一種根莖類蔬菜專用的有機復(fù)合生物肥的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種根莖類蔬菜專用的有機復(fù)合生物肥，其通過將粉碎的秸稈和牛糞作為固體有機物料，再添加5‰比例的具有特定腐熟功效的有機物料腐熟劑并加適量的水，與有機物料混合后，保持含水量為60％左右，自然室外溫度下發(fā)酵5?10天腐熟形成初肥。再添加適當比例的各類營養(yǎng)元素與發(fā)酵物料混合均勻后，添加4‰比例的根莖類蔬菜專用的促生長復(fù)合菌劑均勻混合后獲得的生物肥料。本發(fā)明解決了單純施用化肥、普通有機肥、農(nóng)家肥以及純微生物菌肥所存在的種種弊端，并充分結(jié)合了根莖類蔬菜各個時期的生長特點及對養(yǎng)分的需求，注意調(diào)節(jié)其營養(yǎng)生長與生殖生長的矛盾，是一種尤其適用于根莖類蔬菜生長、高效、優(yōu)質(zhì)的有機復(fù)合生物肥。在根莖類蔬菜生產(chǎn)種植方面具有較好的應(yīng)用前景。
【專利說明】
-種根莖類蔬菜專用的有機復(fù)合生物肥的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種有機復(fù)合生物肥及其制備方法，尤其適用于根莖類蔬菜，屬于農(nóng) 業(yè)生物有機肥制備的技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前我國化肥年使用量在一億=千萬噸左右，廣大農(nóng)民一直W來都是使用化肥， 然而長期使用化肥產(chǎn)生的弊端隨之而來，±地板結(jié)、化學元素殘留、環(huán)境污染等等一系列問 題浮出水面?；室呀?jīng)不能滿足可持續(xù)發(fā)展的需要，更不能成為綠色農(nóng)業(yè)的支柱，各國都在 尋找對策。生物有機肥就此而誕生，成為化肥的第二次革命。生物有機肥是指特定功能微生 物與主要W動植物殘體(如畜禽糞便、農(nóng)作物賴桿等)為來源并經(jīng)無害化處理、腐熟的有機 物料復(fù)合而成的一類兼具微生物肥料和有機肥效應(yīng)的肥料。
[0003] 而根莖類蔬菜是指W富含碳水化合物的地下器官供食用的一類蔬菜作物，包括蘿 h姜、蓮截、胡蘿h山藥等。根莖類蔬菜植株在各生長期對營養(yǎng)元素的吸收，肉質(zhì)根生長盛 期吸收量最大，幼苗期和連座期是吸收根和葉叢生長時期，需氮比憐、鐘多，肉質(zhì)根生長盛 期，憐、鐘需要量增多，尤其W鐘最多。根莖類蔬菜生長前期用氮肥很重要，當?shù)毓?yīng)濃度 前期高后期底時，生長正常良好，反之，則產(chǎn)量下降，出現(xiàn)腐爛。缺氮時幼苗細弱，肉質(zhì)根生 長不良，但氮過多易徒長影響肉質(zhì)根膨大。根莖類蔬菜對憐的吸收利用能較強，只有當±壤 中有效憐含量低于IOPPM時才表現(xiàn)出明顯的缺憐癥狀，其苗生長細胞弱，肉質(zhì)根短小。根莖 類蔬菜缺乏中微量元素易出現(xiàn)褐色屯、腐，病木栓化嚴重，因此要適當?shù)难a充微量元素。單純 施用化肥不能夠滿足根莖類蔬菜的營養(yǎng)需求，因此需要增施生物有機肥為其補充養(yǎng)分。要 解決上述問題就要改變現(xiàn)有的生產(chǎn)模式，從而使養(yǎng)分釋放符合根莖類蔬菜養(yǎng)分吸收要求。 隨著科學的發(fā)展，生物有機肥在農(nóng)業(yè)中的作用漸漸顯露出來。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所述的根莖類蔬菜專用的生物有機肥是指利用微生物技術(shù)，選配具有特定 腐熟功能的菌種制成菌劑，用此菌劑將固體有機物料發(fā)酵成初肥，再按適宜的比例添加各 類營養(yǎng)元素，再配W根莖類蔬菜專用促生長復(fù)合菌劑所制成的肥料。本發(fā)明產(chǎn)品充分利用 了具有腐熟功能菌種的特性，將各類廢棄的固體有機物料發(fā)酵腐熟成肥料，變廢為寶，節(jié)省 資源，大大減少了環(huán)境污染;又添加根莖類蔬菜專用的促生長菌劑，此促生長復(fù)合菌劑是經(jīng) 查閱大量的資料，進行研究總結(jié)，根據(jù)實際要求選擇幾種針對根莖類蔬菜有特殊功效的有 益微生物，然后通過實際反復(fù)實驗，最后確定各微生物的最佳比例，保證果樹各階段的營養(yǎng) 需求。通過各菌種之間的相互作用，起到刺激植物生長、緩解±地板結(jié)、改良±壤生態(tài)環(huán) 境、防病抗病等作用，從而達到增產(chǎn)、高產(chǎn)的目的。本發(fā)明解決了單純施用化肥、普通有機 月己、農(nóng)家肥W及純微生物菌肥所存在的種種弊端。
[0005] 本發(fā)明產(chǎn)品所選用腐熟菌劑，其采用枯草芽抱桿菌（Baci Ilus SUbtiliS) CICC10088,米曲霉（Aspergillus nige;r)CICC2436,白腐菌（Phanerochaete C虹ysospo;rium)ACCC30414、里氏木霉(Trichoderma reesei)ACCC30449等具有特殊腐熟功 效的菌種，按適當?shù)谋壤龔?fù)合發(fā)酵而成的微生物菌劑。所選用各菌種均能夠產(chǎn)生纖維素酶、 木質(zhì)素酶、半纖維素酶、蠟質(zhì)素酶、果膠酶等多種生物酶，通過中溫菌和耐高溫菌的協(xié)同作 用，快速將各類廢棄的有機物料發(fā)酵腐熟成肥料，變廢為寶，節(jié)省資源，大大減少了環(huán)境污 染。
