專利名稱：：低聚物-蛋白酶抑制劑偶聯(lián)物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供了化學(xué)修飾的小分子蛋白酶抑制劑，其具有超過缺少該化學(xué)修飾的小分子蛋白酶抑制劑的某些優(yōu)勢(shì)。本文描述的化學(xué)修飾的小分子蛋白酶抑制劑涉及并/或應(yīng)用于(除其他以外)藥物開發(fā)、藥物療法、生理學(xué)、有機(jī)化學(xué)和高分子化學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：自從1981年報(bào)告了獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)的第一個(gè)病例，人類免疫缺陷病毒的感染已經(jīng)增長到大流行的比例，導(dǎo)致估計(jì)有6500萬感染以及2500萬死亡。參見2006年8月11曰MiWTF/絲(31):841-844(疾病控制和預(yù)防中心)。蛋白酶抑制劑代表了用于治療HIV感染的個(gè)體的重要的一類化合物，盡管這些化合物還可治療患有其他病毒感染(例如丙肝)的個(gè)體。就HIV而言，蛋白酶抑制劑用于抑制病毒蛋白酶，該病毒蛋白酶是gag和gag/pol融合多肽的蛋白酶切所需的，而gag和gag/pol融合多肽是感染性病毒顆粒產(chǎn)生所需的。因此，通過抑制這一蛋白酶切，蛋白酶抑制劑降低了較大HIV-融合多肽前體形成有效病毒復(fù)制所需的蛋白質(zhì)的成熟形式的能力。McQuade等人(1990)S"V""247(4941):454國456?；诘鞍酌敢种苿┑闹委煴徽J(rèn)為是對(duì)表現(xiàn)出有癥狀的HIV疾病的患者以及CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)低于350/jiL但高于200/fiL的水平的無癥狀5的患者的初始治療。Hammer等人(2006)X4A"296(7):827-843。在這種情況下，基于蛋白酶抑制劑的方案將包括蛋白酶抑制劑(通常用利托那韋促進(jìn))連同兩種核苷(或核苷酸)逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的組合。同上。盡管蛋白酶抑制劑在治療患有HIV的患者中起到重要的作用，但它們的使用已經(jīng)被與(除其他事情外)極差的水溶性和強(qiáng)代謝(extensivemetabolism)相關(guān)的困難所妨礙。為解決這些缺點(diǎn)而提出的一種方法包括制備蛋白酶抑制劑的前藥形式，諸如含有?；桶被鶗貂；?carbamotoyl)葡萄糖的前藥(Rouquayrol等人(2001)OzH^/^flTr./d^:161-180)和相對(duì)大的基于PEG的前藥(Gunaseelan等人(2004)肌歸"乂，"JJ:1322-1333)。盡管前藥方法可能解決與蛋白酶抑制劑相關(guān)的缺點(diǎn)中的一些，但該方法必然導(dǎo)致原始分子的還原(return),通常伴隨著其相關(guān)的缺點(diǎn)。例如，認(rèn)為前藥方法不會(huì)充分地解決通常用蛋白酶抑制劑所觀察到的與強(qiáng)代謝相關(guān)的問題。本發(fā)明試圖解決本領(lǐng)域的這一需求和其他需求。發(fā)明概述在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種化合物，該化合物包含直接或通過一個(gè)或多個(gè)原子經(jīng)穩(wěn)定的鍵合共價(jià)連接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制劑的殘基。在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種化合物，該化合物包含直接或通過一個(gè)或多個(gè)原子經(jīng)穩(wěn)定的鍵合共價(jià)連接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制劑的殘基，其中所迷蛋白酶抑制劑由式I涵蓋。在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種化合物，該化合物包含直接或通過一個(gè)或多個(gè)原子經(jīng)穩(wěn)定的鍵合共價(jià)連接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制劑的殘基，其中所述蛋白酶抑制劑由式II涵蓋。在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種化合物，該化合物包含直接或通過一個(gè)或多個(gè)原子經(jīng)穩(wěn)定的鍵合共價(jià)連接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制劑的殘基，其中所述蛋白酶抑制劑由式III涵蓋。在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種化合物，該化合物包含直接或通過一個(gè)或多個(gè)原子經(jīng)穩(wěn)定的鍵合共價(jià)連接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制劑的殘基，其中所述蛋白酶抑制劑由式IV涵蓋。在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種化合物，該化合物包含直接或通過一個(gè)或多個(gè)原子經(jīng)穩(wěn)定的鍵合共價(jià)連接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制劑的殘基，其中所述蛋白酶抑制劑由式V涵蓋。在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種化合物，該化合物包含直接或通過一個(gè)或多個(gè)原子經(jīng)穩(wěn)定的鍵合共價(jià)連接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制劑的殘基，其中所述蛋白酶抑制劑由式VI涵蓋。在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種化合物，該化合物包含直接或通過一個(gè)或多個(gè)原子經(jīng)穩(wěn)定的鍵合共價(jià)連接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制劑的殘基，其中所述蛋白酶抑制劑由式VII涵蓋。在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種化合物，該化合物具有以下結(jié)構(gòu)I蛋白酶抑制劑t~|~X-POLYJ其中蛋白酶抑制劑^小分子蛋白酶抑制劑的殘基；(a)是值為1到3的整數(shù)，包含1和3;X每次出現(xiàn)時(shí)，是穩(wěn)定的鍵合；且POLY每次出現(xiàn)時(shí)，是水溶性非肽低聚物。在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種組合物，該組合物包含化合物，其包含直接或通過一個(gè)或多個(gè)原子經(jīng)穩(wěn)定的鍵合共價(jià)連接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制劑的殘基；和任選地，藥學(xué)上可接受的賦形劑。在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種組合物，該組合物包含(i)具有以下結(jié)構(gòu)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中蛋白酶抑制劑是小分子蛋白酶抑制劑的殘基;(a)是值為1到3的整數(shù)，包含1和3;X每次出現(xiàn)時(shí)，是穩(wěn)定的鍵合；且POLY每次出現(xiàn)時(shí)，是水溶性非肽低聚物；以及(ii)任選地，藥學(xué)上可接受的賦形劑。在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種劑型，該劑型包含化合物，所述化合物包含直接或通過一個(gè)或多個(gè)原子經(jīng)穩(wěn)定的鍵合共價(jià)連接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制劑的殘基。在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種劑型，該劑型包含具有以下結(jié)構(gòu)的化合物.X一POLY其中:蛋白酶抑制劑是小分子蛋白酶抑制劑的殘基;(a)是值為1到3的整數(shù)，包含1和3;X每次出現(xiàn)時(shí)，是穩(wěn)定的鍵合；且POLY每次出現(xiàn)時(shí)，是水溶性非肽低聚物。在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，提供了括將水溶性非肽低聚物共價(jià)地連接于小分子蛋白在本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種方法，括施用具有以下結(jié)構(gòu)的化合物I蛋白酶抑制劑-種方法，^抑制劑。該方法包該方法包-X—P0LY1其中:蛋白酶抑制劑是小分子蛋白酶抑制劑的殘基;(a)是值為1到3的整數(shù)，包含1和3;X每次出現(xiàn)時(shí)，是穩(wěn)定的鍵合；且POLY每次出現(xiàn)時(shí)，是水溶性非肽低聚物；以及(ii)任選地，藥學(xué)上可接受的賦形劑。當(dāng)連同以下詳細(xì)描述一起閱讀時(shí)，本發(fā)明的這些和其他目的、方面、實(shí)施方案和特征將變得更加完全地明顯。發(fā)明詳述本說明書中所使用的單數(shù)形式"一(a)"、"一(an)"和"所述(the)"包括多個(gè)所指對(duì)象，除非上下文中明確地另外指出。在描述和要求保護(hù)本發(fā)明時(shí)，將根據(jù)以下描述的定義來使用以下的術(shù)語。"水溶性非肽低聚物，，指室溫下在水中是至少35%(按重量計(jì))可溶的、優(yōu)選超過70%(按重量計(jì))并更優(yōu)選超過95%(按重量計(jì))可溶的低聚物。通常，未過濾的"水溶性"低聚物的含水制劑透射相同溶液過濾后所透射的光量的至少75%、更優(yōu)選至少95%。然而，非常優(yōu)選的是，水溶性低聚物在水中至少95%(按重量計(jì))可溶或完全可溶。關(guān)于是"非肽的"，當(dāng)?shù)途畚锞哂行∮?5%(按重量計(jì))的氨基酸殘基時(shí)，該低聚物是非肽的。術(shù)語"單體"、"單體亞單元，，和"單體單元"本文中可互換使用，并且指聚合物或低聚物的基本結(jié)構(gòu)單元中的一個(gè)。在同低聚物的情況中，單一重復(fù)的結(jié)構(gòu)單元形成低聚物。在共低聚物的情況中，兩個(gè)或更多種結(jié)構(gòu)單元以一方式或隨機(jī)地重復(fù)以形成低聚物。本發(fā)明使用的優(yōu)選的低聚物是同低聚物。水溶性非肽低聚物通常包含一種或多種單體，它們按順序連接以形成單體鏈。低聚物可由單一單體類型(即為同低聚物)或由兩個(gè)或三個(gè)單體類型(即為共低聚物)形成。"低聚物"是具有從約2個(gè)至約50個(gè)單體、優(yōu)選從約2個(gè)至約30個(gè)單體的分子。低聚物的結(jié)構(gòu)可變。本發(fā)明中使用的具體低聚物包括那些具有諸如直鏈、支鏈或叉狀的多種幾何形狀的低聚物，其在下文中更加詳細(xì)地描述。如本文所用，"PEG"或"聚乙二醇"意在包含任何水溶性聚(環(huán)氧乙烷)。除非另外指出，"PEG低聚物"(也稱為低聚乙二醇)是9其中基本所有(且更優(yōu)選所有)單體亞單元是環(huán)氧乙烷亞單元的低聚物。然而，低聚物可含有不同的封端部分或官能團(tuán)，例如用于偶聯(lián)。通常，本發(fā)明中使用的PEG低聚物將包含以下兩個(gè)結(jié)構(gòu)之一"(CH2CH20)n-，，或"(CH2CH20)nlCH2CH2",這是根據(jù)例如在合成轉(zhuǎn)化期間末端氧是否已經(jīng)被置換。對(duì)于PEG低聚物，"n"從約2到50、優(yōu)選從約2到約30變化，并且整個(gè)PEG的末端基團(tuán)和構(gòu)造可變。當(dāng)PEG進(jìn)一步包含用于連接到例如小分子藥物的官能團(tuán)A時(shí)，該官能團(tuán)共價(jià)地連接于PEG低聚物時(shí)不會(huì)導(dǎo)致形成(i)氧-氧鍵(-O-O-，過氧化物鍵合)或(iO氮-氧鍵(N-O，O-N)。"封端基團(tuán)"通常是連接于PEG低聚物的末端氧的無反應(yīng)性含碳基團(tuán)。示例性封端基團(tuán)包括Cw烷基(諸如甲基、乙基和節(jié)基)，以及芳基、雜芳基、環(huán)、雜環(huán)以及類似基團(tuán)。就本發(fā)明而言，優(yōu)選的封端基團(tuán)具有相對(duì)低的分子量，諸如甲基或乙基。封端基團(tuán)還可包含可檢測(cè)的標(biāo)記物。這種標(biāo)記物包括但不限于熒光劑、化學(xué)發(fā)光劑、酶標(biāo)記中使用的部分、比色標(biāo)記物(例如染料)、金屬離子和放射性部分。涉及低聚物的幾何形狀或總體結(jié)構(gòu)時(shí)，"支鏈"指具有代表不同的"臂"的兩個(gè)或更多個(gè)聚合物的低聚物，所述"臂"從一個(gè)支化點(diǎn)延伸。涉及低聚物的幾何形狀或總體結(jié)構(gòu)時(shí)，"叉狀"指具有從一個(gè)支化點(diǎn)延伸的兩個(gè)或更多個(gè)官能團(tuán)(通常通過一個(gè)或多個(gè)原子)的低聚物。"支化點(diǎn)"指包含一個(gè)或多個(gè)原子的分支點(diǎn)，此處低聚物由直鏈結(jié)構(gòu)分支或分叉成一個(gè)或多個(gè)額外的臂。術(shù)語"反應(yīng)性的"或"活化的，，指在有機(jī)合成的常規(guī)條件下容易地或以實(shí)際速率反應(yīng)的官能團(tuán)。這不同于不反應(yīng)或需要強(qiáng)催化劑或不實(shí)際的反應(yīng)條件以便反應(yīng)的那些基團(tuán)(即"無反應(yīng)性"或"惰性"基團(tuán))。涉及存在于反應(yīng)混合物中的分子上的官能團(tuán)時(shí)，"不容易反應(yīng)"指在反應(yīng)混合物中有效產(chǎn)生所需的反應(yīng)的條件下，基團(tuán)在很大程度上仍然是完整的。"保護(hù)基"是防止或阻斷分子中的特定化學(xué)反應(yīng)官能團(tuán)在某些反應(yīng)條件下的反應(yīng)的部分。保護(hù)基將根據(jù)所保護(hù)的化學(xué)反應(yīng)基的類型以作為實(shí)例，'可4保護(hù)的官能團(tuán)包括羧酸丄;:'氨基r幾基、疏醇基、羰基以及類似官能團(tuán)。羧酸的代表性保護(hù)基包括酯(諸如對(duì)甲氧千酯)、酰胺和酰肼；氨基的代表性保護(hù)基包括氨基甲酸酯(諸如叔丁氧羰基)和酰胺；羥基的代表性保護(hù)基包括醚和酯；硫醇基團(tuán)的代表性保護(hù)基包括硫醚和硫酯；羰基的代表性保護(hù)基包括縮醛和縮酮；以及類似的保護(hù)基。這種保護(hù)基對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是公知的，并且描述于例如T.W.Greene和G.M.Wuts，7VCec"VtgG>ow/7s/wOrgaw/c5^w^s/s(有機(jī)合成中的保護(hù)基)，第三版，Wiley,NewYork,1999及其中所引用的參考文獻(xiàn)。"保護(hù)形式，，的官能團(tuán)指具有保護(hù)基的官能團(tuán)。如本文所用，術(shù)語"官能團(tuán)"或其任何同義詞包含其保護(hù)形式。"生理學(xué)上可裂解的"或"可水解的，，或"可降解的"鍵是相對(duì)不穩(wěn)定的鍵，其在普通生理?xiàng)l件下與水反應(yīng)(即水解)。在普通生理?xiàng)l件下，鍵在水中水解的趨勢(shì)將不僅依賴于連接兩個(gè)中心原子的鍵合的一般類型，還依賴于連接于這些中心原子的取代基。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員一般可識(shí)別這些鍵。合適的水解不穩(wěn)定的或弱的鍵合包括但不限于羧酸酯、磷酸酯、酸酐、縮醛、縮酮、酰氧基烷基醚、亞胺、原酸酯、肽、寡核苷酸、硫酯和碳酸酯。"可酶降解的鍵合"指在普通生理?xiàng)l件下經(jīng)受一種或多種酶降解的鍵合。"穩(wěn)定的"鍵合或鍵指化學(xué)部分或鍵，通常指共價(jià)鍵，其在水中是基本穩(wěn)定的，即在普通生理?xiàng)l件下，在持續(xù)的一段時(shí)間內(nèi)，不經(jīng)受任何可感知程度的水解。水解穩(wěn)定鍵合的實(shí)例包括但不限于以下碳-碳鍵(例如在脂族鏈中)、醚、酰胺、尿烷、胺以及類似的鍵合。一般來說，穩(wěn)定的鍵合是表現(xiàn)出在普通生理?xiàng)l件下水解速率小于約每天1%-2%的鍵合。代表性的化學(xué)鍵的水解速率可見于大多數(shù)標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)教科書。在描述給定組合物中的低聚物的一致性的上下文中，"基本上"或"大體上"指幾乎全部地或完全地，例如某一給定量的95%或更多、更優(yōu)選97%或更多、又更優(yōu)選98%或更多、甚至更優(yōu)選99%或更高、又再更優(yōu)選99.9%或更多、且最優(yōu)選99.99%或更多。"單分散"指這樣的一種低聚物組合物其中如色譜法或質(zhì)語法所確定，該組合物中基本上所有的低聚物具有明確的單一分子量和確定數(shù)量的單體。單分散低聚物組合物在某種意義上是純的，即基本包括具有單一和可確定數(shù)量的單體而不是幾種不同數(shù)量的單體(即具有三個(gè)或更多個(gè)不同低聚物大小的低聚物組合物)的分子。單分散低聚物組合物具有1,0005或更小的MW/Mn值、且更優(yōu)選1.0000的MW/Mn值。通過擴(kuò)展，由單分散偶聯(lián)物組成的組合物指，組合物中基本上所有偶聯(lián)物的所有低聚物具有單一和可確定數(shù)量(作為總數(shù))的單體而沒有分布，且如果低聚物沒有連接于小分子蛋白酶抑制劑的殘基則將擁有1.0005的MW/Mn值、且更優(yōu)選1.0000的MW/Mn值。然而，由單分散偶聯(lián)物組成的組合物可包含一種或多種非偶聯(lián)物質(zhì)，諸如溶劑、試劑、賦形劑等等。涉及低聚物組合物時(shí)，"雙峰"指這樣一種低聚物組合物其中組合物中基本上所有的低聚物具有兩個(gè)可確定的且不同數(shù)量(作為總數(shù))的單體之一而沒有分布，并且它們的分子量分布當(dāng)被繪圖為數(shù)量部分(numberfraction)與分子量的關(guān)系曲線時(shí)表現(xiàn)為兩個(gè)分離可辨的峰。優(yōu)選地，對(duì)于本文描述的雙峰低聚物組合物，每個(gè)峰通常是關(guān)于其平均值對(duì)稱，盡管兩個(gè)峰的大小可能不同。理論上，雙峰分布中每個(gè)峰的多分散性指數(shù)Mw/Mn是1.01或更小、更優(yōu)選1.001或更小、且甚至更優(yōu)選1.0005或更小，并且是最優(yōu)選1.0000的MW/Mn值。通過擴(kuò)展，由雙峰偶聯(lián)物組成的組合物指，組合物中基本上所有偶聯(lián)物的所有低聚物具有兩個(gè)可確定的且不同數(shù)量(作為總數(shù))的單體之一而沒有大分布，且如果低聚物沒有連接于小分子蛋白酶抑制劑激動(dòng)劑的殘基則將具有1.01或更小、更優(yōu)選1.001或更小、且甚至更優(yōu)選1.0005或更小的MW/Mn值，并且具有最優(yōu)選1.0000的MW/Mn值。然而，由雙峰偶聯(lián)物組成的組合物可包含一種或多種非偶聯(lián)物質(zhì)，諸如溶劑、試劑、賦形劑等等。本文中廣泛使用"小分子蛋白酶抑制劑"來提及通常具有小于約1000的分子量且具有一定程度的作為逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶抑制劑的活性的有機(jī)化合物、無機(jī)化合物或有機(jī)金屬化合物。小分子蛋白酶抑制劑包含具有小于約1000的分子量的寡肽和其他生物分子。"生物膜"是通常由專門的細(xì)胞或組織制成的任何膜，其作為針對(duì)至少一些外源實(shí)體或其他不希望的材料的屏障。如本文所用，"生物膜"包括與生理保護(hù)性屏障和黏膜屏障相關(guān)的那些膜，所述生理保護(hù)性屏障包括例如血-腦屏障(BBB);血-腦脊液屏障；血-胎盤屏障；血-乳屏障；血-睪丸屏障；所述黏膜屏障包括陰道黏膜、尿道黏膜、肛門黏膜、頰黏膜、舌下勦膜、直腸黏膜等等。除非上下文明確地另外指出，否則術(shù)語"生物膜"不包含與中部胃腸道(例如胃和小腸)相關(guān)的那些膜。如本文所用，"生物膜透過率"提供了化合物透過生物膜(諸如與血-腦屏障相關(guān)的膜)的能力的度量。多種方法可用于評(píng)價(jià)分子跨越任何給定的生物膜的轉(zhuǎn)運(yùn)。評(píng)價(jià)與任何給定的生物屏障(例如血-腦脊液屏障、血-胎盤屏障、血-乳屏障、腸屏障等等)相關(guān)的生物膜透過率的方法在本領(lǐng)域中是已知的，在本文和/或在相關(guān)文獻(xiàn)中描述，和/或可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員確定。涉及本發(fā)明時(shí)，"降低的代謝速率"指與沒有連接水溶性低聚物的小分子藥物(即小分子藥物自身)或參照標(biāo)準(zhǔn)材料的代謝速率對(duì)比，水溶性低聚物-小分子藥物偶聯(lián)物的代謝速率的可測(cè)量的降低。在"降低的代謝首過率"的具體情況中，需要相同的"降低的代謝速率"，除非小分子藥物(或參照標(biāo)準(zhǔn)材料)和對(duì)應(yīng)的偶聯(lián)物是口服施用?？诜┯玫乃幬飶奈改c道被吸收到門脈循環(huán)中，且在到達(dá)體循環(huán)前必須通過肝。因?yàn)楦问撬幬锎x或生物轉(zhuǎn)化的主要部位，大量的藥物在任何時(shí)候到達(dá)體循環(huán)之前可以被代謝。首過代謝以及由此的其任何的降低的程度可通過許多不同的方法測(cè)量。例如，動(dòng)物血液樣本可以定時(shí)的間隔收集，并通過液相色傳/質(zhì)鐠法分析血漿或血清的代謝水平。測(cè)量與首過代謝和其他代謝過程相關(guān)的"降低的代謝速率"的其他技術(shù)在本領(lǐng)域中是已知的，在本文和/或在相關(guān)文獻(xiàn)中描述，和/或可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員確定。優(yōu)選地，本發(fā)明的偶聯(lián)物可提供滿足以下值中的至少一個(gè)的降低的代謝速率降低至少約30%;至少約40%;至少約50%;至少約60%;至少約70%;至少約80%;以及至少約90%。"口服生物可利用的"化合物(諸如小分子藥物或其偶聯(lián)物)是當(dāng)口服施用時(shí)優(yōu)選具有超過25%、優(yōu)選超過70%的生物利用度的化合物，其中化合物的生物利用度是以未代謝形式到達(dá)體循環(huán)的所施用的藥物的部分。"烷基"指通常長度范圍為從約l個(gè)至20個(gè)原子的烴鏈。這種烴鏈優(yōu)選地而非必須地是飽和的，且可以是支鏈或直鏈，盡管通常優(yōu)選直鏈。示例性烷基包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、l-甲基丁基、l-乙基丙基、3-曱基戊基以及類似的基團(tuán)。如本文所用，當(dāng)涉及三個(gè)或更多的碳原子時(shí)，"烷基"包括環(huán)烷基。"烯基"是具有至少一個(gè)碳-碳雙鍵的2個(gè)至20個(gè)碳原子的烷基。術(shù)語"取代的烷基"或"取代的Cq-r烷基"，其中q和r是標(biāo)識(shí)烷基中含有的碳原子的范圍的整數(shù)，該術(shù)語指由一、二或三個(gè)以下基團(tuán)取代的以上烷基卣(例如F、Cl、Br、I)、三氟甲基、羥基、Ci.7烷基(例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、丁基、叔丁基等等)、Cw烷氧基、d.7酰氧基、Cw雜環(huán)、氨基、苯氧基、硝基、羧基、羧基、?；?、氰基。被取代的烷基可以是用相同或用不同的取代基取代一次、兩次或三次。"