本發(fā)明屬于藥用高分子材料和生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種茄尼醇衍生物、制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

輔酶q10(簡(jiǎn)寫(xiě)為：coq10)為體內(nèi)細(xì)胞中廣泛存在的脂溶性、維生素類內(nèi)源性物質(zhì)，被稱為泛醌或泛醌利酮，其為黃色結(jié)晶性粉末，不溶于水和甲醇，微溶于乙醇；易溶于丙酮、正己烷、乙醚等極性較小的溶劑中；且對(duì)光照及濕度較為敏感。coq10主要存在于代謝活躍的機(jī)體組織，如心臟、肌肉及免疫組織等細(xì)胞中，其發(fā)揮著諸多的生理生化功能。

科學(xué)研究表明coq10在體內(nèi)可：參與線粒體呼吸鏈中電子的傳遞，抑制脂質(zhì)的過(guò)氧化；促進(jìn)皮膚上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)，降低紫外線損害，延緩皮膚衰老；提高機(jī)體免疫力的效果；抗腫瘤作用；增強(qiáng)心肌能力。同時(shí)coq10可以減少血液中低密度脂蛋白，而提高高密度脂蛋白的活性，減少血管動(dòng)脈硬化的產(chǎn)生，而起到保護(hù)心腦血管的作用。coq10臨床主要用于肌肉神經(jīng)退行性疾病、他汀類藥物引起的橫紋肌溶解的癥狀、頭孢類抗生素及部分抗菌藥導(dǎo)致的雙硫侖樣反應(yīng)及心血管疾病等。其中心血管疾病的預(yù)防及輔助治療是coq10的主要應(yīng)用方向。臨床實(shí)驗(yàn)研究表明機(jī)體內(nèi)coq10的含量與高血壓、心力衰竭及心絞痛的發(fā)生、發(fā)展及疾病病程密切相關(guān)。部分患者由于年齡及服藥等原因?qū)е麦w內(nèi)coq10含量較低，可能出現(xiàn)coq10缺乏性高血壓。此類高血壓在應(yīng)用高血壓藥的同時(shí)，應(yīng)當(dāng)適量補(bǔ)充服用coq10，以維持體內(nèi)含量的穩(wěn)定。對(duì)于心力衰竭及心絞痛的心肌細(xì)胞研究表明心肌細(xì)胞內(nèi)coq10的含量與病程密切相關(guān)。治療心力衰竭及心絞痛時(shí)，同服coq10可起到良好減輕病情的作用。

盡管coq10臨床應(yīng)用眾多，但多作為輔助用藥或保健品使用，一般用藥周期較長(zhǎng)，因此也多采用口服給藥的方式。由于coq10分子量較大(863da)，脂溶性較強(qiáng)，水溶性很差(0.7ng/ml，37℃)等原因，導(dǎo)致其胃腸道粘膜的滲透性較差，吸收不佳。又由于其對(duì)光、熱及氧化物的不穩(wěn)定的化學(xué)性質(zhì)，使coq10的臨床應(yīng)用時(shí)生物利用度較低，嚴(yán)重限制了其藥理活性的的發(fā)揮，難以達(dá)到所期望的藥效。因此，如何有效提高coq10的口服生物利用度是目前臨床口服應(yīng)用coq10面臨的最大問(wèn)題。為提高coq10的口服生物利用度。多年來(lái)，研究人員主要通過(guò)：增加coq10的水溶性、提高coq10的光和熱的穩(wěn)定性、減慢coq10的代謝及增加其胃腸道屏障的滲透性等方面進(jìn)行努力。

茄尼醇作為coq10工業(yè)合成的原料，其結(jié)構(gòu)與coq10存在相同的異戊二烯側(cè)鏈，考慮以其作為聚合物膠束的疏水內(nèi)核可能實(shí)現(xiàn)高負(fù)載coq10。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)其與coq10有相似的藥理作用，如清除氧自由基、抑制氧化反應(yīng)、吸收紫外線等，兩者有可能實(shí)現(xiàn)一定的協(xié)同保護(hù)作用。

聚合物材料在較高濃度時(shí)也有良好的生物相容性，可作為藥物載體使用。本文綜合考慮結(jié)構(gòu)的相似性及藥理活性的一致性，考慮以茄尼醇為原料，得到聚乙二醇化的茄尼醇衍生物用于coq10的包載及傳遞。可得到高負(fù)載量，高穩(wěn)定性，具有一定協(xié)同作用的納米載藥膠束。達(dá)到提高coq10的胃腸道吸收及生物利用度的目的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種茄尼醇衍生物、制備方法及其應(yīng)用。

