本發(fā)明涉及一種苯并異硒唑酮修飾的亞硝脲類化合物制備方法和應(yīng)用，屬于化學(xué)領(lǐng)域
背景技術(shù)：
亞硝基脲類抗腫瘤藥物是一種應(yīng)用十分廣泛的烷化劑，應(yīng)用于腦瘤、白血病、惡性淋巴瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤等疾病的臨床治療。
亞硝基脲類抗腫瘤藥物大部分屬于雙官能團烷化劑。其作用機制是：亞硝基脲類藥物在水溶液中迅速分解，產(chǎn)生偶氮氫氧化物中間體。此中間體可以進一步分解為碳正離子。由于dna等大分子屬于富電子分子，可以與碳正離子結(jié)合，比如在鳥嘌呤的o6位或n7位形成烷化損傷，甚至進一步反應(yīng)形成互補堿基對之間的共價交聯(lián)物。這些交聯(lián)作用會對dna的復(fù)制產(chǎn)生損傷，最終引起細胞凋亡。
以甲基亞硝基脲為例，亞硝基脲類藥物與dna作用機制如下：
卡莫司汀是一種烷化劑，是亞硝基脲類抗腫瘤藥物中的代表藥物。由于具有分子量小、脂溶性好、能透過血腦屏障、血漿結(jié)合率高等優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用于臨床中。它在小鼠實驗和臨床研究中都被證明有抗中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的作用，是治療惡性膠質(zhì)瘤的首選藥物。此外，它還被用于多發(fā)性骨髓瘤、惡性黑色素瘤等疾病的治療。
卡莫司汀是雙功能烷化劑。它在水中會迅速分解，生成氯乙基重氮氫氧化物(cl-ch2-ch2-n＝n-oh)和氯乙基異氰酸鹽(o＝c＝n-ch2-ch2-cl)。前者可以與dna發(fā)生交聯(lián)作用，異氰酸鹽可以是蛋白質(zhì)氨甲?；痠。此外，卡莫司汀還對trxr有抑制作用，trxr也可以成為其作用的靶點，它對trxr有不可逆抑制作用。
卡莫司汀具有很強的細胞毒作用。在標準計量給藥時，它的限制性毒性是對造血系統(tǒng)產(chǎn)生遲發(fā)型毒性。而長期給藥時，會造成可能致命的肺纖維化。在大劑量給藥時，卡莫司汀的限制性毒性是肝毒性和肺毒性，而且有5％～20％的患者會出現(xiàn)靜脈栓塞性疾病。
苯并異硒唑酮代表化合物乙烷硒啉是靶向硫氧還蛋白還原酶的、用于抗腫瘤作用的有機硒化合物，現(xiàn)在正在進行臨床研究，臨床i期顯示，乙烷硒啉毒性低，與卡莫司丁毒性表現(xiàn)相比，顯示較好的耐受性。前期研究表明，苯并異硒唑酮結(jié)構(gòu)作為該藥的主要藥效團，能夠主動識別靶酶活性中心并體現(xiàn)出對腫瘤和相關(guān)組織的靶向性。藥物的體內(nèi)代謝研究顯示，乙烷硒啉在腫瘤組織的濃度遠高于血漿中濃度，表現(xiàn)出了良好的腫瘤靶向性。
本專利創(chuàng)新點通過在亞硝脲結(jié)構(gòu)的n原子上引入苯并異硒唑酮結(jié)構(gòu)，得到一類新型的、具有苯并異硒唑酮結(jié)構(gòu)的亞硝脲類化合物，根據(jù)苯并異硒唑酮藥物(乙烷硒啉)特點，該類化合物能夠靶向硫氧還蛋白還原酶，并且具有腫瘤靶向性，且硫氧還蛋白還原酶活性是腫瘤生長的重要因素，因此該類化合物將具有多靶點特點，同時該類結(jié)構(gòu)相對于亞硝脲結(jié)構(gòu)提高了藥物的靶向性，因此能達到增效減毒的作用。
本研究采用了具有苯并異硒唑酮結(jié)構(gòu)的亞硝脲的全新的結(jié)構(gòu)形式，其意義如下
1、此系列化合物保留了乙烷硒啉和卡莫司汀的活性藥效團。研究表明，苯并異硒唑酮是乙烷硒啉中的活性藥效團，可以主動識別trxr中的活性位點并與之結(jié)合，從而發(fā)揮對trxr的抑制作用。因此，我們保留了乙烷硒啉中的苯并異硒唑酮結(jié)構(gòu)?？就〉姆纸馄沃弧纫一氐獨溲趸锸前l(fā)揮dna交聯(lián)作用的基團。
2、作為一種前藥形式，此系列化合物在水中發(fā)生分解作用，產(chǎn)生兩個分子片段。前者中的苯并異硒唑酮結(jié)構(gòu)和異氰酸鹽結(jié)構(gòu)會協(xié)同產(chǎn)生trxr抑制活性。另一片段會與dna產(chǎn)生交聯(lián)作用。這兩個藥效團會產(chǎn)生抗腫瘤的協(xié)同作用，從而提高抗腫瘤活性。
3、由于苯并異硒唑酮結(jié)構(gòu)具有較好的腫瘤靶向性，因此可以產(chǎn)生靶向藥效，而與亞硝脲類結(jié)構(gòu)結(jié)合后，使得新系列的分子具有高靶向性，同時進一步減弱了化合物毒性。
4、由于亞硝脲來化合物具有較好的水溶性，而與苯并異硒唑酮結(jié)構(gòu)拼合后，改變了乙烷硒啉中對稱性分子結(jié)構(gòu)，提高了化合物溶解性，增強了成藥性。