低級(jí)烷基"指含有l(wèi)個(gè)至6個(gè)碳原子的烷基，且可以是直鏈或支鏈，如由甲基、乙基、正丁基、異丁基、叔丁基所示例。"低級(jí)烯基，，指具有至少一個(gè)碳-碳雙鍵的2個(gè)至6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基。"無干擾取代基"指當(dāng)存在于分子中時(shí)通常不與該分子中含有的14其它官能團(tuán)反應(yīng)的那些基團(tuán)。"烷氧基"指-O-R基團(tuán)，其中R是烷基或取代的垸基，優(yōu)選C,-C20烷基(例如曱氧基、乙氧基、丙氧基、千基等等)，優(yōu)選d-C7。"藥學(xué)上可接受的賦形劑"或"藥學(xué)上可接受的栽體"指可包含于本發(fā)明的組合物中以提供具有超過缺少這種組分的組合物的優(yōu)勢(shì)(例如更加適合于施用至患者)的組合物并且被認(rèn)為不會(huì)對(duì)患者引起顯著的不良毒理學(xué)影響的組分。術(shù)語"芳基"指具有多達(dá)14個(gè)碳原子的芳香基。芳基包括苯基、萘基、聯(lián)苯基、菲基、萘并萘基(naphthacenyl)以及類似的基團(tuán)。"取代的苯基"和"取代的芳基"分別指用選自鹵(F、Cl、Br、I)、羥基、羥基、氰基、硝基、烷基(例如d-6烷基)、烷氧基(例如Cw烷氧基)、芐氧基、羧基、芳基等等的一、二、三、四或五個(gè)(例如1-2、1-3或1-4個(gè))取代基取代的苯基和芳基。"含有芳烴的部分"是含有至少一個(gè)芳基和任選地一個(gè)或多個(gè)原子的原子集合。合適的含有芳烴的部分在本文中描述。為簡單起見，化學(xué)部分通篇主要定義為或稱為單價(jià)化學(xué)部分(例如，烷基、芳基等等)。然而，在本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚的適當(dāng)結(jié)構(gòu)環(huán)境下，這些術(shù)語還用于表達(dá)對(duì)應(yīng)的多價(jià)部分。例如，盡管"烷基"部分通常指單價(jià)基團(tuán)(例如CH3-CH2-)，但在某些情況下，二價(jià)連接部分可以是"烷基"，在此情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解烷基為二價(jià)基團(tuán)(例如-CHrCHr),其等同于術(shù)語"亞烷基"。(相似地，在其中需要二價(jià)部分并將其陳迷為"芳基"的情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，術(shù)語"芳基"指對(duì)應(yīng)的二價(jià)部分，亞芳基)。應(yīng)理解，所有的原子具有用于它們鍵形成的化合價(jià)的正常數(shù)(即碳為4，N為3，O為2，且S根據(jù)S的氧化態(tài)，為2、4或6)。"藥理學(xué)上有效量"、"生理學(xué)上有效量"和"治療有效量"本文中可互換使用，指在血流或靶組織中提供活性劑和/或偶聯(lián)物的閥值水平所需的，存在于組合物中的水溶性低聚物一小分子藥物偶聯(lián)物的量。精確的量將取決于許多因素，例如特定的活性劑、組合物的組分和物理特征、預(yù)期的患者群體、患者考量(patientconsideration)以及類似的因素，并且可由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本文提供的以及相關(guān)文獻(xiàn)中可用的信息容易地確定。"雙官能"低聚物是具有包含于其中，通常在其末端處的兩個(gè)官能團(tuán)的低聚物。當(dāng)官能團(tuán)相同時(shí)，低聚物被稱為是同雙官能的(homodifimctional)。當(dāng)官能團(tuán)不同時(shí)，低聚物被稱為是異雙官能的(heterobifunctional)。本文描述的堿性反應(yīng)物或酸性反應(yīng)物包括中性的、帶電的及其任^r相應(yīng)的鹽形式。術(shù)語"患者"指患有或易患可通過施用本文描述的偶聯(lián)物預(yù)防或治療的疾患的活體，并且包括人和哺乳動(dòng)物，所述偶聯(lián)物通常，但不必須是以水溶性低聚物-小分子藥物偶聯(lián)物的形式。"任選的"或"任選地"指隨后描述的情況可能但不需要必須發(fā)生，所以該描述包括其中該情況發(fā)生的實(shí)例和其中該情況不發(fā)生的實(shí)例。如上文所述，本發(fā)明涉及(除其他方面以外)包含直接或通過一個(gè)或多個(gè)原子經(jīng)穩(wěn)定的鍵合共價(jià)連接于水溶性非肽低聚物的蛋白酶抑制劑的殘基的化合物。本發(fā)明還提供具有以下結(jié)構(gòu)的化合物X—POLY其中蛋白酶抑制劑K小分子蛋白酶抑制劑的殘基；(a)是值為1到3的整數(shù)，包含1和3;X每次出現(xiàn)時(shí)，是穩(wěn)定的鍵合；且POLY每次出現(xiàn)時(shí)，是水溶性非肽低聚物。本發(fā)明的化合物是低聚物和蛋白酶抑制劑的偶聯(lián)物。認(rèn)為本發(fā)明的偶聯(lián)物的一個(gè)優(yōu)勢(shì)是它們保留某種程度的蛋白酶活性而且還表現(xiàn)出代謝降低的能力。盡管不希望受理論束縛，但認(rèn)為本文描述的含有低聚物的偶聯(lián)物一一相比于未偶聯(lián)的"原始的"蛋白酶抑制劑一一并不同樣容易地被代謝，因?yàn)榈途畚锲鸬浇档突衔锱c可代謝蛋白酶抑制劑的基質(zhì)的總親和力的作用。如上文所述，本發(fā)明的化合物包括小分子蛋白酶抑制劑的殘基。小分子蛋白酶抑制劑是可降低逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶活性的任何小分子。用于確定化合物(不論化合物是否是以偶聯(lián)形式)是否是蛋白酶抑制劑的測(cè)定在下文中描述。作為小分子蛋白酶抑制劑的已知化合物包括選自以下類型的那些化合物氮雜己烷衍生物(azahexanederivative);氨基酸衍生物；非肽4汙生物；他喃酮化合物；戊-l-胺4汙生物(pentan-l-amine);己-2-基氨基甲酸酯衍生物；磺酰胺衍生物；以及三取代苯基衍生物。還可使用不必須屬于上述類型中的任一種的其他小分子蛋白酶抑制劑。關(guān)于是小分子蛋白酶抑制劑的氮雜己烷衍生物，優(yōu)選的氮雜己烷衍生物具有下式，及其鹽其中R"是低級(jí)烷氧羰基；R12是仲或叔低級(jí)烷基或低級(jí)烷基硫代-低級(jí)烷基；R"是未取代的或由一個(gè)或多個(gè)低級(jí)烷氧基或C4-8環(huán)烷基取代的苯基；R"是苯基或環(huán)己基，每個(gè)在4位由不飽和的雜環(huán)基取代，所述雜環(huán)基通過環(huán)碳原子鍵合，具有5個(gè)至8個(gè)環(huán)原子，含有選自基團(tuán)氮、氧、硫、亞磺?；?-SO-)和磺?；?-S02-)的l個(gè)至4個(gè)雜原子，且是未取代的，或由低級(jí)烷基或苯基-低級(jí)烷基取代；R"是仲或叔低級(jí)烷基或低級(jí)烷基硫代-低級(jí)烷基；且R"是低級(jí)烷氧羰基。一種特別優(yōu)選的氮雜己烷衍生物是下式的化合物其還被稱為阿扎那韋。阿扎那韋和其他的氮雜己烷衍生物以及它們的合成方法被描述于美國專利第5,849,911號(hào)中。關(guān)于是小分子蛋白酶抑制劑的氨基酸衍生物，優(yōu)選的氨基酸衍生物具有下式及其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽《j(式H)其中Rm是節(jié)氧羰基或2-喹啉基羰基。一種特別優(yōu)選的氨基酸衍生物是還被稱為沙奎那韋的式II的化合物，其中Rm是2-喹啉基羰基。這種氨基酸衍生物以及它們的合成方法被描述于美國專利第5，196，438號(hào)中。關(guān)于是小分子蛋白酶抑制劑的非肽衍生物，優(yōu)選的非肽衍生物具有以下結(jié)構(gòu)或其藥學(xué)上可接受的鹽(式ni)其中R""和R""獨(dú)立地選自氫、以及取代的和未取代的烷基和芳基，且R""和R""可與G形成環(huán)；R""選自巰基和取代的與未取代的烷氧基、芳氧基、硫醚、氨基、烷基、環(huán)烷基、飽和的和部分飽和的雜環(huán)、以及芳基；R""、RIII5、Rm6、R""和R脂獨(dú)立地選自氬、羥基、巰基、硝基、鹵、其中J是取代的或未取代的可水解基團(tuán)的-O-J、和取代的與未取代的烷氧基、芳氧基、硫醚、?；喕酋；⒒酋；?、氨基、烷基、環(huán)烷基、飽和的和部分飽和的雜環(huán)和芳基，并且此外其中R""、R"15、R"16、R""和R""中的任何一個(gè)可以是螺環(huán)的成員，且R""、Rlm、Rlm、R""和Ri"s中的任何兩個(gè)可一起為環(huán)的成員；Y和G獨(dú)立地選自氧、-NH、-N-烷基、硫、竭以及兩個(gè)氫原子，D是碳或氮；E是碳或氮；R""選自氫、卣、羥基、琉基以及取代的和未取代的烷氧基、芳氧基、硫醚、氨基、烷基和芳基，其中R""可形成環(huán)的一部分；A是碳環(huán)或雜環(huán)，其任選地被進(jìn)一步取代，且B是碳環(huán)或雜環(huán)，其任選地被進(jìn)一步取代。是小分子蛋白酶抑制劑的一種特別優(yōu)選的非肽衍生物是下式的化合物其還被稱為奈非那韋。奈非那韋和其他的非肽衍生物以及它們的合成方法被描述于美國專利第5,484,926號(hào)和WO95/09843中。關(guān)于是小分子蛋白酶抑制劑的吡喃酮化合物，優(yōu)選的吡喃酮化合物具有以下結(jié)構(gòu)或其藥學(xué)上可接受的鹽其中:R1V4是H;R1V2是C3.5烷基、苯基-(CH2)2-、雜環(huán)基(heterocycyl)-S02NH-(CH2)2-、環(huán)丙基-(CH2)2-、F-苯基-(CH2)r、雜環(huán)基-S02NH-苯基-或F3C-(CH2)2-;或R1V1和RIV2合在一起為雙Riv3是Riv4-(CH2)n,_CH(RIV5)-、H3C-\(1^'8)-，其中R^是低級(jí)烷基、環(huán)烷基、-011或-]\111^,其中R"是氫、低級(jí)烷基或胺保護(hù)基。是小分子蛋白酶抑制劑的一種特別優(yōu)選的己-2-基氨基甲酸酯衍生物是下式的化合物其還被稱為洛匹那韋。利托那韋、洛匹那韋和其他的己-2-基氨基甲酸酯衍生物以及它們的合成方法被描述于美國專利第5,541,206號(hào)和WO94/14436中。關(guān)于是小分子蛋白酶抑制劑的磺酰胺衍生物，優(yōu)選的磺酰胺衍生物具有以下結(jié)構(gòu)及其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或前藥davi1—(bvii)x,-nh-ch—ch—ch2n—s02—evi16hd!(式VII)其中AV"選自由H、Het、-R糧-Het、-Rvm-C"烷基和-R則-C2-6烯基組成的組，所述-RW"-d-6烷基可任選地用選自由羥基、Cw烷氧基、Het、-O-Het、-1^112-(:(0)-]\(1^"2)(1^"2)和-(:(0)-]\(1^"2)(1^112)組成的組的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，所述Rvt"-C2-6烯基可任選地用選自由羥基、d.4烷氧基、Het、-O畫Het、-NRVH2-C(0)N(RVII2)(Rv"2)和-C(0)-N(RV""(RV""組成的組的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代；每個(gè)RV111獨(dú)立地選自由-c(o)-、-so2-、-c(o)c(o)-、-o誦c(o)-、-so2、-S(0)2-C(0)誦和畫NRV"2C(0)-以及-NRV"2-C(0)-C(0)-組成的組；每個(gè)Het獨(dú)立地選自由以下基團(tuán)組成的組Cw環(huán)烷基；<:5.7環(huán)烯基；Cw。芳基；以及5-7元飽和的或不飽和的雜環(huán)，其含有選自N、N(RVII2)、O、S和S(OV，,的一個(gè)或多個(gè)雜原子，其中所述雜環(huán)可任選地被苯并稠合(benzofused);且其中所述Het的任何成員可任選地用選自由以下基團(tuán)組成的組的一個(gè)或多個(gè)取代基取代氧代、-ORv"2、-Rv"2、-N(Rvm)、-RVII2-OH、-CN、C02RVI12、-C(0)N(Rvm)(Rvm)、S02-N(RVII2)(RVII2)、-N(RVII2)-C(0)-Rvm、-C(0)-Rvm、-S(0)n,"-Rvm、-OCF3、-S(0)n,"-Ar、亞甲二氧基、-N(Rvm)-S02(RVI12)、卣、-CF3、-N02、Ar和-O-Ar;每個(gè)RV"z獨(dú)立地選自由H和任選地用Ar取代的Cw烷基組成的組；BV"當(dāng)存在時(shí)，是-N(RVII2)-C(Rv"3)(RVII3)-C(0)-;x'是0或1;每個(gè)Rv"3獨(dú)立地選自由H、Het、d—6烷基、<:2.6烯基、(:3_6環(huán)烷基和<:5-6環(huán)烯基組成的組，其中所述RW"的任何成員(除了H)可任選地用選自由-ORV"2、-C(0)-NH-RVI12、-S(0)n',.-N(RVII2)(Rvm)、Het、-CN、-SRvm、-C02Rvii2、NRvm-C(0)-RVI12組成的組的一個(gè)或多個(gè)取代基取代；每個(gè)n，"獨(dú)立地是1或2;D和D'獨(dú)立地選自由以下基團(tuán)組成的組Ar;d.4烷基，其可任選地用選自<:3.6環(huán)烷基、-ORVII2、-Rv"3、-O-Ar和Ar的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代；C2.4烯基，其可任選地用選自由C3-6環(huán)烷基、-ORVII2、-RVII3、-O-Ar和Ar組成的組的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代；<:3.6環(huán)烷基，其可任選地用Ar取代或與Ar稠合；以及C^環(huán)烯基，其可任選地用Ar取代或與Ar稠合；每個(gè)Ar獨(dú)立地選自由苯基、3-6元碳環(huán)和5-6元雜環(huán)組成的組，5-6元雜環(huán)含有選自O(shè)、N、S、S(O)n，,，和N(RV"2)的一個(gè)或多個(gè)雜原子，其中所述碳環(huán)或雜環(huán)可以是飽和的或不飽和的，且任選地用選自由以下基團(tuán)組成的組的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代氧代、-ORVI12、-Rv"2、-N(RVII2)(RVI12)、-N(RVII2)-C(0)Rv"2、-Rv"2-0H、-CN、-C02RVI12、-C(0)-N(RV112)(RVII2)、卣和-CF3;E選自由以下基團(tuán)纟且成的組Het;O-Het;Het-Het;-0-Rv"3;-NRVII2Rvm;d-6烷基，其可任選地用選自由RVI"和Het組成的組的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代；Cw烯基，其可任選地用選自由RV'"和Het組成的組的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代；C3-6飽和碳環(huán)，其可任選地用選自由R^"和Het組成的組的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代；以及<:5.6不飽和碳環(huán)，其可任選地用選自由R^"和Het組成的組的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代；且每個(gè)RV"4獨(dú)立地選自由-ORV"2、-C(0)-NHRVII2、S02-NHRVII2、卣、-NRVII2-C(0)-Rv"3和-CN組成的組。是小分子蛋白酶抑制劑的一種特別優(yōu)選的磺酰胺衍生物是下式的化合物其還被稱為安普那韋。是小分子蛋白酶抑制劑的另一種特別優(yōu)選的磺酰胺衍生物是下式的化合物安普那韋、U-140690和其他的磺酰胺衍生物以及它們的合成方法被描述于美國專利第5，732，490和5,585,397號(hào)、WO93/23368和WO95/30670中?；酋０费苌锏囊环N特別優(yōu)選的前藥形式是被稱為夫沙那韋(fosamprenavir)的、具有下式的、基于膦酰氧基的前藥及其藥學(xué)上可接受的鹽夫沙那韋和其他磺酰胺衍生物以及它們的合成方法被描述于美國專利第6,514,953和6,436,989號(hào)中。關(guān)于是小分子蛋白酶抑制劑的三取代苯基衍生物，優(yōu)選的三取代苯基衍生物具有以下結(jié)構(gòu)及其藥學(xué)上可接受的鹽U誦l楊90。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>其中rv""是千基；RV"u是節(jié)基或低級(jí)烷基；Rv""是低級(jí)烷基；且ooJL義一NNH—NNHrV川s是或*^A0,這些和其他小分子蛋白酶抑制劑以及它們的合成方法被描述于WO97/21685中。如先前所述，小分子蛋白酶抑制劑可能并不必定歸類于前述類之一。然而，這種小分子蛋白酶抑制劑仍可偶聯(lián)于如本文描述的水溶性非肽低聚物。非限制性的其他小分子蛋白酶抑制劑包括化合物oDMP-323;oh2nDMP-450;以及相關(guān)的化合物，其公開于WO93/07128中另外其他的小分子蛋白酶抑制劑包括27SC-55389a和描述于WO95/06061的其他抑制劑。另外其他的小分子蛋白酶抑制劑包括BILA1096BS;和描述于EP560268的其他抑制劑。在一些實(shí)施方案中，優(yōu)選的是，小分子蛋白酶抑制劑選自由安普那韋、阿扎那韋、夫沙那韋、茚地那韋、洛匹那韋、沙套那韋、奈非那韋、利托那韋、替拉那韋(tipranovir)和地瑞那韋組成的組。這些(和其他)蛋白酶抑制劑中的每一個(gè)可(直接地或通過一個(gè)或多個(gè)原子)共價(jià)連接于水溶性非肽低聚物。本發(fā)明中有用的小分子藥物一般具有小于1000Da的分子量。小分子藥物的示例性的分子量包括以下分子量小于約950;小于約900;小于約850;小于約800;小于約750;小于約700;小于約650;小于約600;小于約550;小于約500;小于約450;小于約400;小于約350;以及小于約300。如果本發(fā)明中使用的小分子藥物是手性的，那么該小分子藥物可以是以外消旋混合物，或旋光形式，例如單一旋光對(duì)映體，或?qū)τ丑w的任何組合或比例(即非外消旋混合物(scalemicmixture))。此夕卜，該小分子藥物可具有一個(gè)或多個(gè)幾何異構(gòu)體。就幾何異構(gòu)體而言，組合物可包括單一幾何異構(gòu)體，或兩個(gè)或更多個(gè)幾何異構(gòu)體的混合物。用于本發(fā)明的小分子藥物可以是以其通常的活性形式，或可具有某種程度的修飾。例如，在低聚物的共價(jià)連接之前或之后，小分子藥物可具有連接于其的耙向劑(targetingagent)、標(biāo)記物或運(yùn)載體(transporter)?？蛇x地，小分子藥物可具有連接于其的親油部分，諸如磷脂(例如二硬酯酰磷脂酰乙醇胺或"DSPE"、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺或"DPPE"等等)或小的脂肪酸。然而，在一些實(shí)例中，優(yōu)選的是，小分子藥物部分不包括至親油部分的連接。用于偶聯(lián)于水溶性非肽低聚物的小分子蛋白酶抑制劑具有適合于共價(jià)連接于低聚物的游離反應(yīng)基，諸如羥基、酰胺、羧基、硫代、氨基或類似的基團(tuán)(即"柄(handle)")。此外，可通過引入反應(yīng)基，優(yōu)選地通過將其現(xiàn)存的官能團(tuán)之一轉(zhuǎn)化為適合于在低聚物和藥物之間形成穩(wěn)定的共價(jià)鍵合的反應(yīng)基，來修飾小分子蛋白酶抑制劑。兩種方法都闡述于實(shí)驗(yàn)部分中。水溶性非肽低聚物通常包含順次連接以形成單體鏈的一個(gè)或多個(gè)單體。低聚物可由單一單體類型形成(即為同低聚物的)，或由兩種或三種單體類型形成(即為共低聚物的)。優(yōu)選地，每種低聚物是兩種單體的共低聚物(co-oligomer),或更優(yōu)選，是同低聚物(homo-oligomer)。因此，每種低聚物主要由至多三種不同的單體類型組成，所述單體類型選自由以下單體類型組成的組環(huán)氧烷，諸如環(huán)氧乙烷或環(huán)氧丙烷；烯醇，諸如乙烯醇、l-丙烯醇或2-丙烯醇；乙烯基吡咯烷酮；羥烷基曱基丙烯酰胺或羥烷基甲基丙烯酸酯，其中烷基優(yōu)選是甲基；a-羥酸，諸如乳酸或乙醇酸；磷腈、噁唑啉、氨基酸、糖類諸如單糖、糖類或甘露醇；以及N-丙烯酰嗎啉。優(yōu)選的單體類型包括環(huán)氧烷、烯醇、羥烷基曱基丙烯酰胺或羥烷基甲基丙烯酸酯、N-丙烯酰嗎啉和a-羥酸。優(yōu)選地，每種低聚物獨(dú)立地是選自該組的兩種單體類型的共低聚物，或更優(yōu)選地，是選自該組的一種單體類型的同低聚物。共低聚物中的兩種單體類型可以是相同的單體類型，例如兩種環(huán)氧烷，諸如環(huán)氧乙烷和環(huán)氧丙烷。優(yōu)選地，低聚物是環(huán)氧乙烷的同低聚物。盡管不是必須的，但通常封住低聚物的沒有共價(jià)連接于小分子的一個(gè)末端(或多個(gè)末端)以使其不起反應(yīng)?？蛇x地，末端可包含反應(yīng)基。當(dāng)末端是反應(yīng)基時(shí)，選擇反應(yīng)基使得其在形成最終低聚物的條件下或在低聚物共價(jià)連接于小分子藥物期間不起反應(yīng)，或必要時(shí)將其保護(hù)。一種常見的末端官能團(tuán)是羥基或-OH，尤其是對(duì)于低聚環(huán)氧乙烷(oligoethyleneoxide)來說。',I蛋白酶抑制in~-X-POLY水溶性非肽低聚物(例如在偶聯(lián)物式1^^^"Yja中的"POLY")可具有許多不同幾何形狀中的任何一個(gè)。例如，水溶性非肽低聚物可以是直鏈的、支鏈的或叉狀的。最常見地，水溶性非肽低聚物是直鏈的或是支鏈的，例如具有一個(gè)支化點(diǎn)。盡管本文討論的許多聚焦于作為示例性低聚物的聚(環(huán)氧乙烷)，但本文中提供的討論和結(jié)構(gòu)可被容易地延伸以包含以上描述的水溶性非肽低聚物中的任何一個(gè)。不包括連接體(linker)部分的水溶性非肽低聚物的分子量，通常是相對(duì)較低的。水溶性聚合物的分子量的示例性值包括低于約1500道爾頓；低于約1450道爾頓；低于約1400道爾頓；低于約1350道爾頓；低于約1300道爾頓；低于約1250道爾頓；低于約1200道爾頓；低于約1150道爾頓；低于約1100道爾頓；低于約1050道爾頓；低于約1000道爾頓；低于約950道爾頓；低于約900道爾頓；低于約850道爾頓；低于約800道爾頓；低于約750道爾頓；低于約700道爾頓；低于約650道爾頓；低于約600道爾頓；低于約550道爾頓；低于約500道爾頓；低于約450道爾頓；低于約400道爾頓；低于約350道爾頓；低于約300道爾頓；低于約250道爾頓；低于約200道爾頓；低于約150道爾頓；和低于約100道爾頓。水溶性非肽低聚物(不包括連接體)的分子量的示例性范圍包括從約100至約1400道爾頓；從約100至約1200道爾頓；從約100至約800道爾頓；從約100至約500道爾頓；從約100至約400道爾頓；從約200至約500道爾頓；從約200至約400道爾頓；從約75至1000道爾頓；以及從約75至約750道爾頓。優(yōu)選地，水溶性非肽低聚物中的單體數(shù)量落在以下范圍(包含所提供的每個(gè)范圍的端點(diǎn))中的一個(gè)或多個(gè)中在約1和約30之間；在約1和約25之間；在約1和約20之間；在約1和約15之間；在約1和約12之間；在約1和約10之間。在某些實(shí)例中，低聚物(及其對(duì)應(yīng)的偶聯(lián)物)中連續(xù)的單體的數(shù)量是l、2、3、4、5、6、7或8中的一個(gè)。在其他的實(shí)施方案中，低聚物(及其對(duì)應(yīng)的偶聯(lián)物)包含9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個(gè)連續(xù)的單體。在又進(jìn)一步的實(shí)施方案中，低聚物(及其對(duì)應(yīng)的偶聯(lián)物)具有21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個(gè)連續(xù)的單體。因此，例如，當(dāng)水溶性非肽聚合物包括CH3-(OCH2CH2)n-時(shí)，則"n"是整數(shù)，該整數(shù)可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30，且可落在以下范圍中的一個(gè)或多個(gè)中在約1和約25之間；在約1和約20之間；在約1和約15之間；在約1和約12之間；在約1和約10之間。