專利名稱：苦荬菜屬醫(yī)藥新用途及其藥物中間體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的技術(shù)領(lǐng)域?qū)籴t(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
菊科(Compositae)苦荬菜屬(Ixeris genus)植物，全世界共有50余種，我國就有20余種，盛產(chǎn)于我國北方；東北、華北和內(nèi)蒙古等地。具有清熱解毒、消炎、止痛之功效。
苦荬菜屬植物(例如抱莖苦荬菜Ixeris sonchifolia(Bge.)Hance；別名為苦碟子、滿天星、秋抱莖苦荬菜Ixeris sonchifolia(Bge.)Hance Var.Serotina(Maxin.)Kitag，為抱莖苦荬菜的變種、苦荬菜Ixeris denticulate(Houtt.)Stebb、山苦荬菜Ixeris chinensis(Thunb.)Nakai，別名小苦賣菜、活血草等)，在我國有悠久的藥用歷史，應(yīng)用于治療闌尾炎、腸炎、頭痛、牙痛等，主要藥理作用有抗腫瘤、抗炎、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜及心血管方面的活性；分述如下①抗腫瘤作用苦荬菜屬中很多植物具有抗腫瘤的作用。Ixerislaciniata在民間作為抗腫瘤草藥使用，畢志明等人對它的化學(xué)成分和藥理活性的研究結(jié)果表明，化合物11β，13-dihydrolactucin acetate有較強(qiáng)的細(xì)胞毒活性。抱莖苦荬菜的甲醇提取物對Ehrlich carcinoma癌細(xì)胞株有抑制活性。韓國學(xué)者發(fā)現(xiàn)Ixeris dentata的甲醇提取物對MG63人骨肉瘤細(xì)胞株有較強(qiáng)的抑制活性。②對心血管系統(tǒng)的藥理作用馮玉書等人證明，抱莖苦荬菜的提取物具有增加冠脈流量，增加心肌營養(yǎng)性血流量，降低心肌耗氧量，改善心肌循環(huán)等作用；對血液系統(tǒng)能顯著抑制血小板聚集功能，明顯增加纖溶酶的活性，而這些作用是防治血栓閉塞性疾病的基礎(chǔ)。抱莖苦荬菜的提取物無論在有氧、不同程度缺氧以及無氧條件下，均能使心肌乳酸含量減少，這將減輕或防止心肌細(xì)胞酸中毒，有利于心肌細(xì)胞功能的恢復(fù)，這是抱莖苦荬菜用于治療心肌梗塞的又一主要原因。③鎮(zhèn)痛作用藥理實(shí)驗(yàn)表明，給雄性小鼠腹腔注射苦碟子注射液后，用熱板法測定痛閾提高百分率，給藥組動物痛閾比對照組有顯著提高，表明苦碟子注射液具有鎮(zhèn)痛作用④鎮(zhèn)靜作用實(shí)驗(yàn)證明，苦碟子注射液具有明顯鎮(zhèn)靜作用，可使小鼠自主活動顯著減少，并能與催眠藥戊巴比妥鈉產(chǎn)生協(xié)同作用，但對中樞興奮劑五甲烯四氮唑和苯甲酸鈉咖啡因未見有明顯的對抗作用。⑤降膽固醇作用韓國學(xué)者發(fā)現(xiàn)苦荬菜(Ixeris dentata)的氯仿提取物具有顯著的降低膽固醇水平的作用。對其進(jìn)行進(jìn)一步的研究后發(fā)現(xiàn)活性成分為三萜及甾醇的混合物α-香樹脂醇，β-香樹脂醇，羽扇豆醇，偽蒲公英甾醇，蒲公英甾醇，β-谷甾醇，豆甾醇等。⑥抗誘變作用韓國學(xué)者把苦荬菜(Ixerisdentata)用甲醇提取后，分別用環(huán)己烷，氯仿，乙酸乙酯，正丁醇依次萃取，然后將萃取各層與含水層一起進(jìn)行抗黃曲霉毒素B(aflatoxin B)所致的誘變實(shí)驗(yàn)。篩選結(jié)果發(fā)現(xiàn)，氯仿層的活性最強(qiáng)，抑制率為74％。
自20世紀(jì)80年代以來，各國學(xué)者對苦荬菜屬植物的化學(xué)成分進(jìn)行了一系列的研究，發(fā)現(xiàn)主要有倍半萜內(nèi)酯類、三萜類及黃酮類、香豆素、甾醇、木脂素、維生素、氨基酸和糖類等200余種化學(xué)成分。