[0006] 本發(fā)明所選用根莖類蔬菜專用的促生長復(fù)合菌劑，其含有大量的對根莖類生長發(fā) 育有特殊功效的有益微生物，其采用枯草芽抱桿菌(Bacillus SUbtilisMCCC 02973、巨大 芽抱桿菌（Bacillus megateriunOACCC 10010、褐色球形固氮菌（Azotobacter C虹OOCOC州m)CGMCCl. 142、膠質(zhì)芽抱桿菌（Bacillus mucilaginosus)CGMCC 1.153、地衣芽 抱桿菌(BaciIlus IicheniformiS)ACCC02936等菌種發(fā)酵液混合后作為混合菌劑，經(jīng)再次 發(fā)酵而制備的微生物復(fù)合菌劑。本發(fā)明選取各菌種是經(jīng)查閱大量的文獻資料，進行研究總 結(jié)，根據(jù)實際要求選擇幾種針對根莖類蔬菜生長發(fā)育有特殊功效的有益微生物，然后通過 實際反復(fù)實驗，最后確定各微生物的最佳比例，從而保證根莖類蔬菜各階段的營養(yǎng)需求。
[0007] 具體的本發(fā)明所述根莖類蔬菜專用的有機復(fù)合生物肥的制備方法，該方法包括如 下步驟：
[0008] (一)有機物料腐熟劑的制備
[0009] 將菌種數(shù)量分別達到IO8個/mLW上的枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilis) CICC10088,米曲霉（Aspergillus nige;r)CICC2436,白腐菌（Phanerochaete chrysospo;rium)ACCC30414、里氏木霉（Trichoderma reesei)ACCC30449的菌種發(fā)酵液按 1.5~2.0:0.8~1.3:0.8~1.3:0.8~1.3的體積比混合均勻后，接種于盛有復(fù)合菌劑培養(yǎng) 基A的發(fā)酵罐中，接種量為復(fù)合菌劑培養(yǎng)基A總體積的5%，3(TC下培養(yǎng)4~7天，使發(fā)酵液中 總菌數(shù)達到IO8個/mL,即得到有機物料腐熟劑；
[0010] 所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基A配方為：玉米面0.5~1.5g/L、玉米賴桿粉15~17g/L、教皮 0.2~0.4g/L、豆餅粉0.2~0.4g/L、Vogel' S母液4mL/100mL，抑值6.0~8.0;
[0011] 步驟(一)的具體制備過程為：
[001 ^ 1.菌種活化:將所述各菌種接于斜面培養(yǎng)基上;枯草芽抱桿菌28~32 °C，pH為7.2 ~7.4,培養(yǎng)時間為1~3天;米曲霉培養(yǎng)溫度25~28°C，抑為6.0~6.5,培養(yǎng)時間為4~7天； 白腐菌培養(yǎng)溫度25~28°C，培養(yǎng)時間為4~7天；
[001引2.-級菌種培養(yǎng):將所述菌種分別接種于盛有液體培養(yǎng)基的50mL錐形瓶中，培養(yǎng) 基pH為6.0~8.0，錐形瓶放入搖床振蕩培養(yǎng)，溫度為30°C，振蕩24~48h;采用血球計數(shù)板計 數(shù)，菌液中菌種數(shù)量分別達到IO8個/mL;
[0014] 3.二級發(fā)酵:將所述菌種分別接種于盛有液體培養(yǎng)基的1000 mL錐形瓶中，培養(yǎng)基 pH6.0~8.0，放入搖床振蕩，溫度為30°C，振蕩48~72h;從而獲得菌種數(shù)量分別達到IO8個/ HiL W上的枯草芽抱桿菌（Baci Ilus subtil is )CICC10088,米曲霉（Aspergi Ilus niger) CICC2436，白腐菌（Phanerochaete ch;rysospo;rium)ACCC30414、里氏木霉（Trichoderma reesei)ACCC30449。
[0015] 所述斜面培養(yǎng)基配方為：
[0016] 1.枯草芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為:牛肉浸液1.化，蛋白腺lOg，化C15.Og, 瓊脂20.0-20.5g，pH7.2-7.4，牛肉浸液的制備：瘦牛肉洗凈，切碎，稱取550g浸泡于1375mL 水中，浸泡一夜，過濾，過濾分裝后0.化奸/cm2 40min備用。
[0017] 2.米曲霉采用的斜面培養(yǎng)基配方為：5 OBe麥芽汁瓊脂，5 OBe麥芽汁1.化，瓊脂 15.Og,自然抑。
[0018] 3.白腐菌的斜面培養(yǎng)基配方為:PDA培養(yǎng)基，取去皮的馬鈴馨200克，切成小塊，加 水1000毫升煮沸30分鐘濾去馬鈴馨塊，將濾液補足至1000毫升，加葡萄糖20克，瓊脂15克溶 化后分裝，15磅滅菌30分鐘；自然抑。
[0019] 4.里氏木霉的斜面培養(yǎng)基配方:同白腐菌。
[0020] 所述液體培養(yǎng)基為斜面培養(yǎng)基不加瓊脂即可。
[0021] (二)混拌、發(fā)酵
[0022] 將步驟(一）制備好的有機物料腐熟劑按發(fā)酵有機物料總質(zhì)量的5%。比例混合，再 兌入適量的水，使總水分控制在60 %左右，在發(fā)酵池經(jīng)過5-10天發(fā)酵，即制得初肥；