當(dāng)水溶性非肽低聚物具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)單體時(shí)，這些值分別對(duì)應(yīng)具有約75、119、163、207、251、295、339、383、427和471道爾頓的分子量的甲氧基封端的低聚(環(huán)氧乙烷)。當(dāng)?shù)途畚锞哂衛(wèi)l、12、13、14或15個(gè)單體時(shí)，這些值分別對(duì)應(yīng)具有相當(dāng)于約515、559、603、647和691道爾頓的分子量的曱氧基封端的低聚(環(huán)氧乙烷)。當(dāng)水溶性非肽低聚物連接于小分子蛋白酶抑制劑(與逐步加入一種或多種單體以使低聚物有效地"生長，，到小分子蛋白酶抑制劑上不同)時(shí)，優(yōu)選的是，含有活化形式的水溶性非肽低聚物的組合物是單分散的。然而，在其中使用雙峰組合物的那些實(shí)例中，組合物將具有以單體的以上數(shù)量中的任何兩個(gè)為中心的雙峰分布。理論上，雙峰分布中的每個(gè)峰的多分散性指數(shù)Mw/Mn是1.01或更小，并更優(yōu)選為1.001或更小，并更優(yōu)選為1.0005或更小。最優(yōu)選，每個(gè)峰具有1.0000的Mw/Mn值。例如，雙峰低聚物可具有單體亞單元的以下示例性組合中的任何一個(gè)1-2、1-3、1-4、1-5、1-6、l曙7、1-8、1-9、1-10等等;2誦3、2-4、2-5、2-6、2-7、2曙8、2-9、2-10等等;3-4、3-5、3國6、3-7、3國8、3誦9、3-10等等;4-5、4-6、4-7、4-8、4-9、4-10等等;5-6、5-7、5-8、5-9、5-10等等;6-7、6-8、6-9、6-10等等;7-8、7-9、7-10等等；以及8-9、8-10等等。在一些實(shí)例中，含有活化形式的水溶性非肽低聚物的組合物將是三峰的(trimodal)或甚至是四峰的(tetramodal)，其具有如先前描述的一系列單體單元。具有非常明確的低聚物的混合物的低聚物組合物(即為雙峰、三峰、四峰等等)可通過混合純化的單分散低聚物來制備，以獲得所需特征的低聚物(僅單體數(shù)量不同的兩種低聚物的混合物是雙峰的；僅單體數(shù)量不同的三種低聚物的混合物是三峰的；僅單體數(shù)量不同的四種低聚物的混合物是四峰的；)，或可選地，可通過回收"中間餾分(centercut)"從多分散低聚物的柱色譜法獲得，以獲得所需的和確定的分子量范圍的低聚物的混合物。優(yōu)選的是，從優(yōu)選地是單分子或單分散的組合物獲得水溶性非肽低聚物。即組合物中的低聚物具有相同的不連續(xù)的分子量值，而不是分子量的分布。一些單分散低聚物可從商業(yè)來源購買，諸如可獲自Sigma-Aldrich的那些，或可選地，可直接從商業(yè)上可獲得的起始物料(諸如Sigma-Aldrich)制備?？扇鏑henY"Baker,G,L,，J.Org.Chem.，6870-6873(1999)、WO02/098949和美國專利申請(qǐng)公布2005/0136031中所描述的來制備水溶性非肽低聚物。連接體或鍵合(水溶性非肽聚合物通過它們連接于小分子蛋白酶抑制劑)至少包括共價(jià)鍵，并通常包括諸如氧的一個(gè)或多個(gè)原子、兩個(gè)原子或多個(gè)原子。連接體的性質(zhì)通常但不必須是直鏈的。鍵合"X"lI蛋白酶抑制CVJ"X-POL丫l,(在lJa中)是穩(wěn)定的鍵合，并優(yōu)選還是酶促穩(wěn)定的。優(yōu)選地，鍵合"X"是具有小于約12個(gè)原子，且優(yōu)選小于約IO個(gè)原子，且甚至更優(yōu)選小于約8個(gè)原子，且甚至更優(yōu)選小于約5個(gè)原子的鏈長的鍵合，由此長度指單鏈中不計(jì)算取代基的原子的數(shù)量。例如，脲鍵合諸如這個(gè)R低聚物-NH-(OO)-NH-R'藥物，4皮認(rèn)為是具有3個(gè)原子(-|^H-￡(0)-MH-)的鏈長。在選擇的實(shí)施方案中，鍵合不包括另外的間隔基團(tuán)(spacergroup)。在一些實(shí)例中，連接體"X"包括醚、酰胺、尿烷、胺、疏醚、脲或碳-碳鍵。諸如下文中討論的和實(shí)施例中示例的那些官能團(tuán)，通常用于形成鍵合。鍵合還可較不優(yōu)選地包括(或鄰接于或側(cè)面連接于)間隔基團(tuán)。在其中由于低聚物的位置相對(duì)接近于小分子藥物的殘基而使偶聯(lián)物的生物活性顯著降低的實(shí)例中，間隔物是最有用的，其中間隔物可起到增加低聚物和小分子藥物的殘基之間的距離的作用。更加具體地，在選擇的實(shí)施方案中，間隔部分X可以是以下中的任何一個(gè)"-"(即在小分子蛋白酶抑制劑的殘基和水溶性非肽低聚物之間的可以是穩(wěn)定的或可降解的共價(jià)鍵)、-O-、-NH-、-S-、-C(O)-、C(O)-NH、NH-C(O)-NH、O-C(O)-NH、-C(S)-、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CH2-、-OCH2-、-CH2-0-、-OCH2-CH2-、-CH2-OCH2-、-CH2-CH20-、-OCH2-CH2-CH2-、-CH2-OCH2-CH2-、-CH2-CH2OCH2-、-CH2-CH2-CH2-0-、-0-CH2-CH2-CH2-CH2-、-CH2-OCH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-OCH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-OCH2-、CH2-CH2-CH2-CH2-O-、-C(0)NH-CH2-、-C(0)-NH-CH2-CH2-、-CH2C(0)-NH-CH2-、國CH2CH2-C(0)-NH-、-C(0)-NH-CH2-CH2-CH2-、-CH2-C(0)-NH-CH2-CH2、-CH2-CH2C(0)-NHCH2-、-CH2-CH2CH2-C(0)NH-、-C(O)-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-、-CH2C(0)-NH-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-C(0)-NHCH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2C(0)NH-CH2-、-CH2-CH2-CH2-C(0)-NHCH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CH2-C(0)-NH-、-NH-C(0)-CH2-、-CH2NH-C(0)-CH2-、-CH2-CH2-NH-CXO)-CH2-、-NH-C(0)-CH2-CH2-、CH2-NH-C(0)-CH2-CH2、-CH2-CH2NH-C(0)-CH2-CH2、-C(0)-NHCH2-、-C(0)-NH-CH2-CH2-、-0-C(0)-NH-CH2-、-0-C(0)-NH-CH2CH2-、-NH-CH2-、-NHCH2-CH2-、-CH2-NHCH2-、-CH2-CH2-NH-CH2-、-C(0)-CH2-、-C(0)CH2-CH2-、-CH2-C(0)-CH2-、CH2-CH2-C(0)-CH2-、-CH2-CH2-C(0)-CH2-CH2-、-CH2-CH2C(0)-、-CH2-CH2-CH2-C(0)-NH-CH2-CH2-NH-、-CH2-CH2-CH2-C(0)-NHCH2-CH2-NHC(O)誦、-CH2-CH2CH2-C(0)-NH-CH2-CH2-NH-C(0)-CH2-、二價(jià)環(huán)烷基、-N(R6)-,議6是H或選自由以下基團(tuán)組成的組的有機(jī)基烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基和取代的芳基。然而，對(duì)于本發(fā)明來說，當(dāng)一組原子直接鄰接于低聚物部分，且該組原子與低聚物的單體相同，以致該組將表示低聚物鏈的純粹的延伸時(shí)，該組原子并不被認(rèn)為是間隔部分。水溶性非肽低聚物和小分子之間的鍵合"X"通常通過低聚物(或當(dāng)需要使低聚物"生長"到蛋白酶抑制劑時(shí)的一個(gè)或多個(gè)單體)的末端上的官能團(tuán)和蛋白酶抑制劑中的對(duì)應(yīng)官能團(tuán)的反應(yīng)來形成。示例性反應(yīng)在下文中簡要描述。例如，低聚物上的氨基可與小分子上的羧酸或活化的羧酸衍生物反應(yīng)以形成酰胺鍵合，或反之亦然?？蛇x地，低聚物上的胺與藥物上活化的碳酸酯(例如琥珀酰亞胺碳酸酯或苯并三唑基碳酸酯)反應(yīng)形成氨基甲酸酯鍵合，或反之亦然。低聚物上的胺與藥物上的異氰酸酯(R-N=C=0)反應(yīng)形成脲鍵合(R-NH-(C-O)-NH-R，)，或反之亦然。此外，低聚物上的醇(醇鹽)基團(tuán)與藥物中的鹵代烷或鹵化物基團(tuán)反應(yīng)形成醚鍵合，或反之亦然。在又一個(gè)偶聯(lián)方法中，具有醛官能的小分子通過還原性胺化偶聯(lián)于低聚物的氨基，導(dǎo)致在低聚物和小分子之間形成仲胺鍵合。一種特別優(yōu)選的水溶性非肽低聚物是含有醛官能團(tuán)的低聚物。在這一點(diǎn)上，低聚物將具有以下結(jié)構(gòu)CH30-(CH2-CH20)n-(CH2)p-C(0)H，其中(n)是l、2、3、4、5、6、7、8、9和10中的一個(gè)，且(p)是l、2、3、4、5、6和7中的一個(gè)。優(yōu)選的(n)值包括3、5和7,且優(yōu)選的(p)值包括2、3和4。此外，-C(O)H部分a位的碳原子可任選地用烷基取代。通常，包封不含有官能團(tuán)的水溶性非肽低聚物的末端以使其不起反應(yīng)。當(dāng)?shù)途畚镌谀┒颂幍拇_包含除了預(yù)期用于形成偶聯(lián)物的官能團(tuán)之外的另外的官能團(tuán)時(shí)，選擇該基團(tuán)以使其在形成鍵合"X"的條件下不起反應(yīng)，或在形成鍵合"X"期間保護(hù)該基團(tuán)。如上所述，偶聯(lián)前，水溶性非肽低聚物包括至少一個(gè)官能團(tuán)。根據(jù)小分子中含有的反應(yīng)基或引入到小分子中的反應(yīng)基，該官能團(tuán)通常包括用于共價(jià)連接于小分子的親電子基團(tuán)或親核基團(tuán)?？纱嬖谟诘途畚锘蛐》肿又械挠H核基團(tuán)的實(shí)例包括羥基、胺、肼(-NHNH2)、酰肼(-C(0)NHNH2)和硫醇。優(yōu)選的親核體包括胺、肼、酰肼和硫醇，特別是胺。用于共價(jià)連接于低聚物的大多數(shù)小分子藥物將具有游離的羥基、氨基、硫代、醛基、酮基或羧基?？纱嬖谟诘途畚锘蛐》肿又械挠H電子官能團(tuán)的實(shí)例包括羧酸、羧酸酯特別是酰亞胺酯、原酸酯、碳酸酯、異氰酸酯、異硫氰酸酯、醛、酮、硫酮、烯基、丙烯酸酯、曱基丙烯酸酯、丙蟑酰胺、砜、馬來酰亞胺、二硫化物、硪代、環(huán)氧、磺酸酯、硫代磺酸酯、硅烷、烷氧基硅烷和卣代硅烷。這些基團(tuán)的更加具體的實(shí)例包括琥珀酰亞胺基酯或琥珀酰亞胺基碳酸酯、咪唑基(imidazoyl)酯或咪唑基碳酸酯、苯并三唑酯或苯并三唑碳酸酯、乙烯基砜、氯乙基砜、乙烯基吡啶、吡啶基二硫化物(pyridyldisulfide)、碘乙酰胺、乙二醛、二酮、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯和三氟乙基磺酸酯(tresylate)(2，2，2-三氟乙烷磺酸酯)。還包括這些基團(tuán)中的幾種的石充類似物諸如硫酮、硫酮水合物、酮縮硫醇，2-塞唑烷硫酮等等，以及以上部分中的任何一個(gè)的水合物或被保護(hù)的衍生物(例如，醛水合物、半縮醛、縮醛、酮水合物、半縮35酮、縮酮、酮縮疏醇、硫縮醛)。羧酸的"活化衍生物"指容易地與親核體反應(yīng)的羧酸衍生物，其通常遠(yuǎn)比未衍生化的羧酸更加容易地反應(yīng)。例如，活化的羧酸包括?；?諸如酰基氯)、酸酐、碳酸酯和酯。這種酯包括通式-(CO)O-Nf(CO)-h的亞胺酯；例如，N-羥基琥珀酰亞胺基(NHS)酯或N-羥基鄰苯二曱酰亞胺基酯。還優(yōu)選的是咪唑基酯和苯并三唑酯。特別優(yōu)選的是活化的丙酸酯或丁酸酯，如在共有的美國專利第5,672,662號(hào)中所描述的。這些包括式-(012)2-3<:(=0)0-0的基團(tuán)，其中Q優(yōu)選地選自N-琥珀酰亞胺、N-磺基琥珀酰亞胺、N-鄰苯二甲酰亞胺、N-戊二酰亞胺、N-四氫鄰苯二曱酰亞胺、N-降水片烯-2，3-二曱酰亞胺、苯并三哇、7-氮雜苯并三峻和咪哇。其他優(yōu)選的親電子基團(tuán)包括琥珀酰亞胺基碳酸酯、馬來酰亞胺、苯并三唑碳酸酯、縮水甘油醚、咪唑基碳酸酯、對(duì)硝基苯基碳酸酯、丙烯酸酯、三氟乙基磺酸酯、醛和鄰吡啶基二硫化物。這些親電子基團(tuán)經(jīng)受與親核體例如羥基、硫代或氨基的反應(yīng)以產(chǎn)生不同的鍵類型。本發(fā)明優(yōu)選的是有利于形成水解穩(wěn)定的鍵合的反應(yīng)。例如，羧酸及其活化的衍生物，包括原酸酯、琥珀酰亞胺基酯、咪唑基酯和苯并三唑酯，分別與以上類型的親核體反應(yīng)以形成酯、硫酯和酰胺，其中酰胺是水解上最穩(wěn)定的。碳酸酯，包括琥珀酰亞胺基碳酸酯、咪唑基碳酸酯和苯并三唑碳酸酯，與氨基反應(yīng)以形成氨基甲酸酯。異氰酸酯(R-N=C=0)分別與羥基或氨基反應(yīng)以形成氨基甲酸酯(RNH-C(O)-OR，)或脲(RNH醫(yī)C(O)-NHR，)鍵合。醛、酮、乙二醛、二酮和它們的水合物或醇加合物(即醛水合物、半縮醛、縮醛、酮水合物、半縮酮和縮酮)優(yōu)選地與胺反應(yīng)，隨后必要時(shí)，還原產(chǎn)生的亞胺以提供胺鍵合(還原性胺化)。親電子官能團(tuán)中的幾種包括親電子雙鍵，可向該親電子雙鍵加入親核基團(tuán)諸如硫醇以形成，例如硫醚鍵。這些基團(tuán)包括馬來酰亞胺、乙烯基砜、乙烯基吡咬、丙烯酸酯、曱基丙烯酸酯和丙烯酰胺。其他的基團(tuán)包括可由親核體置換的離去基團(tuán)；這些基團(tuán)包括氯乙基砜、吡啶基二硫化物(其包括可裂解的s-s鍵)、碘乙酰胺、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、硫代磺酸酯和三氟乙基磺酸酯。環(huán)氧化物通過由親核體開環(huán)反應(yīng)以形成，例如醚鍵或胺鍵。將涉及低聚物和小分子上的互補(bǔ)反應(yīng)基(諸如以上提到的那些反應(yīng)基)的反應(yīng)用于制備本發(fā)明的偶聯(lián)物。在一些實(shí)例中，蛋白酶抑制劑可能不具有適合于偶聯(lián)的官能團(tuán)。在這一實(shí)例中，可以修飾"原始的"蛋白酶抑制劑，使得其具有所需的官能團(tuán)。例如，如果蛋白酶抑制劑具有酰胺基，但需要胺基時(shí)，可通過Hofmann重排、Curtius重排(在酰胺凈皮轉(zhuǎn)化為疊氮化物時(shí))或Lossen重排(在酰胺被轉(zhuǎn)化為幾酰胺(hydroxamide)，隨后用亞節(jié)基(tolyene)-2-磺酰氯/堿處理時(shí))將酰胺基修飾成胺基?？芍苽浜恤然男》肿拥鞍酌敢种苿┑呐悸?lián)物，其中含有羧基的小分子蛋白酶抑制劑偶聯(lián)于氨基末端的低聚乙二醇，以提供具有將小分子蛋白酶抑制劑激動(dòng)劑共價(jià)連接于低聚物的酰胺基的偶聯(lián)物。例如，這可通過在偶聯(lián)試劑(諸如二環(huán)己基碳二亞胺或"DCC")存在下，在無水有機(jī)溶劑中，將含有羧基的小分子蛋白酶抑制劑與氨基末端的低聚乙二醇混合來進(jìn)行。此外，可制備含有羥基的小分子蛋白酶抑制劑的偶聯(lián)物，其中含有羥基的小分子蛋白酶抑制劑偶聯(lián)于低聚乙二醇卣化物，以產(chǎn)生醚(-O-)連接的小分子偶聯(lián)物。例如，這可通過使用氫化鈉將羥基去質(zhì)子化，隨后與卣化物末端的低聚乙二醇反應(yīng)來進(jìn)行。在另一個(gè)實(shí)例中，通過首先還原酮基以形成對(duì)應(yīng)的羥基，可制備含有酮基的小分子蛋白酶抑制劑的偶聯(lián)物。此后，現(xiàn)在含有羥基的小分子蛋白酶抑制劑可如本文描述的來偶聯(lián)。在又一個(gè)實(shí)例中，可制備含有胺基的小分子蛋白酶抑制劑的偶聯(lián)物。在一個(gè)方法中，將含有胺基的小分子蛋白酶抑制劑和含有醛的低聚物溶解于合適的緩沖液中，之后加入合適的還原劑(例如NaCNBH3)。還原后，結(jié)果是在含有胺基的小分子蛋白酶抑制劑的胺基和含有醛的低聚物的羰基碳之間形成胺鍵合。在用于制備含有胺基的小分子蛋白酶抑制劑的偶聯(lián)物的另一個(gè)方法中，通常在偶聯(lián)試劑(例如DCC)存在下，將含有羧酸的低聚物與含有胺基的小分子蛋白酶抑制劑混合。結(jié)果是在含有胺基的小分子蛋式I的小分子蛋白酶抑制劑的示例性的偶聯(lián)物包括具有以下結(jié)構(gòu)的那些偶聯(lián)物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula>(式I-Ca)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula>(式I-Cb);和<formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula>(式I-Cc),其中，對(duì)于式I-Ca、式I-Cb和式I-Cc中的每一個(gè)X是穩(wěn)定的鍵合；POLY是水溶性非肽低聚物;且R"、R12、R13、R"、R"和R"中的每一個(gè)如關(guān)于式I所定義的。小分子蛋白酶抑制劑的優(yōu)選的偶聯(lián)物包括具有以下結(jié)構(gòu)的那些偶聯(lián)物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>其中，在其出現(xiàn)的每個(gè)實(shí)例中，n是從2至30的整數(shù)。式II的小分子蛋白酶抑制劑的示例性的偶聯(lián)物包括具有以下結(jié)構(gòu)的那些偶聯(lián)物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>(式II-Cb)，其中，在其出現(xiàn)的每個(gè)實(shí)例中X是穩(wěn)定的鍵合；POLY是水溶性非肽低聚物；且Rm是芐氧羰基或2-喹啉基羰基。小分子蛋白酶抑制劑的優(yōu)選的偶聯(lián)物包括具有以下結(jié)構(gòu)的那些偶聯(lián)物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage40</formula>其中，在其出現(xiàn)的每個(gè)實(shí)例中，n是從2至30的整數(shù)。式III的小分子蛋白酶抑制劑的示例性的偶聯(lián)物包括具有以下結(jié)構(gòu)的那些偶聯(lián)物(式HI-Ca);和(式III醫(yī)Cb)，其中，在其出現(xiàn)的每個(gè)實(shí)例中X是穩(wěn)定的鍵合；POLY是水溶性非肽低聚物；且R"11、R"12、Rm3、R""、R"15、R"16、R"17、R"18、Y、G、D、E、R"19、A和B中的每一個(gè)如關(guān)于式III所定義的。小分子蛋白酶抑制劑的優(yōu)選的偶聯(lián)物包括具有以下結(jié)構(gòu)的那些偶聯(lián)物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>其中，在其出現(xiàn)的每個(gè)實(shí)例中，n是從2至30的整數(shù)。式IV的小分子蛋白酶抑制劑的示例性的偶聯(lián)物包括具有以下結(jié)構(gòu)的那些偶聯(lián)物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>(式IV-C)其中X是穩(wěn)定的鍵合；POLY是水溶性非肽低聚物；RIV2、RIV3、R^和R『如關(guān)于式IV所定義的。小乂乂且R<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>其中，在其出現(xiàn)的每個(gè)實(shí)例中，n是從2至30的整數(shù)。式V的小分子蛋白酶抑制劑的示例性的偶聯(lián)物包括具有以下結(jié)構(gòu)的那些偶聯(lián)物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>(式V-Ca);和(式V-Cb)其中，在其出現(xiàn)的每個(gè)實(shí)例中X是穩(wěn)定的鍵合；POLY是水溶性非肽低聚物；且zv、Rvl、RV2、RV3、J1、J2和B中的每一個(gè)如關(guān)于式V所定義的。小分子蛋白酶抑制劑的優(yōu)選的偶聯(lián)物包括具有以下結(jié)構(gòu)的那些偶聯(lián)物其中，在其出現(xiàn)的每個(gè)實(shí)例中，n是從2至30的整數(shù)。式VI的小分子蛋白酶抑制劑的示例性的偶聯(lián)物包括具有以下結(jié)構(gòu)的那些偶聯(lián)物其中X是穩(wěn)定的鍵合；POLY是水溶性非肽低聚物；R^是H;且RV"、n"、RVI2、RVI3、Rv"、R"和ZW中的每一個(gè)如關(guān)于式VI所定義的。小分子蛋白酶抑制劑的優(yōu)選的偶聯(lián)物包括具有以下結(jié)構(gòu)的那些偶聯(lián)物(式VI-C)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage44</formula>其中，在其出現(xiàn)的每個(gè)實(shí)例中，n是從2至30的整數(shù)。式VII的小分子蛋白酶抑制劑的示例性的偶聯(lián)物包括具有以下結(jié)構(gòu)的那些偶聯(lián)物DAVII-(BVII)X.-NH-CH—CH—CH2—N—S02—Evll—X-POLYOHD!(式VII-C)其中X是穩(wěn)定的鍵合；POLY是水溶性非肽低聚物；且AV1I、BVII、x'、D、D'和EV"中的每一個(gè)如關(guān)于式VII所定義的。小分子蛋白酶抑制劑的優(yōu)選的偶聯(lián)物包括具有以下結(jié)構(gòu)的那些偶聯(lián)物CH3H3C-OHOCH2oK—g-CH2-CH2'0(CH2CH20)n-CH3<formula>formulaseeoriginaldocumentpage45</formula>其中，在其出現(xiàn)的每個(gè)實(shí)例中，n是從2至^的整數(shù)。式VIII的小分子蛋白酶抑制劑的示例性的偶聯(lián)物包括具有以下結(jié)構(gòu)的那些偶聯(lián)物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage45</formula>其中X是穩(wěn)定的鍵合；POLY是水溶性非肽低聚物；RVII11、Rvim和RVI113中的每一個(gè)如關(guān)于式VIII所定義的。還進(jìn)一步的示例性的偶聯(lián)物包括具有以下結(jié)構(gòu)的那些偶聯(lián)物(其中，關(guān)于每個(gè)結(jié)構(gòu)，X是穩(wěn)定的鍵合且POLY是水溶性非肽低聚物)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage46</formula>其中，在其出現(xiàn)的每個(gè)實(shí)例中，X是穩(wěn)定的鍵合，POLY是水溶性非肽低聚物，且Val是纈氨酸的殘基。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)，通過首先制備具有不同重量和官能團(tuán)的一系列低聚物，且然后通過將偶聯(lián)物施用于患者，并進(jìn)行定期的血液和/或尿采樣，并測(cè)試代謝物的存在和量來獲得所需的清除率特征，可確定用于降低代謝的最合適的分子大小和鍵合。一旦獲得每種測(cè)試偶聯(lián)物的一系列代謝特征，則可鑒別合適的偶聯(lián)物。為了確定小分子蛋白酶抑制劑或小分子蛋白酶抑制劑和水溶性非肽聚合物的偶聯(lián)物是否具有抗HIV活性，可測(cè)試該化合物?？笻IV活性可按照實(shí)驗(yàn)中所描述的來測(cè)試。此外，抗HIV活性在人T細(xì)胞系中，通過例如Kempf等人(1991)^gewfeC7^附(7Aer.&(11):2209-2214中公布的方法來測(cè)試，HIV-l3B儲(chǔ)備溶液(stock)(每ml104'750%組織培養(yǎng)物感染劑量)可稀釋100倍，并與每ml4x10s個(gè)細(xì)胞的MT-4細(xì)胞在37'C下孵育1小時(shí)(感染復(fù)數(shù)，每個(gè)細(xì)胞0.00150%組織培養(yǎng)物感染劑量)。