其中開發(fā)成新藥近有抱莖苦賣菜，文獻(xiàn)報道該植物提取物對循環(huán)系統(tǒng)具有增加冠脈流量、改善心肌循環(huán)等作用；對血液系統(tǒng)能顯著抑制血小板聚集作用，明顯增加纖維蛋白溶解酶的活性，經(jīng)多年研究已于20世紀(jì)80年代末開發(fā)成新藥“碟脈靈注射劑”由于臨床應(yīng)用多年，療效確切，于2002年12月1日升為國家標(biāo)準(zhǔn)，改名為“苦碟子注射液”(Kudiezi Zhusheye)批準(zhǔn)文號為《WS-10354(ZD-0354)-2002》標(biāo)準(zhǔn)中發(fā)布其功能主治為活血止痛、清熱祛瘀。用于瘀血閉阻的胸痹、證見、胸悶、心痛、口苦、舌暗紅或存瘀斑等。適用于冠心病、心絞痛見上述病狀者，亦可用腦梗塞者。標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的中間體制法為經(jīng)典的“石硫法”另外三種藥用植物僅有原植物藥用報道和民間應(yīng)用記載及其化學(xué)成分的分離鑒定等報道。總之，至今未發(fā)現(xiàn)苦荬菜屬(除抱莖苦荬菜外)對治療心腦血管病和白血病的的用途。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決現(xiàn)有未發(fā)現(xiàn)苦荬菜屬治療心腦血管和白血病的新用途及其制備方法。
醫(yī)藥新用途1.白血病細(xì)胞K562的活性從苦荬菜屬山苦荬[Ixeris chinensis(Thunb)Nakai]中分離得到木犀草素-7-O-龍膽二糖苷(Luteolin-7-O-gentiobiside)(I)芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(apigenin-7-O-D-glucuronopyranoside)(II)和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(luteolin-7-O-glucuronopyranoside)(III)對人白血病細(xì)胞K562由較強(qiáng)的抑制作用，K562細(xì)胞用含5％小牛胎血清pMRI1640作基質(zhì)培養(yǎng)而獲得，利用MTT法，測定以上三種化合物，結(jié)果如下表。
表2苦荬菜屬中有效成分的抗白血病細(xì)胞K562的活性

2.苦荬菜屬植物提取物的心血管作用(1)苦碟子提取物靜脈給藥抗心肌缺氧作用的研究將72只受試小鼠隨機(jī)分成6組，每組12只雌雄各半，將受試小鼠用烏拉坦(1.2g/kg)腹腔注射麻醉、固定、頸前部手術(shù)暴露并游離氣管，用MS·302多媒體化生物信號記錄分析系統(tǒng)經(jīng)針型電極與小鼠四肢相連，采集標(biāo)II導(dǎo)聯(lián)心電圖，尾靜脈穿刺注射給藥，第1組對照組注射生理鹽水，第2、3、4組為苦碟子提取物高中低劑量組，給藥劑量分別為40mg/kg，20mg/kg，10mg/kg，第5組為苦碟子提取物灌胃給藥組，劑量為20mg/kg，于夾閉氣管前30分鐘灌胃給藥。第6組為碟脈靈注射液靜脈注射組，給藥劑量為1.625mg/kg，各組給藥容積均為0.2ml/10g，給藥速度為0.02ml/s于試驗(yàn)前用0.9％NaCl配制成所需濃度。受試小鼠給藥后放入含有堿石灰的廣口瓶中，用凡士林將瓶口密封，記錄小鼠的死亡時間(min)。試驗(yàn)資料顯著性測定用成對資料的t-test處理，試驗(yàn)結(jié)果如表3所示，在所選擇劑量范圍內(nèi)，苦碟子提取物靜脈注射給藥和口服給藥均明顯延長小鼠存活時間，與對照組比較有顯著和非常顯著差異。
表3苦碟子提取物靜脈注射對小白鼠存活時間(min)的影響(X±SD)

各給藥組與對照組比較*P＜0.05**P＜0.01(2)苦碟子提取物抗心肌缺血作用的研究①對麻醉犬急性心肌缺血的影響取30只雜種犬，體重在11.0-13.0公斤，每組5只雌雄兼用，隨機(jī)分6組，分別為0.9％NaCl對照組，苦碟子提取物靜脈給藥高中低3個劑量組，劑量分別為8.8mg/kg、4.4mg/kg、2.2mg/kg和4.4mg/kg經(jīng)十二指腸給藥組及碟脈靈注射液0.33mg/kg靜脈給藥組。各給藥組均于給藥前用0.9％NaCl配制所需濃度藥液。
