝0.8772)。然而，實施例2的化合物在與PBS相比時表現(xiàn)出顯著的治療效果(p＝0.0060)。
隨訪研究包括觀察血清和受侵害組織中的細胞因子水平。而易于通過ELISA測定循環(huán)細胞因子，在爪、結腸和脊髓中測定的細胞因子水平并非呈直線的。使用相對RT-PCR方法。為了進行本實驗，使用來自Ambion(USA)的試劑盒，它使用18S核糖體RNA(rRNA)作為內部對照。除rRNA引物外，該試劑盒還提供了用于擴增所分析的不同細胞因子的特異性引物。使用18SrRNA作為標準品的優(yōu)點在于，與用于特異性基因的mRNA相反，它在整個寬范圍組織和治療條件中以靜態(tài)水平得到表達。而對所分析的各組織而言，必須使擴增步驟最優(yōu)化，使得目的基因和rRNA處于線性范圍。在本研究結束時，對動物實施安樂死并取出右后爪并且冷凍。按照制造商的說明，每50-100mg組織使用1ml Trizol試劑(Invitrogen，USA)分離總RNA。按照配備了Ambion TNF-α(小鼠)基因特異性相對(GeneSpecific Relative)RT-PCR試劑盒(目錄#5439)的方案將5微克總RNA用于第一鏈cDNA合成并且將2μl用作定性RT-PCR反應的模板。PCR循環(huán)條件如下在94℃下熱啟動2分鐘，隨后為94℃下變性45秒、50℃下退火45秒和72℃下延伸45秒的27個循環(huán)和在72℃下7分鐘的最終一次延伸。使來自每次PCR反應的10μl等分試樣在6％丙烯酰胺/TBE凝膠(Invitrogen，USA)中電泳并用溴化乙錠染色。附圖8A顯示了這些實驗之一的結果，其中使用rRNA和小鼠TNFα的引物擴增來自1只動物的趾、足墊和踝的RNA(該動物的爪具有不同水平的關節(jié)炎評分)。對不同帶進行的定量光密度分析(Gel Doc 2000凝膠記錄系統(tǒng)和Quantity One 4.3.1軟件，BioRad，USA)允許對樣品之間的相對TNFαrRNA比進行比較。附圖8B表示從來自附圖1中所示實驗的所有動物右后爪中分離總RNA并且其用于測定18S與TNFα水平之間的相對比例時獲得的結果。
使用GraphPad Prism軟件(San Diego，CA)，通過方差分析后的鄧奈特檢驗來分析數(shù)據(jù)。這些結果表明實施例2的化合物(用于附圖1中的實驗)能夠降低患有CIA的小鼠爪中TNFαmRNA水平。
實施例18ASSAO抑制劑-莫非吉蘭(烯丙胺化合物)對小鼠中實驗性自身免疫性腦脊髓炎的抑制SSAO/VAP-1在發(fā)炎組織/器官，包括腦和脊髓的內皮上得到表達。它的支持淋巴細胞跨內皮遷移的能力可能是SSAO/VAP-1在炎性疾病，諸如多發(fā)性硬化和阿爾茨海默氏病的重要系統(tǒng)功能。通過使用在C57BL/6小鼠中的實驗性自身免疫性腦脊髓炎模型(EAE)對使用SSAO抑制劑治療中樞神經系統(tǒng)(CNS)的炎性疾病進行分析。嚙齒動物中的EAE得到充分表征并且是人中多發(fā)性硬化的可再現(xiàn)的動物模型(Benson J.M.等(2000)《臨床研究雜志》(J.C1in.Invest.)1061031)。多發(fā)性硬化是慢性免疫-介導的CNS疾病，其特征在于脫髓鞘區(qū)域中的肥厚性小靜脈周圍炎性浸潤和軸突喪失。作為動物模型，可以通過用由佐劑存在下的致腦炎髓磷脂抗原進行免疫接種在小鼠中誘發(fā)EAE。EAE的發(fā)病機理包括將髓磷脂抗原呈遞給T細胞、活化的T細胞遷移至CNS和在識別相同抗原時發(fā)生炎癥和/或脫髓鞘。
為了檢驗SSAO/VAP-1作為對CNS的淋巴細胞募集的主要調節(jié)劑的作用，在EAE模型中評價莫非吉蘭(一種烯丙胺)和SSAO抑制劑。
在第0天時給30只雌性C57BL/6小鼠經皮下(s.c)免疫接種在弗氏完全佐劑(CFA)中的髓磷脂少突膠質細胞糖蛋白35-55(MOG肽35-55)，隨后經i.p.注射百日咳毒素(在第0天注射一次百日咳毒素，在第2天進行第二次百日咳毒素注射)。10只小鼠的組接受烯丙胺化合物莫非吉蘭(AA，10mg/kg/劑量，每天兩次，連續(xù)18天)、甲氨蝶呤(2.5mg/kg/天，隔天一次(周一、周三、周五)，直到第18天)或載體對照(兩次/天，連續(xù)18天)，所有施用均從免疫接種后1天開始并且均經i.p.施用。然后按照如下的0-5級評分系統(tǒng)對動物監(jiān)測體重、麻痹病征和死亡1＝跛行尾或帶有尾部緊張性的蹣跚步態(tài)；2＝帶有跛行尾的蹣跚步態(tài)(共濟失調)；2.5＝帶有部分肢體麻痹的共濟失調；3＝一條肢完全麻痹；3.5＝一條肢體完全麻痹與第二條肢部分麻痹；4＝兩條肢完全麻痹；4.5＝瀕臨死亡；5＝死亡。結果如附圖2A、附圖2B和附圖2C中所示。與在給藥期間(至第18天)表現(xiàn)出80％疾病發(fā)病率和中度臨床嚴重程度的載體治療組相比，莫非吉蘭-治療的小鼠中，50％受侵害小鼠的疾病嚴重程度具有統(tǒng)計學上的顯著減輕。(通過評價治療效果的重復測定分析p＝0.04。將具有選擇天數(shù)的間隔的適當?shù)亩囗検睫D換用于測試時間效應)。在AA與載體治療組之間在疾病嚴重程度上具有統(tǒng)計學意義的顯著性差異，甚至在終止化合物施用后仍然持續(xù)，并且直到研究結束時仍然觀察到(d25)。
