專利名稱：芳基取代吡啶酮類衍生物抗腫瘤的藥物用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物化學(xué)和藥理學(xué)領(lǐng)域，具體而言，涉及一類6-芳基—3-取代 亞甲基-吡啶酮類化合物用于制備抗腫瘤藥物和藥物組合物的用途。經(jīng)藥理活 性測(cè)試，該類化合物具有顯著抑制體外培養(yǎng)人食管癌細(xì)胞株(Eca-109)和小 鼠淋巴樣瘤細(xì)胞株(P388D1)生長的活性，可期待作為防治食管癌、白血病及 其相關(guān)腫瘤性疾病藥物用途。
背景技術(shù)：
近幾年來，腫瘤化療取得了相當(dāng)?shù)倪M(jìn)步，腫瘤患者生存時(shí)間明顯延長，特 別是對(duì)白血病、惡性淋巴瘤等的治療有了突破，但對(duì)危害人類生命健康最嚴(yán)重 的、占惡性腫瘤90%以上的實(shí)體瘤的治療未能達(dá)到滿意的效果。藥學(xué)家和腫瘤
學(xué)家越來越深刻地認(rèn)識(shí)到要提高腫瘤治療的療效，必須從腫瘤發(fā)生發(fā)展的機(jī) 制著手，才能取得新的突破性進(jìn)展。近年來，分子腫瘤學(xué)、分子藥理學(xué)的發(fā)展 使腫瘤本質(zhì)正在得到逐步闡明；大規(guī)?？焖俸Y選、組合化學(xué)、基因工程等先進(jìn) 技術(shù)的發(fā)明和應(yīng)用加速了藥物開發(fā)進(jìn)程；抗腫瘤藥物的研究與開發(fā)已進(jìn)入一個(gè) 嶄新的時(shí)代。當(dāng)今抗腫瘤藥物的發(fā)展戰(zhàn)略有以下幾個(gè)特點(diǎn)①以占惡性腫瘤 90%以上的實(shí)體瘤為主攻對(duì)象；②從天然產(chǎn)物中尋找活性成分；(D針對(duì)腫瘤發(fā) 生發(fā)展的機(jī)制，尋找新的分子作用(酶、受體、基因)耙點(diǎn)；④大規(guī)?？焖俸Y 選(High-throughput screening);⑤新技術(shù)的導(dǎo)入和應(yīng)用組合化學(xué)、結(jié)構(gòu)生
物學(xué)、計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)、基因工程、DNA芯片、藥物基因組學(xué)(功能基因組 學(xué)與藥理學(xué)結(jié)合)等。
除了國內(nèi)外關(guān)注的抗腫瘤作用的新靶點(diǎn)和針對(duì)機(jī)制的多環(huán)節(jié)作用的新型 抗腫瘤藥物研制外，傳統(tǒng)的細(xì)胞毒性抗腫瘤藥物仍是癌癥治療中與放療等手段 共同使用的不可或缺的一線治療措施。美國國立癌癥研究所(NCI)公布的業(yè) 界正在研究中的細(xì)胞毒類抗腫瘤新物質(zhì)有許多已經(jīng)將近完成臨床實(shí)驗(yàn)或已經(jīng) 進(jìn)入市場(chǎng)，如Bristol Myers Squibb研制的Rebeccamycin Analogue (NSC 655649) 用于治療小鼠白血病有效;Pharmacia Upjohn推出的垸化劑前藥Bezelesin (NSC 615291)用于治療結(jié)腸癌等；Glaxo Wellcome推出的鳥嘌呤代謝干擾劑(NSC 686673)用于治療白血病、T細(xì)胞淋巴瘤等；日本麒麟研制的KPN5500 (NSC650426)用于治療人胃癌、結(jié)腸癌、食道癌等等。均說明細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物 仍然具有較為廣泛的市場(chǎng)和確定的療效。
哌嗪類化合物具有廣泛的藥理活性，如常用藥鎮(zhèn)靜催眠藥(Zopiclone)、 磷酸二酯酶Y抑制劑(Sildenafil)、抗菌藥(Enoxacin、 Ciprofloxacin)以及抗真菌 藥(Ketoconazole、 itraconazole)。早期，哌嗪及其哌嗪類衍生物作為抗腫瘤藥物 進(jìn)行了廣泛的研究[Groszkowski, S.等，J. Med. Chem. 1968, 11， 621],近年來許 多用于抗腫瘤藥物中含有哌嗪片段[Westwell， A.D. Drug Discovery Today 2003, 8,229; Boschelli,D.H.等，J. Med. Chem. 2001, 44， 3965]。
為了進(jìn)一步探索發(fā)現(xiàn)新的高效、廣譜細(xì)胞毒型抗腫瘤化合物，我們對(duì)本發(fā) 明中的同時(shí)含有哌嗪環(huán)和吡啶酮環(huán)的化合物進(jìn)行了針對(duì)人和小鼠腫瘤細(xì)胞的 細(xì)胞毒活性研究。我們選擇了體外培養(yǎng)人食管癌細(xì)胞株(Eca-109)和小鼠淋 巴樣瘤細(xì)胞株(P388D1)作為藥理試驗(yàn)評(píng)價(jià)模型。
