專利名稱：雙苯并異唑酮類化合物及其合成和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及雙苯并異唑酮類化合物，合成方法和含有其的藥物組合物，以及雙苯并異唑酮類化合物的藥學(xué)用途，尤其在制備抗腫瘤、抗病毒和抗菌藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
近二十年來(lái)，硒的生物化學(xué)研究取得一系列重要突破和進(jìn)展，有機(jī)硒化合物在生命科學(xué)方面的特征及其廣泛的藥理作用日益受到重視。研究表明，有機(jī)硒化合物在抗炎、抗氧化、抗腫瘤和治療心腦血管疾病方面有明顯的作用，并能對(duì)免疫系統(tǒng)進(jìn)行調(diào)節(jié)。代表性的有機(jī)硒藥物依布硒啉(Ebselen)已進(jìn)入III期臨床研究。
依布硒啉，即2-苯基-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮(INNEbselen)，是國(guó)外開發(fā)中的抗炎新藥，其特點(diǎn)是低毒并具有廣泛的藥理活性，為活性氧相關(guān)疾病的治療提供了一個(gè)很有前途的手段，并為有機(jī)硒藥物的發(fā)展展示了廣闊的前景。理論認(rèn)為該化合物是模擬谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)最成功的小分子有機(jī)硒化合物，可催化GSH還原分解各種有機(jī)氫過(guò)氧化物。
其類似物苯并異噻唑酮是較強(qiáng)的抗氧化劑，同時(shí)也是一種很好的殺菌劑，對(duì)細(xì)菌、真菌均有抑制作用，具有較為廣泛的生物功能特點(diǎn)。它不僅可殺菌同時(shí)還可以抑制血小板聚集防止血栓的形成，抗動(dòng)脈粥樣硬化，防止心臟病的發(fā)作。在抗炎活性與其含硒類似物Ebselen的作用相似。異噻唑酮對(duì)逆轉(zhuǎn)錄病毒還有很好的抑制作用。但雙苯并異唑酮類化合物合成及其應(yīng)用如雙異噻唑酮的對(duì)稱結(jié)構(gòu)；雙異碲唑酮的對(duì)稱結(jié)構(gòu)；異噻唑酮與異硒唑酮的不對(duì)稱結(jié)構(gòu)；異噻唑酮與異碲唑酮的不對(duì)稱結(jié)構(gòu)；異硒唑酮與異碲唑酮的不對(duì)稱結(jié)構(gòu)，尚未有人報(bào)道。在生物活性研究方面，如以上一系列雙苯并異唑酮類化合物的含硫、碲有機(jī)化合物的抗腫瘤、抗菌研究尚未見報(bào)道。
我們選擇苯并異硒唑酮作為基本母核，將硒替換成其同族元素硫，碲合成了相應(yīng)的雙苯并異唑酮類化合物，并研究了其抗腫瘤、抗菌活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及以下通式的雙苯并異唑酮類化合物及其藥物學(xué)上可接受的鹽
其中R1和R2是相同或不同的，彼此獨(dú)立選自S，Se或Te；其中R是C1-C20線性或支化、飽和或不飽和的二價(jià)烴基，C6-C30亞芳基，C5-C20亞環(huán)烷基，C5-C20亞雜環(huán)基，含有碳環(huán)、雜環(huán)或芳環(huán)的C4-C30二價(jià)烴基，其中碳環(huán)、雜環(huán)或芳環(huán)可以位于鏈中或鏈端，有機(jī)基磺?；?，或羰基有機(jī)基羰基(有機(jī)基包括亞烷基、亞烯基、亞芳基、亞雜環(huán)基等)，所有這些基團(tuán)是取代或未取代的，例如被酸基、酯基、羥基、氨基、鹵素、酰胺基等取代，其碳鏈可以任意插入選自O(shè)、N和S中的一個(gè)或多個(gè)雜原子；其中R優(yōu)選是(-CH2)n-，其中n是1-8；或-(C6H4)n-，其中n是1-3；或-(CH2)n-SS-(CH2)n-，其中n是1-3；或-(CH2)n-NH-(CH2)n-，其中n是1-3；或-C(＝O)-R’-C(＝O)-，其中R’是二價(jià)烴基，如亞烷基，亞烯基，亞芳基，亞環(huán)烷基或亞雜環(huán)基；或-(CH2)n-O-(CH2)n-，其中n是1-4。
尤其優(yōu)選的是以下結(jié)構(gòu)式的化合物 n＝2-8；R1＝R2或R1≠r2其中R1、r2＝S或Se或Te
n ＝1-3；R1＝R2或R1≠R2其中R1、R2＝S或Se或Te n ＝1-3；R1＝R2或R1≠R2其中R1、R2＝S或Se或Te本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述通式化合物的制備方法，包括以下步驟讓以下結(jié)構(gòu)式III和IV的化合物 與結(jié)構(gòu)式H2N-R-NH2的化合物在-20℃到5℃的溫度下，在惰性溶劑中，在堿性條件下，在惰性氣體保護(hù)下反應(yīng)制得所需的化合物。