此類化合物活性測試顯示在苯并異硒唑酮部分c-5位和c-6位取代為f的化合物，同時苯并異硒唑酮部分和亞硝脲部分間的連接臂越短越好(n＝2)可以獲得更明顯的抗腫瘤活性。其中，3-[2-(5-氟-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲以及3-[2-(6-氟-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲在lovo，rko，miapaca-2，panc-1細胞系中均有較好的抗腫瘤活性，具有抗腫瘤作用意義。且引入苯并異硒唑酮后，化合物靶向性得到提升，有利于減毒增效目標的實現(xiàn)。因此，本申請對該類化合物進行了專門申請。這是因為作為新型的具有苯并異硒唑酮結(jié)構(gòu)的亞硝脲類結(jié)構(gòu)藥物溶解度較乙烷硒啉有了很大程度提升，靶向性較卡莫司丁有了較大提升，起到了增效減毒作用，同時增加了成藥性。而苯并異硒唑酮結(jié)構(gòu)和亞硝脲類結(jié)構(gòu)在藥理作用上能夠起到協(xié)同增效的作用，因此這類化合物表現(xiàn)出體外良好的抗腫瘤活性，其ic50值也低于卡莫司丁或與之相當。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于基于以上理論提供一種苯并異硒唑酮修飾亞硝脲類化合物，并通過實驗測定其抗腫瘤活性。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：
以下結(jié)構(gòu)的化合物，
n為連接臂之間碳的數(shù)目
通式i
其中，r1、r2、r3、r4分別為h、c1-4的鏈烷基基團、c1-4的鏈烷氧基基團、c1-4的酰氧基基團、no2、oh或鹵素取代。
n為連接臂之間碳的數(shù)為2-4。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述c1-4的鏈烷基基團是甲基、乙基或丙基；c1-4的鏈烷氧基基團是甲氧基、乙氧基或丙氧基。
3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述鹵素是f、cl、br。
4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，r1，r2，r3，r4是h、me、och3、f、cl、br
5、根據(jù)權(quán)利要求1中所述化合物，其特征在于，n為連接臂之間的碳數(shù)為2-4。
6、權(quán)利要求1-5中任一項所述化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述藥物組合物適用于腸內(nèi)(例如口服或直腸給藥)、局部或腸胃外給藥，例如，口服、注射、植入、外用、噴霧、吸入等。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述口服藥物組合物選自片劑(普通片、含片、舌下片、口腔貼片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡騰片、陰道片或陰道泡騰片、緩釋片、控釋片、腸溶片、口腔速釋片等)、膠囊劑(硬膠囊、軟膠囊、緩釋膠囊、控釋膠囊、腸溶膠囊等)、丸劑(滴丸、糖丸、小丸)、口服液體制劑(糖漿劑、混懸劑、口服溶液劑、口服混懸劑、口服乳劑、糖漿劑、合劑、露劑或茶劑)、顆粒劑(混懸顆粒、泡騰顆粒、腸溶顆粒、緩釋顆粒、控釋顆粒等)、散劑的任一種。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述注射劑包括注射液、注射用無菌粉末或無菌塊狀物(包括采用溶劑結(jié)晶法、噴霧干燥法或冷凍干燥法等工藝制備)、輸液、注射用濃溶液的任一種。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述外用制劑選自栓劑、氣霧劑、粉霧劑、噴霧劑、膜劑、凝膠劑、貼劑、膠劑、貼膏劑、膏藥、軟膏劑、搽劑、洗劑、涂抹劑、凝膏劑的任一種。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，可采用本領(lǐng)域熟知的制劑技術(shù)手段來制備本發(fā)明組合物。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述藥物組合物選自包合制劑或分散制劑。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述的藥學(xué)上可接受的載體為本領(lǐng)域熟知用于制備上述制劑的常用賦形劑或輔料，其中，口服制劑或外用制劑常用的賦形劑或輔料包括但不僅限于填充劑或稀釋劑、潤滑劑或助流劑或抗粘著劑、分散劑、濕潤劑、粘合劑、調(diào)節(jié)劑、增溶劑、抗氧劑、抑菌劑、乳化劑等。