然后將產(chǎn)生的培養(yǎng)物洗滌兩次，重新懸浮成每ml培養(yǎng)基l()5個(gè)細(xì)胞，以一式三份接種于以一系列半對(duì)數(shù)單位稀釋于培養(yǎng)基中的一體積1%化合物的二甲基亞砜溶液中。病毒對(duì)照培養(yǎng)物可以相同的方式處理，除了沒有化合物被加入到培養(yǎng)基中。在沒有化合物或病毒下，孵育細(xì)胞對(duì)照。然后，在第5天，通過使用溴化3-(4，5-二甲基瘞唑-2-基)-2，5-二苯基四氮唑(MTT)在比色測(cè)定中測(cè)量光密度(OD)。參見Pauwds等人(1988)/.KZ卬/2^:309-321。病毒和對(duì)照OD值取六個(gè)測(cè)定的平均值。HIV細(xì)J包病理效應(yīng)(CPE)的百分比抑制通過下式來計(jì)算[(平均OD-病毒對(duì)照OD/(細(xì)胞對(duì)照OD-病毒對(duì)照OD)Ix100。通過在沒有病毒時(shí)，一式兩份用化合物的連續(xù)稀釋液孵育，確定細(xì)胞毒性。細(xì)胞毒性的百分比根據(jù)下式來確定(平均OD/細(xì)胞對(duì)照OD)x100。ECsn代表提供細(xì)胞病理效應(yīng)的50%抑制的化合物的濃度。CCICs。是提供50%細(xì)胞毒性效應(yīng)的化合物的濃度。應(yīng)注意，當(dāng)水溶性非肽低聚物的偶聯(lián)出現(xiàn)在位于沙查那韋的26位的羥基時(shí)，沒有測(cè)量到抗HIV活性。參見表l，實(shí)施例3。盡管不希望受到理論的束縛，但似乎這一羥基的可用性對(duì)于活性來說是需要的("結(jié)合羥基")。結(jié)果，優(yōu)選的是，在一些實(shí)施方案中，偶聯(lián)物沒有與水溶性非肽低聚物在結(jié)合羥基處連接。可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通過例如實(shí)驗(yàn)測(cè)試，和/或通過對(duì)比所關(guān)注的蛋白酶抑制劑的結(jié)構(gòu)和沙奎那韋的結(jié)構(gòu)，并確定蛋白酶抑制劑中哪個(gè)羥基對(duì)應(yīng)沙查那韋的26位的"結(jié)合羥基"，來確定任何給定蛋白酶抑制劑的"結(jié)合羥基"。本發(fā)明還包括藥物制劑，其包括與藥物賦形劑組合的如本文提供的偶聯(lián)物。一般來說，偶聯(lián)物自身將是固體形式(例如沉淀物)，其可與合適的藥物賦形劑組合，該藥物賦形劑可以是固體或液體形式。示例性的賦形劑包括但不限于，選自由糖類、無機(jī)鹽、抗^L生物劑、抗氧化劑、表面活性劑、緩沖劑、酸、堿及其組合組成的組的那些賦形劑。糖類，諸如糖、衍生的糖諸如糖醇、糖醛酸、酯化的糖和/或糖聚合物，可提供為賦形劑。具體的糖類賦形劑包括，例如單糖，諸如果糖、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖以及類似的單糖；二糖，諸如乳糖、蔗糖、海藻糖、纖維二糖以及類似的二糖；多糖，諸如棉子糖、松三糖、麥芽糖糊精、右旋糖酐、淀粉以及類似的多糖；以及糖醇，諸如甘露醇，木糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇、木糖醇、山梨醇(葡糖醇)、吡喃糖基山梨醇(pyranosylsorbitol)、肌醇以及類似的糖醇。賦形劑還可包括無機(jī)鹽或緩沖劑，諸如檸檬酸、氯化鈉、氯化鐘、硫酸鈉、硝酸鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉及其組合。制劑還可包括用于防止或阻止微生物生長的抗微生物劑。適合于本發(fā)明的抗微生物劑的非限制性實(shí)例包括苯扎氯銨、芐索氯銨、芐醇、西吡氯銨、氯丁醇、苯酚、苯乙醇、硝酸苯汞、疏柳汞(thimersol)及其組合?？寡趸瘎┮部纱嬖谟谥苿┲??？寡趸瘎┯糜诜乐寡趸瑥亩乐古悸?lián)物或制劑的其他組分的變質(zhì)。用于本發(fā)明的合適的抗氧化劑包括，例如抗壞血酸棕櫚酸酯、叔丁對(duì)曱氧酚、丁基化羥基曱苯、次磷酸、一硫代甘油(monothioglycerol)、沒食子酸丙酯、亞硫酸氫鈉、甲醛次硫酸氬鈉、焦亞硫酸鈉及其組合。表面活性劑可作為賦形劑存在。示例性的表面活性劑包括聚山梨酯諸如"吐溫20"和"吐溫80"，以及聚氧丙烯諸如F68和F88(兩者都可從BASF,MountOlive,NewJersey獲得)；脫水山梨醇酯；脂質(zhì)，諸如磷脂，諸如卵磷脂和其他的磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺(盡管優(yōu)選不以脂質(zhì)體的形式)、脂肪酸和脂肪酸酯；類固醇，諸如膽固醇；以及螯合劑，諸如EDTA、鋅和其他這類合適的陽離子。49在制劑中，酸或堿可作為賦形劑存在?？墒褂玫乃岬姆窍拗菩詫?shí)例包括選自由以下的酸組成的組的那些酸鹽酸、乙酸、磷酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸、甲酸、三氯乙酸、硝酸、高氯酸、磷酸、>琉酸、富馬酸及其組合。合適的堿的實(shí)例包括但不限于選自由以下的堿組成的組的堿氫氧化鈉、醋酸鈉、氫氧化銨、氬氧化鉀、醋酸銨、醋酸鉀、磷酸鈉、磷酸鉀、檸檬酸鈉、曱酸鈉、疏酸鈉、硫酸鉀、丁烯二酸鐘(potassiumfumerate)及其組合。組合物中偶聯(lián)物的量將根據(jù)許多因素而變化，但當(dāng)組合物被儲(chǔ)存于單位劑量容器中時(shí)，將最佳為有效治療劑量?？赏ㄟ^重復(fù)施用遞增量的偶聯(lián)物，以便確定哪個(gè)量產(chǎn)生了臨床所需終點(diǎn)，來實(shí)驗(yàn)確定治療有效劑量。組合物中的任何單種賦形劑的量將根據(jù)賦形劑的活性和組合物的特定需要而變化。通常，任何單種賦形劑的最佳量將通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定，即通過制備含有變化量的賦形劑(范圍從低到高)的組合物，檢查穩(wěn)定性和其他參數(shù)，且然后確定獲得最佳性能且沒有顯著副作用的范圍。然而，一般來說，賦形劑將以按重量計(jì)約1%至約99%，優(yōu)選地按重量計(jì)約5%-98%，更優(yōu)選地按重量計(jì)約15%-95%的賦形劑的量存在于組合物中，且最優(yōu)選濃度小于按重量計(jì)30%。這些上述的藥物賦形劑連同其他的賦形劑描迷于"Remington:TheScience&PracticeofPharmacy(雷明頓藥學(xué)科學(xué)與實(shí)踐)"，第19版，Williams&Williams,(1995);"Physician'sDeskReference(醫(yī)師案頭參考)，，，第52版，MedicalEconomics,Montvale，NJ(1998)和Kibbe，A.H.，HandbookofPharmaceuticalExcipients(藥物賦形劑手冊(cè))，第三版，AmericanPharmaceuticalAssociation,Washington,D.C.，2000。藥物組合物可采用許多形式，且在這一方面本發(fā)明不受限制。示例性的制劑最優(yōu)選以適合于口服施用的形式，諸如片劑、囊片(capkt)、膠嚢、凝膠膠嚢(gelcap)、錠劑、分散體、懸浮液、溶液、酏劑、糖漿、糖錠、透皮貼片、噴霧劑、栓劑和粉末。對(duì)于口服活性的那些偶聯(lián)物，口服劑型是優(yōu)選的，且包括片劑、囊片、膠嚢、凝膠膠嚢、懸浮液、溶液、酏劑和糖漿，且還可包括被任選地包封的多種顆粒、小珠、粉末或小丸。這種劑型使用藥物配制領(lǐng)域的技術(shù)人員所知的常規(guī)方法來制備，并且描述于相關(guān)的教科書中。例如，可使用標(biāo)準(zhǔn)片劑加工過程和設(shè)備來制備片劑和嚢片。當(dāng)制備含有本文描述的偶聯(lián)物的片劑或嚢片時(shí)，優(yōu)選直接壓制和制粒技術(shù)。除了偶聯(lián)物之外，片劑和嚢片一般將含有無活性的藥學(xué)上可接受的載體材料，諸如粘合劑、潤滑劑、崩解劑、填充劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑、著色劑以及類似物。粘合劑用于向片劑提供粘聚性(cohesivequality)，并因此確保片劑保持完整。合適的粘合劑材料包括但不限于淀粉(包括玉米淀粉和預(yù)膠凝淀粉)、明膠、糖(包括蔗糖、葡萄糖、右旋糖和乳糖)、聚乙二醇、蠟以及天然的和合成的樹膠例如阿拉伯樹膠、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素聚合物(包括羥丙基纖維素、羥丙基曱基纖維素、甲基纖維素、微晶纖維素、乙基纖維素、羥乙基纖維素以及類似的纖維素)和硅酸鎂鋁。潤滑劑用于促進(jìn)片劑制備，提供粉末流動(dòng)，并且防止當(dāng)釋放壓力時(shí)顆粒頂裂(即顆粒破裂)。有用的潤滑劑是硬脂酸鎂、硬脂酸鈣和硬脂酸。崩解劑用于促進(jìn)片劑的崩解，且通常是淀粉、粘土、纖維素、褐藻膠、樹膠或交聯(lián)聚合物。填充劑包括例如，諸如二氧化硅、二氧化鈦、氧化鋁、滑石、高嶺土、粉狀纖維素和微晶纖維素的物質(zhì)以及諸如甘露醇、脲、蔗糖、乳糖、右旋糖、氯化鈉和山梨醇的可溶物質(zhì)。如本領(lǐng)域所公知的，穩(wěn)定劑用于抑制或延遲藥物分解反應(yīng)，藥物分解反應(yīng)包括，作為實(shí)例，氧化反應(yīng)。膠囊還是優(yōu)選的口服劑型，在這種情況下，可以包封液體或凝膠(例如在凝膠膠嚢的情況下)或固體(包括諸如顆粒、小硃、粉末或小丸的微粒)形式的含有偶聯(lián)物的組合物。合適的膠嚢包括硬膠囊和軟膠嚢，并通常由明膠、淀粉或纖維素材料制成。兩件式(two-piece)硬明膠膠囊優(yōu)選地，諸如用明膠帶或類似物密封。51包括基本干燥形式的胃腸外制劑(通常為凍干物或沉淀物，其可以是粉末或餅的形式)，以及制備用于注射的制劑，該制劑通常是液體，并需要重新構(gòu)建干燥形式的胃腸外制劑的步驟。用于注射前重新構(gòu)建固體組合物的合適稀釋劑的實(shí)例包括用于注射的抑菌水，5%右旋糖水溶液、磷酸鹽緩沖鹽水、林格氏溶液、鹽水、無菌水、去離子水及其組合。在一些情況下，預(yù)期用于胃腸外施用的組合物可采用非水溶液、懸浮液或乳劑的形式，每個(gè)通常都是無菌的。非水溶劑或媒介物的實(shí)例是丙二醇、聚乙二醇、諸如橄欖油和玉米油的植物油、明膠和可注射有機(jī)酯諸如油酸乙酯。本文描述的胃腸外制劑還可包含佐劑，諸如防腐劑、潤濕劑、乳化劑和分散劑。通過加入殺菌劑、通過除菌濾器的過濾、輻射或加熱，使制劑無菌。還可使用常規(guī)透皮貼片或其他透皮傳遞系統(tǒng)，通過皮膚施用偶聯(lián)物，其中偶聯(lián)物被包含在作為藥物傳遞設(shè)備的、將固定于皮膚的層狀結(jié)構(gòu)中。在這樣一種結(jié)構(gòu)中，偶聯(lián)物被包含在上部支持層(backinglayer)下面的層或"儲(chǔ)庫(reservoir)"中。層狀結(jié)構(gòu)可含有單個(gè)儲(chǔ)庫，或其可含有多個(gè)儲(chǔ)庫。偶聯(lián)物還可被配制成用于直腸施用的栓劑。關(guān)于栓劑，偶聯(lián)物與栓劑基質(zhì)材料混合，所述基質(zhì)材料是(例如，在室溫下仍為固體但在體溫下軟化、熔化或溶解的賦形劑)諸如可可脂(cocabutter)(可可油)、聚乙二醇、甘油明膠、脂肪酸及其組合。栓劑可通過例如進(jìn)行以下步驟來制備(不必按照所提供的順序)熔化栓劑基質(zhì)材料以形成熔體；加入偶聯(lián)物(在熔化栓劑基質(zhì)材料之前或之后)；將熔體傾入模具中；冷卻熔體(例如將含有熔體的模具放置于室溫環(huán)境中)以由此形成栓劑；并將栓劑從模具中移出。本發(fā)明還提供用于將本文提供的偶聯(lián)物施用于患有對(duì)用該偶聯(lián)物治療有響應(yīng)的疾患的患者的方法。該方法包括一般口服施用治療有效量的偶聯(lián)物(優(yōu)選地提供為藥物制劑的一部分)。還包括其他的施用模式，諸如肺部、鼻、口腔、直腸、舌下、透皮和胃腸外。如本文所用，術(shù)語"胃腸外"包括皮下、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、心臟內(nèi)、鞘內(nèi)和肌內(nèi)注射以及輸注注射。在使用胃腸外施用的實(shí)例中，可能需要使用比先前描述的低聚物稍大的低聚物，該低聚物具有范圍為從約500至30K道爾頓的分子量(例如具有約500、1000、2000、2500、3000、5000、7500、10000、15000、20000、25000、30000或更大的分子量)。施用方法可用于治療可通過施用特定的偶聯(lián)物治療或預(yù)防的任何疾患。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員了解具體的偶聯(lián)物可有效治療何種疾患。所施用的實(shí)際劑量將根據(jù)以下因素而變化受治療者的年齡、體重和一般狀況以及所治療的疾患的嚴(yán)重性、保健專家的判斷和所施用的偶聯(lián)物。治療有效量為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，和/或描述于相關(guān)的參考文本和文獻(xiàn)中，和/或可實(shí)驗(yàn)確定。一般來說，治療有效量是在以下范圍中的一個(gè)或多個(gè)的量從0.001mg/天至10000mg/天；從0.01mg/天至7500mg/天；從0.10mg/天至5000mg/天；從1mg/天至4000mg/天；和從10mg/天至2000mg/天。任何給定的偶聯(lián)物(再次優(yōu)選提供為藥物制劑的一部分)的單位劑量可以根據(jù)臨床醫(yī)師的判斷、患者的需要等等來以不同的給藥方案施用。具體的給藥方案將為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所知，或可使用常規(guī)方法實(shí)驗(yàn)確定。示例性的劑量方案包括但不限于一天五次、一天四次、一天三次、一天兩次、一天一次、一周三次、一周兩次、一周一次、每月兩次、每月一次及其任何組合的施用。一旦已經(jīng)實(shí)現(xiàn)臨床終點(diǎn)，就停止組合物的給藥。施用本發(fā)明的偶聯(lián)物的一個(gè)優(yōu)勢(shì)是相對(duì)于母體藥物，可實(shí)現(xiàn)首過代謝的降低。這一結(jié)果對(duì)基本上通過穿過消化道代謝的許多口服施用的藥物來說是有利的。這樣，可通過選擇低聚物的分子大小、鍵合和提供所需清除率特性的共價(jià)連接的位置，來調(diào)節(jié)偶聯(lián)物的清除率。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可根據(jù)本文的教導(dǎo)確定低聚物的理想分子大小。與對(duì)應(yīng)的未偶聯(lián)的小藥物分子對(duì)比，偶聯(lián)物的首過代謝的優(yōu)選的降低包53括至少約10%;至少約20%;至少約30;至少約40;至少約50%;至少約60%;至少約70%;至少約80%和至少約90%。因此，本發(fā)明提供了用于降低活性劑代謝的方法。該方法包括以下步驟提供單分散或雙峰偶聯(lián)物，每個(gè)偶聯(lián)物包含衍生于小分子藥物的部分，小分子藥物通過穩(wěn)定的鍵合共價(jià)連接于水溶性低聚物，其中所述偶聯(lián)物表現(xiàn)出與沒有連接到水溶性低聚物的小分子藥物的代謝速率相比，降低的代謝速率；以及將偶聯(lián)物施用于患者。通常，施用經(jīng)選自由以下組成的組的一種施用類型來進(jìn)行口服施用、透皮施用、口腔施用、透勦膜施用、陰道施用、直腸施用、胃腸外施用和肺部施用。盡管偶聯(lián)物降低許多類型的代謝(包括I期和II期代謝)的用途可能被削弱，但當(dāng)小分子藥物由肝酶(例如細(xì)胞色素P450同工型的一種或多種)和/或一種或多種腸酶代謝時(shí)，偶聯(lián)物是特別有用的。本文引用的所有文章、書籍、專利、專利公布和其他出版物通過引用以其整體并入。在本說明書中的教導(dǎo)與通過引用并入的技術(shù)之間不一致的情況下，應(yīng)以本說明書中的教導(dǎo)的含義為準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)應(yīng)理解，盡管已經(jīng)描述了本發(fā)明連同某些優(yōu)選的和具體的實(shí)施方案，但以上的描述以及隨后的實(shí)施例意在示例，且并不限制本發(fā)明的范圍。在本發(fā)明的范圍內(nèi)的其他方面、優(yōu)勢(shì)和改良對(duì)本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員來說將是明顯的。在附加的實(shí)施例中涉及的所有化學(xué)試劑是商業(yè)上可獲得的，除非另外指出。PEG-mer的制備描述于例如美國專利申請(qǐng)公布第2005/0136031號(hào)中。以下實(shí)施例中所用的所有低聚(乙二醇)甲醚是單分散和色譜純的，如反相色譜法所確定的。實(shí)施例1PEG-沙查那韋偶聯(lián)物的合成沙查那韋的Cw位的羥基處的偶聯(lián)A.26-m-PEG-3-0-沙奎那韋(n=3)的合成將NaH(60%于礦物油中，72mg，1.8mmol)加入到沙套那韋游離堿(170mg，0.30mmoI)的二甲基甲酰胺(5ml)溶液中。在氮?dú)庀掠谑覝兀瑢⒒旌衔飻嚢?5分鐘，隨后加入在二曱基甲酰胺(1ml)中的Br-(CH2CH20)3-CH3(273mg，1.2mmol)。在氮?dú)庀?，將產(chǎn)生的溶液在50X:的油浴中加熱4小時(shí)。然后，通過使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去所有的溶劑。通過反相制備型HPLC分離獲得純的26-m-PEG-3-0-沙奎那韋(76mg，0.093mmol，分離收率31%)。26-m-PEG-7-0-沙套那韋0=7)的合成將NaH(60。/。于礦物油中，108mg,2.7mmol)加入到沙套那韋游離堿(300mg，0.45mmol)的二甲基曱酰胺(10ml)溶液中。在氮?dú)庀掠谑覝?，將混合物攪?5分鐘，隨后加入在二曱基曱酰胺(1ml)中的Br-(CH2CH20)7-CH3(724mg，1.8mmol)。在氮?dú)庀?，將產(chǎn)生的溶液在50t:的油浴中加熱4小時(shí)。然后，通過使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去所有的溶劑。通過反相制備型HPLC分離獲得純的26-m-PEG-7-0-沙奎那韋(100mg，0.10mmol，分離收率22%)實(shí)施例2PEG-沙套那韋偶聯(lián)物的合成沙奎那韋的ds位的酰胺基處的偶聯(lián)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage56</formula>15-m-PEG-7-NHCO-沙查那韋和15-二-m-PEG-7-NCO-沙套那韋(n-7)的合成26-MEM-0-沙奎那韋的合成。-30°C，在氮?dú)庀?，將丁基?1.58mmol，0.63mL，2.5M在己烷中)通過注射器加入到沙套那韋游離堿(530mg，0.79mmol)的無水四氫吹喃(-30mL)溶液中。-30。C下攪拌5分鐘后，加入在lmL無水四氬吹喃中的MEMCl(118mg，0.95mmol)。將反應(yīng)溶液緩慢升至室溫，并保持過夜(18小時(shí))。HPLC顯示幾乎所有的游離沙奎那韋已經(jīng)消失，并且形成收率卯％的26-MEM-0-沙查那韋。通過反相制備型HPLC分離后，獲得純的無色固體26-MEM-0-沙奎那韋。26-MEM-0-15-m-PEG-7-NHCO-沙奎那韋的合成。將氫化鈉(21mg，0.53mmol，60%于礦物油中)加入到26-MEM-0-沙查那韋(50mg，0.066mmol)的二甲基曱酰胺(8mL)溶液中。室溫下攪拌15分鐘后，加入在~1mL的二甲基甲酰胺中的Br-(CH2CH20)7-CH3(159mg，0.40mmol)。在氮?dú)庀掠谑覝兀瑢⒎磻?yīng)混合物攪拌2天。HPLC顯示形成收率~50%的26-MEM-0-15-m-PEG-7-NHCO-沙查那韋。然后，通過加入0.1N鹽酸溶液(3mL)以石皮壞過量的氫化鈉來終止反應(yīng)。50'C下(CH2CHPX,CH;一CH2CH20》CH:56通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去所有的溶劑以獲得粘性固體。不純化該產(chǎn)物，并將其直接用于下一合成步驟。15-m-PEG-7-NHCO-沙套那韋的合成。將26-MEM-O-l5-m-PEG-7-NHCO-沙套那韋的反應(yīng)混合物溶解于10mL的2N鹽酸曱醇溶液中。室溫下將溶液攪拌4天。HPLC顯示已除去所有的MEM保護(hù)基，并形成收率50%的15-m-PEG-7-NHCO-沙奎那韋。反相制備型HPLC分離后，獲得純的15-m-PEG-7-NHCO-沙查那韋(35mg，0.035mmol，分離收率53%)，LC-MS:計(jì)算值993.2;實(shí)測(cè)值993.5。26-MEM-0-15-二-m-PEG-7-NCO-沙奎那韋的合成。將氫化鈉(26mg，0.64mmol，60%于礦物油中)加入到26-MEM-0-沙查那韋(30mg，0.040mmol)的二甲基曱酰胺(5mL)溶液中。室溫下攪拌15分鐘后，加入在~1mL的二曱基甲酰胺中的Br-(CH2CH20)7-CH3(96mg，0.24mmol)。在氮?dú)庀掠谑覝?，將反?yīng)混合物攪拌2天。HPLC顯示形成收率23%的26-MEM-0-15-二-m-PEG-7-NCO-沙奎那韋。然后通過加入0.1N鹽酸溶液(3mL)以破壞過量的氫化鈉來終止反應(yīng)。50'C下通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去所有的溶劑以獲得粘性固體。不純化該產(chǎn)物，并將其直接用于下一合成步驟。15-二-m-PEG-7-NCO-沙奎那韋的合成。將26-MEM-O-二-15-m-PEG-7-NCO-沙奎那韋的反應(yīng)混合物溶解于10mL的2N鹽酸甲醇溶液中。室溫下將溶液攪拌過夜。HPLC顯示已除去所有的MEM保護(hù)基，并形成收率37%的15-二-m-PEG-7-NCO-沙奎那韋。反相制備型HPLC分離后，獲得純的15-二-m-PEG-7-NCO-沙奎那韋(11mg，0.0084mmol，分離收率21%)，LC-MS:計(jì)算值1315.6;實(shí)測(cè)值1315.6。15-m-PEG-3-NHCO-沙奎那韋(i^3)的合成。26-MEM-0-15-m-PEG-3-NHCO-沙奎那韋的合成。將氫化鈉(37mg，0.92mmol，60%于礦物油中)加入到26-MEM-0-沙奎那韋(88mg，0.12mmol)的二甲基甲酰胺(20mL)溶液中。室溫下攪拌15分鐘后，加入在1mL的二甲基曱酰胺中的Br-(CH2CH20)3-CH3(158mg，0.70mmol)。在氮?dú)庀掠谑覝兀瑢⒎磻?yīng)混合物攪拌過夜(23小時(shí))。HPLC顯示形成收率~47%的26-MEM-CM5-m-PEG-3-NHCO-沙套那韋。然后通過加入0.1N鹽酸溶液(~3mL)以破壞過量的氫化鈉來終止反應(yīng)。50°C下通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去所有的溶劑以獲得粘性固體。不純化該產(chǎn)物，并將其直接用于下一合成步驟。15-m-PEG-3-NHCO-沙查那韋的合成。將粗的26-MEM-0-15-m-PEG-3-NHCO-沙套那韋產(chǎn)物溶解于30mL的2N鹽酸甲醇溶液中。室溫下將溶液攪拌4小時(shí)。HPLC顯示已除去所有的MEM保護(hù)基，并形成收率41%的15-m-PEG-3-NHCO-沙奎那韋。反相制備型HPLC分離后，獲得純的15-m-PEG-3-NHCO-沙查那韋(20mg，0.024mmol，分離收率20%)，LC-MS:計(jì)算值817.0;實(shí)測(cè)值817.5。15-m-PEG-5-NHCO-沙套那韋(n-5)的合成26-MEM-0-15-m-PEG-5-NHCO-沙查那韋的合成。將氫化鈉(59mg，1.48mmol，60。/。于礦物油中)加入到26-MEM-0-沙奎那韋(140mg，0.18mmol)的二甲基甲酰胺(~30mL)溶液中。室溫下攪拌15分鐘后，加入在~1mL的二甲基甲酰胺中的Br-(CH2CH20)5-CH3(349mg，1.11mmol)。在氮?dú)庀掠谑覝?，將反?yīng)混合物攪拌2天。HPLC顯示形成收率~52%的26-MEM-0-15-m-PEG-5-NHCO-沙奎那韋。然后通過加入0.1N鹽酸溶液(3mL)以破壞過量的氫化鈉來終止反應(yīng)。SO"C下通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去所有的溶劑以獲得粘性固體。