一類吡啶鹽類jak抑制劑、制備方法及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及免疫性、炎性、自身免疫性或變應(yīng)性疾病，或者移植排斥等疾病的藥物 領(lǐng)域。具體地講，本發(fā)明涉及對(duì)上述疾病具有治療作用的一類含吡啶鹽結(jié)構(gòu)的JAK抑制劑、 其制備方法，以及在制藥上的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 激酶催化蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖、核苷和其他細(xì)胞代謝物的磷酸化并在真核細(xì)胞生理學(xué) 的所有方面起關(guān)鍵作用。特別地，蛋白激酶和脂質(zhì)激酶參與信號(hào)傳導(dǎo)過程，該過程控制對(duì) 細(xì)胞外調(diào)節(jié)物或刺激物（如生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子或趨化因子）響應(yīng)的細(xì)胞的激活、生長(zhǎng)、分 化和存活。通常，蛋白激酶分為兩類，優(yōu)先磷酸化酪氨酸殘基的蛋白激酶和優(yōu)先磷酸化絲氨 酸和/或蘇氨酸殘基的蛋白激酶。酪氨酸激酶包括跨膜生長(zhǎng)因子受體如表皮生長(zhǎng)因子受體 (EGFR)和胞質(zhì)非受體激酶如Janus激酶（JAK)。不適當(dāng)?shù)馗叩鞍准っ富钚陨婕霸S多疾病， 包括癌癥、代謝疾病、自身免疫性或炎性病癥。這種效應(yīng)可直接或間接地因?yàn)槊傅耐蛔?、過 度表達(dá)或不適當(dāng)激活產(chǎn)生的控制機(jī)制故障而引起。在所有這些實(shí)例中，期望激酶的選擇性 抑制具有有益效應(yīng)。
[0003] 己經(jīng)成為目前藥物開發(fā)焦點(diǎn)的一類激酶是非受體酪氨酸激酶的]anus激酶（JAK) 家族。在哺乳動(dòng)物中，該家族具有四個(gè)成員，JAK1、JAK2、JAK3和酪氨酸激酶2(TYK2)。每 個(gè)蛋白質(zhì)都具有激酶域和催化惰性假性激酶域。JAK蛋白質(zhì)通過其氨基末端FERM(帶4. 1 蛋白（Band-4. 1)、埃茲蛋白（ezrin)、根蛋白（radixin)、膜突蛋白（moesin)域結(jié)合到細(xì) 胞因子受體上。細(xì)胞因子與其受體結(jié)合后，激活JAKs并使受體磷酸化，從而產(chǎn)生用于信號(hào) 傳導(dǎo)分子（尤其是信號(hào)傳感器的成員和轉(zhuǎn)錄激活子（Stat)家族）的停靠位點(diǎn)（docking sites) (Yamaoka 等，2004，The Janus kinases(jaks). Genome Biology, 5 (12)，p253)〇 在哺乳動(dòng)物中，JAK1、JAK2和TYK2普遍表達(dá)。相反，JAK3的表達(dá)主要在造血細(xì)胞中 并且受細(xì)胞發(fā)育與激活的高度調(diào)節(jié)（Musso等，1995, 181(4)，p 1425-1431)。JAK-缺 陷細(xì)胞系和基因靶向小鼠的研究己經(jīng)揭示了 JAKs在細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)中的基本的， 不重復(fù)的功能。JAK1敲除小鼠顯示圍產(chǎn)期致死表型，可能與阻止其哺乳的神經(jīng)作用有 關(guān)0?〇乜8等，1998,0611，93(3) :373-383)。由于紅細(xì)胞生成障礙，從1(2基因的刪除導(dǎo) 致在胚胎第12. 5天時(shí)產(chǎn)生胚胎致死性（Neubauer等，1998, Cell, 93(3)，397-409)。有 趣地，JAK3缺陷首次在患有常染色體隱性重度聯(lián)合免疫缺陷（SCID)的人中被識(shí)別 (Macchi 等，1995, Nature, 377 (6544) : 65-68)。