粘合劑，例如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃芪膠、纖維素及其衍生物、明膠漿、糖漿、淀粉漿或聚乙烯吡咯烷酮，優(yōu)選的纖維素衍生物為微晶纖維素、羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、羥丙甲基纖維素；填充劑，例如乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纖維素及其衍生物、無機鈣鹽、山梨醇或甘氨酸，優(yōu)選無機鈣鹽為硫酸鈣、磷酸鈣、磷酸氫鈣、沉降碳酸鈣；潤滑劑，例如微粉硅膠、硬脂酸鎂、滑石粉、氫氧化鋁、硼酸、氫化植物油、聚乙二醇；崩解劑，例如淀粉及其衍生物、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纖維素，優(yōu)選的淀粉衍生物為羧甲基淀粉鈉、淀粉乙醇酸鈉、預(yù)膠化淀粉、改良淀粉、羥丙基淀粉、玉米淀粉；濕潤劑，例如十二烷基硫酸鈉、水或醇等，優(yōu)選藥學(xué)上可接受的載體為環(huán)糊精(α-環(huán)糊精、β-環(huán)糊精或γ-環(huán)糊精)、celldone102cg、polyplasdonexl-10、滑石粉、硬脂酸鎂或乙醇等。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述注射劑常用的賦形劑或輔料包括但不僅限于：抗氧劑，例如硫代硫酸鈉、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、二丁基苯酸或焦亞硫酸鈉等；抑菌劑，例如0.5％苯酚、0.3％甲酚、0.5％三氯叔丁醇；ph調(diào)節(jié)劑，例如鹽酸、枸櫞酸、氫氧化鉀(鈉)、枸櫞酸鈉及緩沖劑磷酸二氧鈉和磷酸氫二鈉；乳化劑，例如聚山梨酯-80、沒酸山梨坦、普流羅尼克f-68，卵磷酯、豆磷脂；增溶劑，例如吐溫-80、甘油等。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，還可將活性成分與藥學(xué)上可接受的緩控釋載體按其制備要求加以混合，再按照本領(lǐng)域熟知的緩控釋制劑的制備方法，如加入阻滯劑包衣或?qū)⒒钚猿煞治⒛一笤僦瞥晌⑼?，如緩釋微丸或控釋微丸；所述的緩控釋載體包括但不僅限于油臘性摻入劑、親水膠體或包衣阻滯劑等，所述的油脂性摻入劑為單硬脂酸甘油酯、氫化蓖麻油、礦油、聚硅氧烷、二甲基硅氧烷；所述的親水膠體為羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素等纖維素衍生物，或pvp、阿拉伯膠、西黃耆膠或卡波普等；所述的包衣阻滯劑為乙基纖維素(ec)、羥丙甲基纖維素(hmpc)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、鄰苯二甲酸醋酸纖維素(cap)、丙烯酸類樹脂等。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，根據(jù)所需給藥方式，藥學(xué)上可接受的組合物包含約1-99重量％的化合物1-18或其藥物學(xué)上可接受的鹽的任一種或其組合，以及1-99重量％適宜的藥用賦形劑。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述藥物組合物中包含約5-75重量％的化合物1-18或其藥物學(xué)上可接受的鹽的任一種或其組合，余量為藥用賦形劑。
本發(fā)明的另一個方面是提供化合物1-18或其藥物學(xué)上可接受的鹽或其藥物組合物用于制備抗腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述抗腫瘤作用是指用于預(yù)防或治療異常細胞生長，所述異常細胞生長可以表現(xiàn)為腫瘤，所述腫瘤選自腦瘤、肺癌、肝癌、血癌、骨癌、胰腺癌、皮膚癌、黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、胃癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、食道癌、小腸癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)癌、軟組織肉瘤、尿道癌、前列腺癌、淋巴細胞瘤、膀胱癌、腎癌、輸尿管癌、脊椎腫瘤、腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤、垂體腺瘤、肺癌、肝癌、血癌的任一種。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的苯并異硒唑酮修飾亞硝脲類化合物在治療腫瘤時的給藥劑量約為0.05-250mg/kg體重，優(yōu)選為0.5-200mg/kg體重，更優(yōu)選為2-125mg/kg體重，最更優(yōu)選為5-85mg/kg體重。