其中R1和R2是相同或不同的，彼此獨(dú)立選自S，Se或Te；其中R是C1-C20線性或支化、飽和或不飽和的二價(jià)烴基，C6-C30亞芳基，C5-C20亞環(huán)烷基，C5-C20亞雜環(huán)基，含有碳環(huán)、雜環(huán)或芳環(huán)的C4-C30二價(jià)烴基，其中碳環(huán)、雜環(huán)或芳環(huán)可以位于鏈中或鏈端，有機(jī)基磺酰基，或羰基有機(jī)基羰基，所有這些基團(tuán)的碳鏈可以任意插入選自O(shè)、N和S中的一個(gè)或多個(gè)雜原子；其中R優(yōu)選是(-CH2)n-，其中n是1-8；-(C6H4)n-，其中n是1-3；-(CH2)n-SS-(CH2)n-，其中n是1-3；-(CH2)n-NH-(CH2)n-，其中n是1-3；或-(CH2)n-O-(CH2)n-，其中n是1-4。
適宜的惰性溶劑包括例如四氫呋喃，二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺，二氯甲烷，乙醚等。
適合的堿性條件例如為pH8-11。
按照上述方法，獲得了本發(fā)明結(jié)構(gòu)式I和II的兩種異構(gòu)體，這兩種異構(gòu)體一般以1∶1的摩爾比共同存在。
本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供上述通式化合物在制備抗腫瘤、抗病毒和抗菌藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有藥學(xué)有效量的上述通式(I)或(II)化合物與藥物學(xué)上可接受的賦形劑或載體或任選的添加劑如香味劑、甜味劑等組成的藥物組合物。其中通式(I)或(II)的化合物在藥物組合物中的含量例如可以為1-95％。
本發(fā)明的藥物組合物還可按常規(guī)技術(shù)制成膠囊、片劑、口服液、注射或輸液劑型，并根據(jù)需要制成控釋或緩釋系統(tǒng)給藥。
本發(fā)明的通式(I)或(II)的化合物可以獨(dú)自使用或以組合物的形式使用。
本發(fā)明的通式(I)或(II)的化合物的劑量根據(jù)病人年齡、體重、病程、疾病的輕重等因素來(lái)決定。例如，作為參考，在口服劑型的情況下，本發(fā)明的化合物的用量可以是0.1-10mg/kg/d，在注射劑型的情況下，本發(fā)明的化合物用量可以為0.1-5mg/kg/d。
具體實(shí)施例在以下實(shí)施例中，按照下述合成路線合成了以下化合物，應(yīng)該指出的是，這些實(shí)施例僅用于例證的目的，不限制本發(fā)明的范圍。雖然只給出了本發(fā)明化合物的一種異構(gòu)體形式，但在本文中還包括了其異構(gòu)體形式。
化合物1，4-二[2-(1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮)]-苯的合成 化合物EIS1，2-二[2-(1，2-苯并異噻唑-3(2H)-酮)]-乙烷的合成
化合物EIIS1，3-二[2-(1，2-苯并異噻唑-3(2H)-酮)]-丙烷的合成 化合物EIIIS1，4-二[2-(1，2-苯并異噻唑-3(2H)-酮)]-丁烷的合成 化合物EITe1，2-二[2-(1，2-苯并異碲唑-3(2H)-酮)]-乙烷的合成 化合物Ebs-11-[2-(1，2-苯并異噻唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮)]乙烷的合成 化合物EsTe1-[2-(1，2-苯并異噻唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并異碲唑-3(2H)-酮)]乙烷的合成 化合物EbTe1-[2-(1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并異碲唑-3(2H)-酮)]乙烷的合成 1，2-二[2-(1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮)甲基]-二硫醚
1，4-二[2-(1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮)]-苯磺?；衔?1，2-二[(1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮-2-基)羰基]乙烷 實(shí)施例1 中間產(chǎn)物的合成中間產(chǎn)物1重氮鹽的合成 將含有18g鄰氨基苯甲酸和1∶1鹽酸51.4mL溶液用冰浴冷至小于5℃，攪拌下緩慢滴加入亞硝酸鈉溶液制得重氮鹽。
中間產(chǎn)物22-硒氯苯甲酰氯的合成