正如預計的，載體對照小鼠中體重減輕與臨床嚴重程度相關；并且莫非吉蘭治療還在施用期間防止了體重減輕(p＝0.04)。此外，在最后一次治療后將莫非吉蘭對EAE發(fā)展生的抑制作用連續(xù)觀察至少一周以上(d19-25)。MTX-治療的小鼠在治療期間表現(xiàn)出類似的抑制作用(d0-18)。然而，在MTX治療停止后就觀察到疾病發(fā)病率和嚴重程度升高(附圖2A)。在施用期間或之后用MTX和莫非吉蘭治療的組之間沒有統(tǒng)計學顯著性差異(p＝0.8和p＝0.38，分別對臨床嚴重程度和體重而言)。
在獨立的實驗中使用實施例2的化合物遵循完全相同的方案，但這次不使用MTX組。附圖3中所示的結果表明該化合物對疾病的發(fā)展和嚴重程度顯然具有治療效果。這些數(shù)據(jù)表明本發(fā)明的化合物為治療人多發(fā)性硬化的候選物。
實施例18B
VAP-1/SSAO抑制劑對小鼠中復發(fā)性實驗性自身免疫性腦脊髓炎的抑制(慢性多發(fā)性硬化的模型)通過使用在SJL/J小鼠中的復發(fā)性實驗性自身免疫性腦脊髓炎模型(EAE)對使用VAP-1/SSAO抑制劑治療CNS炎性疾病進行分析。小鼠中的復發(fā)性EAE得到充分表征并且是人中多發(fā)性硬化的可再現(xiàn)的動物模型(Brown & McFarlin 1981《實驗室研究》(Lab.Invest.)45278-284；McRae等1992《神經免疫學雜志》(J.Neuroimmunol.)38229-240)。多發(fā)性硬化是慢性免疫-介導的CNS疾病，其特征在于脫髓鞘區(qū)域中的肥厚性小靜脈周圍炎性浸潤和軸突喪失。作為動物模型，可以通過佐劑存在下用致腦炎髓磷脂抗原進行免疫接種在小鼠中誘發(fā)慢性復發(fā)性EAE。EAE的發(fā)病機理包括將髓磷脂抗原呈遞給T細胞、活化的T細胞遷移至CNS和在識別相同抗原時發(fā)生炎癥和/或脫髓鞘。
血管粘著蛋白-1(VAP-1)是胺氧化酶和在發(fā)炎組織/器官，包括腦和脊髓內皮上表達的粘著受體。它的支持淋巴細胞跨內皮遷移的能力可能是VAP-1在炎性疾病，諸如多發(fā)性硬化和阿爾茨海默氏病的重要系統(tǒng)功能。
為了檢驗VAP-1作為對CNS的淋巴細胞募集的主要調節(jié)劑的作用，在慢性復發(fā)性EAE模型中評價VAP-1/SSAO抑制劑。給7-8周齡雌性SJL/J小鼠經s.c.免疫接種在弗氏完全佐劑(CFA)中的50μg小鼠PLP肽139-151，隨后經i.p.注射兩次200ng百日咳毒素。10只小鼠的組接受10mg/kg的載體對照(PBS，0.1ml)或(2-苯基烯丙基)肼，每天兩次，連續(xù)53天，所有的施用均從免疫接種后1天開始。(2-苯基烯丙基)肼為如下化合物 然后按照如下的0-5級評分系統(tǒng)對動物監(jiān)測麻痹病征0.5部分尾部無力；1 跛行尾或帶有尾部緊張性的蹣跚步態(tài)；1.5帶有部分尾無力的蹣跚步態(tài)；
2 帶有跛行尾的蹣跚步態(tài)(共濟失調)；2.5帶有部分肢體麻痹的共濟失調；3 一條肢完全麻痹；3.5一條肢體完全麻痹與第二條肢部分麻痹；4 兩條肢完全麻痹；4.5瀕臨死亡；5 死亡。
將結果表示為平均臨床評分(附圖9A)、發(fā)病率％(帶有任何麻痹的小鼠數(shù)量/10只小鼠)(附圖9B)、患有慢性疾病的小鼠％(具有至少一次復發(fā)的小鼠)(附圖9C)和復發(fā)的累積總數(shù)(附圖9D)。通過重復測定方法分析臨床評分的p值并且通過廣義線性模型，以治療組((2-苯基烯丙基)肼與緩沖劑)的主要效應和選擇的當天來計算累積復發(fā)次數(shù)和患有慢性疾病的小鼠百分比的p值。
正如附圖9A、附圖9B、附圖9C和附圖9D中所示，盡管兩組中90-100％的小鼠在免疫接種后2周發(fā)生中度至重度麻痹，但是慢性疾病的發(fā)病率在用(2-苯基烯丙基)肼治療的組中顯著低于(p＜0.0001)接受緩沖液的對照小鼠。還觀察到(2-苯基烯丙基)肼-治療的小鼠與接受緩沖液的對照組相比，總體臨床嚴重程度(p＜0.005)和累積的復發(fā)次數(shù)(p＜0.0001)均具有類似的統(tǒng)計學上的顯著降低。這些結果共同表明SSAO/VAP-1抑制劑對慢性EAE發(fā)展具有減輕作用。
實施例19角叉菜聚糖誘發(fā)的大鼠爪水腫的抑制角叉菜聚糖誘發(fā)的爪水腫已經廣泛應用于評價多種治療劑的抗炎作用并且是用于評價化合物在緩解急性炎癥中功效的有用的實驗系統(tǒng)(Whiteley PE和Dalrymple SA，1998.“炎癥模型角叉菜聚糖在大鼠中誘發(fā)的爪水腫”-《最新藥理學方案》(Current Protocols inPharmacology.)Enna SJ，Williams M，F(xiàn)erkany JW，Kenaki T，Porsolt RE和Sullivan JP，eds.，pp 5.4.1-5.4.3，John Wiley & Sons，New York)。水腫的完全發(fā)展是嗜中性粒細胞依賴性的(Salvemini D.等(1996)《英國藥理學雜志》(Br.J.Pharmacol.)118829)。
