本發(fā)明涉及一類(lèi)新化合物、其制備方法與應(yīng)用，具體是3-芳基-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮亞胺衍生物、其制備方法及其在制備流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

4-(芳基亞甲氨基)-3-芳基-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮(1)表現(xiàn)出不同的藥理活性。ar為3-吡啶基，化合物1a(r＝2-cl、4-cl、3-br、3-no2、2-oh、4-och3、2-och3和3，4-(och3)2[indianjournalofchemistry,2007,46b:352-356]；r＝4-oh、4-och3、4-cl和4-n(ch3)2)[journalofpharmaresearch,2014,3(3):20-22]；r＝h、4-och3、4-ch3和4-cl[carbohydrateresearch,2006,341(13):2187-2199])具有較好的抗細(xì)菌與真菌活性，其中吸電子取代基的抗菌活性較優(yōu)；當(dāng)r為4-二甲基氨基時(shí)，具有較好的抗驚厥作用[indianjournalofheterocyclicchemistry,2005,15(1):15-18]；ar為2-吡啶基，化合物1b(r＝3-cl、3-no2、3-ch3、3-och3、4-och3和2-oh)，具有一定的殺線蟲(chóng)活性，其中4-och3活性最佳[indianjournalofchemistry,2015,54b(2):228-239]。ar為4-吡啶基，化合物1c(r＝4-f)可作為sar誘導(dǎo)劑[indianjournalofchemistry,2003,54(10):1260-1274]，化合物1c(r＝h、2-cl、3-cl、4-cl、2-no2、3-no2、2-oh、3-oh、4-n(ch3)2、4-och3、3,4-(och3)2、3,4,5-(och3)3、4-oh和3-och3)具有較好的抗細(xì)菌與抗真菌活性，當(dāng)芳環(huán)引入取代基后，抗細(xì)菌活性均增強(qiáng)，且對(duì)位取代活性普遍高于其他位置取代活性，其中4-n(ch3)2活性最優(yōu)[internationaljournalofpharma&biosciences,2010,1(1):1-17；pectrochimicaactaa:molbiomolspectrosc,2008,71(4):1474-80；indianjournalofpharmaceuticalsciences,2004,66(6):818-821；journalofthechileanchemicalsociety,2010,55(3):359-362]；化合物1c(r＝h、4-no2、4-n(ch3)2、4-br、4-cl、4-och3和4-oh)具有消炎作用，其中4-n(ch3)2和4-no2活性最佳[archivesofpharmacalresearch,2011,34(8):1239-1250]。

ar為苯環(huán)，化合物1d(r¹＝h，r＝2-f、3-f、4-f、2-br、3-br、4-br、2-cl、3-cl、4-cl、2-oh、2-no2、3-no2、4-ch3、4-och3和3-och3)具有一定的抗真菌的活性，其中3-f活性最高，3-br活性次之，間位取代活性普遍大于鄰對(duì)位取代活性，給電子取代基活性要優(yōu)于吸電子取代基活性[asianjournalofchemistry,2014,26(23):8207-8210]；化合物1d(r¹＝h，r＝4-no2、4-n(ch3)2、4-ch3、4-och3、3，4，5-(och3)3、2-cf3、3-och3-4-oh)具有治療溶組織內(nèi)阿米巴作用，其中4-no2、4-och3和4-n(ch3)2的ic50均小于0.5μm[bioorganic&medicinalchemistryletters,2012,22(8):2768-2771]；化合物1d(r¹＝4-oh，r＝h、3-oh、2-no2和3-no2)具有較弱的抗氧化作用[journalofpharmaceuticalsciencesandresearch,2009,1(2):74-77]；化合物1d(r¹＝4-cl，r＝4-och3、4-br和4-cl)具有較好的殺棉鈴蟲(chóng)活性，誘導(dǎo)棉鈴蟲(chóng)幼體死亡率高達(dá)70％[derpharmaciasinica,2011,2(1):135-141]；化合物1d(r¹＝2-ch3-4-cl，r＝4-och3)具有降低高血糖效果[internationaljournalofpharmtechresearch,2014,6(4):1245-1255]。

