專利名稱:Hiv-1抑制劑吡咯酮衍生物及其合成方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及的二氫吡咯-2-酮衍生物在合成化學(xué)、工業(yè)與醫(yī)藥等方面有廣泛的用途。二氫吡咯-2-酮衍生物是合成不同結(jié)構(gòu)類型吡咯的中間體,譬如,其可被還原成四氫吡咯酮(Tetrahedron 2006,62,6018-6028;J.Org.Chem.1987,52,4352;US Patent6,784,167 B2,2004;Tetrahedron Lett.2005,46,1525.J.Med.Chem.1993,36,1041-1047)。由于吡咯酮具有很好的水溶性和生物相容性,還常用于生物材料、助溶劑、穩(wěn)定劑等高分子材料的合成,如具有廣泛用途的聚乙烯吡咯酮的合成。除此之外,二氫吡咯-2-酮衍生物還具有廣泛的生物活性,除了前面提到的具有抑制HIV-1PR的活性外,還可作為殺蟲劑(DE patent 102004053191,2006);治療癌癥、細(xì)菌感染的DNA旋轉(zhuǎn)酶(gyrase)抑制劑(WO patent 054102,2006);治療多種腫瘤的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(Vascularendothelial growth factor receptors,VEGF-Rs)抑制劑(J.Med.Chem.2008,51,3814-3824);以及Aurora激酶(Aurora kinase)抑制劑(Bioorg.Med.Chem.Lett.2008,18,1623-1627)。因此高效、環(huán)境友好、經(jīng)濟(jì)地合成該類化合物一直是人們研究的熱點(diǎn)。
本發(fā)明涉及的合成二氫吡咯-2-酮衍生物的方法是四組份法。雖然合成二氫吡咯-2-酮衍生物的方法很多,有多步反應(yīng)法(J.Med.Chem.2008,51,3814-3824;Tetrahedron2006,62,6018-6028;J.Med.Chem.1993.36,1041-1047)、二組份法(Tetrahedron2007,63,461-468;Eur.J.Org.Chem.2006,2843-2850;Tetrahedron 2003,59,8499-8507)、三組分法(Tetrahedron 2008,64,5221-5225;Bioorg.Med.Chem.2007,15,5487-5492;Eur.J.Org.Chem.2006,2843-2850;Tetrahedron 2006,62,6018-6028),但卻沒有用四組份法合成該類化合物的報(bào)道。目前,在合成化學(xué)方面,多組分法越來越受到人們的青睞(J.Am.Chem.Soc.2006,128,11040-11041;Angew.Chem.Int.Ed.2007,46,2295-2298;Angew.Chem.Int.Ed.2007,46,2485-2488;Angew.Chem.Int.Ed.2007,46,3291-3295),因?yàn)橥ㄟ^該方法可簡(jiǎn)便高效地實(shí)現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)物的多樣性。多組分法具有組合化學(xué)的某些特性,在新藥開發(fā)和研究中具有極大的優(yōu)越性和應(yīng)用價(jià)值。此外,本發(fā)明涉及的合成方法制備的化合物是一類含有α-和β-氨基酸結(jié)構(gòu)的二氫吡咯-2-酮化合物,即4-氨基-5-氧-二氫吡咯-3-羧酸酯衍生物。有關(guān)該類化合物的合成方法很少(Syn.Comm.,2005,35(18),2453-2466;Heterocycles 2005,65(10),2451-2459;Syn.Comm.2003,33(13),2235-2241;J.Het.Chem.1975,12(3),585-8;J.Org.Chem.1963,28,1332-6),且都是由兩組分法合成,即由相應(yīng)的4-羥基或4-羰基-5-氧-二氫吡咯-3-羧酸酯衍生物與胺反應(yīng)生成4-氨基-5-氧-二氫吡咯-3-羧酸酯衍生物。由于原料不易合成,導(dǎo)致產(chǎn)物種類受到限制。更重要的是,本發(fā)明涉及的新型4-氨基-5-氧-二氫吡咯-3-羧酸酯系列化合物在體外活性實(shí)驗(yàn)中,顯示出顯著的抗HIV-1的活性。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn),提供一種HIV-1抑制劑吡咯酮衍生物,該類化合物可有效地與HIV-1跨膜糖蛋白亞基gp41作用,從而阻止病毒進(jìn)入靶細(xì)胞,保護(hù)免疫細(xì)胞不被HIV-1感染。該類化合物的活性比單純N-取代吡咯化合物高。
本發(fā)明的另一目的是提供合成該吡咯酮衍生物的方法以及應(yīng)用,該合成方法是首次采用四組分法合成(I)的方法,實(shí)驗(yàn)原料易得,實(shí)驗(yàn)步驟簡(jiǎn)單易行,可高效簡(jiǎn)便地實(shí)現(xiàn)目標(biāo)分子的多樣性,彌補(bǔ)了現(xiàn)有的合成方法存在的原料難合成及產(chǎn)率低的不足。
本發(fā)明提供的新型吡咯酮衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽為
式中 R1、R2和R3為氫、直鏈或支鏈烷基、取代烷基、環(huán)烷基、芳基、取代芳基或雜環(huán)基; R4為氫、直鏈或支鏈烷基、取代烷基、環(huán)烷基、芳基、取代芳基或雜環(huán)基; R5為氫、烷基或芳香基。
R1、R2和R3為氫、直鏈或支鏈烷基、取代烷基、環(huán)烷基、芳基、取代芳基或雜環(huán)基; R4為氫、直鏈或支鏈烷基、取代烷基、環(huán)烷基、芳基、取代芳基或雜環(huán)基; R5為取代或無取代或含雜原子的芳香基、氫或C1-4烷基。
R1、R2和R3為氫、C1-4直鏈或支鏈烷基、羥基取代烷基、鹵素取代烷基、羧基取代烷基、烷氧?;〈榛?、C5-6環(huán)烷基、芐基、苯基、取代芳基或雜環(huán)基; R4為氫、C1-4直鏈或支鏈烷基,羥基取代烷基、鹵素取代烷基、C5-6環(huán)烷基、芐基、苯基、C1-3烷基取代芳基、烷氧基取代芳基、鹵素取代芳基、硝基取代芳基、烷氧?;〈蓟被酋;〈蓟螂s環(huán)基。
R1和R2為C1-4直鏈或支鏈烷基,羥基取代烷基、鹵素取代烷基、C5-6環(huán)烷基或芐基; R3為C1-3烷基、烷氧基取代芳基、鹵素取代芳基、硝基取代芳基、氨磺?;〈蓟?; R4為氫。
R1和R2為C1-3烷基、烷氧基取代芳基、鹵素取代芳基、硝基取代芳基或氨磺?;〈蓟? R3為C1-4直鏈或支鏈烷基,羥基取代烷基、鹵素取代烷基、C5-6環(huán)烷基或芐基; R4為C1-4直鏈或支鏈烷基,羥基取代烷基、鹵素取代烷基、C5-6環(huán)烷基、芐基、苯基、C1-3烷基取代芳基、烷氧基取代芳基、鹵素取代芳基、硝基取代芳基、烷氧酰基取代芳基、氨磺?;〈蓟螂s環(huán)基。
優(yōu)選的化合物是R1、R2和R3為氫、C1-4直鏈或支鏈烷基、羥基取代烷基、鹵素取代烷基、羧基取代烷基、烷氧酰基取代烷基、C5-6環(huán)烷基、芐基、苯基、取代芳基或雜環(huán)基; R4為氫、C1-4直鏈或支鏈烷基,羥基取代烷基、鹵素取代烷基、C5-6環(huán)烷基、芐基、苯基、C1-3烷基取代芳基、烷氧基取代芳基、鹵素取代芳基、硝基取代芳基、烷氧?;〈蓟?、氨磺酰基取代芳基或雜環(huán)基。
R1和R2為C1-4直鏈或支鏈烷基,羥基取代烷基、鹵素取代烷基、C5-6環(huán)烷基或芐基,R3為C1-3烷基、烷氧基取代芳基、鹵素取代芳基、硝基取代芳基或氨磺?;〈蓟籖4為氫。
R1和R2為C1-3烷基、烷氧基取代芳基、鹵素取代芳基、硝基取代芳基或氨磺?;〈蓟?,R3為C1-4直鏈或支鏈烷基,羥基取代烷基、鹵素取代烷基、C5-6環(huán)烷基或芐基,R4為C1-4直鏈或支鏈烷基,羥基取代烷基、鹵素取代烷基、C5-6環(huán)烷基、雜環(huán)基、芐基、苯基、C1-3烷基取代芳基、烷氧基取代芳基、鹵素取代芳基、硝基取代芳基、烷氧?;〈蓟虬被酋;〈蓟?。
本發(fā)明的代表性化合物如下所述 2,5-二氫-1-芐基-4-(芐氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl1-benzyl-4-(benzylamino)-2,5-dihydro-5-oxo-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物1)、 2,5-二氫-1-苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2,5-dihydro-5-oxo-1-phenyl-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物2)、 2,5-二氫-1-對(duì)甲苯基-4-(對(duì)甲基苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(p-tolylamino)-2,5-dihydro-5-oxo-1-p-tolyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物3)、 2,5-二氫-1-對(duì)氟苯基-4-(對(duì)氟苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(4-fluorophenylamino)-1-(4-fluorophenyl)-2,5-dihydro-5-oxo-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物4)、 2,5-二氫-1-對(duì)溴苯基-4-(對(duì)溴苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(4-bromophenylamino)-1-(4-bromophenyl)-2,5-dihydro-5-oxo-lH-pyrrole-3-carboxylate,化合物5)、 2,5-二氫-1-苯基-4-(芐氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(benzylamino)-2,5-dihydro-5-oxo-1-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物6)、 2,5-二氫-1-苯基-4-(丙氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2,5-dihydro-5-oxo-1-phenyl-4-(propylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物7)、 2,5-二氫-1-苯基-4-(環(huán)己氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(cyclohexylamino)-2,5-dihydro-5-oxo-1-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物8)、 2,5-二氫-1-對(duì)硝基苯基-4-(環(huán)己氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(cyclohexylamino)-2,5-dihydro-1-(4-nitrophenyl)-5-oxo-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物9)、 2,5-二氫-1-芐基-2-苯基-4-(芐氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl1-benzyl-4-(benzylamino)-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物10)、 2,5-二氫-1-丙基-2-苯基-4-(丙氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-1-propyl-4-(propylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物11)、 2,5-二氫-1-甲基-2-苯基-4-(甲氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2,5-dihydro-1-methyl-4-(methylamino)-5-oxo-2-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物12)、 