抗病毒藥物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及抗病毒藥物，具體涉及抗人類免疫缺乏病毒(HIV)的藥物及其藥物組合物，特別是涉及一種可作為逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶抑制劑的藥物，該逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶抑制劑具有式I所示的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
【專利說明】
抗病毒藥物
[00011 本申請(qǐng)是2014年8月14日提交的中國專利申請(qǐng)?zhí)?014103999347的分案申請(qǐng)。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及一種抗病毒藥物及其藥物組合物，具體涉及抗人類免疫缺乏病毒 (HIV)的藥物及其藥物組合物，特別是涉及一種可作為逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶抑制劑的藥物，該 逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶抑制劑具有式I所示的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
【背景技術(shù)】
[0003] 人類免疫缺乏病毒(HIV)是一種導(dǎo)致AIDS及其相關(guān)病變的病原性反轉(zhuǎn)錄病毒。由 于HIV的發(fā)現(xiàn)，對(duì)抗AIDS的抗病毒化學(xué)療法的發(fā)展已成為積極研究重點(diǎn)。有關(guān)AIDS的分子目 標(biāo)的研究參見Mitsua等人的文獻(xiàn)(Science，1990，ρρ· 1533-154) AIV蛋白酶(HIV PR)及天 門冬胺?；鞍酌甘紫缺豢死?Kramer)等人(Science 231,1580(1986))認(rèn)為是AIDS療 法的可能目標(biāo)。從此以后，即廣泛地確認(rèn)HIV PR抑制劑在治療AIDS時(shí)作為有效制劑的潛在 用途，有關(guān)HIV PR的醫(yī)療用途參見托馬希里(Tomaselli)等人的文獻(xiàn)(Chimica，0ggi，1991 年5 月，ρρ· 6-27)及J.P.胡弗（Huff)等人的文獻(xiàn)(J.Med.Chem. 34,2341-2327(1991))。在傳 統(tǒng)模擬天門冬胺酰基蛋白酶的過渡狀態(tài)中，羥基乙烯、二羥基乙烯、羥基乙胺和次膦酸電子 等排物(Bostere)似乎和HIV PR具有最大親合力。許多HIV PR的抑制劑已在不同細(xì)胞系統(tǒng) 中，在毫微摩爾范圍的濃度呈現(xiàn)抗病毒活性，且已說明在專利文獻(xiàn)中。
[0004] HIV蛋白酶在病毒復(fù)制過程中的主要作用是將gag和gag-pol基因產(chǎn)物裂解成病毒 成熟所需要的結(jié)構(gòu)蛋白（基質(zhì)、殼、核殼)和酶類(蛋白酶、整合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶），從而進(jìn)一步完 善病毒結(jié)構(gòu)。蛋白酶抑制劑(PI)就是阻止前體蛋白質(zhì)裂解，導(dǎo)致無感染病毒顆粒的堆積。
[0005] 藥效構(gòu)象研究表明，這類化合物的作用機(jī)制是主要以氫健的方式分別與蛋白酶的 Asp 25,Cly 27和Asp 29殘基相互作用，與蛋白酶活性基團(tuán)中的氨基酸殘基形成體相互作 用，從而達(dá)到抑制蛋白酶活性的目的，進(jìn)而阻遏了艾滋病病毒的復(fù)制，達(dá)到抗病毒作用。蛋 白酶抑制劑可進(jìn)入包括外周血在內(nèi)的多種組織器官而發(fā)揮抗病毒作用，因而療效深入而持 久。
[0006] 目前，已在臨床廣泛應(yīng)用的HIV蛋白酶抑制劑有:沙奎那韋（saquinavir)、茚地那 韋（indinavir)、利托那韋(ritonavir)、奈非那韋(neIf inavir)、安普那韋(amprenavir)和 洛匹那韋（lopinavir)。2003年又有atazanavir和fosamprenavir兩個(gè)新的蛋白酶抑制劑通 過了美國Ρ?)Α的審批。由Bristol-Myers Squibb公司研發(fā)的atazanavir是一種每天只需服 用一次的全新的蛋白酶抑制劑。它對(duì)胰島素和脂肪代謝影響非常小，病人沒有腹瀉等副作 用。能輕度增加膽紅素水平，個(gè)別患者出現(xiàn)黃疸等，但病人很少因此而停止用藥。
[0007] 這些蛋白酶抑制劑雖然能抑制HIV復(fù)制，但不能徹底消滅體內(nèi)的病毒，也不能阻止 體內(nèi)耐藥毒株的出現(xiàn)和傳播。蛋白酶抑制劑PI應(yīng)用后不僅體內(nèi)病毒的數(shù)量明顯下降，同時(shí) 淋巴細(xì)胞中T輔助細(xì)胞-CD4細(xì)胞則有所增加。然后長期使用這些蛋白酶抑制劑產(chǎn)生明顯的 毒副作用和耐藥性。脂代謝紊亂是多種副作用中最突出且最復(fù)雜的，臨床表現(xiàn)為面部和外 周脂肪消耗，腹、背、胸部脂肪積聚。病人出現(xiàn)高甘油三酯血癥和高膽固醇血癥、乳酸和血糖 升高、對(duì)胰島素產(chǎn)生耐藥性等。其次是耐藥性，尤其是交叉耐藥性是導(dǎo)致臨床治療失敗的一 個(gè)主要原因。研究表明，發(fā)生PI耐藥的機(jī)制比NRIT和NNRTI更復(fù)雜，往往涉及多點(diǎn)基因突變。 一般來說，蛋白酶底物結(jié)合區(qū)單一突變，可使病毒對(duì)藥物的耐受性增加10倍。若蛋白酶S1亞 區(qū)82位纈氨酸或84位異亮氨酸被取代，則耐受性可增至30倍，如果82與84位殘基同時(shí)突變， 可使藥物治療效果下降100倍。使高劑量PI會(huì)比使用低劑量PI延遲耐藥性的產(chǎn)生，與核苷類 藥物的聯(lián)合應(yīng)用也能減少耐藥性的產(chǎn)生。還有耐藥性的產(chǎn)生也由于高的病毒復(fù)制速率，逆 轉(zhuǎn)錄酶在逆轉(zhuǎn)錄過程中的出錯(cuò)和在蛋白酶抑制劑的選擇性作用下的進(jìn)化結(jié)果。另外PI其復(fù) 雜的服用方法、心血管疾病高風(fēng)險(xiǎn)使它不適應(yīng)于依從性差、糖尿病、心血管疾病的患者。
[0008]已知以下式I化合物是一種有效的逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶抑制劑
[0010]其分子式:(：321141詠他2〇9?，分子量730.66，其典型的英文名可以稱為 ：卜81^13-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-Phosphonooxy-3-(N-quinaldoyl-L-asparaginyl)amin0-4-phenylbutylcarbazate Disodium，典型的中文名可稱為：3_異丙基_3_[ (2S, 3S)_2_勝駿氧 基-3-(N-喹啉酰基-L-天門冬?；?氨基-4-苯基丁基肼基甲酸叔丁酯二鈉，或者典型的中 文名可稱為:3_異丙基_3_[ (2S，3S)_2_勝駿氧基_3_(N_卩奎琳醜基-L-天門冬醜基)氛基_4_ 苯基丁基肼基甲酸叔丁酯二鈉。
[0011] 在式I化合物的結(jié)構(gòu)式中，連接于苯基和異丙基之間的丁基的2位和3位碳均為手 性碳。
[0012] 盡管制藥工作者在藥品質(zhì)量控制中有較強(qiáng)的能力在藥品生產(chǎn)企業(yè)對(duì)原料藥實(shí)現(xiàn) 有效的控制;但是，當(dāng)將原料藥物制成制劑以后，進(jìn)入流通領(lǐng)域，以及進(jìn)入臨床應(yīng)用中時(shí)，非 生產(chǎn)企業(yè)人員(包括物流人員、醫(yī)護(hù)人員、患者等)對(duì)制劑的內(nèi)在的把控能力會(huì)大大減弱。
[0013] 因此，提供一種具有優(yōu)良品質(zhì)例如具有穩(wěn)定藥學(xué)特征的產(chǎn)品，特別是式I化合物的 原料藥或者由其制成的制劑，仍然是本領(lǐng)域技術(shù)人員令人期待的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 本發(fā)明的目的在于提供一種具有優(yōu)良品質(zhì)例如具有穩(wěn)定藥學(xué)特征的產(chǎn)品，特別是 式I化合物的原料藥或者由其制成的制劑。本發(fā)明人已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)，通過將式I化合 物的原料藥中的雜質(zhì)lb控制在一定范圍以下時(shí)，該原料藥與常規(guī)的藥用輔料特別是糖類組 合以制成藥物制劑時(shí)，該種藥物制劑具有優(yōu)異的穩(wěn)定性特別是雜質(zhì)la的增長可以維持在非 常低的范圍內(nèi)。本發(fā)明基于此發(fā)現(xiàn)而得以完成。
[0015] 為此，本發(fā)明第一方面提供了一種藥用原料藥，其活性成分為以下式I化合物：
[0017] 根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥用原料藥，其中含有97%以上的式I化合 物，例如含有97.5 %以上的式I化合物，例如含有98 %以上的式I化合物。
[0018] 根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥用原料藥，其中含有97%~103%的式I化 合物，例如含有97.5%~102.5%上的式I化合物，例如含有98 %~102 %的式I化合物。
[0019] 根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥用原料藥，其中還含有(例如痕量的）作為 雜質(zhì)存在的以下式la化合物：
[0020]
該式la化合物是式I化合物的未磷酸酯化的 化合物，其分子式:C32H42N6O6，分子量606.72。而式I化合物的分子式:C32H4iN6Na2〇9P，分子量 730.66。
[0021] 在本發(fā)明中，式la化合物亦可稱為雜質(zhì)la或者可稱為la或者可稱為la雜質(zhì)或者其 它類似稱謂。
[0022]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥用原料藥，其中相對(duì)于式I化合物而言，式 la化合物的含量小于2%，例如小于1.75%，例如小于1.5%，例如小于1.25%，例如小于 1.0%，例如小于0.75%。
[0023]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥用原料藥，其中相對(duì)于式I化合物而言，式 la化合物的含量為0.002~2%，例如為0.002~1.75%，例如為0.002~1.5%，例如為0.002 ~1.25%，例如為0.002~1.0%，例如為0.002~0.75%。