不純化該產(chǎn)物，并將其直接用于下一合成步驟。15-m-PEG-5-NHCO-沙奎那韋的合成。將26-MEM-0-15-m-PEG-5-NHCO-沙奎那韋的反應(yīng)混合物溶解于~15mL的2N鹽酸甲醇溶液中。室溫下將溶液攪拌4小時(shí)。HPLC顯示已除去所有的MEM保護(hù)基，并形成收率50。/。的15-m-PEG-5-NHCO-沙套那韋。反相制備型HPLC分離后，獲得純的15-H1-PEG-5-NHCO-沙奎那韋(32mg，0.035mmol，分離收率20%)，LC-MS:計(jì)算值58905.1;實(shí)測(cè)值905.5。實(shí)施例3在CEM-SS細(xì)胞中抗HIV-1效力的評(píng)價(jià)以化合物在DMSO中的1.0nM的高測(cè)試濃度測(cè)試。在用于抗病毒測(cè)定前，使CEM-SS細(xì)胞在T-75瓶中傳代。在進(jìn)行測(cè)定當(dāng)天，將細(xì)胞分為1:2,以便確保在感染時(shí)，它們處于指數(shù)生長期。使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器和錐蟲藍(lán)排除法來進(jìn)行總細(xì)胞和存活率定量。應(yīng)用于測(cè)定的細(xì)胞的細(xì)胞存活率超過95%。將細(xì)胞以5x10"個(gè)細(xì)胞/mL重新懸浮于組織培養(yǎng)基中，并將其加入體積50jtL的含有藥物的微量滴定板中。所用的病毒是嗜淋巴細(xì)胞病毒抹HIV-1RF。該病毒從NIHAIDS研究和參考試劑計(jì)劃獲得，并在CEM-SS細(xì)胞中生長，用于制備儲(chǔ)備病毒庫。對(duì)于每個(gè)測(cè)定，從冷凍器中取出預(yù)先滴定的等份病毒，并使其在生物安全拒中緩慢解凍至室溫。將病毒再次懸浮并稀釋到組織培養(yǎng)基中，使得加入到50^L體積的各孔中的病毒的量是確定在感染后6天中提供約90%的細(xì)胞殺死的量。通過在CEM-SS細(xì)胞中的終點(diǎn)滴定計(jì)算的TCIDso表明，這些測(cè)定中感染復(fù)數(shù)約為0.01。每個(gè)板包括細(xì)胞對(duì)照孔(僅有細(xì)胞)、病毒對(duì)照孔(細(xì)胞加病毒)、化合物細(xì)胞毒性孔(僅有細(xì)胞加化合物)、化合物比色對(duì)照孔(僅有化合物)以及實(shí)驗(yàn)孔(化合物加細(xì)胞加病毒)。用一式三份抗病毒效力的測(cè)量和一式兩份細(xì)胞毒性的測(cè)量來評(píng)價(jià)樣品。使用以半對(duì)數(shù)稀釋的六個(gè)濃度，以便確定ICso值并測(cè)量細(xì)胞的細(xì)胞毒性(如果可測(cè)量)。測(cè)定結(jié)束時(shí)，測(cè)定板用基于可溶的四氮唑的染料MTS(CellTiterReagent，Promega)染色，以確定細(xì)胞存活率并定量化合物的細(xì)胞毒性。MTS由代謝活性細(xì)胞的線粒體酶代謝以產(chǎn)生可溶的曱臘(formazan)產(chǎn)物，允許快速定量分析細(xì)胞存活率和化合物的細(xì)胞毒性。MTS是穩(wěn)定的溶液，不需要在使用前制備。測(cè)定結(jié)束時(shí)，向每個(gè)孔加入20pL的MTS。各孔在37'C下孵育4個(gè)到6個(gè)小時(shí)。粘板密封物(adhesiveplatesealer)代替蓋使用，將密封的板倒轉(zhuǎn)數(shù)次以混合可溶的甲賸產(chǎn)物，并在490/650nm下用MolecularDevicesVmax讀板器分光光度讀板。使用計(jì)算機(jī)程序(SouthernResearchInstitute,FrederickMD)，確定各種值，包括IC5G(病毒復(fù)制的50%抑制)、TC5。(細(xì)胞存活率的50%降低)和抗病毒指數(shù)(抗病毒指數(shù)-TCso/IC5。)。值在下表1中提供。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table>實(shí)施例4PEG-阿扎那韋的合成制備PEG-阿扎那韋。本實(shí)施例依據(jù)的方法圖示顯示如下(方案中粗體的化合物數(shù)字僅對(duì)應(yīng)本實(shí)施例4的文本中提供的化合物數(shù)字)。合成試劑的圖示mPEG-n-OH"3，3,6,7ooo、+c!-。人?！〥SCTEAOn-3.75%n-5.83%n-6,65%n=7.90%OmPEG"n-0"C"0—N.mPE(VSC'碳酸醋n=3,5,B,7一丫,NaHC03H20氺。.79%'5,訴％=6,恥％=7.85%60mPEG:rSC-碳酸酯將mPEG:rOH(2.0g，12.1mmol)和無水二氯曱烷(25mL)置于100mL燒瓶中。將澄清溶液冷卻至0X:，且然后緩慢加入三乙胺(1.86mL，13.4mmol，1.1當(dāng)量)。將溶液在0'C下攪拌15分鐘，且然后加入到含有DSC(3.1g,12.1mmol)的二氯曱烷(20mL)懸浮液的第二個(gè)燒瓶中。使反應(yīng)混合物平衡至室溫。約18小時(shí)后，用二氯甲烷(60mL)稀釋淡黃色的反應(yīng)混合物，將其轉(zhuǎn)移至分液漏斗，并用去離子水(IOOmL)分配。水層用二氯甲烷(4x80mL)萃取。合并的有機(jī)物用水、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉洗滌。將干燥的有機(jī)層過濾、減壓下濃縮并在高真空下干燥過夜，以獲得2.79g(75%)淡黃色油狀mPEG3-SC-碳酸酯。^NMR(CDC13)S4.40(m，2H)，3.80(m，2H)，3.70(bs，6H)，3.60(m，2H)，3.35(s，3H)，2.80(s，4H);LC/MS=306(M+1)。mPEGs-SC-碳酸酯將mPEGs-OH(2.0g，7.92mmol)和無水二氯曱烷(15mL)置于100mL燒瓶中。將澄清溶液冷卻至0。C，且然后緩慢加入三乙胺(1.32mL，9.51mmo1，1.2當(dāng)量)。將溶液在下攪拌15分鐘，且然后加入到含有DSC(2.02g，7.92mmol)的二氯甲烷(15mL)懸浮液的第二個(gè)燒瓶中。使反應(yīng)混合物平衡至室溫。約18小時(shí)后，用二氯甲烷(40mL)稀釋淡黃色的反應(yīng)混合物，將其轉(zhuǎn)移至分液漏斗，并用去離子水(80mL)分配。水層用二氯甲烷(4x50mL)萃取。合并的有機(jī)物用水、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉洗滌。將干燥的有機(jī)層過濾、減壓下濃縮并在高真空下千燥過夜，以獲得2.59g(83。/o)淡黃色油狀mPEGs-SC-碳酸酯。H匪R(CDC13)84.45(m，2H)，3.75(m，2H)，3.68(bs，16H)，3.55(m，2H)，3.34(s，3H)，2.80(s，4H);LC/MS=394(M+1)。mPEG6-SC-碳酸酯將mPEG6-OH(2.0g，6.74mmol)和無水二氯甲烷(12mL)置于100mL燒瓶中。將澄清溶液冷卻至OX:，且然后緩慢加入三乙胺(1.12mL，8.10mmol，1.2當(dāng)量)。將溶液在0°C下攪拌15分鐘，且然后加入到含有DSC(1.73g，6.74mmol)的二氯甲烷(15mL)懸浮液的第二個(gè)燒瓶中。使反應(yīng)混合物平衡至室溫。約18小時(shí)后，用二氯甲烷(50mL)稀釋淡黃色的反應(yīng)混合物，將其轉(zhuǎn)移至分液漏斗，并用去離子水(80mL)分配。水層用二氯曱烷(4x50mL)萃取。合并的有機(jī)物用水、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉洗滌。將干燥的有機(jī)層過濾、減壓下濃縮并在高真空下干燥過夜，以獲得1.92g(65。/o)淡黃色油狀mPEG6-SC-碳酸酯。'H醒R(CDC13)S4.48(m，2H)，3.78(m，2H)，3.68(bs，20H)，3.58(m，2H)，3.38(s，3H),2.84(s，4H);LC/MS=438(M+1)。mPEG7-SC-碳酸酯將mPEG7-OH(2.0g，5.87mmol)和無水二氯曱烷(15mL)置于100mL燒瓶中。將澄清溶液冷卻至0'C,且然后緩慢加入三乙胺(1.22mL，8.81mmoi，1.5當(dāng)量)。將溶液在OT下攪拌15分鐘，且然后加入到含有DSC(2.25g，8.81mmol)的二氯甲烷(15mL)懸浮液的第二個(gè)燒瓶中。使反應(yīng)混合物平衡至室溫。約18小時(shí)后，用二氯甲烷(50mL)稀釋淡黃色的反應(yīng)混合物，將其轉(zhuǎn)移至分液漏斗，并用去離子水(80mL)分配。水層用二氯甲烷(4x50mL)萃取。合并的有機(jī)物用水、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉洗滌。將千燥的有機(jī)層過濾、減壓下濃縮并在高真空下千燥過夜，以獲得2.82g(卯r。)淡黃色油狀mPEG7-SC-碳酸酉旨。!HNMR(CDC13)S4.45(m，2H),3.78(m，2H)，3.65(bs，24H)，3.58(m，2H)，3.39(s，3H)，2.85(s，4H);LC廳二482(M+1)。mPEG3-L-叔亮氨酸將L-叔亮氨酸(0.43g，3.27mmol)和去離子水(12mL)置于125mL燒瓶中。將溶液攪拌30分鐘，直到澄清，隨后加入固體碳酸氫鈉(1.27g，15.0mmol，4.6當(dāng)量)。在氮?dú)庀掠谑覝兀瑪嚢杌鞚岬娜芤?。在第二個(gè)燒瓶中，將mPEG3-SC-碳酸酯(1.24g，4.09mmol，1.25當(dāng)量)吸收于去離子水(12mL)中，并將這一溶液一次性全部加入到堿性L-叔亮氨酸溶液中。在氮?dú)庀掠谑覝?，攪拌混濁的淡黃色反應(yīng)混合物。約20個(gè)小時(shí)后，將澄清的混合物冷卻至0C,并用2NHC1小心地酸化至pHl(20mL)。將酸性混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗，并用二氯甲烷(50mL)和額外的水(50mL)分配。水層用二氯甲烷(4x50mL)萃取。合并的有機(jī)層用水和飽和氯化鈉洗滌，并用硫酸鈉干燥。將干燥的有機(jī)層過濾、減壓下濃縮并在高真空下干燥過夜，以獲得0.83g(79。/。)淺黃色油狀mPEG3-L-叔亮氨酸。，HNMR(CDCI3)35.45(d，1H)，4.26-4.35(m，2H)，4.14(m，1H)，3.70(bs，17H)，3.65(m，2H)，3.32(s，3H)，0.96(s，9H);LC/MS=322(M+1)。mPEGs-L-叔亮氨酸將L-叔亮氨酸(0.68g,5.21mmol)和去離子水(20mL)置于250mL燒瓶中。將溶液攪拌30分鐘，直到澄清，隨后加入固體碳酸氫鈉(1.96g，23.3mmol，4.5當(dāng)量)。在氮?dú)庀掠谑覝?，攪拌混濁的溶液。在第二個(gè)燒瓶中，將mPEGs-SC-碳酸酯(3)吸收于去離子水(20mL)中，并將這一溶液一次性全部加入到堿性L-叔亮氨酸溶液中。在氮?dú)庀掠谑覝?，攪拌混濁的淡黃色反應(yīng)混合物。約18個(gè)小時(shí)后，將澄清的混合物冷卻至0'C，并用2NHC1小心地酸化至pH1(18mL)。將酸性混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗，并用二氯甲烷(50mL)和額外的水(50mL)分配。水層用二氯曱烷(4x50mL)萃取。合并的有機(jī)層用水和飽和氯化鈉洗滌，并用硫酸鈉干燥。將干燥的有機(jī)層過濾、減壓下濃縮并在高真空下千燥過夜，以獲得2.04g(96。/。)淺黃色油狀mPEGs-L-叔亮氨酸。!HNMR(CDC13)35.45(d，1H)，4.26-4.35(m，2H)，4.14(m，1H)，3.70(bs，，17H)，3.65(m，2H)，3.38(s，3H)，1.02(s，9H);LC/MS二410(M+1)。mPEG6-L-叔亮氨酸將L-叔亮氨酸(0.45g，3.47mmol)和去離子水(15mL)置于250mL燒瓶中。將溶液攪拌30分鐘，直到澄清，隨后加入固體碳酸氫鈉(1.31g，15.6mmol，4.5當(dāng)量)。在氮?dú)庀掠谑覝兀瑪嚢杌鞚岬娜芤?。在第二個(gè)燒瓶中，將mPEG6-SC-碳酸酯(1.9gm，4.34mmol，1.25當(dāng)量)吸收于去離子水(15mL)中，并將這一溶液一次性全部加入到堿性L-叔亮氨酸溶液中。在氮?dú)庀掠谑覝?，攪拌混濁的淡黃色反應(yīng)混合物。約18個(gè)小時(shí)后，將澄清的混合物冷卻至On，并用2NHC1小心地酸化至pH1(10mL)。將酸性混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗，并用二氯甲烷(50mL)和額外的水(50mL)分配。水層用二氯甲烷(4x50mL)萃取。合并的有機(jī)層用水和飽和氯化鈉洗滌，并用硫酸鈉千燥。將干燥的有機(jī)層過濾、減壓下濃縮并在高真空下干燥過夜，以獲得1.39g(90Yo)淺黃色油狀mPEG6-L腸叔亮氨酸。&NMR(CDC13)S5.47(d，1H)，4.10-4.30(m，2H)，4.14(m，1H)，3,70(bs，20H)，3,65(m，2H)，3.38(s，3H)，1.02(s，9H);LC/MS=454(M+1)。mPEG7-L-叔亮氨酸將L-^又亮氨酸(0.31g，2.32mmol)和去離子水(15mL)置于250mL燒瓶中。將溶液攪拌30分鐘，直到澄清，隨后加入固體碳酸氫鈉(0,89g，10.6mmol，4.5當(dāng)量)。在氮?dú)庀掠谑覝兀瑪嚢杌鞚岬娜芤?。在第二個(gè)燒瓶中，將mPEG7-SC-碳酸酯(1.4gm，2.91mmol，1.25當(dāng)量)吸收于去離子水(15mL)中，并將這一溶液一次性全部加入到堿性L-叔亮氨酸溶液中。在氮?dú)庀掠谑覝兀瑪嚢杌鞚岬牡S色反應(yīng)混合物。約18個(gè)小時(shí)后，將澄清的混合物冷卻至0'C，并用2NHC1小心地酸化至pHl(8mL)。將酸性混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗，并用二氯甲烷(50mL)和額外的水(50mL)分配。水層用二氯曱烷(4x50mL)萃取。合并的有機(jī)層用水和飽和氯化鈉洗滌，并用硫酸鈉干燥。將干燥的有機(jī)層過濾、減壓下濃縮并在高真空下千燥過夜，以獲得1,0g(85。/。)淺黃色油狀mPEG7-L-叔亮氨酸。^NMR(CDC13)85.46(d，1H)，4.10-4.25(m，2H)，4.14(m，1H)，3.70(bs，24H)，3.65(m，2H)，3.38(s，3H)，1.02(s，9H);LC/MS-498(M+1)。合成PEG-阿扎那韋的方案<formula>formulaseeoriginaldocumentpage65</formula>方法在氮?dú)夥障逻M(jìn)行對(duì)空氣或濕氣敏感的反應(yīng)物和溶劑的所有反應(yīng)。一般來說，試劑和溶劑(除了基于PEG的試劑外)如所購買的使用，不進(jìn)一步純化。分析薄層色譜法在二氧化硅F254玻璃板(Biotage)上進(jìn)行。成分通過254nm的紫外光或通過用磷鉬酸噴灑顯像(visulalized)。在BiotageSP4系統(tǒng)上進(jìn)行快速色鐠法。'HNMR鐠Bruker300MHz;信號(hào)的化學(xué)位移表達(dá)為百萬分率(ppm),且參照所用的氘代溶劑。MSi普快速拆分ZorbaxC18柱；4.6x50mm;1.8pm。HPLC方法具有以下參數(shù)柱，BetasilC18，5卞m(100x2.1mm);流速，0.5mL/分鐘；梯度，0-23分鐘，水/0.1%TFA中的20%乙腈/0.1%TFA到100%乙腈/0.1%TFA;檢測(cè)230nm。tR指保留時(shí)間?？s寫TPTU，0-(l，2-二氬-2-氧代-l-吡啶基)-N，N，N'，N'-四曱基四氟硼酸脲；DIPEA，N，N'-二異丙基乙胺。4-吡啶-2-基-苯曱醛(3)將4-曱?；?苯基硼酸(5.0g，33.0mmol)和2-溴吡咬(5.53g，35.0mmol，1.05當(dāng)量)在265mL的4:3曱苯/95%乙醇中的混合物用氮?dú)饷摎?0分鐘，且然后在氮?dú)夥障录訜幔a(chǎn)生澄清溶液。加入在50mL的4:4甲苯和95%乙醇的混合物中的Pd(PPh3)4(0.77g)的漿狀物，隨后加入50mL的3MNa2C03水溶液。將產(chǎn)生的混合物在77°C下溫和地回流。16個(gè)小時(shí)后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并通過過濾除去固體。將濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗，并分層。水層用甲苯(3x50mL)萃取。合并的有機(jī)物用水，然后用飽和氯化鈉洗滌，并用硫酸鈉千躁。過濾溶液，且將濾液在減壓下濃縮以獲得黃色油。通過Biotage色傳(40+M柱體；梯度，0%至5%甲醇/二氯曱烷)純化獲得4.13g(68。/。)淡黃色固體(3)。TLCRf(己烷/乙酸乙酯，2:1)=0.25;NMR(CDC13)810.1(s，HCO)，8.77(d，1H)，8.20(d，2H)，8.00(d，2H)，7.81(m，2H)，7.31(q，1H);MS(M)=184;HPLCtRl.2分鐘。#-1-(叔丁氧羰基)-^-2-[4-(吡啶_2基)苯亞甲基I-腙(4)將(3)(0.50g，2.73mmol)、肼基甲酸叔丁酯(0.36g，2,73mmol)、2-丙醇(3.0mL)和甲苯(3.0mL)加入到100mL燒瓶中。在惰性氣氛下，將混合物加熱至回流(85°C)，持續(xù)2小時(shí)，逐漸地冷卻至室溫，并在氮?dú)庀聰嚢柽^夜。16小時(shí)后，過濾反應(yīng)混合物，并用甲苯和己烷(1:3;100mL)的冷混合物洗滌濾餅。真空下干燥該濾餅以獲得0.73g(90。/。)灰白色固體(4)。TLCRf(己烷/乙酸乙酯，1:2)=0.38;NMR(CDC13)88.70(d，1H)，8.02(m，3H)，7.87(s，1H)，7.81(s，1H)，7.76(m，3H),7.25(m，1H)，1.55(s，9H);MS(M)+=298;HPLCtR2.1分鐘。7V，-(4-吡啶-2-基-千基)-肼羧酸叔丁基酯(5)將在THF(3.0mL)中的(4)(0.45g，1.50mmol)置于100mL燒瓶中。將99%的氰基硼氬化鈉(0.12g，1.80mmol，1.2當(dāng)量)加入這一溶液，隨后加入p-TsOH(0.35g,1.80mmol，1.2當(dāng)量)的THF(3.0mL)溶液。1.5小時(shí)后，加入額外的p國TsOH(0.35g，1,80mmol，1.2當(dāng)量)的THF(3.0mL)溶液。室溫下16小時(shí)后，減壓下除去THF。白色殘留物在乙酸乙酯(35mL)和水(35mL)之間分配。水層用乙酸乙酯(3x35mL)萃取。合并的有機(jī)物用水，然后用飽和氯化鈉洗滌，且然后用疏酸鈉干燥。過濾后，在減壓下濃縮，并在高真空下干燥6小時(shí)，獲得0.41g(91Vo)白色固體(5)。TLCRf(己烷/乙酸乙酯，1:2)=0.30;!H匪R(DMSO-d6)88.64(d，1H)，8.26(sb，HN)，8.02(d，2H)，7.93(d，1H)，7.85(dd，1H)，7.42(d，2H)，7.32(dd，1H)，4.80(m，HN)，3.92(d，2H)，1.38(s，9H);MS(M)+=300;HPLCtR7.0分鐘。iV'-(3-叔丁氧羰基氨基-2-羥基-4-苯基-丁基)-N'-(4-吡啶-2-基-千基)-肼羧酸叔丁基酯(7)將(5)(1.0g，3.34mmol)、(6)(2S，3S)-l，2-環(huán)氧-3-(Boc-氨基)-4-苯基丁烷(2.78g，10.5mmol，3.16當(dāng)量)和2-丙醇(15mL)置于100mL燒瓶中。將反應(yīng)加熱至回流?；亓骷s61小時(shí)后，撤去加熱，并將混合物冷卻至室溫。將水/冰(50mL)加入到冷卻的混合物中。將二氯甲烷(50mL)加入到含水的混合物中，且然后將該混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗。水層用二氯甲烷(3x50mL)萃取。合并的有機(jī)物用水，然后用飽和氯化鈉洗滌，且然后用硫酸鈉干燥。過濾干燥的有機(jī)溶液，并將濾液在減壓下濃縮，且然后在高真空下干燥過夜。黃色泡沫通過Biotage色語(40+M柱體；0%至5%曱醇/二氯甲烷，超過25CV)純化以獲得1.24g白色固體(7)(66%)。TLCRf(己烷/乙酸乙酯，1:2)=0.45;力匪R(CD3OD)S8.60(d，1H)，7.88(m4H)，7.50(d，2H)，7.36(m，1H)，7.25(m，4H)，7.18(m，1H)，3.93(m，2H)，3.70(m,2H)，3.0-2.6(m，4H),1.33(s，9H)，1.30(s，9H);MS(M)十=563;HPLCtR9.6分鐘。3-氨基-4-苯基-l-[N-(4-吡啶-2-基-芐基)-肼基l-丁-2-醇三鹽酸鹽(8)將Boc-氮雜-等排體(7)(1.2g，2.1mmol)吸收于1，4-二氧六環(huán)(16mL)中，并于室溫在氮?dú)庀聰嚢琛?分鐘后，經(jīng)注射器加入4NHC1(12mL)。立即有沉淀物形成，且然后將混合物于室溫在氮?dú)庀聰嚢?。約18小時(shí)后，在減壓下除去二氧六環(huán)。黃色殘留物用甲苯(3x25mL)共沸，且然后在高真空下干燥。高真空下6小時(shí)后，獲得0.92g(9"/。)黃色固體(8)。^NMR(CD3OD)S8.87(d，1H)，8.69(m，1H)，8.42(d，1H)，8.06(m，3H)，7.80(d，2H)，7.28(m，6H)，4，25(m，3H)，3.13(m，2H)，2.88(d，2H);MS(M)+=472。二-mPEGn-阿扎那韋的合成二-mPEG3-阿扎那韋的合成將在無水二氯曱烷(3mL)中的mPEG3-叔亮氨酸(0.34gm,1.05mmo1，3.0當(dāng)量)置于100mL燒瓶中，并冷卻至0X:。然后，加入TPTU(0.31gm，1.05mmol，3.0當(dāng)量)和Hunigs堿((U6mL，2.11mmol，6.0當(dāng)量)。將混濁的溶液在0。C下攪拌15分鐘，且然后加入固體二氨基主鏈三鹽酸鹽(8)(0.16gm，0.35mmol)，隨后二氯曱烷漂洗(3mL)。撤去水浴，并使反應(yīng)混合物平衡至室溫。約20小時(shí)后，用二氯曱烷(20mL)稀釋反應(yīng)混合物。將混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗，并用去離子水(50mL)分配。水層用二氯甲烷(4x30mL)萃取。合并的有機(jī)物用水、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉洗滌。有機(jī)層用硫酸鈉干燥。濾掉干燥劑，并在減壓下濃縮濾液以獲得黃色油。使用Biotage(40+M柱體；梯度洗脫0%至5%甲醇/二氯曱烷)進(jìn)行純化以獲得0.14gm(45。/。)澄清油狀二-mPEG3-阿扎那韋。TLCRf(5%曱醇/二氯曱烷)=0.22;力NMR(CDC13)88.71(d，1H)，7.98(d，2H)，7.81(m，2H)，7.45(d，2H)，7.10-7.30(m，IOH)，6.22(d，1H)，5.35(d，1H)，4.25(m，4H)，4.01(m，4H)，3.50—3.80(m，24H),3.38(s，3H)，2.70-3.0(m，4H)，0.85(d,18H);MS(M)+=969;HPLCtR7.85分鐘。(96%純度)。二-mPEGs-阿扎那韋將在無水二氯甲烷(IOmL)中的m-PEGs-叔亮氨酸(2.0gm，4.88mmo1，4.6當(dāng)量)置于100mL燒瓶中，并冷卻至0"C。然后，加入TPTU(1.45gm，4.88mmol，4.6當(dāng)量)和Hunigs堿(1.85mL，10.6mmol,10.0當(dāng)量)。將混濁的溶液在0'C下攪拌15分鐘，且然后加入固體二氨基主鏈三鹽酸鹽(8)(0.50gm，1.06mmol)，隨后二氯甲烷漂洗(IOmL)。撤去冰浴，并使反應(yīng)混合物平衡至室溫。約20小時(shí)后，用二氯甲烷(40mL)稀釋反應(yīng)混合物。將混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗，并用去離子水(60mL)分配。水層用二氯甲烷(4x50mL)萃取。合并的有機(jī)物用水、飽和碳酸氬鈉和飽和氯化鈉洗滌。有機(jī)層用硫酸鈉干燥。濾掉干燥劑，并在減壓下濃縮濾液以獲得黃色油。使用Biotage(40+M柱體；梯度洗脫0%至5%曱醇/二氯曱烷)進(jìn)行純化以獲得0.70gm(58o/。)淡黃色油狀二-mPEGs-阿扎那韋。