專利名稱：對乙酰氨基苯乙醚用于檢測肝臟功能的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)用檢測試劑技術(shù)領(lǐng)域，是對乙酰氨基苯乙醚(phenacetin，非那西丁)用于檢測肝臟功能的用途。
背景技術(shù)：
正確評價肝臟功能，是目前臨床醫(yī)學(xué)迫切需要解決的重要課題。其涉及到慢性肝病病人肝臟損害程度的評價，肝部分切除術(shù)病人肝臟貯備功能的評估，肝移植病人供肝的選擇，合理用藥及新藥的設(shè)計(jì)與開發(fā)。為此，國內(nèi)外臨床和基礎(chǔ)工作者進(jìn)行了長期大量的實(shí)驗(yàn)研究。其中包括磺酸鈉排泄試驗(yàn)，氨基酸代謝試驗(yàn)，14C-氨基比林呼吸試驗(yàn)，膽汁酸代謝試驗(yàn)，安替比林半衰期試驗(yàn)等。被研究過的模型藥物至少有四十多個。雖然利多卡因氮位去乙基代謝試驗(yàn)(MEGX test)被Abbort公司制成熒光偏震免疫檢測試劑盒，推向市場。但所有這些方法都不能滿足臨床的需要。因?yàn)樵u價肝臟功能的研究有五大難以逾越的障礙①現(xiàn)有評價方法靈敏度低，特異性差。②同位素試驗(yàn)違背環(huán)保要求，且臨床實(shí)用性差。③肝外代謝的存在和代償影響對肝臟功能的正確評價。例如，利多卡因氮位去乙基代謝產(chǎn)物有30％以上來自肝外代謝，這就不能真實(shí)反映肝臟的功能。④正常與異常的界定常有交叉區(qū)。⑤動物實(shí)驗(yàn)與人體實(shí)驗(yàn)結(jié)果常不一致。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明采用對乙酰氨基苯乙醚檢測肝臟功能。對乙酰氨基苯乙醚屬于乙酰苯胺類化合物，是細(xì)胞色素P450 1A2氧化酶的特異性底物。其分子式為C10H13NO2，結(jié)構(gòu)式為 對乙酰氨基苯乙醚通常被用作感冒藥，是復(fù)方阿司匹林等感冒藥的主要成分之一。其在肝臟細(xì)胞色素P450 1A2氧化酶作用下，生成對乙酰氨基酚，代謝途徑為；
對乙酰氨基苯乙醚 對乙酰氨基酚我們最近發(fā)現(xiàn)，對乙酰氨基苯乙醚的肝外代謝極低，且不被經(jīng)典肝藥酶誘導(dǎo)劑苯巴比妥鈉所誘導(dǎo)。因此，可采用口服或靜脈注射對乙酰氨基苯乙醚，一定時間后，測定血液中對乙酰氨基苯乙醚及其氧位脫乙基代謝產(chǎn)物對乙酰氨基酚含量，以兩者含量之比，評價肝臟功能。該方法可以是對乙酰氨基酚/對乙酰氨基苯乙醚的比值，也可以是對乙酰氨基苯乙醚/對乙酰氨基酚的比值。由于對乙酰氨基苯乙醚副作用少，不良反應(yīng)小，人體最小致死量為5克，口服后血液中對乙酰氨基酚與對乙酰氨基苯乙醚的含量之比受干擾因素少，指標(biāo)靈敏、可靠，故可將對乙酰氨基苯乙醚用于檢測肝臟功能。
具體實(shí)施例方式
CCL4誘導(dǎo)的大鼠慢性肝損害模型，是目前最常用的慢性肝損害模型之一。其簡便、易行，能從生物化學(xué)，分子生物學(xué)及組織形態(tài)學(xué)多角度觀察肝臟的功能和結(jié)構(gòu)變化。我們用對乙酰氨基苯乙醚作為探針，以正常大鼠為對照，從血液生化指標(biāo)、組織結(jié)構(gòu)和對乙酰氨基苯乙醚氧位脫乙基代謝三個方面，研究了慢性肝損害大鼠的肝臟變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與正常大鼠相比，模型組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，多數(shù)肝細(xì)胞呈氣球樣變性，伴灶性壞死、大量炎性細(xì)胞浸潤和纖維組織增生。另外，與肝細(xì)胞損害有關(guān)的指標(biāo)明顯升高，如血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和γ-丙氨酰轉(zhuǎn)移酶(γ-GT)等。