JAK3 敲除小鼠也顯示 SCID 但未顯示非 免疫性缺陷，表明JAK3抑制劑作為免疫抑制劑將在體內(nèi)具有有限效應(yīng)并因此成為用于 免疫抑制的有前景的藥物（Papageorgiou 和 Wikman, 2004, Trends in Pharmacological Sciences, 25(11)，558-562)。在急性成巨核細(xì)胞白血病（AMKL)患者中己經(jīng)觀察到JAK3的 激活突變（Walters 等，2006, Cancer Cell, 10 (1)，65-75)。JAK3 的這些突變形式可將 Ba/ F3細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)橐蜃营?dú)立性生長(zhǎng)并在小鼠模型中誘導(dǎo)巨核母細(xì)胞白血病的特征。
[0004] 與JAK3抑制有關(guān)的疾病和病癥進(jìn)一步描述于例如W001/42246和W02008/060301 中。文獻(xiàn)中己報(bào)道一些JAK3抑制劑可用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域（O' Shea等，2004, Nat. Rev. Drug Discov. 3(7):555-564)。據(jù)報(bào)道，有效的JAK3抑制劑（CP-690,550)在器官移植的動(dòng)物 模型（Changelian 等，2003, Science, 302 (5646) ,875-888)和臨床試驗(yàn)（參考：Pesu 等， 2008, Immunol. Rev. 223, 132-142)中顯示效力。氟取代的嘧啶化合物作為JAK3抑制劑描述 于TO-A2010/118986中。雜環(huán)基吡唑并嘧啶類似物作為JAK抑制劑描述于W0-A2011/048082 中。W0-A2008/129380涉及用于治療異常細(xì)胞生長(zhǎng)的磺酰胺衍生物。W0-A2006/117560和 Journal of Molecular Graphics and Modelling(29)2010, 309-320 描述吡唑基氨基取代 的嘧啶及其在治療癌癥中的用途。EP1054004A1描述嘧啶衍生物及其在炎癥中的用途。
[0005] 本發(fā)明公開了一類含吡啶鹽結(jié)構(gòu)的JAK抑制劑，這些化合物可用于制備治療免疫 性、炎性、自身免疫性或變應(yīng)性疾病，或者移植排斥等疾病的藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種具有通式I的良好活性的JAK抑制劑。
[0007] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供制備具有通式I的化合物的方法。
[0008] 本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供含有通式I的化合物在治療免疫性、炎性、自身免疫 性或變應(yīng)性疾病，或者移植排斥等疾病方面的應(yīng)用。
[0009] 現(xiàn)結(jié)合本發(fā)明的目的對(duì)本
【發(fā)明內(nèi)容】
進(jìn)行具體描述。
[0010] 本發(fā)明具有通式I的化合物具有下述結(jié)構(gòu)式：
[0011]
[0012] 其中，R選自CfC3的烷基。
[0013] 優(yōu)選通式I的化合物具有以下結(jié)構(gòu)，
[0015] 本發(fā)明所述通式I化合物可以通過以下路線合成：
[0016]
[0017] 化合物II先用強(qiáng)堿處理，再與化合物III反應(yīng)，得到化合物IV;化合物IV先用強(qiáng) 堿處理，再與1，2-二氯乙烷反應(yīng)，得到化合物V;化合物V在加熱下發(fā)生分子內(nèi)取代反應(yīng)， 得到化合物I ;其中，所述強(qiáng)堿選自正丁基鋰、異丁基鋰、叔丁基鋰、苯基鋰、二異丙基氨基 鋰，所述X=Cl、Br、I，R的定義如前所述。