使用雌性Sprague Dawley大鼠并在接觸角叉菜聚糖前15分鐘經i.p.注射100mg/kg的本發(fā)明化合物。給對照組注射等體積的載體(PBS)。如上所述通過用27-G針頭經s.c.在右足墊(pat)上注射50μl角叉菜聚糖(IV型λ，Sigma)在鹽水中的0.5％溶液誘發(fā)爪中的水腫(參見Whiteley P.E.和Dalrymple S.A.(1998)“炎癥模型角叉菜聚糖在大鼠中誘發(fā)的爪水腫”-《最新藥理學方案》(Current Protocols in Pharmacology.)Enna SJ，Williams M，F(xiàn)erkany JW，Kenaki T，Porsolt RE和Sullivan JP，eds.，pp 5.4.1-5.4.3，JohnWiley & Sons，New York)。在誘發(fā)水腫前和在角叉菜聚糖誘發(fā)后60、120和180分鐘按照體積測量每只動物的測試足的大小。
使用實施例2和8的化合物的實驗結果如附圖4中所示。在兩種情況中，100mg/kg劑量在所有測試時間點均顯然和顯著地減輕了爪水腫。使用GraphPad Prism軟件(San Diego，Ca)，通過方差分析后的鄧奈特檢驗來分析數(shù)據(jù)(p＜0.05)。
使用該模型進行其它實驗以便確定SSAO抑制劑在以治療方式使用時是否表現(xiàn)出顯著功效(即注射角叉菜聚糖后)。簡單的說，在注射角叉菜聚糖后1小時經口服施用SSAO抑制劑(30mg/kg)、吲哚美辛(3mg/kg)和PBS。一個有代表性的實驗結果如附圖10中所示。數(shù)據(jù)表明測試的SSAO抑制劑以治療方式應用時能夠減輕爪水腫到與使用吲哚美辛觀察到的相當?shù)乃健?br> 為了進一步研究SSAO抑制在炎癥反應中的作用，進行研究以便評價SSAO抑制對前列腺素E2(PGE2)水平的作用。將動物分成各8只大鼠的4個治療組。3個組在注射角叉菜聚糖前1小時分別接受口服施用的50mg/kg實施例2的化合物、3mg/kg吲哚美辛或PBS。第4組在爪發(fā)炎前1小時經i.p.接受3mg/kg地塞米松。在注射角叉菜聚糖后3小時，用CO2使大鼠窒息并取下其后爪。用解剖刀撕開爪，將其懸浮于帶有微量加樣器吸頭的1.5ml聚丙烯管脫離底部的位置上并且離心以便擠壓出炎性流體。測定從每只爪中采集的體積并通過使用商購試劑盒(R & D Systems，Minneapolis，MN)，按照制造商的說明進行ELISA來分析流體中PGE2的產量。將角叉菜聚糖注入足墊通常誘發(fā)5-10-倍的PGs增加。正如預計的，地塞米松更有效地預防腫脹，而吲哚美辛對PGE2水平具有更大的影響(參見附圖11)。實施例2的化合物能夠顯著將PGE2產量降至與在地塞米松治療的動物中觀察到的相當?shù)乃健Ｊ褂肎raphPad Prism軟件(San Diego，Ca)，通過方差分析后的鄧奈特檢驗來分析數(shù)據(jù)。
實施例20化學方法誘發(fā)的結腸炎的抑制2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)-誘發(fā)的結腸炎和葡聚糖硫酸鈉(DSS)-誘發(fā)的結腸炎為TH1-介導的涉及克羅恩病的結腸炎小鼠模型。已經證實通過不同機制起作用的化合物在這些模型中有效，包括潑尼松龍、抗IL-16、抗ICAM和抗-整聯(lián)蛋白等(Strober W.等(2002)《免疫學綜述年鑒》(Annu.Rev.Immunol.)20495)。唑酮-誘發(fā)的結腸炎為TH2-介導的過程，它與潰瘍性結腸炎極為相似并且響應抗-IL4療法(Boirivant M.等(1998)《實驗藥物雜志》(J.Ex.Me)1881929)。
如所述的誘發(fā)TNBS結腸炎(Fuss I.J.等(2002)《免疫學雜志》(J.Immunol.)168900)。簡單的說，通過將接近肛門邊緣4cm插入的3.5F導管在麻醉的SJL/J雄性小鼠中經直腸內對每只小鼠施用2.5mg在50％ETOH中的TNBS(pH 1.5-2，Sigma)。將TNBS-注射的小鼠分成3個治療組并且每天兩次經i.p.注射PBS；潑尼松龍(5mg/kg)；和本發(fā)明的化合物(例如以20mg/kg)。在第0天開始注射(注射TNBS的當天)并連續(xù)注射至第7天。
如所述的誘發(fā)唑酮結腸炎(Fuss I.J.等(2002)《免疫學雜志》(J.Immunol.)168900)。簡單的說，通過在表皮上(epicutaneous)施用在100％ EtOH(150μl)中的3％唑酮(4-乙氧基亞甲基-2-苯基-2唑啉-5-酮，Sigma)使小鼠預先致敏，隨后在第5天時，通過通過接近肛門邊緣4cm插入的3.5F導管對麻醉的SJL/J雄性小鼠經直腸內施用50％ EtOH中的1％唑酮(100μl)。將小鼠分成3個治療組并且每天兩次經i.p.注射PBS和本發(fā)明的化合物。在第0天開始注射并連續(xù)注射至第7天或本研究結束。
還如所述的用5％(wt/vol)DSS(ICN Biomedicals Inc.，Ohio，USA)飼喂Balb/c小鼠7天誘發(fā)結腸炎(Okayasu I.等(1990)《胃腸病學》(Gastroenterology)98694)。將小鼠分成3個治療組并且每天兩次經i.p.注射PBS；潑尼松龍(5mg/kg)；和本發(fā)明的化合物(例如以20mg/kg)。在第0天開始注射(飼喂DSS的第1天)并連續(xù)注射至第7天。
通過監(jiān)測體重、糞便的稠度、糞便中帶血、結腸組織切片的組織學分析并監(jiān)測幾種細胞因子的水平來評價所有模型中的疾病發(fā)展情況。
