9-位取代的吡啶并[3,4-b]吲哚衍生物及其制備方法和作為SIRT蛋白抑制劑的用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一類9-位取代的吡啶并[3,4-b]吲哚衍生物，還公開了所述化合物的制備方法和作為SIRT5抑制劑的用途。本發(fā)明的化合物可以用于治療多種疾病，如腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、代謝性疾病等。
【專利說明】
9-位取代的吡啶并[3, 4-b]吲哚衍生物及其制備方法和作 為SIRT蛋白抑制劑的用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及9-位取代的吡啶并[3, 4-b]吲哚衍生物，還涉及其制備方法和作為 SIRT蛋白抑制劑的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 蛋白翻譯后修飾是蛋白功能調(diào)控的重要手段之一，其中賴氨酸殘基是一系列翻譯 后修飾過程的主要作用位點，較為常見的翻譯后修飾形式有?；?，包括乙?；?、琥珀?；?和丙二?；?，以上幾種酰基化修飾形式均受到沉默信息調(diào)節(jié)因子2蛋白（Sirtuin，SIRT) 家族直接調(diào)控。Sirtuin (Silent information regulator 2family，SIRT)是一種煙酰胺腺 嘌呤二核苷酸（NAD)依賴的蛋白賴氨酸脫乙酰化酶及單個ADP-核糖基轉(zhuǎn)移酶，在多種組織 和器官中表達(dá)，如肝臟、心臟、腦和胰腺?；诎被嵝蛄械南嗨菩裕溉閯游矬w內(nèi)SIRT蛋 白共分為7種亞型，即SIRT1-SIRT7。
[0003] 現(xiàn)有研究表明，SIRT在DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞存活和凋亡、能量代謝等細(xì)胞進(jìn)程方面 發(fā)揮著重要作用。因此，目前SIRT被認(rèn)為是多種疾病，如腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、代謝性疾 病等藥物開發(fā)的重要靶點。
[0004] 其中，SIRT5作為多種疾病的治療靶點受到了高度關(guān)注。它恰好位于線粒體內(nèi)能量 代謝的交叉點，可同時感知細(xì)胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)以及代謝需求。并且，除賴氨酸乙酰化外， SIRT5催化的蛋白去琥珀?；采婕暗蕉喾N代謝過程中關(guān)鍵酶的翻譯后修飾，包括三羧酸 循環(huán)、氨基酸降解及脂肪酸代謝。近年來隨著對SIRT5蛋白功能的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，SIRT5 具有新穎的蛋白翻譯后修飾功能，參與了多種細(xì)胞進(jìn)程，與多種疾病相關(guān)。
[0005] 但是，目前暫時沒有較好的SIRT5抑制劑類藥物的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為解決上述問題，本發(fā)明主要提供了一類新型的SIRT抑制劑類藥物一一SIRT5蛋 白小分子抑制劑，它們均是9-位取代的吡啶并[3, 4-b]吲哚衍生物。
[0007] 具體地說，本發(fā)明提供了一種化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述 化合物的結(jié)構(gòu)如式（I)所示：
[0008] 其中，
[0009] A表示無、
環(huán)上相鄰的一個-OH和一個-C00H取代、
I環(huán)上的一個 或多個取代基；所述取代基選自鹵素、三氟甲基、甲基、非甲基的烷基、烷氧基、酯基、-〇H、-C 00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-S02NH 2或-BOOH ;
[0010]
在任意位置并合的芳環(huán)或取代的芳環(huán)、五元芳香或非芳香雜環(huán)、 六元芳香或非芳香雜環(huán)、五元飽和環(huán)或六元飽和環(huán)；
[0012] 當(dāng)B表示無時，L的一端與吡啶并[3, 4-b]吲哚結(jié)構(gòu)中吡咯環(huán)上的氮原子相連，另
[0013]
在任意位置并合的芳環(huán)或取代的芳環(huán)、五元芳香或非芳香雜環(huán)、 六元芳香或非芳香雜環(huán)、五元飽和環(huán)或六元飽和環(huán)時，L的一端與啦啶并[3, 4-b]吲噪結(jié)構(gòu) 中吡咯環(huán)上的氮原子相連，
環(huán)或者環(huán)B相連；
[0014] X表示碳或者氮；
[0015] &和R2分別獨立地表示無或是環(huán)上的一個或多個取代基，所述取代基選自鹵素、 三氟甲基、甲基、非甲基的烷基、硝基.
或氮取代胺酰基；
[0016] 其中，私和R4分別獨立地選自為H、C C6的脂肪烴基、C C 6的飽和環(huán)烷烴基、 的飽和雜環(huán)烴基或
；
[0017] 其中，η表示1、2、3或4 ;R5選自
或取代的芳香基。
[0018] 進(jìn)一步地，所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)如式（I a)所示：
[0019]
[0020] 其中，R!、R2、A和X均具有式（I )中所述的含義。
[0021] 進(jìn)一步地，所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)如式（I aa)、式（I ab)或式（I ac)所示：
[0022]
[0023] 其中，A表示無、或環(huán)上相鄰的一個-OH和一個-C00H取代、或環(huán)上的一個取代基； 所述取代基選自鹵素、二氣甲基、甲基、C2~C6的烷基、C C6的燒酯基、C C6的烷氧基、 -OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-S02NH 2S -BOOH。
[0024] 進(jìn)一步地，所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)如式（I b)所示：
[0025]
[0026] 其中，H A和X均具有式（I )中所述的含義。
[0027] 進(jìn)一步地，所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)如式（I ba)或式（I bb)所示：
[0028]
[0029] 其中，A表示無、或環(huán)上相鄰的一個-OH和一個-C00H取代、或環(huán)上的一個取代基； 所述取代基選自鹵素、二氣甲基、甲基、C2~C6的烷基、C C6的燒酯基、C C6的烷氧基、 -OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-S02NH 2S -BOOH。
[0030] 進(jìn)一步地，所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)如式（I c)所示：
[0031]
[0032] 其中，R^R^A和X均具有式（I )中所述的含義。
[0033] 進(jìn)一步地，所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)如式（I ca)所示：
[0034]
[0035] 其中，A表示無、或環(huán)上相鄰的一個-OH和一個-C00H取代、或環(huán)上的一個取代基； 所述取代基選自鹵素、二氣甲基、甲基、C2~C6的烷基、C C6的燒酯基、C C6的烷氧基、 -OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-S02NH 2S -BOOH。
[0036] 進(jìn)一步地，所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)如式（I d)所示：
[0037]