2,5-二氫-1-丁基-2-苯基-4-(丁氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl1-butyl-4-(butylamino)-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物13)、 2,5-二氫-1-對(duì)甲苯基-2-苯基-4-(對(duì)甲苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(p-tolylamino)-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-1-p-tolyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物14)、 2,5-二氫-1-對(duì)氟苯基-2-苯基-4-(對(duì)氟苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(4-fluorophenylamino)-1-(4-fluorophenyl)-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物15)、 2,5-二氫-1-芐基-2-苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl1-benzyl-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物16)、 2,5-二氫-1-環(huán)己基-2-苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl1-cyclohexyl-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物17)、 2,5-二氫-1-正丁基-2-苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl1-butyl-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物18)、 2,5-二氫-1-羥乙基-2-苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2,5-dihydro-1-(2-hydroxyethyl)-5-oxo-2-phenyl-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物19)、 2,5-二氫-1-羥乙基-2-苯基-4-(對(duì)甲基苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(p-tolylamino)-2,5-dihydro-1-(2-hydroxyethyl)-5-oxo-2-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物20)、 2,5-二氫-1-芐基-2-苯基-4-(對(duì)氟苯基氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(4-fluorophenylamino)-1-benzyl-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物21)、 2,5-二氫-1-羥乙基-2-對(duì)氟苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2-(4-fluorophenyl)-2,5-dihydro-1-(2-hydroxyethyl)-5-oxo-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物22)、 2,5-二氫-1-苯基-2-對(duì)碘苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2,5-dihydro-2-(4-iodophenyl)-5-oxo-1-phenyl-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物23)、 2,5-二氫-1-羥乙基-2-對(duì)羥基苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2,5-dihydro-1-(2-hydroxyethyl)-2-(4-hydroxyphenyl)-5-oxo-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物24)、 2,5-二氫-1-羥乙基-2-甲基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2,5-dihydro-1-(2-hydroxyethyl)-2-methyl-5-oxo-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物25)、 2,5-二氫-1-環(huán)己基-2-甲基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl1-cyclohexyl-2,5-dihydro-2-methyl-5-oxo-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物26)、 2,5-二氫-1-羥乙基-2-丁基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2-butyl-2,5-dihydro-1-(2-hydroxyethyl)-5-oxo-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物27)、 2,5-二氫-1-環(huán)己基-2-苯基-4-(對(duì)硝基苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(4-nitrophenylamino)-1-cyclohexyl-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物28)、 2,5-二氫-1-環(huán)己基-2-苯基-4-苯氨基-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸甲酯(methyl1-cyclohexyl-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物29)和 2,5-二氫-1-苯基-4,4-(二丁氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(dibutylamino)-2,5-dihydro-5-oxo-1-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate化合物30)。
化合物(I)的合成方法一,其反應(yīng)式是
(其中R1、R2、R3和R5如權(quán)利要求4所述,R4為氫)。
以下以摩爾份數(shù)計(jì); (1)在4份有機(jī)溶劑中加入1份化合物(1)和1份化合物(2),0~60℃下攪拌10分鐘~1小時(shí); (2)在步驟(1)的反應(yīng)液中加入1~4份化合物(3),加入0~4份的酸,反應(yīng)溫度20~100℃,攪拌1~5小時(shí); (3)在步驟(2)的反應(yīng)液中加入1~4份化合物(4),加入0~4份的酸,反應(yīng)溫度20~100℃,攪拌1~5小時(shí),可以適當(dāng)選擇結(jié)晶、重結(jié)晶、硅膠色譜法、制備型HPLC等常用方法分離純化。
所述有機(jī)溶劑包括醇、苯、甲苯、己烷、鹵代烴、醚、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、乙腈中的一種或幾種; 所述酸包括硫酸、鹽酸、苯磺酸或醋酸。
合成方法二的反應(yīng)式為
(其中R1、R2、R3和R5如權(quán)利要求5所述,R4為C1-4直鏈或支鏈烷基,羥基或鹵素取代烷基、C5-6環(huán)烷基、芐基、苯基、C1-3烷基、烷氧基取代芳基、鹵素取代芳基、硝基取代芳基、烷氧?;〈蓟被酋;〈蓟螂s環(huán)基)。
化合物(I)的合成方法二是 以下以摩爾份數(shù)計(jì); (1)在2份有機(jī)溶劑中加入1份化合物(1)和1份化合物(2),0~60℃下攪拌10分鐘到1小時(shí); (2)在2份有機(jī)溶劑中加入1~4份化合物(3)、1~4份化合物(4),加入0~4份的酸或堿,反應(yīng)溫度20~100℃,攪拌10分鐘到5小時(shí); (3)將步驟(1)和(2)的反應(yīng)液混合,20~100℃下攪拌5~20小時(shí),可以適當(dāng)選擇結(jié)晶、重結(jié)晶、硅膠色譜法、制備型HPLC等常用方法分離純化。
所述酸包括鹽酸、苯磺酸或醋酸; 所述堿包括三乙胺、碳酸鉀或碳酸鈉; 所述有機(jī)溶劑包括醇、苯、甲苯、己烷、鹵代烴、醚、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、乙腈中的一種或幾種。
所述的吡咯酮衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽在制備抗艾滋病藥物中的應(yīng)用。
圖1為化合物8的分子結(jié)構(gòu)單晶衍射圖, 圖2為化合物17的分子結(jié)構(gòu)單晶衍射圖, 圖3為HL2/3細(xì)胞, 圖4為HeLa-CD4-LTR-β-gal細(xì)胞, 圖5為融合的HL2/3細(xì)胞和HeLa-CD4-LTR-β-gal細(xì)胞顯示了蘭斑的形成, 圖6為陽性藥物T-20 圖7為NB-2抑制細(xì)胞融合的活性, 圖8為部分化合物抑制細(xì)胞融合的活性, 圖9為化合物14抑制gp41六螺旋束結(jié)構(gòu)形成的活性(以NB-2作為陽性化合物對(duì)照), 圖10為化合物14抑制gp41六螺旋束結(jié)構(gòu)形成的活性(以HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑AZT,即Azidothymidine,作為陰性化合物對(duì)照), 圖11為化合物22與gp41對(duì)接圖。
具體實(shí)施例方式 以下將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步地詳細(xì)說明,但是本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于實(shí)施例表示的范圍。
實(shí)施例1 2,5-二氫-1-芐基-4-(芐氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl1-benzyl-4-(benzylamino)-2,5-dihydro-5-oxo-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物1) 方法一 步驟1 將1mmol(170mg)的丁炔二酸二乙酯、1mmol(107mg)的芐胺依次加入到4mL乙醇溶液中,室溫下攪拌20min,得到中間體(5)(2-芐氨基丁烯二酸二乙酯)的反應(yīng)液。
步驟2 將1.5mmol(160mg)的芐胺和1mmol(60mg)乙酸加入到上述含中間體(5)的反應(yīng)液中,20℃下,反應(yīng)5h,得到含中間體(6)(3-芐氨?;?3-芐氨基丙烯酸乙酯)的反應(yīng)液。
步驟3 將2mmol(200mg)的30%的甲醛水溶液和60mg的乙酸加入到上述含中間體(6)的反應(yīng)液中,60℃下,反應(yīng)3h,用制備薄層析板分離產(chǎn)物,展開劑為正己烷+乙酸乙酯(10:1),洗脫劑為乙酸乙酯,用真空旋蒸法除去溶劑得301mg的2,5-二氫-1-芐基-4-(芐氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(化合物1)。