(1)2，2’-二硒化雙苯甲酸的制備在室溫氮?dú)獗Ｗo(hù)下，向6g硒粉與50mL水混合的懸浮液中緩慢滴加硼氫化鉀水溶液。硒粉全部溶解，再加入等量6g硒粉，得到黑紅色溶液。室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，再加入氫氧化鈉水溶液，然后滴加入重氮鹽溶液。滴加完畢，升溫至60℃反應(yīng)2小時(shí)，繼續(xù)反應(yīng)3小時(shí)。加入1∶1鹽酸酸化，過(guò)濾水洗后將所得紅褐色固體加入到100mL碳酸鈉溶液中，除去不溶物。冷卻后再加入1mol/L的鹽酸至PH值小于1，減壓過(guò)濾，水洗后干燥得49.6g淡黃色固體。即為2，2’-二硒化雙苯甲酸。
(2)2-硒氯苯甲酰氯的制備以6g，2，2-二硒化雙苯甲酸加30ml二氯亞砜混合，攪拌下加熱回流3小時(shí)之后旋蒸出多余的二氯亞砜。剩下的物質(zhì)用正己烷重結(jié)晶，得黃色固體3.4g，即為2-硒氯苯甲酰氯。
中間產(chǎn)物32-硫氯苯甲酰氯的合成
(1)2，2’-二硫化雙苯甲酸的制備在室溫氮?dú)獗Ｗo(hù)下，向2.4g硫粉與50mL水混合的懸浮液中緩慢滴加硼氫化鉀水溶液。硫粉少部分溶解，再加入等量2.4g硫粉，室溫?cái)嚢?小時(shí)45分鐘，溶液從無(wú)色變?yōu)辄S綠色再變?yōu)辄S色最后變?yōu)樽丶t色，硫粉大部分溶解。再加入氫氧化鈉水溶液(20g氫氧化鈉+50mL水)，然后滴加入重氮鹽溶液，產(chǎn)生橙紅色氣泡，硫粉基本溶解。滴加完畢，升溫至60℃反應(yīng)2小時(shí)，繼續(xù)反應(yīng)3小時(shí)。加入1∶1鹽酸酸化，過(guò)濾水洗后將所得淺黃色固體加入到100mL碳酸鈉溶液中，除去不溶物。冷卻后再加入1mol/L的鹽酸至PH值小于1，減壓過(guò)濾，水洗后干燥得47.6g白色固體。即為2，2’-二硫化雙苯甲酸。
(2)2-硫氯苯甲酰氯的制備以9.1g2，2-二硫化雙苯甲酸加59.34ml二氯亞砜混合，攪拌下加熱回流3小時(shí)之后旋蒸出多余的二氯亞砜。剩下的物質(zhì)用正己烷重結(jié)晶，得金黃色固體3.7g，即為2-硫氯苯甲酰氯。
中間產(chǎn)物42-碲氯苯甲酰氯的合成
(1)2，2’-二碲化雙苯甲酸的制備在室溫氮?dú)獗Ｗo(hù)下，向4.85g碲粉與25mL水混合的懸浮液中緩慢滴加硼氫化鉀水溶液。碲粉部分溶解，溶液變黑又變澄清最后變?yōu)樽仙?。再加入等?.85g碲粉，液面產(chǎn)生大量氣泡，最后氣泡消失，溶液變成黑紅色。再加入氫氧化鈉水溶液，然后滴加入重氮鹽溶液，生成白霧，黑色氣泡，溶液變?yōu)楹诩t色。滴加完畢，升溫至60℃反應(yīng)2小時(shí)，繼續(xù)反應(yīng)3小時(shí)，得到深紫紅色溶液。加入1∶1鹽酸酸化，過(guò)濾水洗后將所得綠色粘稠固體加入到50mL碳酸鈉溶液中，除去不溶物。冷卻后再加入1mol/L的鹽酸至PH值小于1，減壓過(guò)濾，水洗后干燥得12.7g黃色固體。即為2，2’-二碲化雙苯甲酸。
(2)2-碲氯苯甲酰氯的制備以6.0g2，2-二碲化雙苯甲酸加24.13ml二氯亞砜混合，攪拌下加熱回流3小時(shí)之后旋蒸出多余的二氯亞砜。剩下的物質(zhì)用苯重結(jié)晶，得金黃色固體5.2g，即為2-碲氯苯甲酰氯。
實(shí)施例2化合物EIS1，2-二[2-(1，2-苯并異噻唑-3(2H)-酮)]-乙烷的合成向250ml三口瓶中加入12ml四氫呋喃、0.37ml乙二胺、3.44ml三乙胺，冰浴攪拌下通入氮?dú)?。稱取2.2g硫氯固體放入小燒杯加53.5ml四氫呋喃，硫氯溶解，得到黃色透明溶液。將此溶液用滴液漏斗滴入三口瓶，滴加速度較快。有淺黃色固體生成，溶液顏色變?yōu)辄S色。瓶?jī)?nèi)有小的白色絮狀物漂浮。硫氯溶液滴加完畢反應(yīng)三小時(shí)后，減壓過(guò)濾。得到黃色固體，水洗濾液呈黃色。重結(jié)晶，得到無(wú)色針狀晶體0.4g。產(chǎn)率23.0％，m.p.206℃。EI-MS(M+)328。
實(shí)施例3化合物EIIS1，3-二[2-(1，2-苯并異噻唑-3(2H)-酮)]-丙烷的合成向250ml三口瓶中加入2.25ml四氫呋喃、0.41ml丙二胺、3.23ml三乙胺，冰浴攪拌下通入氮?dú)?。稱取2.0g硫氯固體放入小燒杯加30ml四氫呋喃，硫氯溶解，得到黃色透明溶液。將此溶液用滴液漏斗滴入三口瓶，滴加速度較快。有淺黃色粘稠固體生成，溶液顏色變?yōu)辄S色。瓶?jī)?nèi)有小的白色絮狀物漂浮。硫氯溶液滴加完畢反應(yīng)三小時(shí)后，減壓過(guò)濾。水洗得到白色固體，濾液呈黃色。重結(jié)晶，得到無(wú)色針狀晶體1g。產(chǎn)率60.6％，m.p.163℃。FAB-MS(M+)342。
