回收的實施方案中，通過多種方法，例如通過超濾，與病毒濃縮一 起，容易地除去通過任一個方案回收的病毒中的殘留酰脲?？商鎿Q地或額外地，特別是如果 需要較高的純化程度，且因為酰脲對大多數(shù)色譜方法是惰性的，它們可以通過幾乎任意色 譜方法除去。由于酰脲主要是非離子的，可以將樣品施加于離子交換劑，結(jié)果是，殘留酰脲 未結(jié)合且被洗掉，而病毒發(fā)生結(jié)合且隨后洗脫在不含酰脲的含鹽緩沖液中?；蛘?，可以將所 述樣品施加于尺寸排阻色譜柱，在該柱上，病毒由于它的大尺寸而較早地洗脫，較好地與酰 脲分離，所述酰脲因為它的小尺寸而非常晚地洗脫?；蛘?，可以將鹽加入樣品中以造成病毒 結(jié)合至疏水相互作用色譜柱，而酰脲流穿且從而被消除。普通技術(shù)人員會認識到，可以使用 其它色譜方法或沉淀方法除去殘留酰脲，同時增加病毒的純度。這突出以下這點：如果需要 的話，酰脲共沉淀可以與其它病毒純化方法組合，以達到滿足特定應(yīng)用的要求所需的純度 水平?？商鎿Q地，通過膜過濾方法，使用具有允許可溶性酰脲穿過、但是保留目標生物靶標 的孔徑的膜，可以除去可溶性酰脲。該方案具有濃縮生物靶標的額外益處。
[0030] 在某些涉及蛋白或質(zhì)粒純化的實施方案中，本發(fā)明提供了用過飽和酰脲共沉淀病 毒和內(nèi)毒素的方法，因為病毒和內(nèi)毒素會結(jié)合不溶性酰脲。然后可以通過過濾或離心除去 不溶性的共沉淀物，將可溶性的蛋白或DNA質(zhì)粒回收在上清液中?？梢匀芜x地將不溶性的 共沉淀物滅菌和拋棄。使用該方案時應(yīng)當稍微注意，因為盡管DNA通常似乎對酰脲（諸如 尿囊素）具有低親和力，但是通過污染物與酰脲的相互作用可以除去與污染物強烈地結(jié)合 的DNA。污染物結(jié)合的DNA包括，例如，與組蛋白、核小體、其它蛋白或其它異質(zhì)組裝物結(jié)合 的 DNA。
[0031] 在某些實施方案中，本發(fā)明提供了從含有病毒或疑似含有病毒的樣品選擇性地分 離病毒的方法，所述方法包括以下步驟：（i)提供在其表面處具有酰脲部分的固體；（ii)使 所述樣品與所述固體接觸，由此使所述樣品中的大部分病毒結(jié)合所述固體的表面上的酰 脲；和（iii)將所述固體與所述樣品的液體級分分離。
[0032] 在某些實施方案中，所述樣品中的至少50%、70%、80%、90%、95 %或基本上所有 的病毒結(jié)合所述固體的表面上的酰脲。
[0033] 在某些實施方案中，所述方法用于純化期望的病毒，且所述樣品含有期望的病毒。
[0034] 在某些實施方案中，所述酰脲是過飽和酰脲諸如尿囊素或尿酸。在某些這樣的實 施方案中，所述酰脲是具有大于〇. 56%、1%、2%、5%、10%、20%或更高的濃度的尿囊素。
[0035] 在某些實施方案中，通過所述固體的沉降或過濾，除去所述樣品的液體級分。在某 些實施方案中，用含有飽和的或接近飽和的尿囊素的再懸浮緩沖液洗滌從液體級分分離的 固體，以稀釋殘留在沉淀物間隙中的流體內(nèi)的污染物，然后將所述固體與液體級分分離。在 某些實施方案中，使從液體級分分離的固體與足以溶解酰脲的量的再懸浮緩沖液接觸。所 述緩沖液可以具有不同的PH或鹽濃度，其中通常選擇這樣的條件以有利于病毒的穩(wěn)定性， 且基本上不影響酰脲的溶解度。
[0036] 在某些實施方案中，所述樣品含有期望的生物產(chǎn)物，所述病毒是污染物，且所述方 法是用于純化生物產(chǎn)物的方法。在某些這樣的實施方案中，期望的生物產(chǎn)物是蛋白、DNA質(zhì) ?；蚩贵w。在某些實施方案中，所述固體是固體材料，其具有在這樣的固體材料的表面上的 多個酰脲部分。在某些實施方案中，所述固體酰脲是過飽和酰脲（諸如尿囊素或尿酸）的 不溶性部分。在某些這樣的實施方案中，所述酰脲是具有大于〇. 56%、1%、2%、5%、10% 或20%或更高的濃度的尿囊素。在某些其它實施方案中，所述酰脲是具有大于0. 0025%、 0.01%、0. 1%、1%、2%、5%、10%或更高的濃度的尿酸。在某些實施方案中，所述酰脲具 有大于約2倍飽和度、或大于約1 %、或大于約2%、或大于約3%、或大于約5%、或大于約 10 %的濃度。