[0038] 其中，Y表示無、或苯環(huán)上相鄰的一個-OH和-C00H取代、或苯環(huán)上的一個或多個取 代基；所述取代基選自鹵素、三氟甲基、甲基、c2~C 6的烷基、C C 6的烷酯基、C C 6的 烷氧基、-OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-S02NH 2或-Β00Η。
[0039] &、1?2均具有式（I )中所述的含義。
[0040] 進(jìn)一步地，所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)如式（I da)所示：
[0041 ]
[0042] 其中，Y表示無、或苯環(huán)上相鄰的一個-OH和-C00H取代、或苯環(huán)上的一個取代基； 所述取代基選自鹵素、二氣甲基、甲基、C2~C6的烷基、C C6的燒酯基、C C6的烷氧基、 -OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-S02NH 2S -B00H。
[0043] 進(jìn)一步地，所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)如式（I e)所示：
[0044]
[0045] 其中，Y表示無、或苯環(huán)上相鄰的一個-OH和-C00H取代，或苯環(huán)上的一個或多個取 代基；所述取代基選自鹵素、三氟甲基、甲基、c2~C 6的烷基、C C 6的烷酯基、C C 6的 烷氧基、-OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-S02NH 2或-Β00Η ;
[0046] &、1?2均具有式（I )所述的含義。
[0047] 進(jìn)一步地，所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)如式（I ea)所示：
[0048]
[0049] 其中，Y表示無、或苯環(huán)上相鄰的一個-OH和-C00H取代、或苯環(huán)上的一個取代基； 所述取代基選自鹵素、二氣甲基、甲基、C2~C6的烷基、C C6的燒酯基、C C6的烷氧基、 -OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-S02NH 2S -BOOH。
[0050] 進(jìn)一步地，所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)為下述結(jié)構(gòu)之一：
[0053] 進(jìn)一步地，所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)為下述結(jié)構(gòu)之一：
[0054]
[0055] 本發(fā)明的化合物分別通過下述幾種路線合成：
[0058] 具體地，本發(fā)明還提供了前述化合物或其中間體的方法，包括以下步驟：
[0059]
[0060] 其中，&和R2分別獨立地表示無或環(huán)上的一個取代基，所述取代基選自甲基或甲 氧基；X選自碳或氮；A表示無或環(huán)上的一個取代基，所述取代基選自鹵素或(；~C 6的烷酯 基；
[0061] (1)以化合物lx和化合物2為原料，在堿性環(huán)境下反應(yīng)制備得到化合物3 ;
[0062] (2)將化合物3x進(jìn)行酯水解反應(yīng)，制備得到化合物4x ;
[0063] (3)以化合物4x為原料，與化合物4a發(fā)生縮合反應(yīng)，即得所述化合物或其中間體。
[0064] 或者，制備前述化合物或其中間體的方法，包括以下步驟：
[0065]
[0066] 其中，&和R2分別獨立地表示無或環(huán)上的一個取代基，所述取代基選自4-甲氧 基苯基-氨甲酰基；X選自碳或氮；A表示無或環(huán)上的一個取代基，所述取代基選自-C00H 或 _S03H ;
[0067] (1)以氨基保護(hù)的化合物6為原料，制備得到化合物7 ;
[0068] (2)將上步所得化合物7與化合物lx在堿性條件下反應(yīng)，制備得到化合物8x ;
[0069] (3)將化合物8x脫去氨基保護(hù)基團(tuán)，制備得到化合物9x ;
[0070] (4)以化合物9x為原料，在酸性條件下與化合物4b或其鈉鹽發(fā)生縮合反應(yīng)，即得 所述化合物或其中間體。
[0071] 或者，制備前述化合物或其中間體的方法，包括以下步驟：
[0072]
[0073] 其中，A表示無或環(huán)上的一個-C00H取代；
[0074] (1)以氨基保護(hù)的化合物6為原料，制備得到化合物7 ;
[0075] (2)將上步所得化合物7與化合物lb在堿性條件下反應(yīng)，制備得到化合物8b ;
[0076] (3)將化合物8b脫去氨基保護(hù)基團(tuán)，制備得到化合物9b ;
[0077] (4)以化合物9b為原料，與化合物4c發(fā)生縮合反應(yīng)，即得所述化合物或其中間體。
[0078] 或者，制備前述化合物或其中間體的方法，包括以下步驟：
[0079]
[0080] 其中，Y表示無或苯環(huán)上的一個(^~(：6的烷酯基；
[0081] (1)以氨基保護(hù)的化合物6為原料，制備得到化合物7 ;
[0082] (2)將上步所得化合物7與化合物lb在堿性條件下反應(yīng)，制備得到化合物8b ;
[0083] (3)將化合物8b脫去氨基保護(hù)基團(tuán)，制備得到化合物9b ;
[0084] (4)以化合物9b為原料，與化合物4d反應(yīng)，即得所述化合物或其中間體。
[0085] 或者，制備前述化合物或其中間體的方法，包括以下步驟：
[0086]
[0087] Y表示無、或苯環(huán)上相鄰的一個-OH和-C00H取代、或苯環(huán)上的一個或多個取代基； 所述取代基選自鹵素、二氣甲基、甲基、C2~C6的烷基、C C6的燒酯基、C C6的烷氧基、 -OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-S02NH 2S -BOOH ;
[0088] (1)將化合物1與1，2-二溴乙烷在強(qiáng)堿催化下，制備得到化合物20 ;
[0089] (2)將上步所得化合物20與化合物4e在堿性條件下反應(yīng)，即得所述化合物或其中 間體。
[0090] 本發(fā)明所述的鹵素包括但不限于氟、氯、溴、碘。
[0091] 本發(fā)明所述的烷酯基指的是具有1~6個碳原子的直鏈或支鏈的酯基，例 如-cooch3、-cooch2ch3、-cooch (ch3) 2、-cooch2ch2ch2ch3、-cooch (ch3) )2、-C00CH2CH2CH2CH2CH 3、-C00CH (CH3) CH2CH2CH3、-C00CH2CH (CH3) CH2CH3、-cooch2ch2ch (ch3) 2、-C00CH(CH3)CH(CH3)2和-cooch(ch 2ch3)2等。本發(fā)明所述c c6的烷氧基具有類似的含義， 即相應(yīng)的酯基是氧原子。
[0092] 在本發(fā)明提供的制備方法中，所述中間體指的是目標(biāo)化合物前一步的合成中間 體，例如對于化合物14b而言，化合物14a即是其合成中間體，通過本發(fā)明的制備方法合成 14a后，再進(jìn)一步通過本領(lǐng)域常規(guī)的酯水解技術(shù)手段，即可由化合物14a制備得到。在本發(fā) 明具體的實施例中，類似的情況還包括化合物l〇g、化合物19b、化合物19a與化合物22a。 即對于這些化合物而言，上述方法制備得到是其中間體而不是其本身。其中，酯水解技術(shù)手 段包括在強(qiáng)堿性條件下水解的技術(shù)手段，例如通過化合物21制備化合物22a。
[0093] 本發(fā)明還提供了所述化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其前藥、或其溶劑合物在 制備沉默信息調(diào)節(jié)因子2蛋白抑制劑類藥物上的用途。
[0094] 其中，所述沉默信息調(diào)節(jié)因子2蛋白抑制劑是SIRT5抑制劑。