[0023] 所述發(fā)酵具體為:將混合攬拌均勻的發(fā)酵有機物料放進發(fā)酵設(shè)施，壓實填滿排去 空氣，發(fā)酵池頂部覆蓋一層塑料薄膜，上蓋密封發(fā)酵、適時翻煤，翻堆時補充水分，將總水分 控制在60%左右，原料手握成團，指縫有水但不滴，而松手即散為好。
[0024] 在優(yōu)選的技術(shù)方案中，步驟(二）的發(fā)酵時間是指:一般夏天4-5天，春秋6-7天，冬 季10天。
[0025] (S)深加工
[0026] 將初肥進行粉碎、烘干，按初肥質(zhì)量百分比，具體添加如下營養(yǎng)元素：
[0027] 氮3.0-5.0%、憐0.5-2.5%、鐘4.0-6.0%;巧0.5 ~1.5%、儀 0.5 ~1.5%;棚0.01 ~0.05%，鋒0.01~0.05% ;腐植酸類肥料5.0~10.0% ;
[00%]優(yōu)選情況下，添加營養(yǎng)元素的比例為：
[0029] a.大量元素(氮、憐、鐘)的添加比例:氮3.0%、憐2.0%、鐘6.0%;
[0030] b.中量元素添加比例:巧0.6%、儀0.5%;
[0031] C.微量元素的添加比例:棚0.03%，鋒0.02% ;
[0032] d.腐植酸類肥料的添加比例:5.0%。
[0033] (四）根莖類蔬菜專用促生長復(fù)合菌劑的制備
[0034] 將菌種數(shù)量分別達到108個/1111^^上的枯草芽抱桿菌(8日(3；[11118 311131:;[113)4〔〔0 02973、巨大芽抱桿菌（BaciIlus megaterium)ACCC 10010、褐色球形固氮菌(Azotobacter chroococcunOCGMCC 1.142、膠質(zhì)芽抱桿菌（BaciIlus muciIaginosus)CGMCC 1.153、地衣 芽抱桿菌（Bacillus licheniformis)ACCC02936的菌種發(fā)酵液，按（10~20%): (20~ 30 % ): (10~20 % ): (20~30 % ): (10~20 % )的比例混合均勻后作為混合菌劑，接種于盛有 復(fù)合菌劑培養(yǎng)基B的發(fā)酵罐中，接種量為復(fù)合菌劑培養(yǎng)基B總體積的5%，復(fù)合菌劑培養(yǎng)基B 的抑6.5~7.5，30°C下培養(yǎng)4~7天，使發(fā)酵液中總菌數(shù)達到6~10 X IO8個/mL,即得到根莖 類蔬菜專用微生物復(fù)合菌劑，pH為6.8，總有效活菌數(shù)為9 X IO8個/mL;
[00巧]所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基B的配方為：玉米粉15~ISg/lOOmU豆粗粉5~8g/100mL、酵 母膏0.1 ~0.2g/100血、K出P〇4 0.2~2g/100mL、K2HP〇4 0.5~2g/100mL、MgS〇4.7出0 0.001 ~0.02g/100mL、NaCl 0.5~0.8g/100mL、（NH4)2S04 0.0 Ol~0.0 lg/lOOmL，其余為蒸饋水；
[0036] 所述步驟(四）的具體過程如下：
[0037] 1.接種:將所述各菌種(膠質(zhì)芽抱桿菌、地衣芽抱桿菌、褐色球形固氮菌、巨大芽抱 桿菌、枯草芽抱桿菌)分別接于斜面培養(yǎng)基上;膠質(zhì)芽抱桿菌(鐘細菌)培養(yǎng)溫度25~35°C， 抑為7.5~8.0，培養(yǎng)時間為5天;地衣芽抱桿菌培養(yǎng)溫度25~30°C，抑為7.0~8.0，培養(yǎng)時間 為5天;褐色球形固氮菌培養(yǎng)溫度為25~30 °C，pH為7.0-7.5，培養(yǎng)時間為3~5天；巨大芽抱 桿菌為27~37°C，pH為6.5~7.5，培養(yǎng)時間為4天;枯草芽抱桿菌培養(yǎng)溫度27~37°C，pH為 6.5~7.5，培養(yǎng)時間為4天；
[0038] 2.-級菌種培養(yǎng):將所述步驟1制備的菌種分別按接種環(huán)一環(huán)的量接種于盛有相 應(yīng)液體培養(yǎng)基的50mL錐形瓶中，培養(yǎng)基pH為6.5~7.5，錐形瓶放入搖床振蕩，溫度為30°C， 振蕩24~4她;采用血球計數(shù)板計數(shù)，菌液中菌種數(shù)量分別達到IO8個/血；
[0039] 3.二級發(fā)酵:將所述步驟2制備的菌種分別按5%接種于盛有液體培養(yǎng)基的1000 mL 錐形瓶中，培養(yǎng)基抑6.5~7.5，放入搖床振蕩，溫度為30°C，振蕩48~72h;使菌種數(shù)量分別 達到IO8個/mLW上，從而制得菌種數(shù)量分別達到IO8個/mLW上的枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)ACCC 02973、巨大芽抱桿菌（Bacillus megaterium)ACCC 10010、地衣芽抱桿菌 (Bacillus IicheniformiS)ACCC02936、褐色球形固氮菌（Azotobacter chroococcum) CGMCCl. 142、膠質(zhì)芽抱桿菌(Bacillus mucilaginosus)CGMCC 1.153的菌種發(fā)酵液。
[0040] 所述根莖類蔬菜微生物復(fù)合菌劑制備過程中用到的斜面培養(yǎng)基配方為：
[0041 ] 1.膠質(zhì)芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為:K出K)4 0.06g、MgS化? 7出0 0.05g、