4-氨基-3-芳基-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮與芳香醛縮合得到4-(芳基亞甲氨基)-3-芳基-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮[asianjournalofchemistry,2014,26(23):8207-8210]。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一類(lèi)3-芳基-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮亞胺衍生物、其制備方法、藥物組合物和用途。

為解決本發(fā)明的技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

本發(fā)明技術(shù)方案的第一方面是提供了一類(lèi)如結(jié)構(gòu)式ⅰ所示的3-芳基-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮亞胺衍生物及其在藥學(xué)上可接受的鹽：

式中z選自：n或ch；x選自：h、c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或支鏈烷基；

y¹選自：氫、c1～c2烷基、羥基、甲氧基或乙氧基；y²選自：氫、c1～c2烷基、羥基、甲氧基或乙氧基；y³選自：氫、c1～c2烷基、羥基、乙氧基、氨基、甲氨基、二甲氨基、乙酰氨基、氟、氯、溴或碘；y⁴選自：氫、c1～c2烷基、羥基、甲氧基或乙氧基；y⁵選自：氫或c1～c2烷基。

進(jìn)一步的優(yōu)選的化合物選自：

4-(苯基亞甲基氨基)-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮、

4-[(4-氟苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮、

4-[(4-二甲基氨基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮、

4-[(2-羥基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮、

4-[(3-羥基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮、

4-[(4-羥基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮、

4-[(2，4-二羥基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮或

4-[(2，3，4-三羥基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮。

本發(fā)明技術(shù)方案的第二方面是提供了第一方面所述通式i所示的3-芳基-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮亞胺衍生物的制備方法，其特征在于它的制備反應(yīng)如下：

式中z選自：n或ch；x選自：h、c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或支鏈烷基；

y¹選自：氫、c1～c2烷基、羥基、甲氧基或乙氧基；y²選自：氫、c1～c2烷基、羥基、甲氧基或乙氧基；y³選自：氫、c1～c2烷基、羥基、乙氧基、氨基、甲氨基、二甲氨基、乙酰氨基、氟、氯、溴或碘；y⁴選自：氫、c1～c2烷基、羥基、甲氧基或乙氧基；y⁵選自：氫或c1～c2烷基。

本發(fā)明技術(shù)方案的第三方面是提供含有第一方面所述化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物，該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明的3-芳基-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮亞胺衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽，以及任選的含有藥用載體。其中所述的藥用載體指藥學(xué)領(lǐng)域常用的藥用載體；該藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備：可通過(guò)將本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽與一種或多種藥學(xué)上可接受的固體或液體賦形劑和/或輔劑組合，制成適于人或動(dòng)物使用的任何劑型。本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽在其藥物組合物中的含量通常為0.1％～95％重量百分比。

本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮膚、陰道、直腸等。

給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型或半固體劑型。液體劑型可以是溶液劑(包括真溶液和膠體溶液)、乳劑(包括o/w型、w/o型和復(fù)乳)、混懸劑、注射劑(包括水針劑、粉針劑和輸液)、滴眼劑、滴鼻劑、洗劑和搽劑等；固體劑型可以是片劑(包括普通片、腸溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡騰片、口腔崩解片)、膠囊劑(包括硬膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊)、顆粒劑、散劑、微丸、滴丸、栓劑、膜劑、貼片、氣(粉)霧劑、噴霧劑等；半固體劑型可以是軟膏劑、凝膠劑、糊劑等。

本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽可以制成普通制劑、也制成是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。

為了將本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種賦形劑，包括稀釋劑、黏合劑、潤(rùn)濕劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、助流劑。稀釋劑可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣等；濕潤(rùn)劑可以是水、乙醇、異丙醇等；粘合劑可以是淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纖維素、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、丙烯酸樹(shù)脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解劑可以是干淀粉、微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉等；潤(rùn)滑劑和助流劑可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸鹽、酒石酸、液體石蠟、聚乙二醇等。