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，我們制備得到的6-芳基-3-取代亞甲基-吡啶酮類衍生物對(duì) 于體外培養(yǎng)人食管癌細(xì)胞株(Eca-109)和小鼠淋巴樣瘤細(xì)胞株(P388D1)具 有顯著的生長抑制活性，說明該類6-芳基-3-取代亞甲基-吡啶酮類衍生物具有 可期待作為防治相關(guān)腫瘤性疾病藥物之用途，由此完成本發(fā)明。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一類芳基取代吡啶酮類衍生物在制備抗腫瘤藥物中 的用途，所述衍生物選自一類6-芳基-3-取代亞甲基-吡啶酮類化合物及其可藥 用鹽，具有下列結(jié)構(gòu)
化合物l-a: 3-(4-二苯甲基哌嗪-1-基甲基)-6-(4-甲氧基苯基)-2//-吡啶-2-酮； 化合物l-b: 3-[4- (4-氟芐基)哌嗪-1-基甲基]-6-(4-甲氧基苯基)-2//-吡啶-2-
酮；
化合物l-c: 3-[4- (4-氟苯基)哌嗪-1-基甲基]-6-(4-甲氧基苯基)-2//-吡啶-2-
酮；
化合物14: 4-{[6- (4-甲氧基苯基)-2-氧代-1， 2-二氫吡啶-3-基]甲基哌嗪 基卜l-甲酸乙酉旨；
化合物l~e: 3-[4- (3， 4-二氯苯基)哌嗪-1-基甲基]-6-(4-甲氧基苯基)-2//-吡啶-2-酮；
化合物1-f: 3- (4-芐基哌嗪-l-基甲基)-6-(4-甲氧基苯基)-2//-吡啶-2-酮； 化合物1-g: 3- (4-乙基哌嗪-l-基甲基)-6-(4-甲氧基苯基)-2//-吡啶-2-酮； 化合物1-h: 3-[4- (2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基甲基]-6-(4-甲氧基苯基)-2//-吡啶-2-酮；化合物l-i: 3- (4-環(huán)己垸基哌嗪-l-基甲基)-6-(4-甲氧基苯基)-2//-吡啶-2-
酮；
化合物1-j: 3-[4- (3， 4-二氯芐基)哌嗪-1-基甲基]-6-(4-甲氧基苯基)-2//-吡啶-2-酮。
所述化合物結(jié)構(gòu)式為<formula>formula see original document page 6</formula><formula>formula see original document page 6</formula>
本發(fā)明所制備的上述6-芳基-3-取代亞甲基-吡啶酮類化合物具有重要的 生物活性，體外試驗(yàn)表明此類具有哌嗪類衍生物結(jié)構(gòu)的化合物對(duì)于體外培養(yǎng)人 食管癌細(xì)胞株(Eca-109)和小鼠淋巴樣瘤細(xì)胞株(P388D1)具有生長抑制活 性，可期待作為防治相關(guān)腫瘤性疾病藥物用途。
本發(fā)明所制備的化合物或其可藥用鹽可以與藥學(xué)上常用的輔料或載體結(jié) 合，制備得到具有抗腫瘤用途的藥物。上述藥物組合物可以采用注射劑、片劑、 膠囊、貼片、皮下植埋劑等劑型，或其他采用公知理論和技術(shù)制備的控釋、緩 釋劑型以及納米制劑。
具體實(shí)施例方式
下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。實(shí)施例給出了代表性化合物的 部分活性數(shù)據(jù)。必須說明，下述藥理實(shí)施例是用于說明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明 的限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的簡(jiǎn)單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的 范圍。
實(shí)施例l:起始物A (對(duì)甲氧基苯乙酮)的制備
<formula>formula see original document page 6</formula>
將甲氧基苯(10.8克，0.1摩爾)溶解于150毫升二氯甲垸中，然后加入 無水氯化鋅粉末(26.8克，0.20摩爾)，在-15。C下滴加乙酸酐(15.3克，0.15 摩爾)；滴加完畢后，反應(yīng)慢慢升到室溫反應(yīng)7小時(shí)，然后將反應(yīng)物小心倒入 600毫升冰水中，用乙酸乙酯萃取3次；有機(jī)相用無水硫酸鎂干燥，過濾濃縮 得無色油狀物粗品，經(jīng)過短的硅膠柱層析得起始物A(對(duì)甲氧基苯乙酮)13.1 克，收率87%);白色固體，熔點(diǎn)35 38°C。核磁共振氫譜^-NMR(400MHz， 氘代氯仿，S ppm) S 2.56 (單峰，3H, COC1//3)， 3.87 (單峰，3H， OC//3), 6.93 (雙峰， 2H， /= 8.4 Hz， H國3， 5), 7.94 (雙峰，2H, /= 8.4 Hz, H-2, 6)。實(shí)施例2:中間體B (3-氰基-6-(4-甲氧基苯基)-27/-吡啶-2-酮)的制備:
將金屬鈉(2.76克，120毫摩爾)加入250毫升乙醚中，滴加乙醇1毫升， 在冰浴下滴加起始物A (對(duì)甲氧基苯乙酮)(IOO毫摩爾)和甲酸乙酯(150毫 摩爾)混合物，滴加完畢后，混合物攪拌15分鐘后，升溫到室溫反應(yīng)l小時(shí)， 減壓蒸除乙醚后，固體混合物加入氰基乙酰胺(12.6克，150毫摩爾)和水(400 毫升)?；旌衔锘亓?小時(shí)后，冷卻，用醋酸酸化，過濾得黃色的固體，干燥 后，初產(chǎn)品從乙醇中重結(jié)晶得到中間體B (3-氰基-6-(4-甲氧基苯基)-2//-吡啶-2-酮)收率56%,淡黃色固體，熔點(diǎn)> 250。C; i^(二氯甲垸/甲醇20 : 1) 0.46;核 磁共振氫譜iH-NMR (400 MHz,氘代二甲基亞砜，S ppm): 3.82 (單峰，Me04'): 6.69 (雙峰,1H， /= 7.2 Hz, H—5), 7.05 (雙峰，2H， /= 8,4 Hz， H—3', 5'), 7.79 (雙峰, 2H, J= 8.4 Hz, H-2'， 6'), 8.06 (雙峰，1H, /= 7.2 Hz, H-4)。
實(shí)施例3:中間體C (3-氰基-6-(4-甲氧基苯基)-2-甲氧基吡啶)的制備
中間體B (3-氰基-6-(4-甲氧基苯基)-2//-吡啶-2-酮)(10毫摩爾)在A^V-二 甲基二甲縮醛(DMFDMA) (1.8克，15毫摩爾)的A^V-二甲基甲酰胺(50 毫升)溶液加熱回流過夜，混合物到入冰水中。產(chǎn)生黃色的固體沉淀，過濾， 用少量的水洗滌濾餅、干燥得粗產(chǎn)品，在乙醇中重結(jié)晶得化合物中間體C (3-氰基_6_(4_甲氧基苯基)_2_甲氧基吡啶)收率89%;白色固體；熔點(diǎn)137-138 。C; i y(石油醚/乙酸乙酯3 : 1)0.46;核磁共振氫譜iH-NMR (400 MHz，氘代氯 仿，S ppm): 3.89 (單峰，3H, MeCMT)， 4.15 (單峰，3H, MeO-2), 7.02 (雙峰，2H, /= 8.4 Hz, H-3', 5'), 7.36 (雙峰，1H, /= 8.0 Hz， H-5), 7.87 (雙峰，1H, /= 8.0 Hz, H4)， 8.04 (雙峰，2H, /= 8.4 Hz, H-2', 6')。
實(shí)施例4:中間體D，即化合物(2-甲氧基-6-(4-甲氧基苯基)卩比啶-3-甲酸)的制備:<formula>formula see original document page 8</formula>
在100毫升乙醇中，加入110毫升30%的氫氧化鉀溶液和24克3-氰基畫2-甲氧基-6-(4-甲氧基苯基)吡啶，升溫并回流12小時(shí)，冷卻至室溫，放置過夜， 過濾得2-甲氧基-6-(4-甲氧基苯基)吡啶-3-甲酸鈉鹽，用6N的鹽酸小心中和后， 用二氯甲烷萃取(5x150毫升)，合并有機(jī)相，無水氯化鈣干燥，抽濾，旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)除去二氯甲烷，得到白色固體21克，收率￥=80%。起始物D(2-甲氧基 -6-(4-甲氧基苯基)吡啶-3-甲酸)熔點(diǎn)186~187°C; &(二氯甲垸/甲醇25:1) 0.42;核磁共振氫譜^-NMR (400 MHz,気代二甲基亞砜，5 ppm): 3.83 (單峰, 3H, Me04'), 4.03 (單峰，3H, MeO-2), 7.06 (雙峰，2H， /= 8.4 Hz, H—3', 5'), 7.58 (雙峰，1H， 7.6 Hz, H—5), 8.10 8.17 (多重峰，3H, H-4, 2', 6');核磁共振碳譜 13CNMR(100MHz，氖代二甲基亞砜，S ppm) : 166.0， 161.4， 161.1， 156.8, 142.4， 130.0, 128.7 (x 2)， 114.4 (x 2), 112.1, 111.8, 55.5， 53.5。
實(shí)施例5:中間體E，即化合物(2-甲氧基-6-(4-甲氧基苯基)-3-羥甲基吡啶)的 制備<formula>formula see original document page 8</formula>
于冰鹽浴冷卻條件下，向4.11克氫化鋁鋰的四氫呋喃懸濁液(140毫升) 中，分批加入2-甲氧基-6- (4-甲氧基苯基)吡啶-3-甲酸(中間體D) 14克， 加完后，室溫?cái)嚢?小時(shí)，升溫到6(TC，冷卻后向反應(yīng)體系中加入飽和氯化銨 水溶液(80毫升)，用乙酸乙酯(3x150毫升)萃取，合并有機(jī)相，用飽和食 鹽水洗滌(3x20毫升)，無水硫酸鈉干燥，抽濾，硅膠柱層析(石油醚/乙酸 乙酯5/1)得到無色固體9.9克，收率￥=85%;熔點(diǎn)84 86 。C; i /(石油 醚/乙酸乙酯3 1) 0.56;核磁共振氫譜^-NMR (400 MHz,氘代氯仿，S ppm): 2.38 (寬單峰，1H， HO-C//2)， 3.88 (單峰，3H, MeCMT), 4.09 (單峰，3H， MeO~2)， 4.67 (單峰，2H， CH2-3), 6.98 (雙峰，2H， /= 8.4 Hz， H—3'， 5')， 7.28 (雙峰，1H， / = 8.0 Hz， H-5), 7.58 (雙峰，1H, /= 8.0 Hz, H—4), 8.00 (雙峰，2H, /= 8.4 Hz, H—2',6').電噴霧質(zhì)譜MS(ESI)，m/e: 246([M+l]+)。
