本公開描述了利用噻吩并三唑并二氮雜化合物治療三陰性乳腺癌的方法，所述化合物具有改善的溶解度和生物利用度，并且可以固體分散體的形式提供。

背景技術：

下文所述的式(1)的化合物已經顯示出可抑制乙?；慕M蛋白H4與包含串聯(lián)的溴結構域(BRD)的轉錄調節(jié)子家族(稱為BET(溴結構域和額外末端)蛋白，包括BRD2、BRD3和BRD4)的結合。參見美國專利申請公開No.2010/0286127 A1，其全文以引用的方式并入本文。Denis，G.V.在文獻“Bromodomain coactivators in cancer，obesity，type 2diabetes，and inflammation，”Discov Med 2010；10：489-499(該文獻的全部內容以引用方式并入本文)中報道了如下內容：BET蛋白作為增殖和分化的主要的表觀遺傳調節(jié)子而出現，并且還與傾向于血脂異?；蛑旧刹划斦{節(jié)、心血管病和2型糖尿病的升高的炎癥性質和風險、以及自體免疫疾病(例如類風濕性關節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡)的易感性增加有關。因此，式(1)所示的化合物可以用于治療多種癌癥、心血管疾病、2型糖尿病和自體免疫失調(例如類風濕性關節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡)。

三陰性乳腺癌(TNBC)是臨床上由缺乏雌激素和孕酮受體以及人表皮生長因子受體2(HER2)定義的侵襲性和異質亞型乳腺癌群組。幾乎沒有治療選擇方案顯示出超過細胞毒性化療的臨床優(yōu)點。臨床研究已經證明，超過50％的人乳腺癌呈現比正常乳腺組織低得多的中值O₂分壓，這與化學耐受和放射耐受性相關。本文對化合物(1-1)(在本文中也稱為OTX015)在含氧量正常和缺氧環(huán)境的抗腫瘤活性以及其與抗腫瘤劑的組合的抗腫瘤活性進行了研究。

技術實現要素：

在一些實施方案中，本公開提供了利用本文所述的組合物治療三陰性乳腺癌的方法。

在一些實施方案中，本公開提供了治療哺乳動物中的三陰性乳腺癌的方法，該方法包括：向需要的患者施用藥學可接受的量的組合物，該組合物包含根據本文第III、IV、V和VI部分所描述的任意組合物的固體分散體。

在一些實施方案中，本公開提供了式(1)的化合物(特別是式(1A))的化合用于治療三陰性乳腺癌的應用。

在一些實施方案中，本公開提供了根據本文第III、IV、V和VI部分所描述的任意組合物的固體分散體用于治療三陰性乳腺癌的應用。

在一些實施方案中，本公開提供了利用式(1)的噻吩并三唑并二氮雜化合物、或其藥學可接受的鹽或其水合物或溶劑合物，與選自由m-TOR抑制劑和有絲分裂抑制劑所構成的組中的一種或多種化療藥物聯(lián)合治療三陰性乳腺癌的方法，

其中

R¹為具有1至4個碳的烷基；

R²為氫原子，鹵素原子，或任選地被鹵素原子或羥基取代的具有1至4個碳的烷基；

R³為鹵素原子，任選地被鹵素原子、具有1至4個碳的烷基、具有1至4個碳的烷氧基、或氰基取代的苯基，-NR⁵-(CH₂)_m-R⁶，其中R⁵為氫原子、或具有1至4個碳的烷基，m為0至4的整數，并且R⁶為任選地被鹵素原子取代的苯基或吡啶基，或-NR⁷-CO-(CH₂)_n-R⁸，其中R⁷為氫原子或具有1至4個碳的烷基，n為0至2的整數，并且R⁸為任選地被鹵素原子取代的苯基或吡啶基；并且

R⁴為-(CH₂)_a-CO-NH-R⁹，其中a為1至4的整數，并且R⁹為具有1至4個碳的烷基，具有1至4個碳的羥烷基，具有1至4個碳的烷氧基，或任選地被具有1至4個碳的烷基、具有1至4個碳的烷氧基、氨基或羥基取代的苯基或吡啶基，或-(CH₂)_b-COOR¹⁰，其中b為1至4的整數，并且R¹⁰為具有1至4個碳的烷基。

在一些實施方案中，式(1)選自式(1A)、其藥學可接受的鹽或其水合物：

其中，X為鹵素，R¹為C₁-C₄烷基，R²為C₁-C₄烷基，a為1至4的整數，R³為C₁-C₄烷基、C₁-C₄羥烷基、C₁-C₄烷氧基、任選地具有如式(1)中的R⁹限定的取代基的苯基、或任選地具有如式(1)中的R⁹限定的取代基的雜芳基。

在一個這樣的實施方案中，將噻吩并三唑并二氮雜化合物配制成含有無定形的噻吩并三唑并二氮雜化合物和藥學可接受的聚合物的固體分散體。

在一個實施方案中，式(1)選自由以下化合物構成的組：(i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2，3，9-三甲基-6H-噻吩并[3，2-f][1，2，4]三唑并-[4，3-a][1，4]二氮雜-6-基]-N-(4-羥苯基)乙酰胺或其二水合物；(ii)(S)-{4-(3′-氰基聯(lián)苯-4-基)-2，3，9-三甲基-6H-噻吩并[3，2-f][1，2，4]三唑并[4，3-a][1，4]二氮雜-6-基}乙酸甲酯；(iii)(S)-{2，3，9-三甲基_4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3，2-f][1，2，4]三唑并[4，3-a][1，4]二氮雜-6-基}乙酸甲酯；以及(iv)(S)-{2，3，9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙?；被?苯基]-6H-噻吩并[3，2-f-][1，2，4]三唑并[4，3-a][1，4]二氮雜-6-基}乙酸甲酯。

在一個實施方案中，由式(1)所表示的噻吩并三唑并二氮雜化合物為(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2，3，9-三甲基-6H-噻吩并[3，2-f][1，2，4]三唑并[4，3-a][1，4]二氮雜-6-基]-N-(4-羥苯基)乙酰胺二水合物。

在一個實施方案中，由式(1)所表示的噻吩并三唑并二氮雜化合物為(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2，3，9-三甲基-6H-噻吩并[3，2-f][1，2，4]三唑并[4，3-a][1，4]二氮雜-6-基]-N-(4-羥苯基)乙酰胺。

在一個實施方案中，式(1)的噻吩并三唑并二氮化合物和化療藥物同時施用。

在一個實施方案中，式(1)的噻吩并三唑并二氮化合物和化療藥物按順序施用。

在一個實施方案中，m-TOR抑制劑是依維莫司，有絲分裂抑制劑是多西他賽。

在一個實施方案中，式(1)的噻吩并三唑并二氮化合物形成為固體分散體。在一個實施方案中，固體分散體包含無定形的式(1)噻吩并三唑并二氮雜化合物或其藥學可接受的鹽或其水合物；以及藥學可接受的聚合物。在一個實施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射圖中，基本上不存在與結晶的式(1)的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物是醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯，其中噻吩并三唑并二氮化合物與醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯(HPMCAS)的重量比為1∶3至1∶1。在一個實施方案中，固體分散體表現出約130℃至約140℃的單一的玻璃化轉變溫度(Tg)拐點。

在一個實施方案中，固體分散體包含無定形的噻吩并三唑并三氮雜化合物；和藥學可接受的聚合物，其中所述化合物為(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2，3，9-三甲基-6H-噻吩并[3，2-f][1，2，4]三唑并[4，3-a][1，4]二氮雜-6-基]-N-(4-羥苯基)乙酰胺二水合物、或其藥學可接受的鹽或其水合物。在一個實施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射圖中，基本上不存在與結晶的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線，所述噻吩并三唑并二氮雜化合物為(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2，3，9-三甲基-6H-噻吩并[3，2-f][1，2，4]三唑并[4，3-a][1，4]二氮雜-6-基]-N-(4-羥苯基)乙酰胺二水合物。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯，其中噻吩并三唑并二氮雜化合物與醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯(HPMCAS)的重量比為1∶3至1∶1。在一個實施方案中，固體分散體表現出約130℃至約140℃的單一的玻璃化轉變溫度(Tg)拐點。

應當理解，除非另有說明，本文所述的根據式(1)的化合物的任何實施方案可用于本文所述的藥物組合物的任何實施方案中。此外，除非另有說明，本文作為本發(fā)明實施方案描述的任何化合物或藥物組合物可用作藥物，特別是用于治療如本文實施方案中所述的三陰性乳腺癌的藥物。

附圖說明

參照示例性實施方案的附圖來閱讀時，將會更好的理解前而的發(fā)明概述以及下面的對本發(fā)明的包含噻吩并三唑并二氮雜制劑的藥物組合物和方法的實施方案的詳述。但是，應該理解的是本發(fā)明不限于所示的精確設置和手段。

在附圖中：

圖1A示出了包含固體分散體的比較制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包含25％的化合物(1-1)和Eudragit L100-55；

圖1B示出了包含固體分散體的比較制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包含50％的化合物(1-1)和Eudragit L100-55；

圖1C示出了包含固體分散體的示例性制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包含25％的化合物(1-1)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)；

圖1D示出了包含固體分散體的示例性制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包含50％的化合物(1-1)和PVP；

圖1E示出了包含固體分散體的示例性制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包含25％的化合物(1-1)和PVP-乙酸乙烯酯(PVP-VA)；

圖1F示出了包含固體分散體的示例性制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包含50％的化合物(1-1)和和PVP-VA；

圖1G示出了包含固體分散體的示例性制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包含25％的化合物(1-1)和醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯(HPMCAS-M)；

圖1H示出了包含固體分散體的示例性制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包含50％的化合物(1-1)和HPMCAS-M；

圖1I示出了包含固體分散體的示例性制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包含25％的化合物(1-1)和羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯(HPMCP-HP55)；

圖1J示出了包含固體分散體的示例性制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包含50％的化合物(1-1)和HPMCP-HP55；

圖2A示出了示例性制劑的體內篩選結果，該示例性制劑包含25％化合物(1-1)和PVP的固體分散體；

圖2B示出了示例性制劑的體內篩選結果，該示例性制劑包含25％化合物(1-1)和HMPCAS-M的固體分散體；

圖2C示出了示例性制劑的體內篩選結果，該示例性制劑包含50％化合物(1-1)和HMPCAS-M的固體分散體；

圖3示出了化合物(1-1)的固體分散體的X射線粉末衍射圖譜。

圖4A示出了在環(huán)境條件下平衡的25％化合物(1-1)和PVP的固體分散體的修正的差示掃描量熱軌跡；

圖4B示出了在環(huán)境條件下平衡的25％化合物(1-1)和HMPCAS-M的固體分散體的修正的差示掃描量熱軌跡；

圖4C示出了在環(huán)境條件下平衡的50％化合物(1-1)和HMPCAS-M的固體分散體的修正的差示掃描量熱軌跡；

圖5示出了25％化合物(1-1)和PVP或HPMCAS-M的固體分散體、以及50％化合物(1-1)和HPMCAS-MG的固體分散體的玻璃化轉變溫度(Tg)對相對濕度(RH)的圖；

圖6示出了在75％相對濕度下平衡的25％化合物(1-1)和PVP的固體分散體的修正的差示掃描量熱軌跡；

圖7B示出了1mg/kg靜脈定量給藥后的化合物(1-1)(實心矩形)、3mg/kg口服定量給藥的25％化合物(1-1)：PVP(空心圓圈)、3mg/kg口服定量給藥的25％化合物(1-1)：HPMCAS-MG(空心三角形)和3mg/kg口服定量給藥的50％化合物(1-1)：HPMCAS-MG(空心倒三角)的血漿濃度對時間的曲線。圖7A描繪了在半對數標度上繪制的相同的數據；

圖8B示出了化合物(1-1)作為25％化合物(1-1)：PVP(空心圓圈)、25％化合物(1-1)：HPMCAS-MG(空心三角形)和50％化合物(1-1)：HPMCAS-MG(空心倒三角)在3mg/kg口服定量給藥后的血漿濃度對時間的曲線。圖8A描繪了在半對數標度上繪制的相同的數據；

圖9示出了在穩(wěn)定性測試時間為0時，化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的固體分散體的X射線粉末衍射圖譜；

圖10示出了在40℃和75％相對濕度的環(huán)境下暴露1個月后，化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的固體分散體的X射線粉末衍射圖譜；

圖11示出了在40℃和75％相對濕度的環(huán)境下暴露2個月后，化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的固體分散體的X射線粉末衍射圖譜；

圖12示出了在40℃和75％相對濕度的環(huán)境下暴露3個月后，化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的固體分散體的X射線粉末衍射圖譜；

