專利名稱：作為TACE抑制劑的炔β－氨磺酰和次膦酸酰胺異羥肟酸的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及作為TNF-α轉(zhuǎn)化酶(TACE)的抑制劑的炔芳基氨磺酰和次膦酸酰胺異羥肟酸。本發(fā)明的化合物可用于治療TNF-α介導(dǎo)的疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨性關(guān)節(jié)炎、膿毒病、AIDS、潰瘍性結(jié)腸炎、多發(fā)性硬化癥、局限性回腸炎和退化性軟骨喪失。
背景技術(shù)：
TNF-α轉(zhuǎn)化酶(TACE)催化膜結(jié)合TNF-α前體蛋白形成TNF-α。TNF-α是一種促炎癥細(xì)胞因子，據(jù)信在以下疾病中起作用類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Shire，M.G.；Muller，G.W.Exp.Opin.Ther.Patents 1998，8(5)，531；Grossman，J.M.；Brahn，E.J.Women’s Health 1997，6(6)，627；Isomaki，P.；Punnonen，J.Ann.Med.1997，29，499；Camussi，G.；Lupia，E.Drugs，1998，55(5)，613)、膿毒性休克(Mathison，等人，J.Clin.Invest.1988，81，1925；Miethke，等人，J.Exp.Med.1992，175，91)、移植排斥(Piguet，P.F.；Grau，G.E.；等人，J.Exp.Med.1987，166，1280.)，惡質(zhì)病(Beutler，B.；Cerami，A.Ann.Rev.Biochem.1988，57，505)、厭食、炎癥(Ksontini，R，；MacKay，S.L.D.；Moldawer，L.L.Arch.Surg.1998，133，558.)、充血性心力衰竭(Packer，M.Circulation，1995，92(6)，1973；Ferrari，R.；Bachetti，T.等人.Circulation，1995，92(6)，1479)、局部缺血后重復(fù)灌注(ischaemic)的損傷、中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性疾病、腸炎、胰島素抗性(Hotamisligil，G.S.；Shargill，N.S.；Spiegelman，B.M.；等人.Science，1993，259，87.)和HIV感染(Peterson，P.K.；Gekker，G.；等人，J.Clin.Invest.1992，89，574；Pallares-Trujillo，J.；Lopez-Soriano，F(xiàn).J.Argiles，J.M.Med.Res.Reviews，1995，15(6)，553)，及其熟知的抗腫瘤特性(Old，L.Science，1985，230，630)。例如，用抗TNF-α抗體和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物作的研究表明阻斷TNF-α的形成抑制了關(guān)節(jié)炎的發(fā)展(Rankin，E.C.；Choy，E.H.；Kassimos，D.；Kingsley，G.H.；Sopwith，A.M.；Isenberg，D.A.；Panayi，G.S.Br.J.Rheumatol.1995，34，334；Pharmaprojects，1996，Therapeutic Updates 17(10月)aul97-M2Z)。最近這個(gè)觀察已擴(kuò)展到人，如“人類疾病中的TNF-α”，CurrentPharmaceutical Design，1996，2，662所述。
預(yù)計(jì)TACE的小分子抑制劑具有治療各種疾病癥狀的潛力。雖然已知有許多TACE抑制劑，但這些分子中的許多是肽類或類肽，存在生物可利用性和藥物動(dòng)力學(xué)問題。另外，這些分子中許多是非選擇性的基質(zhì)金屬蛋白酶(尤其是MMP-1)的強(qiáng)抑制劑。已假設(shè)對MMP-1(膠原酶1)的抑制會(huì)造成MMP抑制劑臨床實(shí)驗(yàn)中的關(guān)節(jié)疼痛(Scrip，1998，2349，20)。因此長效、選擇性、口服生物可利用性的非肽類TACE抑制劑對治療上述疾病是非常理想的。
WIPO國際出版物WO9816503、WO9816506、WO9816514和WO9816520和美國專利No.5,776,961公開了呈下式的異羥肟酸氨磺酰MMP/TACE抑制劑的例子，其中2碳鏈將異羥肟酸和氨磺酰氮分開。 美國專利N0.5,445,258、5,506,242、5,552,419、5,770,624、5,804,593和5,817,822以及歐洲專利EP606,046A1和WIPO國際出版物WO9600214和WO9722587公開了基質(zhì)金屬蛋白酶和/或TACE的非肽類抑制劑，即以下所示的異羥肟酸芳基氨磺酰，其中1碳將異羥肟酸和氨磺酰氮分開。其他出版物公開的氨磺酰為基礎(chǔ)的MMP抑制劑，是以下所示的氨磺酰-異羥肟酸的變體或氨磺酰-異羥肟酸的類似物，公開于歐洲專利EP-757037-A1和EP-757984-A1和WIPO國際出版物WO9535275、WO9535276、WO9627583、WO9719068、WO9727174、WO9745402、WO9807697和WO9831664、WO9833768、WO9839313、WO9839329、WO9842659和WO9843963。MacPherson，等人在J.Med.Chem，(1997)，40，2525和Tamura等人在J.Med.Chem.(1998)，41，640中進(jìn)一步詳細(xì)公開了這種類型的MMP抑制劑。 公開MMP和/或TACE的β-氨磺酰-異羥肟酸抑制劑(其中異羥肟酸的α碳與氨磺酰的氮呈環(huán)狀連接，如下所示)的出版物包括美國專利No.5,753,653、WIPO國際出版物WO9633172、WO9720824、WO9827069、WO9808815、WO9808822、WO9808823、WO9808825、WO9834918、WO9808827、Levin等人，Bioorg.&Med.Chem.Letters 1998，8，2657和Pikul等人，J.Med.Chem.1998，41，3568。 專利申請DE19,542,189-A1、WO9718194和EP803505公開了MMP和/或TACE抑制劑的其他環(huán)狀氨磺酰例子。其中含氨磺酰的環(huán)稠合于芳環(huán)或雜芳環(huán)。 氨磺酰的類似物是次膦酸酰胺異羥肟酸MMP/TACE抑制劑，如以下結(jié)構(gòu)所示，公開于WIPO國際出版物WO9808853。 WIPO國際申請9803166中公開了如下所示的氨磺酰MMP/TACE抑制劑，其中硫醇是鋅螯合基團(tuán)。 本發(fā)明的目的是公開芳基氨磺酰和次膦酸酰胺異羥肟酸MMP/TACE抑制劑，其中Y(磺?；蜓蹯⒒蓟?被取代的丁炔基部分或炔丙醚、炔丙胺或炔丙硫醚所對位取代。這些化合物在體外和細(xì)胞試驗(yàn)中提供TACE活性水平增強(qiáng)的抑制和/或優(yōu)于MMP-1的選擇性。所以這些化合物可用于治療由TNF介導(dǎo)的疾病。
發(fā)明概述可用下式代表本發(fā)明的抑制TACE和MMP的鄰位亞磺酰氨基異羥肟酸或其藥學(xué)上可接受的鹽 其中C(＝O)NHOH部分和-NR5-部分連接于相鄰的碳原子；X是SO2或-P(O)R10；Y是5-10元雜芳基環(huán)，所述的雜芳基環(huán)的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S和O、苯基或萘基；條件是X和Z不連接于Y的相鄰原子；Z是O、NH、CH2或S；R5是氫或1-6個(gè)碳原子的烷基；R6和R7各是氫或甲基；R8是氫，1-6個(gè)碳原子的烷基，2-6個(gè)碳原子的鏈烯基，2-6個(gè)碳原子的炔基，3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，5-7元雜芳基，所述的雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，或5-7元雜環(huán)烷基，所述的雜環(huán)烷基的1或2個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，或苯基；R9是氫，1-6個(gè)碳原子的烷基，3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基或苯基；R10是1-6個(gè)碳原子的烷基，3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，苯基，5-7元雜芳基，所述的雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O；R11和R12各是氫，1-6個(gè)碳原子的烷基，3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，5-7元雜芳基，所述的雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，5-7元雜環(huán)烷基，所述的雜環(huán)烷基的1-2個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，或苯基，并且存在點(diǎn)線表示的任選雙鍵；或R11和R12及連接它們的碳原子一起形成5-10元飽和的或不飽和的單環(huán)或雙環(huán)烷基環(huán)，可任選地稠合于一5-7元飽和的或不飽和的環(huán)烷基環(huán)，5-7元雜芳基，所述的雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，5-7元雜環(huán)烷基，所述的雜環(huán)烷基的1或2個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，苯環(huán)或萘環(huán)；或R11和R12及連接它們的碳原子一起形成5-10元飽和的或不飽和的單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)烷基，所述的雙環(huán)雜環(huán)烷基的1-2個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，其任選地稠合于一5-7元單環(huán)或雙環(huán)雜芳基，所述的雙環(huán)雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，5-7元飽和的或不飽和的雜芳基環(huán)或苯環(huán)或萘環(huán)；點(diǎn)線表示可任選的雙鍵；和n＝0-2。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物包括結(jié)構(gòu)為B的化合物，其中X是SO2。
本發(fā)明更優(yōu)選的化合物包括結(jié)構(gòu)為B的化合物，其中X是SO2，Y是在1-和4-位被X和Z分別取代的苯環(huán)。
本發(fā)明更優(yōu)選的化合物包括結(jié)構(gòu)為B的化合物，其中X是SO2，Y是在1-和4-位被X和Z分別取代的苯環(huán)，且Z是氧。
本發(fā)明更優(yōu)選的化合物包括結(jié)構(gòu)為B的化合物，其中X是SO2，Y是在1-和4-位被X和Z分別取代的苯環(huán)，Z是氧，R6和R7是氫。