實施例20A唑酮誘發(fā)的結腸炎的抑制使用實施例20中的方案對唑酮誘發(fā)的結腸炎進行研究。在第0天開始注射并持續(xù)至本研究結束。通過監(jiān)測存活率和體重以及通過結腸炎的肉眼可見的證據(jù)(即直腸脫出、結腸大小、結腸重量)對疾病的發(fā)展情況評價12天(直腸內施用后6天)。從皮膚預先致敏的當天(第0天)開始，每天兩次經i.p.施用10mg/kg的(2-苯基烯丙基)肼。結果表明(2-苯基烯丙基)肼與載體組相比顯著改善存活率和體重減輕(參見附圖12A和12B)。使用GraphPad Prism軟件(San Diego，CA)計算Kaplan-Meyer存活曲線和不配對t檢驗。
如果按照上述方案，那么在通過體重下降測定的疾病嚴重程度在第7天達到最大值(直腸內攻擊后2天)，也是在這一天，動物開始死亡。因此，在最初致敏后的7天處死來自相似研究的動物并取出結腸且固定在1％福爾馬林中。在約定的實驗室(Pathology Associates，F(xiàn)rederick，MD)以盲法進行組織加工和分析。簡單的說，在石蠟包埋后，切5μm的切片并用蘇木精和曙紅進行染色。從每只動物中取距肛門1cm(切片1)、3cm(切片2)和6cm(切片3)的3個橫切片。如下將潰瘍、炎癥(在粘膜、粘膜下層、漿膜和外肌層)和上皮損傷(包括粘膜和粘膜下層膿腫、粘膜下纖維化、腺畸變和粘膜和粘膜下層水腫/出血)的程度進行半定量分級0-不存在；1-最??；2-輕度；3-中度；4-顯著。附圖13表示(2-苯基烯丙基)肼對潰瘍、炎癥和損傷指數(shù)具有顯著作用(分別參見附圖13A、附圖13B和附圖13C)。在另一次研究中，在直腸內攻擊后1天(第6天)開始給藥以便測定誘發(fā)疾病后給予SSAO抑制劑是否對存活率產生影響。一次有代表性的實驗的數(shù)據(jù)如附圖14中所示。在疾病發(fā)作后施用(2-苯基烯丙基)肼對存活率具有顯著影響。使用GraphPad Prism軟件(San Diego，CA)計算Kaplan-Meyer存活曲線。
實施例21伴刀豆凝集素A-誘發(fā)的肝損傷的抑制在肝損傷的伴刀豆凝集素A(Con A)鼠模型中評價通過施用本發(fā)明的化合物對炎癥的預防。Con A活化T淋巴細胞并在小鼠中導致T細胞-介導的肝損傷。腫瘤壞死因子α是該實驗模型中的關鍵介體。T-細胞-介導的肝損傷包括免疫細胞，特別是CD4+T淋巴細胞遷移入肝組織。如所述的對Balb/c小鼠經i.v.接種在200μl無致熱原鹽水中的10mg/kg伴刀豆凝集素A(Willuweit A.等(2001)《免疫學雜志》(J Immunol.)1673944)。在ConA施用前，將動物分入治療組并且經i.p注射PBS和不同濃度的本發(fā)明化合物(例如20mg/kg)。通過測定肝酶，諸如轉氨酶和堿性磷酸酶的血清水平、肝組織病理學和血漿和肝組織中不同炎性細胞因子的水平來評價肝損害。
實施例22銀屑病的SCID小鼠模型中皮膚炎癥的抑制使用移植的銀屑病斑片新建立的SCID-人皮膚嵌合體打開了研究涉及銀屑病的分子復雜性的新前景。該模型還提供了研究多種關鍵生物事件的獨特機會，所述生物事件為諸如細胞增殖、靶組織中T細胞的歸巢、炎癥和涉及炎癥反應的細胞因子/趨化因子級聯(lián)。SCID小鼠模型已經用于評價幾種化合物在銀屑病和其它炎性疾病中的功效(Boehncke W.H.等(1999)《皮膚病學研究學報》(Arch Dermatol Res.)291(2-3)104)。
如上所述進行移植(Boehncke，W.H.等(1994)《皮膚病學研究學報》(Arch Dermatol Res.)286325)。將人全層皮膚異種移植物移植到6-8周齡C.B 17 SCID小鼠(Charles River)背部上。為了進行手術操作，通過腹膜內注射100mg/kg氯胺酮和5mg/kg賽拉嗪使小鼠麻醉。將測量為直徑1cm的全層皮膚紡錘形片移植到小鼠剃刮的中央背部相應切下的全層皮膚缺陷上并用6-0號無創(chuàng)傷單絲縫合線固定。在施加無菌凡士林浸漬的紗布后，通過使用相鄰側面的皮膚在移植的區(qū)域上縫合皮袋(skin pouch)防止移植物受到損傷。使縫合線和其上扎緊的袋保持就位，直到它們在2-3周后自發(fā)分解。使移植物容納2周并愈合。此后，在移植后15-42天之間每天經腹膜內注射。給小鼠注射終體積為200μl的載體(PBS)、地塞米松(0.2mg/kg體重)或本發(fā)明的化合物(例如以20mg/kg體重)。在第42天時處死小鼠，并且在連同周圍小鼠皮膚切除后，將移植物進行福爾馬林包埋。隨后進行常規(guī)的蘇木精-和-曙紅染色并且定性地(表皮分化、炎癥浸潤)和定量地(表皮厚度)分析移植物的病理變化。
實施例23本發(fā)明化合物在阿爾茨海默氏病小鼠模型中的作用阿爾茨海默氏病(AD)的臨床特征在于起病隱襲的癡呆并且在病理學上的特征在于存在大量神經斑和神經原纖維纏結。這些斑主要由來源于淀粉樣前體蛋白(APP)加工產生的β-淀粉狀蛋白(Aβ)肽片段組成。纏結由配對的螺旋狀絲組成，所述的配對螺旋狀絲由微管相關蛋白tau組成。攜帶APP中致病突變的轉基因小鼠從約1年齡開始以來表現(xiàn)出Aβ-蛋白質水平顯著升高和大腦皮層和海馬中Aβ沉積(Hsiao K.等(1996)《科學》(Science)27499)。突變體PS-1轉基因小鼠未表現(xiàn)出異常病理變化，但確實表現(xiàn)出Aβ42/43肽水平的細微升高(Duff K，等(1996)《自然》(Nature)383710)。來源于這些小鼠雜交的轉基因小鼠(PS/APP)與APP單一轉基因小鼠相比表現(xiàn)出Aβ顯著加速累積成可見沉積物(Holcomb L.等(1998)《天然藥物》(Nat Med)497)。此外，最新研究表明在這些小鼠中，炎癥反應可能涉及Aβ沉積(Matsuoka Y.等(2001)《美國病理學雜志》(Am J Pathol.)158(4)1345)。