還可以將片劑進(jìn)一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。

為了將給藥單元制成膠囊劑，可以將有效成分本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽與稀釋劑、助流劑混合，將混合物直接置于硬膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽先與稀釋劑、黏合劑、崩解劑制成顆?；蛭⑼?，再置于硬膠囊或軟膠囊中。用于制備本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽片劑的各稀釋劑、黏合劑、潤(rùn)濕劑、崩解劑、助流劑品種也可用于制備本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽的膠囊劑。

為將本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽制成注射劑，可以用水、乙醇、異丙醇、丙二醇或它們的混合物作溶劑并加入適量本領(lǐng)域常用的增溶劑、助溶劑、ph調(diào)劑劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑。增溶劑或助溶劑可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羥丙基-β-環(huán)糊精等；ph調(diào)劑劑可以是磷酸鹽、醋酸鹽、鹽酸、氫氧化鈉等；滲透壓調(diào)節(jié)劑可以是氯化鈉、甘露醇、葡萄糖、磷酸鹽、醋酸鹽等。如制備凍干粉針劑，還可加入甘露醇、葡萄糖等作為支撐劑。

此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑或其它添加劑。

為達(dá)到用藥目的，增強(qiáng)治療效果，本發(fā)明的藥物或藥物組合物可用任何公知的給藥方法給藥。

本發(fā)明技術(shù)方案的第四方面是提供本發(fā)明第一方面所述3-芳基-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮亞胺衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽以及第三方面所述藥物組合物在制備流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑方面的應(yīng)用。

本發(fā)明技術(shù)方案的第四方面還提供了4-[(4-甲氧基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮其藥學(xué)上可接受的鹽以及第三方面所述藥物組合物在制備流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑方面的應(yīng)用。

有益技術(shù)效果：

本發(fā)明的3-芳基-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮亞胺衍生物是一類(lèi)具有流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制活性的化合物。

具體實(shí)施方式

以下實(shí)施例旨在說(shuō)明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步限定。

實(shí)施例1

6-甲基煙酰肼的制備

15.12g(100.0mmol)6-甲基煙酸甲酯與5ml乙醇的混合液逐滴加入到18.75g(300.0mmol)80％的水合肼中，滴畢，室溫?cái)嚢?h，旋蒸回收溶劑，加入5ml乙醚，抽濾，干燥，得13.52g白色固體6-甲基煙酰肼，收率90％，m.p.138～140℃。

實(shí)施例2

4-氨基-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮的制備

6.00g(40.0mmol)6-甲基煙酰肼，3.36g(60.0mmol)氫氧化鉀，冰浴下溶于50ml甲醇，逐滴加入4.60g(60.0mmol)二硫化碳與2ml乙醇的混合液，滴畢，室溫?cái)嚢?h，析出固體，抽濾，干燥；將固體溶于7.50g(120.0mmol)80％水合肼，回流，反應(yīng)完全，稀鹽酸中和，析出固體，抽濾，干燥，將粗產(chǎn)物浸入20ml二硫化碳，攪拌30min，抽濾，干燥，得5.73g白色固體4-氨基-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮，收率71％，m.p.264～266℃。¹hnmr(400mhz，dmso+d2o)δ:9.02(d，j＝2.0hz，1h，吡啶環(huán)2-h)，8.26(dd，j＝8.0hz，2.0hz，1h，吡啶環(huán)4-h)，7.44(d，j＝8.0hz，1h，吡啶環(huán)5-h)，2.55(s，3h，ch3)。

實(shí)施例3

4-(苯基亞甲基氨基)-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮的制備

5.0mmol4-氨基-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮，5.1mmol苯甲醛，10ml乙酸，回流5.0h，冷卻，析出固體，抽濾，干燥得黃色固體4-(苯基亞甲基氨基)-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮，收率90％，m.p.222～224℃。¹hnmr(400mhz，cdcl3+d2o)δ:10.25(s，1h，n＝ch)，9.14(d，j＝2.0hz，1h，吡啶環(huán)2-h)，8.17(dd，j＝8.4hz，2.0hz，1h，吡啶環(huán)4-h)，7.88(d，j＝7.6hz，2h，c6h4，2，6-h)，7.57～7.47(m，3h，c6h4，3，4，5-h)，7.31(d，1h，j＝8.4hz，吡啶環(huán)5-h)，2.65(s，3h，ch3)。