本發(fā)明更優(yōu)選的化合物包括結(jié)構(gòu)為B的化合物，其中X是SO2，Y是在1-和4-位被X和Z分別取代的苯環(huán)，Z是氧，R6和R7是氫，R8是-CH2OH或甲基。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物是(1R，2R)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-N-羥基環(huán)己烷甲酰胺；(1R，2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)-N-羥基環(huán)己烷甲酰胺；3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基]-N-羥基丙酰胺；3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基]-N-羥基丙酰胺；(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基]-N-羥基環(huán)戊烷甲酰胺；(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基]-N-羥基環(huán)戊烷甲酰胺；(順式)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基]-N-羥基環(huán)己烷甲酰胺；(順式)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基]-N-羥基環(huán)己烷甲酰胺；(1R，2R，3S，4R)-(順式)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基]-N-羥基二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-甲酰胺；和(1R，2R，3S，4R)-(順式)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基]-N-羥基二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-甲酰胺。
本文所用的雜芳基是5-10元單環(huán)或雙環(huán)，其中1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S和O。雜芳基較佳的是 或 其中K是NR9、O或S，R9是氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基或苯基。優(yōu)選的雜芳環(huán)包括吡咯、呋喃、噻吩、吡啶、嘧啶、噠嗪、吡嗪、三唑、吡唑、咪唑、異噻唑、噻唑、異噁唑、噁唑、吲哚、異吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、異喹啉、喹噁啉、喹唑啉、苯并三唑、吲唑、苯并咪唑、苯并噻唑、苯并異噁唑和苯并噁唑。
本發(fā)明的雜芳基可任選地為單取代或雙取代。
本文所用的雜環(huán)烷基是5-10元飽和的或不飽和單環(huán)或雙環(huán)，其中1或2個(gè)雜原子選自N、NR9、S和O。本發(fā)明的雜環(huán)烷基較佳地選自 或 其中M是NR4、O或S，R4是氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基、苯基、萘基、雜芳基、-S(O)nR2、-COOR2、-CONR2R3、-SO2NR2R3或-COR2。優(yōu)選的雜環(huán)烷基環(huán)包括哌啶、哌嗪、嗎啉、四氫吡喃、四氫呋喃或吡咯烷。本發(fā)明的雜環(huán)烷基可任選地為單取代或雙取代。
本文所用的芳基指苯基或萘基，可任選地單、雙或三取代。
烷基、鏈烯基、炔基和全氟烷基包括直鏈和支鏈部分。烷基、鏈烯基、炔基和環(huán)烷基可以是未取代的(碳原子連接于氫、或鏈或環(huán)中的其他碳原子)或單或多取代的。環(huán)烷基可以是單環(huán)或雙環(huán)。單環(huán)烷基的例子包括環(huán)戊基和環(huán)己基。雙環(huán)烷基的例子包括雙環(huán)庚烷和金剛烷基。
鹵素指溴、氯、氟和碘。
芳基、雜芳基、烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基適合的取代基包括(但不限于)鹵素、1-6個(gè)碳原子的烷基、2-6個(gè)碳原子的鏈烯基、2-6個(gè)碳原子的炔基、3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基、-OR2、-CN、-COR2、1-4個(gè)碳原子的全氟烷基、1-4個(gè)碳原子的-O-全氟烷基、-CONR2R3、-S(O)nR2、-OPO(OR2)OR3、-PO(OR2)R3、-OC(O)NR2R3、-C(O)NR2OR3、-COOR2、-SO3H、-NR2R3、-N[(CH2)2]2NR2、-NR2COR3、-NR2COOR3、-SO2NR2R3、-NO2、-N(R2)SO2R3、-NR2CONR2R3、-NR2C(＝NR3)NR2R3、NR2C(＝NR3)N(SO2R2)R3、NR2C(＝NR3)N(C＝O)R2R3、-SO2NHCOR4、-CONHSO2R4、-四唑-5-基、-SO2NHCN、-SO2NHCONR2R3、苯基、萘基、雜芳基或雜環(huán)烷基；其中-NR2R3可形成吡咯烷、哌啶、嗎啉、硫代嗎啉、噁唑烷、噻唑烷、吡唑烷、哌嗪或氮雜環(huán)丁烷環(huán)；R2和R3各是氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基、苯基、萘基、雜芳基或雜環(huán)烷基；R4是氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基、苯基、萘基、雜芳基-S(O)nR2、-COOR2、-CONR2R3、-SO2NR2R3或-COR2；n是0-2。
本發(fā)明雜環(huán)烷基的合適的取代基包括(但不限于)1-6個(gè)碳原子的烷基、3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基、苯基、萘基、雜芳基和雜環(huán)烷基。
當(dāng)某部分含有相同名稱的一個(gè)以上的取代基時(shí)，這些取代基各自可以是相同的和不同的。
當(dāng)本發(fā)明的化合物含有堿性部分時(shí)，可從以下無機(jī)和有機(jī)酸形成藥學(xué)上可接受的鹽，如醋酸、丙酸、乳酸、檸檬酸、酒石酸、丁二酸、反式丁烯二酸、順式丁烯二酸、丙二酸、扁桃酸、羥基丁二酸、苯二甲酸、鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟腦磺酸和類似已知的可接受的酸。當(dāng)本發(fā)明的化合物含有酸性部分時(shí)，也可從無機(jī)和有機(jī)堿形成鹽，較佳地為堿金屬鹽如鈉鹽、鋰鹽或鉀鹽。
本發(fā)明的化合物可含有不對稱碳原子，本發(fā)明的一些化合物可含有一個(gè)或多個(gè)不對稱中心，且因此可能產(chǎn)生旋光異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體。不考慮立體化學(xué)而言，本發(fā)明包括這種旋光異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體；以及消旋和拆解的、對映體純化的R和S立體異構(gòu)體；以及R和S立體異構(gòu)體的其他混合物和它們藥學(xué)上可接受的鹽。據(jù)信一種旋光異構(gòu)體包括非對映異構(gòu)體和對映體或立體異構(gòu)體具有比其他有利的特性。所以當(dāng)公開和說明本發(fā)明權(quán)利時(shí)，當(dāng)公開一種消旋混合物時(shí)，顯然考慮了公開和要求了這兩種光學(xué)異構(gòu)體的權(quán)利包括非對映異構(gòu)體和對映異構(gòu)體，或基本無其他物質(zhì)的立體異構(gòu)體。
本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出能抑制酶MMP-1、MMP-9、MMP-13和TNF-α轉(zhuǎn)化酶(TACE)，并因此可用于治療關(guān)節(jié)炎、腫瘤轉(zhuǎn)移、組織潰爛、異常傷口的愈合、牙周病、移植排斥、胰島素抗性、骨骼疾病和HIV感染。具體說，本發(fā)明的化合物在體外和細(xì)胞試驗(yàn)中提供增強(qiáng)的抑制TACE活性的水平和/或提高優(yōu)于MMP-1的選擇性，因此這些化合物可特別用于治療TNF所介導(dǎo)的疾病。
本發(fā)明還提供制備如下定義的式I化合物的方法，所述的方法包括如下步驟之一a)將式V的化合物或其活性衍生物與羥胺反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)的式B的化合物 其中R5、R6、R7、R8、和R11R12、X、Y和Z及點(diǎn)線的定義如上，Q是OH或其活性衍生物；或b)將式VI的化合物去保護(hù)產(chǎn)生相應(yīng)的式B的化合物 其中R5、R6、R7、R8、和R11R12、X、Y和Z及點(diǎn)線的定義如上，R30是合適的保護(hù)基團(tuán)如叔丁基、芐基或三烷基甲硅烷基；c)拆解式B化合物的旋光活性異構(gòu)體的混合物(如外消旋物)，從而分離出基本無其他對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的一種對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體；或
d)用藥學(xué)上可接受的酸來酸化式B的堿性化合物，得到藥學(xué)上可接受的鹽。
對步驟a)而言，此反應(yīng)可用本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行，如通過?；然钚匝苌锱c羥胺的反應(yīng)。
如步驟b)所示的除去保護(hù)基團(tuán)的反應(yīng)也可用本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行，得到異羥肟酸。
對步驟c)而言，可用標(biāo)準(zhǔn)分離技術(shù)分離特定的對映體或非對映異構(gòu)體形式。例如，通過與‘拆解試劑’的單對映體(如非對映異構(gòu)體鹽形式或共價(jià)鍵形式)反應(yīng)，可將消旋混合物轉(zhuǎn)化成旋光性非對映異構(gòu)體的混合物?？捎脴?biāo)準(zhǔn)方法(如結(jié)晶或?qū)游?分離得到的旋光性非對映異構(gòu)體的混合物，然后處理各旋光性非對映異構(gòu)體以除去‘拆解試劑’，從而釋放出本發(fā)明化合物的單對映異構(gòu)體?？捎檬中詫游?用手性載體、洗脫液或離子配對劑)直接分離對映異構(gòu)體混合物。
可以藥學(xué)上可接受的鹽的形式分離式B的化合物，如用上述酸處理的有機(jī)或無機(jī)酸。
本發(fā)明還涉及制備結(jié)構(gòu)B化合物的方法，包括如下的一個(gè)或多個(gè)反應(yīng)1)將式I的化合物或其鹽或溶劑合物烷基化， 成式II的化合物 2)將上述式II的化合物或其鹽或溶劑合物，與氯化劑(如亞硫酰氯、氯磺酸、草酰氯、五氯化磷)或其他鹵化劑(如氟磺酸或亞硫酰溴)反應(yīng)，形成式III的化合物 其中J是氟、溴、氯。
通過將該化合物與1，2，4-三唑、咪唑或苯并三唑反應(yīng)，分別可進(jìn)一步將得到的磺酰氯、磺酰氟或磺酰溴轉(zhuǎn)化成酰三唑(triazolide)、酰咪唑(imidazolide)或酰苯并噻唑(benzothiazolide)衍生物，其中J為1，2，4-三唑基、苯并三唑基或咪唑基，R6、R7和R8的定義如上。
本發(fā)明還涉及制備結(jié)構(gòu)B化合物的方法，包括如下一個(gè)或多個(gè)反應(yīng)1)將苯酚或其鹽或溶劑合物烷基化成式IV的化合物 2)將上述式IV的化合物或其鹽或溶劑合物與氯磺酸反應(yīng)，制備上述式II的化合物。
特別優(yōu)選的中間體是式II和III的化合物，條件是R6不是氫。
可用有機(jī)合成領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法制備本發(fā)明的化合物。用于制備本發(fā)明化合物的起始原料是已知的，或可用已知方法制備或可購得。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)認(rèn)識到當(dāng)分子上其他潛在的反應(yīng)官能團(tuán)受到屏蔽或保護(hù)，因而避免不利的副反應(yīng)和/或增加反應(yīng)的產(chǎn)量時(shí)，可最佳地進(jìn)行某些反應(yīng)。為此，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以使用保護(hù)基團(tuán)。這些保護(hù)基團(tuán)的例子可見于T.W.Greene，P.G.M.Wuts“有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)”，第二版，1991，Wiley&Sons，New York。較佳地，將氨基酸起始原料上反應(yīng)性側(cè)鏈的官能團(tuán)保護(hù)起來。對特定反應(yīng)保護(hù)基團(tuán)的需要和選擇是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，這取決于被保護(hù)的官能團(tuán)(羥基、氨基、羧基等)的性質(zhì)、含該取代基的分子的結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性及反應(yīng)條件。