受試動物在戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈麻醉下，先剖開一側(cè)股靜脈備給藥用，再行氣管插管，人工呼吸、呼吸頻率為30次/分，呼吸時比為1.5∶1，潮氣量為300ml。動物在右側(cè)臥位人工呼吸下，于左側(cè)第4-5脅間開胸，在距迷走神經(jīng)2cm處，沿迷走神經(jīng)剪開心包壁層做懸床(縫于胸壁)暴露心臟，在冠狀動脈左前降支近1/2處，從冠狀動脈下引線備結(jié)扎用。將心外膜電極縫于心外膜上，經(jīng)波段開關(guān)連于EK10型單道自動心電圖機(jī)上，記錄心外膜電圖[5]，計(jì)算30個導(dǎo)聯(lián)ST移位的總和(∑-ST)及ST移位超過1mV的導(dǎo)聯(lián)數(shù)(N-ST)以結(jié)扎后15分鐘時為給藥前值。各組犬從股靜脈分別滴入相應(yīng)劑量的受試藥物，給藥容積為3ml/kg。給藥速度為2ml/分。同時記錄給藥后30、60、120、180分鐘心外膜電圖，計(jì)算∑ST，N-ST及其變化率；于冠狀動脈結(jié)扎前，結(jié)扎后60分，120分和180分別從股靜脈采血化驗(yàn)肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)活力。給藥后3小時，取下心臟稱重后剪除心房及右室稱左室重、冰凍30-40分鐘，于冠脈結(jié)扎點(diǎn)下、與冠狀溝平行將心室肌切成等厚的5片，將5片心室肌置于37℃1％N-BT染液中、振搖染色15分鐘取出，梗死區(qū)染成淺紅色，非梗死區(qū)為暗紅色，計(jì)算梗死區(qū)占缺血心室、心臟重量的百分比。
試驗(yàn)結(jié)果表明苦碟子提取物靜脈給藥對冠狀動脈結(jié)扎犬心肌缺血有明顯改善作用，表現(xiàn)為1.各給藥組給藥后心外膜電圖ST段位移總和(∑ST)及ST移位超過1mV導(dǎo)聯(lián)數(shù)(N-ST)的變化率與對照組各對應(yīng)時間點(diǎn)上述兩指標(biāo)變化率之間有非常顯著或顯著差異，(詳見表4、5)。2.各給藥組于結(jié)扎冠狀動脈后給藥的不同時間點(diǎn)CK、LDH變化率與對照組相應(yīng)各點(diǎn)CK、LDH變化率之間亦有非常顯著或顯著差異(詳見表6、7)。3.心肌梗死范圍的定量組織學(xué)測定結(jié)果表明各給藥組梗死心肌重量/心室重量百分比、梗死心肌重量/全心重量百分比明顯低于對照組，其間有非常顯著或顯著差異(詳見表8)
表4苦碟子提取物靜脈注射給藥對麻醉開胸犬結(jié)扎冠脈后心外膜電圖S-T段總和(∑ST)影響(mv，X±SD，n＝6)

各給藥組與生理鹽水對照組同時間點(diǎn)給藥前后變化率比較 變化率＝(給藥后值-給藥前值/給藥前值×100％)比*P＜0.05**P＜0.01
表5苦碟子提取物靜脈注射給藥對麻醉開胸犬結(jié)扎冠脈后心外膜電圖N-ST(mv X±SD)的影響

各給藥組與生理鹽水對照組同時間點(diǎn)給藥前后變化率比較 變化率＝(給藥后值-給藥前值/給藥前值×100％)比*P＜0.05**P＜0.01
表6苦碟子提取物靜脈給藥對犬血清肌酸酶CK的影響

與對照細(xì)比較*P＜0.05，**P＜0.01表7苦碟子提取物靜脈給藥對結(jié)扎冠狀動脈犬乳酸脫氧酶的影響


與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01表8苦碟子提取物靜脈注射給藥對結(jié)扎冠狀動脈犬心肌梗死面積(X±SD n＝5)的影響

與對照組比較，*P＜0.05**P＜0.01②對異丙腎上腺素誘發(fā)的大鼠急性心肌缺血的影響將60只大鼠隨機(jī)分組每組10只，分別為模型對照組；秋抱莖苦荬菜提取物靜注給藥高中低劑量組給藥劑量分別為30mg/kg、15mg/kg、7.5mg/kg；15mg/kg灌胃給藥組；陽性對照組為碟脈靈注射液劑量為mg/kg，對照組靜注0.9％NaCl。受試藥物及對照組均用0.9％NaCl配制成所需濃度，給藥容積為10ml/kg，注射速度為2ml/min。