圖13示出了用化合物(1-1)處理的HCC1937、MDA-MB-231和MDA-MB-468細胞系的GI50和E_max值；

圖14A示出了無藥物培養(yǎng)基和化合物(1-1)處理的HCC1937細胞系隨時間變化的細胞周期(G1、S、G2/M)％；

圖14B示出了無藥物培養(yǎng)基和化合物(1-1)處理的MDA-MB-231細胞系隨時間變化的細胞周期(G1、S、G2/M)％；

圖14C示出了無藥物培養(yǎng)基和化合物(1-1)處理的MDA-MB-468細胞系隨時間變化的細胞周期(G1、S、G2/M)％；

圖15A示出了HCC1937、MDA-MB-231和MDA-MB-468細胞系中C-MYC、BRD2、BRD3、BRD4和β-微管蛋白的基礎蛋白質印跡圖；

圖15B示出了HCC1937、MDA-MB-231和MDA-MB-468細胞系中C-MYC的基礎水平的熒光強度；

圖15C示出了HCC1937、MDA-MB-231和MDA-MB-468細胞系中BRD2的基礎水平的熒光強度；

圖15D示出了HCC1937、MDA-MB-231和MDA-MB-468細胞系中BRD3的基礎水平的熒光強度；

圖15E示出了HCC1937、MDA-MB-231和MDA-MB-468細胞系中BRD4的基礎水平的熒光強度；

圖16A示出了用650nM化合物(1-1)處理的HCC1937細胞系中C-MYC、BRD2、BRD3、BRD4和β-微管蛋白的蛋白質印跡圖。

圖16B示出了用75nM化合物(1-1)處理的MDA-MB-231細胞系中C-MYC、BRD2、BRD3、BRD4和β-微管蛋白的蛋白質印跡圖。

圖16C示出了用650nM化合物(1-1)處理的MDA-MB-468細胞系中C-MYC、BRD2、BRD3、BRD4和β-微管蛋白的蛋白質印跡圖。

圖16D示出了當分別用650nM、75nM、650nM化合物(1-1)處理HCC1937、MDA-MB-231和MDA-MB-468細胞系24小時(h)、48小時和72小時的時候，C-MYC的熒光強度；

圖16E示出了當分別用650nM、75nM、650nM化合物(1-1)處理HCC1937、MDA-MB-231和MDA-MB-468細胞系24小時、48小時和72小時的時候，BRD2的熒光強度；

圖16F示出了當分別用650nM、75nM、650nM化合物(1-1)處理HCC1937、MDA-MB-231和MDA-MB-468細胞系24小時、48小時和72小時的時候，BRD3的熒光強度；

圖16G示出了當分別用650nM、75nM、650nM化合物(1-1)處理HCC1937、MDA-MB-231和MDA-MB-468細胞系24小時、48小時和72小時的時候，BRD4的熒光強度；

圖17A和B示出了化合物(1-1)聯(lián)合依維莫司對于HCC1937、MDA-MB-231和MDA-MB-468細胞系的聯(lián)合指數值；

圖18A示出了細胞接種后，對照、化合物(1-1)、依維莫司和化合物(1-1)與依維莫司的組合處理的腫瘤重量對天數的關系；和

圖18B示出了細胞接種后，對照、化合物(1-1)、依維莫司和化合物(1-1)與依維莫司的組合處理的體重對天數的關系。

圖19示出了隨著時間的推移，化合物(1-1)在三陰性乳腺癌細胞系中對細胞周期的作用；

圖20A和20B示出了化合物(1-1)對BRD2/3/4和c-Myc表達的影響；和

圖21示出了在常氧和缺氧條件下，在TNBC細胞系中聯(lián)合使用化合物(1-1)與依維莫司(A)或多西他賽(B)48小時和72小時后的效果。

發(fā)明詳述

現在，下文將參照附圖和實施例來更全面地描述本發(fā)明的主題，所述附圖和實施例示出了代表性的實施方案。但是，本發(fā)明的主題可以以不同的形式體現，并且不應該解釋成局限于本發(fā)明列出的實施方案。提供這些實施方案旨在描述并使本領域的技術人員能夠實施。除非另有說明，否則本發(fā)明所用的所有技術和科學術語都具有所述主題所屬技術領域的普通技術人員通常所理解的相同的含義。本發(fā)明中所提及的所有公開、專利申請、專利和其他參考文獻均以引用的方式全文并入本文中。

I.定義

本文所用的術語“烷基”是指飽和的直鏈或支鏈烴。

術語“取代的烷基”是指具有一個或多個取代基的烷基部分，其中所述的取代基替代了烴主鏈上的氫或者一個或多個碳。

無論術語“烯基”是單獨使用還是作為取代基的一部分(例如“C_1-4烯基(芳基)”)使用，都是指具有至少一個碳-碳雙鍵部分的部分不飽和支鏈或直鏈一價烴基團，其中所述的雙鍵是通過由母體烷基分子的兩個相鄰碳原子的每個碳原子上除去一個氫原子而得到的，并且所述基團是通過由一個碳原子上除去一個氫原子而得到的。原子可以在雙鍵周圍以順式(Z)或反式(E)構象來排布。典型的烯基基團包括但不限于乙烯基、丙烯基、烯丙基(2-丙烯基)、丁烯基等。例子包括C_2-8烯基或C_2-4烯基。

術語“C_(j-k)”(其中j和k為整數，表示碳原子的指定數量)是指烷基以包含j至k個碳原子(包含端值)的前置代號的腳注來顯示的烷基、烯基、炔基、烷氧基或環(huán)烷基基團，或者指基團中的烷基部分。例如C_(1-4)表示包含1、2、3或4個碳原子的基團。

如本文所用，術語“鹵代”或“鹵素”是指F、Cl、Br或I。

術語“藥學可接受的鹽”是本領域公認的，并且是指化合物的相對無毒性的無機酸和有機酸加成鹽，或者有機堿或無機堿加成鹽，包括(例如)在本發(fā)明的組合物中所包含的那些。

如本文所用，術語“固體分散體”是指一組固體產物，其由至少兩種不同的組分組成，通常為親水性載體和疏水性藥品(活性成分)。

術語“手性的”是本領域公認的，并且是指具有鏡像對應部分的非重疊性性質的分子，而術語“非手性”是指可重疊在它們鏡像對應部分上的分子?！扒笆中苑肿印笔侵冈谔囟ǖ倪^程中具有轉化成手性分子的潛力的分子。

符號用于表示鍵，其可以是單鍵、雙鍵或三鍵。

術語“對映異構體”和用于描述對映異構體的結構式意指包含“純的”對映異構體，其不包含光學異構體以及對映異構體及其光學異構體的混合物，其中對映異構體以對映異構體過量而存在，例如至少10％、25％、50％、75％、90％、95％、98％或99％對映異構體過量。

當在本文中使用術語“立體異構體”時，由所有的幾何異構體、對映異構體或非對映異構體組成。本發(fā)明涵蓋了這些化合物和它們的混合物的多種立體異構體。此外，所公開的化合物的構象異構體和旋轉異構體也被包括在內。

如本文所用，術語“立體選擇合成”是指這樣的化學或酶反應，其中單一的反應物在建立新的立構中心的過程中或者在轉化現有的立構中心的過程中形成了立體異構體的不均勻的混合物，并且這些反應是本領域公知的。立體選擇合成涵蓋了對映選擇性和非對映選擇性的轉化。例如參見Carreira，E.M.和Kvaerno，L.，Classics in Stereoselective Synthesis，Wiley-VCH：Weinheim，2009。

術語“噴霧干燥”是指其中涉及將供料懸液或溶液霧化成小滴并在處理室(其中具有用于蒸發(fā)的強驅動力，例如熱干氣、部分真空或它們的組合)中快速除去混合物中的溶劑的工藝。

如本文所用，術語“治療有效量”是指這樣的任何量，與未接受此量的噻吩并三唑并二氮雜或者任何其他藥物活性劑的相應患者相比，該量的本發(fā)明的噻吩并三唑并二氮雜或者任何其他藥物活性劑改善性地治療、治愈、預防或減輕疾病、病癥或副作用，或者降低疾病或病癥的進展的速度。

術語“約”是指+/-10％。在一個實施方案中，“約”是指+/-5％。

在本申請及隨附的權利要求書的全文中，除非上下文中必須另外說明，否則詞語“包括”或其變體(例如“包含”或“包含有”)都應該解釋為包括所述的整數或步驟、或者一組整數或步驟，并且但不排除任何其他的整數或步驟、或一組整數或步驟。此外，術語“包含”應理解為涵蓋：“由...組成”。

目前已經發(fā)現，下文所述的式(1)的噻吩并三唑并二氮雜化合物可以與藥學可接受的聚合物一同配制為固體分散體，從而提供可以使藥物組分由胃腸道高度地吸收至血液循環(huán)中的口服制劑。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為醋酸羥丙甲纖維素琥珀酸酯(也稱為醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯或HPMCAS)。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。

在一些實施方案中，醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯(HPMCAS)可包括：具有9％乙?；?11％琥珀酰基的M級(例如，平均粒徑為5μm的HPMCAS(即，HPMCAS-MF，細粉級)或平均粒徑為1mm的HPMCAS(即，HPMCAS-MG，顆粒級))；具有12％乙?；?6％琥珀酰基的H級(例如，平均粒徑為5μm的HPMCAS(即，HPMCAS-HF，細粉級)或平均粒徑為1mm的HPMCAS(即，HPMCAS-HG，顆粒級))；以及具有8％乙酰基/15％琥珀?；腖級(例如，平均粒徑為5μm的HPMCAS(即，HPMCAS-LF，細粉級)或平均粒徑為1mm的HPMCAS(即，HPMCAS-LG，顆粒級))。

在一些實施方案中，聚乙烯吡咯烷酮的分子量可為約2,500(12PF，重均分子量在2,000至3,000之間)、約9,000(17PF，重均分子量在7,000至11,000之間)、約25,000(25，重均分子量在28,000至34,000之間)、約50,000(30，重均分子量在44,000至54,000之間)或約1,250,000(90或90F，重均分子量在1,000,000至1,500,000之間)。

II.治療方法

在一些實施方案中，本公開提供了利用本文所述的組合物治療三陰性乳腺癌的方法。

在一些實施方案中，本公開提供了治療哺乳動物中的三陰性乳腺癌的方法，該方法包括：向需要的患者施用藥學可接受的量的組合物，該組合物包含根據本文第III、IV、V和VI部分所描述的任意組合物的固體分散體。

在一些實施方案中，本公開提供了治療哺乳動物中的三陰性乳腺癌的方法，該方法包括：向需要的患者施用藥學可接受的量的組合物，該組合物包含根據本文第III、IV、V和VI部分所描述的任意組合物的藥物制劑。

在一些實施方案中，本公開提供了式(1)的化合物(特別是式(1A))的化合用于治療三陰性乳腺癌的應用。

在一些實施方案中，本公開提供了根據本文第III、IV、V和VI部分所描述的任意組合物的固體分散體用于治療三陰性乳腺癌的應用。

在一些實施方案中，利用式(1)的噻吩并三唑并二氮雜化合物(包括其任意的鹽、異構體、對映異構體、消旋物、水合物、溶劑化物、代謝物和多晶型)治療三陰性乳腺癌的方法，

其中

R¹為具有1至4個碳的烷基；

R²為氫原子、鹵素原子、或任選地被鹵素原子或羥基取代的具有1至4個碳的烷基；

R³為鹵素原子，任選地被鹵素原子、具有1至4個碳的烷基、具有1至4個碳的烷氧基、或氰基取代的苯基，-NR⁵-(CH₂)_m-R⁶，其中R⁵為氫原子、或具有1至4個碳的烷基，m為0至4的整數，并且R⁶為任選地被鹵素原子取代的苯基或吡啶基，或-NR⁷-CO-(CH₂)_n-R⁸，其中R⁷為氫原子或具有1至4個碳的烷基，n為0至2的整數，并且R⁸為任選地被鹵素原子取代的苯基或吡啶基；并且

R⁴為-(CH₂)_a-CO-NH-R⁹，其中a為1至4的整數，并且R⁹為具有1至4個碳的烷基，具有1至4個碳的羥烷基，具有1至4個碳的烷氧基，或任選地被具有1至4個碳的烷基、具有1至4個碳的烷氧基、氨基或羥基取代的苯基或吡啶基，或-(CH₂)_b-COOR¹⁰，其中b為1至4的整數，并且R¹⁰為具有1至4個碳的烷基。

在一些實施方案中，式(1)選自式(1A)、其藥學可接受的鹽或水合物：

其中，X為鹵素，R¹為C₁-C₄烷基，R²為C₁-C₄烷基，a為1至4的整數，R³為C₁-C₄烷基、C₁-C₄羥烷基、C₁-C₄烷氧基、任選地具有如式(1)中的R⁹限定的取代基的苯基、或任選地具有如式(1)中的R⁹限定的取代基的雜芳基。

在一個這樣的實施方案中，將噻吩并三唑并二氮雜化合物配制成含有無定形的噻吩并三唑并二氮雜化合物和藥學可接受的聚合物的固體分散體。

在本發(fā)明中，“治療”是指這樣一種行為或動作，其將本發(fā)明的活性成分施用給由醫(yī)生診斷為具有三陰性乳腺癌的患者、或者存在罹患三陰性乳腺癌風險的患者，其目的是(例如)減輕三陰性乳腺癌(或其相同的癥狀)，預防三陰性乳腺癌(或其相同的癥狀)，或恢復三陰性乳腺癌發(fā)病前的狀態(tài)。

III.噻吩并三唑并二氮雜化合物：

在一個實施方案中，在本發(fā)明的制劑中使用的噻吩并三唑并二氮雜化合物由式(1)表示(包括其任意的鹽、異構體、對映異構體、消旋物、水合物、溶劑化物、代謝物和多晶型)：

其中

R¹為具有1至4個碳的烷基；

R²為氫原子、鹵素原子、或任選地被鹵素原子或羥基取代的具有1至4個碳的烷基；

R³為：鹵素原子，任選地被鹵素原子、具有1至4個碳的烷基、具有1至4個碳的烷氧基、或氰基取代的苯基，-NR⁵-(CH₂)_m-R⁶，其中R⁵為氫原子、或具有1至4個碳的烷基，m為0至4的整數，并且R⁶為任選地被鹵素原子取代的苯基或吡啶基，或-NR⁷-CO-(CH₂)_n-R⁸，其中R⁷為氫原子或具有1至4個碳的烷基，n為0至2的整數，并且R⁸為任選地被鹵素原子取代的苯基或吡啶基；并且