實(shí)施例4化合物EIIIS1，4-二[2-(1，2-苯并異噻唑-3(2H)-酮)]-丁烷的合成向250ml三口瓶中加入2.5ml四氫呋喃、0.43ml丁二胺、2.87ml三乙胺，冰浴攪拌下通入氮?dú)?。稱取1.78g硫氯固體放入小燒杯加30ml四氫呋喃，硫氯溶解，得到黃色透明溶液。將此溶液用滴液漏斗滴入三口瓶，滴加速度較快。有淺黃色粘稠固體生成，溶液顏色變?yōu)辄S色。瓶?jī)?nèi)有小的白色絮狀物漂浮。硫氯溶液滴加完畢反應(yīng)三小時(shí)后，減壓過(guò)濾。水洗得到白色固體，濾液呈黃色。重結(jié)晶，得到無(wú)色針狀晶體1.1g。產(chǎn)率64.3％，m.p.207℃。FAB-MS(M+1)357。
實(shí)施例5化合物EITe1，2-二[2-(1，2-苯并異碲唑-3(2H)-酮)]-乙烷的合成向250ml三口瓶中加入5.9ml四氫呋喃、0.18ml 乙二胺、1.68ml三乙胺，冰浴攪拌下通入氮?dú)?。稱取1.6g碲氯固體放入小燒杯加26.5ml四氫呋喃，碲氯溶解，得到棕紅色溶液。將此溶液用滴液漏斗滴入三口瓶，滴加速度較快。有黃色固體生成，溶液顏色變?yōu)辄S色。瓶?jī)?nèi)有小的白色絮狀物漂浮。碲氯溶液滴加完畢反應(yīng)三小時(shí)后，減壓過(guò)濾。得到黃色固體，濾液呈黃色。用蒸餾水洗滌固體數(shù)次，固體顏色變淺，濾液顏色為黃色。再用無(wú)水乙醚少量洗滌此固體產(chǎn)品，濾液顏色為黃綠色。水洗滌此固體產(chǎn)品，濾液顏色為黃綠色。產(chǎn)品干燥得到1.2g，產(chǎn)率86.5％，m.p.203℃。FAB-MS(M+)523；1HNMRδ8～7.6(m，8H，ArH)，δ2.7(s，4H，-CH2-)。
實(shí)施例6化合物Ebs-11-[2-(1，2-苯并異噻唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮)]乙烷的合成向250ml三口瓶中加入12ml四氫呋喃、0.37ml乙二胺、3.44ml三乙胺，冰浴攪拌下通入氮?dú)?。稱取1.1g硫氯固體放入小燒杯加26.5ml四氫呋喃，硫氯溶解，得到黃色透明溶液。再稱取1.35g硒氯固體放入小燒杯加26.5ml四氫呋喃，硒氯溶解，得到棕色透明溶液。將以上兩種溶液用滴液漏斗滴入三口瓶，同時(shí)滴加，且速度相同，滴加速度較快。有淺黃色固體生成，溶液顏色變?yōu)辄S色。瓶?jī)?nèi)有小的白色絮狀物漂浮。溶液滴加完畢后繼續(xù)反應(yīng)三小時(shí)，將反應(yīng)液減壓過(guò)濾。得到淡黃色固體，濾液呈黃色。用蒸餾水洗滌固體數(shù)次，固體顏色變淺，濾液顏色為黃色。再用無(wú)水乙醚少量洗滌此固體產(chǎn)品，濾液顏色為黃綠色。最后用無(wú)水乙醚少量洗滌此固體產(chǎn)品，濾液顏色為黃綠色。產(chǎn)品干燥得到1.8g，產(chǎn)率90.5％，m.p.268℃。EI-MS(M+)375；1HNMRδ8～7.3(m，8H，ArH)，δ4.3～3.3(s，4H，-CH2-)。
實(shí)施例7化合物EsTe1-[2-(1，2-苯并異噻唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并異碲唑-3(2H)-酮)]乙烷的合成向250ml三口瓶中加入5.9ml四氫呋喃、0.18ml乙二胺、1.68ml三乙胺，冰浴攪拌下通入氮?dú)?。稱取0.6g硫氯固體放入小燒杯加13.25ml四氫呋喃，硫氯溶解，得到黃色透明溶液。再稱取0.8g碲氯固體放入小燒杯加13.25ml四氫呋喃，碲氯溶解，得到棕色溶液。將以上兩種溶液用滴液漏斗滴入三口瓶，同時(shí)滴加，且速度相同，滴加速度較快。有黃色固體生成，溶液顏色變?yōu)辄S色。瓶?jī)?nèi)有小的白色絮狀物漂浮。溶液滴加完畢后繼續(xù)反應(yīng)三小時(shí)，將反應(yīng)液減壓過(guò)濾。得到黃色固體，濾液呈黃色。用蒸餾水洗滌固體數(shù)次，固體顏色變淺，濾液顏色為黃色。再用無(wú)水乙醚少量洗滌此固體產(chǎn)品，濾液顏色為黃色。最后用水少量洗滌此固體產(chǎn)品，濾液顏色為黃色。產(chǎn)品干燥得到1.1g，產(chǎn)率89.4％，m.p.287℃。FAB-MS(M+K)463。
實(shí)施例8化合物EbTe1-[2-(1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并異碲唑-3(2H)-酮)]乙烷的合成向250ml三口瓶中加入5.9ml四氫呋喃、0.18ml乙二胺、1.68ml三乙胺，冰浴攪拌下通入氮?dú)?。稱取0.68g硒氯固體放入小燒杯加13.25ml四氫呋喃，硒氯溶解，得到橙紅透明溶液。再稱取0.8g碲氯固體放入小燒杯加13.25ml四氫呋喃，碲氯溶解，得到棕色溶液。將以上兩種溶液用滴液漏斗滴入三口瓶，同時(shí)滴加，且速度相同，滴加速度較快。有黃色固體生成，溶液顏色變?yōu)辄S色。瓶?jī)?nèi)有小的白色絮狀物漂浮。溶液滴加完畢后繼續(xù)反應(yīng)三小時(shí)，將反應(yīng)液減壓過(guò)濾。得到黃色固體，濾液呈黃色。用蒸餾水洗滌固體數(shù)次，固體顏色變淺，濾液顏色為黃色。產(chǎn)品干燥得到1.2g，產(chǎn)率95.23％，m.p.247℃。FAB-MS(M+)471；1HNMRδ8～7.3(m，8H，ArH)，δ4.0～2.9(s，4H，-CH2-)。