受試動物用烏拉坦腹腔注射麻醉(1.2g/kg)，呈仰臥位固定、用針型電極與光電6511型心電圖機(jī)相連記錄標(biāo)II導(dǎo)聯(lián)與V1導(dǎo)聯(lián)。按上述劑量靜脈給藥后即皮下注射異丙腎上腺素，劑量為2mg/kg。觀察給藥后第5′、10′、20′、30′心電圖中ST段偏移基線的高度。以均值做為衡量心肌損傷程度的觀察指標(biāo)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與顯著性測定。
結(jié)果表明，靜脈注射秋抱莖苦荬菜提取物對異丙腎上腺素皮下注射引起心肌代謝加強(qiáng)導(dǎo)致心肌缺血ST段的偏移有明顯緩解作用。詳見表9。
表9秋抱莖苦荬菜提取物靜脈注射對異丙腎上腺素誘發(fā)心肌缺血的影響(X±SD，n＝10)

各給藥組與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.013.苦賣菜屬植物單體化合物的細(xì)胞毒活性我們對從苦賣菜屬植物中分離得到的22個化合物進(jìn)行了細(xì)胞毒活性的測試，并對構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行了初步探討。
實(shí)驗(yàn)材料及細(xì)胞培養(yǎng)A375(人黑色素瘤細(xì)胞)，L929(小鼠肺上皮細(xì)胞)，HeLa(人宮頸癌細(xì)胞)均來源于美國ATCC(American Tissue Culture Collection)，均用RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，加入10％的胎牛血清，1％的抗生素(10,100U/ml青霉素和10,000μg/ml鏈霉素)，2mM谷氨酰胺，置于4％CO2孵箱內(nèi)培養(yǎng)。樣品從苦賣菜屬植物中提取分離的各個單體化合物抱莖苦荬菜內(nèi)酯A(sonchifolactone A)(1)，抱莖苦荬菜內(nèi)酯B(sonchifolactone B)(2)，抱莖苦荬菜內(nèi)酯C(sonchifolactone C)(3)，抱莖苦荬菜內(nèi)酯D(sonchifolactone D)(4)，抱莖苦荬菜木脂素A(sonchifolignan A)(5)，抱莖苦荬菜木脂素B(sonchifolignan B)(6)，抱莖苦荬菜素(sonchifolinin)(7)，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷乙酯(luteolin-7-O-β-D-glucuronopyranoside ethyl ester)(8)，蒲公英烷-20-烯-3β，16α-二羥基-3-乙酯(taraxastane-20-ene-3β，16α-dihydroxy-3-acetate)(9)，苦荬菜皂苷A(ixeris saponin A)(10)，苦荬菜皂苷B(ixeris saponin B)(11)，苦荬菜皂苷C(ixeris saponin C)(12)，苦荬菜皂苷D(ixeris saponin D)(13)，木犀草素(luteolin)(14)，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(luteolin-7-O-β-D-glucopyranoside)(15)，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(luteolin-7-O-β-D-glucuronopyranoside)(16)，木犀草素-7-O-龍膽二糖苷(luteolin-7-O-gentiobiside)(18)，芹菜素(apigenin)(20)，芹菜素7-O-β-D-葡萄糖苷(apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside)(21)，芹菜素7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(apigenin-7-O-β-D-glucuronopyranoside)(22)，5，7-二羥基-4’-甲氧基黃酮-7-O-蘆丁糖苷(5，7-dihydroxy-4’-methoxy-flavone-7-O-rutinoside)(24)，齊墩果酸(oleanlic acid)(25)，蒲公英甾醇乙酸酯(taraxasterylacetate)(26)。
