嘧啶酰胺衍生物及其鹽的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及通式(Ⅰ)所示的嘧啶酰胺衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽，這些化合物的制備方法，含有這些化合物的藥物制劑及藥物組合物，以及這些化合物在制備治療和/或預(yù)防病毒感染的藥物中的用途。X如說(shuō)明書中所定義。
【專利說(shuō)明】
嘧啶酰胺衍生物及其鹽
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及嘧啶酰胺衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽，這 些化合物的制備方法，含有這些化合物的藥物制劑及藥物組合物，以及這些化合物在制備 治療和/或預(yù)防病毒感染的藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 流感是一種由流感病毒引起的急性病毒性呼吸道傳染病，嚴(yán)重危害人類健康。歷 史上流感有過(guò)幾次大規(guī)模流行，以1918年的流感流行最為嚴(yán)重，其死亡人數(shù)達(dá)到2000多萬(wàn)， 且死亡者多數(shù)為15~45歲的青壯年。目前，流感的威脅依然存在，據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界平均每年 有50~100萬(wàn)人死于流感。
[0003] 目前針對(duì)流感的治療藥物主要有兩大類:一類是20世紀(jì)60年代發(fā)現(xiàn)的M2型離子通 道抑制劑，以金剛烷胺為代表，只對(duì)甲型流感病毒有預(yù)防和治療作用;一類是神經(jīng)氨酸酶抑 制劑，對(duì)甲型和乙型流感病毒均有效，包括扎那米韋、奧司他韋、帕拉米韋和辛酸拉尼米韋。 然而耐藥菌株的大量出現(xiàn)限制了這兩類藥物的廣泛應(yīng)用。因此，亟需尋找具有新的作用機(jī) 制的抗流感藥物。
[0004] 流感病毒RNA聚合酶在流感病毒生命周期中發(fā)揮重要的作用，且高度保守，具有復(fù) 制酶活性及核酸內(nèi)切酶活性，成為抗流感病毒藥物的理想靶點(diǎn)。法匹拉韋是由日本富山化 學(xué)工業(yè)株式會(huì)社研究的流感病毒RNA聚合酶抑制劑，用于治療流感，臨床上效果顯著，于 2014年4月在日本獲批上市。
[0005] 除了流感病毒，法匹拉韋對(duì)其它病毒也可以發(fā)揮作用，比如沙粒病毒、白蛉熱病 毒、漢坦病毒、黃病毒、腸道病毒、甲病毒、西方馬腦炎病毒、副粘病毒、呼吸道合胞病毒和諾 和病毒等。埃博拉病毒也和流感病毒類似，都是RNA病毒，所以法匹拉韋有可能阻礙埃博拉 病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖，從而遏制感染。埃博拉今年爆發(fā)以來(lái)，已經(jīng)致西非2500人感染，1000多 人已經(jīng)死亡，目前尚無(wú)有效應(yīng)對(duì)埃博拉病毒的藥物。所以，美國(guó)衛(wèi)生部門正準(zhǔn)備加速審批是 否用法匹拉韋開(kāi)展抗埃博拉病毒臨床試驗(yàn)。
[0006] 法匹拉韋水溶性較低，對(duì)于制劑和給藥造成了很大的局限性，嚴(yán)重影響臨床使用 效果。再者，較差的水溶性會(huì)使制劑在存儲(chǔ)和/或運(yùn)輸過(guò)程中有結(jié)晶析出，從而導(dǎo)致藥物臨 床應(yīng)用的安全性存在隱患。目前報(bào)道了很多改善法匹拉韋水溶性的方法，例如成鹽后制成 無(wú)定型凍干制劑，但是工藝繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，非常不便利。
[0007] 本發(fā)明人對(duì)法匹拉韋進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)了法匹拉韋的前體藥物，即法匹拉韋磷酸 酯以及磷酸酯鹽，成功解決了法匹拉韋的水溶性低的技術(shù)難題。而且，法匹拉韋磷酸酯以及 磷酸酯鹽具有良好的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，更有利于臨床的使用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明將法匹拉韋與磷酸形成磷酸酯或磷酸酯鹽，能夠有效改善法匹拉韋的溶解 度低的弊端，具有良好的藥代動(dòng)力學(xué)，經(jīng)腸胃或腸胃外給藥，到達(dá)人體之后，經(jīng)過(guò)酶或非酶 作用，迅速轉(zhuǎn)化為活性化合物法匹拉韋從而發(fā)揮抗病毒功效。