實(shí)施例6:中間體F，即化合物(3-氯甲基-2-甲氧基-6-(4-甲氧基苯基)卩比啶)的 制備
在冰水浴中，將20毫摩爾的2-甲氧基-6- (4-甲氧基苯基)吡啶-3-甲醇(中 間體E)溶解在二氯甲烷(40毫升)中，加入三乙胺3.0毫升，再滴加甲磺酰 氯2.4克，慢慢升到室溫，反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。加入二氯甲烷40毫升稀釋 后，用水洗(2x40毫升)，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除 去二氯甲烷，硅膠柱層析(石油醚/乙酸乙酯20/1)得到無色固體0.992克， 收率Y-76X。熔點(diǎn)79 80。C.&(石油醚/乙酸乙酯9:1)0.65;核磁共振氫譜 ^曙NMR (400 MHz，氖代氯仿，S ppm): 3.87 (單峰，3H, MeO~4')， 4.10 (單峰，3H, MeO~2), 4.64 (單峰，2H， CH2Cl-3)， 6.98 (雙峰，2H, /= 8.4 Hz, H—3', 5'), 7.28 (雙 峰1H, /= 8.0 Hz, H—5), 7.66 (雙峰，1H, /= 8.0 Hz， H4), 8.00 (雙峰,2H, /= 8.4 Hz, H-2', 6').核磁共振碳譜13C-NMR (100 MHz,氘代氯仿，S ppm): 41.1, 53.4, 55.3， 111.8, 114.0, 117.5, 128.0， 131.2, 139.4, 154.6， 160.5, 160.9。
實(shí)施例7:化合物l-a (3-(4-二苯甲基哌嗪-1-基甲基)-6-(4-甲氧基苯基)-2//-吡 啶-2-酮)的制備
265毫克(3-氯甲基-2-甲氧基-6- (4-甲氧基苯基)吡啶)(即中間體F) 溶于乙腈(14毫升)中，加入504毫克1-二苯甲基哌嗪和1114毫克碳酸鉀， 在60'C下加熱反應(yīng)5小時(shí)。冷卻，過濾，用二氯甲烷洗濾餅，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶 劑后，硅膠柱層析(二氯甲烷~二氯甲烷/甲醇50/1)得白色固體180毫克。 取該白色固體120毫克(0.25毫摩爾)溶于冰醋酸(5毫升)和40%的氫溴酸
化合物1-a水溶液(5毫升)中，混合物在6(TC下反應(yīng)6小時(shí)。冷卻后小心有碳酸鉀中和， 二氯甲烷(3x50毫升)萃取，合并有機(jī)相，用飽和食鹽水洗滌(2x20毫升)， 無水硫酸鈉干燥，抽濾；硅膠柱層析(二氯甲垸/甲醇50/1)得白色固體108
熔點(diǎn)146 148°C (乙腈)，分離收率￥=92.7%。 Rf(二氯甲烷/甲醇20/1): 0.28，核磁共振氫譜H-NMR (400 MHz,気代氯仿，5 ppm): 2.39 2.58 (多重峰， 8H, H國3'， 4', 6'， 7'), 3.56 (單峰，2H， H國l'), 3.85 (單峰，3H, MeO-4")， 4.22 (雙峰， 1H, J=2.8 Hz， H畫8'), 6.53 (寬雙峰，1H, /=6.0 Hz, H國5), 6.97 (雙峰，2H, /=8.8 Hz， H-12', 18'), 7.15-7.28 (多重峰，6H, H畫10'， 14'， 16'， 20'， 3〃， 5"), 7.41 (雙峰，4H, 7=8.0 Hz， H-ll', 13', 17', 19'), 7.48 (雙峰，1H, /=7.2 Hz， H畫4)， 7.67 (雙峰，2H， 7=8.0 Hz, H-2", 6〃)；電噴霧質(zhì)譜MS (ESI), m/e: 466(M+1)+ 。
實(shí)施例8
根據(jù)與以上實(shí)施例的類似方法制備得到以下所示各化合物，下面列出的是 各化合物的理化數(shù)據(jù)
化合物l-b: 3-[4- (4-氟芐基)哌嗪-l-基甲基]-6-(4-甲氧基苯基)-2界吡啶 -2-酮；淺黃色粉末，熔點(diǎn)148 149。C(乙腈重結(jié)晶)，Ri(二氯甲垸/甲醇20/1): 0.46;核磁共振氫譜iH-NMR (400 MHz，氖代氯仿，S ppm): 2.49~2.58 (寬雙峰， 8H, H-3', 4', 6'， 7')， 3.48 (單峰，2H, H-l'), 3.55 (單峰，2H, H-8')， 3.86 (單峰，3H， MeO-4")， 6.53 (雙峰，1H, /=7.2 Hz, H-5), 6.99 (三重峰，4H, Hz, H-ll'， 13'， 3"， 5"), 7.26~7.29 (多重峰，2H, H-10'， 14')， 7.49 (雙峰，1H, /=7.2 Hz， H-4)， 7.70 (雙峰，2H，弁8.4 Hz, H-2", 6〃)；電噴霧質(zhì)譜ESIMS (m/e) 408 (M + 1)+。