所述化合物是
3-【2-(1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)乙基】-1-氯乙基-1-亞硝基脲
3-【2-(1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丙基】-1-氯乙基-1-亞硝基脲
3-【2-(1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丁基】-1-氯乙基脲-1-亞硝基脲
3-【2-(5-氟-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)乙基】-1-氯乙基-1-亞硝基脲
3-【2-(5-氟-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丙基】-1-氯乙基-1-亞硝基脲
3-【2-(5-氟-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丁基】-1-氯乙基-1-亞硝基脲
3-【2-(6-氟-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)乙基】-1-氯乙基-1-亞硝基脲
3-【2-(5-氯-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)乙基】-1-氯乙基-1-亞硝基脲
3-【2-(5-氯-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丙基】-1-氯乙基-1-亞硝基脲
3-【2-(5-氯-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丁基】-1-氯乙基-1-亞硝基脲
3-【2-(6-氯-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)乙基】-1-氯乙基-1-亞硝基脲
3-【2-(5-甲基-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)乙基】-1-氯乙基-1-亞硝基脲
3-【2-(5-甲基-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丙基】-1-氯乙基-1-亞硝基脲
3-【2-(5-甲基-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丁基】-1-氯乙基-1-亞硝基脲
3-【2-(5-甲氧基-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)乙基】-1-氯乙基-1-亞硝基脲
3-【2-(5-甲氧基-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丙基】-1-氯乙基-1-亞硝基脲
3-【2-(5-甲氧基-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丁基】-1-氯乙基-1-亞硝基脲
3-【2-(5-溴-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)乙基】-1-氯乙基-1-亞硝基脲
本發(fā)明的又一目的在于提供一種制備以上所述化合物的方法，具體包括如下步驟：
(1)制備化合物1
化合物1
在亞硝酸鈉存在下使
(2)將化合物1溶于乙醚中，滴加n-boc-1，2-乙二胺，室溫下攪拌反應(yīng)，有固體析出。抽濾得中間體。
(3)將步驟(2)中得到的中間體加入二氯甲烷，滴加三氟乙酸，室溫下攪拌反應(yīng)。用飽和nahco3調(diào)節(jié)ph到7-8，取水層。濃縮，二氯甲烷萃取(少量多次)。干燥，濃縮，滴加氯乙基異氰酸酯，有沉淀析出。抽濾得中間體。
(4)將步驟(3)中得到的中間體溶于2ml無水甲酸中，0℃下加入nano2(摩爾比1∶4)，0℃下反應(yīng)40min，加適量水后有固體析出，抽濾，得白色粉末狀固體，即通式i化合物
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明，應(yīng)該理解的是，這些實施例僅用于例證的目的，決不限制本發(fā)明的保護范圍。
以下是本發(fā)明化合物的合成路線：
2se+4naoh+na2s2o4→na2se2+2na2so3+2h2o
以下以28種化合物為例來說明通式i化合物的制備以及抗腫瘤活性。
這28種化合物如表1所示。
表1
----------------------------