依次配制濃度為1μg/ml，5μg/ml，20μg/ml，50μg/ml，100μg/ml。噻唑藍(lán)(MTT)北京寶泰克公司；RPMI-1640Gibco公司，美國；胎牛血清(FBS)大連生物試劑廠；青、鏈霉素華北制藥股份公司；胰蛋白酶北方同正公司；谷氨酰胺北京寶泰克公司。
對22種單體化合物進(jìn)行了抗腫瘤活性體外篩選，結(jié)果見表10。
從表中可以看出，苦賣菜屬植物中的各類化合物中，倍半萜內(nèi)酯類(如化合物2)和三萜皂苷類化合物(如化合物11)有較明顯的體外抗腫瘤活性，而黃酮類、木脂素類和三萜皂苷元基本沒有抗腫瘤活性。
在倍半萜內(nèi)酯類化合物中，化合物2的活性最強(qiáng)(IC5011.0μg/ml左右)，對化合物1，2，3，4的結(jié)構(gòu)進(jìn)行比較，推測化合物2是由于其苷元結(jié)構(gòu)中存在α-甲烯基-γ-內(nèi)酯的結(jié)構(gòu)而活性較強(qiáng)。當(dāng)雙鍵被還原后，活性大為降低，IC50值降低為30-40μg/ml(如化合物1，3)。
在三萜皂苷類化合物中，化合物11和12的活性明顯比10和13強(qiáng)。分析它們的結(jié)構(gòu)時發(fā)現(xiàn)，很可能是11和12的結(jié)構(gòu)中在C-28位成酯苷而導(dǎo)致了活性比C-28為游離羥基的皂苷10和13強(qiáng)。
在黃酮類化合物中，除了木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(15)呈中等的細(xì)胞毒性外，其它的化合物包括苷元、單糖苷、二糖苷均沒有活性?；衔?表現(xiàn)出顯著的細(xì)胞毒性，因此，我們利用熒光染色法進(jìn)行了進(jìn)一步的研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)化合物7能夠誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡。DAPI是一種熒光染料，它能與細(xì)胞DNA特異性的結(jié)合，并在一定波長的紫外光的激發(fā)下發(fā)出綠色熒光。將經(jīng)化合物7處理的HeLa細(xì)胞進(jìn)行DAPI染色后，發(fā)現(xiàn)HeLa細(xì)胞皺縮，細(xì)胞核變形，染色質(zhì)凝集，呈典型的凋亡特征；而陰性對照組的細(xì)胞生長狀況良好。
Table 10 Cytotoxic Activity of Natural Products against Tumor Cell Lines in vitro(IC50，μg/ml)

倍半萜內(nèi)酯和酚性化合物中的新化合物表1 Constituents isolated from Ixeris genus

苦賣菜屬提取制備中間體的工藝方法A、藥材浸泡及煎煮(A)將苦賣菜屬原料(藥材)切段，按原料與自來水的重量分?jǐn)?shù)比為1∶9～15向原料中加入自來水，常溫浸泡1～3小時，然后將兩者的混合物加熱至70℃～100℃，保溫1～3小時之后，濾渣取液。
(B)按所述苦賣菜屬原料與自來水的重量分?jǐn)?shù)比為1∶6～10向A步(A)濾出的渣中加入自來水，并將兩者混合物加熱至70℃～100℃，保溫1～2.5小時之后，濾渣取液。
(C)按所述苦賣菜屬原料與自來水的重量分?jǐn)?shù)比為1∶6～8向A步(B)濾出的渣中加入自來水，并將兩者混合物加熱至70℃～100℃，保溫1～1.5小時后，濾渣取液。
(D)或者采用50～95％乙醇和甲醇提取液，回收醇至無醇味或10％含醇量以下。
B、液體濃縮將分別通過所述各A步(A)、(B)、(C)、(D)制取的液體混合一起后減壓濃縮，直至其重量與所述原料重量之比為1∶1～5為止。