基于上述目的，本發(fā)明采取了如下技術(shù)方案：

一種茄尼醇衍生物，該衍生物的結(jié)構(gòu)如下：

45≤n≤114，且n取整數(shù)。其中，優(yōu)選n為45或114。

上述茄尼醇衍生物的合成路線如下：

(1)將sol(茄尼醇)和dmap(4-二甲氨基吡啶)溶于二氯甲烷中，n2保護(hù)下將丁二酸酐和三乙胺的dmf混合液滴入前述二氯甲烷溶液中，n2保護(hù)下室溫反應(yīng)至少48h，反應(yīng)結(jié)束后，經(jīng)后處理即得mss，茄尼醇、dmap與丁二酸酐的摩爾比為(5～7)︰(3～4)︰(9～10)；(2)稱取聚乙二醇單甲醚、mss、dcc(二環(huán)己基碳二亞胺)和dmap(4-二甲氨基吡啶)，摩爾比為：1︰2︰2︰1，溶于二氯甲烷中，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)至少48h，反應(yīng)結(jié)束后，常壓過(guò)濾除去沉淀，加入蒸餾水，取二氯甲烷層，減壓旋干，用甲醇：三氯甲烷＝2:1(v/v)的流動(dòng)相復(fù)溶，過(guò)0.22μm有機(jī)濾膜，而后過(guò)凝膠柱，tlc監(jiān)測(cè)產(chǎn)物流出，旋干流動(dòng)相，真空干燥，得淡黃色產(chǎn)物目標(biāo)產(chǎn)物spgs。

前述茄尼醇衍生物作為載藥膠束的應(yīng)用。

本發(fā)明中的茄尼醇衍生物，其中疏水段結(jié)構(gòu)為茄尼醇

聚乙二醇單甲醚優(yōu)選n為45或114，即mn＝2000da或5000da。

本發(fā)明中茄尼醇衍生物，屬于a-b型聚合物。

本發(fā)明提供了兩種分子量茄尼醇衍生物嵌段聚合物，并以此為材料制備了空白和載coq10的聚合物膠束系統(tǒng)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)該系統(tǒng)的理化性質(zhì)、細(xì)胞毒性等一系列考察，所得到的聚合物膠束的具有良好的稀釋穩(wěn)定性、儲(chǔ)存穩(wěn)定性及光穩(wěn)定性。并且考察了聚合物材料的細(xì)胞毒性，結(jié)果表明，聚合物材料在較高濃度時(shí)也有良好的生物相容性，可作為藥物的載體使用。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：聚合物膠束是由兩親性嵌段聚合物大分子自組裝形成的，具有核-殼結(jié)構(gòu)的納米級(jí)粒子，其疏水內(nèi)核可以作為以coq10為代表的疏水性藥物的儲(chǔ)存庫(kù)。其作為coq10的藥物載，可有效提高coq10等疏水性藥物的水溶性，增加胃腸道的滲透性；減少藥物與外界環(huán)境的接觸，提高其理化穩(wěn)定性；利用其納米級(jí)的粒徑結(jié)構(gòu)，增加胃腸道對(duì)輔酶q10的吸收利用，提高其生物利用度及藥效等。

本發(fā)明的茄尼醇衍生物的載藥對(duì)象為輔酶q10，但并不局限于coq10，也可是其他脂溶性藥物(如阿霉素、紫杉醇、姜黃素等)。本發(fā)明以sd大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象的藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)考察聚合物膠束對(duì)coq10生物利用度的影響，結(jié)果證明：利用本發(fā)明制備的茄尼醇衍生物負(fù)載coq10的膠束可增加胃腸道對(duì)coq10的吸收，減慢coq10的代謝速度，將coq10的生物利用度提高3倍以上。

附圖說(shuō)明

圖1為中間產(chǎn)物(a)mss、實(shí)施例1制得的目標(biāo)產(chǎn)物(b)spgs-2k及實(shí)施例2制得的目標(biāo)產(chǎn)物(c)spgs-5k的¹h-nmr圖譜；

圖2為嵌段聚合物spgs載藥前后的粒徑：(a)spgs-2k及coq10-spgs-2k；(b)spgs-5k及coq10-spgs-5k；

圖3coq10-水懸浮液及coq10-spgs水溶液的外觀：(a)coq10-水懸浮液，(b)coq10-spgs-2k水溶液，(c)coq10-spgs-5k水溶液；