R⁴為：-(CH₂)_a-CO-NH-R⁹，其中a為1至4的整數，并且R⁹為具有1至4個碳的烷基，具有1至4個碳的羥烷基，具有1至4個碳的烷氧基，或任選地被具有1至4個碳的烷基、具有1至4個碳的烷氧基、氨基或羥基取代的苯基或吡啶基，或-(CH₂)_b-COOR¹⁰，其中b為1至4的整數，并且R¹⁰為具有1至4個碳的烷基。

在一個實施方案中，合適的烷基包括含有1個碳原子至4個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團。在一個實施方案中，合適的烷基包括含有1個碳原子至3個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團。在一個實施方案中，合適的烷基包括含有1個碳原子至2個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團。在一個實施方案中，示例性的烷基基團包括但不限于甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基。在一個實施方案中，示例性的烷基基團包括但不限于甲基、乙基、丙基、異丙基、2-甲基-1-丙基和2-甲基-2-丙基。

在一些實施方案中，本發(fā)明提供了本發(fā)明所述的噻吩并三唑并二氮雜化合物的藥學可接受的的鹽、溶劑化物(包括水合物)和同位素標記的形式。在一個實施方案中，噻吩并三唑并二氮雜化合物的藥學可接受的鹽包括與無機酸形成的酸加成鹽。在一個實施方案中，噻吩并三唑并二氮雜的藥學可接受的無機酸加成鹽包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、磷酸、偏磷酸、硝酸和硫酸的鹽。在一個實施方案中，噻吩并三唑并二氮雜化合物的藥學可接受的鹽包括與有機酸形成的酸加成鹽。在一個實施方案中，噻吩并三唑并二氮雜化的藥學可接受的有機酸加成鹽包括以下酸的鹽：酒石酸、乙酸、三氟乙酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸、富馬酸、苯甲酸、甲酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、馬來酸、琥珀酸、樟腦硫酸、異硫羰酸(isothionic acid)、粘酸、龍膽酸、異煙酸、糖二酸、葡萄糖醛酸、糠酸、谷氨酸、抗壞血酸、鄰氨基苯甲酸、水楊酸、苯乙酸、扁桃酸、撲酸(帕莫酸)、甲烷磺酸、乙烷磺酸、泛酸、硬脂酸、磺胺酸、褐藻酸、半乳糖醛酸和芳基磺酸(例如苯磺酸和4-甲基苯磺酸)。

本發(fā)明提供了本發(fā)明所述的噻吩并三唑并二氮雜化合物的藥學可接受的同位素標記形式，其中一個或多個原子被原子數相同、但是原子量或質量數與天然常見的原子量或質量數不同的原子所替代。適于包含在噻吩并三唑并二氮雜化合物中的同位素的實例包括以下元素的同位素：氫，例如²H和³H；碳，例如¹¹C、¹³C和¹⁴C；氯，例如³⁶Cl；氟，例s如¹⁸F；碘，例如¹²³I和¹²⁵I；氮，例如¹³N和¹⁵N；氧，例如¹⁵O、¹⁷O和¹⁸O；以及硫，例如³⁵S。通?？梢酝ㄟ^本領域那些技術人員已知的常規(guī)技術來制備噻吩并三唑并二氮雜化合物的同位素標記形式。

式(1)所示化合物的某些同位素標記形式(例如引入了放射性同位素的那些)可用于藥品和/或底物的組織分布研究中。由于放射性同位素氚(³H)和碳-14(¹⁴C)易于引入和即時的檢測手段，所以它們特別適用于上述目的。使用較重的同位素(例如氘(²H))進行取代可以提供由于更廣的代謝穩(wěn)定性而產生的某些治療益處，例如體內半衰期增長或者劑量需求降低，因此，在一些情況下可以是優(yōu)選的。使用發(fā)射正電子的同位素(例如¹¹C、¹⁸F、¹⁵O和¹³N)進行取代可以用于正電子發(fā)射斷層成像術研究(PET)中，以用于檢測底物受體的占用。

在一些實施方案中，本發(fā)明公開的噻吩并三唑并二氮雜化合物可以與藥學可接受的溶劑形成溶劑化以及非溶劑化的形式存在。本領域技術人員應該理解的是，溶劑化物為溶質(在這種情況下為本發(fā)明所述的噻吩并三唑并二氮雜化合物)和溶劑形成的化學計量可變的復合物。優(yōu)選的是此類溶劑不會干擾溶質(噻吩并三唑并二氮雜化合物)的生物活性。用于形成溶劑化物的合適的溶劑的實例包括但不限于水、甲醇、二甲基亞砜、乙醇和乙酸。所用的合適的溶劑為藥學可接受的溶劑。合適的是，所用的溶劑為水。在一個實施方案中，本發(fā)明所述的噻吩并三唑并二氮雜化合物的藥學可接受的溶劑化物包括乙醇溶劑化物、異丙醇溶劑化物、二氧戊烷溶劑化物、四氫呋喃溶劑化物、二甲基亞砜溶劑化物、叔丁醇溶劑化物、2-丁醇溶劑化物、二氧戊烷溶劑化物、1，3-二甲基-3，4，5，6-四氫-2(1H)-嘧啶酮(“DMPU”)溶劑化物、1，3-二甲基咪唑啉酮(“DMI”)溶劑化物和1，3-二甲基咪唑啉酮(“DMP”)溶劑化物、或它們的混合物。

在一些實施方案中，本發(fā)明所述的噻吩并三唑并二氮雜化合物可以包含一個或多個手性中心和/或雙鍵，因此可以以幾何異構體、對映異構體或非對映異構體的形式存在?？梢愿鶕﨏ahn-Ingold-Prelog規(guī)則來命名噻吩并三唑并二氮雜化合物的對映異構體和非對映異構體，所述的規(guī)則將“R”或“S”描述符指定給每個立構中心(通常也稱為手性中心)，并將E或Z描述符指定給每個碳-碳雙鍵(以命名幾何異構體)，這樣可以通過在系統(tǒng)名中包含描述符而獨特地描述整個分子的構造。

在一些實施方案中，本發(fā)明所述的噻吩并三唑并二氮雜化合物可以以外消旋混合物或外消旋物的形式存在，其可以包含手性分子的等量的左旋和右旋對映異構體?？梢酝ㄟ^前綴(±)-或d1-來表示此類外消旋混合物，表明右旋和左旋異構體的相等(1∶1)的混合物。此外，前綴rac-(或racem-)或符號RS和SR也可以用于命名外消旋混合物。

此外，由取代基圍繞碳-碳雙鍵的排列或者取代基圍繞環(huán)烷基或雜環(huán)的排列而產生的幾何異構體也可以存在于本發(fā)明的化合物中。在一些實施方案中，符號可用于表示可以為單鍵、雙鍵或三鍵的鍵。圍繞碳-碳雙鍵的取代基可以命名為呈“Z”或“E”構型，其中根據IUPAC標準使用術語“Z”和“E”。除非另有說明，否則描述雙鍵的結構涵蓋了“Z”和“E”異構體。圍繞碳-碳雙鍵的取代基也可以稱為“順式”或“反式(”，其中“順式”表示取代基在雙鍵的同側上，而“反式”表示取代基在雙鍵的對側上。取代基圍繞碳環(huán)的排列也可以命名為“順式”或“反式”。術語“順式”表示取代基在環(huán)的平面的同側上，而術語“反式”表示取代基在環(huán)的平面的對側上。其中取代基置于環(huán)的平面的同側和對側上的化合物所形成的混合物命名為“順式/反式”或“Z/E”。

在一些實施方案中，本發(fā)明所公開的噻吩并三唑并二氮雜化合物可以以單晶或多晶形式或多型物存在。在一個實施方案中，本發(fā)明所公開的噻吩并三唑并二氮雜化合物包含其無定形形式。在一個實施方案中，本發(fā)明所公開的噻吩并三唑并二氮雜化合物包含其單一多晶型物。在另一個實施方案中，本發(fā)明所公開的噻吩并三唑并二氮雜化合物包含其多晶型物的混合物。在另一個實施方案中，所述化合物為結晶形式。

在一些實施方案中，本發(fā)明所公開的噻吩并三唑并二氮雜化合物可以以單一對映異構體或者對映異構體富集形式存在。在一個實施方案中，本發(fā)明所公開的噻吩并三唑并二氮雜化合物以對映異構體過量百分比(entiomeric excess)超過80％的形式存在。在一個實施方案中，本發(fā)明所公開的噻吩并三唑并二氮雜化合物以對映異構體過量百分比超過90％的形式存在。在一個實施方案中，本發(fā)明所公開的噻吩并三唑并二氮雜化合物以對映異構體過量百分比超過98％的形式存在。在一個實施方案中，本發(fā)明所公開的噻吩并三唑并二氮雜化合物以對映異構體過量百分比超過99％的形式存在。在一個實施方案中，本發(fā)明所公開的噻吩并三唑并二氮雜化合物以選自由至少10％、至少25％、至少50％、至少75％、至少90％、至少95％、至少98％和至少99％所構成的組中的對映異構體過量百分比的形式存在。

對于一對映異構體對而言，可以使用以下等式(等式(1))來計算對映異構體E1相對于對映異構體E2的對映異構體過量百分比：

可以通過手性高效液相色譜(HPLC)、核磁共振(NMR)或任何其他合適的方法來測定E1和E2的相對量。在一些實施方案中，對映異構體化合物的純度可以指對映異構體E1和E2相對于其他材料的量，這些其他物質特別包括副產物和/或未反應的反應物或試劑。

在一些實施方案中，式(1)的噻吩并三唑并二氮雜化合物包括但不限于噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)至(1-18)，其列于下表A中。

表A：可用于本文所述制劑的示例性化合物：

表A(續(xù))

表A(續(xù))

在一些實施方案中，式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物包括：(i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2，3，9-三甲基-6H-噻吩并[3，2-f][1，2，4]三唑并-[4，3-a][1，4]二氮雜-6-基]-N-(4-羥苯基)乙酰胺或其二水合物；(ii)(S)-{4-(3′-氰基聯(lián)苯-4-基)-2，3，9-三甲基-6H-噻吩并[3，2-f][1，2，4]三唑并[4，3-a][1，4]二氮雜-6-基}乙酸甲酯；(iii)(S)-{2，3，9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3，2-f][1，2，4]三唑并[4，3-a][1，4]二氮雜-6-基}乙酸甲酯；以及(iv)(S)-{2，3，9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙?；被?苯基]-6H-噻吩并[3，2-f][1，2，4]三唑并[4，3-a][1，4]二氮雜-6-基}乙酸甲酯。

在一些實施方案中，式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物包括(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2，3，9-三甲基-6H-噻吩并[3，2-f][1，2，4]三唑并[4，3-a][1，4]二氮雜-6-基]-N-(4-羥苯基)乙酰胺。

在本發(fā)明的方法中與式(1)的噻吩并三唑并二氮雜聯(lián)合使用的雷帕霉素(mTOR)抑制劑的哺乳動物靶標的實例包括但不限于列干下表B中的mTOR抑制劑。

表B：可以與式(1)的噻吩并三唑并二氮雜聯(lián)合使用的示例性的mTOR抑制劑化合物

在本發(fā)明的方法中與式(1)的噻吩并三唑并二氮雜聯(lián)合使用的有絲分裂抑制劑的實例包括但不限于列于下表C中的有絲分裂抑制劑。

表C：可以與式(1)的噻吩并三唑并二氮雜聯(lián)合使用的示例性的有絲分裂抑制劑

IV.制劑：

式(1)所示的化合物在蓋倫組合物的常規(guī)給藥和制備方面表現出非常特有的困難，特別包括藥物生物利用度以及患者間和患者內的劑量應答的可變性的特定問題，由此需要針對幾乎水不溶性的所述化合物開發(fā)非常規(guī)的劑型。

之前，已經發(fā)現可以利用載體丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯-三甲基銨乙基甲基丙烯酸酯氯化物共聚物(Eudragit RS，由Rohm公司制造)將式(1)所示的化合物配置成固體分散體，從而提供在下腸道中優(yōu)先釋放藥物組分以用于治療炎性腸病(例如潰瘍性結腸炎和克羅恩病)的口服制劑(2009年1月8日公開的美國專利申請20090012064A1)。通過多個實驗(包括動物試驗)，發(fā)現就炎性腸病而言，藥物在病變部位的釋放及其對炎性病變的直接作用比其由胃腸道吸收至循環(huán)中更為重要。

現在，意外地發(fā)現根據式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物、其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包含水合物)、消旋物、對映異構體以及同位素標記的形式可以使用藥學可接受的聚合物而配制成固體分散體，從而提供口服制劑，該口服制劑能夠使藥物組分由胃腸道高度吸收至循環(huán)中，從而治療炎性腸病以及其他疾病。在狗和人類中的研究證明，與之前研發(fā)的用于治療炎性腸病的Eudragit固體分散體制劑相比，所述這些固體分散體具有高的口服生物利用度。

固體分散體為改善水溶性差的藥物的口服生物利用度的一種手段。

如本文所用，術語“固體分散體”是指一組固體產物，其包含至少2種不同的成分，通常為親水性裁體和疏水性藥物(根據式(1)的噻吩并三唑并二氮雜化合物)?；谒幬镌诜稚Ⅲw內的分子排布，可以區(qū)分為6種不同類型的固體分散體。通常，固體分散體分為：簡單低共熔混合物、固溶體、玻璃溶液和懸浮液、以及結晶載體中的無定形沉淀。此外，可存在一些組合，例如在同一樣品中，一些分子可以成簇存在，而一些分子以分子形式分散。