實施例12，2’-二硒化雙苯甲酸的制備
2se+4naoh+na2s2o4→na2se2+2na2so3+2h2o
(1)氫氧化鈉16g，保險粉18g，硒粉16g，依次加入水中，升溫至50℃，反應(yīng)完畢得到雙硒化鈉溶液。
(2)冰浴條件下，鄰氨基苯甲酸28g加入1∶1鹽酸80ml攪拌混合，在其中慢慢滴入亞硝酸鈉18.0g的水溶液，得到氯化2-苯甲酸重氮鹽。
(3)冰水浴攪拌下將步驟1得到的氯化2-苯甲酸重氮鹽的溶液滴加到步驟2得到的雙硒化鈉溶液中，混合物繼續(xù)攪拌。ph試紙證明溶液呈堿性。硅藻土過濾，調(diào)ph到3，過濾，濾餅用水洗滌，干燥，得棕黃色固體。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δδ7.34(t，2h)，7.46(t，2h)，7.67(d，2h)，8.02(d，2h)，13.69(s，br，2h)
實施例22-硒氯苯甲酰氯的制備
2，2’-二硒化雙苯甲酸40g、氯化亞砜200ml和dmf數(shù)滴攪拌回流，反應(yīng)完畢旋蒸除去多余的二氯亞砜，殘渣用石油醚重結(jié)晶，得到黃色針狀結(jié)晶。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δδ7.39(t，j＝7.7hz，1h，ar-h)，7.67(t，j＝7.7hz，1h，ar-h)，7.85(d，j＝7.7hz，1h，ar-h)，8.09(d，j＝7.7hz，1h，ar-h).
實施例35，5’-二氟-2，2’-二硒化雙苯甲酸的制備
2se+4naoh+na2s2o4→na2se2+2na2so3+2h2o
以與實施例1相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δδ7.23(m，2h)，7.40(dd，2h)，8.11(m，2h)，13.93(s，br，2h)
實施例42-硒氯-5-氟苯甲酰氯的制備
以與實施例2相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δδ7.42(td，j＝8.3，2.7hz，1h，ar-h)，7.65(dd，j＝8.3，5.4hz，1h，ar-h)，7.78(dd，j＝9.0，2.7hz，1h，ar-h).
實施例55，5’-二氯-2，2’-二硒化雙苯甲酸的制備
2se+4naoh+na2s2o4→na2se2+2na2so3+2h2o
以與實施例1相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)d14.12(br，2h，cooh)，8.00(d，j＝2.2，2h，arh)，7.64(d，j＝8.6，2h，arh)，7.60(dd，j1＝8.6，j2＝2.2，2h，arh).
實施例62-硒氯-5-氯苯甲酰氯的制備
以與實施例2相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，cdcl3)d8.12(d，j＝8.6，1h，arh)，7.69(d，j＝2.2，1h，arh)，7.65(dd，j1＝8.6，j2＝2.2，1h，arh).
實施例75，5’-二甲基-2，2’-二硒化雙苯甲酸的制備
2se+4naoh+na2s2o4→na2se2+2na2so3+2h2o
以與實施例1相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δδ2.30(s，3h)，7.43(m，2h)，7.66(m，2h)，7.79(dd，2h)，13.50(s，br，2h)
實施例82-硒氯-5-甲基苯甲酰氯的制備
以與實施例2相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δδ2.37(s，3h，ch3)，7.48(d，j＝8.2hz，1h，ar-h)，7.65(s，1h，ar-h)，7.96(d，j＝8.2hz，1h，ar-h).
實施例95，5’-二甲氧基-2，2’-二硒化雙苯甲酸的制備
2se+4naoh+na2s2o4→na2se2+2na2so3+2h2o
以與實施例1相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δδ2.30(s，3h)，7.43(m，2h)，7.66(m，2h)，7.79(dd，2h)，13.50(s，br，2h)
實施例102-硒氯-5-甲氧基苯甲酰氯的制備
以與實施例2相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ3.80(s，3h，och3)，7.33(dd，j＝8.8，2.7hz，1h，ar-h)，7.39(d，j＝2.7hz，1h，ar-h)，7.90(d，j＝8.8hz，1h，ar-h).