化合物1-c: 3-[4- (4-氟苯基)哌嗪-1-基甲基]-6-(4-甲氧基苯基)-2//-吡啶 -2-酮；淺黃色粉末，熔點(diǎn)143 144°C (乙腈重結(jié)晶)，Rf(二氯甲烷/甲醇20/1): 0.42;核磁共振氫譜^-NMR (400 MHz,氘代氯仿，5 ppm): 2.74 (寬單峰，4H, H國3'， 7')， 3.15 (寬單峰，4H, H-4', 6')， 3.60 (單峰，2H， H-l'), 3.86 (單峰，3H, MeO-4"), 6.54 (雙峰，1H, /=7.2 Hz, H畫5), 6.87 (多重峰，2H, H-9', 13'), 6.95 7.02 (多重峰，4H, H-10', 12'， 3"， 5〃)， 7.56 (雙峰，1H, 7=7.2 Hz, H-4)， 7.66 (雙峰，2H, /=8.8 Hz, H-2", 6〃)；電噴霧質(zhì)譜ESIMS (m/e) 394 (M + 1)+?；衔飈~d: 4-{[6- (4-甲氧基苯基)-2-氧代-1， 2-二氫吡啶-3-基]甲基哌 嗪基}-1-甲酸乙酯；淺黃色粉末，熔點(diǎn)111 112。C(乙腈)，Rf(二氯甲烷/甲醇 30 : 1) 0.46;核磁共振氫譜^-NMR (400 MHz,気代氯仿，S ppm): 1.26 (三重峰, 3H， /=7.2 Hz， H畫ll')， 2.50 (寬單峰，4H, H-3', 7'), 3.50 (單峰，2H， H-l'), 3.53 (寬 單峰，4H, H-4', 6'), 3.87 (單峰，3H, MeO國4"), 4.13 (四重峰，2H， 《/=7.2, 14 Hz, H-10'), 6.49 (雙峰,1H,盧7.2 Hz, H畫5), 6.99 (雙峰，2H, J=8.8 Hz, H-3〃, 5〃), 7.52 (雙峰，1H, /=7.2 Hz， H-4)， 7.67 (雙峰，2H, /=8.8 Hz, H-2", 6");電噴霧質(zhì)譜 ESIMS(m/e)372(M+ 1)+。
化合物l-e: 3-[4- (3， 4-二氯苯基)哌嗪-1-基甲基]-6-(4-甲氧基苯基)-2//-吡啶-2-酮；淺黃色粉末，熔點(diǎn)141~142 。C (乙腈)，Rf (二氯甲烷/甲醇20 : 1) 0.41;核磁共振氫譜^-NMR (400 MHz，氖代氯仿，S ppm): 2.70 (brs, 4H, H-3', 7'), 3.19 (寬單峰，4H, H-4', 6'), 3.58 (單峰，2H， H-l')， 3.85 (單峰，3H, MeO-4"), 6.50 (雙峰，1H, /=7.2 Hz, H-5), 6.73 (雙雙峰，1H, /=2.8， 8.8 Hz, H-13'), 6.94 (雙 峰，1H， 《/=2.8 Hz, H畫9')， 6.99 (雙峰,2H， /=8.4 Hz, H-3"， 5〃), 7.26 (雙峰,1H, /=8.8 Hz, H-12'), 7.57 (雙峰，1H， 《/=7.2 Hz, H-4), 7.68 (雙峰，2H, /=8.4 Hz, H-2", 6"); 電噴霧質(zhì)譜ESIMS (m/e) 444 (M + 1)+。
化合物l-f: 3- (4-芐基哌嗪-l-基甲基)-6-(4-甲氧基苯基)-2//-吡啶-2-酮； 淺黃色粉末，熔點(diǎn)139~140 。C(乙腈)，Rf (二氯甲垸/甲醇20 : 1) 0.44;核磁共 振氫譜^-NMR (400 MHz，気代丙酮，S ppm): 2.57 (寬單峰，4H, H-3', 7')， 2.67 (寬單峰，4H， H-4', 6'), 3.54 (單峰，2H， H-8')， 3.62 (單峰，2H, H-l'), 3.86 (單峰，3H: MeO國4"), 6.57 (雙峰，1H, J-7.2 Hz, H國5), 6.99 (雙峰，2H， 《/=8.8 Hz， H-3", 5"), 7.23-7.32 (多重峰，5H, H-10', ll'， 12', 13'， 14'), 7.56 (雙峰，1H， /=7.2 Hz, H-4)， 7.65 (雙峰，2H,盧8.4 Hz, H-2"， 6");電噴霧質(zhì)譜ESIMS (m/e) 390 (M + 1)+。
化合物l-g: 3- (4-乙基哌嗪-l-基甲基)-6-(4-甲氧基苯基)-2//-吡啶-2-酮， 淺黃色粉末，熔點(diǎn)101 103。C(乙腈),Rf(二氯甲烷/甲醇20 : 1)0.28;核磁共振 氫譜^-NMR (400 MHz,氖代丙酮，S ppm): 1.08 (三重峰，3H, */=7.2 Hz， H-9'), 2.42 (四重峰，2H, /=7.2 Hz, H-8'), 2.46 2.62 (多重峰，8H, H畫3'， 4', 6'， 7'), 3.56 (單 峰，2H, H-l'), 3.86 (單峰，3H, MeO國4"), 6.55 (雙峰,1H,聲6.8 Hz， H-5)， 6.98 (雙 峰，2H, /=8.0 Hz, H-3", 5"), 7.49 (雙峰，1H,異6.8 Hz, H-4), 7.69 (雙峰，2H, ^8.0Hz, H-2〃， 6〃)；電噴霧質(zhì)譜ESIMS (m/e) 328 (M + 1)+。