在一個實施方案中，根據式(1)的噻吩并三唑并二氮雜化合物可以以分子形式分散于無定形顆粒(簇)中。在另一個實施方案中，根據式(1)的噻吩并三唑并二氮雜化合物可以以結晶顆粒形式分散。在一個實施方案中，載體可以是結晶的。在另一個實施方案中，載體可以是無定形的。

在一個實施方案中，本發(fā)明提供了包含固體分散體的藥物組合物，其中所述固體分散體由以下形成：根據式(1)的噻吩并三唑并二氮雜化合物或其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、消旋物、對映異構體、異構體或其同位素標記形式；以及藥學可接受的聚合物。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為醋酸羥丙甲纖維素琥珀酸酯(也稱為醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯或HPMCAS)。在一個實施方案中，分散體中噻吩并三唑并二氮雜化合物與醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯(HPMCAS)的重量比為1∶3至1∶1。在一個實施方案中，至少一部分噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在另一個實施方案中，噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在一些實施方案中，固體分散體表現出單一拐點的玻璃化轉變溫度(Tg)。在一些實施方案中，單一的Tg在130℃至140℃之間出現。在其他這樣的實施方案中，單一的Tg在約135℃出現。在一些這樣的實施方案中，固體分散體在40℃、相對濕度為75％的環(huán)境下暴露至少1個月。在一些實施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。就本申請的目的而言，“基本上不存在”是指在約21°2θ下，在無定形暈(amorphous halo)上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。

在一個實施方案中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、消旋物、對映異構體、異構體或同位素標記形式在藥學可接受的聚合物中的固體分散體。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為聚乙烯吡咯烷酮(也稱為聚維酮或PVP)。在一個實施方案中，分散體中噻吩并三唑并二二氮雜化合物與PVP的重量比為1∶3至1∶1。在一個實施方案中，至少一部分噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在另一個實施方案中，噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在一些實施方案中，固體分散體表現出單一拐點的玻璃化轉變溫度(Tg)。在一些實施方案中，單一的Tg在175℃至約185℃之間出現。在其他這樣的實施方案中，單一的Tg在約179℃出現。在一些這樣的實施方案中，固體分散體在40℃、相對濕度為75％的環(huán)境下暴露至少1個月。在一些實施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。就本申請的目的而言，“基本上不存在”是指在約21°2θ下，在無定形暈(amorphous halo)上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。

在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含無定形形式的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、消旋物、對映異構體、異構體或同位素標記形式與藥學可接受的聚合物的固體分散體。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為醋酸羥丙甲纖維素琥珀酸酯。在一個實施方案中，式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物與醋酸羥丙甲纖維素琥珀酸酯的重量比為1∶3至1∶1。在一個實施方案中，至少一部分噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在另一個實施方案中，噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在一些實施方案中，固體分散體表現出單一拐點的玻璃化轉變溫度(Tg)。在一些實施方案中，單一的Tg在130℃至140℃之間出現。在其他這樣的實施方案中，單一的Tg在約135℃出現。在一些這樣的實施方案中，固體分散體在40℃、相對濕度為75％的環(huán)境下暴露至少1個月。在一些實施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。就本申請的目的而言，“基本上不存在”是指在約21°2θ下，在無定形暈上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。

在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含無定形形式的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、消旋物、對映異構體、異構體或同位素標記形式與藥學可接受的聚合物的固體分散體。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為聚乙烯吡咯烷酮。在一個實施方案中，式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物與聚乙烯吡咯烷酮的重量比為1∶3至1∶1。在一個實施方案中，至少一部分噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在另一個實施方案中，噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在一些實施方案中，固體分散體表現出單一拐點的玻璃化轉變溫度(Tg)。在一些實施方案中，單一的Tg在175℃至約185℃之間出現。在其他這樣的實施方案中，單一的Tg在約179℃下出現。在一些這樣的實施方案中，固體分散體在40℃、相對濕度為75％的環(huán)境下暴露至少1個月。在一些實施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。就本申請的目的而言，“基本上不存在”是指在約21°2θ下，在無定形暈上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。

在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含結晶形式的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、消旋物、對映異構體、異構體或同位素標記形式與藥學可接受的聚合物的固體分散體。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯。在一個實施方案中，式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物與醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯的重量比為1∶3至1∶1。

在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含結晶形式的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、消旋物、對映異構體、異構體或同位素標記形式與藥學可接受的聚合物的固體分散體。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為聚乙烯吡咯烷酮。在一個實施方案中，式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物與聚乙烯吡咯烷酮的重量比為1∶3至1∶1。

在一些實施方案中，通過噴霧干燥來制備包含固體分散體的藥物組合物。

在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含噴霧干燥的固體分散體，該固體分散體由以下形成：式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、消旋物、對映異構體、異構體或同位素標記形式，和藥學可接受的聚合物。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯。在一個實施方案中，化合物(1)與醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯的重量比為1∶3至1∶1。在一個實施方案中，至少一部分噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在另一個實施方案中，噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在一些實施方案中，固體分散體表現出單一拐點的玻璃化轉變溫度(Tg)。在一些實施方案中，單一的Tg在130℃至140℃之間出現。在其他這樣的實施方案中，單一的Tg在約135℃出現。在一些這樣的實施方案中，固體分散體在40℃、相對濕度為75％的環(huán)境下暴露至少1個月。在一些實施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。就本申請的目的而言，“基本上不存在”是指在約21°2θ下，在無定形暈上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。

在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含噴霧干燥的固體分散體，該固體分散體由以下形成：式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、消旋物、對映異構體、異構體或同位素標記形式和藥學可接受的聚合物。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為聚乙烯吡咯烷酮。在一個實施方案中，化合物(1)與聚乙烯吡咯烷酮的重量比為1∶3至1∶1。在一個實施方案中，至少一部分噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在另一個實施方案中，噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在一些實施方案中，固體分散體表現出單一拐點的玻璃化轉變溫度(Tg)。在一些實施方案中，單一的Tg在175℃至185℃之間出現。在其他這樣的實施方案中，單一的Tg在約179℃出現。在一些這樣的實施方案中，固體分散體在40℃、相對濕度為75％的環(huán)境下暴露至少1個月。在一些實施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。就本申請的目的而言，“基本上不存在”是指在約21°2θ下，在無定形暈上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。

在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含噴霧干燥的固體分散體，該固體分散體由以下形成：無定形的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、消旋物、對映異構體、異構體或同位素標記形式和藥學可接受的聚合物。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯。在一個實施方案中，式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物與醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯的重量比為1∶3至1∶1。在一個實施方案中，至少一部分噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在另一個實施方案中，噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在一些實施方案中，固體分散體表現出單一拐點的玻璃化轉變溫度(Tg)。在一些實施方案中，單一的Tg在130℃至140℃之間出現。在一些這樣的實施方案中，固體分散體在40℃、相對濕度為75％的環(huán)境下暴露至少1個月。在其他這樣的實施方案中，單一的Tg在約135℃出現。在一些實施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。就本申請的目的而言，“基本上不存在”是指在約21°2θ下，在無定形暈上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。

在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含噴霧干燥的固體分散體，該固體分散體由以下形成：無定形的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、消旋物、對映異構體、異構體或同位素標記形式和藥學可接受的聚合物。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為聚乙烯吡咯烷酮。在一個實施方案中，式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物與聚乙烯吡咯烷酮的重量比為1∶3至1∶1。在一個實施方案中，至少一部分噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在另一個實施方案中，噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在一些實施方案中，固體分散體表現出單一拐點的玻璃化轉變溫度(Tg)。在一些實施方案中，單一的Tg在175℃至185℃之間出現。在其他這樣的實施方案中，單一的Tg在約179℃出現。在一些這樣的實施方案中，固體分散體在40℃、相對濕度為75％的環(huán)境下暴露至少1個月。在一些實施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。就本申請的目的而言，“基本上不存在”是指在約21°2θ下，在無定形暈上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。

在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含噴霧干燥的固體分散體，該固體分散體由以下形成：結晶形式的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、消旋物、對映異構體、異構體或同位素標記形式和藥學可接受的聚合物。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯。在一個實施方案中，式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物與醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯的重量比為1∶3至1∶1。

在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含嗩霧干燥的固體分散體，該固體分散體由以下形成：結晶形式的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、消旋物、對映異構體、異構體或同位素標記形式和藥學可接受的聚合物。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為聚乙烯吡咯烷酮。在一個實施方案中，式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物與聚乙烯吡咯烷酮的重量比為1∶3至1∶1。

在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含固體分散體，該固體分散體由以下形成：2-[(6S)-4-(4-氯代苯基)-2，3，9-三甲基-6H-噻吩并[3，2-f]-[1，2，4]三唑并[4，3-a][1，4]二氮雜-6-基]-N-(4-羥苯基)乙酰胺二水合物(化合物(1-1))或其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、消旋物、對映異構體、異構體或同位素標記形式；以及藥學可接受的聚合物，其中所述化合物(1-1)如下：

在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為HPMCAS。在一個實施方案中，分散體中化合物(1-1)和HPMCAS的重量比為1∶3至1∶1。在一個實施方案中，至少一部分噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在另一個實施方案中，噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在一個實施方案中，固體分散體是噴霧干燥的。在一些實施方案中，固體分散體表現出單一拐點的玻璃化轉變溫度(Tg)。在一些實施方案中，單一的Tg在130℃至140℃之間出現。在其他這樣的實施方案中，單一的Tg在約135℃出現。在一些這樣的實施方案中，固體分散體在40℃、相對濕度為75％的環(huán)境下暴露至少1個月。在一些實施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。就本申請的目的而言，“基本上不存在”是指在約21°2θ下，在無定形暈上不存在與結晶的噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)有關的衍射線。

在另一個實施方案中，所述藥物組合物包含化合物(1-1)或其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、消旋物、對映異構體、異構體或同位素標記形式；以及藥學可接受的聚合物的固體分散體。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為PVP。在一個實施方案中，分散體中化合物(1-1)和PVP的重量比為1∶3至1∶1。在一個實施方案中，至少一部分噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在另一個實施方案中，噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在一個實施方案中，固體分散體是噴霧干燥的。在一些實施方案中，固體分散體表現出單一拐點的玻璃玻璃化轉變溫度(Tg)。在一些實施方案中，單一的Tg在175℃至185℃之間出現。在其他這樣的實施方案中，單一的Tg在約179℃出現。在一些這樣的實施方案中，固體分散體在40℃、相對濕度為75％的環(huán)境下暴露至少1個月。在一些實施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。就本申請的目的而言，“基本上不存在”是指在約21°2θ下，在無定形暈上不存在與結晶的噻吩并三唑并三氮雜化合物(1-1)有關的衍射線。

在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含無定形形式的噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)或其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、消旋物、對映異構體、異構體或同位素標記形式；以及藥學可接受的聚合物。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為HPMCAS。在一個實施方案中，分散體中化合物(1-1)與HPMCAS的重量比為1∶3至1∶1。在一個實施方案中，至少一部分噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在另一個實施方案中，噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在一個實施方案中，固體分散體是嗩霧干燥的。在一些實施方案中，固體分散體表現出單一拐點的玻璃化轉變溫度(Tg)。在一些實施方案中，單一的Tg在130℃至140℃之間出現。在其他這樣的實施方案中，單一的Tg在約135℃出現。在一些這樣的實施方案中，固體分散體在40℃、相對濕度為75％的環(huán)境下暴露至少1個月。在一些實施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。就本申請的目的而言，“基本上不存在”是指在約21°2θ下，在無定形暈上不存在與結晶的噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)有關的衍射線。

在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含無定形形式的噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)或其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、消旋物、對映異構體、異構體或同位素標記形式與藥學可接受的聚合物的固體分散體。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為PVP。在一個實施方案中，分散體中化合物(1-1)與PVP的重量比為1∶3至1∶1。在一個實施方案中，至少一部分噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在另一個實施方案中，噻吩并三唑并二氮雜化合物均勻地分散于整個固體分散體中。在一個實施方案中，固體分散體是噴霧干燥的。在一些實施方案中，固體分散體表現出單一拐點的玻璃化轉變溫度(Tg)。在一些實施方案中，單一的Tg在175℃至185℃之間出現。在其他這樣的實施方案中，單一的Tg在約189℃出現。在一些這樣的實施方案中，固體分散體在40℃、相對濕度為75％的環(huán)境下暴露至少1個月。在一些實施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物有關的衍射線。就本申請的目的而言，“基本上不存在”是指在約21°2θ下，在無定形暈上不存在與結晶的噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)有關的衍射線。

在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含結晶形式的噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)或其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、消旋物、對映異構體、異構體或同位素標記形式與藥學可接受的聚合物的固體分散體。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為HPMCAS。在一個實施方案中，分散體中化合物(1-1)與HPMCAS的重量比為1∶3至1∶1。在一個實施方案中，固體分散體是噴霧干燥的。

在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含結晶形式的噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)或其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、消旋物、對映異構體、異構體或同位素標記形式與藥學可接受的聚合物的固體分散體。在一個實施方案中，藥學可接受的聚合物為PVP。在一個實施方案中，分散體中化合物(1-1)與PVP的重量比為1∶3至1∶1。在一個實施方案中，固體分散體是噴霧干燥的。

當經口施用本發(fā)明所述的固體分散體時，其表現出特別有利的性質。當在動物或人類的標準生物利用度試驗中施用時，所述固體分散體的有利性質的例子包括但不限于一致的且高水平的生物利用度。本發(fā)明的固體分散體可以包括含有式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物、聚合物以及添加劑的固體分散體。在一些實施方案中，固體分散體可以實現使式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物吸收入血流中，而這是不可能通過僅僅將式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物與添加劑混合而獲得的，這是因為式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物藥物在水和大多數水性介質中的溶解度可忽略不計?？梢允褂枚喾N體外和/或體內研究來測量式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或者噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)的生物利用度。體內研究可以使用例如大鼠、狗或人類來進行。