因此，PS/APP小鼠在研究AD淀粉狀蛋白表型中具有重要的應用并且用于評價本發(fā)明化合物在治療阿爾茨海默氏病患者中的功效的研究。給小鼠注射載體(例如PBS)或本發(fā)明的化合物(例如以10-20mg/kg)，并且通過分析記憶缺失、樣品組織的組織學特征和疾病發(fā)展的其它指征來評價。
實施例24本發(fā)明化合物在I型糖尿病的鼠模型中的作用可以廣泛接受的是促炎細胞因子在1型糖尿病的發(fā)展中起重要作用。因此，本發(fā)明的化合物可以用于治療患有這種疾病的患者?？梢詫в型ㄟ^多次低劑量的鏈唑霉素(STZ)誘發(fā)的糖尿病的小鼠用作1型糖尿病的動物模型。STZ用于在C57BL/6J小鼠中誘發(fā)糖尿病。簡單的說，如所述的經i.p.給予STZ(40mg/kg)或檸檬酸鹽緩沖液(載體)，每天一次，連續(xù)5天(Carlsson P.O等(2000)《內分泌學》(Endocrinology.)141(8)2752)。在STZ注射前5天開始化合物施用(i.p.10mg/kg，每天兩次)并持續(xù)2周。另一種廣泛應用的模型為自身免疫1型糖尿病的NOD小鼠模型(Wong F.S.和Janeway C.A.Jr.(1999)《最新免疫學觀點》(Curr Opin Immunol.)11(6)643。從第10周到第25周每天通過注射本發(fā)明的化合物(20mg/kg/天)治療雌性NOD小鼠。還評價了脾細胞從糖尿病型NOD雌性動物中過繼性轉移后，本發(fā)明化合物在NOD-scid/scid雌性動物中預防胰島炎和糖尿病發(fā)展中的作用。就STZ和NOD模型而言，按照幾種方式，包括監(jiān)測血糖水平來監(jiān)測糖尿病的發(fā)病率。評價分離自實驗小鼠的胰島中的胰島素分泌。測定小鼠血清中的細胞因子產生。定量評價胰島的編程性細胞死亡。
實施例25本發(fā)明化合物在氣道炎癥模型中的作用抗炎化合物，諸如SSAO抑制劑可以在氣道炎癥疾病，諸如哮喘和慢性阻塞性肺疾患中具有有益作用。本文所述的嚙齒動物模型廣泛用于功效研究。還可以用急性肺炎的其它鼠模型測試本發(fā)明的化合物。
為了評價SSAO抑制劑在預防氣道炎癥中的作用，研究3組致敏的大鼠。在7天期限中每天兩次腹膜內施用載體鹽水、本發(fā)明的化合物或陽性對照(例如潑尼松)后，用氣溶膠化的OVA(卵清蛋白)攻擊動物。在該周結束時，如所述的麻醉動物用于測定過敏原誘發(fā)的氣道反應(Martin J.G.等(2002)《免疫學雜志》(J Immunol.)169(7)3963)。用聚乙烯管給動物進行氣管內插管并將動物置于熱墊上以便維持直腸溫度為36℃。通過將氣管內插管頭置于有機玻璃盒(～250ml)內部測定氣流。將連接差動式傳感器的呼吸速度描記儀與盒的另一端連接以測定氣流。用OVA氣溶膠(5％ w/v)將動物攻擊5分鐘。以0.15ml/分鐘的輸出量使用一次性噴霧器。在攻擊后將氣流每隔5分鐘測定一次，持續(xù)30分鐘，且隨后在15-分鐘間隔測定一次，總計8小時。然后處死動物用于支氣管肺泡灌洗(BAL)。在用5次滴注5ml鹽水攻擊后8小時進行BAL。使用血細胞計數(shù)器和錐蟲藍染色估計總細胞計數(shù)和細胞存活力。使用細胞離心涂片器(Cytospin)制備載玻片并使用May-Grünwald-Giemsa染色評價分化的細胞數(shù)并且通過免疫細胞化學評價嗜酸性粒細胞計數(shù)。
實施例26嚙齒動物中的口服生物利用率研究在小鼠和大鼠中進行口服生物利用率研究。簡單的說，通過口腔管飼法對C57B1/6雌性小鼠和Sprague Dawley雌性大鼠施用50mg/kg的本發(fā)明不同的化合物。在施用化合物后的不同時間間隔對動物取血并使用實施例14中所述的比色測定法測定血漿中抑制劑的水平。有代表性的實驗結果如附圖5中所示并且表明本發(fā)明的化合物為口服生物可利用的。(附圖5A表示小鼠中的結果；附圖5B表示大鼠中的結果)。因此，這些數(shù)據(jù)表明本文所述的小分子SSAO抑制劑能夠發(fā)展成口服施用的藥物。在靜脈內和腹膜內施用不同劑量的實施例2、8和10中所述本發(fā)明化合物后進行相同的研究。結果表明這些化合物在施用那些形式后也易于生物利用。
實施例27SSAO/VAP-1抑制劑體內施用后的劑量反應作用評價SSAO在大鼠主動脈和肺中的體內抑制，在這兩種組織中，SSAO活性最高。通過口腔管飼法對6周齡雌性Sprague Dawley大鼠施用在2.5ml/kg PBS中0、0.1、1、10和50mg/kg的實施例8的化合物。施用化合物后4小時，將動物實施安樂死并取出主動脈和肺且冷凍在液氮中。將組織在0.1M pH 7.8的磷酸鉀緩沖液中勻漿(30ml/g用于主動脈且20ml/g用于肺)并且以1000×g離心15分鐘。收集上清液并按照Lizcano J.M.等(1998)在《生物化學雜志》(Biochem.J.)33169中所述的方案用于放射性試驗。通過在室溫下將組織勻漿的200μl等分試樣與20μl 0.4mM14C-標記的芐胺底物(6mCi/mmol比活，Pharmacia)一起保溫30分鐘啟動酶反應。通過加入100μl 2M檸檬酸終止試驗，用5ml含有0.6％(w/v)2，5-二苯基二唑(oxdazole)(PPO)的甲苯∶乙酸乙酯(1∶1)萃取試驗體積并通過液體閃爍法對有機層的等分試樣進行計數(shù)。因為SSAO和MAO-B均對芐胺具有活性，所以需要對照樣品同時進行試驗，以便可以鑒定MAO-B和SSAO活性。用0、10、50和500μM氨基脲抑制SSAO以便進行MAO-B測定，并且用0、5和100μM帕吉林抑制MAO-B以便進行SSAO測定。在添加芐胺前，將這些抑制劑加入到組織上清液中。主動脈和肺主要具有SSAO活性；這些結果為公布的數(shù)據(jù)。附圖6表示實施例8化合物對肺和主動脈而言的體內ED50值分別為0.72mg/kg和5mg/kg。
