本發(fā)明屬于化學(xué)合成技術(shù)領(lǐng)域，涉及在治療和預(yù)防動脈粥樣硬化、肝硬化、高血壓中用作降低血漿總膽固醇藥物的3,4-二芳基馬來酰亞胺衍生物及其制備方法與應(yīng)用

背景技術(shù)：

心腦血管疾病是當(dāng)今危害人類生命健康的第一大殺手，由血脂代謝紊亂所引起的高血脂癥是引發(fā)動脈粥樣硬化、肝硬化、高血壓等心腦血管疾病的重要原因之一。目前臨床上所使用的降膽固醇藥物主要有他汀類藥物、貝特類藥物、煙酸衍生物及膽酸螯合劑，但這些藥物的副作用也很明顯，特別是他汀類藥物中的西立伐他汀由于橫紋肌溶解的副作用造成多例臨床死亡的病例。(3R,4S)-1-(4-氟苯基)-3-[(3S)-3-(4-氟苯基)-3-羥丙基]-4-(4-羥苯基)-2-氮雜環(huán)丁酮(依澤替米貝，Ezetimibe，Zetia^TM)是Merck/Schering-Plough公司研制的新型膽固醇吸收抑制劑，于2002年11月在德國上市，同期在美國上市。該藥選擇性地抑制了膽固醇在腸道內(nèi)的吸收，從而達(dá)到降低血清中膽固醇的目的，發(fā)揮降血脂作用。依澤替米貝是目前唯一上市的膽固醇吸收抑制劑，但其不能有效地逆轉(zhuǎn)動脈粥樣硬化、有潛在的安全性風(fēng)險等問題。因此，尋求活性更強(qiáng)的膽固醇吸收抑制劑具有重要研究意義和應(yīng)用前景。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一類新的膽固醇吸收抑制劑—3,4-二芳基馬來酰亞胺衍生物，且其抑制活性更強(qiáng)。

本發(fā)明還要解決的技術(shù)問題是提供上述3,4-二芳基馬來酰亞胺衍生物的制備方法。

本發(fā)明最后要解決的技術(shù)問題是提供上述3,4-二芳基馬來酰亞胺衍生物的應(yīng)用。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

3,4-二芳基馬來酰亞胺衍生物，它是由通式(I)表示的化合物及其可藥用鹽：

其中，n為0、2、3或4；

R₁取代基獨(dú)立選自包括：-OR₂、-O(CO)R₂、-O(CO)OR₂、-O(CH₂)_1～5OR₂、-O(CH₂)_1～2O-、-O(CO)NR₂R₃、-NR₂R₃、-NR₂(CO)R₃、-NR₂(CO)OR₃、-NR₂(CO)NR₃R₄、-NR₂SO₂-低級烷基、-NR₂SO₂-芳基、-CONR₂R₃、-COR₂、-SO₃Na、-SO₂NR₂R₃、S(O)_0～2-芳基、-O(CH₂)_1～10COOR₂、-O(CH₂)_1～10CONR₂R₃、氫、鄰-鹵代、間-鹵代、對-鹵代、鄰-低級烷基、間-低級烷基、對-低級烷基、芳基、-NO₂、-OCF₃、-CF₃、-低級亞烷基-COOR₂或-CH＝CH-COOR₂；

R₂、R₃、R₄獨(dú)立選自：氫、低級烷基、芳基或芳基取代的低級烷基；

所述的低級烷基為C1～C6直鏈烷基或總碳數(shù)為C1～C6帶支鏈的烷基，例如甲基、乙基、正丙級、異丙基、叔丁基、正戊基或正己基；優(yōu)選C1～C3直鏈烷基或C1～C3帶支鏈的烷烴。更優(yōu)選是甲基、乙基或正丙級。

所述的低級亞烷基為C1～C6亞烷基，如亞甲基、1,2-亞乙基、1,3-亞丙基、1,4-亞丁基、1,5-亞戊基或1,6-亞己基等。

3,4-二芳基馬來酰亞胺衍生物優(yōu)選的方案是，

N為0、2、3或4，R₁-為-H、-SO₃Na或-N(C₂H₅)₂；

上述3,4-二芳基馬來酰亞胺衍生物，最優(yōu)選以下任一化合物或其可藥用鹽或其藥學(xué)上可接受的載體：

3-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3,3-二甲苯丙基)-4-(4-羥基苯基)-1H-吡咯烷-2,5-二酮(I-1)；

3-(4-(2-(二乙胺基)乙氧基)苯基)-4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3,3-二苯基丙基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮(I-2)；

3-(4-(2-(二乙胺基)丙氧基)苯基)-4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3,3-二苯基丙基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮(I-3)；

3-(4-(2-(二乙胺基)丁氧基)苯基)-4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3,3-二苯基丙基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮(I-4)；

2-(4-(4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3,3-二苯基丙基)-2,5-二氧-2,5-二氫-1H-吡咯烷)苯氧基)乙磺酸鈉(I-5)；

2-(4-(4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3,3-二苯基丙基)-2,5-二氧-2,5-二氫-1H-吡咯烷)苯氧基)丙磺酸鈉(I-6)；

2-(4-(4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3,3-二苯基丙基)-2,5-二氧-2,5-二氫-1H-吡咯烷)苯氧基)丁磺酸鈉(I-7)。