[0037] 在某些實施方案中，所述樣品含有選自細胞、細胞亞結(jié)構(gòu)、細胞碎片、聚集體和內(nèi) 毒素的額外污染物，且通過用固體共沉淀來減少額外污染物的量。
[0038] 在某些實施方案中，在使所述固體與所述液體級分分離的步驟之前，使所述樣品 與所述固體接觸至少約15分鐘。在某些其它實施方案中，將所述樣品與所述固體溫育小于 15分鐘或約15-30分鐘，或超過30分鐘或約60分鐘，或超過約60分鐘。作為一般規(guī)則，大 多數(shù)大生物靶標與尿囊素的結(jié)合呈現(xiàn)為基本上瞬時的，并在比進行除去步驟更少的時間內(nèi) 達到完全。盡管如此，謹慎的實驗室實踐推薦系統(tǒng)地評價溫育時間，并且即使證實對特定應(yīng) 用不具有重大影響，應(yīng)當為特定應(yīng)用指定和堅持一致的處理時間。
[0039] 在某些實施方案中，當所述固體接觸所述樣品時，所述樣品具有小于約4. 0、或大 于約4. 0且小于約7. 0、或大于約7. 0且小于約9. 0的pH值。在某些實施方案中，可以在小 于約lmS/cm、或大于約lmS/cm且小于約10mS/cm、或大于約10mS/cm且小于約25mS/cm、或 大于約25mS/cm且小于約40mS/cm、或大于約40mS/cm且小于約100mS/cm、或超過約IOOmS/ cm的電導率施加所述固體。
[0040] 在某些實施方案中，通過沉降或過濾，可以使承載生物靶標的液體與不溶物分離。
[0041] 在某些實施方案中，本發(fā)明提供了使用具有病毒結(jié)合能力的經(jīng)化學修飾的表面的 方法，以便從局部環(huán)境回收病毒，諸如與從空氣或液體過濾病毒相結(jié)合。從其中除去病毒的 局部環(huán)境包括氣體、液體和固體表面。可以將這樣的環(huán)境遞送至本發(fā)明的材料、與本發(fā)明的 材料接觸或流過本發(fā)明的材料，以便實現(xiàn)從這樣的局部環(huán)境除去或"過濾"病毒的目的。
[0042] 酰脲代表一類包含至少一個酰脲殘基的有機分子。例子包括、但不限于：脲、乙 內(nèi)酰脲、尿囊素、尿酸、咪唑烷基脲（1，1' -亞甲基雙（3-[1_(羥甲基）_2, 5-二氧代咪唑 烷-4-基]脲）、雙咪唑烷基脲（1，3-雙（羥甲基）-1-(1，3, 4-三（羥甲基）-2, 5-二氧代 咪唑烷-4-基）脲）、嘌呤、以及含有這些結(jié)構(gòu)的衍生物和化合物構(gòu)建體。為了方便本發(fā)明 的實施，具有足夠低溶解度的酰脲具體地包括尿囊素和尿酸。在某些情況下，高可溶性酰脲 可能弱化固體表面上的酰脲與大靶標生物實體的相互作用。
[0043] 在某些這樣的實施方案中，所述固體的表面另外具有多個第二化學官能團，其中 所述第二化學官能團選自正電性部分、疏水部分和金屬螯合部分。
[0044] 在一個或多個上述實施方案中，通過將一種或多種可溶性的有機多價離子與酰脲 組合，可以為后續(xù)純化步驟調(diào)節(jié)樣品。
[0045] 在一個或多個上述實施方案中，所述可溶性的多價離子可以是正電性的。在一個 這樣的實施方案中，所述可溶性的正電性的多價離子可以包括選自以下的一種或多種：（i) 依沙吖啶、（ii)氯己定、（iii)亞甲藍、（iv)苯扎氯按、（V)聚乙稀亞胺或（vi)其它正電性 的多價有機離子。在一個這樣的實施方案中，所述正電性的有機多價離子的濃度范圍可以 是 0· 001-0. 1%〇
[0046] 在一個或多個上述實施方案中，所述可溶性的有機多價離子可以是負電性的。在 一個這樣的實施方案中，所述可溶性的多價離子可以包括選自癸酸、辛酸或辛酸的一種或 多種，其在0. 01-5. 0%的濃度范圍內(nèi)。
[0047] 在一個或多個上述實施方案中，可以如下進一步調(diào)節(jié)含有酰脲和一種或多種可溶 性的有機多價離子的樣品：（i)從所述樣品除去固體，（ii)提供第一組分，其為具有負電性 表面的第一固體基底；（iii)提供第二組分，其為具有正電性表面的第二固體基底；（iv)使 所述蛋白制品與所述第一組分和第二組分接觸，其中所述第一組分和第二組分被構(gòu)造成使 得，所述樣品可以同時接觸兩種組分，其中操作條件基本上阻止期望的蛋白與所述第一組 分或第二組分的結(jié)合；和（V)使期望的生物靶標與所述第一組分和第二組分分離。在一個 這樣的實施方案中，所述樣品條件阻止目標生物靶標與可溶性的或固定化的離子的實質(zhì)結(jié) 合。在一個這樣的實施方案中，基本上阻止目標生物靶標與多價離子的結(jié)合由以下步驟組 成：調(diào)節(jié)鹽濃度，或調(diào)節(jié)PH，或加入有機修飾劑以有效地阻斷生物靶標與多價離子的實質(zhì) 結(jié)合。