圖4為dls檢測(cè)不同稀釋倍數(shù)下coq10-spgs-2k和coq10-spgs-5k的膠體穩(wěn)定性；

圖5為載藥膠束在25℃及4℃下儲(chǔ)存時(shí)粒徑變化：(a)25℃，(b)4℃；

圖6為coq10光降解剩余百分含量；

圖7為spgs-2k和spgs-5k的細(xì)胞毒性(時(shí)間為48h，n＝3)；

圖8為coq10各制劑的藥物濃度--時(shí)間曲線。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合具體實(shí)例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此。

實(shí)施例1

一種茄尼醇衍生物，該衍生物結(jié)構(gòu)如下：

上述茄尼醇衍生物的合成路線如下：

具體合成步驟如下：

(1)稱取4.0gsol(茄尼醇)和0.4gdmap(4-二甲氨基吡啶)溶于約25ml無(wú)水ch2cl2中，n2保護(hù)下將1.0g丁二酸酐和1.0ml三乙胺的15mldmf混合液用恒壓滴液漏斗滴入前述ch2cl2溶液中，室溫反應(yīng)48h，反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液轉(zhuǎn)入漏斗中，加入30ml蒸餾水洗滌，靜置，取ch2cl2層，重復(fù)操作兩次，旋蒸除去溶劑。用石油醚:乙酸乙酯＝1:1(v/v)為流動(dòng)相過(guò)硅膠柱，tlc監(jiān)測(cè)產(chǎn)物流出，旋干流動(dòng)相，真空干燥，得淡黃色目標(biāo)產(chǎn)物mss(茄琥酯)，產(chǎn)率：60wt％。

(2)稱取1.60g聚乙二醇單甲醚(mn＝2000da)、1.15gmss(茄琥酯)、0.33gdcc(二環(huán)己基碳二亞胺)、0.05gdmap(4-二甲氨基吡啶)溶于30ml二氯甲烷中，室溫?cái)嚢?8h，反應(yīng)結(jié)束后，常壓過(guò)濾除去沉淀，加入30ml蒸餾水，取二氯甲烷層，減壓旋干，用甲醇︰三氯甲烷＝2︰1(v/v)的流動(dòng)相復(fù)溶，過(guò)0.22μm有機(jī)濾膜，而后過(guò)凝膠柱，tlc監(jiān)測(cè)產(chǎn)物流出，旋干流動(dòng)相，真空干燥，得淡黃色產(chǎn)物目標(biāo)產(chǎn)物spgs-2k，產(chǎn)率：65.6wt％。

實(shí)施例2

一種茄尼醇衍生物，該衍生物結(jié)構(gòu)如下：

上述茄尼醇衍生物的合成路線如下：

具體合成步驟如下：

(1)稱取4.0gsol(茄尼醇)和0.4gdmap(4-二甲氨基吡啶)溶于約25ml無(wú)水ch2cl2中，n2保護(hù)下將1.0g丁二酸酐和1.0ml三乙胺的15mldmf混合液用恒壓滴液漏斗滴入前述ch2cl2溶液中，室溫反應(yīng)48h，反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液轉(zhuǎn)入漏斗中，加入30ml蒸餾水洗滌，靜置，取ch2cl2層，重復(fù)操作兩次，旋蒸除去溶劑。用石油醚:乙酸乙酯＝1:1(v/v)為流動(dòng)相過(guò)硅膠柱，tlc監(jiān)測(cè)產(chǎn)物流出，旋干流動(dòng)相，真空干燥，得淡黃色目標(biāo)產(chǎn)物mss(茄琥酯)，產(chǎn)率：60wt％。

(2)稱取4.0g聚乙二醇單甲醚(mn＝5000da)、1.15gmss(茄琥酯)、0.33gdcc(二環(huán)己基碳二亞胺)、0.05gdmap溶于30ml二氯甲烷中，室溫?cái)嚢?8h，反應(yīng)結(jié)束后，常壓過(guò)濾除去沉淀，加入30ml蒸餾水，取二氯甲烷層，減壓旋干，用甲醇:三氯甲烷＝2：1(v/v)的流動(dòng)相復(fù)溶，過(guò)0.22μm有機(jī)濾膜，而后過(guò)凝膠柱，tlc監(jiān)測(cè)產(chǎn)物流出，旋干流動(dòng)相，真空干燥，得淡黃色產(chǎn)物目標(biāo)產(chǎn)物spgs-2k，產(chǎn)率：60.6wt％。