實(shí)施例91，4-二[2-(1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮)]-苯的合成0.38g苯胺，1.3ml三乙胺溶于10mlTHF中，冰浴通N2攪拌，1g硒氯溶于20mlTHF中，慢慢滴入苯胺溶液中，1h內(nèi)滴完.繼續(xù)攪拌三小時(shí)以上.得黃色沉淀，過(guò)濾，用THF和乙醇洗滌沉淀，烘干.母液濃縮后靜置結(jié)晶。產(chǎn)率5％，mp＞300℃；EI-MS(M+)474。
實(shí)施例101，2-二[2(1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮)]-二硫醚的合成向250ml三口瓶中加入6.9ml四氫呋喃、1.18ml二硫醚二胺、1.68ml三乙胺，冰浴攪拌下通入氮?dú)?。稱取1.6g硒氯固體放入小燒杯加26.5ml四氫呋喃，硒氯溶解，滴入三口瓶，有黃色固體生成，溶液顏色變?yōu)辄S色。滴加完畢反應(yīng)三小時(shí)后，減壓過(guò)濾。得到黃色固體，濾液呈黃色。用蒸餾水洗滌固體數(shù)次，固體顏色變淺。產(chǎn)品干燥得到1.2g，產(chǎn)率76.5％，m.p.183℃。
實(shí)施例111，4-二[2-(1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮)]-苯磺酰的合成稱取1.6g硒氯固體放入小燒杯加26.5ml四氫呋喃，硒氯溶解。向250ml三口瓶中加入6.9ml四氫呋喃、與硒氯等摩爾量的4-氨基苯磺酰胺、1.68ml三乙胺，冰浴攪拌下通入氮?dú)?。將硒氯滴入三口瓶，有黃色固體生成，溶液顏色變?yōu)辄S色。滴加完畢反應(yīng)三小時(shí)后，減壓過(guò)濾。得到黃色固體，濾液呈黃色。用蒸餾水洗滌固體數(shù)次，固體顏色變淺。熔點(diǎn)260℃-315℃實(shí)施例121，2-二[(1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮-2-基)羰基]乙烷的合成稱取1.6g硒氯固體放入小燒杯加26.5ml四氫呋喃，硒氯溶解。向250ml三口瓶中加入6.9ml四氫呋喃、與硒氯等摩爾量的丁二酰胺、1.68ml三乙胺，冰浴攪拌下通入氮?dú)?。將硒氯滴入三口瓶，有黃色固體生成，溶液顏色變?yōu)辄S色。滴加完畢反應(yīng)三小時(shí)后，減壓過(guò)濾。得到黃色固體，濾液呈黃色。用蒸餾水洗滌固體數(shù)次，固體顏色變淺。熔點(diǎn)280℃-320℃實(shí)施例13將本發(fā)明的上述化合物20mg，加入土溫80攪拌助溶后，加入注射用生理鹽水2ml，并使土溫80的最終濃度為0.1％，經(jīng)過(guò)濾滅菌灌裝制成注射劑。
實(shí)施例14將本發(fā)明的上述化合物50mg與乳糖180mg，淀粉260mg，和硬脂酸鎂10mg混和均勻后，按常規(guī)工藝制成片劑。
本發(fā)明的化合物還可與其他藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體按常規(guī)工藝制成口服液、膠囊或輸液等劑型，并可根據(jù)需要制成控釋或緩釋系統(tǒng)給藥。
實(shí)施例15化合物藥理活性研究一、上述合成化合物的體外抗腫瘤活性研究(一)體外細(xì)胞計(jì)數(shù)法觀察腫瘤細(xì)胞抑制率1.將本發(fā)明的化合物按如下方法配制藥液，在該方法中所使用的化合物為EbS-1 EIS EI Te 將上述三種化合物用DMSO溶解后，加入不含胎牛血清的1640培養(yǎng)基，將其稀釋成終濃度為50μM.L-1，500μM L-1的藥液，其中DMSO的最終含量少于0.1％(v/v)，且每個(gè)細(xì)胞孔的給藥體積為細(xì)胞懸液和藥液體積總和的1/10，即上述化合物的最終給藥濃度為5μM.L-1和50μM L-1。
2.細(xì)胞計(jì)數(shù)用96％酒精沖洗計(jì)數(shù)板后擦凈，另擦凈蓋片一張；把蓋片覆在計(jì)數(shù)板上面，使之微微移向一側(cè)，露出計(jì)數(shù)板臺(tái)面少許，把計(jì)數(shù)板平放在顯微鏡臺(tái)上，立即從計(jì)數(shù)板邊緣輕輕地加1-2滴的細(xì)胞懸液，使之充滿計(jì)數(shù)板和蓋片間空隙中。鏡下觀察可見細(xì)胞分散各處，健康細(xì)胞胞體完整，透明不著色，凡著色細(xì)胞均為不健康者。計(jì)算四角大方格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)，壓中線者只計(jì)算左線和上線者，右線和下線不計(jì)算在內(nèi)。計(jì)數(shù)時(shí)間為給藥后24h、48h、72h。并按照公式1)-3)計(jì)算細(xì)胞數(shù)和化合物對(duì)細(xì)胞的抑制率。