C、吸附、洗脫使?jié)饪s后的液體通過經(jīng)活化處理后的大孔樹脂柱，使液體中的總黃酮被樹脂柱吸附，并棄去流出液，再按原料重量的1∶1～3的蒸餾水沖洗樹脂柱，棄去流出液。繼用濃度為10～60％的乙醇清洗樹脂柱，并收集洗脫液。將此洗脫液通過已處理好的聚酰胺柱，并用原料量1～2倍的80％乙醇洗脫，收集流出液和洗脫液。
D、去雜將C中收集的洗脫液，用濃度為95％的乙醇加入其中，直至洗脫液的乙醇濃度為80％，然后，使該混合液通過澄渣板過濾，去雜并收集濾液。
E、成品回收、干燥回收工序D制得濾液中的乙醇，余留物質(zhì)干燥后，即可得到制備中間體的成品。
本發(fā)明實(shí)現(xiàn)后與已有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)1.成本低2.雜質(zhì)含量低3.工藝穩(wěn)定，易于操作，易于實(shí)現(xiàn)4.生產(chǎn)過程對環(huán)境無污染中間體制備實(shí)施例實(shí)施例1(原料為抱莖苦賣菜)A、浸泡及煎煮(A)取切段的苦碟子全草10Kg加入容器中，再向容器中加入自來水150升，常溫浸泡2小時，然后，將兩者的混合物加熱至100℃，保溫2小時。
(B)向A步(A)濾出的渣中加入自來水100升，并將兩者混合物加熱至95℃，保溫1小時之后，濾渣取液。
(C)向A步(B)濾出的渣中加入自來水80升，并將兩者混合物加熱至95℃，保溫1小時之后，濾渣取液。
B、液體濃縮將分別通過上述各步(A)、(B)、(C)制取的液體，混合一起后，減壓濃縮，直至其濃縮至20升為止。
C、吸附、洗脫使?jié)饪s后的液體通過經(jīng)活化處理后的大孔樹脂柱，使液體中的總黃酮被樹脂柱吸附，并棄去流出液，再用0.5升蒸餾水沖洗樹脂柱，棄去流出液，繼用濃度60％的乙醇清洗樹脂柱，并收集洗脫液。將此洗脫液通過已處理好的聚酰胺柱，并用原料量2倍的80％乙醇洗脫，收集流出液和洗脫液。
D、去雜將C中收集的洗脫液，用濃度為95％的乙醇加入其中，直至洗脫液的乙醇濃度為80％，然后使該混合液通過澄渣板過濾，去雜并收集濾液。
E、成品回收、干燥回收工序D制得濾液中的乙醇，余留物質(zhì)干燥后，即可得到制備中間體。
實(shí)施例2(原料為秋抱莖苦荬菜)A、浸泡及煎煮(A)取切段的秋抱莖苦荬菜全草10Kg加入容器中，再向容器中加入自來水120升，常溫浸泡2小時，然后，將兩者的混合物加熱至100℃，保溫2小時。
(B)向A步(A)濾出的渣中加入自來水100升，并將兩者混合物加熱至90℃，保溫1.5小時之后，濾渣取液。
(C)向A步(B)濾出的渣中加入自來水80升，并將兩者混合物加熱至85℃，保溫1小時之后，濾渣取液。
B、液體濃縮將分別通過上述各步(A)、(B)、(C)制取的液體，混合一起后，減壓濃縮，直至其濃縮至20升為止。
C、吸附、洗脫使?jié)饪s后的液體通過經(jīng)活化處理后的大孔樹脂柱，使液體中的總黃酮被樹脂柱吸附，并棄去流出液，再用0.5升蒸餾水沖洗樹脂柱，棄去流出液，繼用濃度50％的乙醇清洗樹脂柱，并收集洗脫液。將此洗脫液通過已處理好的聚酰胺柱，并用原料量2倍的70％乙醇洗脫，收集流出液和洗脫液。
D、去雜將C中收集的洗脫液，用濃度為95％的乙醇加入其中，直至洗脫液的乙醇濃度為80％，然后使該混合液通過澄渣板過濾，去雜并收集濾液。
E、成品回收、干燥回收工序D制得濾液中的乙醇，余留物質(zhì)干燥后，即可得到制備中間體。
實(shí)施例3(原料為苦荬菜)A、浸泡及煎煮(A)取切段的苦荬菜全草10Kg加入容器中，再向容器中加入自來水150升，常溫浸泡2小時，然后，將兩者的混合物加熱至95℃，保溫1.5小時。
(B)向A步(A)濾出的渣中加入自來水100升，并將兩者混合物加熱至90℃，保溫2小時之后，濾渣取液。
(C)向A步(B)濾出的渣中加入自來水60升，并將兩者混合物加熱至80℃，保溫1.5小時之后，濾渣取液。
B、液體濃縮將分別通過上述各步(A)、(B)、(C)制取的液體，混合一起后，減壓濃縮，直至其濃縮至20升為止。
C、吸附、洗脫使?jié)饪s后的液體通過經(jīng)活化處理后的大孔樹脂柱，使液體中的總黃酮被樹脂柱吸附，并棄去流出液，再用0.5升蒸餾水沖洗樹脂柱，棄去流出液，繼用濃度55％的乙醇清洗樹脂柱，并收集洗脫液。