[0042] CaS〇4 ?甜2〇 0.004g、蛋白腺5g、玉米漿（50%干重）2.5g、乳糖 15g、化Cl 4g、蒸饋 水lOOOmL、瓊脂25g、抑 7.1;
[0043] 2.地衣芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為：
[0044] 蛋白腺10.Og,牛肉浸取物3.Og,氯化鋼5.Og,、瓊脂15g、蒸饋水lOOOmL、抑7.0;
[0045] 3.巨大芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為：牛肉膏3g、蛋白腺5g、瓊脂15g、化Cl 5邑、蒸饋水lOOOmL、抑7.0;
[0046] 4.枯草芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為:牛肉膏l(xiāng)Og、蛋白腺10g、NaCl 5g、葡萄 糖lOg，瓊脂15g，蒸饋水lOOOmL，抑7.0;
[0047] 5.褐色球形固氮菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為:K出P〇4 0.2g、K2HP〇4 0.8g、MgS〇4 ? 7出00.2g、CaS〇4 ? 2此0 0.1g、Na2Mo〇4 ? 2出0微量、酵母膏0.5g、甘露醇20gJeCl3微量、瓊脂 15邑、蒸饋水lOOOmL、抑7.2;
[0048] 所述液體培養(yǎng)基配方為斜面培養(yǎng)基不加瓊脂制得。
[0049] (五）按步驟(S)深加工所獲得的發(fā)酵物料總質(zhì)量的3~5%。比例添加步驟（四）獲 得的根莖類蔬菜專用的促生長復(fù)合菌劑獲得終產(chǎn)品，將物料混合均勻后，經(jīng)造粒機造?；?成粉，檢測合格后，包裝入庫。
[0050] 對于上述技術(shù)方案，在優(yōu)選的情況下，步驟(一)所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基A配方為：玉 米面0.5g/L、玉米賴桿粉 15g/L、教皮0.25g/L、豆餅粉0.25g/L、Vogel' S 母液4mL/100mL，抑 7.0。
[0051] 對于上述技術(shù)方案，在優(yōu)選的情況下，步驟（一）所述枯草芽抱桿菌（Bacillus subtil is )CICC10088,米曲霉（Aspergi Ilus nige;r)CICC2436，白腐菌（Phanerochaete C虹ysospo;rium)ACCC30414、里氏木霉(Trichoderma reesei)ACCC30449的菌種發(fā)酵液按2: 1:1:1的比例混合均勻。
[0052] 對于上述技術(shù)方案，在優(yōu)選的情況下，步驟(二)所述發(fā)酵有機物料為粉碎的玉米 賴桿與動物糞便按1.0 ~2.0:0.4~1.4質(zhì)量比混合，所述動物糞便通常為雞糞或牛糞。
[0053] 對于上述技術(shù)方案，在優(yōu)選的情況下，步驟(=)所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基B的配方為： 玉米粉 16g/100mL、豆粗粉7g/100mL、酵母膏0 . Ig/lOOmUK出P〇4 lg/100mL、K2冊〇4 Ig/ 100血、MgS〇4.7出0 O.Olg/lOOmL、化Cl 0.6g/100血、（NH4)2S04 O.Olg/100血，其余為蒸饋 水。
[0054] 本發(fā)明的技術(shù)方案是經(jīng)過近幾年的不懈努力，結(jié)合根莖類蔬菜各個時期的生長特 點及對養(yǎng)分的需求，注意調(diào)節(jié)其營養(yǎng)生長與生殖生長的矛盾，最終研制出一種高效優(yōu)質(zhì)的 有機復(fù)合生物肥。其綜合運用了微生物技術(shù)、化肥工業(yè)和農(nóng)業(yè)技術(shù)等最新成果，優(yōu)先制備了 一種高效的富含有機質(zhì)、N ? P ? K營養(yǎng)元素和某些微量元素、植物生長調(diào)節(jié)劑等物質(zhì)有機結(jié) 合起來，由特定工藝最終形成了W有機質(zhì)為主體的營養(yǎng)合理、N ?P ? K比例適當?shù)念w粒狀營 養(yǎng)源。該種肥料不僅具有高利用率、肥效期長的優(yōu)點，而且具有改良±壤、提高農(nóng)作物品質(zhì)， 增強作物抗逆性，增加產(chǎn)量，減少污染，刺激作物生長發(fā)育等特點，省時省工，具有良好的社 會效益和經(jīng)濟效益。
[0化日]有益效果
[0056] 本發(fā)明所述的根莖類蔬菜專用的有機復(fù)合生物肥是選用具有特定具有腐熟功能 的菌種制成菌劑，用此菌劑將有機固體物料發(fā)酵腐熟成初肥，再按適宜的比例添加大量元 素(氮、憐、鐘）、中量元素、微量元素及其他特殊物質(zhì)，再配W功效相應(yīng)的促進根莖類蔬菜生 長的菌劑及其他特殊物質(zhì)所制成的肥料。腐熟劑中含有大量的枯草芽抱桿菌、米曲霉、里氏 木霉、白腐菌等，能夠產(chǎn)生纖維素酶、木質(zhì)素酶、半纖維素酶、蠟質(zhì)素酶、果膠酶等多種生物 酶，通過中溫菌和耐高溫菌的協(xié)同作用，快速將各類廢棄的固體有機物料發(fā)酵腐熟成肥料， 變廢為寶，節(jié)省資源，大大減少了環(huán)境污染;又添加各類營養(yǎng)元素及根莖類蔬菜專用的促生 長復(fù)合菌劑，通過對根莖類蔬菜有特殊功效的有益微生物枯草芽抱桿菌、地衣芽抱桿菌、巨 大芽抱桿菌、膠質(zhì)芽抱桿菌等各菌種之間的相互作用，起到刺激植物生長、緩解±地板結(jié)、 改良±壤生態(tài)環(huán)境、從而達到增產(chǎn)、高產(chǎn)的目的。