[0018] 本發(fā)明所述通式I化合物具有JAK抑制作用，可作為有效成分用于制備免疫性、炎 性、自身免疫性或變應(yīng)性疾病，或者移植排斥等疾病治療藥物。本發(fā)明所述通式I化合物的 活性是通過體外JAK的抑制試驗(yàn)來驗(yàn)證的。
[0019] 本發(fā)明的通式I化合物在相當(dāng)寬的劑量范圍內(nèi)是有效的。例如每天服用的劑量約 在lmg-700mg/人范圍內(nèi)，分為一次或數(shù)次給藥。實(shí)際服用本發(fā)明通式I化合物的劑量可由 醫(yī)生根據(jù)有關(guān)的情況來決定。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。需要說明的是，下述實(shí)施例僅是用于 說明，而并非用于限制本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的教導(dǎo)所做出的各種變化均應(yīng) 在本申請(qǐng)權(quán)利要求所要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0021] 實(shí)施例1化合物1-1的合成
[0022]
[0023]步驟A.化合物IV-1的合成
[0024] 化合物II_l(1.08g，lOmmol)溶于lOmL干燥的THF中，攪拌，在氮?dú)鈿夥罩欣鋮s 至卜20°C，而后用注射器慢慢滴加1. 6M的n-BuLi的正己烷溶液（6. 25mL，lOmmol)，滴加完 畢后，反應(yīng)混合物在該溫度下繼續(xù)攪拌1小時(shí)。用注射器再慢慢滴加III-1 (2. Olg，lOmmol) 溶于3mL干燥的THF制成的溶液，滴加完畢后，反應(yīng)混合物在該溫度下攪拌半小時(shí)，而后升 溫至室溫再攪拌過夜。反應(yīng)混合物小心傾倒入200mL冰水中，攪拌，用50mLX 3CH2C12萃取， 合并萃取相，用鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干，殘 余物使用硅膠柱層析純化，得到化合物IV-1，白色固體，ESI-MS，m/z = 229([M+H]+)。步驟 B.化合物V-1的合成
[0025] 化合物IV-1(1. 37g，6mmol)溶于10mL干燥的THF中，攪拌，在氮?dú)鈿夥罩欣鋮s 到-20 °C，而后用注射器慢慢滴加1. 6M的n-BuLi的正己烷溶液（3. 75mL，6mmol)，滴加 完畢后，反應(yīng)混合物在該溫度下繼續(xù)攪拌1小時(shí)。用注射器再慢慢滴加1，2-二氯乙烷 (0. 99g，lOmmol)溶于3mL干燥的THF制成的溶液，滴加完畢后，反應(yīng)混合物在該溫度下攪 拌半小時(shí)，而后升溫至室溫再攪拌過夜。反應(yīng)混合物小心傾倒入200mL冰水中，攪拌，用 50mLX 3CH2C12萃取，合并萃取相，用鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干，殘余物使用硅膠柱層析純化，得到化合物V-1，白色固體，ESI-MS，m/z = 291([M+H]+) 〇
[0026] 步驟C.化合物1-1的合成
[0027] 化合物V-1(0. 87g，3mmol)溶于10mL干燥的甲苯中，在氮?dú)鈿夥罩屑訜峄亓鬟^夜， TLC顯示反應(yīng)完成。反應(yīng)混合物冷卻到室溫后，加入10mL正己烷，攪拌1小時(shí)，抽濾收集固 體，室溫下真空干燥，得到化合物1-1，白色固體，ESI-MS，m/z = 255([M-C1 ]+)。
[0028] 實(shí)施例2-8
[0029] 參照實(shí)施例1的方法，合成了下表所列化合物。
[0030]
[0031]
[0032] 實(shí)施例9化合物體外對(duì)TAK激酶的抑制作用
[0033] 使用如下文指定的測(cè)試，針對(duì)化合物抑制JAK1、JAK2和JAK3的能力來篩選化合 物。