產(chǎn)率86%,黃色粘稠物;IR(KBr)vmax=3447,2986,1773,1691,1635,1452,1324,1290,1137,770,711cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=7.38-7.27(m,10H),5.15(s,1H),5.13(s,1H),4.66(s,2H),4.17(q,J=7.2Hz,2H),3.89(s,2H),1.25(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=165.6,165.4,139.6,136.5,128.8,128.6,128.2,127.8,127.5,127.3,98.3,59.6,47.0,46.7,46.4,14.4ppm.MS(ESI)m/z 351(M+H+,42),305(100);Anal.Calcd for C21H22N2O3:C,71.98;H,6.33;N,7.99;FoundC,71.96;H,6.43;N,7.92. 化合物2-9、30使用方法一制備 實(shí)施例2 2,5-二氫-1-苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2,5-dihydro-5-oxo-1-phenyl-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物2) 方法一 步驟1 將1mmol(170mg)的丁炔二酸二乙酯、1mmol(93mg)的苯胺依次加入到4mL甲苯溶液中,室溫下攪拌10min,得到含中間體(5)(2-苯氨基丁烯二酸二乙酯)的反應(yīng)液。
步驟2 將1mmol(93mg)的苯胺加入到上述含中間體(5)的反應(yīng)液中,100℃下,反應(yīng)1h,得到含中間體(6)(3-苯氨?;?3-苯氨基丙烯酸乙酯)的反應(yīng)液。
步驟3 將1mmol(100mg)的30%的甲醛水溶液和1mmol(60mg)的乙酸加入到上述含中間體(6)的反應(yīng)液中,100℃下,反應(yīng)1h,用制備薄層析板分離產(chǎn)物,展開劑為正己烷+乙酸乙酯(10:1),洗脫劑為乙酸乙酯,用真空旋蒸法除去溶劑得290mg的2,5-二氫-1-苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(化合物2)。
產(chǎn)率85%,白色固體,熔點(diǎn)138-140℃;IR(KBr)vmax=3439,2976,1771,1681,1631,1450,1304,1291,1130,780,723cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=7.75-7.73(m,2H),7.40-7.15(m,8H),5.09(s,2H),4.41(s,2H),4.23(q,J=7.2Hz,2H),1.29(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=164.6,139.5,138.8,129.1,128.7,127.5,127.4,125.1,119.5,59.9,48.1,46.8,14.5ppm.MS(ESI)m/z323(M+H+,98),277(100);Anal.Calcd for C19H18N2O3:C,70.79;H,5.63;N,8.69;FoundC,70.96;H,5.53;N,8.51. 實(shí)施例3 2,5-二氫-1-對(duì)甲苯基-4-(對(duì)甲基苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(p-tolylamino)-2,5-dihydro-5-oxo-1-p-tolyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物3) 方法一 步驟1 在0℃下將1mmol(170mg)的丁炔二酸二乙酯、1mmol(107mg)的對(duì)甲基苯胺依次加入到4mL二氯甲烷溶液中,攪拌60min,得到含中間體(5)(2-對(duì)甲苯氨基丁烯二酸二乙酯)的反應(yīng)液。
步驟2 將1.5mmol(160mg)的對(duì)甲基苯胺加入到上述含中間體(5)的反應(yīng)液中,20℃下,反應(yīng)5h,得到含中間體(6)(3-對(duì)甲苯氨?;?3-對(duì)甲苯氨基丙烯酸乙酯)的反應(yīng)液。
步驟3 將3mmol(300mg)的30%的甲醛水溶液和1.5mmol(90mg)的乙酸加入到上述含中間體(6)的反應(yīng)液中,20℃下,反應(yīng)5h,用制備薄層析板分離產(chǎn)物,展開劑為正己烷+乙酸乙酯(10:1),洗脫劑為乙酸乙酯,用真空旋蒸法除去溶劑得301mg的2,5-二氫-1-對(duì)甲苯基-4-(對(duì)甲苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(化合物3)。
產(chǎn)率86%,黃色固體,熔點(diǎn)131-132℃;IR(KBr)vmax=3449,2900,1770,1685,1629,1450,1300,1271,1115,830cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=7.96(s,1H),7.64(d,J=8.4Hz,2H),7.16(d,J=8.4Hz,2H),7.09(d,J=8.4Hz,2H),7.01(d,J=8.4Hz,2H),4.47(s,2H),4.18(q,J=7.2Hz,2H),2.32(s,3H),2.31(S,3H),1.20(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=164.6,163.7,143.2,136.3,136.2,134.7,134.3,129.8,129.6,128.9,122.9,119.3,102.4,65.8,60.2,48.3,30.8,20.9,20.8,15.2,14.2ppm.MS(ESI)m/z 351(M+H+,100),305(76);Anal.Calcd for C21H22N2O3:C,71.98;H,6.33;N,7.99;FoundC,71.90;H,6.45;N,8.02. 實(shí)施例4 2,5-二氫-1-對(duì)氟苯基-4-(對(duì)氟苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(4-fluorophenylamino)-1-(4-fluorophenyl)-2,5-dihydro-5-oxo-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物4) 方法一 步驟1 將1mmol(170mg)的丁炔二酸二乙酯、1mmol(111mg)的對(duì)氟苯胺依次加入到4mLN,N-二甲基甲酰胺溶液中,60℃下攪拌10min,得到含中間體(5)(2-對(duì)氟苯氨基丁二酸二乙酯)的反應(yīng)液。
步驟2 將4mmol(444mg)的對(duì)氟苯胺加入到上述含中間體(5)的反應(yīng)液中,100℃下,反應(yīng)1h,得到含中間體(6)(3-對(duì)氟苯氨?;?3-對(duì)氟苯氨基丙烯酸乙酯)的反應(yīng)液。
步驟3 將4mmol(400mg)的30%的甲醛水溶液和4mmol(240mg)的乙酸加入到上述含中間體(6)的反應(yīng)液中,60℃下,反應(yīng)1h后,加飽和氯化鈉水溶液20mL,用二氯甲烷20mL萃取,重復(fù)三次,合并的二氯甲烷溶液,再用飽和氯化鈉水溶液20mL萃取,重復(fù)三次,所得二氯甲烷溶液用硫酸鎂干燥,減壓蒸餾除溶劑,再用制備薄層析板純化產(chǎn)物,展開劑為正己烷+乙酸乙酯(10:1),洗脫劑為乙酸乙酯,用真空旋蒸法除去溶劑得312mg的2,5-二氫-1-對(duì)氟苯基-4-(對(duì)氟苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(化合物4)。
產(chǎn)率87%,白色固體,熔點(diǎn)172-173℃;IR(KBr)vmax=3445,2968,1779,1656,1621,1450,1304,1267,1132,801cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=7.72(s,1H),7.71-7.68(m,2H),7.11-6.96(m,6H),4.48(s,2H),4.21(q,J=7.2Hz,2H),1.24(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=164.6,163.6,161.2(d,J=100Hz,1C),158.8(d,J=104Hz,1C),143.2,134.7,134.5,124.9,124.8,121.2,121.1,116.0,115.7,115.2,115.0,102.9,60.4,48.4,14.2ppm.MS(ESI)m/z 359(M+H+,81),313(100);Anal.Calcd for C19H16 F2N2O3:C,63.68;H,4.50;F,10.60;N,7.82;FoundC,63.75;H,4.71;N,7.78,F(xiàn),10.71. 實(shí)施例5 2,5-二氫-1-對(duì)溴苯基-4-(對(duì)溴苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(4-bromophenylamino)-1-(4-bromophenyl)-2,5-dihydro-5-oxo-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物5) 制備方法同實(shí)施例1 產(chǎn)率89%,白色固體;IR(KBr)vmax=3446,2971,1764,1672,1630,1453,1314,1295,1129,815cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=8.0(s,1H),7.68-6.98(m,8H),4.48(s,2H),4.22(q,J=7.2Hz,2H),1.24(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=164.4,163.6,142.6,137.7,137.6,132.2,131.1,124.3,120.6,118.0,117.6,104.4,60.6,48.1,14.2ppm;MS(ESI)m/z 481(M+H+,30),435(100);Anal.Calcd for C19H16 Br2N2O3C,47.53;H,3.36;Br,33.28;N,5.83;FoundC,47.45;H,3.42;Br,33.31;N,5.79. 實(shí)施例6 2,5-二氫-1-苯基-4-(芐氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(benzylamino)-2,5-dihydro-5-oxo-1-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物6) 制備方法同實(shí)施例1 產(chǎn)率90%,白色固體,熔點(diǎn)130-132℃;IR(KBr)vmax=3413,2936,1761,1685,1637,1455,1324,1271,1120,742,715cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=7.75-7.73(m,2H),7.40-7.15(m,8H),5.09(s,2H),4.41(s,2H),4.22(q,J=7.2Hz,2H),1.29(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=164.6,139.5,138.8,129.1,128.7,127.5,127.4,125.1,119.5,59.9,48.1,46.8,14.5ppm;MS(ESI)m/z 337(M+H+,100),291(49);Anal.Calcd for C20H20 N2O3:C,71.41;H,5.99;N,8.33;FoundC,71.48;H,5.92;N,8.29. 實(shí)施例7 2,5-二氫-1-苯基-4-(丙氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2,5-dihydro-5-oxo-1-phenyl-4-(propylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物7) 制備方法同實(shí)施例1 產(chǎn)率93%,白色固體,熔點(diǎn)78-79℃;IR(KBr)vmax=3449,2986,1776,1683,1531,1324,1261,1120,775,713cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=7.72(d,J=8.0Hz,2H),7.37-7.33(m,2H),7.13(t,J=7.2Hz,1H),4.36(s,2H),4.22(q,J=7.2Hz,2H),3.79(q,J=6.8Hz,2H),1.62-1.57(m,2H),1.30(t,J=7.2Hz,3H),0.95(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13CNMR(100MHz,CDCl3)δ=164.6,138.8,129.0,124.9,119.4,59.7,48.0,44.6,24.5,14.5,11.1ppm;MS(ESI)m/z 289(M+H+,49),243(100);Anal.Calcd for C16H20 N2O3C,66.65;H,6.99;N,9.72;FoundC,66.59;H,6.87;N,9.78. 實(shí)施例8 2,5-二氫-1-苯基-4-(環(huán)己氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(cyclohexylamino)-2,5-dihydro-5-oxo-1-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物8),其分子結(jié)構(gòu)單晶衍射圖見圖1。