[0024]在本發(fā)明中，短語"對(duì)于式I化合物而言，式la化合物的含量"是指對(duì)于所涉及的物 料中，式la化合物相對(duì)于式I化合物的量。例如對(duì)于某一物料中若其中包含100mg式I化合 物，經(jīng)測(cè)定其中還包含有0.5mg的式la化合物，則對(duì)于式I化合物而言，式la化合物的量為 0.5%。對(duì)于其它雜質(zhì)相對(duì)于式I化合物的量的類似表述亦有類似含義。上述"含量"亦可通 過本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定得到。
[0025]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥用原料藥，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式I a化合物峰面積與式I化合物峰面積的比小于2 %，例如小于1.7 5 %，例如小于 1.5%，例如小于1.25%，例如小于1.0%，例如小于0.75%。
[0026]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥用原料藥，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式la化合物峰面積與式I化合物峰面積的比為0.002~2%，例如為0.002~1.75%，例 如為0 · 002~1 · 5%，例如為0 · 002~1 · 25%，例如為0 · 002~1 · 0%，例如為0 · 002~0 · 75%。 [0027]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥用原料藥，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式I化合物峰面積與式la化合物峰面積的比大于50,例如大于57,例如大于67,例如大 于80,例如大于100,例如大于133。
[0028]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥用原料藥，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式I化合物峰面積與式la化合物峰面積的比為50~50000,例如為57~50000,例如為67 ~50000，例如為80~50000，例如為100~50000，例如為133~50000。
[0029] 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，式la化合物體內(nèi)行為特征從藥學(xué)角度講遠(yuǎn)不及式I化合物甚至是不能 接受的，因此在本發(fā)明第一方面的藥用原料藥中（以及本發(fā)明第二方面的藥物組合物中）將 式la化合物的量控制在一定量以下是有必要的。例如可以參考本領(lǐng)域一般對(duì)雜質(zhì)的控制限 度要求(通常為〈1%，例如〈0.75%)。
[0030] 根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥用原料藥，其中還含有(例如痕量的）作為 雜質(zhì)存在的以下式lb化合物：
[0031： 該式lb化合物是式la化合物的次磷酸酯。 ?-
[0032]在本發(fā)明中，式lb化合物亦可稱為雜質(zhì)lb或者可稱為lb或者可稱為lb雜質(zhì)或者其 它類似稱謂。
[0033]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥用原料藥，其中相對(duì)于式I化合物而言，式 lb化合物的含量小于1 %，例如小于0.75%，例如小于0.5%，例如小于0.4%，例如小于 0.3%，例如小于0.25%。
[0034]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥用原料藥，其中相對(duì)于式I化合物而言，式 lb化合物的含量為0.002~1 %，例如為0.002~0.75%，例如為0.002~0.5%，例如為0.002 ~0.4%，例如為0.002~0.3%，例如為0.002~0.25%。
[0035]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥用原料藥，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式I b化合物峰面積與式I化合物峰面積的比小于1 %，例如小于0.7 5 %，例如小于 0.5%，例如小于0.4%，例如小于0.3%，例如小于0.25%。
[0036]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥用原料藥，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式lb化合物峰面積與式I化合物峰面積的比為0.002~1 %，例如為0.002~0.75%，例 如為0 · 002~0 · 5%，例如為0 · 002~0 · 4%，例如為0 · 002~0 · 3%，例如為0 · 002~0 · 25%。 [0037]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥用原料藥，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式I化合物峰面積與式lb化合物峰面積的比大于100,例如大于133,例如大于200,例如 大于250,例如大于333,例如大于400。
[0038]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥用原料藥，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式I化合物峰面積與式lb化合物峰面積的比為100~50000,例如為133~50000,例如為 200~50000，例如為250~50000，例如為333~50000，例如為400~50000。
[0039]已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)含有一定量式lb化合物的本發(fā)明第一方面藥用原料藥與作為某些常 規(guī)藥用輔料特別是糖類混合時(shí)，其中雜質(zhì)式la化合物會(huì)隨著物料的貯藏時(shí)間延長而出現(xiàn)與 式lb化合物含量有關(guān)的增長趨勢(shì)。即，當(dāng)藥用原料藥與此類藥用輔料混合時(shí)，該藥用原料藥 中的式lb化合物高達(dá)一定量以上時(shí)，式lb化合物量越高則式la化合物增長越大;而將該藥 用原料藥中的式lb化合物控制在一定量以下時(shí)，在該藥用原料藥與上述藥用輔料混合時(shí)其 中式la化合物的增長不明顯。這是完全出人意料的，并且具有顯著的制藥意義，因?yàn)樽鳛橐?種藥用原料藥，特別是在將其制成口服給藥的藥用制劑時(shí)，糖類例如乳糖、甘露醇、山梨醇、 蔗糖等對(duì)于制備此類口服給藥制劑是極具價(jià)值的；而當(dāng)該藥用原料藥中的式lb化合物的量 控制在一定量以下時(shí)，其所制成的口服制劑隨著貯藏時(shí)間的延長，作為雜質(zhì)的式la化合物 不會(huì)明顯地增長，這對(duì)于給臨床提供一種安全性良好的制劑是極為有益的。但是當(dāng)該藥用 原料藥中的式lb化合物的量較高是地，該藥用原料藥無法與上述輔料一起制備口服制劑， 這將大大限制該藥用原料藥在制備制劑時(shí)輔料的選擇范圍，因?yàn)檫@類輔料是制劑學(xué)上廉價(jià) 且好用的輔料。
[0040]根據(jù)本發(fā)明，其中所述【HPLC-A】法是一種高效液相色譜法，其可用于同時(shí)測(cè)定各 種物料(包括本發(fā)明的藥用原料藥以及由該藥用原料藥制成的藥物組合物）中的式I化合 物、式la化合物、式lb化合物三者的含量。
[0041] 根據(jù)本發(fā)明，涉及的【HPLC-A】法具體如下：
[0042] (i)色譜條件：
[0043]照中國藥典2010年版二部附錄V D所載高效液相色譜法進(jìn)行，
[0044] 色譜柱：固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠的色譜柱[該色譜柱是典型的C18色譜柱， 其可以容易地從商業(yè)途徑購得，例如Diamonsil Ci8柱、Phenomenex Gemini Ci8柱等，在本 發(fā)明下文的具體試驗(yàn)中，如未另外說明，使用的是Diamonsil C18色譜柱，其規(guī)格可以為250 X4.6mm，5ym]，
[0045] 流速：l.〇ml/min，
[0046] 流動(dòng)相A:0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液（用氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH至3.0)，流動(dòng)相B:乙 臆，
[0047] 線性梯度洗脫程序：
[0049] 檢測(cè)波長:237nm，
[0050] 柱溫：25 Γ，
[0051] 進(jìn)樣量:20μ1，
[0052] (ii)配液
[0053] 供試液:取含式I化合物100mg的供試品[該供試品可以是式I化合物的藥用原料 藥，則此時(shí)稱樣量約為l00mg;該供試品還可以是使用式I化合物的藥用原料藥為原料配制 成的藥物組合物例如藥物制劑，則此時(shí)稱取的物料中包含式I化合物的量約為l00mg]，精密 稱定，置l〇〇ml量瓶中，加50%乙腈溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，必要時(shí)過濾，即得，作為供 試液(其中式I化合物濃度約l〇〇〇μg/ml);
[0054] 對(duì)照溶液：精密吸取供試液lml置100ml量瓶中，加50 %乙腈溶液稀釋至刻度，搖 勻；精密量取該溶液l〇ml置100ml量瓶中，加50 %乙腈溶液稀釋至刻度，搖勻，即得，作為對(duì) 照溶液(其中式I化合物濃度約lμg/ml);
[0055] la溶液:取式la化合物10mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加50%乙腈溶液溶解并稀 釋至刻度，搖勻(在此稱為la液，約100μg/ml);精密量取該溶液10ml置100ml量瓶中，加50% 乙腈溶液稀釋至刻度，搖勻，即得，作為la溶液(其中式la化合物濃度約10μg/ml);
[0056] lb溶液:取式lb化合物10mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加50%乙腈溶液溶解并稀 釋至刻度，搖勻(在此稱為lb液，約100μg/ml);精密量取該溶液10ml置100ml量瓶中，加50% 乙腈溶液稀釋至刻度，搖勻，即得，作為lb溶液(其中式lb化合物濃度約10μg/ml);
[0057] 系統(tǒng)適用性溶液:分別精密吸取供試液、100μg/ml的la液、100μg/ml的lb液各lml， 置于同一個(gè)l〇ml的量瓶中，加50%乙腈溶液稀釋至刻度，搖勻，即得（I lOOμg/ml+Ia 10yg/ ml+Ib 10μg/ml)；