【具體實施方式】
[0057] 本發(fā)明的下述非限制性實施例可W使本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員更全面地理解本發(fā) 明，但不W任何方式限制本發(fā)明。實施例中所用的生物材料均可W由商業(yè)途徑獲得。
[0058] 實施例一:根莖類蔬菜專用有機復(fù)合生物肥的制備
[0059] 本發(fā)明根莖類蔬菜專用的有機復(fù)合生物肥產(chǎn)品是指利用微生物技術(shù)，選配具有特 定腐熟功能的菌種制成菌劑，用此菌劑將有機固體物料發(fā)酵腐熟成初肥，再配W各種營養(yǎng) 元素及根莖類蔬菜專用的促生長復(fù)合菌劑所制成的生物肥料。其【具體實施方式】如下：
[0060] (一)有機物料腐熟劑的制備
[0061] 采用枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilis)CICC10088,米曲霉（Aspergillus niger )CICC2436，白腐菌（Phanerochaete chrysospor ium) ACCC30414、里氏木霉 (化ichoderma reesei)ACCC30449等具有高效腐熟作用的菌種按適當?shù)谋壤龔?fù)合發(fā)酵而成 的腐熟困劑。
[0062] 1.菌種活化:將所述各菌種接于斜面培養(yǎng)基上;枯草芽抱桿菌28~32°C，pH為7.2 ~7.4,培養(yǎng)時間為1~3天;米曲霉培養(yǎng)溫度25~28°C，pH為6.0~6.5,培養(yǎng)時間為4~7天； 白腐菌培養(yǎng)溫度25~28°C，培養(yǎng)時間為4~7天；
[0063] 2.-級菌種培養(yǎng):將所述菌種分別接種于盛有液體培養(yǎng)基的50mL錐形瓶中，培養(yǎng) 基pH為6.0~8.0，錐形瓶放入搖床振蕩培養(yǎng)，溫度為30°C，振蕩24~48h;采用血球計數(shù)板計 數(shù)，菌液中菌種數(shù)量分別達到IO8個/mL;
[0064] 3.二級發(fā)酵:將所述菌種分別接種于盛有液體培養(yǎng)基的1000 mL錐形瓶中，培養(yǎng)基 口冊.0~8.0，放入搖床振蕩，溫度為30°(：，振蕩48~7211;使菌種數(shù)量分別達到108個/1111^^ 上，將各菌種按所述菌種的質(zhì)量百分比混合；
[00化]4.S級發(fā)酵：分別將枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilis)CICC10088,米曲霉 (Aspergillus nige;r)CICC2436,白腐菌（Phanerochaete C虹ysospo;rium)ACCC30414、里氏 木霉(Trichoderma reesei)ACCC30449的菌種發(fā)酵液按2:1:1:1的比例混合均勻后，接種于 盛有復(fù)合菌劑培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，復(fù)合菌劑培養(yǎng)基抑6.0~8.0，接種量為5%，3(TC下培養(yǎng) 4~7天，使發(fā)酵液中菌數(shù)達到IO8個/mL,即得到有機物料腐熟劑。
[0066] 所述斜面培養(yǎng)基配方為：
[0067] 1.枯草芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為:普通瓊脂:牛肉浸液1.化，蛋白腺lOg， NaC15. Og，瓊脂20.0-20.5g，pH7.2-7.4，牛肉浸液的制備:瘦牛肉洗凈，切碎，稱取550g浸泡 于1375mL水中，浸泡一夜，過濾，過濾分裝后0.化奸/cm240min備用。
[00側(cè) 2.米曲霉采用的斜面培養(yǎng)基配方為：5 ^Be麥芽汁瓊脂，5 ^Be麥芽汁1.化，瓊脂 15.Og,自然抑。
[0069] 3.白腐菌的斜面培養(yǎng)基配方為:PDA培養(yǎng)基，取去皮的馬鈴馨200克，切成小塊，加 水1000毫升煮沸30分鐘濾去馬鈴馨塊，將濾液補足至1000毫升，加葡萄糖20克，瓊脂15克， 溶化后分裝，15磅滅菌30分鐘。自然抑。
[0070] 4.里氏木霉的斜面培養(yǎng)基配方為：同白腐菌配方。
[0071 ]所述液體培養(yǎng)基為斜面培養(yǎng)基不加瓊脂即可。
[0072]所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基配方為：玉米面0.5g/L、玉米賴桿粉15g/L、教皮0.25g/L、豆 餅粉0.25g/L、Vogel' S 母液4mL/100mL，pH值7.0。
[007；3](二)混拌、發(fā)酵
[0074] 準備500kg粉碎的玉米賴桿與200kg牛糞作為發(fā)酵的原始有機物料，將制備好的有 機物料腐熟劑按發(fā)酵有機物料總質(zhì)量的5%。兌入適量的水中，與有機物料均勻混拌，原料手 握成團，指縫有水但不滴，而松手即散為好(總水分在60%左右）。將混合攬拌均勻的發(fā)酵物 料放進發(fā)酵設(shè)施，壓實填滿排去空氣，發(fā)酵池頂部覆蓋一層塑料薄膜，上蓋密封發(fā)酵、適時 翻煤，翻堆時補充水分，將總水分控制在60%左右。經(jīng)過10天發(fā)酵，即制得初肥。