[0095] 其中，所述藥物是治療或預(yù)防代謝性疾病、腫瘤或神經(jīng)退行性急性病的藥物。所述 代謝性疾病包括糖尿病。
[0096] 本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，它是以本發(fā)明提供的化合物、或其藥學(xué)上可接 受的鹽、或其前藥、或其溶劑合物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的制劑。
[0097] 其中，所述組合物是治療或預(yù)防代謝性疾病、腫瘤或神經(jīng)退行性急性病的藥物。
[0098] 所述前藥是前述化合物的衍生物，它們自身可能具有較弱的活性或甚至沒有活 性，但是在給藥后，在生理條件下（例如通過代謝、溶劑分解或另外的方式）被轉(zhuǎn)化成相應(yīng) 的生物活性形式。
[0099] 所述的制劑可以包括注射劑或口服制劑。
[0100] 本發(fā)明中的關(guān)鍵中間體和化合物進(jìn)行分離和純化，所使用的方式是有機(jī)化學(xué)中常 用的分離和純化方法。
[0101] 本發(fā)明的一種或多種化合物可以彼此聯(lián)合使用，也可選擇將本發(fā)明的化合物與任 何其它的活性試劑結(jié)合使用，用于制備SIRT抑制劑。如果使用的是一組化合物，則可將這 些化合物同時、分別或有序地對受試對象進(jìn)行給藥。
[0102] 本發(fā)明所述藥學(xué)上可接受的輔料，是指除活性成分以外包含在劑型中的物質(zhì)。
[0103] 經(jīng)試驗證明，本發(fā)明提供的9-位取代的吡啶并[3, 4-b]吲哚衍生物本法對SIRT5 具有優(yōu)異的抑制作用，可以用于治療多種疾病，如腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、代謝性疾病等。
[0104] 同時，本發(fā)明提供的9-位取代的吡啶并[3, 4-b]吲哚衍生物，該結(jié)構(gòu)是全新的化 學(xué)結(jié)構(gòu)，即將吡啶并[3, 4-b]吲哚結(jié)構(gòu)與另一環(huán)狀結(jié)構(gòu)通過L所示的橋聯(lián)結(jié)構(gòu)合并在同一 分子中。目前具有吡啶并[3, 4-b]吲哚結(jié)構(gòu)的化合物主要用于治療認(rèn)知障礙、精神病性精 神障礙、神經(jīng)遞質(zhì)-介導(dǎo)的障礙和/或神經(jīng)元障礙等疾病（CN 102083830 A、CN 102724875 A)，從未見作為SIRT抑制類藥物用途的報道。因此，本發(fā)明也為吡啶并[3, 4-b]吲哚結(jié)構(gòu) 提供了新的衍生化方向和用途。
[0105] 顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離 本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0106] 以下通過實施例形式的【具體實施方式】，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說 明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容 所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
【具體實施方式】
[0107] 實施例1本發(fā)明化合物關(guān)鍵中間體的制備
[0108] 1、化合物2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙酸乙酯（3)的合成
[0109]
[0110] 將購買于百靈威CAS號為244-63-3 ;產(chǎn)品編號為230515的原料化合物1 (0. 50g， 2. 98mmol)和NaH(0. 24g，5. 96mmol)置于圓底燒瓶中，再用lOmLDMF將其溶解，常溫攪拌2h 后，將化合物2 (0. 49mL，4. 46mmol)滴加到上述反應(yīng)液中，室溫反應(yīng)5h，TLC檢測原料基本反 應(yīng)完全。
[0111] 加水，用乙酸乙酯萃取3次，有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、濃縮后粗品經(jīng)硅膠柱層析 (CH2C1 2:CH30H = 60 :1)純化，得淡黃色固體化合物3(0. 40g，收率54% )。
[0112] 化合物 3 JH NMR(400MHz, DMS0-d6) : δ 8· 85 (s, 1H)，8· 51 (d, J = 9. 6Hz, 1H) , 8. 17 (d, J = 7. 6Hz, 1H) , 7. 99 (d, J = 5. 2Hz, 1H) , 7. 63 (t, J = 7. 6Hz, 1H)，7. 42 (d, J = 8. 4Hz, 1H)。
[0113] 2、化合物2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙酸（4)、的合成
[0114]
[0115] 用 5mL 水和 5mL 乙醇將化合物 3(0. 20g，0. 79mmol)和 Na0H(0. 10g，2. 37mmol)溶 解，升溫至l〇〇°C反應(yīng)2h，TLC檢測原料反應(yīng)完全。
[0116] 之后將反應(yīng)液冷卻至室溫，減壓蒸餾除去溶劑，加水，用稀HC1將pH調(diào)至6~7時 有白色固體析出，過濾，真空干燥箱干燥得白色固體化合物4(0. 16g，收率90% )。
[0117] 3、化合物（1_(叔-丁氧羰基）氨基）乙醇-(4-甲苯磺酸）酯（7)的合成
[0118]
[0119] 將購買于瑞歐克科技CAS號為26690-80-2 ;產(chǎn)品編號為R0K11845-2的原料化合 物 6(5. 00g，31. 06mmol)和 TsCl(ll. 88g，62. 12mmol)溶解在 20mL 吡啶中，室溫攪拌反應(yīng) 12h，TLC檢測反應(yīng)完全。
[0120] 減壓蒸餾除去一部分吡啶，加水，用乙酸乙酯萃取3次，有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、濃 縮后粗品經(jīng)硅膠柱層析（石油醚：乙酸乙酯=3 :1)純化得白色固體化合物7(4. 89g，收率 50% ) 〇
[0121] 4、化合物叔-丁基（2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基）氨基甲酸酯（8) 的合成
[0122]
[0123] 將化合物 1(0. 50g，2. 98mmol)和 NaH(0. 24g，5. 96mmol)置于圓底燒瓶中，再用 lOmLDMF將其溶解，45°C攪拌2h后，再將化合物6 (2. 81g，8. 94mmol)加入上述反應(yīng)液中，室 溫攪拌16h，TLC檢測原料基本反應(yīng)完全。
[0124] 加水，用乙酸乙酯萃取3次，有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、濃縮后粗品經(jīng)硅膠柱層析 (CH2C1 2:CH30H = 30 :1)純化得淡黃色固體化合物8 (0· 74g，收率77% )。
[0125] 化合物 8 JH NMR(400MHz, DMS0-d6) : δ 8. 92 (s, 1H)，8. 49 (d, J = 5. 2Hz, 1H) , 8. 17 (d, J = 8. 0Hz, 1H) , 7. 98 (d, J = 5. 2Hz, 1H) , 7. 62 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 55 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 33 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 4. 65 (s, br, 1H), 4. 59 (t, J = 5. 6Hz, 2H), 3. 62 (q, J = 6. 0Hz, 2H), 1. 45 (s, 9H) ppm.