[0058] (iii)測(cè)定和結(jié)果計(jì)算：
[0059] 精密吸取供試液、對(duì)照溶液、la溶液、lb溶液、系統(tǒng)適用性溶液各20yL分別注入液 相色譜儀，分別記錄色譜圖；
[0060] 峰歸屬和保留時(shí)間：根據(jù)對(duì)照溶液、la溶液、lb溶液三者所得色譜圖確定式I化合 物、式la化合物、式lb化合物三者的保留時(shí)間，并據(jù)此確定系統(tǒng)適用性溶液色譜圖中各峰的 歸屬以及供試液中各色譜峰的歸屬(一般而言，在該系統(tǒng)適用性溶液所得色譜圖中出峰順 序依次為式I化合物、式lb化合物、式la化合物）；
[0061] 系統(tǒng)適用性試驗(yàn):在系統(tǒng)適用性溶液測(cè)試所得的色譜圖中，式I化合物與式lb化合 物峰之間的分離度至少為1.5;
[0062] 在供試液色譜圖中，如果檢測(cè)到式la化合物，則可用以下計(jì)算式計(jì)算該雜質(zhì)la的 含量：
[0064] 上述術(shù)語"雜質(zhì)la含量（％ )"其含義相當(dāng)于本發(fā)明上文所述短語"相對(duì)于式I化合 物而言，式la化合物的含量"。
[0065] 在供試液色譜圖中，如果檢測(cè)到式lb化合物，則可用以下計(jì)算式計(jì)算該雜質(zhì)lb的 含量：
[0067] 上述術(shù)語"雜質(zhì)lb含量（％ )"其含義相當(dāng)于本發(fā)明上文所述短語"相對(duì)于式I化合 物而言，式lb化合物的含量"。
[0068] 在供試液色譜圖中，如果檢測(cè)到式la化合物，則可用以下計(jì)算式計(jì)算式la化合物 峰面積與式I化合物峰面積的比（％ :
[0070]在供試液色譜圖中，如果檢測(cè)到式lb化合物，則可用以下計(jì)算式計(jì)算式lb化合物 峰面積與式I化合物峰面積的比（％ :
[0072] 或者，在本發(fā)明中，還可以用"式I化合物峰面積與式la化合物峰面積的比"和"式I 化合物峰面積與式lb化合物峰面積的比"表示式la化合物和式lb化合物相對(duì)于式I化合物 的量。
[0073] 在供試液色譜圖中，如果檢測(cè)到式la化合物，則可用以下計(jì)算式計(jì)算式la化合物 峰面積與式I化合物峰面積的比：
[0075]在供試液色譜圖中，如果檢測(cè)到式lb化合物，則可用以下計(jì)算式計(jì)算式lb化合物 峰面積與式I化合物峰面積的比：
[0077]另外，通過以上【HPLC-A】法，還可以通過配制相當(dāng)濃度的式I化合物對(duì)照品（作為 分析用對(duì)照品，例如其含量大于99.8%)溶液，通過外標(biāo)法測(cè)定供試品中的式I化合物含量 (絕對(duì)含量，即每克供試品中式I化合物的質(zhì)量，％，w/w)。
[0078]上述【HPLC-A】法測(cè)試的"供試品"，這種物料既可以是以式I化合物形式提供的藥 用原料藥或其粗品，亦可以是以它們?yōu)榛钚猿煞植⑻砑佑衅渌幱幂o料配制而成的藥物組 合物，例如藥物制劑，例如片劑等，不論是藥用原料藥還是粗品還是藥物組合物，在供試液 配制過程中稱量供試品時(shí)將其折算成含式I化合物約l〇〇mg的量即可，雜質(zhì)la和雜質(zhì)lb含量 的計(jì)算不會(huì)因供試品稱量準(zhǔn)確性或者其它成分例如藥用輔料的存在而受到影響。
[0079]另外，鑒于分析方法是容易得到改進(jìn)的，并且式la化合物、式lb化合物是容易獲得 的。因此在本發(fā)明中描述各種物料例如藥用原料藥或其粗品或由其制備成的藥物組合物中 的式la化合物、式lb化合物含量時(shí)，無需要限定其是否一定是照【HPLC-A】法測(cè)試得到的結(jié) 果，特別是在描述供試品中雜質(zhì)相對(duì)于式I化合物的含量時(shí)。
[0080] 進(jìn)一步地，本發(fā)明第二方面提供了一種藥物組合物，其是由本發(fā)明第二方面任一 實(shí)施方案所述藥用原料藥和藥用輔料一起制備得到的。
[0081] 根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中式I化合物占該藥物組合 物總重量的10~90%，例如20~80%，例如30~70%。
[0082] 根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中還含有(例如痕量的）作為 雜質(zhì)存在的以下式la化合物：
[0084]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中相對(duì)于式I化合物而言，式 la化合物的含量小于2%，例如小于1.75%，例如小于1.5%，例如小于1.25%，例如小于 1.0%，例如小于0.75%。
[0085]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中相對(duì)于式I化合物而言，式 la化合物的含量為0.002~2%，例如為0.002~1.75%，例如為0.002~1.5%，例如為0.002 ~1.25%，例如為0.002~1.0%，例如為0.002~0.75%。
[0086]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式I a化合物峰面積與式I化合物峰面積的比小于2 %，例如小于1.7 5 %，例如小于 1.5%，例如小于1.25%，例如小于1.0%，例如小于0.75%。
[0087]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式la化合物峰面積與式I化合物峰面積的比為0.002~2%，例如為0.002~1.75%，例 如為0 · 002~1 · 5%，例如為0 · 002~1 · 25%，例如為0 · 002~1 · 0%，例如為0 · 002~0 · 75%。 [0088]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式I化合物峰面積與式la化合物峰面積的比大于50,例如大于57,例如大于67,例如大 于80,例如大于100,例如大于133。
[0089]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式I化合物峰面積與式la化合物峰面積的比為50~50000,例如為57~50000,例如為67 ~50000，例如為80~50000，例如為100~50000，例如為133~50000。
[0090]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中還含有(例如痕量的）作為 雜質(zhì)存在的以下式lb化合物：
[0092] 根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中相對(duì)于式I化合物而言，式 lb化合物的含量小于1 %，例如小于0.75%，例如小于0.5%，例如小于0.4%，例如小于 0.3%，例如小于0.25%。
[0093] 根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中相對(duì)于式I化合物而言，式 lb化合物的含量為0.002~1 %，例如為0.002~0.75%，例如為0.002~0.5%，例如為0.002 ~0.4%，例如為0.002~0.3%，例如為0.002~0.25%。
[0094]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式I b化合物峰面積與式I化合物峰面積的比小于1 %，例如小于0.7 5 %，例如小于 0.5%，例如小于0.4%，例如小于0.3%，例如小于0.25%。
[0095]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式lb化合物峰面積與式I化合物峰面積的比為0.002~1 %，例如為0.002~0.75%，例 如為0 · 002~0 · 5%，例如為0 · 002~0 · 4%，例如為0 · 002~0 · 3%，例如為0 · 002~0 · 25%。 [0096]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式I化合物峰面積與式lb化合物峰面積的比大于100,例如大于133,例如大于200,例如 大于250,例如大于333,例如大于400。
[0097]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式I化合物峰面積與式lb化合物峰面積的比為100~50000,例如為133~50000,例如為 200~50000，例如為250~50000，例如為333~50000，例如為400~50000。
[0098] 根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中所述的藥用輔料包括選自 下列的糖類:乳糖、甘露醇、山梨醇、蔗糖等。
[0099] 根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其是呈片劑、膠囊劑、或顆粒劑 的形式。
[0100] 根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其是呈單位劑量的藥物制劑形 式。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物制劑的每個(gè)單位劑量中包括1~1 OOOmg的式I化合物，例如 包括10~750mg的式I化合物，例如包括20~500mg的式I化合物。
[0101] 根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其是呈片劑或膠囊劑的形式， 其中還任選地包括藥學(xué)常規(guī)的稀釋劑(例如但不限于淀粉及其衍生物例如預(yù)膠化淀粉、改 良淀粉，微晶纖維素等）、崩解劑(例如但不限交聯(lián)聚維酮、羧甲基淀粉鈉等）、粘合劑(例如 但不限于PVP、HPMC等）、潤滑劑/助流劑(例如但不限于硬脂酸鎂、滑石粉等)等。
[0102] 根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其在40°C條件下密封、避光放 置5個(gè)月，測(cè)定并計(jì)算在此條件下處置5個(gè)月后某雜質(zhì)相對(duì)于0月時(shí)的含量增加百分?jǐn)?shù)，其中 照【HPLC-A】測(cè)定，雜質(zhì)la含量增加百分?jǐn)?shù)低于200%，例如低于150%，例如低于100%，例如 低于75%，例如低于50 %。該試驗(yàn)方法在本發(fā)明中可簡稱為40°C_5月考察。所述的術(shù)語某雜 質(zhì)的含量增加百分?jǐn)?shù)是照下式計(jì)算的：
[0104] 上述計(jì)算式可用于計(jì)算各種試樣在經(jīng)歷40°C-5月處置前、后雜質(zhì)la或雜質(zhì)lb增加 的百分量，該值越接近于〇表明該雜質(zhì)增長量越小。