當(dāng)制備或加工本發(fā)明的含芳基、雜芳基或雜環(huán)化合物時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員知道可在構(gòu)建該環(huán)的同時(shí)、之前或之后制備該環(huán)上的取代基。為清晰起見，以下從該流程中刪去了這些環(huán)上的取代。
本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)明白為了最佳制備本發(fā)明化合物，合成步驟的性質(zhì)和順序可作改變。
按流程1制備本發(fā)明的異羥肟酸化合物，通過將羧酸2(其中A＝R11和R12)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的酰基氯或酸酐，或通過將它與適當(dāng)?shù)碾呐悸?lián)劑反應(yīng)，然后與羥胺反應(yīng)形成1，或與被保護(hù)的羥胺衍生物反應(yīng)，得到3。然后可用已知的方法保護(hù)化合物3得到異羥肟酸1，其中R30是叔丁基、苯基、三烷基甲硅烷基或其他合適的屏蔽基團(tuán)。
流程1 可按流程2所示制備羧酸2。將氨基酸衍生物4通過與化合物5反應(yīng)，磺?；蛄姿峄?，其中R40是氫或合適的羧酸保護(hù)基團(tuán)，其中J是合適的離去基團(tuán)包括(但不限于)氯。然后在極性質(zhì)子惰性溶劑如丙酮、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)或四氫呋喃(THF)中，用R3J和堿如碳酸鉀或氫化鈉將N-H化合物6烷基化得到氨磺酰7?；衔?也可通過5直接與N-取代的氨基酸衍生物8反應(yīng)得到。用酸、堿水解或其他方法(包括選擇保護(hù)基團(tuán)R40和存在碳碳三鍵)將7轉(zhuǎn)化成羧酸。
流程2 由流程3顯示了制備磺酰劑5的方法。因此，用炔10(其中J是合適的離去基團(tuán)如鹵素、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯或三氟甲烷磺酸酯(triflate))將磺酸鹽9(其中ZR50是羥基、硫醇或取代的氨基部分)烷基化，得到11。炔10是可購得的或是已知的化合物，或它們可用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法合成。通過已知的方法如與草酰氯或其他與取代基R6、R7和R8和炔相容的試劑反應(yīng)，將磺酸鹽11轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的磺酰氯或其他磺?；噭?。另外，通過與化合物10反應(yīng)可將二硫化物12轉(zhuǎn)化成二炔13，然后還原二硫鍵得到類似的硫醇，再可用已知的方法將其轉(zhuǎn)化成5。用10將酚、硫酚、苯胺或被保護(hù)的苯胺14烷基化得15，然后與氯磺酸反應(yīng)得到磺酸16，用草酰氯或類似的試劑不難將其轉(zhuǎn)化成5。通過保護(hù)硫醇、ZH的烷基化(Z是O、N或S)和硫的去保護(hù)及隨后磺酸16的氧化，硫酚17也是5的前體。
流程3 如流程4所示，可用類似的方法制備8的含磷的類似物。
流程4 如流程5所示，在氨基酸衍生物的磺?；蛄姿峄筮€可再加上炔側(cè)鏈。所以，可用化合物20(其中ZR50是羥基或被保護(hù)的羥基、硫醇或胺)將氨基酸衍生物4和8磺?；蛄姿峄?，若需要可用R7J(如流程2所示)烷基化，得到21。除去R50屏蔽基團(tuán)得到22，隨后用10烷基化得到的苯酚、硫醇或胺，得到7。在此情況中ZR50為OH，無需去保護(hù)步驟可得到22。
流程5
如流程6所示，以氨基酸衍生物4和/或8為起始物可合成炔丙胺類似物7。在DMF中用對硝基芳基化合物23(如4-硝基苯磺酰氯)磺酰基化或磷酸化，然后在DMF中用堿如碳酸鉀或氫化鈉以R5J(對4)烷基化，得到24。用氫和鈀碳、氯化錫或其他已知的方法還原硝基部分，得到苯胺25，隨后用10烷基化得到7。可用合適的氮保護(hù)基團(tuán)如叔丁氧基羰基，衍生化苯胺25，得到26然后用10烷基化，去保護(hù)。
流程6 如流程7所示，炔衍生物7還可通過氟化合物27制備，化合物27易通過氨基酸衍生物4和/或8與氟芳基26反應(yīng)制得。在極性質(zhì)子惰性溶劑如DMF中，存在堿如氫化鈉時(shí)用屏蔽的羥基、硫醇或氨基(HZR70，其中R70是合適的保護(hù)基團(tuán))置換27的氟，隨后去保護(hù)得到28，然后可用10將其烷基化得到7?？捎肗a2S、K2S、NaSH或KS(C＝S)OEt，將27轉(zhuǎn)化成28，其中Z是硫。還可在極性質(zhì)子惰性溶劑中，存在堿如氫化鈉時(shí)，用炔丙基衍生物29(其中Z是O、S或NH)置換27的氟，直接得到7。
流程7 如流程8所示，可通過30得到化合物7(其中Z是亞甲基)。在氯代烴溶劑中用N-溴琥珀酰亞胺將30芐基溴化，得到溴化物31。隨后溴化物用合適的銅酸丙炔置換可得到氨磺酰8。
流程8
本發(fā)明的化合物還可通過以下方法制備在磺?；蛄姿峄鹗及被嵫苌?或8后的任何一個(gè)階段，修飾炔側(cè)鏈上的取代基。可用標(biāo)準(zhǔn)方法操作官能團(tuán)如鹵素、羥基、氨基、醛、酯、酮等，形成化合物1的R1-R8所定義的部分。有機(jī)合成領(lǐng)域的技術(shù)人員懂得這些方法的成功使用取決于分子其他部分上取代基的相容性。本文的保護(hù)基團(tuán)和/或反應(yīng)步驟的順序可能需要變化。
流程9顯示了衍生結(jié)構(gòu)為32的化合物(相當(dāng)于化合物7，其中R12是氫)的一些方法。將末端炔烴32進(jìn)行金屬取代，然后以醛或烷基鹵、磺酸酯或三氟甲烷磺酸酯加成，產(chǎn)生衍生物33和34。32與甲醛和胺反應(yīng)產(chǎn)生Mannich加成產(chǎn)物35。溴化氰加成于35產(chǎn)生炔丙基溴化物36，它可用各種親核試劑置換，生成如醚、硫醚和胺37。32的鈀催化的偶聯(lián)反應(yīng)產(chǎn)生芳基或雜芳基炔38。有機(jī)合成領(lǐng)域技術(shù)人員懂得這些方法的成功使用取決于分子其他部分上取代基的相容性。本文所述的保護(hù)基團(tuán)和/或反應(yīng)步驟的順序可能需要變化，和R35、R45、R55、R65和R75是烷基如甲基；流程9
以下具體實(shí)施例說明了本發(fā)明代表性化合物的制備。起始原料、中間體和試劑可購得或可用有機(jī)合成領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法不難制備。
實(shí)施例1(反式)-2-(4-甲氧基苯磺?；?氨基環(huán)己烷羧酸室溫，在含有1.7ml(12.2mmol)三乙胺的50ml二噁烷∶H2O(1∶1)配制的1g(6.8mmol)反式-2-氨基-1-環(huán)己烷羧酸溶液中，加入1.54g(7.46mmol)4-甲氧基苯磺酰氯。25℃攪拌此混合物18小時(shí)。用戊烷稀釋得到的混合物，生成1.119g(51％)呈白色固體的所需產(chǎn)物。1H NMR(DMSO-d6)7.7ppm(dd，2H，Ar)，7.4ppm(d，1H，NH)，7.0ppm(dd，2H，Ar)，3.8ppm(s，3H，OMe)，3.5ppm(m，1H，N-CH)，1.0-1.7ppm(m，9H，烴類)。
實(shí)施例2(順式)-2-(4-甲氧基苯磺?；?氨基環(huán)己烷羧酸按實(shí)施例1所述相同的方法，用2.5g(17mmol)順式-2-氨基-1-環(huán)己基羧酸生成了3.283g(60％)所需的羧酸。電噴霧質(zhì)譜314.1(M+H)+。
實(shí)施例3(反式)-2-(4-甲氧基苯磺?；?氨基環(huán)己烷羧酸叔丁酯在5.0ml甲苯配制的0.313g(1mmol)實(shí)施例1產(chǎn)物的溶液中加入1ml(4mmol)N，N-二甲基甲酰胺二叔丁基乙縮醛。氮?dú)庵性?10加熱得到的混合物4小時(shí)，然后冷卻至室溫。將溶液傾倒在硅膠柱的頂部。以10-20％乙酸乙酯/己烷洗脫，硅膠層析得到353mg(96％)呈白色固體的所需酯。1H NMR(CDCl3)7.8ppm(dd，2H，Ar)，7.0ppm(dd，2H，Ar)，5.7ppm(d，1H，NH)，3.9ppm(s，3H，OMe)，3.4ppm(m，1H，N-CH)，2.5ppm(m，1H，CH-CO2-)，1.0-2.0ppm(m，17H，烴類)。
實(shí)施例4(順式)-2-(4-甲氧基苯磺?；被?-環(huán)己烷羧酸叔丁酯按實(shí)施例3所述相同的方法，用1.438g(4.59mmol)實(shí)施例2的產(chǎn)物生成0.379g(44％)呈無色油狀的所需叔丁酯。電噴霧質(zhì)譜370.1(M+H)+。
實(shí)施例5
(反式)-2-[芐基-(4-甲氧基苯磺?；?氨基]-環(huán)己烷羧酸叔丁酯在31ml DMF配制的1.146g(3.1mmol)實(shí)施例3產(chǎn)物的溶液中加入0.137g(3.42mmol)60％氫化鈉。在25℃攪拌得到的混合物30分鐘，然后一次性加入0.42ml(3.50mmol)溴化芐。55℃攪拌得到的反應(yīng)混合物10小時(shí)，然后傾倒入水中，用乙醚提取。用水和鹽水洗滌混合的有機(jī)物，MgSO4干燥，過濾并真空濃縮，得到白色固體，用乙酸乙酯/己烷重結(jié)晶后得到1.364g(95％)所需的產(chǎn)物。1HNMR(CDCl3)7.7ppm(dd，2H，Ar)，7.1-7.4(m，5H，Ar)，6.9ppm(dd，2H，Ar)，4.5-4.7ppm(AB四，2H，CH-Ar)，3.9ppm(s，3H，OMe)，4.0ppm(m，1H，N-CH)，2.9ppm(m，1H，CH-CO2-)，1.0-2.3ppm(m，17H，烴類)。
實(shí)施例6(順式)-2-[芐基-(4-甲氧基苯磺?；?氨基]-環(huán)己烷羧酸叔丁酯按實(shí)施例5所述相同的方法，用0.600g(1.62mmol)實(shí)施例4的產(chǎn)物生成0.310g(42％)呈無色油狀的所需芐酯。電噴霧質(zhì)譜460.1(M+H)+。
實(shí)施例7(反式)-2-[芐基-(4-甲氧基苯磺?；?氨基]-環(huán)己烷羧酸在10ml二氯甲烷配制的1.364g(2.97mmol)實(shí)施例5產(chǎn)物的溶液中加入10ml三氟乙酸，室溫?cái)嚢璐嘶旌衔?小時(shí)。真空除去溶劑，以10-100％乙酸乙酯/己烷洗脫，硅膠層析殘留物得到1.092g(73％)呈白色固體的所需產(chǎn)物。電噴霧質(zhì)譜404.2(M+H)+。
實(shí)施例8(反式)-2-[芐基-(4-甲氧基苯磺?；?氨基]-環(huán)己烷羧酸按實(shí)施例7所述相同的方法，用0.240g(0.522mmol)實(shí)施例6的產(chǎn)物生成0.207g(98％)呈白色固體的所需羧酸。電噴霧質(zhì)譜404.0(M+H)+。
實(shí)施例94-丁-2-炔氧基-苯磺酰酸鈉鹽在1L異丙醇和225ml 1.0N氫氧化鈉溶液配制的52.35g(0.225mol)4-羥基苯磺酸鈉溶液中加入59.96g(0.45mol)1-溴-2-丁炔。將得到的混合物加熱至70℃15小時(shí)，然后真空蒸發(fā)除去異丙醇。過濾收集產(chǎn)生的白色沉淀，用異丙醇和乙醚洗滌，真空干燥得到56.0g(100％)呈白色固體的丁炔醚。