可以通過沿著相對于橫坐標(X軸)的時間的縱坐標(Y軸)，繪制式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或者噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)的血清或血漿濃度，從而獲得曲線下面積(AUC)值，由此測量生物利用度。然后，將所述固體分散體中的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或者噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)的AUC值與等價濃度的不包含聚合物的結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或結晶性的噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)的AUC值比較。在一些實施方案中，當將所述固體分散體經口施用給狗時，該固體分散體的曲線下面積(AUC)值選自：由靜脈施用給狗的對照組合物的相應AUC值的至少0.4倍、0.5倍、0.6倍、0.8倍、1.0倍，其中所述對照組合物包含等價量的結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物。

可以通過模擬胃環(huán)境和腸環(huán)境的pH值的體外測試來測量生物利用度?？梢酝ㄟ^以下方法進行測量：將式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)的固體分散體懸浮在pH為1.0至2.0之間的水性體外測試介質中，隨后將對照體外測試介質的pH值調節(jié)為5.0至7.0?？梢栽趐H值調節(jié)后的最初2個小時中的任何時間來測量無定形的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或無定形噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)的濃度。在一些實施方案中，在pH值為5.0至7.0之間的水性體外測試介質中，與不包含聚合物的結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或者結晶的噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)的濃度相比，固體分散體使無定形的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或者無定形的噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)的濃度高至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或者至少10倍。

在其他的實施方案中，在pH值為1.0至2.0的水性體外測試介質中，與不包含聚合物的結晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物的濃度相比，固體分散體中無定形的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或無定形噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)的濃度高至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％。在一些這樣的實施方案中，固體分散體的聚合物為HPMCAS。在一些這樣的實施方案中，固體分散體的聚合物為PVP。

在其他的實施方案中，所述固體分散體中的無定形的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或者無定形噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)的濃度是式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物利藥學可接受的聚合物的固體分散體中的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物的濃度的至少40％、至少50％以上、至少60％、至少70％、至少80％，其中所述藥學可接受的聚合物選自以下物質組成的組中：羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯和丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯-三甲基銨乙基甲基丙烯酸酯氯化物共聚物，其中各固體分散體被放置在pH值為1.0至2.0的水性體外測試介質中。在一些這樣的實施方案中，固體分散體的聚合物為HPMCAS。在一些這樣的實施方案中，固體分散體的聚合物為PVP。

在一些實施方案中，當在一定的濕度和溫度下暴露一段時間時，本發(fā)明所述的固體分散體表現出抵抗式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)的重結晶的穩(wěn)定性。在一個實施方案中，無定形的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物或噻吩并三唑并二氮雜化合物(1-1)的保持無定形的濃度選自：至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％和至少99％。

V.劑型：

可以用于本發(fā)明的固體分散體的合適的劑型包括但不限于膠囊、片劑、小型片劑、珠、微囊劑(beadlet)、丸劑、小顆粒(granule)、粒劑(granulate)和粉末?？梢允褂美缒c溶包衣來包裹合適的劑型。合適的包衣可以包括但不限于鄰苯二甲酸乙酸纖維素、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、聚甲基丙烯酸共聚物、或醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯(HPMCAS)。在一些實施方案中，可存在某些組合，例如，在同一樣品中，本發(fā)明的噻吩并三唑并二氮雜的一些分子可以成簇存在，而一些分子則以分子形式分散于載體中。

在一些實施方案中，本發(fā)明的固體分散體可以配制成片劑、囊片或膠囊。在一些實施方案中，本發(fā)明的固體分散體可以配制成小型片劑或倒入口中(pour-into-mouth)的小顆粒、或者成分(constitution)的口服粉末。在一些實施方案中，本發(fā)明的固體分散體與其他的賦形劑(例如，抑制重結晶/沉淀的聚合物、掩味成分等)組合并分散于合適的稀釋劑中，從而提供即用型的懸浮制劑。在一些實施方案中，本發(fā)明的固體分散體可以配制用于兒科治療。

在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物被配制用于口服給藥。在一個實施方案中，所述的藥物組合物包含根據本發(fā)明所述的多個實施方案的固體分散體，具包含：式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物、或其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、消旋物、對映異構體、異構體或同位素標記的形式；以及聚合物載體。在一個實施方案中，所述的藥物組合物還包含一種或多種添加劑，例如崩解劑、潤滑劑、助流劑、粘結劑和填料。

用于所述的藥物組合物含義合適的藥學可接受的潤滑劑和藥學可接受的助流劑的實例包括但不限于膠態(tài)氧化硅、三硅酸鎂、淀粉、滑石、三堿式磷酸鈣、硬脂酸鎂、硬脂酸鋁、硬脂酸鈣、碳酸鎂、氧化鎂、聚乙二醇、粉末狀纖維素、甘油二十二烷酸酯、硬脂酸、氫化蓖麻油、單硬脂酸甘油酯和硬脂酰富馬酸鈉。

用于所述的藥物組合物的合適的藥學可接受的粘結劑的實例包括但不限于：淀粉、纖維素及其衍生物，例如微晶纖維素(例如AVICEL PH，得自FMC公司)、羥丙基纖維素、羥乙基纖維素和羥丙基甲基纖維素(HPMC，例如METHOCEL，得自Dow Chemical公司)；蔗糖、右旋糖、玉米糖漿；多糖和明膠。

用于所述的藥物組合物的合適的藥學可接受的填料和藥學可接受的稀釋劑的實例包括但不限于：糖果制造商的糖、可壓縮糖、葡萄糖結合劑、糊精、右旋糖、乳糖、甘露醇、微晶纖維素(MCC)、粉末狀纖維素、山梨醇、蔗糖和滑石。

在一些實施方案中，在所述的藥物組合物中，賦形劑可以發(fā)揮多于一種的功能。例如，填料或粘結劑還可以為崩解劑、助流劑、抗粘附劑、潤滑劑、甜味劑等。

在一些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物可以還包含添加劑或配料，例如抗氧化劑(例如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基化羥基茴香醚(BHA)、二丁基化羥基甲苯(BHT)、α-生育酚、丙基沒食子酸鹽和富馬酸)、抗微生物劑、酶抑制劑、穩(wěn)定劑(例如丙二酸)和/或防腐劑。

通常，本發(fā)明的藥物組合物可以配制成任何合適的固體劑型。在一些實施方案中，本發(fā)明的固體分散體混合在單位劑型中，例如作為膠囊或片劑、或者多微粒系統(tǒng)(例如小顆?；蛄⒒蛘叻勰?，以用于給藥。

在一個實施方案中，藥物組合物包含：根據本發(fā)明所述的固體分散體的多個實施方案的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物和醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯(HPMCAS)的固體分散體，其中所述噻吩并三唑并二氮雜化合物在固體分散體中是無定形的，并且噻吩并三唑并二氮雜化合物與醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯(HPMCAS)的重量比為1∶3至1∶1；45重量％至50重量％的乳糖一水合物；35重量％至40重量％的微晶纖維素；4重量％至6重量％的交聯(lián)羧甲基纖維素鈉；0.8重量％至1.5重量％的膠體二氧化硅；和0.8重量％至1.5重量％硬脂酸鎂。

VI.劑量：

在一個實施方案中，本發(fā)明提供了可以配制成任何合適的固體劑型的藥物組合物。在一個實施方案中，根據本發(fā)明的藥物組合物包含本發(fā)明所述式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜化合物的多種實施方案中的一種或多種，其中所述式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜的劑量為約10mg至約100mg。在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含本發(fā)明所述式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜的多種實施方案中的一種或多種，其中所述式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜的劑量選自由如下劑量組成的組：約10mg至約100mg、約10mg至約90mg、約10mg至約80mg、約10mg至約70mg、約10mg至約60mg、約10mg至約50mg、約10mg至約40mg、約10mg至約30mg和約10mg至約20mg。在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含本發(fā)明所述式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜的多種實施方案中的一種或多種，其中所述式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜的劑量選自由約10mg、約50mg、約75mg、約100mg構成的組。

在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包括向有需要的受試者施用本發(fā)明所述多種實施方案中的一種或多種的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜，其劑量選自由如下劑量組成的組：約1mg、約2mg、約2.5mg、約3mg、約4mg、約5mg、約7.5mg、約10mg、約15mg、約20mg、約25mg、約30mg、約35mg、約40mg、約45mg、約50mg、約55mg、約60mg、約65mg、約70mg、約75mg、約80mg、約85mg、約90mg、約95mg、約100mg、約110mg、約120mg、約130mg、約140mg和約150mg；其劑型選自由以下組成的組：每周一次、每六天一次、每五天一次、每四天一次、每三天一次、每隔一天一次、每天一次、每天兩次、每天三次、每天四次、每天五次。在另一個實施方案中，任意前述劑量或劑型可以定期減少或增加。

在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包括向有需要的受試者施用選自由以下化合物構成的組中的噻吩并三唑并二氮雜：化合物(1-1)、(1-2)、(1-3)、(1-4)、(1-5)、(1-6)、(1-7)、(1-8)、(1-9)、(1-10)、(1-11)、(1-12)、(1-13)、(1-14)、(1-15)、(1-16)、(1-17)和(1-18)；所述噻吩并三唑并二氮雜的施用劑量選自由以下劑量構成的細：約1mg、約2mg、約2.5mg、約3mg、約4mg、約5mg、約7.5mg、約10mg、約15mg、約20mg、約25mg、約30mg、約35mg、約40mg、約45mg、約50mg、約55mg、約60mg、約65mg、約70mg、約75mg、約80mg、約85mg、約90mg、約95mg、約100mg、約110mg、約120mg、約130mg、約140mg和約150mg；其劑型選自由以下組成的組：每周一次、每六天一次、每五天一次、每四天一次、每三天一次、每隔一天一次、每天一次、每天兩次、每天三次、每天四次以及每天五次。在另一個實施方案中，任意前述劑量或劑型可以定期減少或增加。

根據特定的治療目的、治療階段等，所述單位劑型適合每日給藥1至5次。在一個實施方案中，有需要的受試者可以至少連續(xù)兩大每日至少1次施用該劑型。在一個實施方案中，有需要的受試者可以至少隔日并每日至少1次施用該劑型。在一個實施方案中，有需要的受試者可以至少每周施用該劑型，并且將該劑型分成相等的和/或不等的劑量。在一個實施方案中，有需要的受試者可以每周施用該劑型，每隔3天和/或每周6次施用。在一個實施方案中，有需要的受試者可以每隔1天、每3天、每4天、每5天、每6天和/或每周以分劑量施用該劑型。在一個實施方案中，有需要的受試者可以每個月服用該劑型的2個或多個等分劑量或非等分劑量。

可以使用例如腸溶包衣來包裹所用的劑型(例如膠囊、片劑、小型片劑、珠、微囊劑、丸劑、小顆粒、粒劑或粉末)。合適的包衣可以包括但不限于鄰苯二甲酸乙酸纖維素、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、聚甲基丙烯酸共聚物、或醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯(HPMCAS)。

VII.工藝：

本發(fā)明所公開的噻吩并三唑并二氮雜化合物可以以游離堿或酸加成鹽的形式存在，其可以根據美國專利申請公開No.2010/0286127(其全部內容以引用方式并入本文或本申請中)中所述的丁序來獲得。本發(fā)明的噻吩并三唑并二氮雜化合物的各對映異構體和非對映異構體可以由包含不對稱中心或立體異構中心的市售可得的起始材料以合成方式制備，或者通過制備外消旋的混合物、然后通過本領域普通技術人員公知的拆分方法來制備。這些拆分方法例如有：(1)使對映異構體的混合物附著在手性助劑上，通過重結晶或色譜法分離所得的非對映異構體的混合物，并從助劑上釋放光學純產物；(2)使用光學活性拆分劑形成鹽；(3)在手性液相色譜柱上直接分離光學對映異構體的混合物；或者(4)使用立體選擇性化學試劑或酶試劑進行動力學拆分。此外，外消旋的混合物還可以通過公知的方法(例如手性相色譜法或使化合物在手性溶劑中結晶)而拆分成它們的構成成分的對映異構體。

如果需要，本發(fā)明所公開的噻吩并三唑并二氮雜化合物的特定對映異構體可以通過不對稱合成或者通過使用手性助劑誘導來制備，其中所得的非對映異構體的混合物被分離并且輔助基團被切割，從而提供所需的純的對映異構體?？蛇x地，在所述分子包含堿性官能團(例如氨基)或酸性官能團(例如羧基)的情況下，非對映異構體的鹽是通過以下過程形成的：使用合適的光學活性的酸或堿，然后對非對映異構體(通過本領域公知的分級結晶或色譜手段而由此形成)進行拆分，并在隨后回收純的對映異構體?？墒褂帽绢I域公知的多種方法來制備式(1)的噻吩并三唑并二氮雜化合物，其中對映異構體的過量百分比通常超過約80％。有利的是，優(yōu)選的對映異構體的過量百分比大于80％，優(yōu)選大于90％，更優(yōu)選大于95％，并且最優(yōu)選為99％以上。

