專利名稱：：梅花參中新的抗腫瘤化合物AnanasideC的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術領域：
，是一種從海洋動物梅花參中分離到的新的抗腫瘤化合物AnanasideC。技術背景梅花參(7Te/e"otoa"a"^J.)，又名"鳳梨參"，屬海洋棘皮動物門海參綱刺參科。其體形很大，長一般為700mm，寬約100mm，高約80mm，廣泛分布于我國西沙群島和臺灣南端。其體內含有豐富的蛋白質、多糖、維生素、皂苷類物質，具有補肝腎，益精，養(yǎng)血的功效。有關其所含的皂苷類成分的化學結構及抗腫瘤活性迄今尚未見有過報道。
發(fā)明內容本發(fā)明是從生長于中國福建海域的梅花參中提取分離一種新的皂苷類化合物，命名為AnanasideC，其化學結構如下AnanasideC為無色結晶性粉末，溶點185187°C(MeOH-H20)，[a]D21.3°(c=0.2，MeOH),Liebermann-Burchard反應和Molisch反應均呈陽性。電噴霧質譜信號w/z905[M+Na]+和w/z859[M-Na]-。紅外光譜max-3423，強寬峰(羥基)，1764(羰基)，1637(雙鍵)，1257，1072(us，磺酸基)。^-和13C核磁共振數據見表l。表1AnanasideC的的&和13<:核磁共振數據position3h(J)Sc11.35m，1.79m36.4Xyl21.82m，1.96m27.014.59d(6.4)105.133.05d(8.4)88.723.94m83.3440.034.18m75.250.91d(10.4)52.844,95m75.961.72m，1.51m28.63.60m，4.56m64.071.46m21.2Qui83.24m40.915.00d(7.6)105,79153.823.90m76.71039,73楊m77.6115.51m115.643.63m73.4124.86d(4.0)71.653.74m71.91358.961.52d闊20,31445.9151.82m,1.39m36.8164.58m76.51789.718174.4191.28s21.2202.28m35.6211.65s18.8224,21m80.7231.9428.6241.54m38.52586.6261.10s28.6271.08s27.9301.02s16.7311.16s28.1321.56s20,3Xyl::木糖，Qui:奎諾糖，J值偶合常數本發(fā)明還提供了從梅花參提取分離AnanasideC的方法，其步驟如下(1)提取將梅花參洗凈，切碎，用5倍量(重量)95%乙醇浸泡7天，濾出提取液，再用85%乙醇浸泡提取2次，每次7天，合并3次提取液，減壓回收乙醇，得流浸膏。將流浸膏溶于水中，通過大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫。收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂苷提取物。(2)分離將上述總皂苷提取物應用硅膠柱層析，以二氯甲垸甲醇水為8~5:1~4:1混合溶劑洗脫，薄層層析檢測，收集含AnanasideC的流份，再經ZorbaxSBC18高效液相柱層析，以甲醇水為65:35為流動相洗脫，得AnanasideC純品。本發(fā)明對梅花參皂苷AnanasideC進行了體外抗腫瘤試驗，表明其具有明顯的抑制腫瘤的效果。試驗所用細胞株為國際通用的腫瘤細胞株，即A-549(肺癌)MCF-7(乳腺癌)IA-9(卵巢癌)CAKI-1(腎癌)PC-3(前列腺癌)KB(鼻咽癌)SK-MEL-2(黑色素瘤)HCT-8(腸癌)試驗方法為國際通用的SRB法根據細胞生長速率，將處于對數生長期的腫瘤細胞以90nl/孔接種于96孔培養(yǎng)板，貼壁生長24小時再加藥1(^1/L。每個濃度設三復孔。并設相應濃度的生理鹽水溶媒對照及無細胞調零孔。腫瘤細胞在37°C、5%032條件下培養(yǎng)72小時，然后傾去培養(yǎng)液，用10%冷TCA固定細胞，4"放置1小時后用蒸餾水洗滌5次，空氣干燥。最后加入150^il/孔的Tris溶液，酶標儀520nm波長下測定OD值。試驗結果見表2。表2AnanasideC對腫瘤細胞的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>上述實驗結果表明，AnanasideC對8種不同的腫瘤細胞株均顯示明顯的抑制作用。本發(fā)明為研制新的抗腫瘤藥物提供了新的先導化合物，為開發(fā)利用中國的海洋藥用生物資源具有重要意義。具體實施例方式以下結合實施例進一步描述AnanasideC的分離制備。將梅花參1000克洗凈，切碎，分別用5倍量(重量)的95%、85%、85%乙醇依次浸泡，每次浸泡7天，合并乙醇浸出液，減壓回收乙醇，得流浸膏。將流浸膏溶于3倍量水中，過濾，濾液通過DA201-B大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至干，得總皂苷5.6克。將總皂苷進行硅膠柱層析，以二氯甲烷甲醇水為7.3:2.7:i的溶劑洗脫，收集含AnanasideC的流份。再經ZorbaxSBC18高效液相柱層析，以甲醇水為65:35為流動相洗脫，得AnanasideC純品0.2克。權利要求1.一種抑制腫瘤的化合物，其特征在于化學結構式如下id="icf0001"file="S2008100612623C00011.gif"wi="72"he="56"top="58"left="66"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>2.權利要求l所述抑制腫瘤的化合物的制備方法，其具體步驟如下(1)提取將原料梅花參洗凈，切碎，用95%乙醇浸泡7天，濾出提取液，再用85%乙醇浸泡2次，每次7天；合并3次提取液，減壓回收乙醇，得流浸膏；將流浸膏溶于水中，通過大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫；收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂苷提取物；(2)分離將上述總皂苷提取物應用硅膠柱層析，以二氯甲烷甲醇水為8~5:14:i混合溶劑洗脫，薄層層析檢測，收集含權利要求i所述化合物的流份，再經ZorbaxSBC18高效液相柱層析，以甲醇水為65:35為流動相洗脫，得權利要求l所述化合物純品。3.權利要求1所述抑制腫瘤的化合物用于制備抗腫瘤藥物的用途。全文摘要本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術領域：
，具體為一種從梅花參中分離的抗癌化合物AnanasideC，分子式C₄₁H₆₃O₁₇SNa。經多種現代光譜分析，特別是應用先進的二維核磁共振譜和高分辨質譜的綜合解析，確定了該化合物的化學結構及立體構型。體外抗腫瘤試驗表明，該化合物對A-549肺癌和IA-9卵巢癌等8種腫瘤細胞株有明顯的抑制作用。本發(fā)明可為研制新的抗腫瘤藥物提供先導化合物，對開發(fā)利用中國的海洋藥用生物資源具有重要價值。文檔編號A61K31/58GK101245092SQ20081006126公開日2008年8月20日申請日期2008年3月26日優(yōu)先權日2008年3月26日發(fā)明者軍巫申請人:軍巫