專利名稱：一種新的化合物司丹托寧及其制法和其藥物組合物與用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的化合物-3β-羥基-18-過氧羥基-15，20α18，20β-二環(huán)氧-13，1414，15-二斷孕甾-5，12-二烯-14-羧酸-16-氧內(nèi)酯，其制備方法，含有它的藥物組合物，和在制備舒張血管藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
柳葉白前Cynanchum stauntonii(decne.)Schltr.ex Lev是中藥白前的基源植物之一，為直立半灌木，高30～60cm。莖圓柱形，有細(xì)棱。葉對生，披針形或線狀披針形，長6～13cm，寬0.3～0.5cm，兩端漸尖，中脈明顯。聚傘花序腋生，有花3～8；花萼5深裂；花冠紫紅色，輻射狀，內(nèi)面被長柔毛，裂片狹三角形；副花冠裂片盾狀，先端稍厚而內(nèi)卷；雄蕊5，與雌蕊合生成蕊柱，花藥2室；柱頭微凸，包于花藥的薄膜內(nèi)。骨突果單生。花期5～8月，果期9～10月。生于溪畔、河邊、山谷陰濕處。主產(chǎn)浙江、安徽、福建、江西、湖北、湖南、廣西、河南等省。具有止咳、化痰、鎮(zhèn)痛、消炎功能。中醫(yī)用于治療水腫、腮腺炎、支氣管炎等。在其化學(xué)成分研究方面，至今報(bào)道很少，僅教科書有記載其含有皂苷類成分。
心腦血管疾病是威脅21世紀(jì)人類生命健康的最嚴(yán)重、最常見的疾病，其患病率和死亡率均占各類疾病之首，被譽(yù)為″21世紀(jì)生命的第一殺手″。統(tǒng)計(jì)資料表明從1991年到1999年間我國成年男性因心腦血管疾病而死于腦卒中的比例為45％，女性為41％；死于冠心病的男性和女性均為15％。近十年來，隨著膳食結(jié)構(gòu)的變化和生活運(yùn)動方式的改變，我國心腦血管疾病的發(fā)病率和死亡率均呈上升趨勢，已成為嚴(yán)重影響我國人民健康和制約經(jīng)濟(jì)發(fā)展的最嚴(yán)重的潛在危險(xiǎn)因素之一。其中我國高血壓不僅發(fā)病人數(shù)最多(已超過1億)，而且已證實(shí)是多種心血管疾病的共同的危險(xiǎn)因素。它可以誘發(fā)人體動脈血管硬化、腦卒中和心肌梗塞，引起心腎功能衰竭，造成多器官的損害。
具有舒張血管功能的制劑是臨床上治療一些較常見的心血管疾病，如各種類型的心絞痛、冠心病、心肌缺血、充血性心力衰竭、高血壓急癥等的基本藥物。按其化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用機(jī)理可分為3類硝酸酯類、α腎上腺素能受體阻滯劑和影響腎素--血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的藥物。臨床上較常見的制劑有硝酸甘油、消心痛、哌唑嗪、三甲唑嗪、吲哚拉明、肌丙抗增壓素、巰甲丙脯酸、乙丙脯氨酸等。
盡管至今已經(jīng)開發(fā)了上述諸多藥物，但是，由于上述藥物在防治疾病的同時，仍不同程度地產(chǎn)生一些副作用，如三類血管擴(kuò)張劑均可引起低血壓、心動過緩或過急速、心律失常、循環(huán)虛脫、變性血紅蛋白含量增加、心室顫動、顱內(nèi)壓增高、嗜睡、性功能紊亂、腎功能減退等，因此，繼續(xù)尋找和開發(fā)具有適當(dāng)舒張血管活性的、安全有效的血管擴(kuò)張劑是非常必要的。
國內(nèi)目前在舒張血管藥物的研制方面以中藥居多，化學(xué)藥無新藥問世。研制最多的是一些已知具有舒張血管，改善供血功能藥物的劑型改進(jìn)。沒有全新的舒張血管，改善供血功能的化學(xué)實(shí)體出現(xiàn)。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有舒血管藥物的過度舒張血管的不良反應(yīng)，本發(fā)明的目的在于提供一種新的具有適當(dāng)?shù)氖鎻堁芑钚缘幕衔锼镜ね袑帯?br> 本發(fā)明的另一目的在于提供一種制備這種化合物的方法。
本發(fā)明的又一目的在于提供一種藥物組合物，包括作為活性成分的本發(fā)明化合物和制藥領(lǐng)域中常用的載體。
本發(fā)明的再一目的在于提供司丹托寧在制備具有舒張血管功能的藥物中的應(yīng)用。
