專(zhuān)利名稱(chēng)：貝母生物堿提取物在制備腫瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物提取物及其應(yīng)用，尤其是貝母生物堿提取物在制備治療基底細(xì)胞癌(BCC)及其他腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
貝母為百合科(Liliaceae)貝母屬(Fritillaria)多種植物的干燥鱗莖，全世界約有60多種，中國(guó)有20種，除兩廣、福建、臺(tái)灣等省外，其他省區(qū)均有分布，其中以新疆、四川、湖北、安徽等地種類(lèi)豐富。貝母作為一種常用中藥，常用于止咳化痰、清熱散結(jié)。近年來(lái)研究表明，貝母的生物活性是多方面的，如抗菌作用、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛作用、抗?jié)冏饔?、抗血小板聚集作用、抗腫瘤作用。貝母屬植物中含有許多類(lèi)化學(xué)物質(zhì)，如生物堿類(lèi)、皂苷類(lèi)等，通常認(rèn)為貝母生物堿是其主要有效成分，并以貝母生物堿的含量作為評(píng)價(jià)貝母質(zhì)量的主要依據(jù)。貝母主要用于制備治療咳嗽，祛痰，潤(rùn)肺等藥物或保健食品，如川貝枇杷膏等。
基底細(xì)胞癌(BCC)是一種常見(jiàn)的上皮細(xì)胞腫瘤，其發(fā)病率隨年齡增長(zhǎng)而上升?，F(xiàn)階段對(duì)于此病的治療主要是采用外科手術(shù)摘除腫瘤以及正常組織的部分邊緣。在患者手術(shù)不可行時(shí)，則通過(guò)放療等方法破壞腫瘤細(xì)胞。放療主要是通過(guò)不可修復(fù)的大量破壞DNA，從而殺死腫瘤細(xì)胞，但與此同時(shí)也殺死了許多正常的細(xì)胞，因此，這些治療方法的實(shí)用性和有效性是十分有限的。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者在應(yīng)用天然藥物有效成分治療基底細(xì)胞癌方面做了大量的基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用研究，希望從中開(kāi)發(fā)出治療該病的新藥，其中研究較多的有cyclopamine等。目前尚未見(jiàn)用貝母及其提取物治療基底細(xì)胞癌的研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要要解決的技術(shù)問(wèn)題在于研究設(shè)計(jì)貝母及其提取物的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了貝母生物堿提取物在制備治療基底細(xì)胞癌及其它腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的機(jī)理主要是通過(guò)區(qū)分出腫瘤細(xì)胞，并使其死亡，從而達(dá)到治療效果。同時(shí)能保留正常的組織細(xì)胞(包括正常表皮基層和毛囊的未被區(qū)分的其它細(xì)胞)。由于貝母生物堿提取物引起腫瘤細(xì)胞死亡的原因是通過(guò)非基因毒性機(jī)制，因此不同于放射治療和化學(xué)療法那樣，它們是通過(guò)破壞DNA來(lái)發(fā)揮作用，對(duì)正常細(xì)胞也帶來(lái)了殺傷。依據(jù)該機(jī)理，貝母生物堿提取物特別適用于癌癥治療，能治療基底細(xì)胞癌、以及其他如髓質(zhì)母細(xì)胞瘤、橫紋肌瘤、纖維肉瘤、消化道腫瘤和小細(xì)胞胞肺癌等通過(guò)hedgehog/圓滑信號(hào)傳導(dǎo)途徑來(lái)繁殖細(xì)胞和防止細(xì)胞凋亡的腫瘤。
本發(fā)明提供了貝母生物堿提取物的應(yīng)用，所述的貝母生物堿提取物通過(guò)下列方法提取將貝母原料粉碎，用原料3倍量的工業(yè)酒精回流提取3次，每次一個(gè)半小時(shí)，過(guò)濾，濃縮得浸膏。浸膏用少量1％的鹽酸溶液捏溶，過(guò)濾，濾液用其1/2量的乙醚萃取3次，再用氨水堿化至pH為8，用與堿液相同量的氯仿萃取6次，回收溶劑，得貝母生物堿提取物。