[0075] (S)各類營養(yǎng)元素的添加
[0076] 物料發(fā)酵完成后，按肥劑型要求進行粉碎、烘干，而后添加各類營養(yǎng)元素，包括大 量元素(氮、憐、鐘）、中量元素(巧、儀）、微量元素(棚、鋒），按發(fā)酵物料質(zhì)量計算，具體添加 比例如下：
[0077] a.大量元素(氮、憐、鐘)的添加比例:氮3.0%、憐2.0%、鐘6.0%;
[007引 b.中量元素添加比例:巧0.6%、儀0.5% ;
[0079] C.微量元素的添加比例:棚0.03%，鋒0.02% ;
[0080] d.腐植酸類肥料的添加比例:5.0%。
[0081 ](四）根莖類蔬菜專用促生長復(fù)合菌劑制備及添加
[0082] 采用枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilis)ACCC 02973、巨大芽抱桿菌（Bacillus megateriunOACCC 10010、褐色球形固氮菌(Azotobacter chroococ州m)CGMCC 1.142、膠質(zhì) 芽抱桿菌（Bacillus mucilaginosus)CGMCC 1.153、地衣芽抱桿菌（Bacillus licheniformis)ACCC02936等具有特殊功效的菌種發(fā)酵液混合后作為混合菌劑，經(jīng)再次發(fā) 酵而制備的微生物復(fù)合菌劑。
[0083] 所述的根莖類蔬菜微生物復(fù)合菌劑制備步驟如下：
[0084] 1.接種:將所述各菌種(膠質(zhì)芽抱桿菌、地衣芽抱桿菌、褐色球形固氮菌、巨大芽抱 桿菌、枯草芽抱桿菌)分別接于斜面培養(yǎng)基上;膠質(zhì)芽抱桿菌(鐘細菌)培養(yǎng)溫度25~35°C， 抑為7.5~8.0，培養(yǎng)時間為5天;地衣芽抱桿菌培養(yǎng)溫度25~30°C，抑為7.0~8.0，培養(yǎng)時間 為5天;褐色球形固氮菌培養(yǎng)溫度25~35°C，pH為7.0~7.5,培養(yǎng)時間為3~5天;巨大芽抱桿 菌為27~37°C，pH為6.5~7.5，培養(yǎng)時間為4天;枯草芽抱桿菌培養(yǎng)溫度27~37°C，pH為6.5 ~7.5，培養(yǎng)時間為4天；
[0085] 2.-級菌種培養(yǎng):將所述步驟1制備的菌種分別按接種環(huán)一環(huán)的量接種于盛有相 應(yīng)液體培養(yǎng)基的50mL錐形瓶中，培養(yǎng)基pH為6.5~7.5，錐形瓶放入搖床振蕩，溫度為30°C， 振蕩24~4她;采用血球計數(shù)板計數(shù)，菌液中菌種數(shù)量分別達到IO8個/血；
[0086] 3.二級發(fā)酵:將所述步驟2制備的菌種分別按5%接種于盛有液體培養(yǎng)基的1000 mL 錐形瓶中，培養(yǎng)基抑6.5~7.5，放入搖床振蕩，溫度為30°C，振蕩48~72h;使菌種數(shù)量分別 達到IO8個/mLW上，從而制得膠質(zhì)芽抱桿菌(鐘細菌)發(fā)酵液、褐色球形固氮菌發(fā)酵液、地衣 芽抱桿菌發(fā)酵液、巨大芽抱桿菌發(fā)酵液和枯草芽抱桿菌發(fā)酵液。
[0087] 將各菌種按質(zhì)量百分比混合后進行再次發(fā)酵：膠質(zhì)芽抱桿菌（鐘細菌）發(fā)酵液 30%、巨大芽抱桿菌發(fā)酵液30%、褐色球形固氮菌發(fā)酵液20%、地衣芽抱桿菌發(fā)酵液10%、 枯草芽抱桿菌發(fā)酵液10%。
[0088] 4.=級發(fā)酵:將所述步驟3制備的混合后的菌液接種于盛有復(fù)合菌劑培養(yǎng)基的發(fā) 酵罐中，復(fù)合菌劑培養(yǎng)基抑6.5~7.5，接種量為復(fù)合菌劑培養(yǎng)基總質(zhì)量的5%，3(TC下培養(yǎng) 4~7天，使發(fā)酵液中菌數(shù)達到6~10 X IO8個/mL,即得到根莖類蔬菜專用微生物復(fù)合菌劑， 抑為5.0，菌數(shù)含量均達到109個/mL。
[0089] 所述斜面培養(yǎng)基配方為：
[0090] 1.膠質(zhì)芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為:K出K)4 0.06g、MgS化? 7出0 0.05g、
[0091] CaS〇4 ?甜2〇 0.004g、蛋白腺5g、玉米漿（50%干重）2.5g、乳糖 15g、化Cl 4g、蒸饋 水lOOOmL、瓊脂25g、抑 7.1;
[0092] 2.地衣芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為:蛋白腺10.Og,牛肉浸取物3.Og,氯化 鋼5.0g，、瓊脂15g、蒸饋水lOOOmL、抑7.0;
[0093] 3.巨大芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為：牛肉膏3g、蛋白腺5g、瓊脂15g、化Cl 5邑、蒸饋水lOOOmL、抑7.0;
[0094] 4.枯草芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為:牛肉膏l(xiāng)Og、蛋白腺10g、NaCl 5g、葡萄 糖lOg，瓊脂15g，蒸饋水lOOOmL，抑7.0;