具體講，本發(fā)明涉及的化合物司丹托寧的結(jié)構(gòu)如式(1)所示 命名3β-羥基-18-過氧羥基-15，20α18，20β-二環(huán)氧-13，1414，15-二斷孕甾-5，12-二烯-14-羧酸-16-氧內(nèi)酯為完成本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案取柳葉白前(Cynanchum stauntonii(decne.)Schltr.ex Lev)的植株，包括植株的整體或部分，例如葉、莖、皮、根均可作為原料，優(yōu)選柳葉白前的根莖為原料，原料適度干燥。為提高提取的效率可以適當(dāng)粉碎，以利于增大與溶劑的接觸面積，提高效率。
提取原藥材的提取溶劑使用水、有機(jī)溶劑或兩者的混合物，有機(jī)溶劑包括醋酸乙酯、氯仿、石油醚、醇類。優(yōu)選的提取溶劑是水與醇類的混合物，例如含有醇1-95％(體積比)的水；優(yōu)選的醇類包括甲醇、乙醇、異丙醇、丁醇，最優(yōu)選的是乙醇。提取溶劑的量為原藥重量的1-14倍，每次加入提取溶劑的量最好沒過藥材原料。提取可以在靜態(tài)或動態(tài)下，優(yōu)選在動態(tài)條件下。為了提高提取的效率，可以使用超聲波等。提取的溫度是從室溫(例如20℃)到溶劑回流溫度的范圍內(nèi)，優(yōu)選在回流的溫度下。提取可連續(xù)或間歇進(jìn)行，間歇提取時可重復(fù)1-4次，提取結(jié)束后，回收溶劑得粗浸膏。粗浸膏可用水或含水的乙醇或甲醇重新溶解，優(yōu)選是醇濃度為50-90％。然后用低級性的有機(jī)溶劑萃取以除去粗浸膏中的低級性成分，優(yōu)選的低級性有機(jī)溶劑包括苯、環(huán)己烷、石油醚、溶劑油，更優(yōu)選的是石油醚、溶劑油，最優(yōu)選的是石油醚。所用的低級性有機(jī)溶劑量可以是粗浸膏醇溶液的1-6倍。萃取的次數(shù)為2-5遍，優(yōu)選是3-4次。萃取完成后棄去低級性有機(jī)溶劑部分。醇溶液部分進(jìn)行濃縮，并轉(zhuǎn)移到蒸發(fā)皿中進(jìn)一步蒸干，得二級浸膏。
上步所得的二級浸膏用水溶解，水溶液再用有機(jī)溶劑萃取，保留有機(jī)溶劑層，棄去水層以除去水溶性成分。優(yōu)選的有機(jī)溶劑包括醋酸乙酯、氯仿、乙醚、苯、二氯甲烷，更優(yōu)選的是醋酸乙酯。可以萃取1-6次，優(yōu)選是2-5次，更優(yōu)選是3次。每次萃取使用的有機(jī)溶劑的量是水體積的0.1-5倍，優(yōu)選是0.2-1.5倍。合并有機(jī)溶劑萃取液并可以先用NaHCO3水溶液萃取、再用H2O洗滌至中性。最后濃縮蒸干得總提物。
總提物用少量有機(jī)溶劑溶解，優(yōu)選是有機(jī)溶劑甲醇。用2-13倍重量的硅膠拌樣，用硅膠柱色譜法分離。分離用硅膠的重量是上樣量的15-80倍，優(yōu)選是20-30倍，硅膠的規(guī)格可以是柱色譜或薄層色譜用硅膠，優(yōu)選是200-300目柱色譜硅膠。硅膠柱的洗脫液可以使用極性從小到大的溶劑洗脫，優(yōu)選的洗脫液是石油醚-醋酸乙酯或石油醚-丙酮混合溶劑，其體積比例可以從9∶1開始，逐步增加醋酸乙酯或丙酮的含量，以提高極性。石油醚-醋酸乙酯的比例可以按9∶1，8∶1，7∶1，6∶1……逐步變大。當(dāng)石油醚∶醋酸乙酯按體積比調(diào)為5∶1，比重為0.708g/cm3時，不久即洗脫得到含本發(fā)明化合物的洗脫流分。分別回收各洗脫流份的洗脫溶劑，含有本發(fā)明化合物的流份即有結(jié)晶析出，并可用有機(jī)溶劑如醋酸乙酯、甲醇、丙酮等重結(jié)晶，得本發(fā)明的化合物，為無色棱晶。當(dāng)然也可以使用其他方法檢測本發(fā)明化合物的流出，例如核磁共振技術(shù)等。也可以合并含有本發(fā)明化合物的洗脫流份，減壓濃縮。殘余物用少量醋酸乙酯溶解，放置，結(jié)晶，過濾，得本發(fā)明的化合物根據(jù)本發(fā)明還涉及含有作為活性成份的本發(fā)明的化合物和常規(guī)藥物賦形劑或輔劑的藥物組合物。通常本發(fā)明藥物組合物含有0.1-95重量％的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明化合物的藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備。用于此目的時，如果需要，可將本發(fā)明化合物與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成可作為人藥或獸藥使用的適當(dāng)?shù)氖┯眯问交騽┝啃问健?br> 本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等，優(yōu)選口服。