上述化合物I-1～I(xiàn)-7的R₁-的基團(tuán)與結(jié)構(gòu)式選擇見表1。

表1

上述3,4-二芳基馬來酰亞胺衍生物的制備方法，它包括如下步驟：

(a)以化合物1(對氟苯乙酮)為起始原料，經(jīng)過溴代反應(yīng)得到化合物2(α-溴代對氟苯乙酮)；化合物2與疊氮化鈉反應(yīng)得到化合物3；化合物3在常溫常壓下，鈀碳催化氫化后再與鹽酸成鹽得到化合物4；

(b)以化合物5為起始原料，在LiOH作用下水解得到化合物6；

(c)步驟(a)制得的化合物4與步驟(b)制得的化合物6通過縮合反應(yīng)得到化合物7，化合物7發(fā)生分子內(nèi)縮合反應(yīng)，得到化合物8(乙?；Ｗo(hù)的二苯基吡咯烷酮)，化合物8在甲醇鈉作用下脫去保護(hù)基得到化合物9(二苯基吡咯烷酮)，化合物9低溫下氧化得到化合物10；

(d)以化合物11為起始原料，與溴代乙酸乙酯反應(yīng)得到二苯基中間體12；經(jīng)過酯的還原得到中間體13，再與對甲苯磺酰氯反應(yīng)得到中間體14；

(e)化合物14與步驟(c)制得的化合物10在K₂CO₃條件下反應(yīng)得到PMB保護(hù)的中間體15；化合物15在硝酸鈰銨催化下脫保護(hù)基后得到化合物16；

(f)以K₂CO₃為堿，化合物16與不同長度的碳鏈連接得到中間體17；化合物17分別與二乙胺連接，得到化合物I-2～I(xiàn)-4；化合物17分別與亞硫酸鈉反應(yīng)得到化合物I-5～I(xiàn)-7。

n為0、2、3或4；

R₁代表1個取代基，它們獨(dú)立選自包括：-OR₂、-O(CO)R₂、-O(CO)OR₂、-O(CH₂)_1～5OR₂、-O(CH₂)_1～2O-、-O(CO)NR₂R₃、-NR₂R₃、-NR₂(CO)R₃、-NR₂(CO)OR₃、-NR₂(CO)NR₃R₄、-NR₂SO₂-低級烷基、-NR₂SO₂-芳基、-CONR₂R₃、-COR₂、-SO₃Na、-SO₂NR₂R₃、S(O)_0～2-芳基、-O(CH₂)_1～10COOR₂、-O(CH₂)_1～10CONR₂R₃、氫、鄰-鹵代、間-鹵代、對-鹵代、鄰-低級烷基、間-低級烷基、對-低級烷基、芳基、-NO₂、-OCF₃、-CF₃、-低級亞烷基-COOR₂或-CH＝CH-COOR₂；

R₂、R₃、R₄獨(dú)立選自：氫、低級烷基、芳基或芳基取代的低級烷基；

所述的低級烷基為C1～C6直鏈烷基或總碳數(shù)為C1～C6帶支鏈的烷基，例如甲基、乙基、正丙級、異丙基、叔丁基、正戊基或正己基；優(yōu)選C1～C3直鏈烷基或C1～C3帶支鏈的烷烴。更優(yōu)選是甲基、乙基或正丙級。

所述的低級亞烷基為C1～C6亞烷基，如亞甲基、1,2-亞乙基、1,3-亞丙基、1,4-亞丁基、1,5-亞戊基或1,6-亞己基等。

步驟(a)中，由化合物1制備化合物2的過程中，溴的摩爾量是對氟苯乙酮的1～1.1倍，反應(yīng)時間是8～10h，反應(yīng)溫度為室溫；

步驟(a)中，由化合物2制備化合物3的過程中，疊氮化鈉的摩爾量是化合物2的1.2～1.5倍，反應(yīng)時間是6h，反應(yīng)溫度為-5℃～5℃；

步驟(a)中，由化合物3制備化合物4的過程中，HCl的摩爾量是化合物3的2～4倍，鈀碳的用量為催化量，反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時間為6～12h；

步驟(b)中，由化合物5制備化合物6的過程中，LiOH的摩爾量是化合物5的1.5～3倍，反應(yīng)時間是4～8h，反應(yīng)溫度是室溫；

步驟(c)中，由化合物4和化合物6縮合制備化合物7的過程中，化合物6的摩爾量是化合物4的1～1.5倍，反應(yīng)時間是5～10h，反應(yīng)溫度為室溫；

步驟(c)中，由化合物7制備化合物8的過程中，三乙胺的摩爾量是化合物7的5～10倍，反應(yīng)時間是3～8h，反應(yīng)溫度是60℃～90℃；

步驟(c)中，由化合物8制備化合物9的過程中，甲醇鈉的摩爾量是化合物8的1～1.5倍，反應(yīng)時間是1～4h，反應(yīng)溫度是-10℃～10℃，反應(yīng)結(jié)束后用與甲醇鈉等摩爾量的CH₃COOH終止反應(yīng)；

步驟(c)中，由化合物9制備化合物10的過程中，有機(jī)堿的摩爾量是化合物9的1～3倍，選擇的有機(jī)堿可以是NaH、CH₃ONa、t-BuOK或DBU，優(yōu)選NaH，反應(yīng)選擇的無水試劑可以是DMF、CH₃OH、t-BuOH或CH₃CN，優(yōu)選DMF，反應(yīng)時間是0.5～1.5h，反應(yīng)溫度為-5℃～5℃，該反應(yīng)必須在氧氣存在的條件下進(jìn)行；