實(shí)施例4

4-[(4-氟苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮的制備

按實(shí)施例3方法制備：4-氨基-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮與4-氟苯甲醛反應(yīng)5.0h，得黃色固體4-[(4-氟苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮，收率80％，m.p.242～244℃。¹hnmr(400mhz，cdcl3+d2o)δ:10.26(s，1h，n＝ch)，9.11(d，j＝2.0hz，1h，吡啶環(huán)2-h)，8.14(dd，j＝8.4hz，2.0hz，1h，吡啶環(huán)4-h)，7.89～7.86(q，2h，c6h43，5-h)，7.20～7.16(t，j＝8.4hz，2h，c6h42，6-h)，7.31～7.29(d，j＝8.4hz，1h，吡啶環(huán)5-h)，2.65(s，3h，ch3)。

實(shí)施例5

4-[(4-甲氧基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮的制備

按實(shí)施例3方法制備：4-氨基-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮與4-甲氧基苯甲醛反應(yīng)5.0h，得黃色固體4-[(4-甲氧基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮，收率66％，m.p.238～240℃。¹hnmr(400mhz，cdcl3+d2o)δ:9.99(s，1h，n＝ch)，9.13(d，j＝2.0hz，1h，吡啶環(huán)2-h)，8.17(dd，j＝8.0hz，2.0hz，1h，吡啶環(huán)4-h)，7.84(d，2h，j＝8.4hz，c6h42，6-h)，7.30(d，2h，j＝8.0hz，吡啶環(huán)5-h)，7.00(d，2h，j＝8.4hz，c6h43，5-h)，3.89(s，3h，och3)，2.64(s，3h，ch3)。

實(shí)施例6

4-[(4-二甲基氨基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮的制備

按實(shí)施例3方法制備：4-氨基-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮與4-(二甲基氨基)苯甲醛反應(yīng)5.0h，得黃色固體4-[(4-二甲基氨基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮，收率89％，m.p.233～235℃。¹hnmr(400mhz，cdcl3+d2o)δ:9.63(s，1h，n＝ch)，9.18(d，j＝2.0hz，1h，吡啶環(huán)2-h)，8.23(dd，j＝8.0hz，2.0hz，1h，吡啶環(huán)4-h)，7.75(d，j＝8.4hz，2h，c6h4，3.5-h)，7.29(s，1h)，6.72(d，j＝8.4hz，2h，c6h4，2，6-h)，3.08(s，6h，ch3nch3)，2.65(s，3h，ch3)。

實(shí)施例7

4-[(2-羥基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮的制備

按實(shí)施例3方法制備：4-氨基-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮與2-羥基苯甲醛反應(yīng)2.5h，得黃色固體4-[(2-羥基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮，收率69％，m.p.235～236℃。¹hnmr(400mhz，cdcl3+d2o)δ:10.02(s，1h，n＝ch)，8.90(s，1h，吡啶環(huán)2-h)，8.13(d，j＝8.0hz，1h，吡啶環(huán)4-h)，7.83(d，j＝8.0hz，1h，吡啶環(huán)5-h)，7.46–6.94(m，4h，c6h4)，2.54(s，3h，ch3)。

實(shí)施例8

4-[(3-羥基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮的制備

按實(shí)施例3方法制備：4-氨基-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮與3-羥基苯甲醛反應(yīng)2.0h，得白色固體4-[(3-羥基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮，收率89％，m.p.238～239℃。¹hnmr(400mhz，dmso+d2o)δ:9.69(s，1h，n＝ch)，8.90(s，1h，吡啶環(huán)2-h)，8.12(d，j＝8.0hz，1h，吡啶環(huán)4-h)，7.45(d，j＝8.0hz，1h，吡啶環(huán)5-h)，7.40-7.03(m，4h，c6h4)，2.54(s，3h，ch3)。