制備方法同實(shí)施例1 產(chǎn)率96%,白色固體,熔點(diǎn)107-108℃;IR(KBr)vmax=3431,2986,1778,1651,1511,1304,1290,1110,770,722cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=8.26-8.24(m,2H),8.01-7.98(m,2H),4.55(brs,1H),4.45(s,2H),4.27(q,J=7.2Hz,2H),2.02-1.98(m,2H),1.76-1.61(m,3H),1.43-1.36(m,2H),1.32(t,J=7.2Hz,3H),1.22-1.21(m,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=165.2,164.4,138.8,129.0,128.8,124.8,119.3,96.3,59.6,50.6,48.0,34.7,25.5,24.6,19.1,14.5ppm;MS(ESI)m/z 329(M+H+,100),283(23);Anal.Calcd for C19H24 N2O3:C,69.49;H,7.37;N,8.53;FoundC,69.53;H,7.41;N,8.50. 實(shí)施例9 2,5-二氫-1-對(duì)硝基苯基-4-(環(huán)己氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(cyclohexylamino)-2,5-dihydro-1-(4-nitrophenyl)-5-oxo-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物9) 制備方法同實(shí)施例1 產(chǎn)率85%,黃色固體,熔點(diǎn)149.5-150.5℃;IR(KBr)vmax=3444,2932,2854,1705,1640,1632,1508,1333,1276,1109,939cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=7.69(d,J=8.4Hz,2H),7.33-7.29(m,2H),7.11-7.07(m,1H),4.56(brs,1H),4.31(s,2H),4.19(q,J=7.2Hz,2H),1.99-1.95(m,2H),1.72-1.66(m,3H),1.42-1.32(m,2H),1.27(t,J=7.2Hz,3H),1.21-1.13(m,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=165.2,144.3,143.7,125.0,118.3,60.0,50.7,47.8,34.7,25.4,24.6,24.1,14.5ppm;MS(ESI)m/z 374(M+H+,100),328(23);Anal.Calcd for C19H23 N3O5:C,61.11;H,6.21;N,11.25;FoundC,61.21;H,6.28;N,11.21. 實(shí)施例10 2,5-二氫-1-芐基-2-苯基-4-(芐氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl1-benzyl-4-(benzylamino)-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物10) 方法二 步驟1 將1mmol(170mg)的丁炔二酸二乙酯、1mmol(107mg)的芐胺依次加入到2mL乙醇溶液中,室溫下攪拌20min,得到含中間體(5)(2-芐氨基丁烯二酸二乙酯)的反應(yīng)液。
步驟2 將2mmol(214mg)的芐胺、2mmol(212mg)的苯甲醛加入到2mL乙醇溶液中,室溫下攪拌10min,得含中間體(7)(亞胺)的反應(yīng)液。
步驟3 將步驟1和2的反應(yīng)液混合,40℃下,反應(yīng)10h,用制備薄層析板分離產(chǎn)物,展開劑為正己烷+乙酸乙酯(10:1),洗脫劑為乙酸乙酯,用真空旋蒸法除去溶劑得350mg的2,5-二氫-1-芐基-2-苯基-4-(芐氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(化合物10)。
產(chǎn)率86%,黃色油狀物;IR(KBr)vmax=3448,2987,1775,1632,1602,1528,1353,1277,763,721cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=7.40-7.09(m,15H),5.18(brs,2H),5.13(d,J=14.8Hz,1H),4.89(s,1H),3.98-3.88(m,2H),3.52(d,J=14.8Hz,1H),1.27(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=165.4,139.5,137.1,136.7,128.8,128.4,128.2,128.0,127.7,127.6,127.4,60.9,59.4,43.9,18.5,14.0ppm;MS(ESI)m/z427(M+H+,100),381(30);Anal.Calcd for C27H26N2O3:C,76.03;H,6.14;N,6.57;FoundC,76.15;H,6.18;N,6.63. 化合物11-29采用方法二合成 實(shí)施例11 2,5-二氫-1-丙基-2-苯基-4-(丙氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-1-propyl-4-(propylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物11) 方法二 步驟1 將1mmol(170mg)的丁炔二酸二乙酯、1mmol(59mg)的丙胺依次加入到2mL甲苯溶液中,室溫下攪拌10min,得到含中間體(5)2-芐氨基丁烯二酸二乙酯的反應(yīng)液。
步驟2 將4mmol(118mg)的丙胺、2mmol(212mg)的苯甲醛加入到2mL甲苯溶液中,室溫下攪拌10min,得含中間體(7)(亞胺)的反應(yīng)液。
步驟3 將步驟1和2的反應(yīng)液混合,100℃下,反應(yīng)5h,用制備薄層析板分離產(chǎn)物,展開劑為正己烷+乙酸乙酯(10:1),洗脫劑為乙酸乙酯,用真空旋蒸法除去溶劑得304mg的2,5-二氫-1-丙基-2-苯基-4-(丙氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(化合物11)。
產(chǎn)率92%,黃色油狀物;IR(KBr)vmax=3439,2947,1725,1652,1602,1528,1453,1353,1237,733,711cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=7.29-7.10(m,5H),5.01(s,1H),3.98-3.93(m,2H),3.84(brs,2H),3.61-3.57(m,1H),2.58-2.55(m,1H),1.64-1.40(m,4H),1.02-0.94(m,6H),0.81(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=206.7,165.4,137.7,128.3,127.9,127.7,102.7,65.8,61.7,59.2,44.3,41.9,30.8,24.5,21.3,15.2,14.0,11.2,11.1ppm;MS(ESI)m/z 331(M+H+,100),285(15);Anal.Calcd for C19H26N2O3:C,69.06;H,7.93;N,8.48;FoundC,69.26;H,7.98;N,8.41. 實(shí)施例12 2,5-二氫-1-甲基-2-苯基-4-(甲氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2,5-dihydro-1-methyl-4-(methylamino)-5-oxo-2-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物12) 方法二 步驟1 將1mmol(170mg)的丁炔二酸二乙酯、1mmol(31mg)的甲胺依次加入到2mL二氯甲烷溶液中,0℃下攪拌1h,得到含中間體(5)2-芐氨基丁烯二酸二乙酯的反應(yīng)液。
步驟2 將4mmol(62mg)的甲胺、1mmol(156mg)的苯甲醛加入到2mL二氯甲烷溶液中,室溫下下攪拌0.5小時(shí),得含中間體(7)(亞胺)的反應(yīng)液。
步驟3 將步驟1和2的反應(yīng)液混合,20℃下,反應(yīng)20h,用制備薄層析板分離產(chǎn)物,展開劑為正己烷+乙酸乙酯(10:1),洗脫劑為乙酸乙酯,用真空旋蒸法除去溶劑得229mg的2,5-二氫-1-甲基-2-苯基-4-(甲氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(化合物12)。
產(chǎn)率86%,白色固體,熔點(diǎn)129-131℃;IR(KBr)vmax=3440,2986,1703,1698,1635,1452,1424,1290,1137,1096,1037,920,832cm-1;1HNMR(400MHz,CDCl3)δ=7.30-7.12(m,5H),4.92(s,1H),3.98-3.94(m,2H),3.38(s,3H),2.72(s,3H),1.00(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=165.6,137.5,128.3,128.0,127.6,102.7,63.8,59.2,30.1,27.5,14.0ppm;MS(ESI)m/z 275(M+H+,100),229(40);Anal.Calcd for C15H18N2O3:C,65.68;H,6.61;N,10.21;FoundC,65.61;H,6.65;N,10.12. 實(shí)施例13 2,5-二氫-1-丁基-2-苯基-4-(丁氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl1-butyl-4-(butylamino)-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物13) 方法二 步驟1 將1mmol(170mg)的丁炔二酸二乙酯、1mmol(73mg)的正丁胺依次加入到2mLN,N-二甲基甲酰胺溶液中,室溫下攪拌10min,得到含中間體(5)2-芐氨基丁烯二酸二乙酯的反應(yīng)液。
步驟2 將2mmol(146mg)的正丁胺、1.5mmol(156mg)的苯甲醛加入到2mLN,N-二甲基甲酰胺溶液中,攪拌10min,得含中間體(7)(亞胺)的反應(yīng)液。
步驟3 將步驟1和2的反應(yīng)液混合,40℃下,反應(yīng)10h后,加飽和氯化鈉水溶液20mL,用二氯甲烷20mL萃取,重復(fù)三次,合并的二氯甲烷溶液,再用飽和氯化鈉水溶液20mL萃取,重復(fù)三次,所得二氯甲烷溶液用硫酸鎂干燥,減壓蒸餾除溶劑,再用制備薄層析板純化產(chǎn)物,展開劑為正己烷+乙酸乙酯(10:1),洗脫劑為乙酸乙酯,用真空旋蒸法除去溶劑得313mg的2,5-二氫-1-丁基-2-苯基-4-(丁氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(化合物13)。