實施例115，5’-溴-2，2’-二硒化雙苯甲酸的制備
2se+4naoh+na2s2o4→na2se2+2na2so3+2h2o
以與實施例1相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)d14.06(br，2h，cooh)，8.10(d，j＝2.3，2h，arh)，7.69(dd，j1＝8.6，j2＝2.3，2h，arh)，7.55(d，j＝8.6，2h，arh).
實施例122-硒氯-5-溴苯甲酰氯的制備
以與實施例2相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，cdcl3)d8.14(d，j＝2.2，1h，arh)，7.65(dd，j1＝8.6，j2＝2.2，1h，arh)，7.49(d，j＝8.6，1h，arh)
實施例134，4’-二氟-2，2’-二硒化雙苯甲酸的制備
2se+4naoh+na2s2o4→na2se2+2na2so3+2h2o
以與實施例1相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δδ7.23(m，2h)，7.40(dd，2h)，8.11(m，2h)，13.93(s，br，2h)
實施例142-硒氯-4-氟苯甲酰氯的制備
以與實施例2相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δδ7.19(td，j＝8.4，2.3hz，1h，ar-h)，7.80(dd，j＝8.4，5.7hz，1h，ar-h)，7.86(dd，j＝9.9，2.3hz，1h，ar-h).
實施例154，4’-二氯-2，2’-二硒化雙苯甲酸的制備
2se+4naoh+na2s2o4→na2se2+2na2so3+2h2o
以與實施例1相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)d14.08(br，2h，cooh)，8.03(d，j＝8.3，2h，arh)，7.60(d，j＝1.7，2h，arh)，7.44(dd，j1＝8.3，j2＝1.7，2h，arh).
實施例162-硒氯-4-氯苯甲酰氯的制備
以與實施例2相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，cdcl3)d8.13(d，j＝1.8，1h，arh)，7.74(d，j＝8.1，1h，arh)，7.40(dd，j1＝8.1，j2＝1.8，1h，arh)
實施例173-[2-(1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲
(1)將2-硒氯苯甲酰氯溶于乙醚中，滴加n-boc-1，2-乙二胺，室溫下攪拌反應(yīng)，有固體析出。抽濾得中間體。
(2)將步驟(1)中得到的中間體加入二氯甲烷，滴加三氟乙酸，室溫下攪拌反應(yīng)。用飽和nahco3調(diào)節(jié)ph到7-8，取水層。濃縮，二氯甲烷萃取(少量多次)。干燥，濃縮，滴加氯乙基異氰酸酯，有沉淀析出。抽濾得中間體。
(3)將步驟(2)中得到的中間體溶于2ml無水甲酸中，0℃下加入nano2(摩爾比1∶4)，0℃下反應(yīng)40min，加適量水后有固體析出，抽濾，得白色粉末狀固體，即通式i化合物
1hnmr(400mhz，dmso)d8.87(t，j＝5.6hz，1h)，8.01(d，j＝8.0hz，1h)，7.77(d，j＝7.0hz，1h)，7.66-7.52(m，1h)，7.41(t，j＝7.1hz，1h)，4.04(t，j＝5.7hz，2h)，3.76(t，j＝5.6hz，2h)，3.66-3.42(m，4h).
ms(ei)m/z：376.0(m+).
實施例183-[2-(1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丙基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲
以與實施例17相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.92(t，j＝5.7hz，1h)，8.05(d，j＝8.0hz，1h)，7.80(d，j＝6.9hz，1h)，7.62(t，j＝7.6hz，1h)，7.42(t，j＝7.4hz，1h)，3.85-3.78(m，2h)，3.76(t，j＝6.3hz，2h)，3.70-3.57(m，3h)，2.06-1.94(m，1h)，1.76-1.63(m，2h).
ms(ei)m/z：390.0(m+).
實施例193-[2-(1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丁基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲
以與實施例17相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.91(t，j＝5.5hz，1h)，8.04(d，j＝8.0hz，1h)，7.79(d，j＝6.8hz，1h)，7.61(t，j＝7.6hz，1h)，7.42(t，j＝7.0hz，1h)，3.77(dt，j＝12.8，6.5hz，3h)，3.68(t，j＝6.9hz，2h)，3.61(dd，j＝12.2，6.1hz，2h)，2.04-1.93(m，1h)，1.54-1.43(m，2h)，1.36(dd，j＝19.7，12.8hz，2h).
ms(ei)m/z：404.0(m+).