D、去雜將C中收集的洗脫液，用濃度為95％的乙醇加入其中，直至洗脫液的乙醇濃度為80％，然后使該混合液通過澄渣板過濾，去雜并收集濾液。
E、成品回收、干燥回收工序D制得濾液中的乙醇，余留物質(zhì)干燥后，即可得到制備中間體。
實(shí)施例4(原料為山苦荬菜)A、浸泡及煎煮(A)取切段的山苦荬菜全草10Kg加入容器中，再向容器中加入自來水100升，常溫浸泡2.5小時，然后，將兩者的混合物加熱至100℃，保溫2小時。
(B)向A步(A)濾出的渣中加入自來水100升，并將兩者混合物加熱至95℃，保溫2小時之后，濾渣取液。
(C)向A步(B)濾出的渣中加入自來水60升，并將兩者混合物加熱至80℃，保溫1.5小時之后，濾渣取液。
B、液體濃縮將分別通過上述各步(A)、(B)、(C)制取的液體，混合一起后，減壓濃縮，直至其濃縮至20升為止。
C、吸附、洗脫使?jié)饪s后的液體通過經(jīng)活化處理后的大孔樹脂柱，使液體中的總黃酮被樹脂柱吸附，并棄去流出液，再用0.5升蒸餾水沖洗樹脂柱，棄去流出液，繼用濃度50％的乙醇清洗樹脂柱，并收集洗脫液。
D、去雜將C中收集的洗脫液，用濃度為95％的乙醇加入其中，直至洗脫液的乙醇濃度為80％，然后使該混合液通過澄渣板過濾，去雜并收集濾液。
E、成品回收、干燥回收工序D制得濾液中的乙醇，余留物質(zhì)干燥后，即可得到制備中間體。
本發(fā)明藥物的劑型1.注射用苦碟子(凍干)抱莖苦荬菜提取物中間體50～200g(相當(dāng)總黃酮、總內(nèi)酯總含量標(biāo)示量90～110％)甘露醇 適量作支持劑制成凍干粉針劑1000支制法在無菌條件下(或超凈化工作臺內(nèi)操作)將處方量提取物和支持劑，加注射用水，加熱溶解，加注射用活性炭，加熱過濾，-40℃分裝1000支，冷凍后，升溫，凍干為止。
性狀本品為灰黃白色無定形粉末或疏松固體狀物，味苦澀，有一定引濕性。
功能與主治活血止痛、清熱祛瘀，用于冠心病、心絞痛證見胸悶、心痛、口苦、舌暗紅活存瘀斑等，亦可用與腦梗塞者。
2.抱莖苦荬菜輸液劑抱莖苦荬菜提取物中間體50～200g(相當(dāng)標(biāo)示量的90～110％)葡萄糖等賦形劑適量制成PVP塑膠袋或輸液瓶1000支制法將出方量中間體和附形劑、溶劑、加注射用水、加熱溶解、加注射用活性炭、加熱、濾過、分裝即得。
性狀本品為淺黃淡色澄明液體，味苦澀。
功能與主治同實(shí)施例1。
3.抗腦塞片苦荬菜提取的中間體80～400g(含內(nèi)酯、酚性物含量占50％以上)賦形劑是量(乳糖、淀粉)制成1000片制法將處方量中間體(提取物)與賦形劑混勻，濕法或一步制粒，若濕法制粒在60～80℃干燥，將顆粒整粒后加適量潤滑劑壓制成1000片，色衣或薄膜色衣即得。
性狀剝?nèi)ヌ且禄虮∧ず鬄樽攸S色粉末，味苦，澀。功能與主治同實(shí)例1、2。另外可適用于慢性闌尾炎的消炎、止痛。
4.白血平膠囊劑山苦荬提取的中間體80～400g(含內(nèi)酯總黃酮在50％以上，為標(biāo)示量90～110％)賦形劑適量制成1000粒制法將處方量中間體混勻獲制成顆粒，裝入膠囊中即得。
性狀本品內(nèi)容物為黃褐色無定形或疏松固體顆粒狀物，味苦澀，有引濕性。功能與主治清熱、解毒、消腫止痛、散瘀。用于冠心病、心絞痛和腦梗塞證見胸悶、手肢麻木及白血病的輔助治療等。
5.心腦舒平和劑(口服液)秋抱莖苦荬菜提取的中間體80～400g賦形劑(蜂蜜、乳糖等)適量制成1000支制法將處方量中間體和賦形劑，加適量水，加熱溶解，加入單糖漿和蜂蜜、苯甲酸等防腐劑，再加水適量，濾過分裝至10000ml，冷藏，濾過，分裝于10ml安瓶中或50ml安瓶中，以100℃無菌30分鐘即得。
功能與主治同實(shí)施例16.苦碟子顆粒劑(無糖型)抱莖苦荬菜提取的中間體80～400g(含內(nèi)酯與總黃酮量在50％以上，標(biāo)示量的90～110％)賦形劑適量制成1000袋制法將處方量提取物的中間體與賦形劑混勻，濕法制?；蛞徊街屏?，若濕法制粒時于60～80℃干燥，將干顆粒進(jìn)行整粒處理后，分裝于1000袋即得。
性狀本品為黃淺棕白色疏松狀顆粒味苦、澀。