步驟(d)中，由化合物11制備化合物12的過程中，鋅粉的摩爾量是化合物11的1～2倍，TMSCl的摩爾量是化合物11的0.1～0.2倍，溴代乙酸乙酯摩爾量是化合物11的1～1.5倍，反應(yīng)時間是6～10h，反應(yīng)溫度30℃～50℃；

步驟(d)中，由化合物12制備化合物13的過程中，LiAlH₄的摩爾量是化合物12的1～4倍，反應(yīng)時間是2～6h，反應(yīng)溫度是-5℃～5℃；

步驟(d)中，由化合物13制備化合物14的過程中，對甲苯磺酰氯的摩爾量是化合物13的1～1.5倍，DMAP的摩爾量是催化量，三乙胺摩爾量是化合物13的1.5～3倍，反應(yīng)溫度是5℃～30℃，反應(yīng)時間為6～12h；

步驟(e)中，由化合物14制備化合物15的過程中，步驟(c)中制得的化合物10的摩爾量是化合物14的1～1.5倍，K₂CO₃的摩爾量是化合物14的1.5～3倍，四丁基溴化銨的摩爾量是催化量，反應(yīng)時間是8～11h，反應(yīng)溫度是50℃～80℃；

步驟(e)中，由化合物15制備化合物16的過程中，硝酸鈰銨的摩爾量是化合物的2～5倍，反應(yīng)時間是1～2h，反應(yīng)溫度是-5℃～10℃；

步驟(f)中，由化合物16制備化合物17的過程中，所述的不同長度的碳鏈為1,2-二溴乙烷、1,3二溴丙烷或者1,4二溴丁烷；其中，1,2-二溴乙烷、1,3二溴丙烷或者1,4二溴丁烷的摩爾量是化合物16的3～8倍，無機(jī)堿優(yōu)選K₂CO₃，其摩爾量是化合物16的1～3倍，反應(yīng)時間是8～12h，反應(yīng)溫度是80℃～100℃；

步驟(f)中，由化合物17制備3,4-二芳基馬來酰亞胺衍生物I-2～I(xiàn)-4的過程中，化合物17二乙胺和K₂CO₃的摩爾比為1:1～3:1～3，反應(yīng)時間6～12h，反應(yīng)溫度60℃～90℃。由化合物17制備3,4-二芳基馬來酰亞胺衍生物I-5～I(xiàn)-7的過程中，化合物17和亞硫酸鈉的摩爾比為1:2～6，反應(yīng)時間為6～12h，反應(yīng)溫度為60～100℃。

上述3,4-二芳基馬來酰亞胺衍生物或其可藥用鹽或其藥學(xué)上可接受的載體在制備治療或預(yù)防動脈粥樣硬化或降低血漿膽固醇水平的藥物中的應(yīng)用。藥學(xué)上可接受的載體是指一種或幾種惰性，非毒性的固體或液體填充物、稀釋劑、助劑等，它們不可逆與活性化合物或病人發(fā)生作用。

其藥物劑型為片劑、膠囊、丸劑、栓劑、軟膠囊、口服液、混懸劑或注射液等藥劑學(xué)上常用劑型?？诜盟幤湍z囊含有傳統(tǒng)的賦形劑如填充物、稀釋劑、潤滑劑、分散劑以及粘合劑?？蓞⒄毡绢I(lǐng)域中熟知的方法進(jìn)行制備。

本發(fā)明活性化合物的劑量將因配方而異。一般的，證明有利的量為達(dá)到所需結(jié)果，每千克體重每24小時給藥通式(I)化合物的總量為約0.01～100mg，優(yōu)選總量為0.1～50mg。如果必要，以幾次單劑量的形式給藥。然而如果必要，也可以偏離上述用量，即這取決于待治療的受試者的類型和體重、個體對藥物的行為、疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重性、制劑和給藥類型以及給藥時間和間隔。

有益效果：本發(fā)明的3,4-二芳基馬來酰亞胺衍生物可以應(yīng)用于治療或預(yù)防動脈粥樣硬化或降低血漿膽固醇水平，其降低血漿膽固醇活性更強(qiáng)，市場前景更廣闊。

具體實(shí)施方式

根據(jù)下述實(shí)施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí)施例所描述的內(nèi)容僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會限制權(quán)利要求書中所詳細(xì)描述的本發(fā)明。

實(shí)施例1：2-溴-1-(4-氟苯基)乙酮的制備

將20g(144.7mmol)對氟苯乙酮溶于200mL乙腈中，緩慢滴加23.12g(144.7mmol)Br₂的50mL乙腈溶液，室溫下攪拌過夜。反應(yīng)完全后，濃縮除去反應(yīng)液，乙酸乙酯復(fù)溶，用飽和食鹽水洗三次，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸餾除去溶劑，得到的白色油狀物在低溫下固化，用100mL正己烷加1mL乙酸乙酯打漿，過濾得白色固體28g，收率：89.2％，mp：40-41℃。

¹H-NMR(300M，CDCl₃):4.40(s,2H,-CH₂-),7.17(m,2H,Ar-H),8.02(m,2H,Ar-H)；MS:calcd.m/z[M]215.96,found m/z[M-H]^-215.0.