1)細(xì)胞數(shù)/毫升原懸液＝4大格細(xì)胞總數(shù)/4×10000稀釋倍數(shù)2)細(xì)胞存活率％＝(加藥組細(xì)胞數(shù)/對(duì)照組細(xì)胞數(shù))×1003)細(xì)胞增殖抑制率％＝[1-(加藥組細(xì)胞數(shù)/對(duì)照組細(xì)胞數(shù))]×1003.實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1和表2表1最終給藥濃度為5μM.L-1

表2最終給藥濃度為50μM.L-1

(二)SRB法和MTT法研究化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用1.其中貼壁細(xì)胞采用SRB法，懸浮細(xì)胞采用MTT法來(lái)研究化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用，所使用化合物藥液按上述方式配制。
2.SRB法取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞(3-5×104cells/ml)，分別接種于96孔培養(yǎng)板中(180ul/孔)，置于37℃，5％CO2，飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，加入20ul不同濃度的受試化合物，置于37℃，5％CO2，飽和濕度的培養(yǎng)箱中再分別繼續(xù)培養(yǎng)所需時(shí)間。細(xì)胞在加藥培養(yǎng)結(jié)束后，棄掉培養(yǎng)液，加入10％三氯醋酸(TCA)100ul并置于4℃冰箱，固定細(xì)胞1小時(shí)。棄掉細(xì)胞固定液后，用去離子水沖洗培養(yǎng)板小孔5遍。甩干水后，將96孔板置于空氣中干燥。每孔加入0.4％的SRB溶液(用1％HAC溶液配制)50μl，室溫放置10分鐘。棄掉多余的SRB后，用1％的醋酸溶液沖洗96孔板5遍，去除未與蛋白結(jié)合的SRB。將96孔板甩干后，置于空氣干燥。每孔加入10mmol/L非緩沖Tris堿液(PH10.5)150μl，完全溶解細(xì)胞結(jié)合的SRB。經(jīng)平板搖床搖勻后，在TECAN SUNRISE Magellan 96 Well酶標(biāo)儀(USA)的540nm處，測(cè)定每個(gè)小孔的OD值。
3.MTT法取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞(3-5×104cells/ml)，分別接種于96孔培養(yǎng)板中(180ul/孔)，置于37℃，5％CO2，飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6h后，加入20ul不同濃度的受試化合物，置于37℃，5％CO2，飽和濕度的培養(yǎng)箱中再分別繼續(xù)培養(yǎng)所需時(shí)間。細(xì)胞在加藥培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入5mg/ml的MTT溶液(用滅菌1×PBS溶液配制)20μl，置于37℃，5％CO2，飽和濕度的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h。然后，將培養(yǎng)板置于離板機(jī)上，進(jìn)行離心，3000r/min×30min。棄掉上清后，將培養(yǎng)板在避光的情況下，進(jìn)行空氣干燥。之后，每孔加入酸化異丙醇150μl，完全溶解活細(xì)胞生成的Formazan后，在TECAN SUNRISEMagellan 96 Well酶標(biāo)儀(USA)的570nm處，測(cè)定每個(gè)小孔的OD值。
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析方法計(jì)算所用的測(cè)試孔OD值＝測(cè)試孔OD值-本底OD值(即完全培養(yǎng)基加MTT、SRB，無(wú)細(xì)胞)。重復(fù)孔的OD值為平均值±SD。
細(xì)胞存活率％＝(加藥細(xì)胞的OD值/對(duì)照細(xì)胞的OD值)×100
細(xì)胞增殖抑制率％＝[1-(加藥細(xì)胞的OD值/對(duì)照細(xì)胞的OD值)]×1005.本發(fā)明化合物對(duì)幾種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用結(jié)果小結(jié)

備注(1)上述各種腫瘤細(xì)胞來(lái)源于北京大學(xué)藥學(xué)院篩選中心。
(2)其中HL-60為人白血病細(xì)胞，也是懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，Bel-7402為人肝癌細(xì)胞，Hela為人宮頸癌細(xì)胞，BGC823為人胃癌細(xì)胞，MDA-MB-435為人乳腺癌，PC-3MIE8為人前列腺癌。
二、本發(fā)明化合物的體外抗病毒活性研究
(一)EITe、EIIIS和EIIISe的體外抗病毒試驗(yàn)HBV-DNA轉(zhuǎn)染人類肝癌細(xì)胞株Hep G2所建立的2.2.15細(xì)胞株能有效表達(dá)HBV復(fù)制的全部標(biāo)志，本實(shí)驗(yàn)以2.2.15細(xì)胞株為靶細(xì)胞，通過(guò)檢測(cè)培養(yǎng)上清液中HBsAg和HBeAg的含量，檢測(cè)EITe、EIIIS和EIIISe的抗病毒作用，并觀察其他化合物的抗病毒作用。
將EITe、EIIIS和EIIISe加適量的DMSO溶解后，加入蒸餾水稀釋10倍后，制得所需濃度的化合物水溶液，經(jīng)進(jìn)行0.2um過(guò)濾除菌后對(duì)細(xì)胞給藥。
取生長(zhǎng)良好狀態(tài)的2.2.15細(xì)胞，接種于24孔培養(yǎng)板，在37℃培養(yǎng)48小時(shí)后，換用含不同藥物濃度的培養(yǎng)液，每隔3天更換一次新鮮的含藥培養(yǎng)液(具體濃度見下表)，共兩次，給藥共計(jì)8天后收集上清液，-20℃保存，待檢HBeAg，同時(shí)測(cè)定藥物的細(xì)胞毒性。
上清液中HBsAg和HBeAg的檢測(cè)，于試驗(yàn)8天時(shí)，吸取培養(yǎng)上清液采用ELISA測(cè)定(試劑盒購(gòu)自英科新創(chuàng)科技有限公司)，按說(shuō)明書所示方法檢測(cè)。抑制率(％)＝(對(duì)照孔A595-實(shí)驗(yàn)孔A595)/(對(duì)照孔A595-2.1)×100％，ID50為HBeAg抑制率為50％時(shí)的藥物濃度。
通過(guò)MTT法測(cè)定細(xì)胞存活率以表征藥物的細(xì)胞毒性。細(xì)胞存活率(％)＝實(shí)驗(yàn)孔(A595-A650)/對(duì)照孔(A595-A650)×100％，CD50是實(shí)驗(yàn)組存活細(xì)胞為對(duì)照組的50％時(shí)的藥物濃度。
用治療指數(shù)(Treaty IndexTI)評(píng)價(jià)受試藥物的抗-HBV活性，其中TI＝CD50/ID50。當(dāng)TI＜1時(shí)，受試藥物為低效有毒，當(dāng)1≤TI≤2時(shí)受試藥物有效有毒，當(dāng)TI≥2.1時(shí)，受試藥物高效低毒，TI越大，則表明該藥物對(duì)HBV的抑制作用越強(qiáng)，細(xì)胞毒性小。本實(shí)驗(yàn)對(duì)EITe、EIIIS和EIIISe的研究結(jié)果如下

結(jié)果分析EIIIS和EIIISe藥物HBsAg的TI＞2.1，說(shuō)明二者藥物具有抑制細(xì)胞HBsAg的作用，而EITe的TI＜2.1，則可能無(wú)效。
三、上述合成化合物的體外抗菌研究將所合成一系列化合物送臨床藥理所進(jìn)行臨床常見菌種抗菌活性實(shí)驗(yàn)，所用測(cè)試方法是標(biāo)準(zhǔn)平皿二倍稀釋法(參考微生物檢驗(yàn)技術(shù)，郭積燕 主編2001年)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下苯并異噻唑、苯并異碲唑衍生物的MIC結(jié)果 其中EbS-1對(duì)5株金黃色葡萄球菌的MIC值為8mg/L，具有抑菌作用。
權(quán)利要求
1.以下通式I或II的雙苯并異唑酮類化合物 其中R1和R2是相同或不同的，彼此獨(dú)立選自S，Se或Te；其中R是C1-C20線性或支化、飽和或不飽和的二價(jià)烴基，C6-C30亞芳基，C5-C20亞環(huán)烷基，C5-C20亞雜環(huán)基，含有碳環(huán)、雜環(huán)或芳環(huán)的C4-C30二價(jià)烴基，其中碳環(huán)、雜環(huán)或芳環(huán)可以位于鏈中或鏈端，有機(jī)基磺酰基，或羰基有機(jī)基羰基，所有這些基團(tuán)是取代或未取代的，其碳鏈可以任意插入選自O(shè)、N和S中的一個(gè)或多個(gè)雜原子。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的雙苯并異唑酮類化合物，其中R是(-CH2)n-，其中n是1-8；-(C6H4)n-，其中n是1-3；-(CH2)n-SS-(CH2)n-，其中n是1-3；-(CH2)n-NH-(CH2)n-，其中n是1-3；或-(CH2)n-O-(CH2)n-，其中n是1-4。