實(shí)施例9

4-[(4-羥基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮的制備

按實(shí)施例3方法制備：4-氨基-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮與4-羥基苯甲醛反應(yīng)2.5h，得白色固體4-[(4-羥基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮，收率83.9％，m.p.257～259℃。¹hnmr(400mhz，dmso+d2o)δ:9.46(s，1h，n＝ch)，8.90(s，1h，吡啶環(huán)2-h)，8.12(d，j＝8.0hz，1h，吡啶環(huán)4-h)，7.75(d，j＝8.0hz，2h，c6h42，6-h)，7.43(d，j＝8.0hz，1h，吡啶環(huán)5-h)，6.94(d，j＝8.0hz，2h，c6h43，5-h)，2.53(s，3h，ch3)。

實(shí)施例10

4-[(2，4-二羥基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮的制備

按實(shí)施例3方法制備：4-氨基-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮與2，4-二羥基苯甲醛反應(yīng)2.0h，得淡黃色固體4-[(2，4-二羥基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮，收率74.4％，m.p.258～260℃。¹hnmr(400mhz，dmso+d2o)δ:9.62(s，1h，n＝ch)，8.88(s，1h，吡啶環(huán)2-h)，8.11(d，j＝8.0hz，1h，吡啶環(huán)4-h)，7.68(d，j＝8.0hz，1h，吡啶環(huán)5-h)，7.43(d，j＝8.4hz，1h，c6h36-h)，6.43—6.41(m，2h，c6h33，5-h)，2.53(s，3h，ch3)。

實(shí)施例11

4-[(2，3，4-三羥基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮的制備

按實(shí)施例3方法制備：4-氨基-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮與2，3，4-三羥基苯甲醛反應(yīng)2.0h，得淡黃色固體4-[(2，3，4-三羥基苯基)亞甲基氨基]-3-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮，收率70.3％，m.p.263℃。¹hnmr(400mhz，dmso+d2o)9.60(s，1h，n＝ch)，8.87(s，1h，吡啶環(huán)2-h)，8.10(d，j＝8.0hz，1h，吡啶環(huán)4-h)，7.43(d，j＝8.0hz，吡啶環(huán)5-h)，7.17(d，j＝8.8hz，1h，c6h2)，6.50(d，j＝8.8hz，1h，c6h2)，2.53(s，3h，ch3)。

實(shí)施例12

3-芳基-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮亞胺衍生物及其鹽的抗流感病毒神經(jīng)氨酸酶活性

1.實(shí)驗(yàn)原理

化合物munana是神經(jīng)氨酸酶的特異性底物，在神經(jīng)氨酸酶作用下產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物在360nm照射激發(fā)下，可產(chǎn)生450nm熒光，熒光強(qiáng)度的變化可以靈敏地反映神經(jīng)氨酸酶活性。酶均來(lái)自a/pr/8/34(h1n1)病毒毒株。

2.實(shí)驗(yàn)方法

在酶反應(yīng)體系中，一定濃度樣品與流感病毒神經(jīng)氨酸酶na懸浮于反應(yīng)緩沖液中(ph6.5)，加入熒光底物munana啟動(dòng)反應(yīng)體系，37℃孵育40分鐘后，加反應(yīng)終止液終止反應(yīng)。在激發(fā)波長(zhǎng)360nm和發(fā)射波長(zhǎng)為450nm的參數(shù)條件下，測(cè)定熒光強(qiáng)度值。根據(jù)熒光強(qiáng)度的減少量可以計(jì)算化合物對(duì)na活性的抑制率。

3.檢測(cè)樣品：實(shí)施例化合物

4.活性結(jié)果

實(shí)施例化合物在反應(yīng)系統(tǒng)中檢測(cè)濃度40.0μg/ml時(shí)對(duì)神經(jīng)氨酸酶的抑制率及其ic50值列入下表1：

表13-芳基-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮亞胺衍生物對(duì)神經(jīng)氨酸酶的抑制活性

3-芳基-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮亞胺衍生物具有良好的抗流感病毒神經(jīng)氨酸酶活性，可用于制備流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑。