專利名稱：：包含喜樹堿衍生物的藥物組合物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及包含拓樸異構酶I抑制劑的藥物組合物，該拓樸異構酶I抑制劑包括但不限于喜樹堿衍生物。
背景技術：
：喜樹堿衍生物是在美國專利No.6，242，457中所描述的一類化合物。一般而言，喜樹堿衍生物(例如在美國專利No.6,242，457所公開的那些)呈現(xiàn)出與給藥有關的非常特殊的難題，特別是由于這些衍生物具有低水溶性而帶來的藥物生物利用度的問題。7-叔-丁氧亞氨基甲基喜樹堿是基于喹啉的生物堿，該生物堿通過抑制拓樸異構酶在快速分裂的細胞(例如癌細胞)中阻斷細胞分裂。所述原料藥極難溶于水性介質，從而妨礙其以有效量遞送至癌細胞。此外，7-叔-丁氧亞氨基曱基喜樹堿易于水解，并且在生理學pH(7.4)時內酯環(huán)趨向于迅速打開，從而導致藥物失活。在血漿中，內酯環(huán)迅速打開形成藥物的羧化物形式，該形式難以在癌細胞內蓄積。一旦被癌細胞納入，所述羧化物形式不能針對其分子靶標，拓樸異構酶(topoisomersase)I表現(xiàn)出活性。因此，水解產物對于治療癌癥而言是無效的。因此，存在開發(fā)包含喜樹堿衍生物的藥物制劑的需求，該衍生物包括但不限于7-叔-丁氧亞氨基甲基喜樹堿，它是穩(wěn)定的，能以臨床相關劑量遞送至癌細胞且易于使用。
發(fā)明內容通過形成包含官能化磷脂的獨特的藥物活性組合物，本發(fā)明克服了包括7-叔-丁氧亞氨基甲基喜樹堿在內的喜樹堿衍生物在以其游離形式給藥時，所述衍生物不穩(wěn)定和溶解性差的問題。這種穩(wěn)定的制劑可用于iv和皮下給藥。在另一方面，本發(fā)明涉及a)使包括但不限于7-叔-丁氧亞氨基甲基喜樹堿在內的喜樹堿衍生物在血中穩(wěn)定并增加其在血中的循環(huán)時間；并且b)通過藥物靶向策略增加藥物抗腫瘤效力，并改善其對更廣范圍內的癌癥疾病的作用。發(fā)明詳述本發(fā)明活性劑是拓樸異構酶I的抑制劑(TopoI抑制劑)，因此能預防尤其是由拓樸異構酶I受體活化所引起的疾病癥狀。在美國專利No.6，242，457中所描述的本發(fā)明的喜樹堿衍生物，包括7-甲氧基亞氨基甲基喜樹堿；.7-甲氧基亞氨基甲基-10-羥基喜樹堿；.7-(叔-丁氧羰基-2-丙氧基)亞氨基曱基喜樹堿；.7-乙氧基亞氨基甲基喜樹堿；.7-異丙氧基亞氨基甲基喜樹堿；7-(2-甲基丁氧基)亞氨基甲基喜樹堿；.7-叔-丁氧亞氨基甲基喜樹堿；.7-叔-丁氧亞氨基甲基-10-羥基喜樹堿；7-叔-丁氧亞氨基甲基-10-甲氧基喜樹堿；.7-(4-羥基丁氧基)亞氨基曱基喜樹堿；.7-三苯基甲氧基亞氨基甲基喜樹堿；.7-羧基甲氧基亞氨基甲基喜樹堿；7-(2-氨基)乙氧基亞氨基甲基喜樹堿；.7-(2-N，N-二曱基氨基)乙氧基亞氨基曱基喜樹堿;.7-烯丙氧基亞氨基甲基喜樹堿；7-環(huán)己氧基亞氨基乙基喜樹堿；.7-環(huán)己基曱氧基亞氨基曱基喜樹堿；.7-環(huán)辛氧基亞氨基曱基喜樹堿；.7-環(huán)辛基甲氧基亞氨基甲基喜樹堿；.7-苯甲氧基亞氨基曱基喜樹堿；.7-[(1-苯甲氧基亞氨基)-2-苯基乙基]喜樹堿；.7-(1-苯甲氧基亞氨基)乙基喜樹堿；.7-苯氧基亞氨基甲基喜樹堿；.7-(l-叔-丁氧亞氨基)乙基喜樹堿；.7-對-硝基苯甲氧基亞氨基甲基喜樹堿；7-對-甲基苯甲氧基亞氨基甲基喜樹堿；.7-五氟苯甲氧基亞氨基甲基喜樹堿；7-對-苯基苯甲氧基亞氨基甲基喜樹堿；.7-[2-(2，4-二氟苯基)乙氧基]亞氨基甲基喜樹堿；.7-(4-叔-丁基苯甲氧基)亞氨基甲基喜樹堿；.7-(l-金剛烷氧基)亞氨基甲基喜樹堿；.7-(l-金剛烷基曱氧基)亞氨基曱基喜樹堿；.7-(2-萘氧基)亞氨基甲基喜樹堿；.7-(9-蒽基甲氧基)亞氨基甲基乙基喜樹堿；.7-環(huán)氧乙烷基甲氧基亞氨基甲基喜樹堿；.7-(6-尿嘧啶(uracyl))甲氧基亞氨基甲基喜樹堿;.7-[2-(1-urcyl)乙氧基]亞氨基甲基喜樹堿；.7-(4-吡啶基)甲氧基亞氨基甲基喜樹堿；.7-(2-噻吩基)甲氧基亞氨基甲基喜樹堿；.7-[(N-曱基)-4-哌啶基]甲氧基亞氨基甲基喜樹堿；.7-[2-(4-嗎啉基(morpholininyl)]乙氧基]亞氨基曱基喜樹堿;.7-(苯甲酰氧基亞氨基甲基)喜樹堿；.7-[(l-羥基亞氨基)-2-苯基乙基)喜樹堿；.7-叔-丁氧基亞氨基曱基喜樹堿-N-氧化物；和.7-甲氧基亞氨基甲基喜樹堿N-氧化物。在本發(fā)明的一個極優(yōu)選實施方案中，被稱為化合物A的式(I)的拓樸異構酶I抑制劑具有卞述結構<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>化合物A以游離或藥學上可接受的鹽的形式存在的優(yōu)選和特別優(yōu)選的活性劑可如美國專利No.6，424，457中所描述的制備。如本文所提到的，它們可以其可能的對映體、非對映體和相關混合物、其藥學上可接受的鹽以及它們的活性代謝物的形式存在。在本發(fā)明的一個實施方案中提供了藥物組合物，其包含a)包埋在脂質體中的治療有效量的7-叔-丁氧亞氨基曱基喜樹堿^和b)藥學上可接受的賦形劑。本發(fā)明通過將藥物溶解在包含7-叔-丁氧亞氨基甲基喜樹堿的磷脂中，提供了穩(wěn)定的、具有高度藥理學活性的制劑。所述制劑以脂質體的形式存在，該脂質體包含多種磷脂，例如常規(guī)的磷脂，例如磷脂酰膽堿膽固醇和官能化的脂質。典型地，7-叔-丁氧亞氨基甲基喜樹堿與具有高親和力的脂質體的膜脂質雙層結合。所述7-叔-丁氧亞氨基曱基喜樹堿嵌入脂質的酰基鏈之間，由此減少藥物的內酯環(huán)與所述脂質體外部和內部的水性環(huán)境相互作用，從而防止其水解。本發(fā)明的脂質體組合物主要由形成嚢泡的脂質組成。這種形成嚢泡的脂質a)可在水中自發(fā)形成雙層嚢泡，如磷脂所示例的，或b)經其疏水部分與內部，即雙層膜的疏水區(qū)域接觸，穩(wěn)定并入脂質雙層，并且它的頭基部分朝向外部和內部，即嚢泡的極性表面。優(yōu)選是這種類型的形成囊泡的脂質具有兩個烴鏈，典型地?；満皖^基(極性或非極性)。存在有多種合成的形成嚢泡的脂質和天然存在的形成嚢泡的脂質，包括磷脂，例如磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酸、磷脂酰肌醇和鞘磷脂，其中所述兩個烴鏈的長度典型地為約14-22個碳原子，且具有變化的不飽和度。其中?；哂凶兓娘柡投鹊纳鲜鲋|和磷脂通過商購或根據(jù)公開的方法制備。其它合適的脂質包括糖脂類和甾醇類，例如膽固醇或膽固醇衍生物。用于本發(fā)明的優(yōu)選的二?；溨|包括二?；视停缌字Ｄ憠A(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰絲氨酸(PS)、磷脂酸(PA)、磷脂酰肌醇(PI)、鞘磷脂(SPM)等，其單獨或組合存在。本發(fā)明通過形成包含官能化磷脂的獨特的藥物活性組合物，克服了7-叔-丁氧亞氨基甲基喜樹堿在以其游離形式給藥時，其不穩(wěn)定和溶解性差的問題。所述官能化磷脂是表面與某種親水性聚合物和/或某種配體接枝的那些。表面接枝的親水聚合物通過包括至少在脂質體的外層脂質層中形成。意欲延長脂質體循環(huán)時間的合適的親水聚合物包括聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯甲基醚、聚甲基喁唑啉、聚乙基喁唑啉、聚羥基丙基喁唑啉、聚羥基丙基曱基丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚二曱基丙諦酰胺、聚羥基丙基甲基丙烯酸酯、聚羥基乙基丙烯酸酯、羥基甲基纖維素、羥基乙基纖維素、聚乙二醇和聚天冬酰胺。在優(yōu)選的實施方案中，親水聚合物為聚乙二醇，優(yōu)選為具有分子量為500-10，000道爾頓，典型為1，000-5，000道爾頓的PEG鏈。由親水聚合物鏈所提供的表面接枝的脂質體可提供膠體穩(wěn)定性并用于保護脂質體免于被網狀內皮系統(tǒng)攝取，提供脂質體到達靶細胞的延長的血液循環(huán)壽命。所述血液循環(huán)時間的提高程度優(yōu)選為在聚合物包衣不存在下完成的時間的數(shù)倍。用于脂質體官能化的具體配體的實例包括葉酸、肽、蛋白質、酶、凝集素、生物素、抗生物素蛋白、單糖、低聚糖、多糖、激素、細胞因子、包括嵌合抗體和人源化抗體以及它們的片斷的多克隆和單克隆抗體。在本發(fā)明的另一個實施方案中提供了治療細胞增殖疾病的方法，該方法包括給予哺乳動物宿主包含a)包埋在脂質體中的治療有效量的7-叔-丁氧亞氨基曱基喜樹堿；和b)藥學上可接受的賦形劑的藥物組合物。所述哺乳動物宿主可為人。在本發(fā)明的另一個實施方案中提供了本發(fā)明的藥物組合物用于治療由拓樸異構酶I受體活化所引起的疾病癥狀的用途。在本發(fā)明的另一個實施方案中提供了本發(fā)明的組合物用于制備治療由拓樸異構酶I受體活化所引起的疾病癥狀的藥物的用途。通過增加滲透和保留(EPR)作用和/或通過特異性細胞膜表面受體的識別靶向遞送，穩(wěn)定的7-叔-丁氧亞氨基甲基喜樹堿制劑循環(huán)用于延長的時間段，具有極佳的藥物保留和血漿穩(wěn)定性，從而導致被動或主動優(yōu)選定位進入腫瘤細胞(與常規(guī)藥劑相比)。穩(wěn)定的7-叔-丁氧亞氨基曱基喜樹堿制劑可用于iv和皮下給藥。例如，在一名約70公斤體重的人體內，可給予約0.5-5mg7-叔-丁氧亞氨基曱基喜樹堿/公斤體重。優(yōu)選地，給予約1.0-3.0mg的7-叔-丁氧亞氨基甲基喜樹堿/公斤體重。但是，可能需要偏離所提及的劑量，特別是在作為待治療受試者的性質和體重的函數(shù)、疾病性質和嚴重程度的函數(shù)、制劑的性質的函數(shù)，并且在藥物給藥時，該給藥發(fā)生的時間或時間間隔的函數(shù)時會發(fā)生偏離。因此，在某些情況下以低于上述活性化合物的量就能足夠，而在另外的情況下必須超過上述活性化合物的量。本領域的技術人員可通過可利用的方法確定7-叔-丁氧亞氨基曱基喜樹堿的特定的所需最佳劑量和給藥類型。如在實驗研究中確定的，合適的量是不具有過度毒性的治療有效量。隨本發(fā)明的藥物組合物，7-叔-丁氧亞氨基曱基喜樹堿可通過靜脈內給藥安全和有效遞送或安全和有效遞送至其它房室。本發(fā)明的益處在于可以解決意在用于iv和/或皮下給藥的7-叔-丁氧亞氨基曱基喜樹堿在生理學pH下的低溶解性和分子的低穩(wěn)定性的問題。其它的益處在于通過用與某種聚合物接枝的脂質體，可通過EPR作用增加循環(huán)時間，以及通過用特定配體官能化脂質體/微團，可以相對于常規(guī)制劑更有效地轉運和增加7-叔-丁氧亞氨基曱基喜樹堿向目標腫瘤細胞進行細胞內化。還可以通過在微團的疏水區(qū)域包埋7-叔-丁氧亞氨基甲基喜樹堿，使其穩(wěn)定并結合至微團薄膜。本發(fā)明涉及a)穩(wěn)定和增加血液中7-叔-丁氧亞氨基曱基喜樹堿的循環(huán)時間；以及b)通過藥物耙向策略增加藥物抗腫瘤效力并改善其對更廣范圍內的癌癥疾病的作用。具體實施例方式實施例1:在小的單層的、長循環(huán)脂質體中的7-叔-丁氧亞氨基曱基喜樹堿，所述脂質體表面用某種聚合物(例如PEG:聚乙二醇)接枝。在PEG-脂質體中的7-叔-丁氧亞氨基曱基喜樹堿根據(jù)薄膜水合法(亦稱做Bangham法(Ref.BanghamA.D.&al.，J.Mol.Biol.13，238-252，1965))如下述改變，制備樣品步驟1:制備原料藥(DS)，脂質膜。將賦形劑和DS溶解在乙醇中。有機溶劑在旋轉蒸發(fā)儀(來自BiichiSwUzerlans的RotavapR-210/215)上在40。C蒸發(fā)4小時以獲得非常均勻的DS，脂質膜。所獲得的薄膜在旋轉蒸發(fā)儀上在55^C和30mbar保持2小時。步驟2:DS,脂質膜的水合。在磁力攪拌下向DS，脂質膜中加入PB-Man緩沖劑溶液(pH7.4)并在40XM呆持30分鐘。獲得乳狀溶液脂質體溶液。將該溶液放入超聲浴中在室溫下保持IO分鐘。步驟3:脂質體溶液的凍融。將脂質體溶液放入液氮中(直到固化)，并在40'C的水浴中溫熱(直到溶化)3個循環(huán)。步驟4:脂質體溶液的擠出。通過聚碳酸酯濾器(400和100nm)擠出脂質體溶液(來自NortherLipidsInc.的LIPEXExtruder)。步驟5:滅菌。脂質體溶液在無菌的MilHpore過濾器0.2|am上過濾。樣品組合物<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>分析特征<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實施例2:在含有配體的脂質體中的7-叔-丁氧亞氨基曱基喜樹堿表面與某種配體接枝用于藥物靼向策略。在PEG-脂質體中的7-叔-丁氧亞氨基甲基喜樹堿根據(jù)如在實施例1中所描述的薄膜水合法制備樣品。樣品組合物<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>分析特征<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>在5t:和25'C的穩(wěn)定性試驗<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>在37。C的血漿穩(wěn)定性試驗<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>實施例3:在長循環(huán)磷脂微團中的7-叔-丁氧亞氨基甲基喜樹堿，所述微團表面用某種聚合物(例如PEG2000:聚乙二醇)接枝。在PEG-脂質體中的7-叔-丁氧亞氨基甲基喜樹堿根據(jù)如在實施例1中所描述的薄膜水合法制備樣品。唯一的差異在于在步驟4中，通過聚碳酸酯濾器(100和50nm)擠出脂質體溶液。才羊品組合物<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>分析特征<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>在5'C和25'C的穩(wěn)定性試驗<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>實施例4:在長循環(huán)磷脂微團中的7-叔-丁氧亞氨基甲基喜樹堿，所述微團表面用某種聚合物(例如PEG2000:聚乙二醇)和某種配體(例如葉酸)接枝。(在葉酸官能化的PEG-脂質體中的7-叔-丁氧基亞氨基曱基喜樹堿)根據(jù)如在實施例1中所描述的薄膜水合法制備樣品。樣品組合物<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>權利要求1.一種治療細胞增殖疾病的方法，該方法包括給予哺乳動物宿主藥物組合物，所述藥物組合物包含a)包埋在脂質體中的治療有效量的7-叔-丁氧亞氨基甲基喜樹堿；和b)藥學上可接受的賦形劑。2.權利要求l的方法，其中所述哺乳動物宿主為人。3.權利要求1的方法，其中所述脂質體由選自下述的合成的或天然的磷脂制備磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、鞘磷脂、二?；视汀⒘字Ｒ掖及?、磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰膽堿(distearylphosphatidylcholine)和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺。4.權利要求l的方法，其中所述脂質體具有負電荷。5.權利要求l的方法，其中所述脂質體是中性的。6.