[0105] 進(jìn)一步地，本發(fā)明第三方面提供了一種藥物組合物，其中包括作為活性成分的如 下式I化合物
[0107] 以及藥用輔料。
[0108] 根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中式I化合物占該藥物組合 物總重量的10~90%，例如20~80%，例如30~70%。
[0109] 根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中還含有(例如痕量的）作為 雜質(zhì)存在的以下式la化合物：
[0111] 根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中相對(duì)于式I化合物而言，式 la化合物的含量小于2%，例如小于1.75%，例如小于1.5%，例如小于1.25%，例如小于 1.0%，例如小于0.75%。
[0112] 根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中相對(duì)于式I化合物而言，式 la化合物的含量為0.002~2%，例如為0.002~1.75%，例如為0.002~1.5%，例如為0.002 ~1.25%，例如為0.002~1.0%，例如為0.002~0.75%。
[0113]根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式I a化合物峰面積與式I化合物峰面積的比小于2 %，例如小于1.7 5 %，例如小于 1.5%，例如小于1.25%，例如小于1.0%，例如小于0.75%。
[0114]根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式la化合物峰面積與式I化合物峰面積的比為0.002~2%，例如為0.002~1.75%，例 如為0 · 002~1 · 5%，例如為0 · 002~1 · 25%，例如為0 · 002~1 · 0%，例如為0 · 002~0 · 75%。
[0115] 根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式I化合物峰面積與式la化合物峰面積的比大于50,例如大于57,例如大于67,例如大 于80,例如大于100,例如大于133。
[0116] 根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式I化合物峰面積與式la化合物峰面積的比為50~50000,例如為57~50000,例如為67 ~50000，例如為80~50000，例如為100~50000，例如為133~50000。
[0117]根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中還含有(例如痕量的）作為 雜質(zhì)存在的以下式lb化合物：
[0119] 根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中相對(duì)于式I化合物而言，式 lb化合物的含量小于1 %，例如小于0.75%，例如小于0.5%，例如小于0.4%，例如小于 0.3%，例如小于0.25%。
[0120] 根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中相對(duì)于式I化合物而言，式 lb化合物的含量為0.002~1 %，例如為0.002~0.75%，例如為0.002~0.5%，例如為0.002 ~0.4%，例如為0.002~0.3%，例如為0.002~0.25%。
[0121]根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式I b化合物峰面積與式I化合物峰面積的比小于1 %，例如小于0.7 5 %，例如小于 0.5%，例如小于0.4%，例如小于0.3%，例如小于0.25%。
[0122] 根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式lb化合物峰面積與式I化合物峰面積的比為0.002~1 %，例如為0.002~0.75%，例 如為0 · 002~0 · 5%，例如為0 · 002~0 · 4%，例如為0 · 002~0 · 3%，例如為0 · 002~0 · 25%。
[0123] 根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式I化合物峰面積與式lb化合物峰面積的比大于100,例如大于133,例如大于200,例如 大于250,例如大于333,例如大于400。
[0124] 根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定， 其中式I化合物峰面積與式lb化合物峰面積的比為100~50000,例如為133~50000,例如為 200~50000，例如為250~50000，例如為333~50000，例如為400~50000。
[0125] 根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中所述的藥用輔料包括選自 下列的糖類:乳糖、甘露醇、山梨醇、蔗糖等。
[0126] 根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其是呈片劑、膠囊劑、或顆粒劑 的形式。
[0127] 根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其是呈單位劑量的藥物制劑形 式。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物制劑的每個(gè)單位劑量中包括1~1 OOOmg的式I化合物，例如 包括10~750mg的式I化合物，例如包括20~500mg的式I化合物。
[0128] 根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其是呈片劑或膠囊劑的形式， 其中還任選地包括藥學(xué)常規(guī)的稀釋劑(例如但不限于淀粉及其衍生物例如預(yù)膠化淀粉、改 良淀粉，微晶纖維素等）、崩解劑(例如但不限交聯(lián)聚維酮、羧甲基淀粉鈉等）、粘合劑(例如 但不限于PVP、HPMC等）、潤滑劑/助流劑(例如但不限于硬脂酸鎂、滑石粉等)等。
[0129] 根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其在40°C條件下密封、避光放 置5個(gè)月，測(cè)定并計(jì)算在此條件下處置5個(gè)月后某雜質(zhì)相對(duì)于0月時(shí)的含量增加百分?jǐn)?shù)，其中 照【HPLC-A】測(cè)定，雜質(zhì)la含量增加百分?jǐn)?shù)低于200%，例如低于150%，例如低于100%，例如 低于75%，例如低于50%。該試驗(yàn)方法在本發(fā)明中可簡稱為40°C-5月考察。
[0130] 本發(fā)明第四方面提供了如下式la化合物
[0132]在制備用于檢測(cè)以如下式I化合物為活性成分的藥用原料藥
[0134] 或者以該式I化合物為活性成分制成的（例如由該藥用原料藥制成的）藥物組合物 的對(duì)照品中的應(yīng)用。
[0135] 根據(jù)本發(fā)明第四方面任一實(shí)施方案的應(yīng)用，其中所述對(duì)照品照【HPLC-A】測(cè)定，式 la化合物的色譜純度大于95%，例如大于96%，例如大于97%，例如大于98%。
[0136] 根據(jù)本發(fā)明第四方面任一實(shí)施方案的應(yīng)用，其用于監(jiān)測(cè)所述藥用原料藥或藥物組 合物以確保該藥用原料藥或藥物組合物中的式la化合物的含量相對(duì)于式I化合物而言小于 2%，例如小于1.75%，例如小于1.5%，例如小于1.25%，例如小于1.0%，例如小于0.75%。
[0137] 根據(jù)本發(fā)明第四方面任一實(shí)施方案的應(yīng)用，其用于監(jiān)測(cè)所述藥用原料藥或藥物組 合物以確保該藥用原料藥或藥物組合物中的式la化合物的含量相對(duì)于式I化合物而言為 0.002~2%，例如為0.002~1.75%，例如為0.002~1.5%，例如為0.002~1.25%，例如為 0.002~1.0%，例如為0.002~0.75%。
[0138] 根據(jù)本發(fā)明第四方面任一實(shí)施方案的應(yīng)用，其用于監(jiān)測(cè)所述藥用原料藥或藥物組 合物以確保該藥用原料藥或藥物組合物照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定，其中式la化合物峰面積 與式I化合物峰面積的比小于2%，例如小于1.75%，例如小于1.5%，例如小于1.25%，例如 小于1.0%，例如小于0.75%。
[0139] 根據(jù)本發(fā)明第四方面任一實(shí)施方案的應(yīng)用，其用于監(jiān)測(cè)所述藥用原料藥或藥物組 合物以確保該藥用原料藥或藥物組合物照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定，其中式la化合物峰面積 與式I化合物峰面積的比為0.002~2%，例如為0.002~1.75%，例如為0.002~1.5%，例如 為0 · 002~1 · 25%，例如為0 · 002~1 · 0%，例如為0 · 002~0 · 75%。
[0140] 根據(jù)本發(fā)明第四方面任一實(shí)施方案的應(yīng)用，其用于監(jiān)測(cè)所述藥用原料藥或藥物組 合物以確保該藥用原料藥或藥物組合物照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定，其中式I化合物峰面積 與式la化合物峰面積的比大于50,例如大于57,例如大于67,例如大于80,例如大于100,例 如大于133。
[0141] 根據(jù)本發(fā)明第四方面任一實(shí)施方案的應(yīng)用，其用于監(jiān)測(cè)所述藥用原料藥或藥物組 合物以確保該藥用原料藥或藥物組合物照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定，其中式I化合物峰面積 與式la化合物峰面積的比為50~50000,例如為57~50000,例如為67~50000,例如為80~ 50000,例如為100~50000,例如為133~50000。
[0142] 本發(fā)明第五方面提供了如下式lb化合物
[0144]在制備用于檢測(cè)以如下式I化合物為活性成分的藥用原料藥
[0146] 或者以該式I化合物為活性成分制成的（例如由該藥用原料藥制成的）藥物組合物 的對(duì)照品中的應(yīng)用。
[0147] 根據(jù)本發(fā)明第五方面任一實(shí)施方案的應(yīng)用，其中所述對(duì)照品照【HPLC-A】測(cè)定，式 lb化合物色譜純度大于95%，例如大于96%，例如大于97%，例如大于98%。
[0148] 根據(jù)本發(fā)明第五方面任一實(shí)施方案的應(yīng)用，其用于監(jiān)測(cè)所述藥用原料藥或藥物組 合物以確保該藥用原料藥或藥物組合物中的式lb化合物的含量相對(duì)于式I化合物而言小于 1 %，例如小于0.75%，例如小于0.5%，例如小于0.4%，例如小于0.3%，例如小于0.25%。