本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物的給藥途徑可為注射給藥。注射包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射和皮內(nèi)注射等。
給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型。如液體劑型可以是真溶液類、膠體類、微粒劑型、乳劑劑型、混懸劑型。其他劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、栓劑、凍干粉針劑等。
本發(fā)明化合物可以制成普通制劑、也可以是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。
為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、硫酸鈣、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，例如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油等；吸收促進(jìn)劑，例如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤滑劑，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。其它載體如聚丙烯酸樹脂類、脂質(zhì)體，水溶性載體如PEG4000和PEG6000、PVP等。還可以將片劑進(jìn)一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。
例如為了將給藥單元制成丸劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高嶺土、滑石粉等；粘合劑，如阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。
例如為了將給藥單元制成膠囊，將有效成分即本發(fā)明化合物與上述的各種載體混合，并將由此得到的混合物置于硬的明膠膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分本發(fā)明化合物制成微囊劑，混懸于水性介質(zhì)中形成混懸劑，亦可裝入硬膠囊中或制成注射劑應(yīng)用。
例如，將本發(fā)明化合物制成注射用制劑，如溶液劑、混懸劑溶液劑、乳劑、凍干粉針劑，這種制劑可以是含水或非水的，可含一種和/或多種藥效學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、粘合劑、潤滑劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑。如稀釋劑可選自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，為了制備等滲注射液，可以向注射用制劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添加常規(guī)的助溶劑、緩沖劑、pH調(diào)節(jié)劑等。這些輔料是本領(lǐng)域常用的。
此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其它材料。
為達(dá)到用藥目的，增強(qiáng)治療效果，本發(fā)明的藥物或藥物組合物可用任何公知的給藥方法給藥。
本發(fā)明化合物、藥物組合物的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預(yù)防或治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，患者或動物的性別、年齡、體重、性格及個體反應(yīng)，給藥途徑、給藥次數(shù)、治療目的，因此本發(fā)明的治療劑量可以有大范圍的變化。一般來講，本發(fā)明中藥學(xué)成分的使用劑量是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明化合物組合物中最后的制劑中所含有的實(shí)際藥物數(shù)量，加以適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，以達(dá)到其治療有效量的要求，完成本發(fā)明的預(yù)防或治療目的。本發(fā)明化合物的每天的合適劑量范圍為0.001-150mg/Kg體重，優(yōu)選為0.01-100mg/Kg體重，更優(yōu)選為0.01-60mg/Kg體重，最優(yōu)選為0.1-10mg/Kg體重。上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個，例如二、三或四個劑量形式給藥，這受限于給藥醫(yī)生的臨床經(jīng)驗(yàn)以及包括運(yùn)用其它治療手段的給藥方案。