產(chǎn)率87%,黃色油狀物;IR(KBr)vmax=3449,2937,1720,1632,1612,1508,1451,1350,1207,782,723cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=7.32-7.13(m,5H),5.03(s,1H),4.01-3.95(m,2H),3.90(brs,2H),3.69-3.65(m,1H),2.60-2.59(m,1H),1.61-1.25(m,8H),1.02(t,J=7.2Hz,3H),0.95(t,J=7.2Hz,3H),0.86(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13CNMR(100MHz,CDCl3)δ=165.3,137.7,128.9,128.5,128.3,127.9,127.7,127.3,102.6,61.6,59.2,42.3,40.0,33.4,30.1,20.0,19.8,14.0,13.8,13.6ppm;MS(ESI)m/z359(M+H+,100),313(35);Anal.Calcd for C21H30N2O3:C,70.36;H,8.44;N,7.81;FoundC,70.29;H,8.51;N,7.78. 實(shí)施例14 2,5-二氫-1-對(duì)甲苯基-2-苯基-4-(對(duì)甲苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(p-tolylamino)-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-1-p-tolyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物14) 方法二 步驟1 將1mmol(170mg)的丁炔二酸二乙酯、1mmol(107mg)的對(duì)甲苯胺依次加入到2mLN,N-二甲基甲酰胺溶液中,室溫下攪拌10min,得到含中間體(5)2-(對(duì)甲苯氨基)丁烯二酸二乙酯的反應(yīng)液。
步驟2 將1mmol(321mg)的對(duì)甲苯胺、4mmol(424mg)的苯甲醛、1mmol(60mg)的乙酸加入到2mLN,N-二甲基甲酰胺溶液中,60℃下攪拌20min,得含中間體(7)(亞胺)的反應(yīng)液。
步驟3 將步驟1和2的反應(yīng)液混合,40℃下,反應(yīng)10h后,加飽和氯化鈉水溶液20mL,用二氯甲烷20mL萃取,重復(fù)三次,合并的二氯甲烷溶液,再用飽和氯化鈉水溶液20mL萃取,重復(fù)三次,所得二氯甲烷溶液用硫酸鎂干燥,減壓蒸餾除溶劑,再用制備薄層析板純化產(chǎn)物,展開劑為正己烷+乙酸乙酯(10:1),洗脫劑為乙酸乙酯,用真空旋蒸法除去溶劑得384mg的2,5-二氫-1-對(duì)甲苯基-2-苯基-4-(對(duì)甲苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(化合物14)。
產(chǎn)率92%,白色固體,熔點(diǎn)150-153℃;IR(KBr)vmax=3432,2983,1709,1632,1515,1290,1211,1110,834,823cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ[ppm]=8.15(brs,1H),7.33-7.16(m,7H),7.11-7.00(m,6H),5.75(s,1H),3.99(q,J=7.2Hz,2H),2.31(s,3H),2.21(s,3H),1.00(t,J=7.2Hz,3H);13C NMR(100MHz,CDCl3)δ[ppm]=164.5,163.9,142.5,137.1,136.0,135.3,134.4,134.0,129.3,129.0,128.3,127.9,127.7,123.0,122.7,108.7,63.1,60.0,20.9,20.8,13.8;MS(ESI)m/z 427(M+H+,80),381(100);Anal.Calcd for C27H26N2O3:C,76.03;H,6.14;N,6.57;FoundC,75.81;H,6.10;N,6.35. 實(shí)施例15 2,5-二氫-1-對(duì)氟苯基-2-苯基-4-(對(duì)氟苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(4-fluorophenylamino)-1-(4-fluorophenyl)-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物15) 方法二 步驟1 將1mmol(170mg)的丁炔二酸二乙酯、1mmol(111mg)的對(duì)氟苯胺依次加入到4mLN,N-二甲基甲酰胺溶液中,60℃下攪拌10min,得到含中間體(5)(2-對(duì)氟苯氨基丁二酸二乙酯)的反應(yīng)液。
步驟2 將2mmol(222mg)的對(duì)氟苯胺、1.5mmol(156mg)的苯甲醛、1mmol(101mg)的三乙胺加入到2mLN,N-二甲基甲酰胺溶液中,100℃下攪拌20min,得含中間體(7)(亞胺)的反應(yīng)液。
步驟3 將步驟1和2的反應(yīng)液混合,40℃下,反應(yīng)10h后,加飽和氯化鈉水溶液20mL,用二氯甲烷20mL萃取,重復(fù)三次,合并的二氯甲烷溶液,再用飽和氯化鈉水溶液20mL萃取,重復(fù)三次,所得二氯甲烷溶液用硫酸鎂干燥,減壓蒸餾除溶劑,再用制備薄層析板純化產(chǎn)物,展開劑為正己烷+乙酸乙酯(10:1),洗脫劑為乙酸乙酯,用真空旋蒸法除去溶劑得348mg的2,5-二氫-1-對(duì)氟苯基-2-苯基-4-(對(duì)氟苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(化合物15) 產(chǎn)率80%,黃色油狀物;IR(KBr)vmax=3465,2984,1709,1632,1511,1456,1289,1221,1158,885,833cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ[ppm]=8.20(brs,1H),7.38-7.34(m,2H),7.23-7.13(m,7H),7.02-6.89(m,4H),5.70(s,1H),4.02(q,J=7.2Hz,2H),1.02(t,J=7.2Hz,3H);13C NMR(100MHz,CDCl3)δ[ppm]=164.5,163.8,161.5,161.4,159.0,142.7,136.5,134.4,132.4,128.5,128.3,127.6,125.1,125.0,124.8,124.7,115.8,115.6,115.3,115.1,109.2,63.4,60.2,13.9;MS(ESI)m/z 435(M+H+,79),389(100);Anal.Calcd for C25H20F2N2O3:C,69.12;H,4.64;N,6.45;FoundC,69.07;H,4.61;N,6.37. 實(shí)施例16 2,5-二氫-1-芐基-2-苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl1-benzyl-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物16) 制備方法同實(shí)施例10 產(chǎn)率87%,黃色油狀物;IR(KBr)vmax=3445,2932,1705,1632,1602,1508,1443,1350,1217,810,754cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=8.28(s,1H),7.36-7.13(m,15H),5.14(d,J=14.8Hz,1H),4.96(s,1H),3.98-3.86(m,2H),3.53(d,J=14.8Hz,1H),0.91(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=164.6,143.0,138.6,136.6,136.4,128.8,128.7,128.6,128.5,128.0,127.7,124.6,122.7,109.6,61.2,60.0,58.5,44.0,18.5,13.8ppm;MS(ESI)m/z 413(M+H+,100),367(35);Anal.Calcd for C26H24N2O3:C,75.71;H,5.86;N,6.79;FoundC,75.83;H,5.89;N,6.81. 實(shí)施例17 2,5-二氫-1-環(huán)己基-2-苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl1-cyclohexyl-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物17),其分子結(jié)構(gòu)單晶衍射圖見圖2。
制備方法同實(shí)施例10 產(chǎn)率95%,白色固體,熔點(diǎn)140-142℃;IR(KBr)vmax=3446,2987,1731,1681,1612,1508,1433,1313,1267,798,743cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=8.09(s,1H),7.33-7.09(m,10H),5.20(s,1H),3.94-3.89(m,2H),3.71-3.65(m,1H),1.76-1.06(m,10H),0.91(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=164.8,164.4,142.7,138.9,138.0,128.3,128.2,128.1,128.0,124.4,122.6,109.7,61.8,59.8,54.3,30.9,30.6,26.0,25.8,25.2,13.8ppm;MS(ESI)m/z 405(M+H+,100),359(95);Anal.Calcd for C25H28N2O3:C,74.23;H,6.98;N,6.93;FoundC,74.28;H,6.87;N,6.97. 實(shí)施例18 2,5-二氫-1-正丁基-2-苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl1-butyl-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物18) 制備方法同實(shí)施例10 產(chǎn)率89%,白色固體,熔點(diǎn)101-102℃;IR(KBr)vmax=3449,2997,1715,1641,1621,1502,1423,1375,1227,803,723cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=8.20(s,1H),7.36-7.10(m,10H),5.17(s,1H),3.98-3.93(m,2H),3.73-3.70(m,1H),2.66-2.65(m,1H),1.48-1.43(m,2H),1.28-1.23(m,2H),0.94(t,J=7.2Hz,3H),0.86(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=164.7,164.5,143.0,138.8,136.8,128.6,128.4,128.3,127.8,124.5,122.6,109.2,62.2,59.9,40.3,30.2,20.0,13.8,13.7ppm;MS(ESI)m/z 379(M+H+,100),333(75);Anal.Calcd for C23H26N2O3:C,72.99;H,6.92;N,7.40;FoundC,72.79;H,6.86;N,7.35. 實(shí)施例19 2,5-二氫-1-羥乙基-2-苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2,5-dihydro-1-(2-hydroxyethyl)-5-oxo-2-phenyl-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物19) 制備方法同實(shí)施例10 產(chǎn)率94%,黃色固體,熔點(diǎn)117-118℃;IR(KBr)vmax=3689,3439,2943,1712,1602,1518,1452,1343,1238,798,745cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=8.22(s,1H),7.34-7.08(m,10H),5.28(s,1H),3.93(q,J=7.2Hz,2H),3.69-3.56(m,3H),3.15(brs,1H),2.94-2.88(m,1H),0.92(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=165.9,164.4,142.7,138.7,136.4,128.6,128.43,128.37,127.8,124.5,122.6,110.1,63.5,60.9,59.95,44.1,13.8ppm;MS(ESI)m/z 367(M+H+,100),321(35);Anal.Calcdfor C21H22N2O4:C,68.84;H,6.05;N,7.65;FoundC,68.76;H,6.13;N,7.58. 