化合物1-h: 3-[4- (2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基甲基]-6-(4-甲氧基苯基)-2//-吡啶-2-酮；淺黃色粉末，熔點(diǎn)151 152 °C (乙腈),Rf (二氯甲垸/甲醇20 : 1) 0.46; 核磁共振氫譜iH-NMR (400 MHz,気代氯仿，S ppm): 2.81 (寬單峰，4H, H-3', 7'),
3.15 (寬單峰，4H， H畫4', 6')， 3.66 (單峰，2H， H畫l'), 3.86 (單峰，6H， MeO-4", 9')， 6.58 (雙峰，1H， /=6.8 Hz， H-5), 6.85~7.01 (多重峰，6H, H畫10'， 11'， 12'， 13'， 3〃， 5"), 7.57 (雙峰，1H, /=6.8 Hz， H-4)， 7.67 (雙峰，2H, >/=8.4 Hz， H-2"， 6〃)；電噴霧質(zhì)譜 ES歸(m/e)楊(M十1)+。
化合物l-i: 3- (4-環(huán)己烷基哌嗪-l-基甲基)-6-(4-甲氧基苯基)-2仏吡啶-2-酮；淺黃色粉末，熔點(diǎn)125 127。C(乙腈)，Rf(二氯甲垸/甲醇20:1) 0.30;核磁 共振氫譜^-NMR (400 MHz，気代氯仿，S ppm): 1.08~1.90 (多重峰m, 10H, H-9'， 10', 11', 12', 13'), 2.24 (寬單峰，1H， H-8')， 2.64 (寬單峰，8H, H國3', 4', 6', 7')， 3.56 (s， 2H, H-l'), 3.86 (單峰，3H, MeO誦4")， 6.59 (雙峰，1H， J=7.2 Hz, H-5), 6.99 (雙峰, 2H， J=8.8 Hz, H-3"， 5"), 7,48 (雙峰，1H, J=7.2 Hz, H畫4), 7.67 (雙峰，2H， /=8.8 Hz, H-2", 6");電噴霧質(zhì)譜ESIMS (m/e) 382 (M + 1)+。
化合物1-j: 3-[4- (3， 4-二氯芐基)哌嗪-1-基甲基]-6-(4-甲氧基苯基)-2//國 吡啶-2-酮；淺黃色粉末，熔點(diǎn)149 150 。C (乙腈)，Rf (二氯甲垸/甲醇20 : 1) 0.48; 核磁共振氫譜^-NMR (400 MHz，氘代氯仿，S ppm): 2.51 2.61 (多重峰，8H， H-3', 4', 6'， 7'), 3.49 (單峰，2H， H-8'), 3.56 (單峰，2H, H國l'), 3.90 (單峰，3H， MeO誦4"), 6.56 (雙峰，1H, /=7.2 Hz, H國5), 6.97 (雙峰，2H， 《/=8.0 Hz， H畫3", 5〃)，
7.16 (雙峰，1H， /=7.6 Hz, H-14')， 7.37 (雙峰，1H，聲7.6 Hz， H-13')， 7.43 (單峰，1H， H畫10'), 7.51 (雙峰,1H, /=7.2 Hz， H畫4)， 7.65 (雙峰,2H， /=8.0 Hz, H畫2", 6").電噴 霧質(zhì)譜ESIMS (m/e) 458 (M + 1)+。
藥理實(shí)施例1:化合物l-b對(duì)人食管癌細(xì)胞的細(xì)胞毒活性
人食管癌細(xì)胞(Eca-109)用RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含5%的小 牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升的鏈霉素。細(xì)胞以每孔4X1()S的濃度 加入到96孔板中，在37"C含5%二氧化碳潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。
細(xì)胞存活率的測(cè)定用改良MTT (3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽)法。細(xì)胞經(jīng)過24小時(shí)的孵育后，分別將新配的化合物l-b的二甲亞砜溶液 以濃度梯度加入到各孔中，使孔中化合物最終濃度分別為100微克/毫升，33.3 微克/毫升，11.1微克/毫升和3.7微克/毫升。72小時(shí)后，加入10微升MTT(5 毫克/毫升)的生理鹽水溶液，再繼續(xù)在37'C培養(yǎng)3小時(shí)后，每孔中加入200 微升二甲亞砜，以溶解還原的MTT晶體甲臜(formazan)，所形成的formazan 用酶標(biāo)儀在570nm波長下比色，細(xì)胞存活率由樣品相對(duì)于對(duì)照品的比值計(jì)算。
化合物l-b對(duì)Eca-109細(xì)胞半數(shù)抑制濃度IC5o由劑量效應(yīng)曲線得到。實(shí)驗(yàn) 結(jié)果顯示，化合物l-b的ICso為63.4MM。