實(shí)施例104-丁-2-炔氧基-苯磺酰氯在29ml二氯甲烷配制的43.8ml(0.087mol)2M草酰氯/二氯甲烷的0℃溶液中逐滴加入6.77ml(0.087mol)DMF，隨后加入7.24g(0.029mol)實(shí)施例9的產(chǎn)物。0°攪拌此反應(yīng)混合物10分鐘，然后讓其升溫至室溫，攪拌2天。然后將反應(yīng)物傾倒入冰中，用150ml己烷提取。用水和鹽水洗滌有機(jī)物，Na2SO4干燥，過濾并真空濃縮，得到6.23g(88％)呈黃色固體的磺酰氯；m.p.63-65℃。電噴霧質(zhì)譜為243.9MH+實(shí)施例11丁-2-炔氧基-苯在溶解于100ml苯和40ml THF的6.14g(0.023mol)三苯基膦的溶液中加入1.75ml(0.023mol)2-丁炔-1-醇。5分鐘后，在反應(yīng)物中加入溶解于10mlTHF的2.08(0.023mol)苯酚，然后再加入3.69ml(0.023mol)偶氮二羧酸二乙酯。室溫?cái)嚢璧玫降姆磻?yīng)混合物18小時(shí)，真空濃縮。以乙酸乙酯/己烷(1∶10)洗脫，硅膠層析殘留物，得到2.18g(70％)呈清澈液體的丁炔醚。EI質(zhì)譜146.0MH+。
實(shí)施例124-丁-炔氧基-苯磺酰氯在丙酮/冰浴中N2下，逐滴將0.3ml二氯甲烷配制的0.073ml(1.1mmol)氯磺酸加到由0.3ml二氯甲烷配制的0.146g(1.0mmol)實(shí)施例11產(chǎn)物的溶液中。加完后，移去冰浴，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)物2小時(shí)。然后在反應(yīng)物中逐滴加入0.113ml(1.3mmol)草酰氯，隨后加入0.015ml DMF。加熱反應(yīng)物回流2小時(shí)，然后用己烷稀釋，傾倒入冰水中。用鹽水洗滌有機(jī)層，硫酸鈉干燥，真空濃縮得到0.130g(53％)呈淺褐色固體的所需產(chǎn)物。
實(shí)施例13(1R，2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)-環(huán)己烷羧酸在含有2.55ml(18.3mmol)三乙胺的75ml二噁烷∶H2O(1∶1)配制的1.5g(10.2mmol)反式-2-氨基-1-環(huán)己烷羧酸的室溫溶液中，加入3.0g(11.2mmol)4-丁炔氧基苯磺酰氯。25℃攪拌此混合物18小時(shí)。用乙酸乙酯稀釋得到的混合物，用1N鹽酸水溶液(3X)洗滌。無水硫酸鎂干燥有機(jī)相，真空濃縮得到呈白色固體的(1R，2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)-環(huán)己烷羧酸。電噴霧質(zhì)譜為352.2(M+H)+實(shí)施例14叔-丁基(1R，2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)-環(huán)己烷羧酸在30ml甲苯配制的2.1g(6mmol)(1R，2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)-環(huán)己烷羧酸溶液中加入6ml(24mmol)N，N-二甲基甲酰胺二叔丁基乙縮醛。氮?dú)庵?10℃加熱得到的混合物4小時(shí)，然后冷卻至室溫。將溶液傾倒入硅膠柱的頂部。以10-20％乙酸乙酯/己烷洗脫，硅膠層析得到1.7g呈白色固體的叔-丁基(1R，2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)-環(huán)己烷羧酸。電噴霧質(zhì)譜為408.3(M+H)+實(shí)施例15(1R，2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基)-環(huán)己烷羧酸叔-丁酯在20ml DMF配制的1.38g(3.4mmol)(1R，2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}氨基)環(huán)己烷羧酸叔丁醇的溶液中加入0.164g(4.1mmol)60％氫化鈉。25℃攪拌得到的反應(yīng)混合物30分鐘，一次性加入0.26ml(4.1mmol)碘代甲烷。25℃攪拌此反應(yīng)混合物0.5小時(shí)，然后加入水和乙酸乙酯。用水洗滌有機(jī)物，無水碳酸鉀干燥，真空濃縮得到呈白色固體的(1R，2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基)-環(huán)己烷羧酸叔-丁酯。電噴霧質(zhì)譜為422.2(M+H)+實(shí)施例16(1R，2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基)-環(huán)己烷羧酸在20ml二氯甲烷配制的(1R，2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基)-環(huán)己烷羧酸叔-丁酯溶液中加入5ml三氟乙酸，室溫?cái)嚢璐嘶旌衔?小時(shí)。真空除去溶劑，以甲醇/二氯甲烷洗脫，硅膠層析殘留物。用乙酸乙酯/己烷研磨得到1.04g呈白色固體的(1R，2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基)-環(huán)己烷羧酸。電噴霧質(zhì)譜為364.3(M+H)+
實(shí)施例17(1R，2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基)-N-羥基環(huán)己烷甲酰胺0℃，在二氯甲烷配制的草酰氯(1.42ml在二氯甲烷中為2M的溶液)的溶液中加入二甲基甲酰胺(0.22ml)。15分鐘后，加入以二甲基甲酰胺配制的(1R，2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基)-環(huán)己烷羧酸溶液，室溫?cái)嚢璧玫降姆磻?yīng)混合物1小時(shí)。
在分液瓶中，在7.6ml THF和3.2ml水配制的0.987g鹽酸羥胺0℃混合物中加入3ml三乙胺?；旌虾?℃攪拌15分鐘，一次性加入?；热芤海缓笞尩玫降娜芤荷郎刂潦覝?，再攪拌18小時(shí)。然后在反應(yīng)瓶中加入乙酸乙酯和重碳酸鈉水溶液。用重碳酸鈉水溶液洗滌有機(jī)相，無水碳酸鉀干燥。真空濃縮，用二乙醚研磨得到呈白色固體的(485mg)(1R，2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基)-N-羥基環(huán)己烷羧酸。電噴霧質(zhì)譜為381.2(M+H)+實(shí)施例18(1R，2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)-N-羥基環(huán)己烷甲酰胺如實(shí)施例17所述的相同方法，用0.50g(1.42mmol)(1R，2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)環(huán)己烷羧酸生成0.32g呈白色固體的(1R，2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)-N-羥基環(huán)己烷甲酰胺。電噴霧質(zhì)譜為367.2(M+H)+實(shí)施例193-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)丙酸叔丁酯0℃，在20ml二氯甲烷配制的叔-丁基-2-氨基丙酸(2.0g，11.0mmol)溶液中加入三乙胺(6.75ml，48.4mmol)，然后加入4-(2-丁炔氧基)苯磺酰氯(2.94g，12.1mmol)。在此濃漿中加入10ml二氯甲烷。攪拌此混合物過夜，然后用二氯甲烷稀釋，順序用水、2N檸檬酸水溶液和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾、真空濃縮得到固體，然后用己烷/乙酸乙酯研磨得到呈灰白色固體的3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)丙酸叔丁酯(3.88g)，mp 63-65℃。分析C17H23NO5S計(jì)算值C，55.77；H，6.56；N，3.96，實(shí)測值C，57.68；H，6.42；N，3.90。電噴霧質(zhì)譜為354.2(M+H)+
實(shí)施例20N-{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀-β-丙氨酸按實(shí)施例16所述相同的流程，用3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)丙酸叔丁醇(1.0g，2.83mmol)生成呈白色固體的N-{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}-β-丙氨酸(1.12g)。電噴霧質(zhì)譜為296.2(M-H)-實(shí)施例213-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)-N-羥基丙酰胺在二甲基甲酰胺(5ml)配制的N-{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}-β-丙氨酸(0.80g，2.69mmol)溶液中加入1-羥基苯并三唑(0.436g，3.23mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺(0.67g，3.5mmol)。1小時(shí)后，加入50％羥胺水溶液(1.3ml)。攪拌此反應(yīng)混合物過夜，真空濃縮。加入乙酸乙酯，用水(2X)和鹽水洗滌有機(jī)相，然后無水硫酸鈉干燥。過濾、真空濃縮得到的白色固體，用乙酸乙酯研磨后生成呈白色固體的3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)-N-羥基丙酰胺(0.30g)，mp118-128℃。電噴霧質(zhì)譜為313.3(M+H)+實(shí)施例223-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基)丙酸叔丁酯0℃，在二甲基甲酰胺(5ml)配制的3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)丙酸叔丁酯(1.0g，2.83mmol)溶液中加入氫化鈉(3.39mmol)，然后加入碘代甲烷(211μl，3.39mmol)。72小時(shí)后，用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)混合物，用水和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾并真空濃縮后得到呈無色油狀的3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基)丙酸叔丁酯(1.0g)。電噴霧質(zhì)譜為368.2(M+H)+實(shí)施例23N-{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀-N-甲基-β-丙氨酸按實(shí)施例16所述相同的流程，用3-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基]丙酸叔丁酯(0.863g，2.34mmol)生成呈白色固體的N-{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀-N-甲基-β-丙氨酸(0.760g)，mp90-110℃。電噴霧質(zhì)譜為312.1(M+H)+實(shí)施例24