[0126] 5、化合物2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基-1-氨基（9)的合成
[0127] 先用10mL的012(：12將化合物8(0. 21g，0. 66mmol)溶解，在室溫攪拌下加入1. 60mL 三氟乙酸，反應(yīng)5h后，TLC檢測原料反應(yīng)完全。
[0128] 減壓蒸餾除去溶劑，用飽和NaHC03調(diào)至PH為8,乙酸乙酯萃取3次，有機(jī)層經(jīng) 硫酸鎂干燥、濃縮后得淡黃色固體化合物9(0. 12g，收率86% )。實施例2化合物N-芐 基-2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙酰胺（5a)的合成
[0129]
[0130] 先用2mLCH2CU#化合物4(0. 05g，0. 22mmol)溶解，在0°C攪拌下逐步加入芐 胺（0.05mL，0.44mmol)、1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDCI，0.05g， 0. 27mmol)、1-羥基苯并三氮唑（H0BT，0. 04g，0. 27mmol)和N、N-二異丙基乙胺 (DIEA，0. 09mL，0. 44mmol)，加畢，升溫至室溫攪拌反應(yīng)12h，TLC檢測顯示反應(yīng)完全。
[0131] 加水，用二氯甲烷萃取三次，有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、濃縮后粗品經(jīng)硅膠柱層析 (CH2C1 2:CH30H = 60 :1)純化得白色固體化合物5a(0. 04g，收率58% )。
[0132] 化合物 5a :純度：HPLC 測試為 98 % NMR(400MHz, CDC13) : δ 8. 91 (s, 1H) ,8. 55(d, J = 8. 4Hz, 1H), 8. 19(d, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 99 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 7. 67 (t, J =7. 6Hz, 1H), 7. 49(d, J = 8. 4Hz, 1H), 7. 40 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 70-7. 08 (m, 5H) ,6.04(s，br，lH)，5.11(s，2H)，4.44(d，J = 4.0Hz，2H)ppm.13C 匪R(100MHz，CDC13) :δ 167. 3, 141. 1, 140. 3, 137. 3, 136. 5, 131. 7, 129. 2, 128. 7, 127. 6, 127. 3, 122. 2, 121. 7, 12 1. 1, 114. 8, 109. 4, 47. 2, 43. 4 ；LC-MSm/z: 316. 13[M+H] 〇
[0133] 實施例3化合物N-(吡啶-3-亞甲基）-2- (9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙 酰胺（5b)的合成
[0134]
[0135] 先用2mLCH2CU#化合物4 (0. 03g，0. 13mmol)溶解，在0 °C攪拌下逐步加入 P比啶_3_甲胺（0. 03g，0. 26mmol)、1_ (3_二甲氛基丙基）_3_乙基碳二亞胺鹽酸鹽 (EDCI，0. 03g，0. 16mmol)、l-羥基苯并三氮唑（ΗΟΒΤ,Ο. 02g，0. 16mmol)和 N、N-二異丙基乙 胺（DIEA，0. 06mL，0. 26mmol)，加畢，升溫至室溫后攪拌反應(yīng)12h，TLC檢測反應(yīng)完全。
[0136] 加水，用二氯甲烷萃取三次，有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、濃縮后粗品經(jīng)硅膠柱層析 (CH2C1 2:CH30H = 10 :1)純化得白色固體化合物5b(0. 03g，收率71% )。
[0137] 化合物 5b :純度：HPLC 測試為 98% JH NMR(400MHz, CDC13) : δ 8. 80 (s, 1H)，8. 50 ( d, J = 5. 2Hz, 1H), 8. 39 (d, J = 4. 8Hz, 1H), 8. 28 (s, 1H), 8. 14 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 92 (d, J =5. 2Hz, 1H), 7. 65 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 46-7. 43 (m, 2H), 7. 38 (t, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 16 (q, J =4. 8Hz, J = 2. 8Hz, 1H), 6. 42 (s, br, 1H), 5. 10 (s, 2H), 4. 41 (d, J = 6. 0Hz, 2H) ppm. 13C NMR (100MHz, CDC13) : δ 167. 6, 148. 8, 148. 7, 141. 1，140. 1，136. 4, 135. 3, 133. 3, 131. 5, 129. 3， 123. 5, 122. 2, 121. 6, 121. 1, 114. 7, 109. 3, 47. 1, 40. 8. LC-MS m/z :317. 12[M+H] 〇
[0138] 實施例4化合物N-(4-氯苯基）-2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙酰胺（5c) 的合成
[0139]
[0140] 先用2mLCH2CU#化合物4 (0. 03g，0. 13mmol)溶解，在0 °C攪拌下逐步加入 (4-氯苯）甲胺（0.04g，0.26mmol)、l-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽 (EDCI，0. 03g，0. 16mmol)、l-羥基苯并三氮唑（ΗΟΒΤ,Ο. 02g，0. 16mmol)和 N、N-二異丙基乙 胺（DIEA，0. 06mL，0. 26mmol)，加畢，升溫至室溫攪拌反應(yīng)12h，TLC檢測反應(yīng)完全。
[0141] 加水，用二氯甲烷萃取三次，有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、濃縮后粗品經(jīng)硅膠柱層析 (CH2C12:CH30H = 40 :1)純化得白色固體化合物5c(0. 03g，收率65% )。
[0142] 化合物 5b :純度：HPLC 測試為98%;1!1匪1?(4001抱，0)(：13):5 8.70(8，1!1)，8· 34-8. 30 (m, 2H), 8. 19 (s, 1H), 8. 08 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 83 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 7. 63 (t, J =7. 6Hz, 1H), 7. 44 (t, J = 8. 0Hz, 2H), 7. 35 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 13 (q, J = 4. 8Hz, J = 2. 8Hz, 1H), 6. 84 (t, J = 6. 0Hz, 1H), 5. 02 (s, 2H), 4. 37 (d, J = 6. 0Hz, 2H) ppm. 13C NMR (100M Hz, CDC13) : δ 167. 3, 141. 1，140. 3, 136. 4, 135. 6, 133. 4, 131. 6, 129. 3, 129. 2, 128. 8, 128. 7 ,122. 3, 121. 7, 121. 2, 114. 8, 109. 4, 47. 2, 42. 6. LC-MS m/z :350. 10[M+H] 〇
[0143] 實施例5化合物3-((2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙酰氨基）甲基）苯 甲酸乙酯（5d)的合成
[0144]
[0145] 先用3mLCH2C1^3-胺甲基-苯甲酸-乙酯（0. 04g，0. 22mmol)溶解，在0°C攪 拌下逐步加入化合物4 (0. 10g，0. 44mmol)、1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽 (EDCI, 0· 05g，0. 27mmol)、1_ 羥基苯并三氮唑（Η0ΒΤ，0· 04g，0. 27mmol)和 N、N-二異丙基乙 胺（DIEA，0. 09mL，0. 44mmol)，加畢，升溫至室溫，攪拌反應(yīng)12h，TLC檢測反應(yīng)完全。
[0146] 加水，用二氯甲烷萃取三次，有機(jī)層經(jīng)干燥、濃縮后粗品經(jīng)柱層析（CH2C1 2:CH30H = 30 :1)純化得白色固體5d(0. 05g，收率63%)。結(jié)構(gòu)經(jīng)? NMR確認(rèn)，純度：HPLC測試為98%。
[0147] 實施例6化合物3-((2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙酰氨基）甲基）苯 甲酸（5e)的合成