實(shí)施例2：2-疊氮基-1-(4-氟苯基)乙酮的制備

將31.59g(146mmol)2-溴-1-(4-氟苯基)乙酮溶于150mL的甲醇中，0℃下緩慢加入50mL的11.38g(175mmol)NaN₃水溶液，室溫下攪拌反應(yīng)過夜。反應(yīng)完全后，0℃下緩慢滴加50mL水，有大量的白色固體析出，過濾，烘干，得到25.25g，收率：96.6％。

¹H-NMR(300M，CDCl₃):4.52(s,2H,-CH2-),7.17(m,2H,Ar-H),7.94(m,2H,Ar-H)；MS:calcd.m/z[M]179.05,found m/z[M+H]⁺180.0.、

實(shí)施例3：2-氨基-1-(4-氟苯基)乙酮鹽酸鹽的制備

將25.25g(141mmol)2-疊氮基-1-(4-氟苯基)乙酮溶于100mL甲醇中，緩慢滴加42.85g(423mmol)濃鹽酸(濃度36％)，加入2g Pd/C，常溫下催化氫化。反應(yīng)完全后，過濾Pd/C，減壓蒸餾除去溶劑，50mL乙醚打漿，過濾得白色固體22.72g，收率：85％，mp：213-215℃。

實(shí)施例4：(4-(4-甲氧基芐基)氧基)苯乙酸甲酯的制備

將2.6g(15.6mmol)對羥基苯乙酸甲酯、7g(50.6mmol)K₂CO₃和2g(12.8mmol)對甲氧基芐氯溶于40mL丙酮中，攪拌回流過夜。反應(yīng)完全后，濃縮除去溶劑，用二氯甲烷復(fù)溶，飽和食鹽水洗三次，水洗三次，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸餾除去溶劑，10mL乙醇打漿，過濾，得到白色固體3.9g，收率：87％，mp：53-56℃。

¹H-NMR(500M，DMSO):3.59(s,2H,-CH2-),3.60(s,3H,CH3O),3.75(s,3H,CH3O),4.99(s,2H,PhCH2-),6.94(d,4H,J＝6.95Hz,Ar-H),7.15(d,2H,J＝8.45Hz,Ar-H),7.35(d,2H,J＝8.5Hz,Ar-H)；MS:calcd.m/z[M]286.12,found m/z[M+Na]⁺309.3.

實(shí)施例5：(4-(4-甲氧基芐基)氧基)苯乙酸的制備

將3.9g(4-(4-甲氧基芐基)氧基)苯乙酸甲酯溶于50mL的四氫呋喃中，攪拌條件下緩慢滴加1.14g(27.24mmol)LiOH的水溶液，室溫下反應(yīng)過夜。反應(yīng)完全后，0℃下緩慢滴加1mol/L的鹽酸，將pH調(diào)節(jié)至酸性，室溫下繼續(xù)攪拌30min。水相用二氯甲烷萃取三次，將有機(jī)相合并后水洗三次，無水硫酸鈉干燥后過濾，減壓蒸餾除去溶劑，得到白色固體3.4g，收率：91.6％，mp：140-145℃。

¹H-NMR(300M，CDCl₃):3.59(s,2H,-CH₂-),3.81(s,3H,CH₃O),4.97(s,2H,PhCH₂-),6.92(m,4H,Ar-H),7.19(d,2H,J＝8.46Hz,Ar-H),7.34(d,2H,J＝8.43Hz,Ar-H)；MS:calcd.m/z[M]272.10,found m/z[M+Na]⁺295.1.

實(shí)施例6：N-(2-(4-氟苯基)-2-氧-乙基)-2-(4-((4-甲氧基芐基)氧基)苯基)乙酰胺的制備

將10g(36.78mmol)(4-(4-甲氧基芐基)氧基)苯乙酸、9.48g(50.14mmol)EDCl、6.95g(50.14mmol)HOBt和13.27g(133.73mmol)N-甲基嗎啉依次加入100mL的無水二氯甲烷中，0℃下攪拌1h后繼續(xù)加入6.32g(33.43mmol)2-胺基-1-(4-氟苯基)乙酮鹽酸鹽，室溫下攪拌過夜。反應(yīng)完全后，0℃下攪拌，有大量固體析出，過濾，烘干，得到白色固體9.7g，收率：64.8％，mp：150-152℃。

¹H-NMR(300M，CDCl₃):3.45(s,2H,-CH₂-),3.76(s,3H,CH₃O-),4.58(d,2H,J＝5.4Hz,-CH₂N-),4.99(s,2H,PhCH₂O-),6.92(m,4H,Ar-H),7.19(d,2H,J＝8.37Hz,Ar-H),7.34(m,4H,Ar-H),8.06(m,2H,Ar-H),8.37(m,1H,-NH-)；

MS:calcd.m/z[M]407.15,found m/z[M+Na]⁺430.4.

實(shí)施例7：N-乙?；?4-(4-氟苯基)-3-(4-((4-甲氧基芐基)氧基)苯基)-1H-吡咯烷-2(5H)-酮的制備

將9.7g(23.82mmol)N-(2-(4-氟苯基)-2-氧-乙基)-2-(4-((4-甲氧基芐基)氧基)苯基)乙酰胺加入到30.36g(297.8mmol)乙酸酐中，氮?dú)獗Ｗo(hù)，0℃下緩慢滴加20.47g(202.50mmol)三乙胺，75℃下攪拌反應(yīng)2h。反應(yīng)完全后，減壓蒸餾除去溶劑，二氯甲烷復(fù)溶后用飽和食鹽水洗三次，無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓蒸餾除去溶劑，用30mL乙醚打漿，得到淡黃色固體8.4g，收率：81.8％，mp：155-160℃。

¹H-NMR(300M，CDCl₃):2.63(s,3H,-CH₃),3.83(s,3H,CH₃O-),4.69(s,2H,-CH₂N-)，5.00(s,2H,PhCH₂O-),6.99(m,6H,Ar-H),7.27(m,2H,Ar-H),7.38(m,4H,Ar-H)；MS:calcd.m/z[M]431.50,found m/z[M-H]⁺430.9.