貝母生物堿提取物可以制成藥物制劑。將貝母生物堿提取物，與藥用輔料，按常規(guī)的制劑工藝，即可制成口服型藥物制劑或注射型藥物制劑。與口服制劑中的藥用輔料崩解劑、賦型劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、填充劑等，按常規(guī)方法即可制成為片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑和丸劑等口服固體藥物制劑；與常用的增溶劑、乳化劑、潤(rùn)濕劑、起泡或消泡劑等表面活性劑、稀釋劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、較味劑、增稠劑等混合，按相應(yīng)的常規(guī)方法，即可制成為水劑、糖漿劑等口服液體藥物制劑；與注射劑中常用的適當(dāng)溶劑和附加劑配合和操作，還可以制備成相應(yīng)的凍干粉針、水針等肌肉注射藥物制劑。
本發(fā)明提供了貝母生物堿提取物在制備治療各種基底細(xì)胞癌及其他腫瘤藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明方法提取的貝母生物堿提取物進(jìn)行了下列動(dòng)物試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)康呢惸干飰A防止了B波段紫外線(xiàn)(UV)誘導(dǎo)的基底細(xì)胞癌的生成試驗(yàn)動(dòng)物昆明小鼠(一級(jí))180只，體重30-35克，雌雄各半，隨機(jī)分為6組。
造模方法UVB距小鼠30cm處照射。
供試藥物貝母生物堿提取物陽(yáng)性對(duì)照藥環(huán)耙明(cyclopamine)儀器UV放射裝置(Daavlin Co.，Bryan，OH)試驗(yàn)方法用B波段UV照射小鼠240mJ/cm2一周三次，直至有明顯可見(jiàn)的皮膚腫瘤出現(xiàn)，停止照射。口服給藥20周，記錄每周的腫瘤情況。然后取小鼠背部皮膚，以從組織學(xué)上研究腫瘤情況。于4℃將組織浸于0.2％戊二醛/2％甲醛-1*PBS20分鐘，然后用1*PBS洗兩次。將組織在37℃置于含5％5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷的95％鐵緩沖液中，放置24小時(shí)，以患基底細(xì)胞癌(BCC)表示部位的面積作為觀察指標(biāo)。
試驗(yàn)結(jié)果

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，貝母生物堿提取物可明顯抑制小鼠所患的基底細(xì)胞癌。
本發(fā)明人將貝母生物堿提取物應(yīng)用于患者也獲得了良好的效果。
例如將貝母生物堿提取物乳膏治療鼻部基底細(xì)胞癌患者，結(jié)果表明大量腫瘤細(xì)胞死亡。
本發(fā)明提供的貝母生物堿提取物在治療腫瘤方面的應(yīng)用，將為治療腫瘤辟了新的方案，對(duì)醫(yī)藥臨床和人類(lèi)健康有較大的應(yīng)用價(jià)值。
具體實(shí)施例方式實(shí)例1、本發(fā)明的貝母生物堿提取物制劑的應(yīng)用實(shí)例一68歲老年男性患者，鼻部上端患大面積潰爛性基底細(xì)胞癌。用貝母生物堿提取物乳膏治療基底細(xì)胞癌患處的下半部。每隔三個(gè)小時(shí)，直接涂抹約20mu.l貝母生物堿提取物乳膏于基底細(xì)胞癌患處的下半部，而上半部不涂抹。治療54小時(shí)后，將腫瘤切除，以便觀察?？擅黠@觀察到用貝母生物堿提取物乳膏治療的上半部分，腫瘤被快速抑制，而下半部分無(wú)明顯變化。另外，用H&E標(biāo)記切除的腫瘤，可以看到，治療部分大量腫瘤細(xì)胞死亡，并由此形成了大小不一的囊腫。與此相對(duì)的，未治療部分是一堅(jiān)固的腫瘤組織，而且沒(méi)有觀察到細(xì)胞死亡。在免疫組織化學(xué)方面，用單核抗體Ki-S5為標(biāo)記拮抗抗原Ki-67。抗原Ki-67，是細(xì)胞繁殖的標(biāo)記，它在用貝母生物堿提取物乳膏部位不再表達(dá)，而在未治療部位，可明顯的看到腫瘤細(xì)胞繁殖。