本實(shí)驗(yàn)以抗腫瘤一線用藥順鉑(DDP)作為陽性對(duì)照，DDP對(duì)Eca-109細(xì) 胞的半抑制濃度ICso為5.0pM。
本實(shí)驗(yàn)表明此類6-芳基-3-取代亞甲基-吡啶酮類衍生物對(duì)Eca-109細(xì)胞具 有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，有可能發(fā)展成為新的具有抗食管癌及相關(guān)腫瘤作用的藥 物。
藥理實(shí)施例2:化合物l-h對(duì)人食管癌細(xì)胞的細(xì)胞毒活性
細(xì)胞存活率的測(cè)定用改良MTT法，具體方法如藥理實(shí)施例1。 其中化合物l-h對(duì)Eca-109細(xì)胞半抑制濃度(IC5。)由劑量效應(yīng)曲線得到。
化合物l-h的ICso為73.1^iM;而陽性對(duì)照順鉑對(duì)Eca-109細(xì)胞的ICso為5.0(iM。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明此類6-芳基-3-取代亞甲基-吡啶酮類衍生
物對(duì)人食管癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，有可能發(fā)展成為新的具有抗食管癌作
用及相關(guān)腫瘤作用的藥物。
藥理實(shí)施例3:化合物l-b對(duì)小鼠淋巴樣瘤的細(xì)胞毒活性
小鼠淋巴樣瘤(P388D1)細(xì)胞用RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10 %小牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升鏈霉素。細(xì)胞以每孔5乂103個(gè)密 度接種到96孔板中，在37。C， 5。/。C02潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。
細(xì)胞存活率的測(cè)定方法用改良MTT法。細(xì)胞經(jīng)24小時(shí)的孵育后，分別將 新配的化合物l-b的二甲亞砜溶液以濃度梯度加入到各孔中，使孔中化合物的 最終濃度分別為100微克/毫升、50微克/毫升、25微克/毫升、5微克/毫升。 72小時(shí)后，加入10微升MTT(5毫克/毫升)的生理鹽水溶液，再繼續(xù)在37。C， 5%(302潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3小時(shí)，每孔中加入150微升二甲亞砜，振蕩 溶解生成的MTT晶體甲臜(formazan)，所形成的甲臜用酶標(biāo)儀在570nm波長下比色，細(xì)胞存活率由樣品OD值對(duì)于對(duì)照OD值的比值計(jì)算。其中化合物 l-b對(duì)P388Dl細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC5())由劑量效應(yīng)曲線得到。
化合物l-b對(duì)P388D1細(xì)胞半數(shù)抑制濃度IC5o由劑量效應(yīng)曲線得到。實(shí)驗(yàn) 結(jié)果顯示，化合物l-b的ICso為42.9拜。
本實(shí)驗(yàn)以抗腫瘤一線用藥順鉑(DDP)作為陽性對(duì)照，DDP對(duì)P388D1細(xì) 胞的半抑制濃度IC5Q為7.2pM。
本實(shí)驗(yàn)表明此類6-芳基-3-取代亞甲基-吡啶酮類衍生物對(duì)P388D1細(xì)胞 具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，有可能發(fā)展成為新的具有抗白血病及相關(guān)腫瘤作用的藥 物。
藥理實(shí)施例4:化合物1"C對(duì)小鼠淋巴樣瘤的細(xì)胞毒活性
細(xì)胞存活率的測(cè)定用改良MTT法，具體方法如藥理實(shí)施例3。
化合物l~c對(duì)P388D1細(xì)胞半數(shù)抑制濃度IC5。由劑量效應(yīng)曲線得到。實(shí)驗(yàn)
結(jié)果顯示，化合物l"C的IC5o為68.0iiM。
本實(shí)驗(yàn)以抗腫瘤一線用藥順鉑(DDP)作為陽性對(duì)照，DDP對(duì)P388D1細(xì)
胞的半抑制濃度ICso為7.2肖。
本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明此類6-芳基-3-取代亞甲基-妣啶酮類衍生物對(duì)P388Dl
細(xì)胞具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，有可能發(fā)展成為新的具有抗白血病及相關(guān)腫瘤作用 的藥物。
藥理實(shí)施例5:化合物l-a對(duì)小鼠淋巴樣瘤的細(xì)胞毒活性
細(xì)胞存活率的測(cè)定用改良MTT法，具體方法如藥理實(shí)施例3。
化合物l-a對(duì)P388Dl細(xì)胞半數(shù)抑制濃度IC5o由劑量效應(yīng)曲線得到。實(shí)驗(yàn)