實(shí)施例8：4-(4-氟苯基)-3-(4-((4-甲氧基芐基)氧基)苯基)-1H-吡咯烷-2(5H)-酮的制備

將8.4g(19.48mmol)N-乙酰基-4-(4-氟苯基)-3-(4-((4-甲氧基芐基)氧基)苯基)-1H-吡咯烷-2(5H)-酮溶于40mL無水甲醇中，氮?dú)獗Ｗo(hù)，0℃下緩慢滴加3.94g的28％甲醇鈉(20.45mmol)的甲醇溶液，0℃下攪拌反應(yīng)1h。反應(yīng)完全后，滴加1.23g(20.45mmol)乙酸淬滅反應(yīng)，繼續(xù)攪拌5min，減壓蒸餾除去溶劑，二氯甲烷復(fù)溶，水洗三次，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸餾除去溶劑，20mL乙醚打漿，過濾烘干，得到淡黃色固體6.2g，收率：81.5％，mp：150-155℃。

¹H-NMR(500M，CDCl₃):3.53(s,3H,CH₃O-),4.32(s,2H,-CH₂N-),5.00(s,2H,PhCH₂O-),6.98(m,6H,Ar-H),7.30(m,2H,Ar-H),7.36(m,2H,Ar-H)；MS:calcd.m/z[M]389.14,found m/z[M+Na]⁺412.2.

實(shí)施例9：3-(4-氟苯基)-4-(4-((4-甲氧基芐基)氧基)苯基)-1H-吡咯烷-2,5-二酮的制備

將0.4g(1.02mmol)4-(4-氟苯基)-3-(4-((4-甲氧基芐基)氧基)苯基)-1H-吡咯烷-2(5H)-酮溶于4mL無水DMF中，0℃下加入0.16g(4.08mmol)的NaH(含量：60％)，室溫下攪拌反應(yīng)30min。反應(yīng)完全后，滴加3滴水淬滅反應(yīng)，加入乙酸乙酯，飽和食鹽水洗三次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾除去溶劑，柱層析(PE∶EA＝5∶1)得到黃色固體0.32g，收率：77.2％，mp：140-145℃。

¹H-NMR(500M，CDCl₃):3.83(s,3H,CH₃O-),5.03(s,2H,PhCH₂O-),6.94(m,4H,Ar-H),7.07(t,2H,J＝8.50Hz,Ar-H),7.35(d,2H,J＝8.35Hz,Ar-H),7.40(s,1H,Ar-H),7.47(m,2H,Ar-H),7.51(m,2H,Ar-H)；MS:calcd.m/z[M]403.12,found m/z[M-H]⁺402.2.

實(shí)施例10：3-羥基-3，3-二苯基丙酸乙酯的制備

將0.921mg(16.455mmol)的活化鋅粉加入100mL的三頸瓶中，加入10mL無水乙醚，氮?dú)獗Ｗo(hù)，加入0.2g(1.317mmol)的溴代乙酸乙酯無水乙醚溶液，加入0.12g(1.1mmol)的TMSCl，反應(yīng)放熱，溶劑回流，加入1.8g(11.85mmol)的溴代乙酸乙酯無水乙醚溶液，攪拌回流直至鋅粉不在減少，溶液變成綠色，加入2g(10.97mmol)二苯甲酮的無水乙醚溶液，回流反應(yīng)過夜。反應(yīng)完全后冷卻到0℃，加入10％的硫酸將反應(yīng)淬滅，用乙酸乙酯萃取三次后合并有機(jī)相，再用10％的硫酸、飽和食鹽水、水分別洗三次，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸餾除去溶劑，柱層析(PE∶EA＝50∶1→PE∶EA＝3∶1)，得到白色固體1.9g，收率：64％，mp：75-80℃。

¹H-NMR(500M，CDCl₃):1.145(t,3H,J＝7.15Hz,CH₃CH₂-),3.259(s,2H,-CH₂-),4.087(q,2H,J＝7.10Hz,CH₃CH₂-),7.212(t,2H,J＝7.30Hz,Ar-H),7.296(m,4H,Ar-H),7.434(m,4H,Ar-H)；MS:calcd.m/z[M]270.13,found m/z[M+Na]⁺293.1.

實(shí)施例11：1，1-二苯基-1，3-丙二醇的制備

將0.841g(22.2mmol)LiAlH₄加入到20mL的無水四氫呋喃中，0℃下緩慢滴加3g(11.1mmol)3-羥基-3，3-二苯基丙酸乙酯的無水四氫呋喃溶液，室溫下攪拌反應(yīng)2h。反應(yīng)完全后，降溫到0℃，滴加20％的NaOH水溶液淬滅反應(yīng)，過濾后將四氫呋喃旋干，用乙酸乙酯萃取三次，無水硫酸鈉干燥，過濾，柱層析(PE∶EA＝20∶1→PE∶EA＝5∶1)，得到白色固體2.1g，收率：83％，mp：85-90℃。

¹H-NMR(500M，CDCl₃):2.564(t,2H,J＝5.45Hz,-CH₂-),2.679(s,1H,-OH),2.689(s,1H,-OH),3.760(t,2H,J＝5.45Hz,-CH₂-),7.236(m,2H,Ar-H),7.318(m,4H,Ar-H),7.426(d,4H,J＝7.7Hz,Ar-H)；MS:calcd.m/z[M]228.12,found m/z[M+Na]⁺251.1.