本發(fā)明的固體分散體可以通過多種方法來制備，包括熔融和溶劑蒸發(fā)方法。本發(fā)明的固體分散體還可以根據如下文中所描述的工序制備：Chiou WL，Riegelman S：“Pharmaceutical applications of solid dispersion systems”，J.Pharm.Sci.1971；60：1281-1302；Serajuddin ATM：“Solid dispersion of poorly water-soluble drugs：early promises，subsequent problems，and recentbreakthroughs”，J.Pharm.Sci.1999；88：1058-1066；Leuner C，Dressman J：“Improving drug solubility for oral delivery using solid dispersions”，Eur.J.Pharm.Biopharm.2000；50：47-60；以及Vasconcelos T，Sarmento B，Costa P：“Solid dispersions as strategy to improve oral bioavailability of poor water soluble drugs”，Drug Discovery Today 2007；12：1068-1075，所有這些文獻均以引用的方式將其全文并入本文中。

在一個實施方案中，本發(fā)明的固體分散體是通過熔融工藝制備的。在一個實施方案中，熔融工藝包括在載體中將式(1)的噻吩并三唑并二氮雜的多個實施方案的一個或多個熔融。在一個實施方案中，熔融工藝包括使本發(fā)明的熔融化合物和載體冷卻。在一個實施方案中，熔融工藝包括將熔融的化合物和載體粉碎。在一個實施方案中，在冷卻步驟之后將本發(fā)明的熔融的化合物和載體粉碎。

在一些實施方案中，式(1)的噻吩并三唑并二氮雜或者其藥學可接受的鹽、溶劑化物(包括水合物)、外消旋物、對映異構體、異構體或同位素標記的形式與載體間不相容，在這種情況中，可以在熔融步驟中加入表面活性劑，從而防止在加熱的混合物中形成兩個液相或懸液。在一些實施方案中，式(1)的噻吩并三唑并二氮雜的多個實施方案中的一個或多個實施方案懸浮于之前熔融的載體中，而并未使用熔融狀態(tài)的藥品和載體，由此降低了工藝的溫度。在一個實施方案中，在冰浴攪拌下使熔融的藥品和載體的混合物冷卻。在一個實施方案中，通過噴霧冷卻(可選的通過噴霧冷凝)使熔融的藥品和載體混合物冷卻并固化。

在一個實施方案中，通過將熔融物噴霧至冷卻室(使環(huán)境溫度或冷卻溫度的低溫空氣通過該冷卻室)中以將熔融物形成顆粒，從而使熔融的藥品和載體的混合物冷卻或固化。在一個實施方案中，通過在合適的流化床處理器中使熔融分散體霧化和再固化，從而使熔融的藥品和載體混合物冷卻和固化。在一個實施方案中，通過在可加熱的高剪切混合器中進行熔融制粒，從而使熔融的藥品和載體的混合物冷卻并固化。

在一些實施方案中，可以采用熱階段擠出(hot-stage extrusion)或熔融團聚物來避免藥物的熔融局限。熱階段擠出包括如下過程：在熔融溫度下將預先混合的藥品和載體以高轉速在短時間內擠出；在室溫下冷卻后收集所得的產物并研磨。

在一個實施方案中，將式(1)的噻吩并三唑并二氮雜的多個實施方案中的一個或多個實施方案在較低的溫度下加工，從而避免任何熱不穩(wěn)定的化合物發(fā)生降解。在一個實施方案中，通過將熱階段擠出與暫時性增塑劑(例如二氧化碳)結合而實現較低的處理溫度。在一個實施方案中，在根據本發(fā)明的固體分散體的制備中，在常規(guī)的高剪切混合器或旋轉處理器中使用了熔融團聚物。在一個實施方案中，通過將包含根據本發(fā)明的噻吩并三唑并二氮雜化合物的熔融載體加入至加熱的賦形劑中，從而制備根據本發(fā)明的固體分散體。在一個實施方案中，通過將包含根據本發(fā)明的噻吩并三唑并二氮雜化合物、載體和一種或多種賦形劑的混合物加熱至載體的熔融范圍內或以上的溫度，從而制備根據本發(fā)明的固體分散體。

在一些實施方案中，通過溶劑蒸發(fā)方法來制備根據式(1)的噻吩并三唑并二氮雜的制劑的多個實施方案中的一個或多個實施方案。在一個實施方案中，溶劑蒸發(fā)方法包括使根據式(1)的噻吩并三唑并二氮雜和載體溶解于揮發(fā)性溶劑中，然后使揮發(fā)性溶劑蒸發(fā)。在一個實施方案中，揮發(fā)性溶劑可以為一種或多種賦形劑。在一個實施方案中，一種或多種賦形劑包括但不限于抗粘劑、惰性填料、表面潤濕劑、pH調節(jié)劑和添加劑。在一個實施方案中，賦形劑可以溶解于揮發(fā)性溶劑中，或者在揮發(fā)性溶劑中呈懸浮或膨脹狀態(tài)。

在一個實施方案中，根據本發(fā)明的固體分散體的制備包括使懸浮于揮發(fā)性溶劑中的一種或多種賦形劑干燥。在一個實施方案中，所述的干燥包括真空干燥、使揮發(fā)性溶劑在低溫下緩慢蒸發(fā)、使用旋轉蒸發(fā)儀、噴霧干燥、噴霧制粒、冷凍干燥或使用超臨界流體。

在一個實施方案中，使用了噴霧干燥制備根據式(1)的噻吩并三唑并二氮雜組合物的制劑，其包括使所述的組合物的懸液或溶液霧化成小滴，然后快速除去制劑中的溶劑。在一個實施方案中，根據本發(fā)明的制劑的制備涉及噴霧制粒，其中將位于溶液中的組合物的溶液或懸液噴霧至合適的化學惰性和/或物理惰性填料上，例如乳糖或甘露醇。在一個實施方案中，通過雙通或三通噴嘴對所述的組合物的溶液或懸液進行噴霧制粒。

在一些實施方案中，根據本發(fā)明的固體分散體的制備包括使用超臨界流體。術語“超臨界流體”是指在臨界溫度和臨界壓力以上以單一液相存在的物質。在一個實施方案中，根據本發(fā)明的制劑的制備包括使用超臨界二氧化碳流體。在一個實施方案中，利用超臨界流體技術制備根據本發(fā)明的制劑，其包括：將根據式(1)的噻吩并三唑并二氮雜組合物和載體溶解于常見溶劑中，該溶劑通過噴嘴與二氧化碳同時被引入至顆粒形成容器中；以及將所述溶液噴霧，從而使溶劑被超臨界流體快速萃取，由此使得固體分散體顆粒沉淀在容器的壁上。

在一些實施方案中，根據本發(fā)明的固體分散體的制備包括使用共沉淀方法。在一個實施方案中，在持續(xù)攪拌下將非溶劑滴加至根據式(1)的噻吩并三唑并二氮雜組合物和載體溶液中。在一個實施方案中，在添加非溶劑的過程中，使根據式(1)的噻吩并三唑并二氮雜組合物和載體進行共沉淀，從而形成微顆粒。在一個實施方案中，過濾并干燥所得的微顆粒，從而提供所需的固體分散體。

對于式(1)的化合物與聚合物載體(一種或多種)的混合比例沒有特別限定，只要其可以改善式(1)的化合物的生物利用率即可，并且該比例根據聚合物的種類而改變。

通過以下非限定性例子來說明本發(fā)明。

VIII.例子：

實施例1：化合物(1-1)的固體分散體的體外篩選

使用化合物(1-1)以及五種聚合物中的一種來制備十種固體分散體，其中所述聚合物包括醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯(HPMCAS-M)、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯(HPMCP-HP55)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、PVP-乙酸乙烯酯(PVP-VA)和Eudragit L100-55，并且對于每種聚合物，化合物(1-1)的負載率為25％和50％。使用噴霧干燥，然后在低溫對流烘箱中進行二次干燥，從而通過溶劑蒸發(fā)法來制備固體分散體。通過非沉降溶解性能測試(non-sink dissolution performance test)來評估各固體分散體的性能，所述測試測量藥物的總量和隨著時間溶液中所存在的游離藥物的量。選擇非沉降溶解是由于其能夠最好地代表低溶解度化合物在體內的情況。該測試包括在分散體被引入至測試介質后約30分鐘至40分鐘，分散體由胃pH(0.1N NaCl，pH 1.0)至腸pH(FaFSSIF，pH 6.5)的“胃轉移”，從而模擬了體內的情況。[FaFSSIF為禁食狀態(tài)的人工腸液，其由3mM的牛黃膽酸鈉、0.75mM的卵磷脂、0.174g NaOH顆粒、1.977g NaH₂PO₄·H₂O、3.093g NaCl和適量純凈水500mL組成]。使用高效液相色譜(HPLC)法和Agilent 1100串聯(lián)HPLC來定量溶解藥物的量。制劑的溶解情況(圖1A-1J)表明：相對于在相同介質中的未經配制的化合物而言，在所有的分散體候選物中，藥物的溶解度均大幅升高。在所有的固體分散體中，基于在腸pH下釋放的游離藥物的水平較高這一發(fā)現可知，與未經配制的化合物相比，25％化合物(1-1)在PVP中的分散體、25％化合物(1-1)在HPMCAS-M中的分散體、以及50％化合物(1-1)在HPMCAS-M中的分散體提供了增強的經口吸收。

實施例2：化合物(1-1)的固體分散體的體內篩選

以更大的規(guī)模制備化合物(1-1)的固體分散體，即25％化合物(1-1)在PVP中的分散體、25％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散體、以及50％化合物(1-1)在HPMCAS-M中的分散體，以用于體內研究。各制劑均經過了實施例1所述的體外溶解測試的評估。為了確保這些分散體是無定形且均質的，通過X射線粉末衍射法(PXRD)和修正的差示掃描量熱法(mDSC)來評估各分散體。X射線衍射計為Bruker D-2Phaser。另外，為了了解水對各種分散體的玻璃化轉變溫度(Tg)的影響，對首先在設定的相對濕度(即，25％、50％和75％RH)下平衡至少18小時的樣品進行mDSC。水可以用作固體分散體的增塑劑，并且由活性化合物或聚合物導致的體系的吸濕性可以影響被這些體系吸收的水的量。

非沉降溶解結果(圖2A-2C)與實施例1中分散體的結果相當。PXRD結果(圖3)顯示沒有證據表明任意一種分散體中存在結晶化合物，并且mDSC結果(圖4A-4C)顯示各分散體均存在單一的玻璃化轉變溫度(Tg)，這表明各分散體是均勻的。對于各分散體，觀察到Tg與相對濕度之間逆相關(圖5)。值得注意的是，對于在75％RH下平衡的25％化合物(1-1)在PVP中的固體分散體，出現了兩個Tg，這表明發(fā)生了相分離，并且該分散體還顯示出在75％RH下發(fā)生了熔化，這表明在RH平衡過程中發(fā)生了結晶(圖6)。該發(fā)現表明25％化合物(1-1)在PVP中的分散體的穩(wěn)定性弱于HPMCAS-M分散體。

為了評估這三種分散體的生物利用度，向多組雄性獵兔犬(每組3只)給予劑量為3mg/kg的化合物(1-1)的固體分散體的水性懸液(通過口服填喂法給藥)，或者給予劑量為3mg/kg的溶解于水∶乙醇∶聚乙二醇(PEG)400(60∶20∶20)中的化合物(1-1)(并以靜脈推注給藥至頭靜脈中)。在靜脈給藥后的0分鐘(服藥之前)、5分鐘、15分鐘和30分鐘、和1小時、2小時、4小時、8小時、12小時和24小時，以及在口服填喂給藥后的0分鐘(服藥之前)、15分鐘和30分鐘、和1小時、2小時、4小時、8小時、12小時和24小時由各動物的頸靜脈收集血液樣品。使用合格的LC-MS/MS法檢測各樣品中存在的化合物(1-1)的量，并且量化下限為0.5ng/mL。通過使用線性梯形法則(直至最終可測的濃度，而未將終末消除相外推至無窮大)來測定血漿濃度-時間曲線的曲線下面積(AUC)。通過對對數濃度-時間曲線的終末線性部分進行最小二乘回歸分析來計算消除半衰期(t_1/2)。由血漿濃度數據直接得到最大血漿濃度(C_max)和達到C_max的時間(t_max)。通過用口服給藥后的劑量歸一化的AUC除以靜脈給藥后的劑量歸一化的AUC來計算口服生物利用度(F)，并以百分數(％)形式報告。下表1中總結的結果給出了25％化合物(1-1)在PVP中的固體分散體、25％化合物(1-1)在HPMCAS-M中的固體分散體和50％化合物(1-1)在HPMCAS-M中的固體分散體的平均口服生物利用度，分別為58％、49％和74％。

表1：狗口服(po)和靜脈(iv)給藥后的化合物(1-1)的藥物動力學參數(數值為3只狗的平均值)

AUC：血漿濃度-時間曲線下的面積；C_max：最大血漿濃度；F：生物利用度；HPMCAS：醋酸羥丙基甲基纖維素鈉；IV：靜脈內；PEG：聚乙二醇；PO：經口，口服；PVP：聚乙烯吡咯烷酮；t_max：達到C_max的時間；t_1/2：血漿消除半衰期

實施例3：包含化合物(1-1)的固體分散體的膠囊的制備和臨床應用

制備10mg強度的明膠膠囊，在患有惡性血液病的患者中進行初步的臨床研究。基于實施例1和2中所述的化合物(1-1)的固體分散體的體外和體內測試結果，選擇50％化合物(1-1)在HPMCAS-M中的固體分散體用于膠囊的研發(fā)。以3號尺寸的硬明膠膠囊，190mg的填充量為目標來開始膠囊的研發(fā)，因為這樣的構造可以通過填充更大尺寸的膠囊而潛在地增加膠囊的強度，同時保持藥物組合物。根據經驗，設計了4種膠囊制劑，其中具有不同量的崩解劑并且具有或不具有潤濕劑。由于所有4種制劑都顯示出相似的崩解測試和溶解測試結果，所以選擇最簡單的制劑(不具有潤濕劑，并具有最少量的崩解劑)用于制造。進行制造工藝的研發(fā)和規(guī)模擴大的研究，以確定固體分散體的噴霧干燥工藝和干燥后的時間；共混的參數；為獲得約0.60g/cc的目標堆密度的共混物的輥壓和研磨；以及膠囊填充的條件。