實施例28SSAO/VAP-1抑制劑對體外粘著的阻斷進行本實施例中的研究以便測定轉染入內皮細胞的SSAO/VAP-1是否保留了粘著功能和它是否在新近分離的人PBMCs與這些細胞粘著方面起任何作用。此外，這些研究還用于測定阻斷SSAO/VAP-1是否對這兩種細胞類型的粘著水平具有影響。使用用熒光染料鈣熒光素-AM(MolecularProbes，OR，USA)標記的細胞按制造商的說明進行粘著試驗。簡單的說，將大鼠淋巴結肥厚內皮細胞(HEC；如Ager，A.(1987)在《細胞科學雜志》(J.Cell Sci.)87133中所述進行分離和培養(yǎng))在96-孔平板中平板接種過夜(2,000個細胞/孔)。在37℃下用1ml 10μM鈣熒光素-AM將PBMCs(外周血單核細胞)(1×107)標記1小時，用RPMI洗滌3次并加入到含有模擬-轉染或用全長人SSAO/VAP-1轉染的HEC細胞單層的96孔平板中(含有2,000個HEC細胞的每個孔中平板接種60,000個PBMCs)。在37℃下使粘著進行3小時。通過用RPMI洗滌3次除去未粘著的細胞并在熒光平板讀出器中在485nm的激發(fā)波長和530nm的發(fā)射波長處測定熒光。包括幾個對照組，諸如僅HEC細胞和PBMCs(標記和未標記的)。在所有實驗中，SSAO/VAP-1的表達使PBMCs與HEC細胞的粘著增加了2-5倍。這些結果與其他人公布的數(shù)據(jù)一致(Smith等《實驗藥物雜志》(J.Exp Med)(1998)18817；Salmi等《循環(huán)研究》(Circ Res)(2000)861245)。
設計下一步實驗以便研究阻斷酶催化位點是否對SSAO/VAP-1的粘著功能具有影響和本發(fā)明的抑制劑是否可以介導粘著-抑制作用。公布的結果提示用氨基脲阻斷SSAO活性抑制了完全位于心臟內皮單層上的層下淋巴細胞的滾動(Salmi等《免疫性》(Immunity)(2001)14265)。使用如上所述的粘著試驗重復這些研究以便評價本發(fā)明的抑制劑。所用的粘著阻滯劑包括抗-人VAP-1單克隆抗體(Serotec，Oxford，UK)、神經氨酸酶(neuramidase)(一種唾液酸酶，因為SSAO/VAP-1為唾液糖蛋白；Sigma)和幾種針對大鼠粘著分子的功能-阻滯抗體(CD31-PECAM、CD54-ICAM-1、CD92P-P選擇蛋白)。對照包括SSAO抑制劑氨基脲(Sigma)、MAO-A和MAO-B抑制劑(分別為氯吉靈和帕吉林；Sigma)和小鼠IgGI和IgG2同種型對照品(BD，USA)。將抗體(10μg/ml)和神經氨酸酶(neuramidase)(5mU)與HECs一起在37℃下保溫30分鐘；在添加標記的PBMCs前洗除過量抗體。將小分子抑制劑在IC100濃度下以相同方式預保溫，但不洗滌掉存在于上清液中的量以便在粘著步驟中保持IC100濃度。
附圖7表示一個有代表性的實驗結果(n＝6重復結果)。附圖7B表示了顯示抗-VAP-1、實施例2的化合物、實施例8的化合物的數(shù)據(jù)，并且在較低的程度上，氨基脲將PBMCs與SSAO/VAP-1轉染的HECs粘著的數(shù)量降至與在模擬轉染細胞中觀察到的相接近的水平。(對模擬轉染的細胞測試的相同化合物的數(shù)據(jù)如附圖7A中所示)。本文的抗-VAP-1抗體結果與有關抗-VAP-1mAb對淋巴細胞與VAP-1-轉染的HEC細胞的粘著的作用公布的數(shù)據(jù)一致(Salmi等《循環(huán)研究》(Circ Res)(2000)861245)。氯吉靈(MAO-A抑制劑)和帕吉林(MAO-B抑制劑)沒有作用。有意義的是，VAP-1表達看起來降低了抗-CD54、CD31和CD62P抗體的相對阻滯作用。
概括地說，這些結果表明抑制SSAO酶功能的本發(fā)明化合物減少了PBMCs與在體外表達SSAO/VAP-1的HECs的結合；即本發(fā)明的SSAO抑制劑能夠在體外抑制PBMCs與表達SSAO/VAP-1的HECs的粘著。