實(shí)施例12：3-羥基-3，3-二苯基對甲苯磺酸丙酯的制備

將2.4g(10.5mmol)的1，1-二苯基-1，3-丙二醇、2.4g(12.6mmol)的對甲苯磺酰氯和催化量的DMAP溶于50mL無水二氯甲烷中，0℃下緩慢滴加2.13g(21mmol)的三乙胺，室溫下攪拌反應(yīng)過夜。反應(yīng)完全后，反應(yīng)液用飽和食鹽水洗三次，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸餾除去溶劑，柱層析(PE∶EA＝5∶1→PE∶EA＝3∶1)，得到白色固體2.5g，收率：62.5％。

¹H-NMR(500M，CDCl₃):2.438(s,3H,-PhCH₃),2.710(t,2H,J＝7.30Hz,-CH₂-),4.092((t,2H,J＝7.30Hz,-CH₂-),7.27(m,12H,Ar-H),7.679(d,2H,J＝8.20Hz,Ar-H)MS:calcd.m/z[M]382.12,found m/z[M+Na]⁺405.3.

實(shí)施例13：3-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3，3-二苯基丙基)-4-(4-(4-甲氧基芐基)氧基)苯基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮的制備

將2.5g(6.54mmol)3-羥基-3，3-二苯基對甲苯磺酸丙酯和2.93g(7.84mmol)3-(4-氟苯基)-4-(4-(4-甲基氧基芐基)氧基)苯基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮溶于50mL的乙腈中，加入1.81g(13.07mmol)K₂CO₃和221mg(0.65mmol)四丁基溴化銨,60℃反應(yīng)過夜。反應(yīng)完全后將溶劑旋干，乙酸乙酯復(fù)溶，飽和食鹽水洗三次，干燥，過濾，減壓蒸餾除去溶劑，柱層析(PE∶EA＝10∶1→PE∶EA＝5∶1)得到黃色固體2.8g，收率：73.5％。

¹H-NMR(300M，CDCl₃):3.83(s,3H,CH₃O-)，2.69(t,2H,J＝6.6Hz,-CH₂-),3.87(t,2H,J＝6.6Hz,-CH₂-),5.08(s,2H,PhCH₂O-),6.91(d,2H,J＝9Hz,Ar-H),7.04(m,2H,Ar-H),7.10(m,2H,Ar-H),7.25(m,8H,Ar-H),7.40(m,8H,Ar-H)；

MS:calcd.m/z[M]583.22,found m/z[M+Na]⁺606.5.

實(shí)施例14：3-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3,3-二苯基丙基)-4-(4-羥基苯基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮(I-1)

將1.2g(2.06mmol)3-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3,3-二苯基)-4-(4-芐基氧基苯基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮溶于乙腈-水溶液，加入3.6g(6.18)CAN,在0℃下攪拌1h，加入食鹽水稀釋，再用乙酸乙酯萃取三次，干燥，過濾，減壓蒸餾除去溶劑，柱層析(PE∶EA＝3∶1→PE∶EA＝2∶1)得到黃色油狀物0.9g，收率：90％，mp：63-65℃。

¹H-NMR(300M，CDCl₃):2.74(t,2H,J＝6.48Hz,-CH₂-),3.88(t,2H,J＝6.48Hz,-CH₂-),6.78(m,2H,Ar-H),7.10(m,2H,Ar-H),7.13(m,2H,Ar-H),7.24(m,4H,Ar-H),7.30(m,2H,Ar-H),7.44(m,4H,Ar-H)；

MS:calcd.m/z[M]493.17,found m/z[M-H]⁺492.1.

實(shí)施例15：3-(4-(2-溴乙氧基)苯基)-4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3，3-二苯基丙基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮

將150mg(0.304mmol)3-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3,3-二苯基丙基)-4-(4-羥基苯基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮(Ⅰ-1)溶于5mL乙腈中，加入226mg(1.22mmol)的1.2-二溴乙烷和84mg(0.608mmol)K₂CO₃，回流攪拌過夜。反應(yīng)完全后減壓蒸餾除去旋干，乙酸乙酯復(fù)溶，水洗三次，干燥，過濾，減壓蒸餾除去溶劑，柱層析(PE∶EA＝10∶1→PE∶EA＝5∶1)得到黃色油狀物132mg，收率：72.1％。

¹H-NMR(300M，CDCl₃):2.74(t,2H,J＝6.3Hz,-CH₂-),3.45(s,1H,-OH),3.64(t,2H,J＝6.3Hz,-CH₂-),3.89(t,2H,J＝6.3Hz,-CH₂-),4.31(t,2H,J＝6.3Hz,-CH₂-),6.87(m,2H,Ar-H),7.09(m,2H,Ar-H),7.20(m,2H,Ar-H),7.26(m,2H,Ar-H),7.30(m,4H,Ar-H),7.45(m,4H,Ar-H)；

MS:calcd.m/z[M]613.13,found m/z[M+Na]⁺636.4.