TLCRf(5%甲醇/二氯甲烷)=0.23;NMR(CDC13)S8.60(d，1H)，7.88(d，2H)，7.65(m，2H)，7,38(d，2H)，7.10-7.25(m，8H)，6.18(d，1H)，5.30(m，2H)，4.15(m，4H)，3.92(m，3H)，3.45-3.65(m，40H),3.30(s，3H)，2.65-2.90(m，4H)，0.80(d，18H);MS(M)+=1146;HPLCtR7.72分鐘。(98%純度)。二-mPEG6-阿扎那韋將在無水二氯甲烷(3hiL)中的mPEG6-叔亮氨酸(0.81gm，1.78mmo1，3.0當(dāng)量)置于100mL燒瓶中，并冷卻至0。C。然后，加入EDC(0.34gm，1.78mmol，3.0當(dāng)量)和HOBT(0.24gm，1.78mmol，3.0當(dāng)量)。將混濁的溶液在O'C下攪拌15分鐘，且然后加入固體二氨基主鏈三鹽酸鹽(8)(0.28gm，0.59mmol)，隨后二氯甲烷漂洗(5mL)。撤去冰浴，并使反應(yīng)混合物平衡至室溫。約28小時(shí)后，用二氯甲烷(35mL)稀釋反應(yīng)混合物。將混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗，并用去離子水(60mL)分配。水層用二氯甲烷(4x50mL)萃取。合并的有機(jī)物用水、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉洗滌。有機(jī)層用硫酸鈉千燥。濾掉干燥劑，并在減壓下濃縮濾液以獲得黃色油。使用Biotage(40+M柱體；梯度洗脫0%至5%甲醇/二氯甲烷)進(jìn)行純化以獲得0.27gm(40。/。)澄清油狀二-mPEG6-阿扎那韋。TLCRf(5%甲醇/二氯甲烷)=0.17;&NMR(CDC13)88.75(d，1H)，78.02(d，2H)，7.85(m，2H),7.50(d，2H)，7.10-7.25(m，6H)，6.22(d，1H)，5.40(m,2H)，4.20(m，4H)，4.15(m，3H)，3.52—3.70(m，48H),3.38(s，3H)，2.75-2.92(m，4H)，0.85(d，18H);MS(M)+=1234;HPLCtR7.70分鐘。(96%純度)。二-mPEG7-阿扎那韋將在無水二氯曱烷(IOmL)中的mPEG7畫叔亮氨酸(2.13gm，4.29mmol，4.6當(dāng)量)置于100mL燒瓶中，并冷卻至0"C。然后，加入TPTU(1.28gm，4.29mmol，4.6當(dāng)量)和Hunigs堿(1.14mL，6.53mmol，7.0當(dāng)量)。將混濁的溶液在0X:下攪拌15分鐘，且然后加入固體二氨基主鏈三鹽酸鹽(0.44gm，0.93mmol),隨后二氯甲烷漂洗(IOmL)。撤去冰浴，并使反應(yīng)混合物平衡至室溫。約22小時(shí)后，用二氯甲烷(30mL)稀釋反應(yīng)混合物。將混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗，并用去離子水(50mL)分配。水層用二氯甲烷(4x50mL)萃取。合并的有機(jī)物用水、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉洗滌。有機(jī)層用硫酸鈉干燥。濾掉干燥劑，并在減壓下濃縮濾液以獲得黃色油。使用Biotage(40+M柱體；梯度洗脫0%至5%甲醇/二氯曱烷)進(jìn)行純化以獲得0.47gm(38。/o)淡黃色油狀二-mPEG7-阿扎那韋。NMR(CDC13)d8.60(d，1H)，7.90(d，2H)，7.70(m，2H)，7.35(d，2H)，7.10—7.25(m，8H)，6.12(d，1H)，5.30(m，2H)，4.10(m，4H)，3.92(m，3H)，3.50-3.70(m，56H)，3.28(s，3H)，2.62—2,90(m，4H)，0.78(d，18H);MS(M)+=1321;HPLCtR7.69分鐘。(96%純度)。實(shí)施例5PEG-地瑞那韋的合成-"方法A"使用第一種方法制備PEG-地瑞那韋。這一實(shí)施例依據(jù)的方法圖示顯示如下(圖示中粗體的化合物數(shù)字僅對(duì)應(yīng)本實(shí)施例5的文本中提供的化合物數(shù)字)。131)mPEGn-CHO2)NaBH416(16a，n=3;16b，n=5;16c，n=7)1)TFA/CH2C1:2)9L-古洛糖酸-l，4-內(nèi)酯(2)的合成50匸和50psi氫壓下，在Parr氫化器中使用10%Pd/C(2.2g)氫化170ml水中的L-抗壞血酸(23.1g，0.13mol)溶液，持續(xù)24小時(shí)。通過過濾除去催化劑，并真空下除去水以獲得23.2g白色結(jié)晶固體(0.13mol,99%)。當(dāng)在甲醇-乙酸乙酯中重結(jié)晶后，獲得22.0g所需的產(chǎn)物。iHNMR(DMSO):85.80(d，1H).5,30(d，1H)，4.95(d，1H)，4.65(t，1H)，4.45(m，1H)，4.23-4.15(m，2H)，3,75(m，1H)，3,48(m，2H)。5，6-異亞丙基-L-古洛糖酸-l，4-內(nèi)酯(3)的合成將L-古洛糖酸-l，4-內(nèi)酯(11.08g，62.0mmol)的二甲基甲酰胺(100ml)溶液冷卻至10°C，并在攪拌下分批加入對(duì)甲苯磺酸(O.09g，0.50mmol)。10r:下，將異丙烯基曱瞇(5.83g，80.5mmol)滴加于產(chǎn)生的溶液。撤去冷卻浴，并將溶液在室溫下進(jìn)一步攪拌24小時(shí)。然后用碳酸鈉十水合物(llg)處理該溶液，并將懸浮液劇烈攪拌2小時(shí)。通過過濾除去固體，并使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮母液(濾液)。將黃色殘留物在甲苯(25ml)中重結(jié)晶。通過抽吸分離產(chǎn)物，用己烷/乙醇(9:1，50ml)洗滌，并干燥無色晶體(3)收率11,22g(82,7%)。^NMR(DMSO):85.87(d，1H)，5.42(br.1H)，4.43(t，1H)，4.41-4.21(m，3H).4.06(m，1H)，3.75(m，1H)，1.35(s，3H)，1.30，(s，3H)。E-R-3-(2，2-二甲基-l，31二氧戊環(huán)-4-基)-丙烯酸乙酯(5)的合成32-34'C下，在3小時(shí)內(nèi)，向良好攪拌的水(24g)中的KI04(10.60g，0.046mol，2.3當(dāng)量)、KHC03(4.60g，0.046mol，2.3當(dāng)量)的漿狀物中滴加丄-5，6-Q-異亞丙基-古洛糖酸-l，4-內(nèi)酯(4.37g，0.020mol)的水(2.70g)和THF(22.90g)溶液。將反應(yīng)混合物在32。C下攪拌4.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至5'C，并在此溫度下保持14個(gè)小時(shí)。通過過濾除去固體，濾餅通過再次成漿用THF(3.0mL)和另一部分THF(4.0mL)洗滌。13-17。C下，25分鐘內(nèi)，在攪拌下向?yàn)V液滴加膦酰乙酸三乙酯(TEPA，3.90g，0.017mol)。隨后，17-25。C下，在30分鐘內(nèi)分批加入K2C03(16.80g)。將反應(yīng)混合物在20'C下攪拌另外17個(gè)小時(shí)。分離水和THF相，并用100mL甲苯萃取水相兩次。合并的THF和曱苯相在真空下濃縮，獲得2.80g淡黃色液體。NMR顯示存在五-/-3-(2，2-二甲基-[1，31二氧戊環(huán)-4-基)-丙烯酸乙酯(5，78%)。因此，按照(3)計(jì)，(5)的粗收率是70%收率。0.50g上述殘留物通過快速色譜法在硅膠上使用3/7(v/v)乙酸乙S旨/正庚烷作為洗脫液來純化。這提供了具有純度96%的0.37g(5)。！HNMR(300MHz，CDC13)6.79(1H，dd，/=16.0，5.3Hz)，6.01(1H，dd,/=16.0，0.9Hz)，4.58(1H，q，/=6.0Hz)，4.16-4.06(3H，m)，3.58(1H,t，/=7.6Hz)，1.35(3H，s)，1.31(3H，s)，1.20(3H，t，《/=7.0Hz)。13C匪R(75MHz，CDC13)8.166.0(C)，144.7(CH)，122.4(CH)，110.2(C)，75.0(CH)，68.8(CH2)，60.6(CH2)，26.5(CH3)，25.8(CH3)，14.2(CH3)。LC-MS，C10H17O4(M+H+)的計(jì)算值201.1，實(shí)測(cè)值201.1。(3aS，4S，6aR)-4-甲氧基-四氫-呋喃并3，4-b呋喃-2(3H)-酮(ot-7)將1.75g未色鐠純化的(5)(78wt。/。純，1.37g，6.80mmol)加入到5.0mL甲醇中的硝基甲烷(458mg，7.50mmol)中，并將溶液冷卻至10。C。隨后，10-21。C下，在35分鐘內(nèi)滴加DBU(1.03g，6.80mmol)。20x:下攪拌i8小時(shí)后，將產(chǎn)生的暗紅色溶液冷卻至ox:，并在o'c下，在30分鐘內(nèi)滴加NaOMe(15mL的0.50M曱醇溶液，7.50mmol)。0匸下攪拌30分鐘后，在0-5。C下通過在劇烈攪拌下滴加3小時(shí)，使反應(yīng)混合物在H2S04(2.43g，96%，23.80mmol)的甲醇(2.43g)溶液中淬滅。0-2。C下攪拌2小時(shí)后，在0-6t:，通過滴加l小時(shí)，使反應(yīng)混合物在攪拌的KHC03(3.53g)的水(6.80mL)漿狀物中淬滅。0。C下，用H2S04(96Y。)將pH調(diào)至4.1。加熱至20X:后，通過過濾除去鹽，并用乙酸乙酯(3x3,75mL)洗滌。洗液在后續(xù)的萃取中使用。真空下濃縮過濾的母液以除去曱醇。向產(chǎn)生的殘留物中加入水(0.80g),并用H2S04(96%)將pH調(diào)至4.1。產(chǎn)生的水溶液用乙酸乙酯(7.0mL，4x5.0mL)萃取35-40'C下，在真空中濃縮合并的有機(jī)相。揮發(fā)物與異丙醇(3x1.40g)共蒸發(fā)，獲得由(a-7)和(p-7)的粗混合物組成的殘留物(1.46g)，將它們?cè)?0'C下溶解于異丙醇(2.02g)中。除去不溶的材料，并將濾液冷卻，使(a-7)自發(fā)結(jié)晶。晶體通過過濾分離，用異丙醇(2x1.0mL，Or)洗滌，并在401C下在真空中干燥，直到實(shí)現(xiàn)恒重，獲得灰白色結(jié)晶產(chǎn)物(a-7)390mg，按(5)計(jì)，收率37%。純度>99%。將母液和第一次(a-7)結(jié)晶的洗液在真空中濃縮，加入甲醇(1.20mL)，并在真空中濃縮產(chǎn)生的混合物。再次加入甲醇(1.20mL)，并在真空中再次濃縮該混合物。向殘留物加入甲醇(0.45g)和甲磺酸(MeS03H，0.027g，0.28mmol)，并將該溶液加熱至回流?；亓?60-65°C)—小時(shí)后，將溶液冷卻至33。C,用三乙胺(0.029g，按MeSO;jH計(jì)，1.05當(dāng)量)中和，并在真空中濃縮。向產(chǎn)生的殘留物加入異丙醇(1.20mL)，并將該混合物在真空中濃縮以獲得0,88g粗產(chǎn)物。47X:下，將殘留物溶解于異丙醇(0.37g)中。在2.5小時(shí)內(nèi)，將產(chǎn)生的溶液冷卻至2X:。通過過濾分離結(jié)晶產(chǎn)物，用異丙醇(3x(U0mL，0t:)洗滌，并在40匸下在真空中干躁，直到實(shí)現(xiàn)恒重，獲得第二批灰白色結(jié)晶產(chǎn)物(a-7)(0.098g)。純度>99%。第一批和第二批(a-7)的總收率按(5)計(jì)是46%。用Agilent6890GC(EPC)和25mm的并具有5nm的膜厚度的CP-Sil5CB柱(部件號(hào)CP7680(Varian)或等同物)，使用5.1kPa的柱頭壓，40mL/分鐘的分流和250t:的注射溫度，進(jìn)行化合物(a-7)和(P-7)的GC測(cè)定。所用的升溫速率為初始溫度50匸(5分鐘)，速率10X:/分鐘，最終溫度250t:(15分鐘)。在250匸的溫度下，用FID檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。保留時(shí)間如下氯苯(內(nèi)標(biāo))17.0分鐘，(a-7)24.9分鐘，(P-7)25.5分鐘。通過在甲醇中在環(huán)境溫度下使用0.2當(dāng)量MeS03H，在16小時(shí)內(nèi)，將純的(a-7)(如上制備)差向異構(gòu)為(a-7)和(P-7)的約3:1的混合物，來確定(p-7)的保留時(shí)間(^NMR和GC-MS確認(rèn)，僅形成(|5-7))。對(duì)于(|5-7)的定量，已假設(shè)(p-7)的響應(yīng)因子與(a-7)的響應(yīng)因子相同。匪R(300MHz,CDC13)35.15(1H，dd，/=7.4，3.8Hz)，4.88(1H，s)，4.10(1H，d，/=11.1Hz)，3.96(1H，dd,/=10.9，3.8Hz)，3.33(3H，s)，3.10-2.99(1H,m)，2.84(1H，dd,/=18.2，11.0Hz).2.51(1H，dd,/=18.3，3.7Hz)。13C匪R(75MHz,CDC13)8175.9(C)，110.0(CH)，83.0(CH)，70.6(CH2)，54.5(CH3)，45.1(CH)，31.7(CH2)。LC-MS:C7Hu04(M+H+)的計(jì)算值159.06，實(shí)測(cè)值159.06.e.e.>99%(由GC確定)。(3/，3aS，6a及)-六氫-呋喃并[2，3-bl呋喃-3-醇(8)30分鐘內(nèi)，將10%LiBH4(2.16g，1.1當(dāng)量)的溶液滴加于(a-7)(1.42g，9.0mmol)的THF(8.0g)溶液中，并在50。C下，將反應(yīng)混合物攪拌2.5小時(shí)。將獲得的懸浮液冷卻至-10'C，并在4小時(shí)的時(shí)間段內(nèi)滴加32%HC1水溶液(1.36g，0.012mol，按LiBH4計(jì)1.3當(dāng)量)，且保持溫度〈-5。C。-IO"C下，攪拌額外的2小時(shí)后，在l小時(shí)內(nèi)滴加三乙胺(1.325g，0.013mol，按HC1計(jì)1.1當(dāng)量)，且保持溫度〈0。C。將反應(yīng)混合物升溫，并在大氣壓下濃縮至殘留物重量約5.0g,將殘留物吸收于乙酸乙酯(18.0g)中，并在大氣壓下再次濃縮至殘留物重量約5.0g。將殘留物吸收于乙酸乙酯(18.0g)中，攪拌回流15分鐘，并冷卻至0。C。通過過濾除去鹽，并用冷(0X:)的乙酸乙酯(2xl.5g)洗滌。<40'0下，將合并的濾液真空濃縮至無色油，其含有0.94g的(8)7.23mmol，按(01-7)計(jì)80%，依據(jù)力NMR，純度87wt0/。。通過快速色讒法在硅膠上使用乙酸乙酯作為洗脫液(R嚴(yán)0.56)純化該油。這獲得0.89g(6.85mmol)的(8),且純度99%,其對(duì)應(yīng)按(a-7)計(jì)的76%的收率。^NMR(300MHz，DMSO-</6)35.52(1H，d,/=4.8Hz)，5.14(1H，d，/=4.5Hz)，4.27-4.17(1H,m)，3.84-3.74(2H，m),3.72-3.62(1H，m)，3.33(1H，dd，/=22.6，14.1Hz),2.77-2.66(1H，m)，2.24-2.14(1H，m),1.75-1.59(1H，m)。13C匪R(75MHz，DMSO-^)8108.8(CH)，72.1(CH2)，69.4(CH)，68.8(CH2)，45.8(CH)，24.6(CH2)。'H醒R(300MHz，CDC13)S5.62(IH，d，/=4.9Hz)，4.36(IH，q，《/=7.2Hz)，3.94-3.77(3H，m)，3.52(IH，dd，/=8.9，7.1Hz)，3.20(1H，s)，2.84-2.73(IH，m)，2.30-2.20(1H，m),1.87-1.72(lH，m)。13C匪R(75MHz,CDC13)3109.3(CH)，72.7(CH2)，70.4(CH),69.7(CH2),46.3(CH)，24.7(CH2).GC-MS:C6H03(M+H+)的計(jì)算值131.0,實(shí)測(cè)值131.0。e.e.>99%(由GC確定)。用HP5890GC以及60mm的和0.25mm內(nèi)徑的且具有0.25jim膜厚度的Supelco24305Betadex柱，使用30psi的柱頭壓，1.4mL/分鐘的柱流，37.5mL/分鐘的分流和250'C的注射溫度，進(jìn)行8的e.e.確定。所用的升溫速率為初始溫度80°C(1分鐘)，速率4。C/分鐘，最終溫度180。C(5分鐘)。在250。C的溫度下，用FID檢測(cè)器進(jìn)4亍檢測(cè)。保留時(shí)間如下(8)27.1分鐘，(:^，3a/，6a5}-六氬-呋喃并[2，3-b]呋喃-3-醇(8)的對(duì)映體l27.3分鐘。e.e.確定所需的外消旋的(8)根據(jù)與針對(duì)旋光(8)所描述的相同的過程制備，除了使用外消旋的(a-7)作為起始物料之外?；衔?9)的合成將三乙胺(I.IOmL，10.40mmol)加入到化合物(8)(500mg，3.85mmol)和N，N-二琥珀酰亞胺(1.47g，5.75mmol)的20mLCH3CN溶液中。將產(chǎn)生的溶液在室溫下攪拌7小時(shí)。減壓下濃縮反應(yīng)混合物。產(chǎn)生的殘留物用20mL飽和KHCO3處理，且然后用乙酸乙酯(150mLx3)萃取。有機(jī)相用水(150mLx3)洗滌，并用32804干燥。除去溶劑，并在真空下干燥后，獲得化合物(9)(827mg，收率79%)。1HNMR(300MHz,CDC13)82.00(m，1H).2.15(m，1H)，2.87(br"4H)，3.14(m，1H)，3.96(m，2H)，4.03(m，1H)，4.12(m，1H)5.28(m，1H)，5.76(d，1H)?；衔?ll)的合成室溫下，將異丁胺(1.60g，21.92mmol)加入到攪拌的化合物(10)(962mg，3.65mmol)的2-丙醇(40mL)溶液中。產(chǎn)生的混合物在75X3下反應(yīng)6小時(shí)。這一時(shí)期后，減壓下濃縮反應(yīng)混合物。將產(chǎn)生的殘留物溶解于5ml的2-丙醇中，并再次減壓下濃縮。獲得所需的白色固體產(chǎn)物(1.17g，收率95%);&NMR(300MHz,CDC13)30.91(d，3H)，0.93(d，3H)，1,37(s，9H)，1.72(m，1H)，2.42(d，2H)，2.70(d，2H)，2.86(m，1H)，3.01(dd，1H)，3.48(m，1H)，3.84(br"1H)，4.74(d，1H)，7.20-7.33(m，5H);LC-MS(w/z)計(jì)算值336.25,實(shí)測(cè)值337.25[M+Hj+?；衔?12)的合成23'C下，將4-硝基苯磺酰氯(1.16g，5.21mmol)加入到攪拌的先前制備的胺(1.16g，3.48mmol)在CH2C12(30mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液(20mL)的混合物中的溶液中。產(chǎn)生的混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。然后用CH2Cl2萃取混合物，并用無水Na2S04干燥。減壓下除去溶劑，隨后經(jīng)硅膠柱色鐠法(3。/oEtOAc于CH2Ch中作為洗脫液)，產(chǎn)生白色無定形固體化合物(12)(1.29g，72%):NMR(300MHz，CDC13)30.86(d，3H)，0.87(d，3H)，1.36(s，9H)，1.84-1.92(m，1H)，2.86-2.95(m，2H)，2.98(d，2H)，3.19(d，2H)，3.75-3.82(m，2H)，4,64(d，1H)，7.22-7.32(m，5H)，7.95(d，2H)，8.32(d，2H);LC-MS(附/z)計(jì)算值521.22，實(shí)測(cè)值544.3[M+Na+?；衔?13)的合成將Pd/C(100mg)加入到化合物(12)(1.28g，2.40mmol)的EtOAc(20mL)溶液中。于室溫在氫氣(15psi)下，將混合物攪拌10小時(shí)。反應(yīng)混合物經(jīng)硅藻土(Cdite)過濾，并用EtOAc洗滌濾餅。減壓下除去溶劑，隨后經(jīng)硅膠柱色諳法(7%EtOAc于CHC13中作為洗脫液)，獲得白色固體的對(duì)應(yīng)的芳香胺(1.16g，98%):'HNMR(300MHz，CDCI3)30.86(d，3H)，0.89(d，3H)，1.34(s，9H)，1.86(m，1H)，2.77(dd，1H)，2.89-3.15(m，5H)，3.85(br.，2H)，4.05(br.，1H)，4.17(s，2H)，4.65(br"1H)，6,71(d，2H)，7.19-7.30(m，5H)，7.58(d，2H);LC-MS(附/z)計(jì)算值491.3，實(shí)測(cè)值492.M+H+，514.2M+Na廣。化合物(16)的合成(16a、16b和16c的通用過程)85X:下，將化合物(13)(98mg，0.20mmol)和mPEGn-CHO(n=3、5或7，分別進(jìn)行)(0.30mmol)的CH3OH(10mL)溶液在共沸條件下攪拌90分鐘(已除去4.0mlCH3OH)。這一時(shí)期后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并分批加入硼氬化鈉(20當(dāng)量)。50'C下，將混合物攪拌2小時(shí)，且然后用碳酸氫鈉淬滅反應(yīng)。加入15t)mlDCM。溶液用H20(3xi50ml)洗滌。有機(jī)相用石充酸鈉干燥，且然后減壓下濃縮。殘留物通過珪膠柱色譜法(2%MeOH于CHCb中作為洗脫液)純化以分別獲得無色油狀化合物(16a)、(16b)或(16c)(收率70-80%)?；衔?16a)(n=3),力匪R(300MHz,CDC13)S0.86(d，3H)，0.89(d，3H)，1.33(s9H)，1.82(m，1H)，2.77(dd，1H)，2.89-2.92(m，2H)，2.99-3.11(m，3H)，3.75-3.80(m，2H)，3.32(m，2H)，3.38(s，3H)，3.57(m，2H)，3.60-3.90(mIIH)，4.04(br"lH)，4.62(d，1H)，4.85(t，1H)，6.60(d，2H)，7.19-7.30(m，5H)，7.54(d，2H);LC-MS(附/z)計(jì)算值637.3，實(shí)測(cè)值638.3[M+H廣化合物(16b)(n-5)，力NMR(300MHz，CDC13)S0.86(d，3H)，0.89(d，3H)，1.34(s,9H)，1.80-1.86(m，1H)，2.77(dd，1H),2.89-2.92(m3H)，2.99-3.11(m，2H)，3,32(m，2H)，3.36(s，3H)，3.54(m，2H)，3.58-3.90(m，19H)，4.65(d，1H)，4.98(t，1H)，6.59(d，2H)，7.19-7.30(m5H)，7.54(d,2H)?；衔?16c)(n=7)，，H醒R(300MHz,CDC13)S0.86(d,3H)，0.89(d，3H)，1.34(s，9H)，1.80-1.86(m，1H)，2.77(dd，1H)2.89-3.11(m，5H)，3.32(m，2H)，3.36(s，3H)，3.54(m，2H)，3.58-3.90(m27H)，4.65(d，1H)，4.98(t，1H)，6.59(d，2H),7.19-7.30(m，5H),7.54(d，2H)?；衔?17)的合成(17a、17b和17c的通用過程)將化合物(17a)、(17b)或(17c)(每個(gè)分別進(jìn)行)(0.151mmol)在30%三氟乙酸的CH2Cl2(4mL)混合物中的溶液攪拌60分鐘。這一時(shí)期后，減壓下濃縮反應(yīng)混合物，并將產(chǎn)生的殘留物再次溶解于CH2C12(5.0mL)中。向這一溶液加入化合物9(45mg，0.17mmol)和三乙胺(0.155mL，1.51mmol)。將產(chǎn)生的混合物攪拌2小時(shí)。然后，減壓下濃縮反應(yīng)混合物，并通過硅膠柱色鐠法純化殘留物(2%MeOH于CHC13中作為洗脫液)以分別獲得油狀化合物(173)、("b)和(nc)(收率80-89%)?；衔?17a)(n=3),NMR(300MHz，CDC13)80.87(d，3H),0.93(d3H)，1.42-1.46(m,1H)，1.57-1.65(m，1H)，1.79-1.85(m，1H)，2.75-2.81(m，2H)，2.87-2.98(m，3H)，3.05-3.16(m，2H)，3.34(m，2H)，3.38(s，3H)，3.58(m，2H)，3.64-3.74(m，IOH)，3.82-4.00(m，5H)，4.97-5.01(m，2H)，5.63(d，1H)，6.67(d，2H)，7.18-7.28(m，5H)，7.53(d，2H);LC-MS(附/z)計(jì)算值693.3,實(shí)測(cè)值694.M+H廣?