[0009] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下：
[0010] 方案1.式（I)所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
[0012] 父選自-卩〇(〇!1)2、-?0(01〇(0-]\11+)、-?0(0-]\11+)(0-]\12 +)或-?0(0-)2.02+，]\11+和]\12+分別 是藥學(xué)上可接受的一價(jià)陽(yáng)離子，D 2+是藥學(xué)可接受的二價(jià)陽(yáng)離子。
[0013] 方案2.方案1中式(I)所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
[0014] 父選自-卩0(0!〇2、-?0(01〇(0-]\11+)、-?0(0-]\11+)(0-]\12 +)或-?0(0-)2.02+，]\11+和]\12+分別 獨(dú)立的選自Li+、Na+、K+或(4R)N+，每個(gè)R獨(dú)立的選自氫或&―4烷基;D 2+選自Mg2+、Ca2+、Ba2+。
[0015] 方案3.方案2中式(I)所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
[0016] X選自-P0(0H)2、-P0(0H)(0-Mi+h-PCKO-Mi+KO-Μ/)』，和 M2+分別獨(dú)立的選自 Li+、 Na+、K+。
[0017] 方案4.方案3中式(I)所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
[0018] X選自-P0(OH) 2、-P0(0H) (0-Mi+)、-P0(0-Μι+) (0-M2+)，Μι+和M2+分別為Na+。
[0019] 方案5.如下所述的化合物：
[0022] 本發(fā)明式（I)化合物的"藥學(xué)上可接受的鹽"是指式（I)化合物中存在的酸性官能 團(tuán)（例如-C00H、-OH、-P03等)與適當(dāng)?shù)臒o(wú)機(jī)或者有機(jī)陽(yáng)離子(堿)形成的鹽，包括與堿金屬或 堿土金屬形成的鹽、銨鹽，以及與含氮有機(jī)堿形成的鹽；以及式（I)化合物中存在的堿性官 能團(tuán)（例如-NH 2等）與適當(dāng)?shù)臒o(wú)機(jī)或者有機(jī)陰離子(酸)形成的鹽，包括與無(wú)機(jī)酸、有機(jī)酸形 成的鹽。
[0023] 本發(fā)明式（I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，可以與一種或多種藥用載體制成藥 學(xué)上可接受的藥物制劑，以口服、腸胃外等方式施用于需要這種治療的患者?？诜o藥時(shí)， 可以與常規(guī)的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、稀釋劑等制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、膠 囊劑、丸劑、顆粒劑等；用于腸胃外給藥時(shí)，可制成注射劑，包括注射液、注射用無(wú)菌粉末與 注射用濃溶液。制成注射劑時(shí)，可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，配制注射劑時(shí)，可 以不加入附加劑，也可根據(jù)藥物的性質(zhì)加入適宜的附加劑。
[0024] 本發(fā)明化合物的施用量和施用頻率可以根據(jù)臨床醫(yī)生或藥師的判斷考慮例如以 下的一些因素而作出調(diào)整:患者的年齡、體重、待治療病征的嚴(yán)重性。一般而言，以單次劑量 或分劑量給予患者的本發(fā)明化合物的日劑量可為50mg~5000mg，優(yōu)選100~2000mg，更優(yōu)選 500~1000mg 〇
[0025] 本發(fā)明式（I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，可以與一種或多種其他抗病毒藥物 制成藥物組合物，所述的其他抗病毒藥物包括阿昔洛韋、奧司他韋、扎那米韋、培拉米韋、拉 尼米韋、更昔洛韋、阿糖腺苷、膦甲酸、干擾素、金剛烷胺、利巴韋林。