[0148]
[0149] 用 2mL 水和 2mL 乙醇將化合物 5d(0. 05g，0. 22mmol)和 Na0H(0. 03g，0. 67mmol)溶 解，升溫至l〇〇°C回流反應(yīng)2h，TLC檢測原料反應(yīng)完全。
[0150] 將反應(yīng)液冷卻至室溫，減壓蒸餾出去溶劑后，加水，用稀HC1將pH調(diào)至6~7時有 白色固體析出，過濾，真空干燥箱干燥得白色粉末5e(0. 04g，收率85% )。
[0151] 化合物 5e :純度：HPLC 測試為 98 % JH NMR(400MHz, DMS0) : δ 9. 23 (s, 1H)， 8. 94(t,J = 5. 6Hz, 1H), 8. 40(d, J = 4. 8Hz, 1H), 8. 28 (d, J = 7. 6Hz, 1H), 8. 14 (d, J =5. 2Hz, 1H), 7. 91 (s, 1H), 7. 84 (d, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 66-7. 59 (m, 2H), 7. 52 (d, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 45(t, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 31 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 5. 26 (s, 2H), 4. 40 (d, J = 6. 0Hz, 2H)ppm. 13C NMR(100MHz, DMSO) : δ 167. 8, 167. 6, 144. 8, 140. 1, 139. 2, 137. 3, 133. 3, 132. 2, 131. 5, 129. 1, 128. 8, 128. 6, 128. 4, 128. 0, 122. 3, 121. 1, 120. 2, 115. 0, 110. 6, 46. 2, 42. 6. LC-MS m/z:358. 12[M-H]〇
[0152] 實施例7化合物4-((2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙酰氨基）甲基）苯 甲酸5f的合成
[0153]
[0154] 按照實施例5的方法合成化合物5g，區(qū)別在于以4-胺甲基-苯甲酸-乙酯替代 3_胺甲基-苯甲酸-乙酯，得化合物5g(0. 06g，收率86% )。按照實施6的方法合成化合 物5f，區(qū)別在于以化合物5g替代化合物5d。得化合物5f (0. 05g，收率88% )。
[0155] 化合物 5f :純度：HPLC 測試為 98 % JH NMR(400MHz, DMS0) : δ 12. 87(s, b r, 1H), 9. 08(s, 1H), 8. 96(t, J = 6. 0Hz, 1H), 8. 44 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 8. 32 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 8. 24 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 7. 89 (d, J = 8. 0Hz, 2H), 7. 70-7. 63 (m, 2H), 7. 39 (d, J = 8. 0Hz, 2H), 7. 34 (t, J = 6. 8Hz, 1H), 5. 30 (s, 2H), 4. 40 (d, J = 5. 6Hz, 2H) ppm. 13C NMR (100M Hz, DMSO) : δ 167. 8, 167. 6, 144. 7, 142. 1, 138. 2, 137. 2, 132. 5, 131. 7, 129. 8, 129. 2, 128. 7, 127. 7, 122. 6, 121. 0, 120. 5, 115. 3, 110. 8, 46. 3, 42. 6. LC-MS m/z :358. 12 [M-H] 〇
[0156] 實施例8化合物N-芐基-2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基-1-氨基 (10a)的合成
[0157]
[0158] 先用 8mLCH2CU#化合物 9(0. 03g，0. 14mmol)、化合物苯甲醛（0. 04mL，0. 42mmol) 和二氫吡啶酯（0.05g，0. 20mmol)溶解，在室溫攪拌下加入催化量的4A分子篩和三氟乙 酸（0. 003mL，0. 03mmol)加畢升溫至40°C反應(yīng)10h，TLC檢測反應(yīng)完全。過濾，濾液減壓蒸 餾后經(jīng)硅膠柱層析（CH2C1 2:CH30H = 50 :1)純化得白色固體目標(biāo)化合物10a(0. 012g，收率 30% ) 〇
[0159] 化合物 10a :純度：HPLC 測試為 98 % 4 NMR (400MHz, DMSO) : δ 9. 08 (s, 1H) ,8. 37(d, J = 4. 8Hz, 1H), 8. 28(d, J = 4. 8Hz, 1H), 8. 27 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 8. 13 (d, J =5. 2Hz, 1H), 7. 90(s, 1H), 7. 78(d, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 74(d, J = 8. 4Hz, 1H), 7. 42 (d, J =7. 6Hz, 1H), 7. 35 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 28 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 4. 60 (t, J = 6. 4Hz, 2H), 3. 77 (s, 2H), 2. 97 (t, J = 6. 4Hz, 2H) ppm. LC-MS m/z: 302. 16 [M+H] 〇
[0160] 實施例9化合物3-( ((2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基）氨基）甲基） 苯甲酸（10b)的合成
[0161]
[0162] 先用 4mL 的 012(：12將化合物 9(0. 03g，0. 14mmol)、3-甲?；?苯甲酸（0. 03g， 0. 21mmol)和二氫吡啶酯（0.05g，0. 20mmol)溶解，在室溫攪拌下加入催化量的4A分子篩 和三氟乙酸（0. 003mL，0. 03mmol)加畢，升溫至40°C反應(yīng)10h，TLC檢測反應(yīng)完全。過濾，濾 液經(jīng)減壓蒸餾后經(jīng)硅膠柱層析（CH2C1 2:CH30H = 10 :1)純化得白色固體10b(0. 026g，收率 54% ) 〇
[0163] 化合物 10b :純度：HPLC 測試為 98 % JH NMR(400MHz, DMS0) : δ 9. 08 (s, 1H) ,8. 37(d, J = 4. 8Hz, 1H), 8. 28(d, J = 4. 8Hz, 1H), 8. 27 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 8. 13 (d, J =5. 2Hz, 1H), 7. 90(s, 1H), 7. 78(d, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 74(d, J = 8. 4Hz, 1H), 7. 42 (d, J =7. 6Hz, 1H), 7. 35 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 28 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 4. 60 (t, J = 6. 4Hz, 2H), 3. 77 (s, 2H), 2. 97 (t, J = 6. 4Hz, 2H) ppm. LC-MS m/z: 344. 15 [M-H] 〇
[0164] 實施例10化合物4-( ((2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基）氨基）甲基） 苯甲酸（10c)的合成
[0165]
[0166] 按照實施例9的方法合成化合物10c，區(qū)別在于以4-甲?；?苯甲酸替代3-甲酰 基-苯甲酸。得化合物10c(0.036g，收率58% )。
[0167] 化合物 10c :純度：HPLC 測試為 99 % JH NMR(400MHz, DMS0) : δ 9. 11 (s, 1H) ,8. 45(d, J = 5. 2Hz, 1H), 8. 32(d, J = 8. 0Hz, 1H), 8. 21 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 7. 98 (d, J =8. 4Hz, 2H), 7. 77 (d, J = 8. 4Hz, 1H), 7. 67 (t, J = 7. 2Hz, 1H), 7. 57 (d, J = 8. 0Hz, 2H), 7. 35(t, J = 7. 2Hz, 1H), 4. 80 (t, J = 6. 8Hz, 2H), 4. 26 (s, 2H), 3. 45 (t, J = 6. 4Hz, 2H)ppm. 13C NMR(100MHz, DMSO) : δ 167. 8, 167. 6, 144. 7, 142. 1, 138. 2, 137. 2, 132. 5 ,131. 7, 129. 8, 129. 2, 128. 7, 127. 7, 122. 6, 121. 0, 120. 5, 115. 3, 110. 8, 46. 3, 42. 6. LC-MS m/z:344. 15[M-H]〇