將結晶化合物(1-1)和聚合物醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯(HPMCAS-M)溶解于丙酮中，并嗩霧干燥，從而生產包含50％化合物(1-1)載量的固體分散體中間體(SDI)顆粒。PXRD分析顯示SDI是無定形的，mDSC分析顯示SDI是均勻的(即在環(huán)境條件下具有單一的Tg)。在V型攪拌機的多個段中將50％化合物(1-1)在HPMCAS-M中的固體分散體(1000g)和賦形劑(包括微晶纖維素填料-粘結劑(4428g)、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉崩解劑(636g)、膠體二氧化硅分散劑/潤滑劑(156g)、硬脂酸鎂分散劑/潤滑劑(156g)和乳糖一水合物填料(5364g))共混。然后將混合物壓制并制粒，從而得到約0.6g/mL的堆密度。使用自動化的填充機將混合物分配至3號尺寸的硬明膠膠囊(目標填充量：190mg)中，并使用膠囊拋光機將制得的膠囊拋光。

在口服給藥10mg膠囊(包含50％化合物(1-1)在HPMCAS中的固體分散體)后進行藥物動力學的評估，并將結果與對健康志愿者口服給藥4x10mg膠囊(其包含化合物(1-1)的Eudragit固體分散體)后進行的藥物動力學評估加以對比。

在下表2A和2B中提供了這兩種藥物組合物的比較。之前的Eudragit制劑在2009年1月8日公開的美國專利申請2009/0012064A1中的實施例5中有所描述。該中請記載：通過在水利乙醇的混合物中溶解和/或分散式(A)所示的噻吩并三唑并二氮雜和包裹用賦形劑(包含氨溶甲基丙烯酸脂共聚物B型(Eudragit RS)、甲基丙烯酸共聚物C型(Eudragit L100-55)、滑石和硅酸鋁鎂)來制備Eudragit固體分散體制劑。然后，使用離心流化床制粒機將上述的非均勻混合物施加在微顯纖維素球(Nonpareil 101，Freund)上，從而生產分配至2號尺寸的羥丙基甲基纖維素膠囊中的顆粒。

在這兩個臨床研究中，使用經驗證的LC-MS/MS方法來測定化合物(1-1)的血液水平，并根據在膠囊給藥后24小時內各時間點測量的化合物(1-1)的血漿濃度來進行藥物動力學分析。下表3中總結的結果顯示，根據AUC(924*4/1140，由于給藥劑量的差異而改變)，HPMCAS-M固體分散體制劑在人中的生物利用度比Eudragit固體分散體制劑高3倍以上。此外，根據觀察到的T_max，HPMCAS制劑的吸收速度快于Eudragit制劑(T_max為1小時vs 4-6小時)。HPMCAS-M固體分散體制劑的在系統(tǒng)暴露方面的明顯改善是意料之外的。

表2A：用于臨床應用的化合物(1-1)的固體分散體膠囊

包含化合物(1-1)的50％HPMCAS固體分散體的藥物組合物：10mg強度，3號尺寸的硬明膠膠囊

表2B：包含化合物(1-1)的Eudragit L100-55固體分散體的藥物組合物：10mg強度，2號尺寸的硬明膠膠囊

*為無水形式

表3：在將化合物(1-1)的固體分散體經口施用給人后的藥物動力學參數

AUC_0-24h：24小時內OTX015血漿濃度對時間曲線下的面積

C_max：最大血漿濃度

hr：小時

HPMCAS：醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯

mL：毫升

ng：納克

PO：經口，口服

T_max：達到C_max的時間

實施例4：在大鼠中的口服暴露

在大鼠中測定化合物(1-1)的固體分散體的3種制劑的口服生物利用度。所選的3種分散體為25％化合物(1-1)在PVP中的分散體、25％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散體和50％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散體。在該研究中使用的動物為得自土爾庫大學(芬蘭)的中央動物實驗室(Central Animal Laboratory)的無特定病體(SPF)的Hsd：Sprague Dawley大鼠。大鼠最初購自位于荷蘭的Harlan。大鼠為雌性，并且為10周齡，12只大鼠用于該研究中。在聚碳酸酯Makrolon II籠中飼養(yǎng)動物(每個籠中3只)，動物室溫為21+/-3℃，動物室內的相對濕度為55+/-15％，并且動物室內照明為人工照明，而且為12小時明暗周期的循環(huán)(暗周期為18:00至06:00之間)。白楊木屑(Tapvei Oy，Estonia)用于墊料，并且每周至少更換1次墊料。在對動物定量給藥之前提供食物和水，但是在定量給藥后最初的2個小時中移除食物和水。

將預先計算的量的注射用無菌水加入至裝有采用合適的量的分散體的容器中，獲得化合物(1-1)的濃度為0.75mg/mL，由此制備包含25％化合物(1-1)在PVP中的分散體的口服定量給藥溶液、包含25％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散體的口服定量給藥溶液和包含50％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散體的口服定量給藥溶液。在每次給藥之前，將口服定量給藥溶液進行渦旋混合20秒。用于靜脈給藥的定量給藥溶液包含0.25mg/mL的化合物(1-1)，該定量給藥溶液是通過將5mg的化合物(1-1)溶解于這樣的混合物中來制備的，所述混合物包含4mL的平均分子量為400Da的聚乙二醇(PEG400)、4mL的乙醇(96％純度)和12mL的注射用無菌水。在加入水后的30分鐘之內使用含有25％化合物(1-1)在PVP中的分散體的定量給藥溶液。在加入水后的60分鐘之內使用含有25％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散體的定量給藥溶液和含有50％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散體的定量給藥溶液。使用4mL/kg定量給藥量，從而使化合物(1-1)的靜脈給藥的給藥水平為1mg/kg，口服給藥的給藥水平為3mg/kg。定量給藥方案在表4中給出。

表4.用于大鼠口服暴露研究的定量給藥方案

在定量給藥后的0.25小時、0.5小時、1小時、2小時、4小時、8小時、12小時和24小時的時間點，將約50μL的血液樣品收集至包含5μL乙二胺四乙酸(EDTA)溶液的Eppendorf管中，并且每個樣品都是在距所述時間點5分鐘時間窗內收集的。由各樣品獲得20μL血漿并儲存在干冰溫度下以用于分析。使用經驗證的液相色譜串聯(lián)質譜(LC-MS/MS)法對各樣品中化合物(1-1)的濃度進行分析，其定量下限為0.5ng/mL。

使用Phoenix WinNonlin軟件包(6.2.1版，Pharsight Corp公司，CA，USA)，采用標準的非房室模型方法來計算藥物動力學參數。通過對對數濃度-時間曲線的終末線性部分進行最小二乘回歸分析來計算消除半衰期(t_1/2)。通過使用線性梯形法則直至最終可測的濃度，此后將終末消除相外推至無窮大來測定血漿濃度-時間曲線的曲線下面積(AUC)。通過將藥物濃度曲線外推至無窮大來計算平均保留時間(MRT)，其代表了化合物在房室或系統(tǒng)中保留的平均時間量。由血漿濃度數據直接得到最大血漿濃度(G_max)和達到C_max的時間(t_max)。通過用口服給藥后的劑量歸一化的AUC除以靜脈給藥后的劑量歸一化的AUC來計算試驗性口服生物利用度(F)，即F＝(AUC(口服)/劑量(口服))/(AUC(靜脈)/劑量(靜脈))]，并以百分數(％)形式報告。

藥物動力學參數在表5中給出，血漿濃度對時間的圖示于圖7和8中。

表5.口服和靜脈給藥后的化合物(1-1)的藥物動力學參數。值為得自3只動物的平均值。

實施例5.噴霧干燥分散體的制備

使用五種所選的聚合物來制備化合物(1-1)的噴霧干燥的分散體，這5種聚合物為：HPMCAS-MG(Shin Etsu Chemical公司)、HPMCP-HP55(Shin Etsu Chemical公司)、PVP(ISP，Ashland公司的部門)、PVP-VA(BASF公司)和Eudragit L100-55(Evonik Industries AG)。使用每種聚合物以25％和50％制備所有的噴霧干燥溶液。除了PVP溶液以外，所有的溶液都是在丙酮中制備的，PVP溶液是在乙醇中制備的。對于各溶液而言，在10g溶劑中制備1.0g固體(聚合物和化合物(1-1))。使用具有1.5mm噴嘴的Büchi B-290，PE-024噴霧干燥器和Büchi B-295，P-002冷凝器將溶液噴霧干燥。將噴霧干燥器的噴嘴壓力設定為80psi，目標出口溫度設定為40℃，冷卻器的溫度設定至-20℃，泵速設定為100％，并且抽吸器設定為100％。在噴霧干燥后，收集固體分散體，并在低溫對流烘箱中過夜干燥，從而除去殘余的溶劑。

實施例6：濕度和溫度的穩(wěn)定性

通過在高溫下暴露于水分來評估化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的噴霧干燥分散體的穩(wěn)定性。通過在75％相對濕度和40℃下放置1、2和3個月，來測定作為相對濕度的函數的玻璃化轉變溫度(Tg)。在HDPE瓶中將噴霧干燥的分散體儲存在LDPE袋內，從而模擬散裝物品包裝。結果總結于表6中。在時間0時，Tg為134℃，在1個月時Tg為134℃，在2個月時Tg為135℃，在3個月時Tg為134℃，并且在各測量中僅觀測到單一的拐點。對每種樣品還獲得了X射線衍射圖譜。圖9示出了在穩(wěn)定性測試的時間0時，化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的固體分散體的X射線粉末衍射圖譜。圖10、11和12示出了分別在暴露于40℃和75％相對濕度1個月、2個月和3個月后，化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的固體分散體的X射線粉末衍射圖譜。圖案未顯示與化合物(1-1)有關的任何衍射線。

實施例7：三陰性乳腺癌細胞系的體外處理。

在HCC197、MDA-MB-231和MDA-MB-468人源性TNBC細胞系中測定化合物(1-1)的生長抑制濃度50％(GI50)值。將細胞暴露于劑量遞增的化合物(1.1)72小時，并用MTT測定法評估細胞增殖。使用Windows用Prism 5.00，利用S形劑量反應的方程式計算生長抑制50％(GI50)濃度和最大效應(Emax)值?；衔?1-1)在72小時后，在3種細胞系中顯示出抗增殖活性，GI50值范圍為81.7nM至448.3nM，如圖13所示。

結果表示為抑制50％細胞生長的濃度(G150)。Emax％表示化合物(1-1)對細胞增殖產生的最大抑制效果(相對于對照未處理細胞的百分比)。兩個值都表示為具有95％置信區(qū)間的平均值。在所有情況下，n≥4。

在暴露24小時、48小時和72小時后，評價化合物(1-1)對細胞周期的影響。細胞用碘化丙啶染色，然后使用FACScan流式細胞儀進行分析。用化合物(1-1)(對于MDA-MB-231細胞系為75nM，對于其他兩種細胞系為650nM)同時處理HCC1937、MDA-MB-231和MDA-MB-468細胞系24小時、48小時和72小時。處理72小時后，用PBS洗滌對照細胞和經處理的細胞，并在不含化合物(1-1)的培養(yǎng)基(藥物洗脫)中再培養(yǎng)。如圖14A-14C所示，通過單因素方差分析(one-way ANOVA test)，然后進行SNK檢驗確定相對于未處理的對照細胞，化合物(1-1)處理細胞的百分比存在顯著差異(p＜0.001)。沖洗后，根據需要，在具有相等或不同方差的獨立樣品的Student t檢驗中測定對照和預處理的細胞之間指定細胞周期階段中細胞百分比的顯著差異。*、×和#表示經處理的細胞和對照細胞分別在G1期(*p＜0.05，**p＜0.01)、G2/M期(×p＜0.05，××p＜0.01)和S期(p＜0.05，##p＜0.01)存在顯著差異。每個條和垂直線分別表示平均值±SEM(n≥3)。在三種TNBC細胞系中，24小時化合物(1-1)暴露誘導G1期細胞百分比的顯著(p＜0.05)增加，S期細胞減少。然而，在HCC1937和MDA-MB-231細胞中，該阻斷是短暫的，因為它們在藥物洗脫48小時后恢復對照細胞周期模式。有趣的是，在藥物洗脫后，MDA-MB-468細胞系顯示G2/M期細胞的顯著(p＜0.05)累積，損失G1期細胞。

在三種TNBC細胞系中，在未處理的細胞中以及在暴露于化合物(1-1)(對于MDA-MB231細胞系為75nM，對于HCC1937和MDA-MB-468細胞系為650nM)24小時、48小時和72小時后，通過商用抗體進行的蛋白質印跡和RT-PCR分析BRD2/3/4以及c-Myc的表達水平。使用Fast SYBR Green Master Mix在StepOnePlus在實時PCR系統(tǒng)(Real-Time PCR System)上進行RT-PCR，進行24、48和72小時(B圖)。如圖14所示，通過單因素方差分析(p＜0.001)，接著進行SNK后驗檢(*p＜0.05，**p＜0.01)確定mRNA水平的顯著差異。根據需要，在單因素方差分析之前采用變量的對數變換。圖15A-15E示出了HCC1937、MDA-MB-231和MDA-MB-468細胞系中的C-MYC、BRD2、BRD3和BRD4的基礎水平。如圖16A-C所示，蛋白質印跡是三個獨立實驗的代表，其中每個條和垂直線分別代表平均值±SEM(n＝3)。如圖15D-15G所示，在經過化合物(1-1)處理的所有三種細胞系中，C-MYC蛋白和mRNA水平未改變?；衔?1-1)下調了(p＜0.05)MDA-MB-468細胞系中的c-Myc表達(mRNA和蛋白質)。在MDA-MB231和MDA-MB-468細胞中BRD2水平增加(p＜0.05)?；衔?1-1)還降低了(p＜0.05)HCC1937和MDA-MB-468細胞中BRD3的mRNA水平。

將化合物(1-1)與依維莫司聯(lián)合，通過Chou-Talalay法(CI＜1，協(xié)同作用；CI≈1，疊加作用；CI＞1.1，拮抗作用)確定聯(lián)合指數(CI)。在指定的細胞系中72小時后，通過MTT測定來評估化合物(1-1)和依維莫司聯(lián)合的抗增殖活性。如圖17A和17B所示，依維莫司與化合物(1-1)的同時聯(lián)用在HCC1937和MDA-MB-231細胞系中具有疊加作用(分別為CI＝1.02和0.94)，在MDA-MB-468細胞系中具有拮抗作用(CI＝1.60)。BRD2/3/4和C-MYC蛋白和mRNA的基礎表達與對化合物(1-1)的敏感性沒有關聯(lián)，與兩種藥物的聯(lián)合效果也沒有關聯(lián)。

實施例8：小鼠的體內處理

在8周齡雌性MDA-MB-231裸鼠衍生的異種移植物中進行體內試驗。注射10x106個細胞，當腫瘤體積達到100mm³時，將小鼠隨機分為4組(n＝9)：1)空白對照；2)50mg/kg化合物(1-1)(BID，口服)；3)2mg/kg依維莫司(每周3次，腹腔注射)；4)化合物(1-1)和依維莫司的聯(lián)合；治療4周。

如圖18A所示，在治療期間和隨后，使用雙因素方差分析(two way ANOVA test)(p＜0.001)在每個時間點，比較不同藥物方案的腫瘤重量，隨后進行Bonferroni(一種后驗檢驗)。符號·表示治療與載劑處理的小鼠之間的顯著差異(p＜0.05)。*表示聯(lián)合處理的動物和兩個單一試劑組之間的腫瘤質量的顯著差異(*p＜0.05，**p＜0.01和***p＜0.001)。結果表示平均值±SEM(在治療期間，n＝9)。治療期間動物體重的變化如圖18B所示。在體內，在沒有體重減輕的治療19天后，相對于載劑處理的小鼠(最佳T/C％＝40.7)，化合物1-1處理的異種移植物顯示腫瘤質量顯著(p＜0.05)降低。雖然單獨的依維莫司不具有活性，但與化合物(1-1)的聯(lián)合是最有效的治療策略(最佳T/C％＝20.7)。在聯(lián)合治療10天后，T/C比為39％，在第23天出現最佳值21％?；衔?1-1)可單獨用于治療TNBC、或與mTOR抑制劑聯(lián)合用于治療TNBC。

實施例9

在HCC197、MDA-MB-231和MDA-M B-468人源性TNBC細胞系中，在常氧和缺氧(0.1％大氣O₂)條件下暴露48小時和72小時后，采用MTT測定和細胞計數測定化合物(1-1)生長抑制濃度50％(GI₅₀)值。在基線水平，以及暴露于500nM化合物(1-1)24小時、48小時和72小時后，在StepOnePlus實時PCR系統(tǒng)上用Fast SYBR Green Master Mix進行RT-PCR。化合物(1-1)與多西他賽或mTOR抑制劑-依維莫司聯(lián)用，并且通過Chou-Talalay法確定聯(lián)合指數(CI＜0.9，協(xié)同作用；CI＝0.9-1.1，疊加作用；CI＞1.1，拮抗作用)。

化合物(1-1)在常氧條件和缺氧條件下處理48小時和72小時后，在3種細胞系中顯示出抗增殖活性。MDA-MB-231在兩種條件下最敏感。缺氧顯著(p＜0.05)增加化合物(1-1)在MDA-MB-468細胞中的抗增殖活性。此外，僅在這些細胞中，化合物(1-1)的抗腫瘤作用伴隨著c-MYC和n-MYC的表達水平的顯著(p＜0.05)降低。在化合物(1-1)暴露后，三種細胞系表現出p21表達的實質性增加，這與G1細胞周期停滯相關。在HCC1937和MDA-MB-231細胞，當依維莫司與化合物(1-1)同時聯(lián)用時，具有疊加作用(分別為CI＝1.02和0.94)中，并且在MDA-MB-468細胞中具有拮抗作用(CI＝1.60)。同樣地，在HCC1937和MDA-MB-231細胞中，當多西他賽與化合物(1-1)同時聯(lián)用時，也具有疊加作用(分別為CI＝1.03和0.95)，并且在MDA-MB-468細胞中顯示出輕微的協(xié)同作用(CI＝0.87)。

這些臨床前數據為化合物(1-1)在TNBC的臨床環(huán)境中的進一步發(fā)展提供支持，其可以單獨施用或與mTOR抑制劑聯(lián)合施用。單一試劑在實體腫瘤患者(包括TNBC)中的Ib期研究正在進行之中。

實施例10

這項工作的目的是評估化合物(1-1)在常氧和缺氧環(huán)境中以及與mTOR抑制劑依維莫司和多西他賽聯(lián)用的體外抗腫瘤活性。

實驗程序：在三種人源性TNBC細胞系：HCC1937、MDA-MB-231和MDA-MB-468中評估化合物(1-1)的抗增殖活性。在常氧和缺氧(0.1％大氣O₂)條件下，將細胞暴露于增加濃度的化合物(1-1)中48和72小時。采用MTT測定和細胞計數評估增殖。使用Windows用Prism5.00，使用S形劑量反應的方程式計算化合物(1-1)抑制50％細胞生長的濃度(GI50)和6μM的化合物(1-1)誘導的最大抑制效應(Emax％)。在暴露24小時、48小時和72小時后，在常氧條件下評價化合物(1-1)對細胞周期的影響。細胞用碘化丙啶染色，然后使用FACScan流式細胞儀分析。作為化合物(1-1)的靶標，通過在常氧條件下在TNBC細胞系中進行蛋白質印跡和RT-PCR分析BRD2/3/4以及c-Myc的基礎表達水平。在TNBC細胞系模型中，在指定濃度下暴露于化合物(1-1)24小時、48小時和72小時后，還評估了BRD2/3/4、c-Myc、n-Myc和CDKN1A(p21)的mRNA和蛋白質水平。在三種TNBC細胞系中，在常氧和缺氧條件下，對暴露于化合物(1-1)聯(lián)用RAD001或多西他賽達到48和72小時的抗增殖作用進行評價。使用通過Chou-Talalay法確定的聯(lián)合指數(CI)(CI＜0.90，協(xié)同作用；0.90≤CI≥1.10，疊加作用；CI＞1.10，拮抗作用)評價聯(lián)合效果。

如表7所示，在常氧和缺氧條件下，均在HCC1937和MDA-MB-231細胞系中觀察到化合物(1-1)的抗增殖作用。MDA-MB-468細胞僅在缺氧條件下對化合物(1-1)敏感。

表7.48小時處理后化合物(1-1)的GI₅₀和E_max值

表7中的結果表示為抑制50％的細胞生長(GI₅₀)的濃度。Emax％表示6μM的化合物(1-1)對細胞增殖產生的最大抑制效果(相對于對照未處理細胞的百分比)。兩個值都表示為具有95％置信區(qū)間的平均值。當Emax％≤60％時，IG₅₀值被認為是明顯的(*)。在所有情況下，n≥4。

如圖19所示，在所有細胞系中，24小時化合物(1-1)暴露誘導G1細胞百分比的顯著(p＜0.05)增加，伴隨著S期細胞的減少。用化合物(1-1)(對于MDA-MB-231細胞系為75nM，對于兩種其他細胞系為650nM)同時處理HCC1937、MDA-MB-231和MDA-MB-468細胞系24小時、48小時和72小時。在所有情況下，細胞用碘化丙啶染色并通過流式細胞術分析。通過單因素方差分析(p＜0.01)，隨后進行SNK后驗檢，確定化合物1-1處理的細胞相對于未處理對照細胞的G1、S和G2/M期細胞百分比的顯著差異。*，×和#分別表示處理細胞與對照之間的G1細胞周期(*p＜0.05，**p＜0.01)、G2/M期(×p＜0.05，××p＜0.01)和S期的顯著差異(#p＜0.05，##p＜0.01)。每個條和垂直線分別表示平均值±SEM(n≥3)。

如圖20A和20B所示，在MDA-MB-468細胞中，化合物(1-1)下調(p＜0.01)c-Myc表達(mRNA和蛋白質)以及BRD4和n-Myc的mRNA水平(p＜0.05)。MDA-MB-231和MDA-MB-468細胞中BRD2水平增加(分別為p＜0.05和p＜0.01)。在所有三種細胞模型中，CDKNlA(p21)mRNA水平增加(p＜0.001)。通過RT-PCR和蛋白質印跡，在HCC1937、MDA-MB-231和MDA-MB-468細胞系中分別在基礎水平(圖19A)和暴露于化合物(1-1)(MDA-MB-231細胞為75nM，兩種其他細胞系為650nM)后24小時、48小時和72小時后，評估BRD2/3/4、p21、n-Myc和c-Myc在mRNA和蛋白質水平方面的表達(圖19B)。通過單因素方差分析(p＜0.01)，然后進行SNK后驗檢(*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.01)確定mRNA水平的顯著差異。根據需要，在方差分析之前采用變量的對數變換。每個條和垂直線分別代表平均值±SEM(n＝3)。蛋白質印跡是3次獨立試驗的代表。(a)在HCC1937和MDA-MB-231細胞中未檢測到n-Myc mRNA。

如表8所示，化合物(1-1)抑制所有TNBC細胞系中的增殖，72小時處理后Gl₅₀值＜500nM。在常氧和缺氧條件下觀察到對增殖的類似作用。

表8：72小時處理后化合物(1-1)的GI₅₀和E_max值

表8中的結果表示為抑制50％的細胞生長(GI₅₀)的濃度。Emax％表示6μM的化合物(1-1)對細胞增殖產生的最大抑制效果(相對于對照未處理細胞的百分比)。兩個值都表示為具有95％置信區(qū)間的平均值。當Emax％≤60％時，IG₅₀值被認為是明顯的(*)。在所有情況下，n≥4。

圖22示出了在常氧和缺氧條件下，在TNBC細胞系中48小時和72小時處理后，化合物(1-1)與依維莫司(A)或多西他賽(B)的聯(lián)合作用的體外評價的結果。在缺氧和常氧條件下，在HCC1937和MDA-MB-231細胞系中，化合物(1-1)和依維莫司的同時聯(lián)合處理72小時后顯示出疊加作用，但在MDA-MB-468細胞中是拮抗作用。化合物(1-1)和多西他賽的聯(lián)用在TNBC細胞系中是疊加作用或輕微協(xié)同作用。協(xié)同作用定義為CI＜0.9；0.9至1.10之間的CI值表示藥物的疊加作用；CI＞1.10反映拮抗作用(n＝3)。

結論：化合物(1-1)在常氧和缺氧條件下的三種TNBC細胞系中均顯示出抗增殖作用，GI50值＜500nM?；衔?1-1)的生長抑制活性伴隨著細胞在G1期的顯著積累，同時伴隨著S期細胞的減少和CDKN1A(p21)mRNA水平的增加?；衔?1-1)的作用機制似乎是Myc-非依賴性的，因為處理僅導致了MDA-MB-468細胞系中的c-Myc和n-Myc的表達下調。當與依維莫司聯(lián)用時，化合物(1-1)在HCC1937和MDA-MB-231細胞系中顯示出疊加的抗增殖作用，但在MDA-MB-468細胞中(在常氧和缺氧下)顯示拮抗作用。在常氧和缺氧下，化合物(1-1)和多西他賽在HCC1937和MDA-MB-231細胞系中顯示出疊加抗增殖作用，并且在MDA-MB-468細胞中顯示出協(xié)同作用。

本領域技術人員應該理解的是，在不脫離本發(fā)明的寬泛的發(fā)明構思的條件下可以對上文所示的并描述的示例性實施方案進行修改。因此，應該理解的是本發(fā)明不限于所示的并描述的示例性實施方案，其旨在涵蓋在權利要求書所限定的本發(fā)明的精神和范圍內的修改。例如，示例性實施方案的特定特征可以為所要求保護的發(fā)明的一部分或不是其一部分，并且所公開的實施方案的特征可以結合。除非本發(fā)明作出具體說明，術語“一個”、“一種”和“所述”不限于一個元素，而是應該理解為“至少一個”。

應該理解的是，本發(fā)明的至少一些特征和描述被簡化為集中于與清楚地理解本發(fā)明有關的元素，同時為了清晰起見，除去了本領域普通技術人員將理解的其他元素(也可以包含本發(fā)明的一部分)。但是由于此類元素是本領域公知的，并且由于它們不一定會更有利于更好地理解本發(fā)明，所以在本發(fā)明中未提供此類元素的描述。

此外，所述的方法并非依賴于本發(fā)明列出的步驟的特定順序，就此而言，步驟的特定順序不應該解釋為對權利要求的限定。涉及本發(fā)明的方法的權利要求不成該限于書寫順序的步驟的性能，并且本領域的技術人員可以容易理解這些步驟可以改變，并且仍然保持在本發(fā)明的精神和范圍內。