實施例203-[2-(5-氟-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲
以與實施例17相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.88(t，j＝5.6hz，1h)，8.12-7.95(m，1h)，7.57-7.40(m，2h)，4.04(t，j＝5.6hz，2h)，3.76(t，j＝5.6hz，2h)，3.63(t，j＝6.2hz，2h)，3.54-3.43(m，2h).ms(ei)m/z：393.9(m+).
實施例213-[2-(5-氟-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丙基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲
以與實施例17相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.99-8.66(m，1h)，8.10(dd，j＝8.6，4.6hz，1h)，7.61-7.28(m，2h)，3.81(ddd，j＝22.4，13.7，7.2hz，4h)，3.69-3.51(m，4h)，1.76-1.60(m，2h).ms(ei)m/z：408.0(m+).
實施例223-[2-(5-氟-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丁基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲
以與實施例17相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.89(t，j＝18.7hz，1h)，8.17-7.98(m，1h)，7.52(t，j＝8.9hz，2h)，3.91-3.51(m，8h)，1.53-1.29(m，4h).ms(ei)m/z：422.0(m+).
實施例233-[2-(6-氟-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲
以與實施例17相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.86(t，j＝5.6hz，1h)，7.79(dt，j＝8.5，4.4hz，2h)，7.34-7.17(m，1h)，4.03(t，j＝5.6hz，2h)，3.75(t，j＝5.7hz，2h)，3.62(t，j＝6.3hz，2h)，3.53(dd，j＝12.1，6.1hz，2h).ms(ei)m/z：394.0(m+).
實施例243-[2-(5-氯-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲
以與實施例17相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，cdcl3)d8.01(t，j＝4.6hz，1h)，7.63-7.42(m，2h)，4.31-4.10(m，2h)，3.88(dd，j＝15.2，9.7hz，2h)，3.83-3.70(m，2h)，3.64(t，j＝5.6hz，2h).ms(ei)m/z：409.9(m+).
實施例253-[2-(5-氯-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丙基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲
以與實施例17相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.92(s，1h)，8.18-8.00(m，1h)，7.80-7.59(m，2h)，3.90-3.70(m，4h)，3.62(dt，j＝12.8，6.1hz，4h)，2.05-1.87(m，2h).
ms(ei)m/z：424.0(m+).
實施例263-[2-(5-氯-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丁基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲
以與實施例17相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.89(dd，j＝21.6，16.0hz，1h)，8.04(dd，j＝18.4，8.6hz，1h)，7.79-7.53(m，2h)，4.08(t，j＝6.4hz，1h)，3.87-3.51(m，6h)，2.00(dd，j＝14.5，6.8hz，1h)，1.60-1.28(m，4h).ms(ei)m/z：438.0(m+)
實施例273-[2-(6-氯-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲
以與實施例17相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.12(d，j＝31.9hz，1h)，7.54-7.41(m，1h)，7.21(s，1h)，6.67(s，1h)，3.68(dd，j＝34.6，28.6hz，4h)，3.05(t，j＝5.9hz，2h)，2.63(d，j＝31.7hz，2h).ms(ei)m/z：410.0(m+).
實施例283-[2-(5-甲基-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲
以與實施例17相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.87(t，j＝5.4hz，1h)，7.89(t，j＝10.8hz，1h)，7.61(d，j＝19.9hz，1h)，7.43(d，j＝8.0hz，1h)，4.03(t，j＝5.6hz，2h)，3.74(t，j＝5.6hz，2h)，3.68-3.57(m，2h)，3.53(dd，j＝12.0，6.0hz，2h)，2.36(d，j＝22.8hz，3h).ms(ei)m/z：390.0(m+).
實施例293-[2-(5-甲基-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丙基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲
以與實施例17相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.91(dd，j＝19.6，14.3hz，1h)，7.92(d，j＝8.2hz，1h)，7.67-7.54(m，1h)，7.44(d，j＝8.3hz，1h)，3.92-3.69(m，4h)，3.69-3.50(m，4h)，2.36(d，j＝26.8hz，3h)，1.68(dd，j＝14.0，7.0hz，2h).
ms(ei)m/z：404.0(m+).