[0149] 根據(jù)本發(fā)明第五方面任一實(shí)施方案的應(yīng)用，其用于監(jiān)測(cè)所述藥用原料藥或藥物組 合物以確保該藥用原料藥或藥物組合物中的式lb化合物的含量相對(duì)于式I化合物而言為 0.002~1 %，例如為0.002~0.75%，例如為0.002~0.5%，例如為0.002~0.4%，例如為 0.002~0.3%，例如為0.002~0.25%。
[0150] 根據(jù)本發(fā)明第五方面任一實(shí)施方案的應(yīng)用，其用于監(jiān)測(cè)所述藥用原料藥或藥物組 合物以確保該藥用原料藥或藥物組合物照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定，其中式lb化合物峰面積 與式I化合物峰面積的比小于1 %，例如小于0.75 %，例如小于0.5 %，例如小于0.4 %，例如 小于0.3%，例如小于0.25%。
[0151] 根據(jù)本發(fā)明第五方面任一實(shí)施方案的應(yīng)用，其用于監(jiān)測(cè)所述藥用原料藥或藥物組 合物以確保該藥用原料藥或藥物組合物照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定，其中式lb化合物峰面積 與式I化合物峰面積的比為0.002~1 %，例如為0.002~0.75%，例如為0.002~0.5%，例如 為0.002~0.4%，例如為0.002~0.3%，例如為0.002~0.25%。
[0152] 根據(jù)本發(fā)明第五方面任一實(shí)施方案的應(yīng)用，其用于監(jiān)測(cè)所述藥用原料藥或藥物組 合物以確保該藥用原料藥或藥物組合物照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定，其中式I化合物峰面積 與式lb化合物峰面積的比大于100,例如大于133,例如大于200,例如大于250,例如大于 333,例如大于400。
[0153] 根據(jù)本發(fā)明第五方面任一實(shí)施方案的應(yīng)用，其用于監(jiān)測(cè)所述藥用原料藥或藥物組 合物以確保該藥用原料藥或藥物組合物照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè)定，其中式I化合物峰面積 與式lb化合物峰面積的比為100~50000,例如為133~50000,例如為200~50000,例如為 250~50000，例如為333~50000，例如為400~50000。
[0154] 進(jìn)一步地，本發(fā)明第六方面提供了控制藥品質(zhì)量的方法，所述的藥品是以式I化合 物為活性成分的藥用原料藥或者由該藥用原料藥制備成的藥物組合物，該方法包括使該藥 品中的雜質(zhì)式lb化合物控制在一定范圍內(nèi)，以使該藥品在長期貯藏過程中雜質(zhì)式la化合物 呈現(xiàn)低的增長。
[0155] 根據(jù)本發(fā)明第六方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述藥品（即藥用原料藥或藥物 組合物）中相對(duì)于式I化合物而言，式Ib化合物的含量小于1 %，例如小于0.75 %，例如小于 0.5%，例如小于0.4%，例如小于0.3%，例如小于0.25%。
[0156] 根據(jù)本發(fā)明第六方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述藥品中相對(duì)于式I化合物而 言，式lb化合物的含量為0.002~1 %，例如為0.002~0.75 %，例如為0.002~0.5%，例如為 0.002~0.4%，例如為0.002~0.3%，例如為0.002~0.25%。
[0157] 根據(jù)本發(fā)明第六方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述藥品照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè) 定，其中式Ib化合物峰面積與式I化合物峰面積的比小于1 %，例如小于0.75 %，例如小于 0.5%，例如小于0.4%，例如小于0.3%，例如小于0.25%。
[0158] 根據(jù)本發(fā)明第六方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述藥品照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè) 定，其中式lb化合物峰面積與式I化合物峰面積的比為0.002~1 %，例如為0.002~0.75%， 例如為0·002~0·5%，例如為0·002~0·4%，例如為0·002~0·3%，例如為0·002~0·25%。
[0159] 根據(jù)本發(fā)明第六方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述藥品照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè) 定，其中式I化合物峰面積與式lb化合物峰面積的比大于100,例如大于133,例如大于200， 例如大于250,例如大于333,例如大于400。
[0160] 根據(jù)本發(fā)明第六方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述藥品照本發(fā)明【HPLC-A】法測(cè) 定，其中式I化合物峰面積與式lb化合物峰面積的比為100~50000,例如為133~50000,例 如為200~50000，例如為250~50000，例如為333~50000，例如為400~50000。
[0161] 根據(jù)本發(fā)明第六方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述藥品在40°C條件下密封、避 光放置5個(gè)月，測(cè)定并計(jì)算在此條件下處置5個(gè)月后某雜質(zhì)相對(duì)于0月時(shí)的含量增加百分?jǐn)?shù)， 其中照【HPLC-A】測(cè)定，雜質(zhì)la含量增加百分?jǐn)?shù)低于200%，例如低于150%，例如低于100%， 例如低于75%，例如低于50%。
[0162] 根據(jù)本發(fā)明第六方面任一實(shí)施方案的方法，所述使該藥品在長期貯藏過程中雜質(zhì) 式la化合物呈現(xiàn)低的增長是指所述藥品在40°C條件下密封、避光放置5個(gè)月，測(cè)定并計(jì)算在 此條件下處置5個(gè)月后某雜質(zhì)相對(duì)于0月時(shí)的含量增加百分?jǐn)?shù)，其中照【HPLC-A】測(cè)定，雜質(zhì) la含量增加百分?jǐn)?shù)低于200%，例如低于150%，例如低于100%，例如低于75%，例如低于 50% 〇
[0163] 進(jìn)一步地，本發(fā)明第七方面提供了制備本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案所述藥用原 料藥的方法，該方法包括以下步驟：
[0164] (丨）向N-喹啉?；?L-天門冬氨酸、3-異丙基-3-[ (2S，3S) -2-羥基-3-(苯基甲氧基 羰基)氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯、苯并三唑-1-基氧三(二甲基氨基)鱗氟磷酸鹽和 1-羥基苯并三唑的無水二甲基甲酰胺的攪拌溶液中加入N，N_二異丙基乙胺，在室溫下攪拌 使反應(yīng)完全，反應(yīng)物用乙酸乙酯稀釋，并用水、2 %硫酸氫鉀、5 %碳酸氫鈉和飽和氯化鈉水 溶液洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，減壓蒸發(fā)溶劑，用硅膠柱色譜以乙酸乙酯提純，得到3-異丙 基-3-[(2S，3S)-2-羥基-3-(N-喹啉酰基-L-天門冬?；?氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁 酯（即式la化合物）
[0166] (2)在室溫、氮?dú)夥障?，使二環(huán)己基碳化二亞胺、3-異丙基-3-[(2S，3S)_2-羥基Ι α-喹啉?；?L-天門冬?；? 氨基-4-苯基丁基] 肼基甲酸叔丁酯 （即式 la 化合物 ）、無水亞 磷酸在無水吡啶中混合，在60°C攪拌反應(yīng)后，減壓蒸發(fā)溶劑，以碳酸氫鈉水溶液處理，于室 溫下激烈攪拌1小時(shí)，濾出沉淀物，以水洗滌，以濃鹽酸酸化濾液至約PH1.5;以乙酸乙酯萃 取吸收產(chǎn)物，有機(jī)物經(jīng)無水硫酸鎂脫水，溶劑蒸發(fā)，得到3-異丙基-3-[ (2S，3S )-2-次膦羧氧 基-3-(N-喹啉?；?L-天門冬?；?氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯（即式lb化合物）
[0168] (3)使3-異丙基-3-[(2S，3S)-2-次膦羧氧基-3-(N-喹啉?；?L-天門冬?；?氨 基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯（即式lb化合物)在六甲基二硅胺烷中的懸浮液于120 ± 5 °C下攪拌使反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)呈均質(zhì)化，添加雙(三甲硅烷基)過氧化物，接著在上述溫度下攪 拌1小時(shí)；反應(yīng)混合物冷卻至室溫后，真空蒸發(fā)至干;殘余物溶于甲醇中，減壓蒸發(fā)至干，再 溶于0.1M碳酸氫鈉水溶液中，所得混合物以濃鹽酸酸化至約pHl. 5，經(jīng)氯化鈉飽和，以乙酸 乙酯萃取。合并的有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鎂脫水，蒸發(fā)至干，得到3-異丙基-3-[(2S，3S)-2-膦羧 氧基-3-(N-喹啉?；?L-天門冬?；?氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯
[0170] (4)在室溫下將3_異丙基_3_[ (2S，3S)_2_勝駿氧基_3_(N_卩奎琳醜基-L-天門冬醜 基)氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯加至碳酸氫鈉水溶液中，攪拌直至溶液變澄清;加異 丙醇，攪拌混合物，過濾;所得濾液在55-60°C真空下蒸餾去除溶劑;使物料冷卻至25-35°C， 添加異丙醇，升溫至55-60°C，真空蒸餾除溶劑，干燥，所得固體用異丙醇洗滌，再在70-75Γ 的真空下蒸發(fā)至干燥，即得式I所示二鈉鹽化合物為3-異丙基-3-[(2S，3S)-2-膦羧氧基Ια-喹啉?；?L-天門冬?；? 氨基-4-苯基丁基肼基甲酸叔丁酯二鈉