[0095] 5.褐色球形固氮菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為:K出P〇4 0.2g、K2HP〇4 0.8g、MgS〇4 ? 7出00.2g、CaS〇4 ? 2此0 0.1g、Na2Mo〇4 ? 2出0微量、酵母膏0.5g、甘露醇20gJeCl3微量、瓊脂 15g、蒸饋水lOOOmL、抑 7.2;
[0096] 所述液體培養(yǎng)基配方為斜面培養(yǎng)基不加瓊脂制得。
[0097] 所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基配方為:玉米粉2~20g/100血、豆粗粉1~lOg/100血、酵母膏 0.05~0.2邑/1001111^、1(出口04 0.2~2邑/1001111^、1(2冊04 0.5~2邑/1001111^、]\%504.7此0 0.001~ 0.02g/100mL、NaCl 0.5~0.8g/100mL、（NH4)2S04 0.OOl~0.Olg/lOOmL，其余為蒸饋水。
[0098] 按發(fā)酵物料總質(zhì)量的4%。比例添加根莖類蔬菜專用的促生長復(fù)合菌劑，再次混合 均勻。
[0099] (五)造?；虺煞?，檢測、包裝、入庫
[0100] 將物料混合均勻后，經(jīng)造粒機造?；虺煞郏瑱z測合格后，包裝入庫。
[0101] 實施例二:根莖類蔬菜專用有機復(fù)合生物肥在洋蔥上的應(yīng)用效果試驗
[0102] 1.材料和方法
[0103] 1.1供試材料
[0104] 洋蔥品種:紅福洋蔥
[0105] 供試肥料:=科根莖類蔬菜專用有機復(fù)合生物肥，該肥料由大連=科生物工程有 限公司自主研發(fā)及生產(chǎn)，2化g/袋，顆粒狀。
[0106] 1.2試驗田情況
[0107] 試驗田±壤為壤±，有機質(zhì)含量為2.9%，pH值6.5，地勢平整，肥力中等。
[0108] 1.3試驗方法
[0109] 試驗設(shè)置為兩組，采用隨機排列，每個處理分別=次重復(fù)，每個試驗小區(qū)面積667 平方米。
[0110] 所述的兩組處理：
[0111] ①對照組，常規(guī)施肥;②試驗組，嚴格按照根莖類蔬菜專用有機復(fù)合生物肥產(chǎn)品使 用說明施用。
[0112] 在洋蔥收獲期測量株高，統(tǒng)計蔥頭產(chǎn)量，并測定Vc,可溶性糖含量。VC測定采用鋼 藍比色法，可溶性糖含量采用斐林-艦量法。
[0113] 2.結(jié)果與分析
[0114] 表1.施用根莖類蔬菜專用的有機復(fù)合生物肥對于洋蔥產(chǎn)量及品質(zhì)的影響
[0115]
[0116] 從表1可W看出，施用根莖類蔬菜專用有機復(fù)合生物肥對株高有一定的影響，但與 對照組差異不大。從畝產(chǎn)量數(shù)據(jù)可看到，施用有機復(fù)合生物肥可顯著提高洋蔥產(chǎn)量，試驗組 畝產(chǎn)量可比對照組增加1071kg，增產(chǎn)率為16.4%。此外，表1可看出施用根莖類蔬菜專用有 機復(fù)合生物肥可顯著提高Vc和可溶性糖含量，分別提高21.5%和11.8%。洋蔥品質(zhì)的好壞 主要WVc、可溶性糖含量多少為指標，它們含量高，則說明洋蔥的品質(zhì)更好。
[0117] 3.結(jié)論
[0118] 通過對洋蔥的試驗發(fā)現(xiàn)，施用根莖類蔬菜專用有機復(fù)合生物肥能夠顯著提高洋蔥 的產(chǎn)量及品質(zhì)，增產(chǎn)率可達16.4%，顯著提高了經(jīng)濟效益。因此，根莖類蔬菜專用有機復(fù)合 生物肥可在根莖類蔬菜生產(chǎn)種植中擴大示范面積，并進行大面積推廣使用。
【主權(quán)項】
1. 一種根莖類蔬菜專用的有機復(fù)合生物肥，其特征在于，所述有機復(fù)合生物肥的制備 方法包括： (一) 有機物料腐熟劑的制備 將菌種數(shù)量分別達到1〇8個/mL以上的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CICC10088， 米曲霉（Aspergi 1 lus niger )CICC2436，白腐菌（Phanerochaete chrysosporium) ACCC30414，里氏木霉（Trichoderma reesei )ACCC30449的菌種發(fā)酵液按1 · 5~2 · 0:0 · 8~ 1.3:0.8~1.3:0.8~1.3的比例混合均勻后，接種于盛有復(fù)合菌劑培養(yǎng)基A的發(fā)酵罐中，接 種量為復(fù)合菌劑培養(yǎng)基A總體積的5%，30°C下培養(yǎng)4~7天，使發(fā)酵液中總菌數(shù)達到10 8個/ mL，即得到有機物料腐熟劑； 所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基A配方為：玉米面0.5~1.5g/L、玉米猜桿粉15~17g/L、麩皮0.2~ 0 · 4g/L、_a 餅粉0 · 2 ~0 · 4g/L、Vogel ' s母液4mL/100mL，pH 值6 · 0 ~8 · 0; (二) 混拌、發(fā)酵 將步驟(一）制備好的有機物料腐熟劑按發(fā)酵有機物料總質(zhì)量的5%。