[0026] 本發(fā)明式（I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，在制備治療和/或預(yù)防病毒感染的藥 物中的用途，所述的病毒感染包括病毒性呼吸道感染、流行性感冒、流行性腮腺炎、脊髓灰 質(zhì)炎、病毒性胃腸炎、病毒性肝炎、麻疹、風(fēng)疹、幼兒急疹、水痘、帶狀皰疹、天花、狂犬病、口 蹄疫、病毒性結(jié)膜炎、病毒性角膜炎、病毒性腦炎、病毒性出血熱，優(yōu)選流行性感冒和病毒性 出血熱。
[0027] 本發(fā)明式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的優(yōu)點(diǎn)：
[0028] 法匹拉韋因?yàn)槿芙舛炔顚?dǎo)致制劑難度大，進(jìn)一步導(dǎo)致動(dòng)物體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì) 差，而本發(fā)明化合物具有非常好的溶解性，方便給藥以及制劑的配置，可以保證制劑在存儲(chǔ) 和/或運(yùn)輸過(guò)程的穩(wěn)定性，降低臨床應(yīng)用的安全隱患。本發(fā)明化合物具有良好的藥代動(dòng)力學(xué) 特征，進(jìn)入體內(nèi)之后，迅速轉(zhuǎn)化為原藥，發(fā)揮藥理活性。
[0029] 以下進(jìn)一步闡述本發(fā)明化合物的有益效果，本發(fā)明其它化合物與試驗(yàn)中所列舉的 部分本發(fā)明化合物具有相同的有益效果，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明化合物僅具有下列有益 效果。
[0030] 實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明化合物的溶解性實(shí)驗(yàn)
[0031] 目的根據(jù)中國(guó)藥典2010年版二部凡例，用目測(cè)法觀察本發(fā)明化合物及對(duì)照藥的溶 解情況，并計(jì)算溶解度。
[0032] 測(cè)試物本發(fā)明化合物1，按照實(shí)施例方法1制備所得;對(duì)照藥法匹拉韋(北京澳合研 究院有限公司）
[0033]方法及結(jié)果
[0034] 1、ρΗ=9·0緩沖液配置
[0035] 稱取氯化鉀1.5g與硼酸1.24g，加入0.2mol/L氫氧化鈉溶液41.6mL和適量水，溶解 后再加水稀釋至400mL，搖勻，即得。
[0036] 2、對(duì)照藥法匹拉韋溶解度測(cè)定
[0037] 取對(duì)照藥法匹拉韋樣品4.90mg，加 pH= 9.0緩沖液30ul，振搖，不溶，再加50ul，振 搖，不溶，再加50ul，振搖，不溶，再加100ul，振搖，不溶，再加100ul，振搖，不溶，再加100ul， 振搖，不溶，再加1 〇〇u 1，振搖，不溶，再加100u 1，振搖，不溶，再加100ul，振搖，粉末溶解，顆 粒不溶，再加1 〇〇u 1，振搖，不溶，再加100u 1，振搖，不溶，再加50u 1，振搖，不溶，再加40u 1，振 搖，不溶，再加30ul，振搖，不溶，再加20ul，振搖，不溶，再加20ul，振搖，目測(cè)溶液澄清，樣品 已溶解，計(jì)算得到法匹拉韋的溶解度為4.6mg/ml。
[0038] 3、本發(fā)明化合物1溶解度測(cè)定
[0039] 取本發(fā)明化合物1樣品5 . Olmg，加 pH = 9.0緩沖液20μ1，振搖，不溶，再加20μ1，振 搖，不溶，再加20μ1，振搖，溶解，目測(cè)溶液澄清，樣品已溶解，計(jì)算得到本發(fā)明化合物1的溶 解度為 83.5mg/mL。
[0040] 4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0041] 藥典2010年版二部關(guān)于溶解度的規(guī)定，上述方法所測(cè)得溶解度換算之后結(jié)果如 下：
[0043] 極易溶解系指溶質(zhì)lg(ml)能在溶劑不到lml中溶解；
[0044] 易溶系指溶質(zhì)lg(ml)能在溶劑1~不到10ml中溶解；
[0045] 溶解系指溶質(zhì)lg(ml)能在溶劑10~不至Ij30ml中溶解；
[0046] 略溶系指溶質(zhì)lg(ml)能在溶劑30~不到100ml中溶解；
[0047] 微溶系指溶質(zhì)lg(ml)能在溶劑100~不至IjlOOOml中溶解；
[0048] 極微溶解系指溶質(zhì)lg(ml)能在溶劑1000~不到10000ml中溶解；
[0049] 幾乎不溶或不溶系指溶質(zhì)lg(ml)在溶劑10000ml中不能完全溶解。
[0050]實(shí)驗(yàn)結(jié)論
[0051] 根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)，本發(fā)明化合物1的溶解度屬于溶解，而對(duì)照藥屬于微溶，本發(fā)明化 合物溶解度是對(duì)照藥的約18倍。由此可見(jiàn)，本發(fā)明化合物1比對(duì)照藥具有良好的溶解度，差 異顯著。
[0052] 實(shí)驗(yàn)例2本發(fā)明化合物的大鼠藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)
[0053] 供試品:本發(fā)明化合物1，自制，其化學(xué)名稱和制備方法見(jiàn)制備實(shí)施例。
[0054]受試動(dòng)物:雄性SD大鼠，3只/給藥劑量/供試品，體重220-240g/只。
[0055]供試品溶液制備：
[0056] 0.2mol/LNa0H配制:稱取氫氧化鈉400mg，加入50ml純化水，超聲溶解，渦旋混勻。 [0057] pH9 · 0的緩沖鹽溶液：稱取0 · 75g氯化鉀與0 · 62g硼酸，加入20 · 8ml 0 · 2mol/LNa0H 液和適量純化水，溶解后加水稀釋至200ml，搖勻。
[0058]本發(fā)明化合物1靜脈注射（iv)給藥配制：稱取化合物75.13mg加入1.094ml pH9.0 的緩沖鹽溶液溶解，過(guò)0.22μπι濾膜后成澄清透明的溶液。
[0059]對(duì)照藥法匹拉韋靜脈注射（iv)給藥配制:稱取化合物30.02mg加入2ml ρΗ9.0的緩 沖鹽溶液，振搖，不溶，過(guò)0.22μπι濾膜后成澄清透明的溶液。
[0060]實(shí)驗(yàn)方法
[0061 ]將供試品藥液按照下表方法進(jìn)行給藥：
[0062]
[0063] 采血：
[0064] 采集時(shí)間點(diǎn)：藥后0.083h，0.25h，0.5h，lh，2h，4h，6h，8h，24h，30h.
[0065]每個(gè)時(shí)間點(diǎn)通過(guò)尾靜脈采取100yL左右全血，加入到肝素鈉抗凝管里，高速離心機(jī) 中8000轉(zhuǎn)/分鐘離心6min分離血漿，血漿于-80 °C冰箱凍存。
[0066] 血漿樣品分析：
[0067] 采用蛋白沉淀法，取20μυ??衆(zhòng)，加入300yL內(nèi)標(biāo)(含Tobutamide 100ng/ml的乙腈溶 液），1000轉(zhuǎn)/分鐘渦旋5min，加入300yL的水，禍旋5分鐘后，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心5min，取上清 液50yL，再加入150yL水，渦旋混勻，LC-MS/MS分析。
[0068] 表1 SD大鼠 PK評(píng)價(jià)結(jié)果（iv)
[0069]
[0070] AUCiast代表藥時(shí)曲線下面積0-t;
[0071] 由上述結(jié)果可以看出，本發(fā)明化合物具有較好的溶解度，利于給藥和代謝，在大鼠 體內(nèi)轉(zhuǎn)化成原藥法匹拉韋后，暴露量比直接給藥法匹拉韋顯著提高，可以有效的避開(kāi)溶解 度差、PK性質(zhì)不好的缺點(diǎn)，成藥性更好。
【具體實(shí)施方式】
[0072] 以下通過(guò)實(shí)施例形式的【具體實(shí)施方式】，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō) 明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下實(shí)施例。
[0073] 實(shí)施例1 3-氨基甲?；?5-氟吡嗪-2-基磷酸二鈉(化合物1)的制備
[0074] 1.二芐基(3-氨基甲酰基-5-氟吡嗪-2-基)磷酸酯的制備
[0076] 在10mL的兩口瓶中加入N，N-二甲基甲酰胺（5mL)和6-氟-3-羥基吡嗪-2-甲酰胺 (200mg，1 .27mmol)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫向反應(yīng)體系中分批加入NaH(60%，203mg， 5.08mmol)，然后攪拌1小時(shí)，分批加入四芐基二磷酸酯(820mg，1.52mmol)。加畢繼續(xù)室溫?cái)?拌3小時(shí)。過(guò)濾得固體，粗產(chǎn)物通過(guò)中壓制備純化(流動(dòng)相:CH 3CN，H20，1 %NH4HC03)，收集組 分并冷凍干燥，得到產(chǎn)物192mg(產(chǎn)率為36 % )，為黃色的固體。
[0077] 2.3-氨基甲?；?5-氟吡嗪-2-基磷酸二鈉的制備
[0079] 在50mL的茄型瓶中加入二芐基（3-氨基甲酰基-5-氟吡嗪-2-基）磷酸酯（192mg， 0.46mmol)和二氯甲烷(20mL)，室溫?cái)嚢璧渭尤谆骞柰?280mg，1.84mmol)，然后室溫?cái)?拌4小時(shí)。反應(yīng)混合物減壓濃縮，得到的殘余物溶于乙醚(50mL)，并攪拌10分鐘，濾除不溶固 體，有機(jī)相轉(zhuǎn)移到另一只lOOmL的三口瓶中降溫至0°C，向混合物中滴加氫氧化鈉(40mg)的 水(30mL)溶液，分去有機(jī)相，水相冷凍干燥得104mg(產(chǎn)率為80 % )黃色的固體。
[0080] LC-M: (ES，m/z): [M-44] - = 236.0
[0081 ] H-NMR: (300MHz，D20，ppm): δ7 · 860-7 · 887 (d，J = 8 · 1Hz，1H) ·
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 式(I)所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：其中， X選自-PO(OH) 2、-PO(OH) (0-Mi+)、-PO(0-Mi+) (0-M2+)或-PO(0-) 2 · D2+，Mi+和M2+分別是藥 學(xué)上可接受的一價(jià)陽(yáng)離子，D2+是藥學(xué)可接受的二價(jià)陽(yáng)離子。2. 權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽： 父選自-卩0(011)2、-?0(011)(0-]\11+)、-?0(0-]\11+)(0-]\12 +)或-?0(0-)2.02+，]\11+和]\12+分別獨(dú)立 的選自Li+、Na+、K+或(4R) N+，每個(gè)R獨(dú)立的選自氫或&―4烷基;D2+選自Mg2+、Ca 2+、Ba2+。3. 權(quán)利要求2所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽： X選自-PO (OH) 2、-PO (OH) (0-Mi+)、-PO (0-Mi+) (0-M2+)，Mi+和M2+分別獨(dú)立的選自 Li+、Na+、K + O4. 權(quán)利要求3所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽： X選自-PO(OH)2、-PO(OH) (0-Ml+)、-PO(0-Mi+) (0-M2+)，Mi+和M2+分別為Na+〇5. 如下所述的化合物：6. 藥物制劑，含有權(quán)利要求1~5任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及一種 或多種藥用載體。7. 藥物組合物，含有權(quán)利要求1~5任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及一 種或多種其他抗病毒藥物，所述的其他抗病毒藥物包括阿昔洛韋、奧司他韋、扎那米韋、培 拉米韋、拉尼米韋、更昔洛韋、阿糖腺苷、膦甲酸、干擾素、金剛烷胺、利巴韋林。8. 權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療和/或預(yù)防病毒感染的 藥物中的用途，所述的病毒感染包括病毒性呼吸道感染、流行性感冒、流行性腮腺炎、脊髓 灰質(zhì)炎、病毒性胃腸炎、病毒性肝炎、麻疹、風(fēng)疹、幼兒急疹、水痘、帶狀皰疹、天花、狂犬病、 口蹄疫、病毒性結(jié)膜炎、病毒性角膜炎、病毒性腦炎、病毒性出血熱。9. 權(quán)利要求8所述的病毒性感染為流行性感冒和病毒性出血熱。
【文檔編號(hào)】A61P31/22GK105884827SQ201510990316
【公開(kāi)日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2015年12月24日
【發(fā)明人】吳永謙
【申請(qǐng)人】山東軒竹醫(yī)藥科技有限公司