而除血清總膽紅素(TBil)外，其他與肝臟功能有關(guān)的指標(biāo)，如血漿白蛋白(AIb)和凝血酶原時間(TT)，卻未見明顯改變。值得注意的是，若用分光光度法測定對乙酰氨基苯乙醚氧位脫乙基代謝產(chǎn)物對乙酰氨基酚含量，模型組是正常對照組的30％；而用高效液相色譜法(HPLC)測定對乙酰氨基苯乙醚和對乙酰氨基酚含量，計(jì)算對乙酰氨基酚/對乙酰氨基苯乙醚比值，模型組大鼠僅為正常對照組的1/17.3。這一結(jié)果說明，對乙酰氨基酚/對乙酰氨基苯乙醚比值法是評價慢性肝損害大鼠肝臟功能的一個非常靈敏的指標(biāo)。
慢性乙型病毒性肝炎在我國是一種常見病與多發(fā)病。其中，部分病人可發(fā)展成肝纖維化和肝癌，對社會和家庭造成嚴(yán)重影響。在慢性病毒性肝炎的早期，及時了解肝臟的功能狀態(tài)，正確評估肝臟的功能，對確定病情，評價藥物療效，判斷預(yù)后非常重要。另外，在臨床實(shí)踐中，經(jīng)常遇到一些病人肝功能檢查正常，但肝部分切除后，或經(jīng)肝動脈插管化療后，出現(xiàn)嚴(yán)重肝功能衰竭。所以，我們選擇慢性乙型肝炎病人為對象，以對乙酰氨基苯乙醚為探針，評價了慢性乙肝病人的肝臟功能。
在慢性乙型肝炎病人，標(biāo)志肝臟功能的三大主要指標(biāo)，血漿白蛋白含量、凝血酶原時間和血清膽紅素含量都在正常范圍。這說明二個問題，一是肝臟代償功能很強(qiáng)，另一是臨床現(xiàn)有評價肝臟功能的指標(biāo)靈敏度太低。
我們用對乙酰氨基苯乙醚作探針，對正常人和慢性乙型肝炎患者進(jìn)行檢測。發(fā)現(xiàn)慢性乙型肝炎病人血液中對乙酰氨基苯乙醚氧位脫乙基代謝產(chǎn)物對乙酰氨基酚含量，比正常人減少了72％，對乙酰氨基苯乙醚含量比正常人高了1.15倍，而對乙酰氨基酚/對乙酰氨基苯乙醚比值只有正常人的1/7.6。顯然，用對乙酰氨基酚/對乙酰氨基苯乙醚比值法評價慢性乙型肝炎病人的肝臟功能，方法簡單，結(jié)果靈敏可靠，具有臨床實(shí)用價值。
實(shí)施例對乙酰氨基苯乙醚用于檢測慢性肝損害大鼠的肝臟功能試驗(yàn)40只大鼠，雄性，體重166±20克，購自中科院實(shí)驗(yàn)動物中心。隨機(jī)分成二組，即慢性肝損害模型組和正常對照組，每組20只。模型組腹腔注射四氯化碳橄欖油，配比為1∶6，1-4周注射劑量為0.025毫升/只，5-9周注射劑量為0.05毫升/只。均為隔日一次。正常對照組則隔日注射等體積注射用水。9周后，先禁食12小時，再每鼠尾靜脈注射0.6％對乙酰氨基苯乙醚20毫克/公斤，30分鐘后，從眼球后靜脈取血，置于抗凝管內(nèi)，-20℃保存。同時，取右肝葉，中性福爾馬林固定，常規(guī)石臘包埋切片，HE染色，進(jìn)行組織學(xué)分析檢查。采用日立-7150生化自動分析儀測定血液生化指標(biāo)。采用高效液相色譜法測定對乙酰氨基苯乙醚及對乙酰氨基酚含量。采用紫外分光光度法測定血液中對乙酰氨基酚含量。檢測數(shù)據(jù)用單因素方差分析及RIDIT法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和顯著性檢驗(yàn)。結(jié)果見表1和表2。
表1慢性肝損害大鼠與正常對照大鼠血液生化指標(biāo)的檢測數(shù)據(jù)(x±SD，n＝20)