實施例303-[2-(5-甲基-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丁基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲
以與實施例17相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.89(dd，j＝21.3，15.6hz，1h)，7.90(dd，j＝16.5，8.3hz，1h)，7.72-7.56(m，1h)，7.41(dt，j＝41.3，20.7hz，1h)，3.75(dt，j＝28.9，14.9hz，4h)，3.62(tt，j＝19.3，6.4hz，4h)，2.36(d，j＝25.5hz，3h)，1.59-1.44(m，2h)，1.36(dt，j＝13.4，6.6hz，2h).ms(ei)m/z：418.0(m+).
實施例313-[2-(5-甲氧基-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲
以與實施例17相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.89(dd，j＝23.3，17.5hz，1h)，8.08(dd，j＝26.5，14.3hz，1h)，7.78-7.58(m，2h)，4.18-3.98(m，2h)，3.74(dt，j＝13.0，5.8hz，2h)，3.67-3.57(m，2h)，3.57-3.43(m，2h)，3.34(s，3h).ms(ei)m/z：406.0(m+).
實施例323-[2-(5-甲氧基-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丙基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲
以與實施例17相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.92(t，j＝5.6hz，1h)，7.91(d，j＝8.7hz，1h)，7.27(ddd，j＝11.5，7.9，3.6hz，2h)，3.85-3.71(m，6h)，3.69-3.55(m，4h)，2.05-1.95(m，1h)，1.75-1.62(m，2h).ms(ei)m/z：420.0(m+).
實施例333-[2-(5-甲氧基-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)丁基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲
以與實施例17相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.91(s，1h)，7.90(d，j＝8.6hz，1h)，7.37-7.19(m，2h)，3.93-3.71(m，5h)，3.70-3.55(m，3h)，2.33(s，1h)，2.05-1.94(m，2h)，1.47(m，2h)，1.39(m，2h).ms(ei)m/z：434.0(m+).
實施例343-[2-(5-溴-1，2-苯并異硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亞硝基脲
以與實施例17相同的方式得到該化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.86(s，1h)，7.97(d，j＝8.5hz，1h)，7.91-7.83(m，1h)，7.77(dd，j＝8.6，2.1hz，1h)，4.05(dd，j＝10.5，5.5hz，2h)，3.82-3.70(m，2h)，3.62(t，j＝6.1hz，2h)，3.53(d，j＝5.8hz，2h).ms(ei)m/z：453.9(m+).
實驗例3518種化合物的體外抗腫瘤活性的測定
采用mtt法，首先將處于對數(shù)生長期的lovo，rko，miapaca-2，panc-1細胞接種于96孔板，接種密度為4×104個/ml。待細胞貼壁后，每孔加入20微升藥液，使藥物最終濃度為0，1，5，10，50，微升/毫升，作用48小時后，加入5mg/ml的mtt溶液(20ul/孔)，放入二氧化碳孵箱培養(yǎng)3～4小時后，小心棄上清，待殘留液體風干后，加入dmso，200微升/孔，于搖床上震搖0.5～1小時，待結(jié)晶完全溶解后，于酶標儀492nm處測吸光度od值。
細胞生長抑制率＝(陰性對照od值-加藥組od值)/(陰性對照od值-空白組od值)×100％
表2
表2的實驗結(jié)果顯示，在rko細胞系中，有16個化合物(編號除9，18外)的ic50值低30um；在lovo細胞系中，有14個化合物(編號除10，11，17，18外)的ic50值低于30um；在mia-paca2細胞系中，有14個化合物(編號除9，10，11，18外)的ic50值低于30um；在panc-1細胞系中，有14個化合物(編號除9，10，17，18外)的ic50值低30um；可見，這一類苯并異硒唑酮修飾的亞硝脲類化合物表現(xiàn)出了良好的抗腫瘤活性。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，對本發(fā)明而言僅僅是說明性的，而非限制性的。本專業(yè)技術(shù)人員理解，在本發(fā)明權(quán)利要求所限定的精神和范圍內(nèi)可對其進行許多改變，修改，甚至等效，但都將落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。