結(jié)果顯示，化合物l-a的ICso為5.4pM。
本實(shí)驗(yàn)以抗腫瘤一線用藥順鉑(DDP)作為陽性對(duì)照，DDP對(duì)P388D1細(xì)
胞的半抑制濃度IC5o為7.2pM。
本實(shí)驗(yàn)表明，化合物l-a對(duì)小鼠淋巴樣瘤P388Dl細(xì)胞毒性比陽性對(duì)照藥
物順鉑(DDP)還要強(qiáng)，極具潛力發(fā)展成為新的具有抗白血病及相關(guān)腫瘤作用
的藥物。
本發(fā)明的這些化合物或其可藥用鹽可以與現(xiàn)已上市的抗腫瘤藥物如鉑類 藥物順鉑(DDP)、喜樹堿類藥物伊立替康(Irinatecan， CPT-ll)、長春花堿 類藥物失碳長春花堿(Vinorebine， NVB諾維本)、脫氧胞昔類藥物吉西他濱(Gemcitabine， Gemzar，健擇)、足葉乙甙(Etoposide)、紫杉醇(Paclitaxel)
等聯(lián)合使用，制備得到具有腫瘤生長抑制活性的細(xì)胞毒性組合物，可用于治療 腫瘤疾病，尤其是食管癌、白血病及其相關(guān)腫瘤疾病。
權(quán)利要求
1. 芳基取代吡啶酮類衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征是所述衍生物選自一類6-芳基-3-取代亞甲基-吡啶酮類化合物，具有以下結(jié)構(gòu)化合物1-a3-(4-二苯甲基哌嗪-1-基甲基)-6-(4-甲氧基苯基)-2H-吡啶-2-酮；化合物1-b3-[4-(4-氟芐基)哌嗪-1-基甲基]-6-(4-甲氧基苯基)-2H-吡啶-2酮；化合物1-c3-[4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基甲基]-6-(4-甲氧基苯基)-2H-吡啶-2-酮；化合物1-d4-{[6-(4-甲氧基苯基)-2-氧代-1，2-二氫吡啶-3-基]甲基哌嗪基}-1-甲酸乙酯；化合物1-e3-[4-(3，4-二氯苯基)哌嗪-1-基甲基]-6-(4-甲氧基苯基)-2H-吡啶-2-酮；化合物1-f3-(4-芐基哌嗪-1-基甲基)-6-(4-甲氧基苯基)-2H-吡啶-2-酮；化合物1-g3-(4-乙基哌嗪-1-基甲基)-6-(4-甲氧基苯基)-2H-吡啶-2-酮；化合物1-h3-[4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基甲基]-6-(4-甲氧基苯基)-2H-吡啶-2-酮；化合物1-i3-(4-環(huán)己烷基哌嗪-1-基甲基)-6-(4-甲氧基苯基)-2H-吡啶-2-酮；化合物1-j3-[4-(3，4-二氯芐基)哌嗪-1-基甲基]-6-(4-甲氧基苯基)-2H-吡啶-2-酮。
2. 芳基取代吡啶酮類衍生物的可藥用鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的芳基取代吡啶酮類衍生物及其可藥用的鹽 在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征是在制備治療食管癌、白血病及其相關(guān) 腫瘤疾病藥物中的應(yīng)用。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的芳基取代吡啶酮類衍生物及其可藥用的鹽 在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征是所述芳基取代吡啶酮類衍生物與制劑 允許的藥用輔料制備成藥物。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的芳基取代吡啶酮類衍生物及其可藥用的鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征是所述藥物的制劑形式選用注射劑、片劑、膠囊、貼片、皮下植埋劑，或其他采用公知理論和技術(shù)制備的控釋、緩釋劑型 以及納米制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供一類6-芳基-3-取代亞甲基-吡啶酮類化合物及其可藥用的鹽在制備抗腫瘤藥物中的用途。本發(fā)明所述的芳基取代吡啶酮類衍生物具有重要的生物活性，體外試驗(yàn)表明此類具有哌嗪類衍生物結(jié)構(gòu)的化合物對(duì)于體外培養(yǎng)人食管癌細(xì)胞株(Eca-109)和小鼠淋巴樣瘤細(xì)胞株(P388D1)具有生長抑制活性，可期待作為防治相關(guān)腫瘤性疾病藥物的用途。
文檔編號(hào)A61K31/496GK101284007SQ20081006168
公開日2008年10月15日 申請(qǐng)日期2008年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月23日
發(fā)明者孫蓮莉, 巫秀美, 蘇 曾, 楊雷香, 董盛誼, 昱 趙, 陽應(yīng)華 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)