實(shí)施例20 2,5-二氫-1-羥乙基-2-苯基-4-(對(duì)甲基苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(p-tolylamino)-2,5-dihydro-1-(2-hydroxyethyl)-5-oxo-2-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物20) 制備方法同實(shí)施例10 產(chǎn)率92%,檸檬色固體,熔點(diǎn)127-128℃;IR(KBr)vmax=3649,3431,2983,1772,1658,1508,1453,1346,1228,815,769cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=8.20(s,1H),7.33-7.01(m,9H),5.26(s,1H),3.96-3.90(m,2H),3.67-3.56(m,3H),3.25(brs,1H),2.91-2.88(m,1H),2.30(s,3H),0.92(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=165.9,164.4,142.7,138.7,136.4,128.6,128.43,128.37,127.8,124.5,122.6,110.1,63.5,60.9,59.95,44.1,13.8ppm;MS(ESI)m/z 381(M+H+,100),335(53);Anal.Calcd for C22H24N2O4:C,69.46;H,6.36;N,7.36;FoundC,69.53;H,6.41;N,7.39. 實(shí)施例21 2,5-二氫-1-芐基-2-苯基-4-(對(duì)氟苯基氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(4-fluorophenylamino)-1-benzyl-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物21) 制備方法同實(shí)施例10 產(chǎn)率89%,黃色固體,熔點(diǎn)174-176℃;IR(KBr)vmax=3439,2983,1772,1632,1558,1412,1383,1243,934,765cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=7.35-7.01(m,10H),5.19(d,J=14.8Hz,1H),4.88-4.84(m,5H),4.08-4.03(m,2H),3.54(d,J=14.8Hz,1H),1.05(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=165.2,163.7,157.4,136.3,134.5,128.8,128.5,127.90,127.86,127.5,122.3,113.3,60.0,59.7,44.0,13.8ppm;MS(ESI)m/z431(M+H+,100),385(63);Anal.Calcd for C26H23FN2O3:C,72.54;H,5.39;F,4.41;N,6.51;FoundC,72.58;H,5.43;F,4.47;N,6.60. 實(shí)施例22 2,5-二氫-1-羥乙基-2-對(duì)氟苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2-(4-fluorophenyl)-2,5-dihydro-1-(2-hydroxyethyl)-5-oxo-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物22) 制備方法同實(shí)施例10 產(chǎn)率93%,黃色固體,熔點(diǎn)134-135℃;IR(KBr)vmax=3689,3439,2943,1712,1602,1518,1452,1343,1238,798,745cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=8.21(brs,1H),7.28-6.98(m,9H),5.27(s,1H),3.96-3.91(m,2H),3.68-3.57(m,3H),2.91-2.86(m,2H),0.93(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=165.8,164.3,163.9,161.4,142.7,138.6,132.2,129.6,129.5,128.4,124.6,122.6,115.7,115.5,109.7,62.7,60.9,60.0,43.9,13.8ppm;MS(ESI)m/z 385(M+H+,100),339(30);Anal.Calcdfor C21H21FN2O4:C,65.62;H,5.51;F,4.94;N,7.29;FoundC,65.69;H,5.48;F,4.97;N,7.35. 實(shí)施例23 2,5-二氫-1-苯基-2-對(duì)碘苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2,5-dihydro-2-(4-iodophenyl)-5-oxo-1-phenyl-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物23) 制備方法同實(shí)施例10 產(chǎn)率60%,黃色固體;IR(KBr)vmax=3449,2973,1777,1638,1550,1452,1363,1273,914,745cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=8.18(s,1H),7.44-7.16(m,14H),5.79(s,1H),4.00(q,J=7.2Hz,2H),0.99(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=164.3,163.9,163.6,161.1,142.0,138.6,136.3,132.6,129.3,128.7,128.5,125.8,124.7,122.9,122.8,115.6,115.5,115.3,109.4,62.5,60.2,13.8ppm;MS(ESI)m/z493(M+H+,100),447(70);Anal.Calcd for C25H21IN2O3:C,57.26;H,4.04;I,24.20;N,5.34;FoundC,57.31;H,4.12;I,24.27;N,5.42. 實(shí)施例24 2,5-二氫-1-羥乙基-2-對(duì)羥基苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2,5-dihydro-1-(2-hydroxyethyl)-2-(4-hydroxyphenyl)-5-oxo-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物24) 制備方法同實(shí)施例10 產(chǎn)率92%,黃色固體,熔點(diǎn)117-119℃;IR(KBr)vmax=3618,3430,2988,1762,1635,1568,1442,1380,1273,944,810cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=8.27(s,1H),7.36-7.10(m,9H),5.33(s,1H),3.96(q,J=7.2Hz,2H),3.74-3.68(m,1H),3.63-3.57(m,2H),3.22(brs,1H),2.94-2.88(m,1H),0.94(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=165.9,164.4,142.7,138.8,136.5,128.6,128.4,127.9,124.4,122.5,110.1,63.4,60.8,60.0,43.9,13.8ppm;MS(ESI)m/z 383(M+H+,100),337(40);Anal.Calcd for C21H22N2O5:C,65.96;H,5.80;N,7.33;FoundC,65.91;H,5.76;N,7.28. 實(shí)施例25 2,5-二氫-1-羥乙基-2-甲基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2,5-dihydro-1-(2-hydroxyethyl)-2-methyl-5-oxo-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物25) 制備方法同實(shí)施例10 產(chǎn)率98%,橙色油狀物;IR(KBr)vmax=3615,3430,2981,1752,1642,1551,1432,1373,1283,810,723cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=8.12(s,1H),7.26-7.22(m,2H),7.08-7.05(m,3H),4.31(q,J=6.4Hz,1H),4.17-4.11(m,2H),3.80-3.71(m,3H),3.33-3.29(m,1H),2.80(brs,1H),1.41(d,J=6.4Hz,3H),1.15(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=165.4,164.9,142.8,138.8,128.3,124.3,122.5,110.6,61.3,60.1,55.2,43.8,17.9,14.1ppm;MS(ESI)m/z 305(M+H+,5),359(100);Anal.Calcd for C16H20N2O4:C,63.14;H,6.62;N,9.20;FoundC,63.21;H,6.71;N,9.32. 實(shí)施例26 2,5-二氫-1-環(huán)己基-2-甲基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl1-cyclohexyl-2,5-dihydro-2-methyl-5-oxo-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物26) 制備方法同實(shí)施例10 產(chǎn)率92%,黃色固體,熔點(diǎn)138-139℃;IR(KBr)vmax=3413,2973,1779,1630,1550,1418,1363,1273,789,734m-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=7.80(s,1H),7.29-7.25(m,2H),7.10-7.06(m,3H),4.30(q,J=6.4Hz,1H),4.13(q,J=7.2Hz,2H),3.70-3.65(m,1H),1.91-1.31(m,13H),1.14(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=164.8,164.1,142.8,139.1,128.2,124.2,122.4,109.5,59.9,54.2,54.0,31.1,30.4,26.1,25.9,25.4,19.9,14.1ppm;MS(ESI)m/z 343(M+H+,30),297(100);Anal.Calcdfor C20H26N2O3:C,70.15;H,7.65;N,8.18;FoundC,70.21;H,7.59;N,8.22. 實(shí)施例27 2,5-二氫-1-羥乙基-2-丁基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl2-butyl-2,5-dihydro-1-(2-hydroxyethyl)-5-oxo-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物27) 制備方法同實(shí)施例10 產(chǎn)率60%,橙色油狀物;IR(KBr)vmax=3685,3449,2973,1778,1636,1548,1415,1387,1263,760,734cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=8.12(s,1H),7.68-7.66(m,2H),7.50-7.48(m,3H),4.45(t,J=3.2Hz,1H),4.17-4.09(m,2H),3.84-3.77(m,1H),3.72-3.69(m,2H),3.21-3.15(m,1H),2.17-2.08(m,1H),1.86-1.77(m,1H),1.27-1.20(m,2H),1.30(t,J=7.2Hz,3H),0.98-0.88(m,2H),0.83(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=166.0,164.8,143.2,139.0,128.3,124.2,122.3,108.5,61.0,60.1,58.6,43.7,28.2,23.6,22.5,14.1,13.9ppm;MS(ESI)m/z 347(M+H+,100),301(32);Anal.Calcd for C19H26N2O4:C,65.87;H,7.56;N,8.09;FoundC,65.79;H,7.61;N,8.02. 實(shí)施例28 2,5-二氫-1-環(huán)己基-2-苯基-4-(對(duì)硝基苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(4-nitrophenylamino)-1-cyclohexyl-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物28) 方法二 步驟l 將1mmol(170mg)的丁炔二酸二乙酯、1mmol(138mg)的對(duì)硝基苯胺依次加入到2mL二氯甲烷溶液中,60℃下攪拌1h,得到含中間體(5)2-(對(duì)硝基苯氨基)丁烯二酸二乙酯的反應(yīng)液。