藥理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明1.司丹托寧對內(nèi)皮完整大鼠主動脈血管環(huán)的舒張作用司丹托寧能夠濃度依賴性地舒張苯腎上腺素所致血管收縮，pIC50為5.24±0.87(n＝7)。
2.司丹托寧對去內(nèi)皮大鼠主動脈血管環(huán)的舒張作用司丹托寧在較低濃度時(10-8～10-5M)舒張血管的作用不強(qiáng)，但在10-4M濃度下，仍能夠舒張血管達(dá)64.78±26.87％。
3.司丹托寧對高鉀(100nM)所致大鼠主動脈收縮的作用在較低濃度下，司丹托寧作用很弱，而在10-4M濃度下可舒張血管達(dá)53.41±7.28％。
從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看出，司丹托寧可對抗苯腎上腺素、高鉀引起鈣通道開放所致血管收縮的作用。
具體實(shí)施例方式
下面的實(shí)施例及藥物活性實(shí)驗(yàn)用來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但這并不意味著對本發(fā)明的任何限制。
實(shí)施例1、本發(fā)明化合物的制備取干燥的柳葉白前(Cynanchum stauntonii(decne.)Schltr.ex Lev)根5kg，用95％酒精加熱回流提取，共提取3次，每次加入酒精量以剛沒過白前樣品為準(zhǔn)。過濾，合并3次提取液，減壓濃縮回收酒精。
提取物用2500ml約80％的酒精重新溶解，然后用石油醚萃取4遍，第一次萃取用1500ml石油醚，后三次各用1000ml。棄去石油醚部分。酒精部分進(jìn)行濃縮，并轉(zhuǎn)移到蒸發(fā)皿中進(jìn)一步蒸干，然后重新用2500ml水溶解，再用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，共萃取3次，每次用1000ml有機(jī)溶劑，合并3次乙酸乙酯萃取液。將乙酸乙酯用5％NaHCO3水溶液、H2O各洗3次，每次均用1500ml。最后將乙酸乙酯溶液濃縮蒸干并稱重得22g總提物。
將總提物用少量甲醇加熱溶解，加40g硅膠(200-300目)拌樣后上柱(硅膠用量為500g)。用石油醚-醋酸乙酯混合溶劑按極性遞增(9∶1，8∶1，…)進(jìn)行洗脫。將石油醚∶醋酸乙酯按體積比調(diào)為5∶1，比重為0.708g/cm3時，不久即洗脫得到該化合物的流分；將洗脫劑回收后，殘余物用少量醋酸乙酯溶解，放置結(jié)晶；將結(jié)晶過濾得無色棱晶，即得式(I)化合物。
mp173-175°分子式C21H28O7IR v max KBr cm-13398，3170(OH)，2941，1724(C＝O)，1631(C＝C)，1486，1385，1365，1132和1043。
FAB-MS m/z375[M+H-H2O]+和359[M+H-H2O2]+。
EI-MS m/z374，358，340，191，166，145(100)，83。
1H和13C NMR數(shù)據(jù)見表1。
表1司丹托寧的1H(500MHz)和13C NMR(125MHz)光譜數(shù)據(jù)原子δCDEPTδHJH-H(Hz)1H-1HCOSY中的偶合1 38.4 CH2Hα:1.18 td 13.5，4.0 H-1β，H-2α，H-2βHβ1.93 dt 13.5，3.5 H-1α，H-2α，H-2β2 32.3 CH2Hα1,80 br d 13.5，H-1α，H-1β，H-2βHβ1.47 tdd 13.5，11.0，4.0 H-1α，H-1β，H-2α3 71.9 CH Hα3.39 tt 11.0，4.5 H-2α，H-2β，H-4α，H-4β4 42.7 CH2Hα2.28 ddd 13.0，5.0，2.0H-3α，H-4β，Hβ2.17 overlappedH-3α，H-4α，H-65 141.4 C6 120.6 CH 5.32 br sH-4β，H2-77 30.9 CH2Hα2.17 overlappedH-6，H-8βHβ2.17 overlapped8 42.4 CH Hβ2.37dt11.5，5.0H2-7，H-9α