；衔?17b)(n=5)，&NMR(300MHz,CDC13)S0.87(d，3H)，0.93(d，3H)，1.46(m，1H),1.60(m，1H)，1.82(m，1H),2.75-2.81(m，2H)，2.87-2.98(m，3H)，3.05-3.16(m，2H)，3.32(m，2H)，3.36(s，3H)，3.54(m，2H)，3.64-3.74(m，18H),3.82-3.92(m,5H)，4.97-5.01(m，2H),5.63(d，1H)，6.67(d，2H),7.18-7.28(m,5H)，7.54(d,2H);LC-MS(附/z)計(jì)算值781.4,實(shí)測(cè)值782.5[M+H廣化合物(17c)(n=7)，&NMR(300MHz,CDC13)60.87(d，3H)，0.92(d,3H)，1.46(m，1H),1.60(m，1H)，1.82(m，1H)，2.75-2.81(m，2H)，2.87-2.98(m，3H)，3.05-3.16(m，2H)，3.30(m，2H)，3.36(s，3H)，3.54(m，2H)，3.64-3.74(m，26H),3.82-3.92(m，5H)，4.97-5.05(m，3H)，5.63(d，1H)，6.62(d，2H)，7.18-7.28(m,5H)，7.53(d，2H);LC-MS(w/z)計(jì)算值869.4，實(shí)測(cè)值870.3[M+H+。實(shí)施例6PEG-地瑞那韋的合成-"方法B"^_用第二種方法制備PEG-地瑞那韋。這一實(shí)施例依據(jù)的方法圖示顯示如下(圖示中粗體的化合物數(shù)字僅對(duì)應(yīng)本實(shí)施例6的文本中提供的化合物數(shù)字)。對(duì)硝基笨基^OjCl化合物(18)的合成23°C下，將mPEG3-NH2(489mg，3.0mmol)加入到攪拌的化合物(10)(264mg，1.0mmol)[根據(jù)實(shí)施例12中合成化合物(10)的過禾呈制備的2-丙醇(10mL)溶液中。將產(chǎn)生的混合物在75X:下攪拌6小時(shí)。這一時(shí)期后，減壓下濃縮反應(yīng)混合物。殘留物通過硅膠柱色鐠法(biotage，CH3OH/DCM，4-15%CH3OH，20CV)純化。獲得3卯mg的粘性油狀的對(duì)應(yīng)的胺(18)(收率91.5%)。醒R(300MHz，CDC13)8.1.35(s，9H)，1.85-1.89(m，1H)，2.70(m，lH)，2.86(m，4H)，3.00(dd，1H)，3.35(s，3H)，3.54-3.75(m，IOH)，3.85(m，1H)，4.70(d，1H)，7.10-7.40(m，5H);LC-MS(附/。計(jì)算值426.3，實(shí)測(cè)值427.M+H廣。化合物(19)的合成23。C下，將4-硝基苯磺酰氯(304mg，1.38mmol)加入到攪拌的先前制備的胺(18)(390mg，0.92mmol)在CH2C12(15mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液(IOmL)的混合物中的溶液中。將產(chǎn)生的混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。然后，用CH2Cl2萃取混合物，并用無水Na2S04干燥。減壓下除去溶劑，隨后經(jīng)硅膠柱色諳法(biotage，DCM/CH3OH，CH3OH:1-6%,20CV)，獲得所需的粘性油狀產(chǎn)物(19)(455mg,81%):力NMR(300MHz，CDC13)S1.37(s，9H)，2.85(m，1H)，3.10(m，2H)，3.30(m，1H)，3.41(m，2H)，3.38(s，3H)，3.50-3.85(m，IIH)，3.90(m，1H)，4.45(d'1H)，4.95(d，1H)，7.22-7.32(m，5H)，7.95(d，2H)，8.32(d，2H)。LC-MS(附/z)計(jì)算值611.3，實(shí)測(cè)值612.3[M+H+。化合物(20)的合成將Pd/C(40mg，10%)加入到化合物(19)(455mg，0.74mmol)的EtOAc(10mL)溶液中。于室溫在氫氣(30psi)下，將混合物攪拌4.0小時(shí)。將反應(yīng)混合物經(jīng)硅藻土過濾，并用EtOAc洗滌濾餅。減壓下除去溶劑，獲得白色固體狀的對(duì)應(yīng)的芳香胺(420mg，98%):NMR(300MHz，CDCb)81.36(s，9H)，2.90-3.10(m，3H),3.10-3.30(m，3H)，3.37(s，3H)，3.56(m，2H)，3.63-3.90(m，IIH)，4.54(br"1H)，4.88(d，1H)，6.65(d，2H)，7.19-7.30(m，5H)，7.53(d，2H);LC-MS(w/z)，計(jì)算值581.3，實(shí)測(cè)值582.3[M+H]+?；衔?21)的合成室溫下，將化合物(20)(116mg，0.2mmol)在30%三氟乙酸的CH2C12(4mL)混合物中的溶液攪拌1.0小時(shí)。這一時(shí)期后，減壓下濃縮反應(yīng)混合物，并將殘留物溶解于CH2Cl2(5.0mL)+。向該溶液加入(3/，3aS，6a/)-3羥基六氫呋喃并[2，3-6呋喃基琥珀酰亞胺基碳酸酉旨化合物(9)(54mg，0.2mmol)和三乙胺(0.5mL)。將產(chǎn)生的混合物攪拌2小時(shí)。此時(shí)，減壓下濃縮溶液。產(chǎn)生的殘留物通過柱色i普法(biotage，DCM/CH3OH，CH3OH:2-6%,20CV)純化以獲得油狀化合物(21)(102mg，80%)。力醒R(300MHz，CDC13)61.40-1.60(m，1H)，1.60-1.80(m，1H)，1.90(br"1H)，2.75(m，1H)，2.90(m，1H)，3.00-3.15(m，2H)，3.15-3.30(m，3H)，3.37(s，3H)，3.50-3.85(m，12H)，3.85-3.98(m，4H)，4.23(br"2H)，4.50(br"1H)，5.02(m，1H)，5.40(d，1H)，5.64(d，1H)，6.67(d，2H，/)8.6Hz)，7.18-7.28(m，5H)，7.51(d，2H);LC-MS(一，計(jì)算值637.2;實(shí)測(cè)值638.M+H廣。實(shí)施例7PEG-地瑞那韋的合成-"方法C"孑吏用第三種方法制備PEG-地瑞那韋。這一實(shí)施例依據(jù)的方法圖示顯示如下(圖示中粗體的化合物數(shù)字僅對(duì)應(yīng)本實(shí)施例7的文本中提供的化合物數(shù)字)。2930(30an=3;30b'n5;30cn。7)TFA,CH2CI2雙-THF-NHSil(31a，n3;31b,n^5;3k,n*7)化合物(23)的合成將BnBr(6.00g,0.035mol)加入到攪拌的J5oc-7)r-6^fe[化合物(22),10.33g，0.035mol和碳酸鉀(7.20g，0.052mol)的丙酮(45mL)溶液。將產(chǎn)生的混合物在60。C下攪拌16個(gè)小時(shí)。這一時(shí)期后，通過過濾除去固體，并減壓下濃縮反應(yīng)混合物。產(chǎn)生的殘留物通過柱色鐠法(biotage:DCM/CH3OH，CH3OH，0-6%,15CV)純化。獲得白色固體產(chǎn)物(23)(13.0g，96%);，HNMR(300MHz,CDC13)S1.44(s，9H)，3.05(m，2H)，3.72(s，3H)，4.55(m，1H)，5.00(m，1H)，5.05(s，2H)，6.90(d，2H)，7.10(d，2H)，7.20-7.38(m，5H);LC-MS(附/z)計(jì)算值385.2，實(shí)測(cè)值408.M+Na+?；衔?25)的合成將在無水THF(150ml)中的化合物(23)(12.74g，0.033mol)和碘氯甲烷(23.35g，0.132mol)冷卻至-78。C,并滴加LDA(83ml，0.165mol)。當(dāng)添加完成后，將溶液在-75。C下攪拌額外的15分鐘。滴加乙酸溶液(20mlTHF+20mlHOAc)，且保持溫度低于-70。C。加入200ml甲苯后，繼續(xù)攪拌15分鐘，然后加入IOOmll。/。HCl。有才幾相用0.5MNaHC03(10ml)洗滌，并將其分離。向該溶液加入100ml乙醇，并冷卻至-78。C。加入NaBH4(6.3g，0.17mol)。-78°(2下，將混合物攪拌l小時(shí)，且然后通過加入100ml飽和KHS04淬滅反應(yīng)。有機(jī)相用水洗滌，并用Na2S04干燥。除去溶劑后，產(chǎn)生的固體用己烷洗滌，且然后在乙酸乙酯中重結(jié)晶。獲得黃色固體化合物(25a)[3.5g，按化合物(23)計(jì)30%1。&NMR(300MHz,CDC13)31.39(s，9H)，2.91(m，2H)'3.17(br"1H)，3.57(m，1H)，3.67(m，1H)，3.84(m，2H)，4.57(m，1H)，5.05(s，2H),6.92(d，2H)，7.13(d，2H)，7.20-7.38(m,5H);LC-MS(附/z)計(jì)算值405.2，實(shí)測(cè)值428.2[M+Nal+。化合物(26)的合成將化合物(25a)(2,18g，5.38mmol)懸浮于0.1N的氫氧化鉀的甲醇溶液(5.92mmo1，59.2ml)中。將產(chǎn)生的混合物在50'C下攪拌1.5小時(shí)。減壓下除去溶劑，并將固體溶解于100mlDCM，隨后其用水(IOOmLx3)洗滌。千燥溶液，并在減壓下除去溶劑。獲得所需的黃色固體產(chǎn)物(1.74g，88%)。力NMR(300MHz，CDC13)31.40(s，9H)，2.77(m，3H)，2.92(m，2H)，3.65(br.，1H)，4.44(br"1H)，5.05(s，2H)，6.92(d，2H)，7.15(d，2H)，7.26-7,38(m，5H);LC-MS(w/z)計(jì)算值369.2，實(shí)測(cè)值370.M+H+，392.2[M+Na+。化合物(27)&(28)的合成23XU下，將異丁胺(2.20g,30mmo1)加入到攪拌的化合物(26)(I.74g，4.80mmol)的2-丙醇(60mL)溶液中。產(chǎn)生的混合物在75匸下反應(yīng)6小時(shí)。這一時(shí)期后，減壓下濃縮反應(yīng)混合物。將殘留物溶解于5ml2-丙醇中，并再次減壓下濃縮。獲得黃色固體化合物(27)(1.97g)，該化合物沒有進(jìn)一步純化，就用于下一反應(yīng)。23。C下，將4-硝基苯磺酰氯(1.48g，6.67mmol)加入到攪拌的化合物(27)(1.97g，4.45mmol)在CH2C12(40mL)和飽和碳酸氬鈉水溶液(30mL)的混合物中的溶液中。室溫下，將產(chǎn)生的混合物攪拌16小時(shí)。然后用CH2C12(150mLx2)萃取混合物。有機(jī)相用水(150mLx3)洗滌，并用無水Na2S04干燥。減壓下除去溶劑，隨后經(jīng)柱色譜法(biotage:DCM/CH3OH，CH3OH，16%,15CV，6-8%5CV)獲得白色無定形固體化合物(28)(2.14g，77%):JHNMR(500MHz,CDC13)S0.87(d,3H),0.89(d，3H)，1.37(s，9H)，1.87(m，1H)，2.86(m，2H)，2.99(d，2H)，3.19(d，2H)，3.72(m，1H)，3.79(m，2H)，4.61(d，1H)，5.05(s，2H)，6.90(d，2H)，7.14(d,2H)，7.35(m，1H)，7.44(m，4H)，7.95(d，2H)，8.34(d，2H);LC-MS(附/z)計(jì)算值627.26，實(shí)測(cè)值650.M+Na廣?；衔?29)的合成將Pd/C(428mg)加入到化合物(28)(2.14g,3.41mmol)的THF(20mL)溶液中。于室溫在氫氣氣氛(45psi)下，將混合物攪拌48.0小時(shí)。反應(yīng)混合物經(jīng)硅藻土過濾，并用THF洗滌濾餅。減壓下除去溶劑，獲得對(duì)應(yīng)的白色固體芳香胺(1.48g，86%):^NMR(500MHz，CDC13)50.86(d，3H)，0.90(d，3H)，1.36(s，9H)，1.85(m，1H)，2.77(m，1H)，2.84(m，1H)，2.90(m，2H)，2.92(d，1H)，3.07(m，1H)，3.71(m，1H),3.77(m，1H)，4.16(br"2H)，4.72(d，1H)，6.66(d，2H)，6.75(d，2H)，7.09(d，2H)，7.52(d，2H)?；衔?30a)、(30b)和(30c)的合成的通用過程70匸下，將化合物(29)(152mg，0.30mmol)和mPEGn-Br(n=3、5和7，三個(gè)分別進(jìn)行)(0.45mmol)的丙酮(10mL)溶液攪拌20小時(shí)。這一時(shí)期后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并加入150mLDCM。溶液用水(150mLx2)洗滌。有機(jī)相用硫酸鈉干燥，且然后在減壓下濃縮。產(chǎn)生的殘留物通過柱色鐠法(biotage:DCM/CH3OH,CH3OH,3-6%,15CV,6-8%5CV)純化以分別獲得無色油狀化合物(30a)、(30b)和(30c)(收率70-80%)。化合物(30a)(n-3):NMR(500MHz,CDC13)60.83(d，3H)，0.89(d，3H)，1.36(s，9H)，1.82(m,1H)，2.62(m，1H)，842.69(m，1H)，2.86(m，1H),2.92(m，3H)，3.36(s,3H)，3.53(m，2H)，3.62(m，2H)，3.68(m，2H),3.74(m，4H)，3.85(m，3H)，4.08(m，2H)，4.40(br"2H)，4.77(d，1H)，6.62(d，2H)，6.82(d，2H)，7.14(d，2H)，7.38(d，2H);LC-MS(w/z)計(jì)算值653.3;實(shí)測(cè)值654.4[M+H廣。化合物(30b)(n=5):力匪R(500MHz，CDC13)60.83(d，3H),0.89(d，3H),1.37(s，9H)，1.81(m，1H)，2,60(m，2H)，2.85(m，1H)，2.92(m，3H)，3.35(s，3H)，3.52(m，2H)，3.61-3.65(m，11H),3.70(m，2H)，3.75(m，5H)，3.85(m，2H)，4.07(m，2H)，4.49(br.，2H)，4.73(d，1H)，6.62(d，2H)，6.82(d，2H)，7.15(d，2H)，7.34(d,2H);LC畫MS(w/"計(jì)算值741.4，實(shí)測(cè)值742.5[M+H+,764.4.[M+Na廣。化合物(30c)(n=7):NMR(500MHz,CDC13)80.82(d，3H)，0.89(d，3H)，1.36(s，9H)，1.80(m，1H)，2.85(m，1H)，2.92(m，3H)，3.35(s，3H)，3.52(m，2H),3.61-3.65(m，19H)，3.70(m，2H)，3.75(m，5H)，3.85(m，2H)，4.07(m，2H)，4.49(s，2H)，4.73(d，1H)，6.61(d，2H)，6.82(d，2H)，7.14(d，2H)，7.35(d，2H);LC國MS(附/z)計(jì)算值829.4,實(shí)測(cè)值830.5[M+H+?；衔?31a)、(31b)和(31c)的合成的通用過程室溫下，將化合物(30a)、(30b)和(30c)(0.20mmol，三個(gè)分開進(jìn)行)在30%三氟乙酸的CH2Cl2混合物(4.0mL)中的溶液攪拌40分鐘。這一時(shí)期后，減壓下濃縮反應(yīng)混合物，并將殘留物再次溶解于CH2C12(5.0mL)。向該溶液加入(3及，3aS，6a及)-3羥基六氫呋喃并2，3-61呋喃基琥珀酰亞胺基碳酸酯(54mg，0.20mmol)和三乙胺(0.155mL，1.51mmol)。將產(chǎn)生的混合物攪拌1小時(shí)。然后在減壓下濃縮反應(yīng)混合物，并通過柱色語法(biotage,DCM/CH3OH，CH3OH:0-4%,20CV，4-6%，10CV)純化殘留物以分別獲得無色油狀化合物(31a)、(Mb)和(31c)(收率75-80%)?；衔?31a)(n=3):力匪R(500MHz，CDC13)30.83(d，3H)，0.88(d，3H)，1,58(m，1H)，1.64(m，1H)，1.77(m，1H)，2.65(m，1H)，2.72(m，2H)，2.90(m，2H)，2.98(m，2H)，3.35(s，3H)，3.52(m，2H)，3.60(m，2H)，3.64(m，3H)，3.69(m，4H)，3.81(m，5H)，3.92(m，1H)，4.03(m，2H)，4.46(s，2H)，5.00(m，1H)，5.16(d，1H)，5.62(d，1H)，6.60(d，2H)，6.78(d，2H)，7.08(d，2H)，7.38(d，2H);LC-MS(zw/z)計(jì)算值709.3，實(shí)測(cè)值710.3[M+H+?；衔?31b)(n=5):!H匪R(500MHz，CDC13)S0.86(d，3H)，0.92(d,3H),1.71-1.85(m，3H)，2.65(m，2H)，2.78(m，1H)，2.97(m，4H)，3.36(s，3H)，3.54(m，2H)，3.64(m，IOH)，3.68(m，3H)，3.75(m，4H)，3.69(m，4H)，3.85(m，4H),3.90(m,1H)，4.00(m，1H)，4.10(m，2H)，4.50(br.，2H)，5.06(m，1H)，5.12(d，1H)，5.66(d，1H),6.64(d，2H)，6.82(d，2H)，7.13(d，2H)，7.37(d，2H);LC-MS(附/z)計(jì)算值797.4，實(shí)測(cè)值798.4[M+Hj+?；衔?31c)(n=7)，NMR(500MHz，CDC13)30.86(d，3H)，0.92(d，3H)，1.71-1.85(m，3H)，2.62(m,2H)，2.78(m，1H)，2.97(m，4H)，3.37(s，3H)，3.54(m，2H)，3,64(m，19H)，3.68(m，3H)，3.73(m,4H),3.85(m，4H)，3.90(m，1H)，4.00(m，1H)，4.08(m，2H)，4.52(br"2H)，5.06(m，1H)，5.12(d，1H)，5.66(d，1H)，6.64(d，2H)，6.82(d，2H)，7.13(d，2H)，7.37(d，2H);LC-MS(附/z)計(jì)算值885.4,實(shí)測(cè)值886.M+H廣。實(shí)施例8PEG-替拉那韋的合成制備PEG-替拉那韋。這一實(shí)施例依據(jù)的方法圖示顯示如下(其中Xa代表噁唑啉酮，且示例中粗體的化合物數(shù)字僅對(duì)應(yīng)本實(shí)施例8的文本中提供的化合物數(shù)字)。vSOCI2.rt,過夜O回*2小時(shí)A2A81%<formula>formulaseeoriginaldocumentpage87</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage87</formula>13.兩步收率72%13a.n=3,62%;13b.n-5,52%;13c.n=7,50%在進(jìn)行這一合成中，使用了以下材料。氫化鈣(CaH2)、乙二醇、原乙酸三甲酯、氫氧化鈉、氯化鈦(IV)、N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)、高氯酸60%(HCL04)、苯乙基氯化鎂(l.OM在THF中)、丁醛(butyaldehyde)、科里試劑(PCC)、異丙氧基鈦(IV)、叔丁醇鉀(KOBut)、鈀/碳(10wt。/。)、草酰氯[(COC1)2、二甲基亞砜(DMSO)、無87水甲醇、硼氬化鈉(NaBH4)和吡吱購買于Sigma-Aldrich(StLouis，MO)。mPEGn-OH(n=3、5、7)購買于TCIAmerica。5-三氟甲基國2-吡咬碌酰氯購買于TorontoResearchChemicals,Inc.(NorthYork,ON，Canada)。DCM由CaH2蒸餾。四氫呋喃(THF)和其他有機(jī)溶劑購買后直接使用。2-(E)-戊烯酸、亞硫酰氯、(R)-(-)-4-苯基-2-噁喳啉酮、正丁基鋰(1M，己烷)、3-[雙(三曱硅烷基)氨基l苯基氯化鎂(1.0M,THF)、溴化銅(I)-二甲疏、節(jié)基溴和氯化銨購買于Sigma-Aldrich(StLouis,MO)。氫氧化銨、硫酸鈉、乙酸乙酯和己烷購買于FisherScientific(FairLawn，NJ)。硫酸鎂、碳酸氬鈉和碳酸鈉購買于EMScience(Gibbstown，NJ)。DCM由CaH2蒸餾。THF(無水)和乙腈也購買于Sigma-Aldrich，且購買后直接使用。?；戎苽?2A)氮?dú)庀?，?-(E)-戊烯酸(15.4mL，152mmol)加入到裝有回流冷凝管的lOOml燒瓶中。將反應(yīng)燒瓶安裝于水浴中后，然后緩慢加入亞硫酰氟(10,5mL,144mmol)，使其在水浴中保持額外的10分鐘，然后將反應(yīng)體系移出并使其升至室溫。將反應(yīng)體系保持在室溫下，過夜，且然后在油浴中加熱至110。C(外溫)，持續(xù)30分鐘，并在這一溫度下保持額外的30分鐘。在開始真空蒸餾之前，將溶液冷卻至40r以下。在45-55。C(外溫)/8mmHg，真空蒸餾提供所需的產(chǎn)物2(13.8g，收率81%),其為無色液體。NMR(300MHz，CDCl3)S1.13(t，3H，/=7.5Hz)，2.29-2.39(m，2H)，6.07(dt，1H，/二1.5，15.3Hz)，7.28(dt，lH，/=6.3，15.3Hz)。噁唑啉酮酰胺鍵的形成(4A)將噁唑淋酮(3A)(6.90g，42.3mmol)加入到用氮?dú)獗Ｗo(hù)的500-mL燒瓶中，并加滿無水THF(265mL)。在千水浴中，將THF溶液冷卻至醫(yī)78。C。然后緩慢加入n-BuLi(1.6M于己烷中，27.8mL，44.4mmol)(約12分鐘)。在7分鐘內(nèi)緩慢加入2-(E)-戊烯酰氯(2A)(5.51g，46,5mmol)之前，將反應(yīng)體系在此溫度下保持30分鐘。完成添加酰基氯后，立即撤去千冰浴，并將反應(yīng)溶液在40分鐘內(nèi)升至室溫。然后，由NH4C1的飽和溶液(400mL)淬滅反應(yīng)。加入少量的純?nèi)ルx子水以溶解NH4C1沉淀。分離有機(jī)THF相，并用EtOAc(100mLx2)萃取水相。將有機(jī)相合并，用MgS04干燥，并濃縮至約25mL。當(dāng)攪拌時(shí)，加入己烷(200mL)，且然后在幾分鐘內(nèi)沉淀出粗產(chǎn)物。過濾后，將溶液濃縮至約10mL，并用己烷(約180mL)二次沉淀。濃縮母液，并在Biotage(EtOAc/己烷6%-50%，20CV)上純化產(chǎn)生的殘留物。合并三個(gè)部分的無色產(chǎn)物(4A)(9.95g，收率96%)。0.45(己烷:EtOAc=3:1)，RP-HPLC(betasilC18，0.5mL/min，60-100%ACN，在8分4中內(nèi))7.40min，LC畫MS(ESI，MH)246.1。H匪R(300MHz，CDC13)S1.08(t，3H，/=7.5Hz)，2.28(p，2H，/=6.3Hz)，4.28(dd，1H，/=3.9，9.0Hz)，4.70(t，1H，/=8.7Hz)，5.49(dd，1H，/=3.9,8.7Hz)，7.09-7.18(m，1H)，7.23-7.42(m，6H)。不對(duì)稱Michael加成將溴化銅(I)-二甲硫(7.44g，36.2mmol)加入到用氮?dú)獗Ｗo(hù)的500-mL燒瓶中，隨后加入無水THF(75mL)。將溶液用干冰/乙腈冷卻至-45。C，然后在30分鐘內(nèi)滴加3-雙(三甲硅烷基)氨基l苯基氯化鎂(1.0M，36.2mL，36.2mmol)。將反應(yīng)在-40。C至0'C之間的溫度下保持20分鐘。在20分鐘內(nèi)，滴加以上起始物料(4A)(7.1g，29.0mmol)的THF(19.3mL)溶液。然后將反應(yīng)在10分鐘內(nèi)升至0。C，且然后進(jìn)一步在15分鐘內(nèi)升至室溫。室溫下，用添加NH4C1水溶液(70mL)15分鐘來淬滅反應(yīng)混合物。然后，通過添加NH40H(5mL)將水相調(diào)至pH=8。然后，將溶液傾入醚溶液(250mL)中，并分離水相。醚相用NaHC03(80mLx2)洗滌，直到水相對(duì)pH試紙不再呈藍(lán)色。然后，用Na2S04干燥醚相，并在真空中濃縮。將產(chǎn)生的殘留物載入反相柱(40Mx3，每個(gè)約8g粗產(chǎn)物)，并由20%-70%ACN以20CV純化。收集級(jí)分，并蒸發(fā)乙腈。然后，水相用DCM(50mLx3)萃取。合并有機(jī)溶液，用Na2S04千燥，濃縮以獲得產(chǎn)物(6A)(8.73g，收率89%)。