圖1為茄琥酯mss、聚合物spgs-2k和spgs-5k的核磁圖譜，(a)中mss核磁與原料sol相比，δ＝1.60ppm(ch3-c＝c-)、δ＝5.42ppm(-ch2c＝c-h)、δ＝2.10ppm(-c＝cch2ch2c＝c-)、δ＝1.70ppm(ch3ch3c＝c-)、δ＝5.11ppm(c-c-c＝c-h)處的sol結(jié)構(gòu)中質(zhì)子峰仍然存在。而sol中羥基旁的亞甲基峰，在mss中(-cooch2-)由于酯鍵的形成由sol中的δ＝4.15ppm向低場(chǎng)高位移移動(dòng)至δ＝4.62ppm處；同時(shí)δ＝2.65ppm處亞甲基質(zhì)子(-oocch2ch2coo)峰的出現(xiàn)，說(shuō)明了由sol已成功合成了mss(茄琥酯)。(b)及(c)與mss的核磁圖譜比較可以發(fā)現(xiàn)有如下特點(diǎn)：①在δ＝4.25ppm處出現(xiàn)了新的酯鍵旁亞甲基質(zhì)子峰；②在δ＝3.38-3.82范圍內(nèi)出現(xiàn)了mpeg質(zhì)子特征峰，綜上可以斷定兩親性嵌段聚合物spgs-2k或spgs-5k的成功合成與分離。

空白膠束的制備及粒徑的表征

采用自乳化溶劑揮發(fā)法制備空白膠束，具體為：取40.0mg實(shí)施例1制得的spgs-2k(或?qū)嵤├?制得的spgs-5k)溶于1ml丙酮中，緩慢滴于20ml去離子水中，常溫?fù)]發(fā)24h或減壓揮發(fā)，經(jīng)0.45μm及0.22μm水系濾膜過(guò)濾即得空白膠束溶液。取3ml左右采用激光粒度儀測(cè)定膠束粒徑及粒徑分布。

載輔酶q10膠束的制備及粒徑的表征

分別稱取實(shí)施例1制得的40.0mgspgs-2k(或?qū)嵤├?制得的40mgspgs-5k)和40.0mg輔酶q10分別溶于1ml丙酮，混合均勻，緩慢滴加于20ml去離子水中，常溫?fù)]發(fā)24h或減壓揮發(fā)，經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾即得載藥膠束溶液(分別記作coq10-spgs-2k、coq10-spgs-5k)。取3ml左右采用激光粒度儀測(cè)定膠束粒徑及粒徑分布。

由圖2可知空白膠束粒徑在105nm左右，且pdi較小，膠束粒徑分布較窄。spgs-5k空白膠束粒徑稍大于spgs-2k，可能是由于其peg段稍長(zhǎng)，但peg段在水中并未完全展開(kāi)，導(dǎo)致其粒徑增加并不明顯。載藥膠束粒徑在183nm左右，與空白膠束相比出現(xiàn)明顯增加。比較載藥前后膠束pdi的變化可以發(fā)現(xiàn)載藥后的pdi均明顯小于載藥前，可能是由于藥物的負(fù)載使膠束內(nèi)核作用增強(qiáng)，同時(shí)由于材料本身親水段稍大，輔酶q10的加入相當(dāng)于延長(zhǎng)了疏水段，對(duì)膠束粒子粒徑有一定均一化作用，進(jìn)而使分布變窄。

載輔酶q10膠束水溶液及輔酶q10-水混懸液的外觀

由圖3中coq10-水混懸液(輔酶q10濃度為1.0mg/ml)和coq10-spgs制劑的水溶液(輔酶q10濃度均為1.0mg/ml)的外觀可以發(fā)現(xiàn)，黃色coq10裸藥粉末不溶于水，部分漂浮與水上或沉于底部。這是由于coq10分子量較大，具有很強(qiáng)的油脂性，導(dǎo)致其水溶性極低(0.7ng/ml，37℃)。而coq10-spgs制劑可以明顯提高coq10的水溶性，制劑水溶液中coq10最高濃度可達(dá)4mg/ml。