實(shí)施例16：3-(4-(3-溴丙氧基)苯基)-4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3，3-二苯基丙基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮的制備

參考實(shí)施例15。以3-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3,3-二苯基丙基)-4-(4-羥基苯基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮和1,3-二溴丙烷為原料，摩爾比為1:4。收率：76.7％。

實(shí)施例17：3-(4-(3-溴丁氧基)苯基)-4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3，3-二苯基丙基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮的制備

參考實(shí)施例15。以3-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3,3-二苯基丙基)-4-(4-羥基苯基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮和1,4-二溴丁烷為原料，摩爾比為1:4。收率：62.0％。

實(shí)施例18：3-(4-(2-(二乙胺基)乙氧基)苯基)-4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3，3-二苯基丙基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮(Ⅰ-2)的制備

將75.7mg(0.126mmol)的3-(4-(4-溴乙氧基)苯基)-4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3，3-二苯基丙基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮溶于2mL乙腈，加入18.4mg(0.252mmol)二乙胺和34.8mg(0.252mmol)K₂CO₃，攪拌回流過夜。反應(yīng)完全后減壓蒸餾除去溶劑，二氯甲烷復(fù)溶，水洗三次，無水硫酸鈉干燥，過濾，刮大板，得到黃色固體62mg，收率：54.8％，mp：99-103℃。

¹H-NMR(500M，CDCl₃):1.33(s,6H,-CH₂CH₃),2.73(s,4H,-CH₂CH₃),2.74(t,2H,J＝6.5Hz,-CH₂-),2.89(s,2H,-CH₂-),3.46(s,2H,-CH₂-),3.88(t,2H,J＝6.5Hz,-CH₂-),4.16(s,2H,-CH₂-),6.84(d,J＝9Hz,2H,Ar-H),7.02(t,J＝9Hz,2H,Ar-H),7.12(t,J＝7.5Hz,2H,Ar-H),7.22(t,J＝7.5Hz,4H,Ar-H),7.26(d,J＝8.5Hz,2H,Ar-H),7.31(m,2H,Ar-H),7.44(d,J＝7.5Hz,2H,Ar-H)；

MS:calcd.m/z[M]592.27,found m/z[M+H]⁺593.5.

實(shí)施例19：3-(4-(2-(二乙胺基)丙氧基)苯基)-4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3，3-二苯基丙基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮(Ⅰ-3)的制備

參考實(shí)施例18。以3-(4-(4-溴丙氧基)苯基)-4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3，3-二苯基丙基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮和二乙胺為原料，摩爾比為1:2，收率：51.1％。

¹H-NMR(500M，CDCl₃):1.37(t,J＝7Hz,6H,-CH₂CH₃),2.32(s,2H,-CH₂-),2.74(t,J＝6Hz,2H,-CH₂-),3.07(d,J＝6Hz,2H,-CH₂-),3.12(s,4H,-CH₂CH₃),3.88(t,J＝6.5Hz,2H,-CH₂-),4.10(t,J＝5.5Hz,2H,-CH₂-),6.82(d,J＝8.5Hz,2H,Ar-H),7.02(t,J＝8.5Hz,2H,Ar-H),7.12(t,J＝7.5Hz,2H,Ar-H),7.22(t,J＝7.5Hz,4H,Ar-H),7.29(m,4H,Ar-H),7.44(d,J＝7.5Hz,2H,Ar-H)；

MS:calcd.m/z[M]606.29,found m/z[M+H]⁺607..5.

實(shí)施例20：3-(4-(2-(二乙胺基)丁氧基)苯基)-4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3，3-二苯基丙基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮(Ⅰ-4)的制備

參考實(shí)施例18。以3-(4-(4-溴丁氧基)苯基)-4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3，3-二苯基丙基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮和二乙胺為原料，摩爾比為1:2,收率：54.8％。

¹H-NMR(300M，CDCl₃):1.31(t,6H,J＝6.84Hz,-CH₂CH₃),1.88(s,4H,-CH₂-),2.73(m,2H,-CH₂-),3.25(m,2H,-CH₂-),3.44(m,4H,-CH₂CH₂-),3.76(s,2H,-CH₂-),4.07(s,2H,-CH₂-),6.90(d,J＝8.22Hz,2H,Ar-H),7.09(m,4H,Ar-H),7.22(m,4H,Ar-H),7.33(m,4H,Ar-H),7.43(d,J＝7.47Hz,4H,Ar-H)

實(shí)施例21：2-(4-(4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3，3-二苯基丙基)-2，5-二氧-2，5-二氫-1H-吡咯烷)苯氧基)乙磺酸鈉(Ⅰ-5)的制備

將131mg(0.218mmol)3-(4-(2-溴乙氧基)苯基)-4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3，3-二苯基丙基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮溶于6mL乙醇∶水＝2∶1的混合溶液中，加入137mg(1.09mmol)Na₂SO₃，攪拌回流過夜。反應(yīng)完全后減壓蒸餾除去旋干，2mL甲醇打漿，過濾，減壓蒸餾除去溶劑后用4mL石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1的混合溶液打漿，過濾得黃色固體83mg，收率：61％，mp﹥200℃。

¹H-NMR(300M，CDCl₃):2.76(t,2H,J＝7.2Hz,-CH₂-),3.28(t,2H,J＝7.5Hz,-CH₂-),3.79(t,2H,J＝6.9Hz,-CH₂-),4.41(t,2H,J＝7.2Hz,-CH₂-),6.96(d,2H,J＝9Hz,Ar-H),7.14(m,2H,Ar-H),7.20(m,4H,Ar-H),7.25(m,2H,Ar-H),7.35(m,2H,Ar-H),7.47(m,4H,Ar-H)；

MS:calcd.m/z[M]623.14,found m/z[M-Na]⁺600.3.