步驟2 將1mmol(99mg)的環(huán)己胺、1mmol(106mg)的苯甲醛加入到2mL二氯甲烷溶液中,攪拌10min,得含中間體(7)(亞胺)的反應(yīng)液。
步驟3 將步驟1和2的反應(yīng)液混合,40℃下,反應(yīng)10h,用制備薄層析板分離產(chǎn)物,展開劑為正己烷+乙酸乙酯(4:1),洗脫劑為乙酸乙酯,用真空旋蒸法除去溶劑得405mg的2,5-二氫-1-環(huán)己基-2-苯基-4-(對(duì)硝基苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(化合物28)。
產(chǎn)率88%,黃色固體,熔點(diǎn)160-161℃;IR(KBr)vmax=3443,2932,2854,1705,1632,1517,1458,1340,1263,1110,851,762cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=8.48(s,1H),8.18-8.15(m,2H),7.35-7.22(m,7H),5.25(s,1H),4.02-3.96(m,2H),3.68(t,J=3.2Hz,1H),1.78-1.52(m,7H),1.19-1.12(m,3H),0.98(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=165.2,144.3,143.7,125.0,118.2,60.0,50.7,47.8,34.7,25.4,24.6,24.1,14.5ppm;MS(ESI)m/z 450(M+H+,100),404(60);Anal.Calcd for C25H27N3O5:C,66.80;H,6.05;N,9.35;FoundC,66.83;H,6.12;N,9.23. 實(shí)施例29 2,5-二氫-1-環(huán)己基-2-苯基-4-苯氨基-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸甲酯(methyl1-cyclohexyl-2,5-dihydro-5-oxo-2-phenyl-4-(phenylamino)-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物29) 制備方法同實(shí)施例10 產(chǎn)率92%,白色固體,熔點(diǎn)175.5-176.5;IR(KBr)vmax=3441,2978,1770,1612,1551,1452,1373,1273,769,734cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=8.08(s,1H),7.33-7.09(m,10H),5.19(s,1H),3.69-3.63(m,1H),3.43(s,1H),1.79-1.48(m,6H),1.16-0.94(m,4H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=164.8,164.6,142.8,138.8,137.9,128.3,128.2,127.9,124.5,122.8,109.2,61.8,54.3,50.9,30.9,30.6,26.0,25.8,25.2ppm;MS(ESI)m/z 391(M+H+,100),359(40);Anal.Calcd for C24H26N2O3:C,73.82;H,6.71;N,7.17;FoundC,73.69;H,6.83;N,7.23. 實(shí)施例30 2,5-二氫-1-苯基-4,4-(二丁氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯(ethyl4-(dibutylamino)-2,5-dihydro-5-oxo-1-phenyl-1H-pyrrole-3-carboxylate,化合物30) 制備方法同實(shí)施例1 產(chǎn)率90%,黃色油狀物;IR(KBr)vmax=3449,2953,1762,1630,1551,1432,1373,1283,825,764cm-1;1H NMR(400MHz,CDCl3)δ=8.48(s,1H),8.18-8.15(m,2H),7.35-7.22(m,7H),5.25(s,1H),4.02-3.96(m,2H),3.68(t,J=3.2Hz,1H),1.78-1.52(m,7H),1.19-1.12(m,3H),0.98(t,J=7.2Hz,3H)ppm;13C NMR(100MHz,CDCl3)δ=166.1,162.8,147.2,139.0,129.0,124.8,119.6,103.7,59.9,51.2,49.0,30.4,20.0,14.6,14.0ppm;MS(ESI)m/z 359(M+H+,100),313(15);Anal.Calcd for C21H30N2O3:C,70.36;H,8.44;N,7.81;FoundC,70.25;H,8.51;N,7.90. 以下用細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)方法來評(píng)估根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案的方法制備的化合物對(duì)HIV-1的融合抑制活性,用酶聯(lián)免疫吸附分析(Enzyme-linked immunoadsorbant assay,ELISA)和天然凝膠電泳分析(Native-PAGE)等方法探討活性化合物抑制gp41六螺旋束核心結(jié)構(gòu)形成的作用機(jī)制。
實(shí)施例31 細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)方法 采用HL2/3細(xì)胞(圖3)與HeLa-CD4-LTR-β-gal細(xì)胞(圖4)共育,以β-半乳糖苷酶活性為指標(biāo)的定量檢測(cè)HIV誘導(dǎo)的細(xì)胞融合抑制活性的非感染性方法。HL2/3細(xì)胞能穩(wěn)定高效表達(dá)HIV Gag,Env,Tat,Rev和Nef蛋白,但不表達(dá)HIV逆轉(zhuǎn)錄酶,也不能檢測(cè)到成熟的病毒顆粒。HeLa-CD4-LTR-β-gal細(xì)胞能穩(wěn)定表達(dá)HIV的受體CD4和HIV LTR啟動(dòng)的β-半乳糖苷酶。當(dāng)HL2/3細(xì)胞與HeLa-CD4-LTR-β-gal細(xì)胞共育時(shí),二者的細(xì)胞膜在HIV gp120/gp41的介導(dǎo)下發(fā)生融合,HL2/3細(xì)胞表達(dá)的Tat釋放到HeLa-CD4-LTR-β-gal細(xì)胞中,能與LTR結(jié)合,啟動(dòng)β-半乳糖苷酶的表達(dá)。通過檢測(cè)細(xì)胞中β-半乳糖苷酶的活性,可以判斷HIV包膜蛋白誘導(dǎo)的膜融合作用。該方法可以用來檢測(cè)化合物抑制HIV包膜蛋白誘導(dǎo)的膜融合的活性,表明該活性化合物能抑制HIV進(jìn)入靶細(xì)胞,如圖5。
HL2/3細(xì)胞(2×105/孔)能高水平的表達(dá)Gag,Env,Tat,Rev,Nef等蛋白。實(shí)驗(yàn)時(shí)HL2/3細(xì)胞先與樣品化合物于96孔板中37℃孵育30分鐘,然后再加Hela-CD4-LTR/β-gal細(xì)胞(2×105/孔)混合,于37℃共孵育48小時(shí),然后做β-gal染色,倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)蘭斑數(shù)目?;衔镆种坡?%)=[1-(E-N)/(P-N)]×100,其中‘E’代表了實(shí)驗(yàn)組中細(xì)胞融合的數(shù)目,‘P’代表陽性也就是不加藥物組中細(xì)胞融合的數(shù)目,‘N’代表陰性對(duì)照組中細(xì)胞融合的數(shù)目?;衔锏陌霐?shù)抑制濃度(IC50)作為化合物抗病毒活性的指標(biāo),通過Calcusyn軟件計(jì)算得出,如圖6、圖7。
化合物2、6、10、14、19、21的活性實(shí)驗(yàn)表明,各化合物均有一定的抑制HIV-1包膜蛋白誘導(dǎo)的細(xì)胞融合的作用。除化合物19、21外,其它化合物的半數(shù)抑制濃度(IC50)小于25μg/ml。
實(shí)施例32 酶聯(lián)免疫吸附分析法(Enzyme-linked immunoadsorbant assay,ELISA) 在HIV的感染過程中,首先是HIV包被膜與靶細(xì)胞的細(xì)胞膜發(fā)生融合。HIV與靶細(xì)胞融合主要由包被糖蛋白gp120和跨膜亞基gp41介導(dǎo)。gp120與靶細(xì)胞上的CD4分子和輔助受體(趨化因子受體CCR5或CXCR4等)先后結(jié)合,導(dǎo)致gp41的構(gòu)型發(fā)生改變,形成六螺旋束核心結(jié)構(gòu),將病毒包膜與靶細(xì)胞膜拉近并發(fā)生融合,完成病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞的感染過程。因此,抑制融合過程中的任何一個(gè)環(huán)節(jié),就能抑制HIV進(jìn)入靶細(xì)胞,從而預(yù)防和治療HIV的感染。
N36和C34是從HIV gp41的NHR和CHR區(qū)衍生出來的多肽,二者在體外能形成類似NHR和CHR結(jié)合的六螺旋束結(jié)構(gòu)。因此,抗gp41亞基核心結(jié)構(gòu)的活性可以用抑制N36和C34結(jié)合的作用來測(cè)定。
酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)方法的第一步是將特異性識(shí)別gp41六螺旋束結(jié)構(gòu)的單克隆抗體NC-1包被在96孔酶標(biāo)板上;第二步是將N36與待篩選化合物混合,再加入C34,然后將它們加入到已封閉好的酶標(biāo)板中;最后,分別加入兔抗N36/C34復(fù)合物的多克隆抗體IgG,辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG和顯色底物,檢測(cè)吸光度值,判斷化合物抗N36與C34結(jié)合的活性?;衔锏囊种苹钚约鞍胄б种茲舛?IC50)采用CalcuSyn軟件分析,如圖9。
實(shí)施例33 天然凝膠電泳(Native-PAGE) 我們建立了一個(gè)簡(jiǎn)便的生物物理的方法,即天然聚丙烯酰氨凝膠電泳法(Peptides.2003;241303-1313),來確認(rèn)活性分子是否抑制gp41核心結(jié)構(gòu)形成。該方法不采用抗體,可以排除上面采用免疫吸附方法篩選過程中出現(xiàn)的“假陽性”化合物。
如圖10,采用18%的聚丙烯酰氨凝膠,對(duì)N36和C34的復(fù)合物進(jìn)行天然凝膠電泳,然后對(duì)凝膠進(jìn)行考馬斯亮藍(lán)染色,并進(jìn)行照相。N36由于帶正電荷,在電泳中不顯示條帶,C34則在凝膠底部顯一條多肽條帶,N36和C34的復(fù)合物除底部有一條強(qiáng)度減弱的C34條帶外,在上方還出現(xiàn)一條六聚體的條帶。若化合物能抑制gp41核心結(jié)構(gòu)形成,則該六聚體條帶強(qiáng)度減弱或消失,而底部的C34條帶強(qiáng)度增加。