3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基)-N-羥基丙酰胺按實(shí)施例21所述，將N-{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基)-N-甲基-β-丙氨酸(0.7g，2.25mmol)轉(zhuǎn)化成3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基)-N-羥基丙酰胺(0.525g，白色固體)。分析C14H18N2O5S計(jì)算值C，51.52；H，5.56；N，8.58，實(shí)測值C，51.38；H，5.16；N，8.28。電噴霧質(zhì)譜為327.2(M+H)+實(shí)施例25(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基]環(huán)戊烷羧酸0℃，在1∶1水∶二甲基甲酰胺(10ml)配制的順式-2-氨基-1-環(huán)戊烷(1.0g，7.74mmol)溶液中加入碳酸鈉(2.7g，25.5mmol)，然后再加入4-(2-丁炔氧基)苯基磺酰氯(2.08g，8.5mmol)。讓反應(yīng)混合物升溫至室溫。攪拌過夜后，加入水和乙酸乙酯，用6N鹽酸將混合物酸化至pH＝1。用水和鹽水洗滌有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥。過濾并真空濃縮得到呈白色固體的(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基]環(huán)戊烷羧酸1.58g，mp105-135℃。電噴霧質(zhì)譜為336.4(M+H)+實(shí)施例26(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基]-N-羥基環(huán)戊烷羧酸按實(shí)施例21所述，將(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基]環(huán)戊烷羧酸(0.506g，1.5mmol)，轉(zhuǎn)化成(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基]-N-羥基環(huán)戊烷羧酸(0.28g)，得到灰白色固體(0.185g)，mp140-145℃。電噴霧質(zhì)譜為353.4(M+H)+實(shí)施例27(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基]環(huán)戊烷羧酸叔丁酯按實(shí)施例14所述，將(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}氨基]環(huán)戊烷羧酸(0.80g)轉(zhuǎn)化成呈白色晶體的(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基]環(huán)戊烷羧酸叔丁酯(0.60g)，mp97-110℃。分析C20H27NO5計(jì)算值C，61.05；H，6.92；N，3.56，實(shí)測值C，61.04；H，6.79；N，3.72。電噴霧質(zhì)譜為394.2(M+H)+實(shí)施例28(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基環(huán)戊烷羧酸叔丁酯將二甲基甲酰胺(4ml)配制的(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基環(huán)戊烷羧酸叔丁酯(0.50g，1.27mmol)用碳酸鉀(0.527g，3.81mmol)和碘代甲烷(95μl，1.53mmol)處理。18小時(shí)后，真空濃縮反應(yīng)混合物，用乙酸乙酯稀釋，用水和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾和真空濃縮得到呈白色固體的(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基環(huán)戊烷羧酸叔丁酯(0.495g)，mp131-133℃。電噴霧質(zhì)譜為408.2(M+H)+實(shí)施例29(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]環(huán)戊烷羧酸按實(shí)施例16所述，將(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基環(huán)戊烷羧酸(0.44g)叔丁酯轉(zhuǎn)化成呈白色固體的(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基]環(huán)戊烷羧酸(0.375g)。電噴霧質(zhì)譜為352.2(M+H)+實(shí)施例30(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基]N-羥基環(huán)戊烷甲酰胺按實(shí)施例21所述，將(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]環(huán)戊烷羧酸(0.320g)轉(zhuǎn)化成呈白色晶體的(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基]N-羥基環(huán)戊烷甲酰胺(0.105g)，mp160-164℃。分析C17H22N2O5S計(jì)算值C，55.72；H，6.05；N，7.64，實(shí)測值C，55.40；H，6.15；N，7.50。電噴霧質(zhì)譜為367.25(M+H)+實(shí)施例31(順式)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基環(huán)己烷羧酸按實(shí)施例25所述，將順式-2-氨基-1-環(huán)己烷(1.2g，8.38mmol)轉(zhuǎn)化成呈白色固體的(順式)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基環(huán)己烷羧酸(0.825g)，mp172-175℃。分析C17H21NO5S計(jì)算值C，58.10；H，6.02；N，3.99，實(shí)測值C，58.32；H，5.92；N，3.87。電噴霧質(zhì)譜為350.1(M-H)-實(shí)施例32(順式)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}氨基]-N-羥基環(huán)己烷甲酰胺按實(shí)施例21所述，將(順式)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基環(huán)己烷羧酸(0.300g，0.854mmol)轉(zhuǎn)化成呈灰白色泡沫狀的(順式)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}氨基]-N-羥基環(huán)己烷甲酰胺(0.210g)。電噴霧質(zhì)譜367.2(M+H)+實(shí)施例33(順式)-叔-丁基-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基]環(huán)己烷羧酸按實(shí)施例14所述，將(順式)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基環(huán)己烷羧酸(0.38g，1.08mmol)轉(zhuǎn)化成呈白色固體的(順式)-叔-丁基-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基]環(huán)己烷羧酸(0.450g)。電噴霧質(zhì)譜408.2(M+H)+實(shí)施例34(順式)-叔-丁基-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基]環(huán)己烷羧酸按實(shí)施例28所述所述，將(順式)-叔-丁基-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基]環(huán)己烷羧酸(0.390g，0.956mmol)轉(zhuǎn)化成呈無色油狀的(順式)-叔-丁基-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基]環(huán)己烷羧酸(0.260g)。電噴霧質(zhì)譜422.2(M+H)+實(shí)施例35(順式)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]環(huán)己烷羧酸按實(shí)施例16所述，將(順式)-叔-丁基-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基]環(huán)己烷羧酸(0.220g，0.522mmol)轉(zhuǎn)化成呈白色固體的(順式)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基]環(huán)己烷羧酸(0.190g)。電噴霧質(zhì)譜366.2(M+H)+實(shí)施例36(順式)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-N-羥基環(huán)己烷甲酰胺按實(shí)施例21所述，將(順式)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基]環(huán)己烷羧酸(0.165g，0.45mmol)轉(zhuǎn)化成呈灰白色固體的(順式)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基]-N-羥基環(huán)己烷甲酰胺(0.50g)。電噴霧質(zhì)譜381.2(M+H)+
實(shí)施例37(1R，2R，3S，4R)-(順式)-3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-羧酸按實(shí)施例25所述，將3-外-氨基二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-外-羧酸(1.0g，6.44mmol)轉(zhuǎn)化成呈白色固體的(1R，2R，3S，4R)-(順式)-3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-羧酸(1.32g)，mp195-215℃。電噴霧質(zhì)譜364.3(M+H)+實(shí)施例38(1R，2R，3S，4R)-(順式)-3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}氨基)-N-羥基二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-甲酰胺按實(shí)施例21所述，將(1R，2R，3S，4R)-(順式)-3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-羧酸(0.363g，1mmol)轉(zhuǎn)化成呈白色固體的(1R，2R，3S，4R)-(順式)-3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)-N-羥基二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-甲酰胺(0.30g)。分析C18H22N2O5S計(jì)算值C，57.13；H，5.86；N，7.4，實(shí)測值C，57.76；H，6.12；N，7.6。電噴霧質(zhì)譜為379.3(M+H)+實(shí)施例39(1R，2R，3S，4R)-(順式)-3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-羧酸叔丁酯按實(shí)施例14所述，將(1R，2R，3S，4R)-(順式)-3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-羧酸(0.80g，2.2mmol)轉(zhuǎn)化成呈白色固體的(1R，2R，3S，4R)-(順式)-3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-羧酸叔丁酯(0.69g)，mp94-99℃。分析C22H29NO5S計(jì)算值C，62.98；H，6.97；N，3.34，實(shí)測值C，62.65；H，6.95；N，3.7。電噴霧質(zhì)譜為420.3(M+H)+實(shí)施例40(1R，2R，3S，4R)-(順式)-3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基)二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-羧酸叔丁酯按實(shí)施例28所述，將(1R，2R，3S，4R)-(順式)-3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}氨基)二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-羧酸叔丁酯(0.55g，1.31mmol)轉(zhuǎn)化成呈白色固體的(1R，2R，3S，4R)-(順式)-3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基)二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-羧酸叔丁酯(0.54g)，mp120-125℃。