[0034]使用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)，使人 JAKl(aa850-1154)、JAK2(aa826-1132)、 JAK3(aa795-1124)和TYK2(aa871-1187)的催化結(jié)構(gòu)域表達(dá)為N端GST融合蛋白且其購(gòu)自 Carna Biosciences。使用生物素標(biāo)記的肽一聚（GT)-生物素（CisBio)-作為底物來測(cè) 定酶的潔性。反應(yīng)中的肽濃度對(duì)于JAK1為60nM、對(duì)于JAK2為20nM、對(duì)于JAK3為140nM且 對(duì)于TYK2為50nM。通過TR-FRET (時(shí)間分辨焚光能量轉(zhuǎn)移（time-resolved fluorescence energy transfer))法來檢測(cè)磷酸化的程度。對(duì)于在8mM M0PS(pH7.0)、10mM MgCl2、0. 05% 0 _疏基乙醇、0. 45mg/mL BSA中的含有酶、ATP和肽的反應(yīng)混合物中的各激酶測(cè)量化合物 的IC5。。反應(yīng)中的ATP濃度對(duì)于JAK1為3 y M、對(duì)于JAK2為0. 2 y M、對(duì)于JAK3為0. 6 y M且對(duì) 于TYK2為1. 8 y M。酶法反應(yīng)在室溫下進(jìn)行30分鐘。然后用20 y L含有0. 115 y g/mL抗纈氨 酸磷酸化（phosphoTyr) (PT66)-穴狀化合物（CisBio)以及可變濃度的SA-XL665 (CisBio) 的浮滅檢測(cè)緩沖液（50mM HEPES、0. 5M KF、EDTA 0. 25M、0. 1% (w/v)BSA, pH7. 5)未停止反應(yīng) 以保持SA-B比率恒定。孵育3小時(shí)，然后在設(shè)定為讀取熒光共振能量傳遞的Victor2V光 譜焚光計(jì)（PerkinElmer)上讀取。
[0035]
[0036] 從上表結(jié)果可以看出，本發(fā)明的化合物對(duì)JAK具有很強(qiáng)的抑制作用，可以作為制 備治療免疫性、炎性、自身免疫性或變應(yīng)性疾病，或者移植排斥等疾病的藥物。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 具有通式I結(jié)構(gòu)的化合物，其中，R選自（；-(：3的烷基。2. 權(quán)利要求1所定義的通式I化合物，選自：3. 合成權(quán)利要求1-2任一所定義的屬于通式I的化合物的方法：化合物II先用強(qiáng)堿處理，再與化合物III反應(yīng)，得到化合物IV ;化合物IV先用強(qiáng)堿處 理，再與1，2-二氯乙烷反應(yīng)，得到化合物V ;化合物V在加熱下發(fā)生分子內(nèi)取代反應(yīng)，得到 化合物I ;其中，所述強(qiáng)堿選自正丁基鋰、異丁基鋰、叔丁基鋰、苯基鋰、二異丙基氨基鋰，所 述X = Cl、Br、I，R的定義如權(quán)利要求1-2所述。4. 權(quán)利要求1-2之一所定義的通式I化合物在制備JAK抑制劑藥物方面的用途。5. 權(quán)利要求4所述的用途，包括用于制備治療免疫性、炎性、自身免疫性、變應(yīng)性疾病、 移植排斥等疾病藥物。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一類含吡啶鹽結(jié)構(gòu)的JAK抑制劑、其制備方法、以及在制備治療免疫性、炎性、自身免疫性或變應(yīng)性疾病，或者移植排斥等疾病藥物中的應(yīng)用。其中，R選自C1-C3的烷基。
【IPC分類】A61P37/06, A61P37/08, A61K31/437, C07D471/04, A61P29/00, A61P37/00
【公開號(hào)】CN105153150
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510501161
【發(fā)明人】曾華仙
【申請(qǐng)人】天津小新醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2015年12月16日
【申請(qǐng)日】2015年8月14日