功能與主治同實(shí)施例1。
含量測定方法和指標(biāo)
(1)以苦賣菜屬中指標(biāo)性成分腺苷及木犀草素7-O-糖苷為對照品，建立了植物提取物的薄層色譜鑒別方法。
(2)采用HPLC法對本屬藥材提取物中間體的有效成份抱莖苦荬菜內(nèi)酯A進(jìn)行含量測定，并以比色法測定了制劑的總黃酮含量，中間體中有效成分加和含量80％以上可測，提取物中間體抱莖苦荬菜內(nèi)酯A的含量不得少于1％。
(3)以木犀草素7-O-糖苷為參照物，制定了藥材、中間體的指紋圖譜。所制定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)保證了藥品質(zhì)量的可控性和重現(xiàn)性。
權(quán)利要求
1.苦荬菜屬醫(yī)藥新用途，其特征在于植物提取物，含倍半萜內(nèi)酯及酚性物(含黃酮)，具有對循環(huán)系統(tǒng)增加冠脈流量、改善心肌循環(huán)、抑制血小板聚集作用、明顯增加纖維蛋白的溶解酶的活性、抗腦梗塞等作用。
2.苦荬菜屬中的九種新化合物的結(jié)構(gòu)如下
3.苦荬菜屬藥物中間體的制備方法，其特征在于中間體的制備采用水或醇類提取，通過大孔樹脂和聚酰胺串聯(lián)柱色譜方法制備。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的苦荬菜屬藥物中間體的制備方法，其特征在于A、藥材浸泡及煎煮(A)將苦賣菜屬原料(藥材)切段，按原料與自來水的重量分?jǐn)?shù)比為1∶9～15向原料中加入自來水，常溫浸泡1～3小時，然后將兩者的混合物加熱至70℃～100℃，保溫1～3小時之后，濾渣取液。(B)按所述苦賣菜屬原料與自來水的重量分?jǐn)?shù)比為1∶6～10向A步(A)濾出的渣中加入自來水，并將兩者混合物加熱至70℃～100℃，保溫1～2.5小時之后，濾渣取液。(C)按所述苦賣菜屬原料與自來水的重量分?jǐn)?shù)比為1∶6～8向A步(B)濾出的渣中加入自來水，并將兩者混合物加熱至70℃～100℃，保溫1～1.5小時后，濾渣取液。(D)或者采用50～95％乙醇和甲醇提取液，回收醇至無醇味或10％含醇量以下。B、液體濃縮將分別通過所述各A步(A)、(B)、(C)、(D)制取的液體混合一起后減壓濃縮，直至其重量與所述原料重量之比為1∶1～5為止。C、吸附、洗脫使?jié)饪s后的液體通過經(jīng)活化處理后的大孔樹脂柱，使液體中的總黃酮被樹脂柱吸附，并棄去流出液，再按原料重量的1∶1～3的蒸餾水沖洗樹脂柱，棄去流出液。繼用濃度為10～60％的乙醇清洗樹脂柱，并收集洗脫液。將此洗脫液通過已處理好的聚酰胺柱，并用原料量1～2倍的80％乙醇洗脫，收集流出液和洗脫液。D、去雜將C中收集的洗脫液，用濃度為95％的乙醇加入其中，直至洗脫液的乙醇濃度為80％，然后，使該混合液通過澄渣板過濾，去雜并收集濾液。
全文摘要
苦荬菜屬醫(yī)藥新用途及其藥物中間體的制備方法屬醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域。本發(fā)明解決現(xiàn)有未發(fā)現(xiàn)苦荬菜屬治療心腦血管和白血病的新用途及其制備方法?？噍げ藢籴t(yī)藥新用途的要點(diǎn)在于植物提取物，含倍半萜內(nèi)酯及酚性物(含黃酮)，具有對循環(huán)系統(tǒng)增加冠脈流量、改善心肌循環(huán)、抑制血小板聚集作用、明顯增加纖維蛋白的溶解酶的活性、抗腦梗塞等作用。其制備方法的要點(diǎn)在于中間體的制備采用水或醇類提取，通過大孔樹脂和聚酰胺串聯(lián)柱色譜方法制備，其中間體的總黃酮、總內(nèi)酯的加和含量在60－95％。
文檔編號A61P7/02GK1654040SQ20041002112
公開日2005年8月17日 申請日期2004年2月9日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月9日
發(fā)明者徐綏緒, 宋少江, 封錫志, 曹穎林, 路金才, 徐琲琲, 鄒大光, 張國剛, 陳兆國, 張梅 申請人:徐綏緒, 宋少江, 江永忠, 李仁 , 魏振霖