[0048] 在一個或多個上述實施方案中，可以如下進一步調(diào)節(jié)含有酰脲和一種或多種可溶 性的有機多價離子的樣品：（i)從所述樣品除去固體，（ii)使所述樣品與至少一個固體表 面接觸，所述固體表面包含至少一種表面結(jié)合的能夠結(jié)合金屬的配體，其中所述表面結(jié)合 的能夠結(jié)合金屬的配體最初基本上不具有金屬，其中選擇操作條件以基本上阻止期望的蛋 白與至少一個固體表面的結(jié)合，和（iii)將所述樣品與至少一種表面結(jié)合的配體分離；其 中當存在超過一種表面結(jié)合的配體時，每種表面結(jié)合的配體獨立地具有相同電荷或電荷中 性。在一個這樣的實施方案中，所述樣品條件阻止目標生物靶標與可溶性的或固定化的離 子的實質(zhì)結(jié)合。在一個這樣的實施方案中，基本上阻止目標生物靶標與多價離子的結(jié)合由 以下步驟組成：調(diào)節(jié)鹽濃度，或調(diào)節(jié)PH，或加入有機修飾劑以有效地阻斷生物靶標與多價 離子的實質(zhì)結(jié)合。
[0049] 在一個或多個上述實施方案中，調(diào)節(jié)蛋白制品包括前述調(diào)節(jié)規(guī)程或其部分的任意 組合。
[0050] 在一個或多個上述實施方案中，調(diào)節(jié)樣品包括：在使期望的蛋白基本上不結(jié)合一 種或多種可溶性的多價有機離子且基本上不被一種或多種可溶性的多價有機離子沉淀的 條件下，以在約0.001%至約〇. 1% (重量/體積）范圍內(nèi)的總體濃度，用一種或多種具有 相同凈電荷類型的可溶性的有機多價離子處理蛋白制品。
[0051] 在一個或多個上述實施方案中，調(diào)節(jié)樣品包括：在使期望的蛋白基本上不結(jié)合固 定化的有機多價離子的條件下，用一種或多種具有相同或不同凈電荷的固定化的有機多價 離子處理所述樣品。
[0052] 在一個或多個上述實施方案中，至少一種可溶性的或固定化的有機多價陽離子包 含金屬親和官能團。
[0053] 在一個或多個上述實施方案中，通過增加電導率、改變pH、添加阻斷性的有機添加 劑或它們的組合，阻止期望的蛋白與一種或多種可溶性的有機多價離子的結(jié)合和沉淀。
[0054] 定義
[0055] 定義術(shù)語以便可以更容易地理解本發(fā)明。在詳細描述中闡述了其它定義。
[0056] "內(nèi)毒素"表示存在于革蘭氏陰性菌外膜中的有毒的熱穩(wěn)定的脂多糖物質(zhì)，其在 細胞裂解后從所述細胞釋放。內(nèi)毒素通常是酸性的（由于它們的高磷酸和羧基殘基含 量）和高疏水的（由于脂質(zhì)-A區(qū)域的脂肪酸含量）。各種內(nèi)毒素分子的分子量可以低 至10, 000D或更小，但是它們通常在有強去污劑存在下和沒有金屬離子存在下以該形式存 在。在生物溶液中，它們通常作為呈不同物理構(gòu)象的大聚集體存在，所述大聚集體具有高達 10, 000, 000D以上的分子量。已知一些這樣的聚集體具有1000nm(l微米）或更大的物理尺 寸，且可以被構(gòu)造為具有金屬離子和給它們賦予擴大的尺寸的其它樣品組分的膠束、帶、片 和復雜組裝物。
[0057] "多核苷酸"表示由在鏈中共價地鍵合的多個核苷酸單體組成的生物聚合物。 DNA(脫氧核糖核酸）和RNA(核糖核酸）是多核苷酸的例子。"DNA質(zhì)粒"表示DNA的閉環(huán) 雙鏈單元，其具有獨立于染色體DNA而在細胞內(nèi)復制的能力。
[0058] "蛋白"表不一組復雜有機大分子中的任一種，所述復雜有機大分子含有碳、氫、 氧、氮，且經(jīng)常含有硫，并且主要由通過肽鍵連接的一條或多條氨基酸鏈組成。蛋白可以具 有天然來源或重組來源?？梢杂梅前被岵糠中揎椀鞍祝T如通過糖