[0172] (5)純化:使步驟⑷所得產(chǎn)物加至庚烷：乙酸乙酯=10:2~5的混合溶劑中，在70-75 °C下攪拌1 -3小時(shí)，冷卻至室溫，濾出固體析出物，用庚烷20ml分2次洗滌，再在60 °C、真空 下蒸發(fā)至干燥，即得;任選地根據(jù)需要重復(fù)本步驟(5)。
[0173] 本發(fā)明任一方面或該任一方面的任一實(shí)施方案所具有的任一技術(shù)特征同樣適用 其它任一實(shí)施方案或其它任一方面的任一實(shí)施方案，只要它們不會(huì)相互矛盾，當(dāng)然在相互 之間適用時(shí)，必要的話可對(duì)相應(yīng)特征作適當(dāng)修飾。下面對(duì)本發(fā)明的各個(gè)方面和特點(diǎn)作進(jìn)一 步的描述。
[0174] 本發(fā)明所引述的所有文獻(xiàn)，它們的全部內(nèi)容通過引用并入本文，并且如果這些文 獻(xiàn)所表達(dá)的含義與本發(fā)明不一致時(shí)，以本發(fā)明的表述為準(zhǔn)。此外，本發(fā)明使用的各種術(shù)語和 短語具有本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的一般含義，即便如此，本發(fā)明仍然希望在此對(duì)這些術(shù)語和 短語作更詳盡的說明和解釋，提及的術(shù)語和短語如有與公知含義不一致的，以本發(fā)明所表 述的含義為準(zhǔn)。
[0175] 下面對(duì)本發(fā)明的各個(gè)方面作進(jìn)一步描述。
[0176] 本發(fā)明一些實(shí)施方案提供的是以式I化合物為活性成分的藥用原料藥，該式I化合 物是由式la化合物經(jīng)磷酸化反應(yīng)形成次磷酸酯，即形成式lb化合物，式lb化合物的次磷酸 酯經(jīng)氧化后進(jìn)一步形成二鈉鹽，得到式I化合物。在制備過程中，雜質(zhì)的引入是不可避免的， 例如雜質(zhì)式la化合物或式lb化合物可能會(huì)引入到以式I化合物為活性成分的原料藥中或者 會(huì)引入到由該原料藥制備成的藥物制劑中。
[0177] 上述式Ia、式lb作為雜質(zhì)引入到式I化合物中，這對(duì)于將式I化合物作為藥用原料 藥以及將其制成藥物組合物例如藥物制劑，是需要努力避免的。
[0178] 盡管化學(xué)家們?cè)谥苽涫絀化合物時(shí)會(huì)努力將已知的和未知的雜質(zhì)去除，但是在綜 合考慮成本效益關(guān)系的情況下，微量的雜質(zhì)是難以避免的，而當(dāng)這些微量雜質(zhì)在可控(包括 作為原料藥時(shí)它們是可控的，還包括它們制成制劑時(shí)亦是可控的)狀態(tài)下時(shí)，在藥學(xué)領(lǐng)域通 常還是免強(qiáng)可以接受的。然而，令人遺憾的是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在式I化合物中作為雜質(zhì)的式lb化 合物高于一定量限度的時(shí)候，以此種式I化合物作為活性成分的原料藥物在與常規(guī)制劑輔 料特別是某些糖類相配合而制成的藥物組合物例如藥物制劑時(shí)，隨著時(shí)間的推移，該藥物 組合物中的式la化合物會(huì)出現(xiàn)顯著的增長，而該式la化合物的生物學(xué)性質(zhì)例如其吸收性質(zhì) 是不能令人接受的。因此，在以式I化合物作為活性成分的原料藥物或者以其制成的藥物組 合物例如藥物制劑中，將該雜質(zhì)式lb化合物控制在低于上述限度以下是極為有利的。
[0179] 目前已在臨床廣泛應(yīng)用的HIV蛋白酶抑制劑有:沙奎那韋（saquinavir)、茚地那韋 (indinavir)、利托那韋(ritonavir)、奈非那韋(nelfinavir)、安普那韋（amprenavir)和洛 匹那韋（lopinavir)，atazanavir和fosamprenavir。沙奎那維（Saquinavir)是一種強(qiáng)效和 高選擇性蛋白酶的抑制劑，與其他核苷酸衍生物不同，不需經(jīng)過代謝而直接起作用，半衰 期：13 · 2h，腦脊液與血清濃度比為>90,本品對(duì)HIV-1和HIV-2均有作用，且對(duì)病毒蛋白酶有 高度的專屬性，對(duì)與人密切有關(guān)的天冬氨酶則沒有作用，體外實(shí)驗(yàn)表明這是一種迄今為止 新見到的最強(qiáng)的抗HIV病毒藥物，本品通常耐受性好，會(huì)有腹瀉、頭痛、腹脹高血脂癥，脂肪 代謝障礙。利多那韋(ritonavir)是一種強(qiáng)效蛋白酶抑制劑，半衰期3~5h，與食物同服，可 增強(qiáng)耐受性，為減少不良反應(yīng)，建議逐漸加量，副作用、腹瀉、疲乏，集中力減退，高血脂癥。 Amprenavir通過抑制病毒，編碼的蛋白酶，導(dǎo)致處理gag和gag-pol無能，產(chǎn)生無功能病毒， 適應(yīng)于HIV-1和HI V-2感染，禁用于對(duì)其任何成分在臨床上過敏的患者，副作用，惡心，腹瀉， 腹脹，皮疹。茚地那韋（Indinair)是美國meek公司開發(fā)的另一種強(qiáng)效蛋白酶的抑制劑、有效 對(duì)抗HIV-1，口服生物利用度好，對(duì)于以前未用拉米夫定或蛋白酶抑制劑治療的HIV感染者， 本品加齊多夫定和拉米夫定較僅用兩種核苷類藥物能更好地減緩疾病的進(jìn)展和降低死亡 率。Atazanavir(ATV)是目前唯一的每天只需服一次的蛋白酶抑制劑，現(xiàn)正出于III其臨床 試驗(yàn)階段，其主要優(yōu)點(diǎn)在于其強(qiáng)大的抗病毒效果，獨(dú)有的耐藥圖譜，以及對(duì)脂肪代謝影響最 小。
[0180]目前臨床上仍然期待有新的治療HIV的方案。本發(fā)明提供的式I化合物是一種有效 的抗HIV藥物，其具有良好的口服生物利用度，適用于HIV感染的治療并且對(duì)HIV-1和HIV-2 均有作用。以給予人使用式I化合物時(shí)其典型的日用藥劑量為50~500mg，例如50~250mg， 例如50~200mg。
[0181] 特別地，本發(fā)明的以式I化合物為活性成分的藥用原料藥或由其制備得到的藥物 組合物具有優(yōu)良的性質(zhì)。
【具體實(shí)施方式】
[0182] 通過下面的實(shí)施例可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的描述，然而，本發(fā)明的范圍并不限 于下述實(shí)施例。本領(lǐng)域的專業(yè)人員能夠理解，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的前提下，可以 對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種變化和修飾。本發(fā)明對(duì)試驗(yàn)中所使用到的材料以及試驗(yàn)方法進(jìn)行一般性 和/或具體的描述。雖然為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的所使用的許多材料和操作方法是本領(lǐng)域公知的， 但是本發(fā)明仍然在此作盡可能詳細(xì)描述。
[0183] A、化合物制備實(shí)施例部分
[0184] 實(shí)施例1:制備3_異丙基-[(2R, 3S)_2_羥基_3_(苯基甲氧基幾基)氛基_4_苯基丁 基]肼基甲酸叔丁酯
[0185] 步驟A:制備3-異丙基肼基甲酸叔丁酯
[0186] 標(biāo)題化合物可通過Dutta等人(J.C:S. Perkin/1975,1712-1720)的方法或下述方 法來制備：在室溫下，將13.28(0.1111〇1)肼基甲酸叔丁酯和68(0.103111〇1)丙酮及12.5 8 (O.lmol)無水硫酸鎂的100ml二氯甲烷的混合物攪拌12小時(shí)，用過濾除去干燥劑后，濾液在 減壓下蒸發(fā)至于，由環(huán)己烷結(jié)晶后，得到16.9g(98%收率)相應(yīng)的腙，其熔點(diǎn)為104-105Γ。 于溫室下在氮?dú)夥罩?，?.04g(0.094mo 1)硼氫化鋰的100ml無水四氫咲喃的懸浮液中加入 12ml(0.094mol)三甲基氯硅烷，30分鐘后，在室溫下緩慢加入13.45g(0.078mol)腙，并繼續(xù) 攪拌2小時(shí)。然后，小心地加入50ml甲醇，并將該混合物在減壓下蒸發(fā)至干，殘余物在乙醚 (150ml)和水(50ml)之間分配，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鎂干燥并過濾，干燥氯化氫通過濾液并用 過濾除去形成的白色固體，用一部分新鮮乙醚洗滌，干燥得到（10.5g)標(biāo)題化合物的鹽酸 鹽。通過在己烷（150ml)和20%氫氧化鉀水溶液之間的分配將其轉(zhuǎn)化為其游離堿形式得到 8.3g(61%)產(chǎn)物。
[0187] 步驟B:制備3_異丙基-[(2R, 3S)-2-羥基-3-(苯基甲氧基幾基)氣基苯基丁基] 肼基甲酸叔丁酯
[0188] 在室溫下，將在無水二甲基甲酰胺中的0.15g(0.41mmol )N-CBZ-L-苯基丙氨酸氯 甲基酮和lml飽和碘化鈉溶液的混合物攪拌15分鐘。向其中加入0.074g(0.47mmol)3-異丙 基肼基甲酸叔丁酯，接著加入〇 .〇95g(l. 13mmol)碳酸氫鈉。在室溫下攪拌6小時(shí)后，加入 0.051g(1.3mmol)硼氫化鈉并繼續(xù)攪拌另外30分鐘。該溶液用乙酸乙酯稀釋至30ml，并用 2%硫酸氫鉀水溶液、水和飽和氯化鈉水溶液洗滌，然后經(jīng)無水硫酸鎂干燥。在減壓下蒸發(fā) 溶劑，并用快速色譜（硅膠；己烷/乙酸乙醋20:5)提純殘余楊，得到標(biāo)題化合物，其熔點(diǎn)為 118-119·5Γ，收率為49% ;R(A) =0.11 ;R(B) =0.47;
[0189] 匪以〇)(：13)1.0(111，6!1，異丙基〇13);1.44(3,9!1，叔丁基〇13);2.62(111，2!1，丁基(：!12-1);2.75-3.2(111，3!1，丁基〇1-3,〇12-4) ;3.47(111，1!1，異丙基〇0;3.89(111，1!1，丁基(：!1-2);4.44 (寬3，1!1，0!〇 ;4.6(寬111，1!1，順）；5.03(3,2!1，甲氧基012) ;5.3(寬3，1!1，肼基甲酸酯順）；7.23 (m，10H，芳H)〇
[0190] 實(shí)施例2:制備3-異丙基-3-[(2R，3S)-2-羥基-3-(N-喹啉?；?L-纈氨?；?氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯
[0191] 步驟A:制備N-喹啉酰基-L-纈氨酸
[0192] 在室溫下，將在lml無水1，4_二口惡烷中的0.628(3.6!11111〇1)喹啉酸和0.618 (3.76mmol) 1，1 羰基二咪唑的混合物攪拌30分鐘。向其中加入0.43g(3.7mmol)L_繳氨酸 和0.15 5 g (3.7 mm ο 1)氫氧化鋰的1 m 1水的溶液，所得混合物于室溫下劇烈攪拌約4小時(shí)。該混 合物用水稀釋至l〇ml，冷卻（冰水浴），然后用1N鹽酸酸化至pH約3,并在4 °C下將其放置2小 時(shí)。用過濾除去形成的晶體，將其用5ml冷水洗滌3次并在高真空下經(jīng)五氧化二磷干燥得到 〇.75g產(chǎn)物。收率= 76%;熔點(diǎn)為134-136°C;