稀釋穩(wěn)定性考察

載藥膠束液(輔酶q10濃度為：1.5mg/ml)用去離子水分別稀釋至x0、x10、x50、x200、x1000倍，經(jīng)激光粒度儀測(cè)定粒徑及其分布變化，考察比較膠束的稀釋穩(wěn)定性，模擬其在被大量稀釋條件下保持膠束結(jié)構(gòu)和粒徑穩(wěn)定的能力。dls法測(cè)定了不同稀釋倍數(shù)下水合粒徑的變化。結(jié)果如圖4所示，對(duì)于載藥膠束coq10-spgs-2k及coq10-spgs-5k發(fā)現(xiàn)即使稀釋倍數(shù)達(dá)到1000倍，材料濃度低于其cac時(shí)，膠束水合粒徑及其分布仍能保持穩(wěn)定，基本沒(méi)有變化。由于coq10結(jié)構(gòu)與茄尼醇的高度相似性，coq10的加入對(duì)膠束起到了較好的穩(wěn)定性作用，與空白膠束相比其耐稀釋的能力明顯增加。這一點(diǎn)也為其體內(nèi)應(yīng)用提供了一定的可能性。

儲(chǔ)存穩(wěn)定性考察

量取2份載藥膠束溶液(輔酶q10濃度為1.5mg/ml)各20ml，加入少量疊氮鈉溶液后，分別置于4℃和25℃(室溫)儲(chǔ)存；于第1d、5d、10d、15d、30d進(jìn)行外觀檢查、粒徑測(cè)定及其分布測(cè)定，以考察載藥膠束的膠體穩(wěn)定性，結(jié)果見(jiàn)圖5。由圖5可知在室溫(25℃)及冷藏條件(4℃)下30d內(nèi)兩種制劑的粒徑變化均在10nm以內(nèi)，且粒徑分布也無(wú)明顯變化。因此可以認(rèn)為coq10-spgs-2k和coq10-spgs-5k已具有適當(dāng)?shù)哪z體穩(wěn)定性。

光穩(wěn)定性考察

載藥制劑光穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)在yp-250gsp型穩(wěn)定性試驗(yàn)箱中進(jìn)行。在模擬自然光4500±500lx照射條件下，分別取10ml的coq10-spgs-2k(輔酶q10濃度為0.2mg/ml)、coq10-spgs-5k(輔酶q10濃度為0.2mg/ml)、coq10-乙醇液(輔酶q10濃度為0.2mg/ml)及coq10-水液(輔酶q10濃度為0.2mg/ml)于試驗(yàn)箱中，燈管距離25cm，考察溫度25℃。隨后，分別于0h、2h、4h、6h、12h、24h取樣，乙醇稀釋溶解處理。用紫外全波長(zhǎng)掃描及高效液相色譜(hplc)進(jìn)樣分析，確定coq10含量的變化，并進(jìn)行一級(jí)動(dòng)力學(xué)降解擬合，以確定不同制劑中coq10的降解速度。

因?yàn)閏oq10為光敏感性藥物，光照下產(chǎn)生超氧化物(ros)及單線態(tài)氧而發(fā)生降解?？疾熘苿┲衏oq10光穩(wěn)定性結(jié)果如圖6所示，發(fā)現(xiàn)在乙醇溶液和水溶液中coq10降解較快，24h降解剩余分別為54.35％及28.25％。兩者降解速度的差別可能由于溶劑作用，在不同溶劑中降解速度是不同的。而coq10-spgs-2k及coq10-spgs-5k中，經(jīng)24h光照處理后，coq10的含量仍接近起始量的88％以上，體現(xiàn)了良好的光穩(wěn)定性。產(chǎn)生這一現(xiàn)象的原因可能是由于聚合物材料疏水段茄尼醇的紫外吸收作用，茄尼醇結(jié)構(gòu)中有大量雙鍵結(jié)構(gòu)，能有效的吸收紫外輻射，清除氧自由基，從而減少coq10的光降解速度。同時(shí)由于膠束結(jié)構(gòu)的存在可以產(chǎn)生一定的屏障作用減少紫外線及活性氧對(duì)藥物的影響。

聚合物膠束的體外細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)