實施例29脂多糖(LPS)-誘發(fā)的內毒素血癥的抑制在膿毒癥中，所有器官的內皮細胞與升高水平的LPS和炎癥細胞因子接觸導致粘著分子和趨化因子增量調節(jié)，這使得白細胞的粘連、滾動和遷移增加(Pawlinski R.等(2004)《血液》(Blood)1031342)。LPS-誘發(fā)的內毒素血癥是得到充分表征的全身炎癥模型且由此可以用于研究SSAO抑制在這些炎癥機理中的推定作用。通過i.p.施用5mg/kg LPS在C57B1/6J雌性小鼠中誘發(fā)膿毒癥。LPS注射前60分鐘，通過口服對動物施用200μl載體(PBS)或50mg/kg(2-苯基烯丙基)肼。在誘發(fā)疾病前1小時經i.p施用濃度為3mg/kg的地塞米松。從麻醉動物的眼眶后血管叢中抽取血液并采集血清并凍干，直到測定細胞因子時。通過使用商購試劑盒(R & D Systems，Minneapolis，MN)，按照制造商的說明進行ELISA來測定IL-1β、TNF-α和IL-6的濃度。附圖15表明(2-苯基烯丙基)肼顯著降低該模型中循環(huán)TNF-α和IL-6的水平。使用GraphPad Prism軟件(San Diego，CA)，通過方差分析后的鄧奈特檢驗來分析數(shù)據(jù)。附圖16表示研究結果，設計該研究是為了研究SSAO抑制是否能夠影響LPS休克后動物的存活率。通過i.p.注射對小鼠施用均溶于PBS的2mg/kg LPS與300mg/kg D-半乳糖胺(GalN，Sigma)。在所示的時間點，來自不同治療組的動物通過口服施用接受200μl載體(PBS)或30mg/kg(2-苯基烯丙基)肼。數(shù)據(jù)表明SSAO抑制延長了LPS休克后小鼠的存活。
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盡管為清楚理解的目的通過解釋和實施例在一定程度上詳細描述了前述的本發(fā)明，但是本領域技術人員顯然可以進行某些較小程度的改變和修改。因此，本說明書和實施例不應視為對本發(fā)明范圍的限定。
權利要求
1.通式I-P的化合物，包括其所有的立體異構體、其所有的E/Z(順式/反式)異構體、其所有的溶劑合物和水合物、其所有的晶形和非晶形及其所有的鹽 其中R1p獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基、C5-C14取代的雜芳基、R4-(CH2)n-和R5-Y1-CH2-組成的組；n獨立地為1或2；Y1獨立地為S或O；R2獨立地選自H、C1-C4烷基、Cl、F或CF3；X獨立地選自O或NR6；R3獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；R4獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；R5獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；且R6獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；條件是當R1為未被取代的苯基，R2為H且X為NH時，R3不為H。
2.權利要求1的化合物，其中R1p為未被取代的苯基。
3.權利要求1的化合物，其中R1p為取代的苯基。
4.權利要求1、2或3的化合物，其中R2為H。
5.權利要求1、2、3或4的化合物，其中X為O。
6.權利要求1、2、3或4的化合物，其中X為NR6。
7.權利要求1、2、3、4、5或6的化合物，其中R3為H或C1-C4烷基。
8.權利要求1、2、3、4、5或6的化合物，其中R6為H或C1-C4烷基。
9.根據(jù)通式I-AP的權利要求1的化合物，包括其所有的立體異構體、其所有的E/Z(順式/反式)異構體、其所有的溶劑合物和水合物、其所有的晶形和非晶形及其所有的鹽 其中Rlap為取代或未被取代的苯基；R2獨立地選自H、C1-C4烷基、Cl、F或CF3；X獨立地選自O或NR6；R3獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；R6獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；條件是當R1為未被取代的苯基，R2為H且X為NH時，R3不為H。
10.權利要求9的化合物，其中Rlap為未被取代的苯基。
11.權利要求9的化合物，其中Rlap為取代的苯基。
12.權利要求9、10或11的化合物，其中X為O。
13.權利要求9、10或11的化合物，其中X為NR6。
14.權利要求9、10、11、12或13的化合物，其中R3為H或C1-C4烷基。
15.權利要求9、10、11、12或13的化合物，其中R6為H或C1-C4烷基。
16.通式I-B的化合物，包括其所有的立體異構體、其所有的E/Z(順式/反式)異構體、其所有的溶劑合物和水合物、其所有的晶形和非晶形及其所有的鹽 其中R2獨立地選自H、C1-C4烷基、Cl、F或CF3；R91和R92獨立地選自H、F、Br、Cl、I、C1-C4烷基和C1-C4烷氧基；X獨立地選自O或NR6；R3獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；R6獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基。
17.權利要求16的化合物，其中X為NR6。
18.權利要求16或17的化合物，其中R3為H或C1-C4烷基。
19.權利要求16、17或18的化合物，其中R6為H或C1-C4烷基。
20.權利要求16、17、18或19的化合物，其中R91和R92均為H。
21.通式I-C的化合物，包括其所有的立體異構體、其所有的E/Z(順式/反式)異構體、其所有的溶劑合物和水合物、其所有的晶形和非晶形及其所有的鹽 其中R2獨立地選自H、C1-C4烷基、Cl、F或CF3；R91和R92獨立地選自H、F、Br、Cl、I、C1-C4烷基和C1-C4烷氧基；X獨立地選自O或NR6；R3獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；R6獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基。