[0193] NMR(DMS0-d6)1.03(d，6H，Val CH3);2.3(m，lH，Val (?-β);3·35(寬S，1H，0H);4.49 (q，lH，Val CH-a);7.5-8.3(m，5H，#H);8.5-8.76(m，2H，#H，NH)。
[0194] 步驟B:制備3_異丙基_3_[ (2R，3S)-2-羥基-3-(苯基甲氧基幾基)氣基苯基丁 基]肼基甲酸叔丁酯
[0195] 在氮?dú)夥障?，?.113g(0.24mmol)實(shí)施例1的產(chǎn)物的2ml甲醇的冷卻溶液中加入 O.lg的10%鈀/活性炭，接著加入O.lg硼氫化鈉。使反應(yīng)物升溫至室溫并攪拌1小時(shí)，然后過 濾除去催化劑，并用一部分新鮮甲醇洗滌。合并的濾液用lml 0.1N鹽酸水溶液處理并在減 壓下蒸發(fā)至于。殘余物用5ml 0.1N氫氧化鉀處理，該產(chǎn)物用30ml乙醚溶解。有機(jī)相用飽和氯 化鈉水溶液洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥并減壓蒸發(fā)得到0. 〇797g( 99 %收率)步驟B產(chǎn)物，該產(chǎn) 物在沒有進(jìn)一步提純情況下用于下一步驟。
[0196] 步驟C:m3_異丙基_3_[ (2R, 3S)_2_羥基-3_(N_卩奎琳醜基-L-繳氛醜基)氛基_4_ 苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯
[0197] 向在0.5ml無水二甲基甲酰胺中的0.06438(0.24!11111〇1)來自步驟六的酸、0.0797 8 (0 · 236mmol)來自步驟B的胺和0 · 032g(0 · 24mmol) 1-羥基苯并三唑的混合物中加入0 · 071g (0.24mmol)l-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺甲碘化物。于室溫下攪拌一夜后，混 合物用乙酸乙醋稀釋至30ml，依次用水、5 %碳酸氫鈉水溶液、2%硫酸氫鉀水溶液和飽和氯 化鈉溶液洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。減壓蒸發(fā)溶劑，用柱色譜(硅膠，己烷/乙酸乙酯3: 2) 提純殘余物，得到〇. 〇91g( 65 %收率)標(biāo)題化合物，其熔點(diǎn)
[0198] 為 186-189°C :1^(8)=0.19;1^(〇 = 0.83;匪1?(0)(：13)1.0(111，12!1，￥31和異丙基 CH3);1.71(S，9H，叔丁基CH3) ;2.3(m，lH，Val CH-0);2.5-3.27(m，3H，TSCH-3，CH2);3.5 (111，1!1，異丙基0〇 ;4.31(111，2!1，￥&101-2,0!〇;5.43(寬3，1!1，肼基甲酸酯順） ；6.22(寬(1，1!1， 丁基 NH);6.7-8.73(m，12H，#H，NH)。
[0199] 實(shí)施例3:制備3-異丙基-3-[ (2R，3S)-2-羥基-3-(N-喹啉?；?L-天門冬?；?氨 基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯
[0200] 步驟A:制備N-喹啉?；?L-天門冬氨酸
[0201] 當(dāng)用天門冬氨酸代替實(shí)施例2的步驟A中的L-纈氨酸時(shí)，用相同的方法得到標(biāo)題化 合物，其熔點(diǎn)為200_203°C，收率為85%。
[0202] NMR(DMS0-d6)3.0(m，2H，aSn CH2);5.0(m，lH，aSn CH-2);6.3(寬S，1H，0H);6.55 (寬2，1!1，順2);7.3(寬5，1!1，順2) ;7.55-8.6(111，6!1，芳!〇;9.22((1，1!1，順）。
[0203] 步驟B:制備3_異丙基_3_ [ (2R, 3s )_2_羥基_3_ (N-卩奎琳醜基-L-天門冬醜基)氛基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯
[0204] 向步驟 A 的產(chǎn)物(0.111g;0.386mmol)、實(shí)施例 2 步驟 B 產(chǎn)物(0.13022g;0.386mmol)、 苯并三唑-1-基氧三（二甲基氨基）鱗氟磷酸鹽（0.2058;0.46111111〇1)和1-羥基苯并三唑 (0.052g ; 0.384mmol)的lml無水二甲基甲酰胺的攪拌溶液中加入Ν,Ν-二異丙基乙胺 (0.24ml，1.38mmol)。于室溫下攪拌12小時(shí)后，反應(yīng)物用乙酸乙酯稀釋至30ml，并用水、2% 硫酸氫鉀、5%碳酸氫鈉和飽和氯化鈉水溶液洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥。減壓蒸發(fā)溶劑，用柱 色譜(硅膠，乙酸乙酯)提純殘余物得到〇.152g(65%收率)標(biāo)題產(chǎn)物，其熔點(diǎn)為109-114Γ; Rf(C)=0.36；Rf(D)=0.37；
[0205] 匪以〇)(：13)1.0(111，6!1，￥31，異丙基〇13);1.42(5,9!1，叔丁基〇13);2.5-3，1(111，7!1， &511〇12，丁基(：!12-1，-4,〇1-3) ;3.44(111，1!1，異丙基〇0;4.21(111，1!1，丁基〇1-2);4.55(5，1!1， 0H);4,94(m，lH，aSnCH-2);5.4-6,2(m，3H，_K);6.7-8.4(m，llH，#H);9.25(m，lH，NH)。 [0206] 實(shí)施例4:制備2 (R，S) -3 (S) -1，2-環(huán)氧-3-苯基甲氧基羰基氨基-4-苯基丁烷 [0207] 向6g(18mmol)N-CBZ-L-苯基丙氨酸氯甲基酮的30ml 50%甲醇的四氫呋哺的溶液 中加入0.68g硼氫化鈉，于室溫下攪拌30分鐘后，混合物小心地用1 N鹽酸酸化并在減壓下 蒸發(fā)至干。殘余物用二氯甲烷稀釋至50ml，用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌，并經(jīng)無水硫酸鎂 干燥。蒸發(fā)得到6.02g( 100% )的2(R, S)-3(S)_1_氯_2_羥基_3_苯基甲氧基幾基氨基_4_苯 基丁烷，其為白色固體。將其溶于50ml異丙醇中，并于室溫下加入9ml 2N氫氧化鉀的甲醇溶 液。于室溫下攪拌1小時(shí)后，減壓除去溶劑，殘余物在50ml乙酸乙醋和20ml水之間分配。有機(jī) 相用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥并蒸發(fā)至干，正如由赤_NCH(3.74 ppm; 72 % )和蘇-NCH(4.2; 28 % )的相對(duì)積分測(cè)定的那樣，得到5.3g(99 %收率）以2 (S)立體異構(gòu) 體為主的標(biāo)題化合物；
[0208] NMR(CDC13)2 · 42-3 · 17(m，5H，丁烷CH2-1，_4，CH-2); 3 · 74(m，0 · 72H，丁烷CH-3);4 · 2 (111，0.28!1，丁烷01-3);4.73(寬111，1!1，順）；5.08(5,2!1，甲氧基012) ;7.3(111，10!1，芳!〇。
[0209] 實(shí)施例5:制備3-異丙基-3-[(2S，3S)-2-羥基-3-(苯基甲氧基羰基)氨基-4-苯基 丁基]肼基甲酸叔丁酯
[0210] 步驟A:制備2(R)_3(S)_1，2_環(huán)氧_3_苯基甲氧基幾基氛基_4_苯基丁燒 [0211] 在氨氣氛中，向6.02g(40mmol)碘化鈉的50ml無水乙腈的攪拌溶液中加入2.6ml (22mmol)三甲基氯硅烷。攪拌10分鐘后，加入6g(20 . lmmol)主要為赤異構(gòu)體的2(R，S)-3 (S)-l，2-環(huán)氧-3-苯基甲氧基羰基氨基-4-苯基丁烷(實(shí)施例4)，繼續(xù)攪拌另外1小時(shí)。向該 混合物中加入4g(61.2mmo 1)鋅粉，接著加入6ml乙酸。所得混合物于室溫下劇烈攪拌約5小 時(shí)并過濾除去固體物質(zhì)。濾液在真空中蒸發(fā)至干，殘余物用乙醚稀釋至75ml，用水和5N硫代 硫酸鈉水溶液洗滌并經(jīng)無水硫酸鎂干燥。在真空中蒸發(fā)并用硅膠色譜（己烷/乙酸乙酯4:1) 提純，得到5.1g(90%)的（S)-2-(苯基甲氧基羰基)氨基-1-苯基丁-3-烯;Rf(A) = 0.5;熔點(diǎn) = 87-88°C (己烷）；
[0212] NMR(CDCI3)2.87(d，2H，buteneCH2-l);4.77(m，2H，T_CH2-4) ;5.0(m，lH，NCH); 5.06(8,2!1，甲氧基〇12);5.18(寬(1，1!1，順）；5.55-6(111，1!1，丁烯〇1-3) ;7.19,7.27(111，8,5!1， 5H，芳 H).
[0213]該物質(zhì)（2.238;7.93111111〇1)溶于251111無水二氯甲烷中，并在+4°(：下加入4.5 8 (22. lmmol)85%的3-氯過氧苯甲酸。所得混合物在上述溫度下攪拌2天，然后用乙醚稀釋至 50ml，依次用0°C 10 %亞硫酸鈉水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌，并 經(jīng)硫酸鎂干燥。蒸發(fā)溶劑后，粗產(chǎn)物用己烷/二氯甲烷的混合物結(jié)晶，得到2. lg(89%收率） 主要為蘇式立體化學(xué)結(jié)構(gòu)的標(biāo)題環(huán)氧化物;熔點(diǎn)= 83-84°C ;
[0214] NMR(CDCl3)2.47(m，5H，T_CH2-l，4，CH-2);3.74(m，0.15H，NCH) ;4.2(m，0.85H， %!〇;4.53(寬(1，1!1，順）；5.03(111，2!1，甲氧基012) ;7.3(111，10!1，芳!〇.
[0215] 步驟B:制備3_異丙基_3_[ (2S，3S)-2-羥基-3-(苯基甲氧基幾基)氣基苯基丁 基]肼基甲酸叔丁酯
[0216] 在氮?dú)夥罩校?.03g(6.83mmol)步驟A的產(chǎn)物和1.2g(7.6mmol)3-異丙基肼基甲酸 叔丁酯的8ml異丙醇的混合物于70±5°C下攪拌12小時(shí)。在真空中蒸發(fā)溶劑后，固體殘余物 用己烷重結(jié)晶，得到2.6g(80 %收率)標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)為114-115°C ;
[0217] 1^(厶）=0.2;1^(8)=0.61;匪1?(0)(：13)0.95(111，6!1，異丙基(：!13) ;1.42(8,9!1，叔丁基 013);2.44(111，2!1，丁基012-1) ;2.94(111，3!1，丁基012-4,01-3);3.33-3.93(111，2!1，異丙基01，丁 基 CH-2);4.4(寬111，1!1，0!〇;5.05(8,2!1，甲氧基(：!12);5.33(寬111，2!1，順） ；7.18,7.27(111，8,5!1， 5H，芳 H).