實(shí)施例22：2-(4-(4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3，3-二苯基丙基)-2，5-二氧-2，5-二氫-1H-吡咯烷)苯氧基)丙磺酸鈉(Ⅰ-6)的制備

參考實(shí)施例21。以3-(4-(4-溴丙氧基)苯基)-4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3，3-二苯基丙基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮和磺酸鈉為原料，摩爾比為1:5，收率：57％。

¹H-NMR(300M，CDCl₃):2.26(m,2H,J＝6.9Hz,-CH₂-),2.75(t,2H,J＝6.9Hz,-CH₂-),2.97(m,2H,-CH₂-),3.78(t,2H,J＝7.2Hz,-CH₂-),4.16(t,2H,J＝6.3Hz,-CH₂-),6.92(d,2H,J＝8.7Hz,Ar-H),7.12(m,4H,Ar-H),7.24(d,4H,J＝7.8Hz,Ar-H),7.35(m,2H,Ar-H),7.40(m,2H,Ar-H),7.47(m,4H,Ar-H)；

MS:calcd.m/z[M]637.15,found m/z[M-H]⁺613.8.

實(shí)施例23：2-(4-(4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3，3-二苯基丙基)-2，5-二氧-2，5-二氫-1H-吡咯烷)苯氧基)丁磺酸鈉(Ⅰ-7)的制備

參考實(shí)施例21。以3-(4-(4-溴丁氧基)苯基)-4-(4-氟苯基)-1-(3-羥基-3，3-二苯基丙基)-1H-吡咯烷-2，5-二酮和磺酸鈉為原料，摩爾比為1:5，收率：48％。

¹H-NMR(300M，CDCl₃):1.83(m,2H,-CH₂-),1.94(m,2H,-CH₂-),2.71(m,2H,-CH₂-),2.84(m,2H,-CH₂-),3.76(t,2H,J＝6.9Hz,-CH₂-),4.03(t,2H,J＝5.49Hz,-CH₂-),6.83(m,2H,Ar-H),7.08(m,4H,Ar-H),7.14(m,8H,Ar-H),7.44(m,4H,Ar-H)；

MS:calcd.m/z[M]651.17,found m/z[M+H]⁺674.

實(shí)施例24：藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

1細(xì)胞、試劑及儀器

1.1細(xì)胞

Caco-2細(xì)胞，訂購單位：中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心

1.2試劑

膽固醇購自Sigma公司，貨號：C8667-5G

Penicillin-streptomycin solution購自HyClone公司，貨號SV30010

DMEM購自WISENT公司，貨號310-011-CL

0.25％Trypsin-EDTA購自Gibco公司，貨號：25200-072

Sodium tauroclate hydrate購自Sigma公司，貨號：86339-1G

甘油單油酸酯購自Sigma公司，貨號：M7765-50mg

BCA蛋白濃度測定試劑盒購自碧云天(Beyotime)公司，貨號：P0012

RIPA裂解液(強(qiáng))購自碧云天(Beyotime)公司，貨號：P0013B

NaCl購自Biosharp，批號：2012/09

Na₂HPO₄購自Sigma公司，貨號：S5136-100G

KCl購自Amresco公司，貨號：0395-500G

KH₂PO₄購自Amresco公司，貨號：0781-500G

三氟乙酸購自國藥集團(tuán)，貨號：20120608

1.3受試藥物、陽性藥物以及實(shí)驗(yàn)過程中用到的試劑的配置

培養(yǎng)基的配制：DMEM培養(yǎng)基中加入20％的FBS和1％的青霉素-鏈霉素溶液，混勻后4℃保存待用。

PBS緩沖液的配制：1L超純水中加入8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na₂HPO₄和0.24g KH₂PO₄，超聲溶清，高溫滅菌。

豆甾醇膠束的配制：稱取0.08065g?；悄懰徕c、0.000535g油酸單甘油酯和0.2063g豆甾醇加入到200mL的DMEM培養(yǎng)基中，超聲助溶2h，再經(jīng)0.22μm的濾膜過濾，4℃冰箱保存待用。

細(xì)胞裂解液的配制：按照RIPA裂解液(強(qiáng))∶蛋白酶抑制劑＝100∶1的比例配制，冰浴保存，現(xiàn)配現(xiàn)用。

Jones試劑的配制：配制4mol/L的H₂SO₄以及4mol/L的CrO₃水溶液，分別經(jīng)0.22μm濾膜過濾，常溫保存，使用前取等體積混勻使用。

陽性藥(Ezetimibe)及受試化合物溶液的配制：將Ezetimibe或受試藥用DMSO配成100mmol/L的母液待用。

1.4實(shí)驗(yàn)儀器

酶標(biāo)儀購自Bio-Tek公司，型號：Synergy HT

高效液相購自日本島津公司，型號：LC-20AT

2實(shí)驗(yàn)方法

培養(yǎng)Caco-2細(xì)胞于6孔板中，實(shí)驗(yàn)分為空白對照組、模型組、陽性藥組和受試藥組。每組6個平行組，當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)到80％，將含有100μmol/L受試藥的培養(yǎng)基加入到每孔中，每孔1.5mL，陽性藥一樣，另外空白組與模型組加入純培養(yǎng)基，一起培養(yǎng)24h。24h后將培養(yǎng)液吸去，用PBS洗2遍，空白組每孔加1mL的DMEM培養(yǎng)24h，模型組、陽性藥組和受試藥組每孔加入1mL的豆甾醇膠束培養(yǎng)24h。吸取膽固醇膠束，用PBS洗2遍，最后破碎細(xì)胞，測蛋白含量及細(xì)胞內(nèi)膽固醇的含量。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

以上藥理學(xué)數(shù)據(jù)顯示，本發(fā)明通式(I)化合物具有較強(qiáng)的降低細(xì)胞內(nèi)膽固醇作用。