分析C23H31NO5S計(jì)算值C，63.72；H，7.21；N，3.23，實(shí)測值C，63.34；H，7.11；N，3.55。電噴霧質(zhì)譜為434.2(M+H)+實(shí)施例41(1R，2R，3S，4R)-(順式)-3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基)二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-羧酸按實(shí)施例16所述，將(1R，2R，3S，4R)-(順式)-3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基)二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-羧酸叔丁酯(0.45g.1.04mmol)轉(zhuǎn)化成呈白色固體的(1R，2R，3S，4R)-(順式)-3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基)二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-羧酸(0.37g)，mp153-158℃。分析C19H23NO5S計(jì)算值C，60.46；H，6.14；N，3.71，實(shí)測值C，60.71；H，5.94；N，3.97。電噴霧質(zhì)譜為378.1(M+H)+實(shí)施例42(1R，2R，3S，4R)-(順式)-3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基)-N-羥基二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-甲酰胺按實(shí)施例21所述，將(1R，2R，3S，4R)-(順式)-3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基)二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-羧酸(0.30g，0.79mmol)轉(zhuǎn)化成(1R，2R，3S，4R)-(順式)-3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基)-N-羥基二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-甲酰胺(0.137g)。電噴霧質(zhì)譜為393.2(M+H)+藥理學(xué)以下的體外試驗(yàn)顯示本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，具有抑制基質(zhì)金屬蛋白酶或TACE的能力，并由此證明它們對治療受基質(zhì)金屬蛋白酶或TACE介導(dǎo)的疾病的效果。
測定MMP-1、MMP-9和MMP-13抑制的測試程序這些標(biāo)準(zhǔn)藥理測試程序是基于基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-1、MMP-13(膠原酶)或MMP-9(明膠酶)切割硫肽(thiopeptide)底物如Ac-Pro-Leu-Gly(2-巰基-4-甲基-戊醇基)-Leu-Gly-OEt，導(dǎo)致釋放出能與DTNB(5，5′-二硫二(2-硝基-苯甲酸)產(chǎn)生顏色反應(yīng)的底物產(chǎn)物。用顏色增加的速率衡量酶的活性。用溶于100％DMSO的20mM硫肽底物的新配制原液，將DTNB溶解在100％DMSO中作為100mM原液，室溫儲(chǔ)存在暗處。使用前用底物緩沖液(50mM HEPES pH7.5，5mMCaCl2)將底物和DTNB一起稀釋至1mM。用緩沖液(50mM HEPES，pH7.5，5mMCaCl2，0.02％Brij)將酶原液稀釋至所需的最終濃度。按緩沖液、酶、運(yùn)載體或抑制劑、和DTNB/底物的順序?qū)⑦@些物質(zhì)加到96孔板中(終反應(yīng)體積為200μl)，在405nm用分光光度議平板讀數(shù)儀上監(jiān)測顏色的增加5分鐘，繪制隨時(shí)間顏色增加的線性圖。
另外，使用熒光肽底物。在該測試程序中，肽底物含有熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)。一旦MMP切割底物，在熒光平板讀數(shù)儀上定量測定產(chǎn)生的熒光。在HCBC試驗(yàn)緩沖液(50mM HEPES，pH7.0，5mM Ca+2，0.02％Brij，0.5％半胱氨酸)中用人重組MMP-1、MMP-9或MMP-13進(jìn)行該試驗(yàn)。將底物溶解在甲醇中，以1mM等份冰凍儲(chǔ)存。該試驗(yàn)中，用HCBC緩沖液將底物和酶稀釋至所需的濃度。將化合物加到含酶的96孔板中，加入底物開始反應(yīng)。讀取(340nm激發(fā)，444nm發(fā)射)應(yīng)10分鐘，繪制隨時(shí)間熒光增加的線性圖。
對硫肽或熒光肽測試程序而言，計(jì)算直線的斜率，其代表反應(yīng)速率。證實(shí)反應(yīng)速率的線性(r2＞0.85)。計(jì)算對照速率的平均值(x±sem)，并用Dunnett多重比較檢驗(yàn)與藥物處理速率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(p＜0.05)。用多種劑量的藥物可得到劑量—反應(yīng)關(guān)系，用線性回歸估計(jì)95％CI的IC50值。
測定TACE抑制的試驗(yàn)程序用96孔黑色微量滴定板，各孔加入由10μl TACE(終濃度為1μg/ml)、70μl Tris緩沖液、pH7.4含有10％甘油(終濃度為10mM)、和10μl以DMSO配制的測試化合物(終濃度為1μM，DMSO濃度＜1％)組成的溶液，室溫培育10分鐘。各孔中加入熒光肽底物(終濃度為100μM)以引發(fā)反應(yīng)，然后在搖床上振蕩5秒。
讀取反應(yīng)10分鐘(340nm激發(fā)，420nm發(fā)射)，繪制隨時(shí)間熒光增加的線性圖。計(jì)算該線的斜率，其代表反應(yīng)速率。
證實(shí)反應(yīng)速率的線性(r2＞0.85)。計(jì)算對照速率的平均值(x±sem)，并用Dunnett多重比較檢驗(yàn)與藥物處理速率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(p＜0.05)。用多種劑量的藥物可得到劑量—反應(yīng)關(guān)系，用線性回歸估計(jì)95％CI的IC50值。
可溶性蛋白質(zhì)的人單核THP-1細(xì)胞分化試驗(yàn)(THP可溶性蛋白質(zhì)試驗(yàn))
有絲分裂刺激THP-1細(xì)胞致使分裂成巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞，伴有除其他蛋白質(zhì)外同時(shí)分泌腫瘤壞死因子(TNF-α)和TNF受體(TNF-R，p75/80和TNF-R p55/60)以及白細(xì)胞介素-8(IL-8)。另外，在該時(shí)間以后未受刺激的THP-1細(xì)胞分泌出p75/80和p55/60受體。稱為TNF-a轉(zhuǎn)化酶或TACE的酶介導(dǎo)了膜結(jié)合TNF-α的釋放和可能的TNF-R p75/80和TNF-R p55/60的釋放但無IL-8釋放?？捎迷撛囼?yàn)來證明抑制性或刺激性化合物對此TACE酶的作用和該化合物的細(xì)胞毒性結(jié)果。
THP-1細(xì)胞(由ATCC獲得)是一種人單核細(xì)胞系，獲自一個(gè)一歲的患急性單核細(xì)胞白血病男童的外周血液。它們可以在培養(yǎng)基中生長，且受促細(xì)胞分裂劑刺激后能分裂成巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞。
在該試驗(yàn)中，由上述生長的和以5×106ml/瓶冷凍保藏的ATCC原液中采集THP-1細(xì)胞。將一管接種到T25瓶中，其中含有16ml補(bǔ)充有Glutamax(Gibco)的RPMI-1640培養(yǎng)基(含10％胎牛血清、100單位/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素和5×10-5M 2-巰基-乙醇(THP-1培養(yǎng)基))。在用于試驗(yàn)前，將各管細(xì)胞培養(yǎng)約2星期，然后再使用4-6周來篩選化合物。在星期一和星期四傳代細(xì)胞至濃度1×105/ml。
為了進(jìn)行試驗(yàn)，37℃在5％CO2中，將THP-1細(xì)胞以1.091×106個(gè)細(xì)胞/ml(1.1ml/孔)在24孔平板中，與每孔含有50ml 24mg/ml的脂多糖(LPS)(CalbiochemLot#B13189)原液共培養(yǎng)24小時(shí)。同時(shí)將50ml/孔的藥物、運(yùn)載體或THP-1培養(yǎng)液置于適當(dāng)?shù)目字校K體積為1.2ml/孔。將標(biāo)準(zhǔn)化合物和測試化合物溶解在濃度為36mM的DMSO中，并從此濃度用THP-1培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)?shù)臐舛龋谂囵B(yǎng)開始時(shí)加到諸孔中，使終濃度為100mM、30mM、10mM、3mM、1mM、300nM和100nM。將與DMSO接觸的細(xì)胞限制在0.1％終濃度。試驗(yàn)中包括陽性對照孔，其中有促細(xì)胞分裂劑但無藥物。還包括運(yùn)載體對照孔，除加入終濃度為0.083％的DMSO外都與陽性對照相同。試驗(yàn)中還包括陰性對照孔，細(xì)胞中加入了運(yùn)載體但不加促細(xì)胞分裂劑或藥物?？赏ㄟ^用50ml/孔的THP-1培養(yǎng)基代替LPS評估化合物對受體基礎(chǔ)性(無刺激)分泌的作用。將平板置于設(shè)置為5％CO2和37℃的培養(yǎng)箱中。培養(yǎng)4小時(shí)后，取出300ml/孔組織培養(yǎng)物上清液(TCS)用于TNF-a ELISA。培養(yǎng)24小時(shí)后，取出700ml/孔TCS，用于TNF-R p75/80、TNF-R p55/60和IL-8 ELISA分析。
另外在24小時(shí)時(shí)，將細(xì)胞重懸浮于500μl/孔的THP-1培養(yǎng)液中收集各處理組的細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移到FACS管中。加入2ml/管0.5mg/ml二碘化丙錠原液(PI)(Boerhinger Mannheim cat.#1348639)。將這些樣品在Becton Dickinson FaxCaliberFLOW細(xì)胞記數(shù)儀上跑樣，以紅外線波長(FL3)測定各細(xì)胞攝取的染料量。只有膜受損的細(xì)胞(死或?yàn)l死)才吸收PI。通過計(jì)數(shù)未被PI染色的細(xì)胞除以樣品中細(xì)胞的總量來計(jì)算活細(xì)胞百分比。將藥物處理組的活力計(jì)算值與運(yùn)載體處理的促細(xì)胞分裂劑刺激組(“載體陽性對照”)的活力計(jì)算值相比較，確定“相當(dāng)于對照的變化百分比”。這個(gè)“相當(dāng)于對照的變化百分比”是表明藥物細(xì)胞毒性的一種指標(biāo)。
采用從R&D Systems購得的ELISAs測得THP-1細(xì)胞培養(yǎng)物的TCS中可溶性TNF-a、TNF-R p75/80和TNF-R p55/60和IL-8的量，通過用試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品所產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)曲線外推。用FLOW細(xì)胞記數(shù)儀測定了攝取或排斥PI的細(xì)胞數(shù)量，并用可購得的Cytologic軟件繪制直方圖直觀化各處理組(包括所有對照)的數(shù)據(jù)。