實(shí)例2、一82歲老年男性患者，面頰患毛發(fā)上皮瘤。用25mu.l貝母生物堿提取物乳膏每隔三個(gè)小時(shí)，直接涂抹于患處。24小時(shí)后，中斷治療，將患腫瘤處皮膚切除，以作觀察。在殘留腫瘤細(xì)胞中可以觀察到，細(xì)胞開(kāi)始死亡。另外，患處附近的胎塊在用藥24小時(shí)后變小，色素沉著變少。
實(shí)例3一59歲男性患者，下眼瞼患有痣樣基底細(xì)胞癌。除被標(biāo)記處，其余所有節(jié)結(jié)都用20mu.l貝母生物堿提取物乳膏每隔四小時(shí)治療一次。被標(biāo)記的節(jié)結(jié)只能靠乳膏的擴(kuò)散來(lái)接受治療。接受治療后的第三天，患處腫瘤大幅度減少，只殘留少量可見(jiàn)部分。停止治療，再做后續(xù)觀察，沒(méi)有觀察到明顯的腫瘤抑制現(xiàn)象。用H&E標(biāo)記的接受治療的腫瘤部位顯示出許多無(wú)腫瘤細(xì)胞的包囊空間。6天后，原腫瘤患處的皮膚被切除以作觀察。殘留的腫瘤細(xì)胞，特別是在包囊邊緣附近的細(xì)胞，顯示出不同尋常的高頻率細(xì)胞分化特征。而在被切除的活組織切片檢查無(wú)此現(xiàn)象。通過(guò)觀察在免疫組織化學(xué)上用Ber-Ep4標(biāo)記的結(jié)節(jié)證實(shí)了，貝母生物堿提取物誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞分化作用是呈顯著的劑量依賴(lài)關(guān)系的。另外，在六天不接受治療的后續(xù)觀察中，已經(jīng)分化的腫瘤細(xì)胞并未恢復(fù)原狀。
權(quán)利要求
1.一種貝母生物堿提取物在制備治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用，其特征在于該貝母生物堿提取物是通過(guò)下列方法提取的將貝母原料粉碎，用原料3倍量的工業(yè)酒精回流提取3次，每次一個(gè)半小時(shí)，合并提取液過(guò)濾，濃縮得浸膏，浸膏用少量1％的鹽酸溶液捏溶，過(guò)濾，濾液用其1/2量的乙醚萃取3次，收集乙醚萃取液再用氨水堿化至pH為8，用與堿液相同量的氯仿萃取6次，回收溶劑后，得貝母生物堿提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種貝母生物堿提取物在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于其中所述的腫瘤包括基底細(xì)胞癌，髓質(zhì)細(xì)胞瘤、橫紋肌瘤、纖維肉瘤、消化道腫瘤和小細(xì)胞肺癌。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種貝母生物堿提取物在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于其中的所述的治療腫瘤的藥物包括貝母生物堿提取物與藥用輔料組成的口服制劑或注射劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了貝母生物堿提取物在制備治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)和臨床應(yīng)用實(shí)例表明可明顯抑制基底細(xì)胞癌。本發(fā)明將為治療腫瘤開(kāi)辟新的方案，對(duì)醫(yī)藥臨床的人類(lèi)健康有較大的應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1853700SQ20051002558
公開(kāi)日2006年11月1日 申請(qǐng)日期2005年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月29日
發(fā)明者康露, 周劍俠, 范小兵, 沈征武 申請(qǐng)人:上海諾德生物實(shí)業(yè)有限公司