9 53.2CH Hα1.84，td 11.5，5.5H-8β，H-11α，H-11β1038.6C1130.2CH2Hα2.48 dt 13.0，4.5H-9α，H-11β，H-12Hβ2.41 br t12.0 H-9α，H-11α，H-1212134.3 CH 5.35 br d 12.5 H-11α，H-11β，H-18，H-17α13139.5 C14180.8 C1571.2CH2Hα4.33 dd 10.0，7.5H-15β，H-16αHβ2.85 dd 10.0，5.0H-15α，H-16α1678.9CH Hα5.53 td 7.5，4.5 H-15α，H-15β，H-17β1756.6CH Hα3.20 br d8.0 H-12，H-16α18107.5 CH Hβ5.75 br s H-121920.3CH31.06 s20116.1 C2124.1CH31.54 s結(jié)構(gòu)確證其IR光譜給出羥基(3398cm-1和3170cm-1)、羰基(1724cm-1)和雙鍵(1631cm-1)的吸收峰。
FAB-MS中有375[M+H-H2O]+和359[M+H-H2O2]+的離子碎片，表明其含有過氧羥基(參考，El-Feraly，F(xiàn).S.，Chan，Y.M.，1977，Peroxycostunolide and peroxyparthenolidetwo cytotoxic germacranolidehydroperoxide from Magnolia grandiflora.Structural revision of verlotorinand artemorin.Tetrahedron Lett(23)，1973-1976)。
13C NMR譜顯示21個碳信號(表1)。
在其1HNMR譜中，19位和21位的2個與季碳相連的甲基的單峰δ1.54和1.06(各3H，s，CH3-19，21)，1個連羥基的次甲基δ3.39(1H，tt，J＝11.0，4.5Hz，H-3α)和1個CH-CHO-CH2O系統(tǒng)δ3.20(1H，br d，J＝8.0Hz，H-17α)，4.33(1H，dd，J＝10.0，7.5Hz，H-15α)，3.86(1H，dd，J＝10.0，5.0Hz，H-15β)和5.53(1H，td，J＝7.5，4.5Hz，H-16α)可以很容易地得到辨認(rèn)。結(jié)合13C和DEPT NMR譜以及HMQC實(shí)驗(yàn)還可以判斷司丹托寧含有1個連有2個氧原子的次甲基δ5.75(1H，br s，H-18β)、2個不飽和次甲基δ5.35(1H，br d，J＝12.5Hz，H-12)和5.32(1H，br s，H-6)、2個飽和次甲基δ2.37(1H，m，H-8β)和1.85(1H，dd，J＝11.5，5.5Hz，H-9α)以及5個飽和亞甲基δ1.18(1H，td，J＝13.5，4.0Hz，H-1α)、1.93(1H，dt，J＝13.5，3.5Hz，H-1β)、1.80(1H，br d，J＝13.5，H-2α)、1.47(1H，tdd，J＝13.5，11.0，4.0Hz，H-2β)、2.28(1H，ddd，J＝13.0，5.0，2.0Hz，H-4α)、2.17(3H，m，H-4β，H-7α，H-7β)、2.48(1H，dt，J＝12.5，4.5Hz，H-11α)和2.41(1H，br t，J＝12.0Hz，H-11β)的共振信號。另外，DEPT譜還顯示司丹托寧含有1個羰基δ180.8(C-14)、2個不飽和季碳δ141.4(C-5)和139.5(C-13)以及2個飽和季碳δ38.6(C-10)和116.1(C-20)。
在司丹托寧的COSY1H-1H譜中，除了19位和21位的2個與季碳相連的甲基的單峰外，其余信號構(gòu)成了一個大的自旋系統(tǒng)；其中H-18β由于連有2個氧原子，其共振信號出現(xiàn)在最低場，并顯示出與H-12的丙烯體系偶合的交叉峰。由此開始，可以歸屬分子中所有其他質(zhì)子的共振信號。譜中所有的1H-1H COSY相關(guān)信號見表1。
司丹托寧的HMBC譜給出了其分子中碳原子的連接方式，而其NOESY譜則表明了分子的相對構(gòu)型；司丹托寧的C-H遠(yuǎn)程相關(guān)和NOE相關(guān)分別為 司丹托寧主要HMBC相關(guān) 司丹托寧的NOE相關(guān)司丹托寧最后的結(jié)構(gòu)確證是通過其X-射線單晶結(jié)構(gòu)分析完成的，其晶體結(jié)構(gòu)為。
通過光(波)譜分析，將司丹托寧的結(jié)構(gòu)鑒定為3β-羥基-18-過氧羥基-15，20α18，20β-二環(huán)氧-13，1414，15-二斷孕甾-5，12-二烯-14-羧酸-16-氧內(nèi)酯。
結(jié)構(gòu)式為