THP-1細(xì)胞培養(yǎng)物的反應(yīng)強(qiáng)度的生物學(xué)變化要求根據(jù)每種藥物的“載體陽性對照”的變化百分比為基礎(chǔ)對這些試驗(yàn)進(jìn)行比較。按以下公式計(jì)算各化合物濃度的各可溶性蛋白質(zhì)相當(dāng)于“載體陽性對照”的變化百分比 對于刺激條件下可溶性蛋白質(zhì)(TNF-a、p75/80、p55/60、IL-8)的研究，測定了重復(fù)孔的平均值pg/ml，結(jié)果以相當(dāng)于“載體陽性對照”的變化百分比表示。對于非刺激條件下可溶性蛋白質(zhì)(p75/80和p55/60受體)的研究，測定了重復(fù)孔的平均值pg/ml，結(jié)果用以下公式表示成相當(dāng)于“載體陽性對照”的變化百分比 用定制的軟件(使用JUMP統(tǒng)計(jì)軟件包)，由非線性的回歸分析計(jì)算出各化合物的IC50值。
對于細(xì)胞活力研究，測定了合并的重復(fù)孔的活力(PI排斥)，以相當(dāng)于“載體陽性對照”的變化百分比表示結(jié)果。將計(jì)算出的化合物處理組的活力值與計(jì)算出的“載體陽性對照”的活力值相比較，以確定以下的“相對于對照的變化百分比”。該“相對于對照的變化百分比”的值是藥物細(xì)胞毒性的一種指標(biāo)。 參考文獻(xiàn)Bjornberg，F(xiàn).，Lantz，M.，Olsson，I.，和Gullberg，U.“將p55和p75腫瘤壞死因子(TNF)受體加工成可溶性受體形式有關(guān)的機(jī)制”，Lymphokine Cytokine Res.13203-211，1994。
Gatanaga，T.，Hwang.C.，Gatanaga，M.，Cappuccini，F(xiàn).，Yamamoto，R.，和Granger，G.“體外PMA-和LPS刺激的人單核THP-1細(xì)胞對TNF mRNA合成、膜表達(dá)和釋放的調(diào)節(jié)”，Cellular Immun.1381-10，1991。
Tsuchiya，S.，Yamabe，M.，Yamagughi，Y.，Kobayashi，Y.，Konno，T.，和Tada，K.“人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系(THP-1)的建立和特性分析”，Int.J.Cancer.261711-176，1980。
下表I列出了上述體外基質(zhì)金屬蛋白酶抑制、TACE抑制和THP標(biāo)準(zhǔn)藥理測試方法的結(jié)果。
表1
aIC50(nM)b在3μM時(shí)的抑制根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)藥理測試方法，本發(fā)明的化合物可用于治療病癥如關(guān)節(jié)炎、腫瘤轉(zhuǎn)移、組織潰瘍、異常傷口愈合、牙周病、移植排斥、胰島素抗性、骨骼病和HIV感染等疾病。
本發(fā)明的化合物還可用于治療或抑制基質(zhì)金屬蛋白酶介導(dǎo)的病理變化如動(dòng)脈粥樣硬化、動(dòng)脈粥樣硬化斑形成、動(dòng)脈粥樣硬化斑破潰所致的冠脈血栓形成的復(fù)原、再狹窄、MMP-介導(dǎo)的骨質(zhì)疏松、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎性疾病、肌膚老化、新血管生成、腫瘤轉(zhuǎn)移、腫瘤生長、骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎、角膜潰瘍、蛋白尿、動(dòng)脈瘤病、創(chuàng)傷性關(guān)節(jié)損傷后的退化性軟骨丟失、神經(jīng)系統(tǒng)的脫髓鞘病、肝硬化、腎小球疾病、胎膜早破、腸炎病、年齡相關(guān)的黃斑變性、糖尿病視網(wǎng)膜病、增生性玻璃體視網(wǎng)膜變態(tài)、視網(wǎng)膜未熟病、眼部炎癥、圓錐形角膜、斯耶格倫綜合癥、近視、眼部腫瘤、眼部血管生成/血管再生和角膜移植排斥。
本發(fā)明的化合物可單獨(dú)給予或與藥用載體一起給予需要其的患者。藥用載體可以是固體或液體。
可采用的固體載體包括一種或多種物質(zhì)，這些載體也可作為增香劑、潤滑劑、穩(wěn)定劑、懸浮劑、填充劑、助流劑、助壓劑、粘合劑或藥片崩解劑或封裝材料。在粉狀制劑中，載體是分散得很細(xì)的固體，可與分散得很細(xì)的活性組分相混合。在片劑中，活性組分與適當(dāng)比例的具有必需的助壓特性的載體相混合，被壓制成所需的性狀和尺寸。粉末制劑和片劑較佳地含有多至99％活性組分。合適的固體載體包括如磷酸鈣、硬脂酸鎂、滑石粉、糖、乳糖、糊精、淀粉、明膠、纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉鹽、聚乙烯吡咯烷酮、低熔點(diǎn)蠟和離子交換樹脂。
液態(tài)載體可用于制備溶液、懸浮液、乳劑、糖漿和酏劑?？蓪⒈景l(fā)明的活性組分溶解于或懸浮于藥學(xué)上可接受的液態(tài)載體如水、有機(jī)溶劑、這兩者的混合物或藥學(xué)上可接受的油或脂肪中。液態(tài)載體可含有其他合適的藥用添加劑如穩(wěn)定劑、乳化劑、緩沖劑、防腐劑、甜味劑、增香劑、懸浮劑、增稠劑、色素、粘度調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑或滲透調(diào)節(jié)劑。合適的用于口服和腸胃外給藥的液態(tài)載體的例子包括水(尤其含有上述添加劑如纖維素衍生物，較佳地是羧甲基纖維素鈉鹽的溶液)、醇(包括一元醇和多元醇如甘油)和它們的衍生物，和油(如分級椰子油和花生油)。用于腸胃外給藥的載體也可以是油酯，如油酸乙酯和肉豆蔻酸異丙酯。無菌液態(tài)載體可用于腸胃外給藥的無菌液體形式的組合物中。
可將無菌溶液或懸浮液的液體藥物組合物用于例如肌內(nèi)、腹腔內(nèi)或皮下注射。也可靜脈內(nèi)注射給予無菌溶液?？诜o藥可以是液體或固體組合物形式。
可以常規(guī)栓劑的形式直腸給予本發(fā)明的化合物。對于鼻內(nèi)或支氣管內(nèi)吸入或吹入給藥，可將本發(fā)明的化合物配制成水溶液或部分水溶液，然后以氣霧劑形式使用。本發(fā)明的化合物還可以透皮給予，采用含有活性化合物和對該活性化合物為惰性、對皮膚無毒的載體的透皮貼片，通過皮膚讓該藥劑全身吸收送遞入血流。運(yùn)載體可以采取多種形式如乳劑、軟膏、糊劑、凝膠和包藏裝置。乳劑和軟膏可以是粘性液體或水包油或油包水類型的半固體乳劑。由分散在含該活性組分的石油或親水性石油中的吸收性粉末構(gòu)成的糊膏?？捎酶鞣N包藏裝置將該活性組分釋放到血流中，如覆蓋含有該活性組分的有或無載體的儲(chǔ)器、或含有該活性組分的基質(zhì)的半透膜。其他包藏裝置是本領(lǐng)域已知的。
必須由主治醫(yī)生主觀確定用于治療患MMP或TACE依賴性病癥的具體患者的劑量。所涉及的各種變化包括功能紊亂的嚴(yán)重程度、和患者的體形、年齡和反應(yīng)模式。通常從低于該化合物最佳劑量的小劑量開始治療。隨后逐漸增加劑量直到在此情況下達(dá)到最佳效果?？捎山o藥的醫(yī)生依據(jù)治療個(gè)體的經(jīng)驗(yàn)和標(biāo)準(zhǔn)的用藥原則，確定口服、腸胃外、鼻內(nèi)或支氣管內(nèi)給藥的精確劑量。
較佳地，此藥用組合物以單位劑量形式如片劑或膠囊。在該形式中，將此組合物再分成含有適當(dāng)量該活性組分的單位劑量；單位劑量形式可以是包裝的組合物如包裝的粉末、小瓶、安瓿、預(yù)先充滿的針筒或含有液體的小袋。單位劑量形式可以是例如膠囊或片劑本身，或者也可是適當(dāng)數(shù)量的包裝形式的這些組合物。
權(quán)利要求
1.一種具有下式的異羥肟酸及其藥學(xué)上可接受的鹽 其中C(＝O)NHOH部分和-NR5-部分連接于相鄰的碳原子；X是SO2或-P(O)R10；Y是5-10元雜芳基環(huán)，所述的雜芳基環(huán)的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S和O；苯基或萘基；條件是X和Z不連接于Y的相鄰原子；Z是O、NH、CH2或S；R5是氫或1-6個(gè)碳原子的烷基；R6和R7各是氫或甲基；R8是氫，1-6個(gè)碳原子的烷基，2-6個(gè)碳原子的鏈烯基，2-6個(gè)碳原子的炔基，3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，5-7元雜芳基，所述的雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，或5-7元雜環(huán)烷基，所述的雜環(huán)烷基的1或2個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，或苯基；R9是氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基或苯基；R10是1-6個(gè)碳原子的烷基，3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，苯基，5-7元雜芳基，所述的雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O；R11和R12各是氫，1-6個(gè)碳原子的烷基，3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，5-7元雜芳基，所述的雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，5-7元雜環(huán)烷基，所述的雜環(huán)烷基的1-2個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，或苯基，并且存在點(diǎn)線表示的任選雙鍵；或R11和R12及連接它們的碳原子一起形成5-10元飽和的或不飽和的單環(huán)或雙環(huán)烷基環(huán)，可任選地稠合于一5-7元飽和的或不飽和的環(huán)烷基環(huán)，5-7元雜芳基，所述的雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，5-7元雜環(huán)烷基，所述的雜環(huán)烷基的1或2個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，苯環(huán)或萘環(huán)；或R11和R12及連接它們的碳原子一起形成5-10元飽和的或不飽和的單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)烷基，所述的雙環(huán)雜環(huán)烷基的1-2個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，其可任選地稠合于一5-7元單環(huán)或雙環(huán)雜芳基，所述的雙環(huán)雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，5-7元飽和的或不飽和的環(huán)烷環(huán)或苯環(huán)或萘環(huán)；點(diǎn)線表示可任選的雙鍵；和n＝0-2。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的X是SO2。
3.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其特征在于，所述的Y是在1-或4-位被X和Z分別取代的苯環(huán)。
4.如權(quán)利要求1-3任一所述的化合物，其特征在于，所述的Z是氧。
5.如權(quán)利要求1-4任一所述的化合物，其特征在于，所述的R6和R7是氫。
6.如權(quán)利要求1-5任一所述的方法，其特征在于，所述的R8是CH2OH或甲基。