[0168] 實施例11化合物N-(2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基）苯甲酰胺（lOd) 的合成
[0169]
[0170] 先用2mLCH2CU#化合物9(0. 03g，0. 14mmol)溶解，在0°C攪拌下逐步加入苯 甲酸（0.038,0.28臟〇1)、1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽伍0(：1，0.03 8， 0. 17mmol)、1-羥基苯并三氮唑（Η0ΒΤ，0. 025g，0. 17mmol)和N、N-二異丙基乙胺 (DIEA，0. 06mL，0. 28mmol)，加畢，升溫至室溫反應(yīng)12h，TLC檢測反應(yīng)完全。加水，用二氯甲 烷萃取三次，有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、濃縮后經(jīng)硅膠柱層析（CH 2C12:CH30H = 15 :1)純化得淡 黃色固體10d(0. 03g，收率68% )。
[0171] 化合物 10d :純度：HPLC 測試為 99 % NMR(400MHz, CDC13) : δ 8. 93 (s, 1H)， 8.38(d，J = 5·2Ηζ，1Η) ,8.16 (d，J = 7·6Ηζ，1Η) ,7.96 (d，J = 5·2Ηζ，1Η) ,7.62-7. 56 (m ，4H)，7.47(t，J = 7·2Ηζ，1Η) ,7.38-7. 30 (m，3H) ,6.69 (t，J = 5·2Ηζ，1Η) ,4.72 (t，J = 6. 0Hz, 2H), 3. 95 (q, J = 6. 0Hz, 2H) ppm. LC-MS m/z: 316. 14 [M+H] 〇
[0172] 實施例12化合物3-((2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基）氨甲酰基）苯 甲酸（l〇e)的合成
[0173]
[0174] 先用2mLCH2Cl^#化合物9(0. 03g，0. 14mmol)溶解，在0°C攪拌下逐步加入間苯 二甲酸（0.07g，0.41mmol)、1-(3_二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDCI，0.03g， 0· 17mmol)、1-羥基苯并三氮唑（1-羥基苯并三氮唑（Η0ΒΤ，0· 025g，0· 17mmol)和N、N-二 異丙基乙胺（N、N-二異丙基乙胺（DIEA，0. 06mL，0. 28mmol)，加畢，升溫至室溫反應(yīng)12h，TLC 檢測反應(yīng)完全。加水，用二氯甲烷萃取三次，有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、濃縮后粗品經(jīng)硅膠柱層 析（CH2C1 2:CH30H = 5 :1)純化得淡黃色固體10e(0. 02g，收率40% )。
[0175] 化合物 10e :純度：HPLC 測試為 99 % JH NMR(400MHz, DMS0) : δ 9. 03 (s, 1H)， 8. 84(t, J = 6. 0Hz, 1H), 8. 35(d, J = 5. 2Hz, 1H), 8. 26 (d, J = 4. 4Hz, 2H), 8. 12 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 8. 03 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 85 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 72 (d, J = 8. 4Hz, 1H), 7. 58- 7. 50 (m, 2H), 7. 26 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 4. 71 (t, J = 6. 0Hz, 2H), 3. 74 (q, J = 6. 0Hz, 2H) ppm. LC-MS m/z:358. 13[M-H]〇
[0176] 實施例13化合物4-((2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基）氨甲酰基）苯 甲酸（l〇f)的合成
[0177]
[0178] 按照實施例12的方法合成化合物10f，區(qū)別在于以對苯二甲酸替代間苯二甲酸。 得化合物l〇f (〇· 〇3g，收率31% )。
[0179] 化合物 10f :純度：HPLC 測試為 99 % JH NMR(400MHz，DMS0) : δ 12. 98(s， br, 1H), 9. 15(s, 1H), 8. 81 (t, J = 5. 6Hz, 1H), 8. 42 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 8. 29 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 7. 92 (d, J = 6. 8Hz, 2H), 7. 79 (d, J = 4. 4Hz, 1H), 7. 69-7. 61 (m, 3H), 7. 31 (t, J = 7. 6Hz，1H)，4· 75 (t，J = 6. 4Hz，2H)，3· 76 (q，J = 6· OHz，2H) ppm. LC-MS m/z: 358. 13 [M-H] 〇
[0180] 實施例14化合物2- ((2- (9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基）氨基）喹 啉-6-羧酸（10h)的合成
[0181]
[0182] 具體的合成步驟如上述路線所示，中間體化合物9 (0. 042g, 0. 2mmol)與上海書亞 醫(yī)藥科技有限公司購買的CAS號為849996-80-1 ;產(chǎn)品編號為B167393的原料化合物2-氯 喹啉-6-羧酸（0. 047g, 0. 2mmol)在叔丁醇鉀催化下于DMF做溶劑在60°C下反應(yīng)8h后得化 合物10g(0. 041g，收率68% );接著按照實施例6中的方法，水解得化合物10g(0. 03g，收 率 84% )。
[0183] 化合物 10h :純度：HPLC 測試為 98 % JH NMR(400MHz，DMS0) : δ 13. 01(s， br, 1H), 9. 18(s, 1H), 8. 85(t, J = 5. 6Hz, 2H), 8. 42 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 8. 30 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 7. 96 (d, J = 6. 8Hz, 2H), 7. 82 (d, J = 4. 4Hz, 1H), 7. 69-7. 61 (m, 3H), 7. 30 (t, J = 7. 6Hz, 1H)，4. 76 (t, J = 6. 4Hz, 2H)，3. 75 (q, J = 6. 0Hz, 2H) ppm. LC-MS m/z: 381. 13 [M-H] 〇
[0184] 實施例15化合物4-( ((2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基）氨基）甲基） 苯磺酸（l〇i)的合成
[0185]
[0186] 按照實施例10的方法合成化合物10i，區(qū)別在于以3-甲酰基-苯磺酸鈉替代3-甲 ?；?苯甲酸。得化合物l〇i (0. 〇28g，收率48% )。
[0187] 化合物 10i :純度：HPLC 測試為 98 % JH NMR(400MHz, DMS0-d6) : δ 9. 08 (s, 1H ),8. 46(d, J = 5. 6Hz, 1H), 8. 28(d, J = 8. 0Hz, 1H), 8. 07 (d, J = 4. 8Hz, 1H), 7. 98 (d, J =8. 4Hz, 2H), 7. 78 (d, J = 8. 4Hz, 1H), 7. 66 (t, J = 7. 2Hz, 1H), 7. 57 (d, J = 8. 0Hz, 2H), 7. 35(t, J = 7. 2Hz, 1H), 4. 80 (t, J = 6. 8Hz, 2H), 4. 26 (s, 2H), 3. 45 (t, J = 6. 4Hz, 2H) ppm. LC-MS m/z: 380. 11 [M-H]。
[0188] 實施例16化合物3-((2-(7-甲氧基-1-甲基-9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基） 乙酰氨基）甲基）苯甲酸（14b)的合成
[0189]
[0190] 按照實施例1中類似化合物4的方法制備化合物13。
[0191] 按照實施例5的方法合成化合物14a，區(qū)別在于用化合物13替代化合物4。得化 合物14a(0. 032g，收率60% )。將獲得的化合物14a按照實施例6的方法水解后獲得化合 物14b，區(qū)別在于化合物14a替代化合物5d。得化合物14b (0. 026g，收率92% )。