藥理實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)例1化合物司丹托寧對α受體激動劑所致大鼠主動脈收縮的影響試驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)動物Wistar大鼠，雄性，體重180～200g左右，購自醫(yī)科院動物中心。
藥品及試劑苯腎上腺素(pheylephrine，phe)，Sigma公司提供。其他試劑均為市售國產(chǎn)分析純。試驗(yàn)化合物為實(shí)施例1制備。
儀器恒溫水槽，上?？茦防砘瘷C(jī)械廠；BIOPAC system多道生物信號分析系統(tǒng)，美國；JZ101型肌肉張力換能器，高碑店市新航機(jī)電設(shè)備有限公司。10mL玻璃浴皿。
試驗(yàn)方法擊昏大鼠，頸動脈放血。取大鼠胸主動脈，分離附著組織，剪成3～5mm的血管環(huán)。置充滿K-H營養(yǎng)液的10mL浴皿中，恒溫37℃，調(diào)節(jié)靜息張力1g，平衡1小時，其間每20分鐘換一次營養(yǎng)液。用Phe(10-7M)預(yù)處理兩次，血管環(huán)使其收縮至平臺，然后開始實(shí)驗(yàn)。
濃度累加化合物司丹托寧(10-8～10-4M)，記錄舒張數(shù)值，求算pIC50(為IC50，mol/ml的負(fù)對數(shù)值)。
并以硝酸甘油作為陽性對照。
去內(nèi)皮血管重復(fù)上述試驗(yàn)過程。(是否有硝酸甘油對照)表2司丹托寧對內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮大鼠主動脈血管環(huán)的舒張作用(均值±方差)。
司丹托寧硝酸甘油濃度-lgC，M 舒張百分率％ 濃度-lgC，M舒張百分率％內(nèi)皮完整去內(nèi)皮-10 6.74±3.288 9.71±6.46 4.26±3.50-9.520.89±14.337 19.39±9.39 6.29±4.66-9 30.43±19.666 19.17±17.338.25±3.84-8.540.87±22.835 64.73±20.078.96±5.48-8 57.64±30.014 71.93±14.5664.78±26.87 -7.571.52±31.16-7 86.10±24.28-6.590.48±0pIC505.24±0.87 --pIC508.28±0.63
結(jié)論對于內(nèi)皮完整的血管環(huán)，司丹托寧能夠濃度依賴性地舒張Phe所致血管收縮，pIC50為5.24±0.87(n＝7)。
對于去內(nèi)皮血管環(huán)，司丹托寧在較低濃度時(10-8～10-5M)舒張血管的作用不強(qiáng)，但在10-4M濃度下，仍能夠舒張血管達(dá)64.78±26.87％。
司丹托寧對血管有一定的舒張作用，在較低濃度下，可能為內(nèi)皮依賴性地舒張作用，而在高濃度下，可能直接舒張血管平滑肌。因此，能夠?qū)筆he所致去內(nèi)皮血管所致血管的收縮作用。結(jié)果看出，司丹托寧可對抗α受體激動劑引起鈣通道開放所致血管收縮的作用。
實(shí)驗(yàn)例2化合物司丹托寧對高鉀所致大鼠主動脈收縮的影響(內(nèi)皮完整？)試驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)動物Wistar大鼠，雄性，體重180～200g左右，購自醫(yī)科院動物中心。
藥品及試劑試驗(yàn)化合物為實(shí)施例1制備，其他均為市售國產(chǎn)分析純。
儀器恒溫水槽，上?？茦防砘瘷C(jī)械廠；BIOPAC system多道生物信號分析系統(tǒng)，美國；JZ101型肌肉張力換能器，高碑店市新航機(jī)電設(shè)備有限公司。10mL玻璃浴皿。
試驗(yàn)方法擊昏大鼠，頸動脈放血。取大鼠胸主動脈，分離附著組織，剪成3～5mm的血管環(huán)。置充滿K-H營養(yǎng)液的10mL浴皿中，恒溫37℃，調(diào)節(jié)靜息張力1g，平衡1小時，其間每20分鐘換一次營養(yǎng)液。以高鉀(100nM)收縮血管至平臺，然后開始實(shí)驗(yàn)。
濃度累加化合物司丹托寧(10-8～10-4M)，記錄舒張數(shù)值，并以維拉帕米作為陽性對照。
表3司丹托寧對高鉀(100nM)所致大鼠主動脈收縮的作用(均值±方差)。
濃度-lgC，M 舒張百分率％司丹托寧 維拉帕米