0.11(己烷:EtOAc=3:1)，RP畫HPLC(betasilC18,0.5mL/min，60-100%ACN，在8分鐘內(nèi))5.67min，LC-MS(ESI，MH+)339.2。NMR(500MHz，CDC13)S0.76(t，3H，/=7.2Hz)，1.50-1.68(m，2H),2.90-3.00(m，1H)，3.06(dd，1H，/=7.2，15.6Hz)，3.48(dd，1H，/=7.5，15.6Hz)，4.17(dd，1H，/=4.2，9.3Hz)，4.64(t，1H，/=9.0Hz)，5.38(dd，1H，《/=3.9，8.7Hz)，6.51-6.61(m，3H)，6.99-7.07(m，3H)，7.22-7.28(m，3H)。胺的節(jié)基保護(hù)在500-mL燒瓶中，將以上產(chǎn)物(6A)(13.5g，40mmol)溶解于DCM(146mL)和H20(106mL)中。加入固體碳酸鈉(25g，240mmol)和千基溴(19.0mL，160mmol)。在通過TLC檢查之前，將溶液加熱至(52X:外溫)回流過夜(20小時(shí))。反應(yīng)體系用NaHCO3(300mL)稀釋，并從溶液中分離DCM。然后用DCM(60mLx2)萃取水相，并合并有機(jī)相。溶液用Na2S04干燥，并濃縮。殘留物通過6-22%EtOAc/己烷以18CV載入Biotage(40Mx2，每個(gè)14g粗產(chǎn)物)。收集產(chǎn)物級(jí)分，并蒸發(fā)以獲得無色軟固體產(chǎn)物(2)(17.5g，84%)。0.42(己烷:EtOAc二3:1),RP-HPLC(betasilC18，0.5mL/min，60-100%ACN，在8分鐘內(nèi)，100%8-12分鐘)9，80min，LC-MS(ESI，MH+)519.2。NMR(300MHz，CDC13)60.65(t，3H，/=7.2Hz)，1.40-1.55(m，2H)，2.84-2,94(m，1H)，3.02(dd，1H，/=7.2，15.6Hz)，3.42(dd，1H，/=7.5，15.6Hz)，4.15(dd，1H，/=3.9，8.7Hz)，4.53-4.67(m，5H),5.35(dd，1H，/=3.9，8.7Hz)，6.50-6.61(m，3H)，6.98-7.07(m，3H)，7.18-7.29(m，13H)。乙二醇原酸酯，化合物(3)的合成新制的CaH2蒸餾的起始物料(26.3g，219mmol)與乙二醇(llmL，197mmol)在室溫下混合。加入H2S04(3-4滴，0.25%),并在此溫度下攪拌。將具有固體NaOH干燥瓶的水噴霧真空系統(tǒng)(watersprayvacuosystem)和水銀壓力計(jì)安裝于蒸餾反應(yīng)系統(tǒng)。將真空調(diào)至低于95mmHg(不低于55mmHg)，并4吏溫度逐漸升高(每10分鐘10°C)。收集初餾物(2g)之后，在68-71r/58-62mmHg下收集無色產(chǎn)物(16.2g，收率70%)。tHNMR(300MHz，CDCl3)51.55(3H，s)，3.28(3H，s)，3.97-4.12(4H，m)。制備化合物(4)的TiCV活化的C-C偶聯(lián)氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將預(yù)先真空干燥的起始物料(2)(6.45g，12.4mmol)溶解于DCM(50mL)中。然后使其在干冰/丙酮浴中冷卻至-78。C。滴加TiCl4(2.45mL，22.3mmol)，并在加入DIPEA(4.11mL，23.6mmol)之前，將反應(yīng)體系在此溫度下保持5分鐘。立即撤去該浴，并在冰鹽浴中將反應(yīng)升至0"C。將再次冷卻至-78。C之前，在此溫度下，保持烯醇化物形成，持續(xù)30分鐘。緩慢加入乙二醇原酸酯(3)(3.66mL，31mmol)。加入后，將反應(yīng)升至0。C，并在此溫度下保持2.5小時(shí)。反應(yīng)用半飽和NH4C1和水淬滅。溶液用水稀釋，并用DCM(50mLx3)萃取。合并的有機(jī)相用NaHC03洗滌，并用Na2S04干燥。TLC顯示反應(yīng)完成，但剩余10%的起始物料。Biotage純化(40MX5次)提供沒有雜質(zhì)的無色產(chǎn)物(5.47g，收率73%)。及/=0.51(己烷:EtOAc=3:1)，LC-MS(ESI，MH)605.3。力NMR(300MHz，CDC13)S_50.55(3H，t，/=7.2Hz)，0.86(3H，s)，1.40-1.51(2H，m)2.89(1H，dt，/=3.6，11.1Hz)，3.03(1H，q，/=6.9Hz)，3.44-3.50(1H，m)，3.54(1H，q，/=6.9Hz)，3.62-3.72(1H，m)，4.26(1H，dd，/=3.6，9.0Hz)，4.55-4.67(5H，m)，4.80(1H，d，/=10.8Hz)，5.46(1H，dd，/=3.3，8.4Hz)，6.59-6.63(3H，m)，7.08(1H，t，/=7.5Hz)，7.19-7.37(15H,m)。形成化合物(5)的縮醛酸水解將縮醛產(chǎn)物(4)(5.47g，9.06mmol)溶解于無水THF(18mL)中。加入去離子水(3.6mL)和HC104(3.6mL)。在(外溫)的溫度下，在油浴中開始反應(yīng)，持續(xù)2.5小時(shí)。冷卻至室溫后，溶液用NaHC03緩慢中和至pH=89。混合物溶液用水(IOOmL)稀釋，并用DCM(80mLx3)萃取。有機(jī)相用Na2S04干燥，并真空濃縮。將殘留物裝入具有梯度洗脫(16CV的4-13%EtOAc/己烷)的Biotage柱(25M)。高真空干燥后，收集無色固體(5.18g，收率>100%)。及/=0.43(己烷:￡^^^=3:1)，RP畫HPLC(betasilC18，0.5mL/min，60-100%ACN在10分鐘內(nèi))6.40min，LC-MS(ESI，MH+)561.3。力NMR(300MHz,CDC13)S0.61(3H，t，/=7.2Hz)，1.63(3H，s)，1.07(1H,dt，/=3.3，10.8Hz)，4.22(1Hdd，3.9，8.7Hz)，4.61(4H，s)，4.67(1H，t，/=9.0Hz)，4.98(1H，d，/=10.5Hz)，5.42(1H,dd，/=3.6，8.7Hz)，6.54-6.64(3H，m)，7.09(1H，t，/=8.1Hz)，7.21-7.39(15H，m)。化合物(6)的合成將苯乙基氯化鎂(1M于THF中，120mmol)與THF(180mL)—起用導(dǎo)管導(dǎo)入500-mL燒瓶中。然后，在滴加丁醛(10.2mL，114mmol)之前，使用水水浴，將以上混合物溶液冷卻至0°C。在此溫度下，1小時(shí)后，TLC顯示完全反應(yīng)。然后，用NH4C1(150mL)淬滅反應(yīng)，并分離THF。THF溶液用飽和鹽水洗滌，然后其用Na2S04干燥，并在真空下濃縮。獲得超過20克仲醇產(chǎn)物(收率>100%)，且不進(jìn)一步純化。將仲醇產(chǎn)物(4.56g，25.6mmol)與DCM(128mL)在室溫下混合。加入PCC(6.62g，30.7mmol)。反應(yīng)在室溫下保持2小時(shí)。因?yàn)門LC顯示約15%的剩佘起物材料，所以加入另一部份PCC(1.11g，5.1mmol),且反應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)結(jié)束。溶液混合物通過硅藻土和硅膠的層過濾。然后，蒸發(fā)過濾的溶液，并在Biotage柱(40S)上純化殘留物。收集無色化合物(6)(2.79g，收率62%)。NMR質(zhì)譜顯示產(chǎn)物具有〈1。/。的雜質(zhì)。&NMR(300MHz,CDC13)50.89(3H，t，/=7.2Hz)，1.56-1,63(2H，m)，2.37(2H，t，/=7.2Hz)，2.72(2H，t，/=7.2Hz)，2.90(2H，t，/=7.5Hz)，7.17-7.21(3H，m)，7.26-7.28(2H，m)。形成化合物(7)的Ti-活化的C-C偶聯(lián)，醛醇縮合反應(yīng)將剛剛蒸餾的DCM(22mL)加入到氮?dú)獗Ｗo(hù)的100-mL燒瓶中。按照順序加入Ti(OPr)4(373jiL，1.27mmol)和TiCl4(377jiL，3.44mmol)。將反應(yīng)溶液在丙酮-干水浴中冷卻至-78X:，并緩慢加入化合物(5)(1.93g，3.44mmol)的DCM(6mL)溶液。溶液呈淡紅色，并在加入DIPEA(899jiL，5.16mmol)之前，在此溫度下保持5分鐘。在使用冰水浴之前，撤去丙酮-干冰浴并升至ox:。在丙酮-干冰浴中再次冷卻至-78匸之前，ox:下，保持烯醇化物形成，持續(xù)1小時(shí)。緩慢加入化合物(6)(1.21mL，6.88mmol)。然后，將溶液升至0。C，并經(jīng)由水水浴在此溫度下保持1小時(shí)。由飽和NH4C1溶液(30mL)淬滅反應(yīng)，并由DCM(40mLx3)萃取稀釋的混合物。然后，合并的有機(jī)相用Na2S04干燥，并在真空中濃縮。將殘留物裝入具有梯度(16CV的8-18%EtOAc/己烷)的Biotage柱(40S)。收集淡黃色產(chǎn)物(1.90g，收率75%)。i,=0.42(己烷:EtOAc-3:l)，RP-HPLC(betasilC18,0.5mL/分鐘，60-100%ACN，在10分鐘)9.13分鐘，LC-MS(ESI，MH+)737.5。合成化合物(8)的堿水解和內(nèi)酯化在氮?dú)庀?，將醛醇產(chǎn)物(7)混合物(1.68g，2.28mmol)溶解于THF(50mL)中。樣品溶解后，使溶液在冰水浴中冷卻5分鐘，然后加入KOBut(lM，2.74mL)。將反應(yīng)在此溫度下保持20分鐘。用NH4C1(50mL)將其淬滅，并用EtOAc(150mL)稀釋有機(jī)相。然后分離水相(確定pH〈7)，并用飽和鹽水(50mL)洗滌醚相。然后，其用Na2S04干燥，并在真空下濃縮。將干燥的殘留物裝入Biotage柱(25M)，并純化(16CV的6-22。/oEtOAc/己烷)四次。高真空干躁后，使淡黃色千胺化合物(8)(712.1mg，收率54.5%)固化。/,=0.41(己烷:EtOAc=3:1),RP-HPLC(betasilC18，0.5mL/分鐘，60-100%ACN，在十分鐘內(nèi))5.23分鐘，LC-MS(ESI，MH+)574.4。Pd/C氫化以合成(R)-3-((R)-l-(3-氨基苯基)丙基)-5，6-二氫-4-羥基腸6-苯乙基-6-丙基吡喃-2-酮(9)將千胺化合物(8)(265.8mg，0.464mmol)溶解于EtOAc(6.5mL)和MeOH(6.5mL)的混合物溶液中。在加入催化劑之前，溶液小瓶用氮?dú)夤呐輷Q氣至少15分鐘。停止攪拌，并緩慢(或以小部分)加入Pd/C催化劑(43mg，8wt%x2)。將系統(tǒng)排空，并重新充入氫氣(<50psi)三次(真空期間，停止攪拌)。然后于室溫在50psi下，保持氫解過夜(16小時(shí))至完成。釋放壓力后，在進(jìn)行過濾之前，反應(yīng)混合物首先用HPLC檢查以了解完全性。用甲醇小心洗滌催化劑殘留物和濾紙。然后，蒸發(fā)溶液，并真空干燥以獲得類油狀化合物(9)(182mg，收率100%)。無需進(jìn)一步純化。RP-HPLC(betasilC18，0.5mL/分鐘，10-100%ACN，在8分鐘內(nèi))4.58分鐘，LC-MS(ESI，MH+)394.2。經(jīng)mPEGn-OH的Swern氧化制備化合物(IO)將DCM(105mL)和草酰氯(2M，7.5mL，15mmol)加入到氮?dú)獗Ｗo(hù)的250-mL燒瓶中。溶液在干冰丙酮浴中冷卻至-78'C，持續(xù)5分鐘，然后加入DMSO(1.42mL，20.0mmol)。將其在此溫度下劇烈攪拌20分鐘，然后加入mPEG7-OH(3.40g，10.0mmol)和DCM(10mL)的混合物。反應(yīng)在此溫度下保持另外的20分鐘，然后加入TEA(5.5mL，39.6mmol)。反應(yīng)在干冰浴中保持3分鐘，然后撤去該浴以逐漸升至環(huán)境溫度，持續(xù)25分鐘。其用飽和NaHC03(70mL)淬滅，并稀釋DCM溶液(120mL)。分離有機(jī)相，并用DCM(20mLx2)萃取水相。其用Na2S04干燥，且然后濃縮，并在氮?dú)庀聝?chǔ)存內(nèi)部具有一些固體的淡黃色液體(2.78g，收率82%)。NMR顯示為64%的轉(zhuǎn)化混合物。BiotageFCC(16CV的3-10%MeOH的DCM溶液)提供還原性胺化的純產(chǎn)物。0.32(DCM:MeOH=10:1)。力NMR(300MHz,CDC13)S3.39(s，3H)，3.54-3.57(m，2H)，3.66(s，20H),3.72-3.75(m，2H),4.17(s，2H)，9.740，1H)。以相似的方法合成mPEG5-CHO。粗產(chǎn)物顯示為具有99°/收率的86%的醛。BiotageFCC(16CV的3-10%MeOH的DCM溶液)提供具有56%收率的75%的醛產(chǎn)物，和具有25%收率的15%醛混合物。//=0.34(DCM:MeOH=10:1)，，HNMR(300MHz,CDC13)53.38(s，3H)，3.38-3.57(m，2H)，3.67(s，IIH)，3.70-3.75(m，3H)，4.17(s，2H)，9.74(s，1H)。合成化合物(ll)的還原性胺化將化合物(9)(69.6mg，0.177mmol)溶解于甲醇(3.4mL)中。攪拌，并滴加mPEG5-CHO(235mg，純度75%，0.708mmol)。使反應(yīng)進(jìn)行18分鐘，此后移至室溫水浴。分幾部分加入NaBH4(54mg，1.42mmol)。三分鐘后，使用HPLC檢查反應(yīng)，并證實(shí)反應(yīng)完成了77%的轉(zhuǎn)化。反應(yīng)用NaHCO3(10mL)淬滅，并用水和EtOAc稀釋。然后，分離有機(jī)相，并用Na2S04干燥。HPLC顯示反應(yīng)具有81%的轉(zhuǎn)化，并剩余13%的起物材料。溶液用NaHC03水溶液稀釋，并用DCM(30mLX3)萃取。蒸發(fā)合并的有機(jī)溶液以提供粗樣品(178mg)。將其溶解于ACN(6mL)和水(2mL)中，并在AKTA(40-57%，5CVx2，12.10分鐘)上純化。蒸發(fā)收集的產(chǎn)物的乙腈溶液，并用NaCl飽和。其用DCM(30mLx3)萃取，且合并的溶液用NaS04千燥，過濾，真空下濃縮。獲得具有純度超過99%的淡黃色產(chǎn)物(75,9mg，收率69%)。RP-HPLC(betasilC18，0.5mL/分鐘，30-100%ACN,在十分鐘內(nèi))5.53分鐘，LC-MS(ESI，MH+)628.2。按照這一合成過程，除了用mPEG3-CHO代替mPEGs-CHO。用過量的醛(1.6當(dāng)量)，完成后，產(chǎn)物混合物顯示72%的轉(zhuǎn)化。AKTA純化(3CV的40-50%ACN，13.2分鐘)提供收率42%的具有純度>99%的產(chǎn)物。RP-HPLC(betasilC18,0.5mL/分鐘，30-100。/。ACN，在十分鐘內(nèi))5.65分鐘，LC-MS(ESI，MH+)540.3。按照這一合成過程，除了用mPEG7-CHO代替mPEGs-CHO。用過量的醛(4.5當(dāng)量)，完成后，產(chǎn)物混合物顯示78%的轉(zhuǎn)化。AKTA純化(40-57%，5CV)提供收率73%的純產(chǎn)物(>99%)。RP-HPLC(betasilC18，0.5mL/分鐘，60-100%ACN，在八分鐘內(nèi))5.06分鐘，LC-MS(ESI，MH+)716.4?；衔?13a)的合成將以上AKTA純化的產(chǎn)物(lla)(96.8mg，0.180mmol)溶解于DCM(1.6mL)。溶解后，將溶液在冰水浴中冷卻，并加入三氟吡咬磺酰氯(48,6mg，0.198mmol)。然后加入吡啶(44fiL，0.54mmol),并在過夜反應(yīng)期間使反應(yīng)升溫。HPLC顯示起物材料的保留時(shí)間結(jié)束，然后反應(yīng)用NH4C1(10mL)淬滅。其用DCM稀釋，并用鹽水洗滌分離的有機(jī)相。然后，有機(jī)相用Na2S04干燥并濃縮。粗產(chǎn)物(159.4mg)在Biotage(16CV的10-50%EtOAc的己烷溶液)上純化，提供淡黃色產(chǎn)物(13a)(73.1mg)，和較差純度的產(chǎn)物(35.7mg)，且總收率約62%。及,=0.22(己烷:EtOAc-1:1)，RP-HPLC(betasilC18，0.5mL/分鐘，60-100%ACN，在8分鐘內(nèi))4.20分鐘，LC-MS(ESI，MH+)749.3。按照與合成化合物(13a)相似的過程，化合物(llb)(154.9mg)產(chǎn)生所需的產(chǎn)物(13b)(36.0mg，純度93%)和產(chǎn)物的混合物(71.2mg)，收率52%。經(jīng)Biotage硅膠柱(16CV的1-7%MeOH的DCM溶液)純化。0.54(EtOAc)，RP-HPLC(betasilC18，0.5mL/分鐘，60-100%ACN，在8分鐘內(nèi))4.36分鐘，LC-MS(ESI，MH+)837.4。按照與合成化合物(13a)相似的過程，化合物(llc)(167.7mg)產(chǎn)生所需的產(chǎn)物(13c)(39.9mg,純度95%)和產(chǎn)物的混合物(82.3mg)，收率~50%。經(jīng)Biotage珪膠柱(16CV的2-7%MeOH的DCM溶液)純化。及,=0.25(EtOAc),RP-HPLC(betasilC18，0.5mL/分鐘，60-100%ACN，在8分鐘內(nèi))3.78分鐘，LC畫MS(ESI，MH+)925.5。實(shí)施例9偶聯(lián)物的評(píng)價(jià)按照在細(xì)胞和無細(xì)胞測(cè)定中評(píng)價(jià)活性和效力的標(biāo)準(zhǔn)過程(且例如在實(shí)施例3中所列)，阿扎那韋偶聯(lián)物(參見實(shí)施例4)、替拉那韋偶聯(lián)物(參見實(shí)施例8)和地瑞那韋偶聯(lián)物(參見實(shí)施例5至7)。結(jié)果顯示于以下表2至表8中。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage96</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage97</column></row><table>表6無細(xì)胞測(cè)定中的替拉那韋偶聯(lián)物<table>tableseeoriginaldocumentpage98</column></row><table>表7基于細(xì)胞的測(cè)定中的地瑞那韋偶聯(lián)物<table>tableseeoriginaldocumentpage98</column></row><table>表6無細(xì)胞測(cè)定中的地瑞那韋偶聯(lián)物<table>tableseeoriginaldocumentpage98</column></row><table>權(quán)利要求1.一種化合物，其包含共價(jià)連接于水溶性非肽低聚物的小分子蛋白酶抑制劑的殘基。2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制劑來自小分子蛋白酶抑制劑的氮雜己烷衍生物類。3.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制劑來自小分子蛋白酶抑制劑的氨基酸衍生物類。4.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制劑來自小分子蛋白酶抑制劑的非肽衍生物類。5.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制劑來自小分子蛋白酶抑制劑的吡喃酮類。6.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制劑來自小分子蛋白酶抑制劑的戊-l-胺衍生物類。7.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制劑來自小分子蛋白酶抑制劑的己-2-基氨基甲酸酯衍生物類。8.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制劑來自小分子蛋白酶抑制劑的磺酰胺衍生物類。9.如權(quán)利要求1所迷的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制劑來自小分子蛋白酶抑制劑的三取代苯基衍生物類。10.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制劑選自由安普那韋、阿扎那韋、夫沙那韋、茚地那韋、洛匹那韋、沙奎那韋、奈非那韋、利托那韋、替拉那韋和地瑞那韋組成的組。11.如權(quán)利要求l所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制劑選自由DMP國323、DMP畫450、BMS186613、SC-55389a和BILA1096BS組成的組。12.如權(quán)利要求l、2、3、4、5、6、7、8、9、10和11中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述水溶性非肽低聚物是聚(環(huán)氧烷)。13.如權(quán)利要求12所述的化合物，其中所述聚(環(huán)氧烷)是聚(環(huán)氧乙烷環(huán)氧乙烷)。14.如權(quán)利要求l、2、3、4、5、6、7、8、9、10和11中4壬一項(xiàng)所述的化合物，其中所述水溶性非肽低聚物是由1個(gè)和30個(gè)之間的單體組成。15.如權(quán)利要求14所述的化合物，其中所述水溶性非肽低聚物是由1個(gè)和10個(gè)之間的單體組成。16.如權(quán)利要求12所述的化合物，其中所述聚(環(huán)氧烷)包括烷氧基或羥基封端部分。17.如權(quán)利要求l、2、3、4、5、6、7、8、9、10和11中任一項(xiàng)所述的化合物，其中單一水溶性非肽低聚物共價(jià)地連接于所述小分子蛋白酶抑制劑的殘基。18.如權(quán)利要求l、2、3、4、5、6、7、8、9、10和11中任一項(xiàng)所述的化合物，其中多于一種水溶性非肽低聚物共價(jià)地連接于所述小分子蛋白酶抑制劑的殘基。19.如權(quán)利要求l、2、3、4、5、6、7、8、9、10和11中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制劑的殘基經(jīng)穩(wěn)定的鍵合共價(jià)地連接。20.如權(quán)利要求l、2、3、4、5、6、7、8、9、10和11中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制劑的殘基經(jīng)可降解的鍵合共價(jià)地連接。21.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制劑的殘基經(jīng)醚鍵合共價(jià)地連接于所述水溶性非肽低聚物。22.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制劑的殘基經(jīng)酰胺鍵合共價(jià)地連接于所述水溶性非肽低聚物。23.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制劑的殘基經(jīng)氨基甲酸酯鍵合共價(jià)地連接于所述水溶性非肽低聚物。24.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述小分子蛋白酶抑制劑的殘基經(jīng)胺鍵合共價(jià)地連接于所述水溶性非肽低聚物。25.—種組合物，其包括含有共價(jià)地連接于水溶性非肽低聚物的小分子蛋白酶抑制劑的殘基的化合物，以及任選地，藥學(xué)上可接受的賦形劑。26.—種物質(zhì)組合物，其包括含有共價(jià)地連接于水溶性非肽低聚物的小分子蛋白酶抑制劑的殘基的化合物，其中所述化合物以一種劑型存在。27.—種方法，其包括將水溶性非肽低聚物共價(jià)地連接于小分子蛋白酶抑制劑。28.—種方法，其包括施用含有共價(jià)地連接于水溶性非肽低聚物的小分子蛋白酶抑制劑的殘基的化合物。全文摘要本發(fā)明提供由水溶性低聚物的共價(jià)連接來化學(xué)修飾的小分子藥物。本發(fā)明的偶聯(lián)物當(dāng)通過許多施用途徑中的任何一種來施用時(shí)，顯示出不同于沒有連接到水溶性低聚物的小分子的特征。文檔編號(hào)A61K47/48GK101631568SQ200880007943公開日2010年1月20日申請(qǐng)日期2008年3月12日優(yōu)先權(quán)日2007年3月12日發(fā)明者F·J·杜阿特,J·里吉斯-索希爾,T·X·維加斯,X·顧,文張,林成申請(qǐng)人:尼克塔治療公司