22.權利要求21的化合物，其中X為NR6。
23.權利要求21或22的化合物，其中R3為H或C1-C4烷基。
24.權利要求21、22或23的化合物，其中R6為H或C1-C4烷基。
25.權利要求21、22、23或24的化合物，其中R91和R92均為H。
26.通式III的化合物，包括其所有的立體異構體、其所有的E/Z(順式/反式)異構體、其所有的溶劑合物和水合物、其所有的晶形和非晶形及其所有的鹽 其中R27獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基、C5-C14取代的雜芳基、R23-(CH2)n-和R24-Y2-(CH2)-；R22獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；n獨立地為1或2；n3獨立地為0、1或2；Y2獨立地為S或O；且R23和R24獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基。
27.權利要求26的化合物，其中R27為未被取代的苯基。
28.權利要求26的化合物，其中R27為取代的苯基。
29.權利要求26、27或28的化合物，其中R22為H或C1-C4烷基。
30.通式III-A的權利要求26的化合物，包括其所有的立體異構體、其所有的E/Z(順式/反式)異構體、其所有的溶劑合物和水合物、其所有的晶形和非晶形及其所有的鹽 其中R21獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基、C5-C14取代的雜芳基、R23-(CH2)n-和R24-Y2-(CH2)-；R22獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；n獨立地為1或2；Y2獨立地為S或O；且R23和R24獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基。
31.權利要求30的化合物，其中R27為未被取代的苯基。
32.權利要求30的化合物，其中R27為取代的苯基。
33.權利要求30、31或32的化合物，其中R22為H或C1-C4烷基。
34.通式III-B的權利要求26的化合物，包括其所有的立體異構體、其所有的E/Z(順式/反式)異構體、其所有的溶劑合物和水合物、其所有的晶形和非晶形及其所有的鹽 其中R25獨立地選自C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；R22獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基。
35.權利要求34的化合物，其中R27為未被取代的苯基。
36.權利要求34的化合物，其中R27為取代的苯基。
37.權利要求34、35或36的化合物，其中R22為H或C1-C4烷基。
38.通式III-C的化合物，包括其所有的立體異構體、其所有的E/Z(順式/反式)異構體、其所有的溶劑合物和水合物、其所有的晶形和非晶形及其所有的鹽 其中R26獨立地選自C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基；R22獨立地選自H、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、C6-C14芳烷基、C4-C9雜芳基、C6-C14取代的芳基和C5-C14取代的雜芳基。
39.權利要求38的化合物，其中R27為未被取代的苯基。
40.權利要求38的化合物，其中R27為取代的苯基。
41.權利要求38、39或40的化合物，其中R22為H或C1-C4烷基。
42.權利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40或41的化合物，其用于治療。
43.權利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40或41的化合物，其用于治療炎癥或炎性疾病。
44.權利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40或41的化合物，其用于治療免疫疾病或自身免疫病。
45.權利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40或41的化合物，其用于治療多發(fā)性硬化。
全文摘要
本發(fā)明提供了治療炎性疾病和免疫疾病的組合物和方法。本發(fā)明公開了為氨基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)和/或血管粘著蛋白1(VAP－1)抑制劑的烯丙基肼化合物、羥基胺(氨基氧基)化合物和其它化合物。這些化合物具有抑制炎癥和炎癥反應以及治療幾種疾病，包括多發(fā)性硬化的治療應用。
文檔編號A61K31/15GK1863763SQ200480029000
公開日2006年11月15日 申請日期2004年8月6日 優(yōu)先權日2003年8月8日
發(fā)明者L·M·薩爾特－錫德, E·Y·王, K·科克里爾, M·D·林尼克, E·J·維多利亞 申請人:拉卓拉藥物公司