權利要求l的方法，其中所述脂質體具有正電荷。7.權利要求l的方法，其中所述脂質體表面與親水聚合物接枝。8.權利要求7的方法，其中所述親水聚合物是由選自下述的親水聚合物組成聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯甲基醚、聚甲基p惡唑啉、聚乙基喁唑啉、聚羥基丙基嗜唑啉、聚羥基丙基甲基丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺、聚羥基丙基甲基丙烯酸酯、聚羥基乙基丙烯酸酯、羥基曱基纖維素、羥基乙基纖維素、聚乙二醇和聚天冬酰胺。9.權利要求8的方法，其中所述親水聚合物包衣是由具有分子量為約500道爾頓至約10,000道爾頓的聚乙二醇鏈組成。10.權利要求l的方法，其中所述脂質體為約0.05至約l微米。11.權利要求1的方法，其中所述脂質體還包含與所述親水聚合物鏈的至少一部分的遠端連接的配體。12.權利要求1的方法，其中所述脂質體還包含與所述脂質體的形成嚢泡的脂質的至少一部分的極性頭基連接的配體。13.權利要求11或12的方法，其中所述配體選自葉酸、磷酸吡哆醛、唾液酸化路易斯寡糖(sialylLewis)、轉鐵蛋白、表皮生長因子、堿性成纖維細胞生長因子、血管內皮生長因子、VCAM-1、ICAM-1、PECAN-1和RGD肽。14.權利要求11或12的方法，其中所述配體選自水溶性維生素、載脂蛋白、胰島素、半乳糖、Mac-l、PECAM-1/CD31、纖連蛋白、骨橋蛋白、基質蛋白的RGD序列、HIVGP120/41結構域peptomers、GP120C4結構域peptomers、T細胞嗜性分離物(Tcelltropicisolates)、SDF-1趨化因子、巨嗟細胞嗜性分離物(Macrophagetropicisolates)、抗細胞表面受體抗體或其片段、pyridoxyl配體、RGD肽模擬物和抗-E-選擇素Fab。15.權利要求IO或11的方法，其中所述配體結合選自下述的受體葉酸受體(folatereceptor)、E-選擇素受體、L-選擇素受體、P-選擇素受體、CD4受體、ocP整聯(lián)蛋白受體和趨化因子受體。16.—種藥物組合物，其包含a)包埋在脂質體中的治療有效量的7-叔-丁氧亞氨基曱基喜樹堿;和b)藥學上可接受的賦形劑。17.根據(jù)權利要求16的藥物組合物，其中所迷脂質體由選自下述的合成的或天然的磷脂制備磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、鞘磷脂、二?；视?、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰膽堿(distearylphosphatidylcholine)和二石更月旨酖磷月旨酰乙醇胺。18.根據(jù)權利要求16或17的藥物組合物，其中所述脂質體是表面與親水聚合物接枝的。19.根據(jù)權利要求18的藥物組合物，其中所述親水聚合物選自聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯甲基醚、聚曱基喁唑啉、聚乙基p惡唑啉、聚羥基丙基喁唑啉、聚羥基丙基甲基丙烯酰胺、聚曱基丙烯酰胺、聚二曱基丙烯酰胺、聚羥基丙基甲基丙烯酸酯、聚羥基乙基丙烯酸酯、鞋基甲基纖維素、羥基乙基纖維素、聚乙二醇和聚天冬酰胺。20.權利要求16-19藥物組合物用于治療由拓樸異構酶I受體活化所引起的疾病癥狀的用途。21.權利要求16-19藥物組合物用于制備治療由拓樸異構酶I受體活化所引起的疾病癥狀的藥物的用途。全文摘要本發(fā)明涉及包含拓撲異構酶I抑制劑的藥物組合物，該拓撲異構酶I抑制劑包括但不限于喜樹堿衍生物。文檔編號A61K9/127GK101652125SQ200880007871公開日2010年2月17日申請日期2008年1月30日優(yōu)先權日2007年2月1日發(fā)明者G·弗朗西斯,J·奧戈卡,張家艾申請人:希格馬托制藥工業(yè)公司