80 3.00±1.8070 46.52±16.1860 97.36±8.5153.65±5.67 --453.41±7.28 --結(jié)論對于高鉀所引起的血管收縮，在較低濃度下，司丹托寧作用很弱，而在10-4M濃度下可舒張血管達(dá)53.41±7.28％。維拉帕米劑量依賴性舒張高鉀引起的血管收縮，在10-6M濃度下血管舒張達(dá)到97.36±8.51(見表3)。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看出，司丹托寧可對抗高鉀引起鈣通道開放所致血管收縮的作用。
權(quán)利要求
1.一種如式(I)所示的化合物
2.制備如權(quán)利要求1所述的化合物的方法，其特征在于(a)柳葉白前(Cynanchum stauntonii(decne.)Schltr.ex Lev)，加溶劑提取，過濾，合并提取液，濃縮得一級提取物；(b)一級提取物用醇溶解，然后用弱極性有機(jī)溶劑萃取，棄去弱極性有機(jī)溶劑部分；醇溶液濃縮至干得二級提取物；(c)二級提取物用水溶解，再用有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取，合并有機(jī)溶劑萃取液濃縮至干得總提物；(d)總提物用硅膠柱分離，用洗脫劑按極性遞增進(jìn)行洗脫，得到含該化合物的流分；(e)將洗脫劑回收后，殘余物用少量結(jié)晶溶劑溶解，放置結(jié)晶，過濾得結(jié)晶為司丹托寧。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的制備方法，其特征在于，所述的柳葉白前(Cynanchumstauntonii(decne.)Schltr.ex Lev)是柳葉白前的根。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的制備方法，其特征在于，(a)步驟中的提取溶劑選自水、有機(jī)溶劑或兩者的混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的制備方法，其特征在于，所述的有機(jī)溶劑選自醋酸乙酯、氯仿、石油醚、醇類。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的制備方法，其特征在于，所述的醇類包括甲醇、乙醇、異丙醇、丁醇。
7.根據(jù)權(quán)利要求2的制備方法，其特征在于，(b)步驟中選用的醇是純的或含水的甲醇或乙醇。
8.根據(jù)權(quán)利要求2的制備方法，其特征在于，(b)步驟中所述的弱極性有機(jī)溶劑包括苯、環(huán)己烷、石油醚、溶劑油。
9.根據(jù)權(quán)利要求2的制備方法，其特征在于，(C)步驟中有機(jī)溶劑萃取液在濃縮前用NaHCO3水溶液、H2O萃取。
10.根據(jù)權(quán)利要求2的制備方法，其特征在于，(C)步驟中所述的有機(jī)溶劑選自醋酸乙酯、氯仿、乙醚、苯、二氯甲烷。
11.根據(jù)權(quán)利要求2的制備方法，其特征在于，(d)步驟中所述的硅膠的重量是總提物的15-80倍、所述硅膠的規(guī)格是200-300目。
12.根據(jù)權(quán)利要求2的制備方法，其特征在于，(d)步驟中所述的洗脫液選自石油醚-醋酸乙酯、石油醚-丙酮混合溶劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的制備方法，其特征在于，洗脫液體積比例是從9∶1開始，逐步增加醋酸乙酯或丙酮的含量。
14.根據(jù)權(quán)利要求2的制備方法，其特征在于，(e)步驟中所述的結(jié)晶所用的溶劑為選自醋酸乙酯、甲醇、丙酮。
15.權(quán)利要求1所述的化合物在制備具有舒張血管功能的藥物中的應(yīng)用。
16.一種舒張血管的藥物組合物，其特征在于，含有藥物有效劑量的如權(quán)利要求1所述的化合物，及藥用載體。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物可以是片劑、膠囊、丸劑、注射劑、緩釋制劑、控釋制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)所示的化合物司丹托寧，其制備方法，含有它們的藥物組合物，及其作為藥物，尤其是作為舒張血管藥物的用途。
文檔編號C07D493/00GK1623994SQ20031011688
公開日2005年6月8日 申請日期2003年12月2日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月2日
發(fā)明者秦海林, 王鵬, 李志宏, 朱海波, 張嶺 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所