**與正常對照組比，P＜0.01表2對乙酰氨基苯乙醚用于檢測慢性肝損害大鼠的肝臟功能(μg/ml，n＝20)

**與正常對照組比，P＜0.01由表1-2可見，與正常對照組比，模型組大鼠肝細(xì)胞損害的生化指標(biāo)ALT、Tbil和γ-GT明顯升高，說明四氯化碳造成大鼠肝臟損害。在四氯化碳誘導(dǎo)的慢性肝損害大鼠，雖然與肝臟功能有關(guān)的指標(biāo)AIb和TT無明顯改變，但對乙酰氨基苯乙醚氧位脫乙基代謝產(chǎn)物對乙酰氨基酚含量比正常大鼠減少了70％，尤其是對乙酰氨基酚/對乙酰氨基苯乙醚比值，模型組大鼠只有正常對照組的1/17.3。說明對乙酰氨基酚/對乙酰氨基苯乙醚比值法是檢測慢性肝損害大鼠肝臟功能的一個靈敏指標(biāo)。
實(shí)施例對乙酰氨基苯乙醚用于檢測慢性乙型肝炎病人肝臟功能26例慢性乙型肝炎病人，男性20例，女性6例，年齡32±8歲(20-54歲)，符合1995年全國第五屆傳染病寄生蟲病學(xué)術(shù)會議病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。血清乙型肝炎病毒-DNA與乙型肝炎病毒e抗原陽性，血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶＞40u.L-1，血清膽紅素＜50μmol.L-1，總膽紅素＜85.5μmol.L-1。所有病人知情同意，無血液系統(tǒng)疾病，無活動性消化性潰瘍，無解熱鎮(zhèn)痛藥過敏史。心腎功能正常，近期未使用過細(xì)胞色素P450誘導(dǎo)劑與抑制劑。8例健康受試者，男女各半，年齡22-48歲。常規(guī)體檢正常，近一周內(nèi)未使用過任何藥物。無解熱鎮(zhèn)痛藥過敏史。
所有受試者空腹口服對乙酰氨基苯乙醚0.5克，200毫升溫開水服下。2小時后抽靜脈血1毫升，置于抗凝管內(nèi)，-20℃保存。采用高效液相色譜法測定血漿中對乙酰氨基苯乙醚及其氧位脫乙基代謝產(chǎn)物對乙酰氨基酚含量，計(jì)算對乙酰氨基酚/對乙酰氨基苯乙醚比值，用分組t檢驗(yàn)法檢驗(yàn)兩組間差異的顯著性，結(jié)果見表3。
表3慢性乙肝病人和健康對照者血液對乙酰氨基苯乙醚與對乙酰氨基酚含量(μg/ml)

**與正常對照組比，P＜0.01由表3可見，在慢性乙型肝炎病人，對乙酰氨基苯乙醚氧位脫乙基代謝產(chǎn)物對乙酰氨基酚含量只有健康受試者的28％，而對乙酰氨基苯乙醚血濃度比正常人高了1.15倍。值得注意的是，以對乙酰氨基酚/對乙酰氨基苯乙醚比值為指標(biāo)，兩組間差別高達(dá)7.6倍。說明用對乙酰氨基酚/對乙酰氨基苯乙醚比值法檢測肝臟功能，比單純使用對乙酰氨基苯乙醚代謝產(chǎn)物對乙酰氨基酚含量檢測肝臟功能更靈敏、可靠。另外，該實(shí)驗(yàn)還說明，靜脈注射對乙酰氨基苯乙醚后，用紫外分光光度法測定對乙酰氨基酚含量，也能反映肝臟功能的變化，但與高效液相色譜法比，不如用對乙酰氨基酚/對乙酰氨基苯乙醚比值法靈敏。
權(quán)利要求
1.對乙酰氨基苯乙醚在制備檢測肝臟功能制劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)用檢測試劑技術(shù)領(lǐng)域，是對乙酰氨基苯乙醚用于檢測肝臟功能的用途。對乙酰氨基苯乙醚是復(fù)方阿司匹林等感冒藥的主要成分之一，其經(jīng)肝臟代謝后，生成對乙酰氨基酚。急慢性肝病患者接受對乙酰氨基苯乙醚后，血液中檢測到的對乙酰氨基酚明顯低于正常人，而對乙酰氨基苯乙醚則明顯高于正常人。血液中對乙酰氨基酚與對乙酰氨基苯乙醚兩者的比值更能反映患者與正常人肝臟功能的差異。該發(fā)明較現(xiàn)有檢測肝臟功能的指標(biāo)靈敏，受干擾因素少，能客觀地反映肝臟功能的狀態(tài)。該發(fā)明方法簡單，只要在口服或靜脈注射對乙酰氨基苯乙醚一定時間后，檢測血液中的對乙酰氨基酚和對乙酰氨基苯乙醚的含量，計(jì)算對乙酰氨基酚與對乙酰氨基苯乙醚的比值，或者是計(jì)算對乙酰氨基苯乙醚與對乙酰氨基酚的比值即可。
文檔編號A61B5/145GK1588065SQ200410066858
公開日2005年3月2日 申請日期2004年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月29日
發(fā)明者賀平, 李曉冬 申請人:賀平, 楊曉冬