3.權(quán)利要求1-2任一所述的通式I或II化合物，選自1)1，2-二[2-(1，2-苯并異噻唑-3(2H)-酮)]-乙烷；2)1，3-二[2-(1，2-苯并異噻唑-3(2H)-酮)]-丙烷；3)1，4-二[2-(1，2-苯并異噻唑-3(2H)-酮)]-丁烷；4)1，2-二[2-(1，2-苯并異碲唑-3(2H)-酮)]-乙烷；5)1-[2-(1，2-苯并異噻唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮)]乙烷；6)1-[2-(1，2-苯并異噻唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并異碲唑-3(2H)-酮)]乙烷；7)1-[2-(1，2-苯并異噻唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并異碲唑-3(2H)-酮)]乙烷；8)1-[2-(1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮)]-2-[2-(1，2-苯并異碲唑-3(2H)-酮)]乙烷；9)1，2-二[2-(1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮)甲基]-二硫醚；10)1，4-二[2-(1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮)]-苯；11)1，4-二[2-(1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮)]-苯磺酰；和12)1，2-二[(1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮-2-基)羰基]乙烷。
4.權(quán)利要求1所述的通式I或II化合物的制備方法，包括以下步驟將以下結(jié)構(gòu)式III和IV的化合物 與結(jié)構(gòu)式為H2N-R-NH2的化合物在-20℃到5℃的溫度下，在惰性溶劑中，在堿性條件下，在惰性氣體保護(hù)下反應(yīng)，其中R1和R2是相同或不同的，彼此獨(dú)立選自S，Se或Te；其中R是C1-C20線性或支化、飽和或不飽和的二價(jià)烴基，C6-C30亞芳基，C5-C20亞環(huán)烷基，C5-C20亞雜環(huán)基，含有碳環(huán)、雜環(huán)或芳環(huán)的C4-C30二價(jià)烴基，其中碳環(huán)、雜環(huán)或芳環(huán)可以位于鏈中或鏈端，有機(jī)基磺?；螋驶袡C(jī)基羰基，所有這些基團(tuán)的碳鏈可以任意插入選自O(shè)、N和S中的一個(gè)或多個(gè)雜原子。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的制備方法，其中R是(-CH2)n-，其中n是1-8；-(C6H4)n-，其中n是1-3；-(CH2)n-SS-(CH2)n-，其中n是1-3；-(CH2)n-NH-(CH2)n-，其中n是1-3；或-(CH2)n-O-(CH2)n-，其中n是1-3。
6.權(quán)利要求1-3任一所述的通式I或II的化合物在制備抗腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求1-3任一所述的通式I或II的化合物在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求1-3任一所述的通式I或II的化合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。
9.一種用于抗腫瘤、抗病毒或抗菌的藥物組合物，其特征在于含有藥學(xué)有效量的權(quán)利要求1-3任一所述的通式I和/或II的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其藥物劑型可選自片劑、膠囊、口服液、注射劑、輸液制劑或緩釋或控釋給藥系統(tǒng)。
全文摘要
本發(fā)明涉及雙苯并異唑酮類化合物的合成及其組合物的制備，以及雙苯并異唑酮類化合物的藥學(xué)用途，尤其在制備抗腫瘤、抗病毒和抗菌藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)C07D275/03GK1594299SQ03156590
公開日2005年3月16日 申請(qǐng)日期2003年9月10日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月10日
發(fā)明者曾慧慧 申請(qǐng)人:北京大學(xué)藥學(xué)院