比例混合，再兌入 適量的水，使總水分控制在60 %左右，在發(fā)酵池經(jīng)過5-10天發(fā)酵，即制得初肥； (三) 深加工 將初肥進行粉碎、烘干，按初肥質(zhì)量百分比，具體添加如下營養(yǎng)元素： 氮3.0-5.0%、磷0.5-2.5%、鉀4.0-6.0% ;鈣0.5~1.5%、鎂0.5~1.5% ;硼0.01~ 0.05%，鋅0.01~0.05% ;腐植酸類肥料5.0~10.0% ; (四） 根莖類蔬菜專用促生長復(fù)合菌劑的制備 將菌種數(shù)量分別達到1〇8個/mL以上的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)ACCC 02973、 巨大芽抱桿菌（Bacillus megaterium)ACCC 10010、褐色球形固氮菌（Azotobacter chroococcum)CGMCC 1.142、膠質(zhì)芽抱桿菌（Bacillus mucilaginosus)CGMCC 1.153、地衣 芽抱桿菌（Bacillus 1 icheniformis)ACCC02936的菌種發(fā)酵液，按（10~20% ): (20~ 30% ): (10~20% ): (20~30% ): (10~20% )的比例混合均勻后作為混合菌劑，接種于盛有 復(fù)合菌劑培養(yǎng)基B的發(fā)酵罐中，接種量為復(fù)合菌劑培養(yǎng)基B總體積的5%，復(fù)合菌劑培養(yǎng)基B 的pH 6.5~7.5，30°C下培養(yǎng)4~7天，使發(fā)酵液中總菌數(shù)達到6~10 X 108個/mL，即得到根莖 類蔬菜專用微生物復(fù)合菌劑，pH為6.8，總有效活菌數(shù)為9 X 108個/mL; 所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基B的配方為：玉米粉15~18g/100mL、豆栢粉5~8g/100mL、酵母膏 0.1 ~0.2g/100mL、KH2P〇4 0.2~2g/100mL、K2HP〇4 0.5~2g/100mL、MgS〇4.7H20 0.001 ~ 0 · 02g/100mL、NaCl 0 · 5~0 · 8g/100mL、（NH4)2S〇4 0 · 001 ~0 · 01g/100mL，其余為蒸餾水； (五） 按步驟(三)深加工所獲得的發(fā)酵有機物料總質(zhì)量的3~5%。比例添加步驟（四）獲 得的根莖類蔬菜專用的促生長復(fù)合菌劑獲得終產(chǎn)品。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的根莖類蔬菜專用的有機復(fù)合生物肥的制備方法，其特征在于， 步驟(一)所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基A配方為:玉米面0.5g/L、玉米秸桿粉15g/L、麩皮0.25g/L、豆 餅粉0·25g/L、Vogel's母液4mL/100mL，pH 7·0。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的根莖類蔬菜專用的有機復(fù)合生物肥的制備方法，其特征在于， 步驟（一）所述枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilis)CICC 10088,米曲霉（Aspergillus niger)CICC2436，白腐菌（Phanerochaete chrysosporium)ACCC30414、里氏木霉 (Trichoderma reesei)ACCC30449的菌種發(fā)酵液按2:1:1:1的比例混合均勾。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的根莖類蔬菜專用的有機復(fù)合生物肥的制備方法，其特征在于， 步驟(二)所述發(fā)酵有機物料為粉碎的玉米秸桿與動物糞便按1.0~2.0:0.4~1.4質(zhì)量比混 合。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的根莖類蔬菜專用的生物有機肥的制備方法，其特征在于，步驟 (三)所述營養(yǎng)元素為氮3.0%、磷2.0%、鉀6.0% ;鈣0.6%、鎂0.5%;硼0.03%，鋅0.02% ; 腐植酸類肥料5.0 %，腐植酸類肥料為腐植酸銨或者腐植酸鉀。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的根莖類蔬菜專用的生物有機肥的制備方法，其特征在于，步驟 (三）所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基B的配方為：玉米粉16g/100mL、豆栢粉7g/100mL、酵母膏0. lg/ 100mL、KH2P〇4 lg/100mL、K2HP〇4 lg/100mL、MgS〇4.7H20 0.01g/100mL、NaCl 0.6g/100mL、 (NH4)2S〇4 0.01g/100mL，其余為蒸餾水。
【文檔編號】C05F11/08GK106064967SQ201610374550
【公開日】2016年11月2日
【申請日】2016年5月30日 公開號201610374550.9, CN 106064967 A, CN 106064967A, CN 201610374550, CN-A-106064967, CN106064967 A, CN106064967A, CN201610374550, CN201610374550.9
【發(fā)明人】崔昌娜, 崔國臣
【申請人】大連三科生物工程有限公司