mtt細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，使用人正常肝細(xì)胞(hl-7702)和人肝癌細(xì)胞(hepg-2)用于評(píng)價(jià)聚合物材料的生物相容性。取處于指數(shù)生長(zhǎng)期的hl-7702細(xì)胞或hepg-2細(xì)胞接種到96孔板上，每孔細(xì)胞數(shù)為4×10⁴個(gè)。培養(yǎng)24h后(37℃、5％co2)，分別加入含有濃度梯度為：0.0024g/l、0.024g/l、0.12g/l、0.24g/l、0.36g/l的聚合物空白膠束液培養(yǎng)基100μl。每個(gè)濃度均設(shè)3個(gè)復(fù)孔，同時(shí)用未經(jīng)空白膠束液處理的細(xì)胞作為對(duì)照。加入樣品以后繼續(xù)培養(yǎng)48h(37℃、5％co2)，進(jìn)行mtt檢測(cè)：每孔加mtt溶液(0.5g/l，基礎(chǔ)培養(yǎng)基溶解)100μl。繼續(xù)孵育4h后，終止培養(yǎng)。小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液,每孔加100μldmso，輕輕振蕩5min，使甲臜結(jié)晶物充分溶解提取。在酶聯(lián)免疫監(jiān)測(cè)儀上測(cè)定各孔570nm處od值，利用各吸收值及空白對(duì)照組吸光度平均值為基礎(chǔ)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)組吸光度平均值計(jì)算各濃度下細(xì)胞存活率，考察聚合物材料的細(xì)胞毒性大小。

spgs聚合物材料的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖7所示，spgs-2k對(duì)于hepg-2細(xì)胞及hl-7702細(xì)胞的ic50分別為0.532g/l及1.0410g/l；spgs-5k對(duì)hepg-2細(xì)胞及hl-7702細(xì)胞的ic50分別為0.6382g/l及1.362g/l。可以證明spgs-2k和spgs-5k為生物相容性較好，可作為安全的聚合物載體材料。

載輔酶q10聚合物膠束的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià)

sd大鼠18只，隨機(jī)分成三組：coq10原藥組、coq10-spgs-2k實(shí)驗(yàn)組、coq10-spgs-5k實(shí)驗(yàn)組，每組各6只；給藥劑量：65mg/kg。實(shí)驗(yàn)前一天晚上8點(diǎn)開(kāi)始禁食不禁水，第二天早上8點(diǎn)按計(jì)量給藥，分別于20min、40min、70min、120min、240min、360min、480min、600min、720min、1440min眼眶靜脈叢取血0.4ml左右，置于肝素化的離心管中，以3500rmp離心5min分離取上層血漿(可-20℃冷凍保存)。精密量取200μl血漿樣品于4ml肝素化的離心管中，加入35μl濃度為6.40μg/ml的vk1標(biāo)準(zhǔn)液；渦旋1min，混勻后加入400μl甲醇用于沉蛋白。渦旋1min混勻后，加入1ml正己烷，渦旋3min，超聲5min，5000rpm離心10min，取正己烷層于ep管中；再次加入1ml正己烷，重復(fù)以上操作。合并正己烷層，于氮?dú)獗Ｗo(hù)下?lián)]發(fā)干后，加入100μl乙腈復(fù)溶，20μl進(jìn)樣，hplc測(cè)定。

圖8為兩種制劑和coq10-混懸液灌胃給藥后，血藥濃度c與時(shí)間曲線圖。2圖8可知，coq10的cmc-na混懸液的cmax、tmax及auc0-24h分別為0.212±0.023μg/ml、210±120.564min及110.094±15.822μg/ml·min，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。coq10-spgs-2k的cmax、tmax及auc0-24h分別為0.735±0.072μg/ml、150.0±60.00min及379.33±45.09μg/ml·min；其中coq10-spgs-2k的cmax及auc0-24h均高于coq10裸藥組，而tmax對(duì)于兩組來(lái)說(shuō)基本沒(méi)有差別。coq10-spgs-5k表現(xiàn)出了和coq10-spgs-2k相似的結(jié)果，說(shuō)明了膠束制劑可以明顯促進(jìn)coq10的胃腸道吸收，顯著提高coq10的生物利用度，可達(dá)到coq10裸藥的生物利用度的3倍以上，但對(duì)吸收速度基本沒(méi)有影響。膠束制劑組的血藥清除率約為0.08l/min/kg，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于0.32l/min/kg，且coq10組的mrt為412.085±14.046min，小于coq10-spgs-2k的422.765±53.862min及coq10-spgs-5k的471.118±82.335min，說(shuō)明了膠束制劑明顯延長(zhǎng)了coq10的血液循環(huán)時(shí)間，減小了其被清除的速度。coq10-spgs提高coq10的生物利用度和峰濃度的主要原因可能是由于聚合物膠束的納米結(jié)構(gòu)增加了coq10的水溶性及胃腸道滲透性，同時(shí)納米粒子具有較強(qiáng)的胃腸道粘附能力，可延長(zhǎng)胃腸道隨coq10的吸收時(shí)間，從而提高coq10的生物利用度。