7.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物選自(1R，2R)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基]-N-羥基環(huán)己烷甲酰胺；(1R，2R)-2-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基)-N-羥基環(huán)己烷甲酰胺；3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}氨基]-N-羥基丙酰胺；3-({[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺酰基}(甲基)氨基]-N-羥基丙酰胺；(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基]-N-羥基環(huán)戊烷甲酰胺；(1R，2S)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基]-N-羥基環(huán)戊烷甲酰胺；(順式)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基]-N-羥基環(huán)己烷甲酰胺；(順式)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基]-N-羥基環(huán)己烷甲酰胺；(1R，2R，3S，4R)-(順式)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀氨基]-N-羥基二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-甲酰胺；和(1R，2R，3S，4R)-(順式)-2-[{[4-(2-丁炔氧基)苯基]磺?；鶀(甲基)氨基]-N-羥基二環(huán)[2.2.1]庚烷-2-甲酰胺。
8.一種制備權(quán)利要求1所述化合物的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步驟之一a)將式V的化合物或其活性衍生物與羥胺反應(yīng)，產(chǎn)生式B的相應(yīng)化合物 其中R5、R6、R7、R8、和R11R12、X、Y和Z及點(diǎn)線的定義如權(quán)利要求1所述，Q是OH或其活性衍生物；或b)將式VI的化合物去保護(hù)產(chǎn)生式B的相應(yīng)化合物 其中R5、R6、R7、R8、和R11R12、X、Y和Z及點(diǎn)線的定義如權(quán)利要求1所述，R30是合適的保護(hù)基團(tuán)；c)拆解式B化合物的旋光活性異構(gòu)體的混合物(如外消旋物)，分離出基本無其他對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的一種對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體；或d)用藥學(xué)上可接受的酸來酸化式B的堿性化合物，得到藥學(xué)上可接受的鹽。
9.一種如下式的化合物 其中R6和R7各是氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、-CN、-CCH；和R8是1-6個(gè)碳原子的烷基，2-6個(gè)碳原子的鏈烯基，2-6個(gè)碳原子的炔基，3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，苯基，萘基，5-10元雜芳基，所述的雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、O或S，或5-9元雜環(huán)烷基，所述的雜環(huán)烷基的1或2個(gè)雜原子選自N、NR9、O或S。
10.一種如下式的化合物 其中R6和R7各是氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、-CN、-CCH；R8是1-6個(gè)碳原子的烷基，2-6個(gè)碳原子的鏈烯基，2-6個(gè)碳原子的炔基，3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，苯基，萘基，5-10元雜芳基，所述的雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、O或S，或5-9元雜環(huán)烷基，所述的雜環(huán)烷基的1或2個(gè)雜原子選自N、NR9、O或S；和J是氟、溴、氯、1，2，4-三唑基、苯并三唑基或咪唑基。
11.一種抑制需要抑制受TNF-α轉(zhuǎn)化酶(TACE)介導(dǎo)的病理變化的哺乳動(dòng)物的方法，其特征在于，所述的方法包括給予所述的哺乳動(dòng)物治療有效劑量的下式化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 其中C(＝O)NHOH部分和-NR5-部分連接于相鄰的碳原子；X是SO2或-P(O)R10；Y是5-10元雜芳基環(huán)，所述的雜芳基環(huán)的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S和O、苯基或萘基；條件是X和Z不連接于Y的相鄰原子；Z是O、NH、CH2或S；R5是氫或1-6個(gè)碳原子的烷基；R6和R7各是氫或甲基；R8是氫，1-6個(gè)碳原子的烷基，2-6個(gè)碳原子的鏈烯基，2-6個(gè)碳原子的炔基，3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，5-7元雜芳基，所述的雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，或5-7元雜環(huán)烷基，所述的雜環(huán)烷基的1或2個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，或苯基；R9是氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基或苯基；R10是氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基、苯基、或L；R11和R12各是氫，1-6個(gè)碳原子的烷基，3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，5-7元雜芳基，所述的雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，5-7元雜環(huán)烷基，所述的雜環(huán)烷基的1-2個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，或苯基，并且存在點(diǎn)線表示的任選雙鍵；或R11和R12及連接它們的碳原子一起形成5-10元飽和的或不飽和的單環(huán)或雙環(huán)烷基環(huán)，可任選地稠合于-5-7元飽和的或不飽和的環(huán)烷基環(huán)，5-7元雜芳基，所述的雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，5-7元雜環(huán)烷基，所述的雜環(huán)烷基的1或2個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，苯環(huán)或萘環(huán)；或R11和R12及連接它們的碳原子一起形成5-10元飽和的或不飽和的單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)烷基，所述的雙環(huán)雜環(huán)烷基的1-2個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，可任選地稠合于一5-7元單環(huán)或雙環(huán)雜芳基，所述的雙環(huán)雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，5-7元飽和的或不飽和的環(huán)烷基環(huán)或苯環(huán)或萘環(huán)；點(diǎn)線表示的可任選的雙鍵；和n＝0-2。
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，所述治療的疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、移植排斥、惡病質(zhì)、炎癥、發(fā)燒、胰島素抗性、膿毒性休克、充血性心力衰竭、中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性疾病、腸炎病或HIV感染。
13.一種藥物組合物，其特征在于，它包含下式的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 其中C(＝0)NHOH部分和-NR5-部分連接于相鄰的碳原子；X是SO2或-P(O)R10；Y是5-10元雜芳基環(huán)，所述的雜芳基環(huán)的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S和O；苯基或萘基；條件是X和Z不連接于Y的相鄰原子；Z是O、NH、CH2或S；R5是氫或1-6個(gè)碳原子的烷基；R6和R7各是氫或甲基；R8是氫，1-6個(gè)碳原子的烷基，2-6個(gè)碳原子的鏈烯基，2-6個(gè)碳原子的炔基，3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，5-7元雜芳基，所述的雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，或5-7元雜環(huán)烷基，所述的雜環(huán)烷基的1或2個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，或苯基；R9是氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基或苯基；R10是氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基、苯基、或L；R11和R12各是氫，1-6個(gè)碳原子的烷基，3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，5-7元雜芳基，所述的雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，5-7元雜環(huán)烷基，所述的雜環(huán)烷基的1-2個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，或苯基，并且存在點(diǎn)線表示的任選雙鍵；或R11和R12及連接它們的碳原子一起形成5-10元飽和的或不飽和的單環(huán)或雙環(huán)烷基環(huán)，可任選地稠合于一5-7元飽和的或不飽和的環(huán)烷基環(huán)，5-7元雜芳基，所述的雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，5-7元雜環(huán)烷基，所述的雜環(huán)烷基的1或2個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，苯環(huán)或萘環(huán)；或R11和R12及連接它們的碳原子一起形成5-10元飽和的或不飽和的單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)烷基，所述的雙環(huán)雜環(huán)烷基的1-2個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，可任選地稠合于一5-7元單環(huán)或雙環(huán)雜芳基，所述的雙環(huán)雜芳基的1-3個(gè)雜原子選自N、NR9、S或O，5-7元飽和的或不飽和的環(huán)烷基環(huán)或苯環(huán)或萘環(huán)；點(diǎn)線表示可任選的雙鍵；和n＝0-2；和藥學(xué)上可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種式(B)的可用于治療受TNF—α介導(dǎo)的疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、膿毒病、AIDS、潰瘍性結(jié)腸炎、多發(fā)性硬化、局限性回腸炎和退化性軟骨喪失的異羥肟酸。在該式中點(diǎn)線表示可任選的雙鍵,R
文檔編號A61P27/00GK1337944SQ00803031
公開日2002年2月27日 申請日期2000年1月27日 優(yōu)先權(quán)日1999年1月27日
發(fā)明者J·I·萊文, J·M·陳, A·薩斯科 申請人:美國氰胺公司