[0192] 化合物 14b :純度：HPLC 測試為 98 % JH NMR(400MHz, DMS0_d6) : δ 1 2. 84 (s, br, 1Η), 8. 98 (t, J = 5. 6Hz, 1H), 8. 51 (d, J = 4. 8Hz, 1H), 8. 22 (d, J = 7. 6Hz, 1H), 8. 14 (d, J = 5. 2Hz, 1H) ,7.91 (s, 1H), 7. 86 (d, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 66-7. 5 9(m, 2H), 7. 51 (d, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 16 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 5. 26 (s, 2H), 4. 40 (d, J = 6. 0Hz, 2H), 3. 89 (s, 3H), 2. 87 (s, 3H) ppm. LC-MSm/z: 402. 15 [M-H] 〇
[0193] 實施例17化合物3-(((2-(3-((4-甲氧基苯基）氨甲?；?9H-吡啶并[3, 4-b] 吲哚-9-基）乙基）氨基）甲基）苯甲酸（19b)的合成
[0194]
[0195] 按照實施例1中類似化合物4的方法制備化合物18a。
[0196] 按照實施例5的方法合成化合物19a，區(qū)別在于化合物18a替代化合物4,以甲氧 基苯胺替代3-胺甲基-苯甲酸-乙酯。得化合物19a(0.054g，收率64%)。將獲得的化 合物19a按照實施例6的方法水解后獲得化合物19b，區(qū)別在于化合物19a替代化合物5d。 得化合物19b (0. 042g，收率73% )。
[0197] 化合物 19b:純度：HPLC 測試為 98 % JH NMR(400MHz, DMS0-d6) : δ 12. 84(s， br, 1H), 10. 01 (s, 1H), 9. 10 (s, 1H), 8. 37 (s, 1H), 8. 26 (d, J = 4. 8Hz, 1H), 8. 22 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 8. 13 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 7. 90-7. 74 (m, 3H), 7. 42 (d, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 35 (t, J = 7. 6Hz, 2H), 7. 26-7. 17 (m, 4H), 4. 61 (t, J = 6. 4Hz, 2H), 3. 89 (s, 3H), 3. 78 (s, 2H), 2. 96 (t, J =6. 4Hz, 2H) ppm. LC-MS m/z: 493. 20 [M-H] 〇
[0198] 實施例18化合物2-(2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基）-1, 2, 3, 4-四氫 異喹啉-6-甲酸（22a)的合成
[0199]
[0200] 將購買于上海書亞醫(yī)藥科技有限公司CAS號為185057-00-5 ;產(chǎn)品編號為B27871 的 1,2,3,4-四氫異喹啉-6-羧酸甲酯（0. 038g，0. 2mmol)和 NaH(0. 018g，0. 4mmol)在 3mL 的DMF做溶劑的條件下，活化lh，接著加入合成的中間體化合物20(0. 054g，0. 2mmol)后升 高溫度至80°C繼續(xù)反應(yīng)，反應(yīng)約12h，經(jīng)TLC檢測，反應(yīng)完畢后加入100mL冰水，調(diào)節(jié)PH為 7后，經(jīng)乙酸乙酯萃取3次，有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥后，經(jīng)硅膠柱層析（CH 2C12:CH30H = 50 :1) 純化后得化合物21 (0. 035g.收率46% )。將獲得的化合物21按照實施例6的方法水解后 獲得化合物22,區(qū)別在于化合物21替代化合物5d。得化合物22 (0. 028g，收率83% )。
[0201] 化合物 22:純度：HPLC 測試為 98 % JH NMR(400MHz, DMS0) : δ 12. 87, 9. 10 (s, 1Η), 8. 39 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 8. 27 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 8. 24 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 8. 00 (d, J =8. 4Hz, 2H), 7. 77 (d, J = 8. 4Hz, 1H), 7. 35 (t, J = 7. 2Hz, 1H), 4. 80 (t, J = 6. 4Hz, 2H), 4. 68(t, J = 6. 4Hz, 2H), 4. 28 (t, J = 6. 4Hz, 2H), 4. 26 (s, 2H), 3. 45 (t, J = 6. 4Hz, 2H)ppm. LC-MS m/z:370. 16[M-H]〇
[0202] 實施例19本發(fā)明化合物對體外SIRT5蛋白的抑制活性
[0203] 具體的測試方法如下：
[0204] 1)實驗材料：
[0205] 購買于圣路易斯，密蘇里州Sigma-Aldrich公司的煙酰胺（產(chǎn)品編號：72340); BPS公司的組蛋白去乙?；福℉DAC)緩沖液（產(chǎn)品編號：50031) ;BPS公司的SIRT顯影劑 (產(chǎn)品編號：50089) ;BPS公司的Sirtuin 5蛋白底物（產(chǎn)品編號：50126)以及受試化合物。
[0206] 2)實驗方法：
[0207] 首先，制備反應(yīng)母液：于每個測試孔中加入5 μ 1牛血清白蛋白（BSA, lmg/ mL)，0. 5mM煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+，lmg/mL)，14. 5 μ LSIRT緩沖溶液和5 μ 1稀釋的 SIRT底物（100 μΜ/L)。然后，將所有受試化合物及陽性對照化合物煙酰胺溶解于100%的 DMS0中配制成10mM/L的溶液后用含有10 % DMS0的HDAC緩沖溶液分別將其稀釋成100 μ M/ L、30 μ M/L和10 μ M/L。隨后，取配制好化合物溶液5 μ 1，加入不同的測試孔中；再向每個 測試孔中加入20 μ 1SIRT5蛋白后于37°C下培養(yǎng)30分鐘。接著，每孔中加入50 μ 1的2χ SIRT顯影劑于常溫繼續(xù)培養(yǎng)15min。最后使用Biotek Synergy酶標(biāo)儀在激發(fā)光為380ηΜ和 440ηΜ發(fā)射光波長處測試以上反應(yīng)液的發(fā)光強(qiáng)度從而根據(jù)"抑制活性％ = (F-Fb) AFt-Fb) xlOO% "確定化合物對SIRT5的抑制活性，其中F為含有受試化合物的熒光強(qiáng)度，F(xiàn)b為不含 SIRT蛋白的熒光強(qiáng)度；Ft為不含測受試化合物的熒光強(qiáng)度。
[0208] 3)實驗結(jié)果：
[0209] 通過以上實驗方法，測試了本發(fā)明中的化合物針對SIRT5的抑制活性。具體部分 化合物在1〇μΜ、30μΜ、100μΜ濃度下的抑制活性見表1.其中A表示抑制率大于85%、B 表示抑制率為大于70%、C表示抑制率為大于55%，D表示抑制率為大于40% ;E表示抑制 率為大于20% ;NA表示無活性；-表示未測試。
[0210] 表1.受試化合物對SIRT5的抑制活性
[0211]
[0212] 綜上所述，本發(fā)明提供的9-位取代的吡啶并[3, 4-b]吲哚衍生物，對SIRT5具有 優(yōu)異的抑制作用，可以用于治療多種疾病，如腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、代謝性疾病等。
【主權(quán)項】