實(shí)施例34 如圖11(化合物22與gp41的作用圖),應(yīng)用SYBYL8.0藥物設(shè)計(jì)軟件采用分子對(duì)接技術(shù)(docking),計(jì)算合物與gp41的作用強(qiáng)度。作用強(qiáng)度用評(píng)分衡量,打分越高表示結(jié)合力越強(qiáng),打分在3分以上表示化合物跟靶點(diǎn)都有較好的結(jié)合。一些化合物的評(píng)分比NB64更高(評(píng)分結(jié)果見表1)。
方法如下 第一步,準(zhǔn)備蛋白,下載PDB1AIK,打開SYBYL8.0,F(xiàn)ile,open,選擇1AIK,點(diǎn)擊Prepare structure,structure preparation Tool,點(diǎn)擊analyze selected structure,進(jìn)行蛋白修復(fù)。
第二步,分子對(duì)接。
打開SYBYL軟件,點(diǎn)擊Application,Docking suite,Dockligand; 在打開的DOCKING對(duì)話框中,Docking mode選擇surflex dock,在file name里面選擇要進(jìn)行分子對(duì)接的PDB1AIK。接著彈出對(duì)話框,點(diǎn)擊generate,OK,返回Docking對(duì)話框; 在SLN右面的空框里面選擇要進(jìn)行對(duì)接的小分子SLN文件; 點(diǎn)擊0K進(jìn)行分子對(duì)接,如化合物22與gp41對(duì)接圖(圖11); 分子對(duì)接完彈出的對(duì)話框會(huì)顯示每個(gè)小分子的打分,>3有意義。
表1 一些化合物與gp41的作用強(qiáng)度
權(quán)利要求
1、吡咯酮衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽,其特征在于,通式為
式中
R1、R2和R3為氫、直鏈或支鏈烷基、取代烷基、環(huán)烷基、芳基、取代芳基或雜環(huán)基;
R4為氫、直鏈或支鏈烷基、取代烷基、環(huán)烷基、芳基、取代芳基或雜環(huán)基;
R5為氫、烷基或芳香基。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的吡咯酮衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽,其特征在于,其中
R5為取代或無取代或含雜原子的芳香基、氫或C1-4烷基。
3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的吡咯酮衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽,其特征在于,其中
R1、R2和R3為氫、C1-4直鏈或支鏈烷基、羥基取代烷基、鹵素取代烷基、羧基取代烷基、烷氧?;〈榛?、C5-6環(huán)烷基、芐基、苯基、取代芳基或雜環(huán)基;
R4為氫、C1-4直鏈或支鏈烷基,羥基取代烷基、鹵素取代烷基、C5-6環(huán)烷基、芐基、苯基、C1-3烷基取代芳基、烷氧基取代芳基、鹵素取代芳基、硝基取代芳基、烷氧?;〈蓟?、氨磺?;〈蓟螂s環(huán)基。
4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的吡咯酮衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽,其特征在于,其中
R1和R2為C1-4直鏈或支鏈烷基,羥基取代烷基、鹵素取代烷基、C5-6環(huán)烷基或芐基;
R3為C1-3烷基、烷氧基取代芳基、鹵素取代芳基、硝基取代芳基、氨磺酰基取代芳基;
R4為氫。
5、根據(jù)權(quán)利要求3所述的吡咯酮衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽,其特征在于,其中
R1和R2為C1-3烷基、烷氧基取代芳基、鹵素取代芳基、硝基取代芳基或氨磺?;〈蓟?br>
R3為C1-4直鏈或支鏈烷基,羥基取代烷基、鹵素取代烷基、C5-6環(huán)烷基或芐基;
R4為C1-4直鏈或支鏈烷基,羥基取代烷基、鹵素取代烷基、C5-6環(huán)烷基、芐基、苯基、C1-3烷基取代芳基、烷氧基取代芳基、鹵素取代芳基、硝基取代芳基、烷氧?;〈蓟?、氨磺酰基取代芳基或雜環(huán)基。
6、根據(jù)權(quán)利要求3所述的吡咯酮衍生物,其特征在于,所述衍生物為
2,5-二氫-1-芐基-4-(芐氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-對(duì)甲苯基-4-(對(duì)甲基苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-對(duì)氟苯基-4-(對(duì)氟苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-對(duì)溴苯基-4-(對(duì)溴苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-苯基-4-(芐氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-苯基-4-(丙氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-苯基-4-(環(huán)己氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-對(duì)硝基苯基-4-(環(huán)己氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-芐基-2-苯基-4-(芐氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-丙基-2-苯基-4-(丙氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-甲基-2-苯基-4-(甲氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-丁基-2-苯基-4-(丁氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-對(duì)甲苯基-2-苯基-4-(對(duì)甲苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-對(duì)氟苯基-2-苯基-4-(對(duì)氟苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-芐基-2-苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-環(huán)己基-2-苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-正丁基-2-苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-羥乙基-2-苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-羥乙基-2-苯基-4-(對(duì)甲基苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-芐基-2-苯基-4-(對(duì)氟苯基氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-羥乙基-2-對(duì)氟苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-苯基-2-對(duì)碘苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-羥乙基-2-對(duì)羥基苯基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-羥乙基-2-甲基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-環(huán)己基-2-甲基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-羥乙基-2-丁基-4-(苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-環(huán)己基-2-苯基-4-(對(duì)硝基苯氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯、
2,5-二氫-1-環(huán)己基-2-苯基-4-苯氨基-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸甲酯或2,5-二氫-1-苯基-4,4-(二丁氨基)-5-氧-1H-吡咯-3-羧酸乙酯。
7、一種權(quán)利要求1-6之一所述吡咯酮衍生物的合成方法,其特征在于,包括以下步驟
以下以摩爾份數(shù)計(jì);
(1)在4份有機(jī)溶劑中加入1份化合物(1)和1份化合物(2),0~60℃下攪拌10分鐘~1小時(shí);
(2)在步驟(1)的反應(yīng)液中加入1~4份化合物(3),加入0~4份的酸,反應(yīng)溫度20~100℃,攪拌1~5小時(shí);
(3)在步驟(2)的反應(yīng)液中加入1~4份化合物(4),加入0~4份的酸,反應(yīng)溫度20~100℃,攪拌1~5小時(shí),用常規(guī)方法分離純化;
所述化合物(1)為
所述化合物(2)為
R1R2NH (2)
所述化合物(3)為
R3NH2 (3)
所述化合物(4)為
R4CHO (4)
其中R1、R2、R3和R5如權(quán)利要求4所述,R4為氫;
所述有機(jī)溶劑包括醇、苯、甲苯、己烷、鹵代烴、醚、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜或乙腈中的一種或幾種;
所述酸包括硫酸、鹽酸、苯磺酸或醋酸。
8、一種權(quán)利要求1-6之一所述吡咯酮衍生物的合成方法,其特征在于,包括以下步驟
以下以摩爾份數(shù)計(jì);
(1)在2份有機(jī)溶劑中加入1份化合物(1)和1份化合物(2),0~60℃下攪拌10分鐘到1小時(shí);
(2)在2份有機(jī)溶劑中加入1~4份化合物(3)、1~4份化合物(4),加入0~4份的酸或堿,反應(yīng)溫度20~100℃,攪拌10分鐘到5小時(shí);
(3)將步驟(1)和(2)的反應(yīng)液混合,20~100℃下攪拌5~20小時(shí),用常規(guī)方法分離純化;
所述化合物(1)為
所述化合物(2)為
R1R2NH(2)
所述化合物(3)為
R3NH2 (3)
所述化合物(4)為
R4CHO (4)
其中R1、R2、R3和R5如權(quán)利要求5所述,R4為C1-4直鏈或支鏈烷基,羥基或鹵素取代烷基、C5-6環(huán)烷基、芐基、苯基、C1-3烷基、烷氧基取代芳基、鹵素取代芳基、硝基取代芳基、烷氧酰基取代芳基、氨磺?;〈蓟螂s環(huán)基;
所述有機(jī)溶劑包括醇、苯、甲苯、己烷、鹵代烴、醚、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜或乙腈中的一種或幾種。
9、一種權(quán)利要求1-6之一所述的吡咯酮衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽在制備抗艾滋病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種HIV-1抑制劑吡咯酮衍生物及其合成方法和其應(yīng)用,本發(fā)明的吡咯酮衍生物的結(jié)構(gòu)式為式(I),(I)中R1、R2、R3、R4是氫、芳香基、烷基或雜環(huán)基;R5是氫、烷基、芳香基。(I)可用四組分法簡(jiǎn)便地由化合物(1)、化合物(2)、化合物(3)及化合物(4)合成,產(chǎn)率為60-96%。本發(fā)明的吡咯酮衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽可單獨(dú)或結(jié)合其他藥物應(yīng)用到制備抗艾滋病藥物。
文檔編號(hào)A61K31/4015GK101497580SQ200910036539
公開日2009年8月5日 申請(qǐng)日期2009年1月9日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月9日
發(fā)明者江煥峰, 朱秋華, 劉叔文, 珉 張 申請(qǐng)人:華南理工大學(xué), 南方醫(yī)科大學(xué)