1. 一種化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié)構(gòu)如式（I )所 示：其中， A表示無、或：環(huán)上相鄰的一個-OH和一個-COOH取代、或?環(huán)上的一個或多 個取代基；所述取代基選自鹵素、三氟甲基、甲基、非甲基的烷基、烷氧基、酯基、-OH、_C00H、 -C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-SO2NH2S -BOOH ; B表示無或胃￡任意位置并合的芳環(huán)或取代的芳環(huán)、五元芳香或非芳香雜環(huán)、六元 芳香或非芳香雜環(huán)、五元飽和環(huán)或六元飽和環(huán)； L表當(dāng)B表示無時，L的一端與吡啶并[3, 4-b]吲哚結(jié)構(gòu)中吡咯環(huán)上的氮原子相連，另一端 」環(huán)相連； 當(dāng)B表示±E任意位置并合的芳環(huán)或取代的芳環(huán)、五元芳香或非芳香雜環(huán)、六元 芳香或非芳香雜環(huán)、五元飽和環(huán)或六元飽和環(huán)時，L的一端與P比啶并[3, 4-b] Π 引噪結(jié)構(gòu)中P比 咯環(huán)上的氮原子相連，另一端與環(huán)或者環(huán)B相連； X表示碳或者氮；RJPR2分別獨立地表示無或是環(huán)上的一個或多個取代基，所述取代基選自鹵素、三氟 甲基、甲基、非甲基的烷基、硝基.或氮取代胺酰基； 其中，RjPR4分別獨立地選自H、（^~C6的脂肪烴基、（^~C6的飽和環(huán)烷烴基、（^~ C6的飽和雜環(huán)烴基或其中，η表示1、2、3或4 ;R5選自：取代的芳香基。2. 權(quán)利要求1所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)如式（I a)所示：其中，札、R2、A和X均具有權(quán)利要求1中所述的含義。3. 權(quán)利要求2所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)如式（I aa)、式（I ab)或式（I ac)所示：其中，A表示無、或環(huán)上相鄰的一個-OH和一個-COOH取代、或環(huán)上的一個取代基；所述 取代基選自鹵素、三氟甲基、甲基、C2~C6的烷基J1-C6的烷酯基、C ^C6的烷氧基、-OH 、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-SO2NH 2或-Β00Η。4. 權(quán)利要求1所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)如式（I b)所示：其中，Ri、R2、A和X均具有權(quán)利要求1中所述的含義。5. 權(quán)利要求4所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)如式（I ba)或式（I bb)所示：其中，A表示無、坱外上《郊的一個-UH和一個-⑶UH耿代、坱外上的一個耿代基；所述 取代基選自鹵素、三氟甲基、甲基、C2~C6的烷基J1-C6的烷酯基、C ^C6的烷氧基、-OH 、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-SO2NH 2或-Β00Η。6. 權(quán)利要求1所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)如式（I c)所示：其中，札、R2、A和X均具有權(quán)利要求1中所述的含義。7. 權(quán)利要求6所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)如式（I ca)所示：其中，A表示無、或環(huán)上相鄰的一個-OH和一個-COOH取代、或環(huán)上的一個取代基；所述 取代基選自鹵素、三氟甲基、甲基、C2~C6的烷基J1-C6的烷酯基、C ^C6的烷氧基、-OH 、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-SO2NH 2或-Β00Η。8. 權(quán)利要求1所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)如式（I d)所示：其中，Y表示無、或苯環(huán)上相鄰的一個-OH和-COOH取代、或苯環(huán)上的一個或多個取代 基；所述取代基選自??素、二氣甲基、甲基、C2~C 6的烷基、C廣C 6的燒酯基、C廣C 6的燒 氧基、-OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S0 3H、-SO2NH2或-BOOH ; &、私均具有權(quán)利要求1中所述的含義。9. 權(quán)利要求8所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)如式（I da)所示： f其中，Y表示無、或苯環(huán)上相鄰的一個-OH和-COOH取代、或苯環(huán)上的一個取代基；所述 取代基選自鹵素、三氟甲基、甲基、C2~C6的烷基J1-C6的烷酯基、C ^C6的烷氧基、-OH 、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-SO2NH 2或-Β00Η。10. 權(quán)利要求1所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié) 構(gòu)如式（I e)所示：其中，Y表示無、或苯環(huán)上相鄰的一個-OH和-COOH取代，或苯環(huán)上的一個或多個取代 基；所述取代基選自??素、二氣甲基、甲基、C2~C 6的烷基、C廣C 6的燒酯基、C廣C 6的燒 氧基、-OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S0 3H、-SO2NH2或-BOOH ; &、私均具有權(quán)利要求1中所述的含義。11. 權(quán)利要求10所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的 結(jié)構(gòu)如式（I ea)所*其中，Y表示無、或苯環(huán)上相鄰的一個-OH和-COOH取代、或苯環(huán)上的一個取代基；所述 取代基選自鹵素、三氟甲基、甲基、C2~C6的烷基J1-C6的烷酯基、C ^C6的烷氧基、-OH 、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-SO2NH 2或-Β00Η。12. 權(quán)利要求1-11任一項所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述 化合物的結(jié)構(gòu)為下述結(jié)構(gòu)之一：13. 制備權(quán)利要求1-12任一項所述化合物或其中間體的方法，其特征在于：包括以下 步驟：其中，&和R 2分別獨立地表示無或環(huán)上的一個取代基，所述取代基選自甲基或甲氧基； X選自碳或氮；A表示無或環(huán)上的一個取代基，所述取代基選自鹵素或(；~C 6的烷酯基； (1) 以化合物Ix和化合物2為原料，在堿性環(huán)境下反應(yīng)制備得到化合物3 ; (2) 將化合物3x進(jìn)行酯水解反應(yīng)，制備得到化合物4x ; (3) 以化合物4x為原料，與化合物4a發(fā)生縮合反應(yīng)，即得所述化合物或其中間體； 或者，包括以下步驟：其中，&和R2分別獨立地表示無或環(huán)上的一個取代基，所述取代基選自4-甲氧基 苯基-氨甲?；?；X選自碳或氮；A表示無或環(huán)上的一個取代基，所述取代基選自-COOH 或-SO3H ; (1) 以氨基保護(hù)的化合物6為原料，制備得到化合物7 ; (2) 將上步所得化合物7與化合物Ix在堿性條件下反應(yīng)，制備得到化合物Sx ; (3) 將化合物8x脫去氨基保護(hù)基團(tuán)，制備得到化合物9x ; (4) 以化合物9x為原料，在酸性條件下與化合物4b或其鈉鹽發(fā)生縮合反應(yīng)，即得所述 化合物或其中間體； 或者，包括以下步驟：其中，A表示無或環(huán)上的一個-COOH取代； (1) 以氨基保護(hù)的化合物6為原料，制備得到化合物7 ; (2) 將上步所得化合物7與化合物Ib在堿性條件下反應(yīng)，制備得到化合物8b ; (3) 將化合物8b脫去氨基保護(hù)基團(tuán)，制備得到化合物9b ; (4) 以化合物9b為原料，與化合物4c發(fā)生縮合反應(yīng)，即得所述化合物或其中間體； 或者，包括以下步驟：其中，Y表示無或苯環(huán)上的一個Ci~C 6的烷酯基； (1) 以氨基保護(hù)的化合物6為原料，制備得到化合物7 ; (2) 將上步所得化合物7與化合物Ib在堿性條件下反應(yīng)，制備得到化合物8b ; (3) 將化合物8b脫去氨基保護(hù)基團(tuán)，制備得到化合物9b ; (4) 以化合物9b為原料，與化合物4d反應(yīng)，即得所述化合物或其中間體； 或者，包括以下步驟：Y表示無、或苯環(huán)上相鄰的一個-OH和-COOH取代、或苯環(huán)上的一個或多個取代基；所 述取代基選自鹵素 、三氟甲基、甲基、C2~C6的烷基的烷酯基、C1-C 6的烷氧基、-OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-SO 2NH2S -BOOH ; (1) 將化合物1與1，2-二溴乙烷在強(qiáng)堿催化下，制備得到化合物20 ; (2) 將上步所得化合物20與化合物4e在堿性條件下反應(yīng)，即得所述化合物或其中間 體。14. 權(quán)利要求1-12任一項所述化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其前藥、或其溶劑合 物在制備沉默信息調(diào)節(jié)因子2蛋白抑制劑類藥物上的用途；優(yōu)選地，所述沉默信息調(diào)節(jié)因 子2蛋白抑制劑類藥物是SIRT5抑制劑類藥物。15. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的用途，其特征在于：所述藥物是治療或預(yù)防代謝性疾病、月中 瘤或神經(jīng)退行性急性病的藥物。
【文檔編號】C07D471/04GK105884767SQ201510823698
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2015年11月24日
【發(fā)明人】楊羚羚, 王周玉, 錢珊, 何彥穎, 陳泉龍
【申請人】西華大學(xué)