[0218] 實(shí)施例6:制備3-異丙基-3-[(2S，3S)-2-羥基-3-(N-喹啉酰基-L-天門冬?；?氨 基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯(式la化合物）
[0220] 本實(shí)施例的標(biāo)題化合物亦稱為3-異丙基-3-[(2S，3S)-2-羥基-3-(N-喹啉?；?L-天門冬?；?氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯。
[0221] 用實(shí)施例5的產(chǎn)物代替實(shí)施例3中使用的3-異丙基-3-[(2R，3S)-2-羥基-3-(苯基 甲氧基羰基)氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯（即代替實(shí)施例3中所使用的實(shí)施例2步驟B 的產(chǎn)物），用與實(shí)施例3相同的方法可制備得到本實(shí)施例的標(biāo)題化合物，收率為66%;熔點(diǎn)= 203-204°C (氯仿）；【HPLC-A】色譜純度98 · 1 % ;
[0222] Rf(C)=0.36;Rf(D)=0.37;NMR(5%CD30D in CDCl3);1.0(m，6H，異丙基CH3);1.4 (s，9Hj^TSCH 3);2.53(d，2H，TSCH2-l);2.87(m，4H，asnCH2，TSCH2-4) ;3.13(s，6H， 〇〇3〇11);3.42(111，2!1，異丙基01，丁基(：!1-3) ;4.0(111，1!1，丁基01-2);4.89(111，1!1，&811(：!1-〇) ; 7.11(111，5!1，苯基）；7.41-8.47(111，6!1，喹哪啶?；?br>[0223] 實(shí)施例7:制備3-異丙基-3-[(2S，3S)-2-次膦羧氧基-3-(N-喹啉?；?L-天門冬酰 基)氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯(式lb化合物）
[0225] 在室溫、氮?dú)夥障?，攪拌添?.28克（1.4毫摩爾）二環(huán)己基碳化二亞胺至含0.4克 (0.67毫摩爾)3_異丙基-3-[(2S，3S)-2-羥基-3-(N-喹啉?；?L-天門冬酰基)氨基-4-苯基 丁基]肼基甲酸叔丁酯（即式la化合物）與0.12克（1.47毫摩爾）無水亞磷酸混合物的1.5毫 升無水吡啶中。于60°C攪拌2小時(shí)后，減壓蒸發(fā)溶劑，以28毫升0.1ml碳酸氫鈉水溶液處理， 于室溫下激烈攪拌1小時(shí)。濾出沉淀物，以水洗滌，以濃鹽酸酸化濾液至pH~1.5。以乙酸乙 酯(3x50毫升)萃取吸收產(chǎn)物，有機(jī)物經(jīng)無水硫酸鎂脫水。溶劑蒸發(fā)，產(chǎn)生0.42克(收率95 % ) 標(biāo)題產(chǎn)物的無色固體，Rf (B) = 0.62;【HPLC-A】色譜純度98.2% ;
[0226] 護(hù)匪1?(〇)(：13);1.08(111，6!1、異丙基〇13);1.41(8,9!1、叔丁基〇13) ;2.7-4.8(111，14!1， &811〇12，丁基〇12-1，4;〇1-2,3 ;異丙基〇1;?-0!1\2!120);5.12(111，1!1，&811〇0 ;5.89(8,0.5!1， ΡΗ) ;6 ·2-8·5(ι?，15.5H，芳香系，酰胺ΝΗ，0·5ΡΗ);9· 02(m，lH，asn NH);p31NMR(CDCl3)14.99 (J = 636Hz)。
[0227] 實(shí)施例8:制備憐酸酯化合物3_異丙基_3_ [ (2S, 3S )_2_勝駿氧基_3_( N_陸琳醜基-L-天門冬?；?氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯
[0229] 使含0.4克(0.6毫摩爾)式lb化合物的2毫升六甲基二硅胺烷懸浮液于120 ± 5 °C下 攪拌45分鐘。此時(shí)反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)呈均質(zhì)化。添加0.3毫升雙(三甲硅烷基)過氧化物(P. G.庫 森(Cookson)等人，J.Organometal ,Chem. , 1975,99,C31)，接著在上述溫度下攪拌1小時(shí)。反 應(yīng)混合物冷卻至室溫后，真空蒸發(fā)至干。殘質(zhì)溶于20毫升甲醇中，減壓蒸發(fā)至干，再溶于12 毫升0.1M碳酸氫鈉水溶液中，所得混合物以濃鹽酸酸化至pH~1.5，經(jīng)氯化鈉飽和，以乙酸 乙酯（3x50毫升)萃取。合并的有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鎂脫水，蒸發(fā)至干，產(chǎn)生0.39克(收率96%) 標(biāo)題化合物的無色固體;Rf (B) = 0.07;
[0230] 護(hù)匪1?(0)(：13):1.2(111，6!1，異丙基013);1.4(5,9!1，叔丁基013)2.8-4.2(111，8!1， &811 〇12，丁基(^2-1，4;01=3;異丙基(：!〇;4.2-6.4(111，5!1，&811(：!1丁基(：!1-2，順，？0!〇 ;6.5-8.4(111， 14H，芳香系，NH，8.78(m，2H，NH);p31NMR(CDCl 3)9.6(s)。
[0231] 實(shí)施例9:制備式I化合物(二鈉鹽)
[0233] 操作:在室溫下將碳酸氫鈉2.2g(26mmol)在反應(yīng)瓶中溶解于22ml去離子水中，將 10g( 14.5mmol)實(shí)施例8產(chǎn)物加至上述溶液中，攪拌2-3小時(shí)直至溶液變澄清；加異丙醇 100ml，攪拌20-30min，過濾;所得濾液在55-60°C真空下蒸餾去除溶劑;使物料冷卻至25-35 °C，添加異丙醇50ml，升溫至55-60°C，真空蒸餾除溶劑，干燥，所得固體用異丙醇50ml洗滌， 再在70-75Γ的真空下蒸發(fā)至干燥，即得式I所示二鈉鹽化合物，收率gS^jHPLC-A】色譜純 度97.2%，雜質(zhì)la含量= 0.82%，雜質(zhì)lb含量= 0.68%。
[0234] 實(shí)施例91:制備式I化合物(二鈉鹽)
[0235] 將實(shí)施例9產(chǎn)物1 g置于反應(yīng)瓶中，添加庚烷/乙酸乙酯（10/3，v/v) 20ml，在70-75 °C 下攪拌3小時(shí)，冷卻至室溫，濾出固體析出物，用庚烷20ml分2次洗滌，再在60°C、真空下蒸發(fā) 至干燥，即得式I所示二鈉鹽化合物，收率96 %?！綡PLC-A】色譜純度99.3 %，雜質(zhì)la含量= 0.26%，雜質(zhì)lb含量= 0.23% (從0.68% 降至0.23%，降低至34%)。
[0236] 實(shí)施例92:制備式I化合物(二鈉鹽)
[0237] 將實(shí)施例91產(chǎn)物lg置于反應(yīng)瓶中，添加庚烷/乙酸乙酯（10/2，v/v)20ml，在70-75 °C下攪拌1小時(shí)，冷卻至室溫，濾出固體析出物，用庚烷20ml分2次洗滌，再在60°C、真空下蒸 發(fā)至干燥，即得式I所示二鈉鹽化合物，收率95 %?！綡PLC-A】色譜純度99.5 %，雜質(zhì)la含量= 0.09%，雜質(zhì)lb含量= 0.07% (降低至30%)。
[0238] 實(shí)施例93:制備式I化合物(二鈉鹽)
[0239] 將實(shí)施例92產(chǎn)物lg置于反應(yīng)瓶中，添加庚烷/乙酸乙酯（10/5，v/v)20ml，在70-75 °C下攪拌2小時(shí)，冷卻至室溫，濾出固體析出物，用庚烷20ml分2次洗滌，再在60°C、真空下蒸 發(fā)至干燥，即得式I所示二鈉鹽化合物，收率96 %?！綡PLC-A】色譜純度99.6 %，雜質(zhì)la含量= 0.025%，雜質(zhì)lb含量= 0.019% (降低至27%)。
[0240] 實(shí)施例94:制備式I化合物(二鈉鹽)
[0241] 將實(shí)施例93產(chǎn)物lg置于反應(yīng)瓶中，添加庚烷/乙酸乙酯（10/4，v/v)20ml，在70-75 °C下攪拌2.5小時(shí)，冷卻至室溫，濾出固體析出物，用庚烷20ml分2次洗滌，再在60 °C、真空下 蒸發(fā)至干燥，即得式I所示二鈉鹽化合物，收率94 %?！綡PLC-A】色譜純度99.8 %，雜質(zhì)la含量 =0.008%，雜質(zhì)lb含量= 0.006% (降低至32%)。
[0242] 實(shí)施例95:制備式I化合物(二鈉鹽)
[0243] 將實(shí)施例94產(chǎn)物lg置于反應(yīng)瓶中，添加庚烷/乙酸乙酯（10/3，v/v)20ml，在70-75 °C下攪拌2小時(shí)，冷卻至室溫，濾出固體析出物；用庚烷20ml分2次洗滌，再在60°C、真空下蒸 發(fā)至干燥，即得式I所示二鈉鹽化合物，收率96 %?！綡PLC-A】色譜純度99.8 %，雜質(zhì)la含量= 0.002%，雜質(zhì)lb含量= 0.002% (降低至33%)。
[0244]根據(jù)以上實(shí)施例91~95的結(jié)果可見，使用庚烷/乙酸乙酯對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行處理時(shí)，可以 使雜質(zhì)la和雜質(zhì)lb的含量大大降低，每處理一次可使此類雜質(zhì)分別降低至約25%~35%， 即降低了約65 %~75 %。
[0245] 實(shí)施例97:制備式I化合物(二鈉鹽)
[0246] 將實(shí)施例9產(chǎn)物lg置于反應(yīng)瓶中，添加庚烷20ml，在70-75°C下攪拌3小時(shí)，冷卻至 室溫，濾出固體析出物，用庚烷20ml分2次洗滌，再在60°C、真空下蒸發(fā)至干燥，即得式I所示 二鈉鹽化合物，收率97% JHPLC-A】色譜純度97.5%，雜質(zhì)la含量=0.74%，雜質(zhì)lb含量= 0.61 % (兩種雜質(zhì)分別降低約10%)。
[0247] 另外，在參照實(shí)施例97的補(bǔ)充試驗(yàn)中，使用庚烷/乙酸乙酯=10/0.5、或10/1為溶 劑處理時(shí)，兩種雜質(zhì)分別降低約9~11 %。
[0248] 實(shí)施例98:制備式I化合物(二鈉鹽)
[0249] 將實(shí)施例9產(chǎn)物lg置于反應(yīng)瓶中，添加乙酸乙酯20ml，在70-75Γ下攪拌2小時(shí)，冷 卻至室溫，濾出固體析出物，用庚烷20ml分2次洗滌，再在60°C、真空下蒸發(fā)至干燥，即得式I 所示二鈉鹽化合物，收率97 % JHPLC-A】色譜純度97.5 %，雜質(zhì)la含量=0.79 %，雜質(zhì)lb含 量= 0.64%。
[0250]另外，在參照實(shí)施例98的補(bǔ)充試驗(yàn)中，使用庚烷/乙酸乙酯= 10/50、或10/20為溶 劑處理時(shí)，兩種雜質(zhì)分別降低約7~10%。
[0251]根據(jù)以上實(shí)施例97~98的結(jié)果可見，當(dāng)使用庚烷、或者使用乙酸乙酯、或者使用此 二者用量差異較大的混合溶劑處理時(shí)，不能有效地使雜質(zhì)la和雜質(zhì)lb的含量得到明顯降 低，每處理一次僅可使此類雜質(zhì)降低約10%。
[0252] 實(shí)施例99:制備式I化合物(二鈉鹽)
[0253] 將實(shí)施例8產(chǎn)物游離酸用2當(dāng)量的0.2M碳酸氫鈉溶液處理，轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的二鈉鹽， 所得溶液冷凍干燥，即得，收率99%?！綡PLC-A】色譜純度95.6%，雜質(zhì)la含量=2.68%，雜質(zhì) lb 含量= 1.91%。
[0254] 實(shí)施例95所得式I化合物的表征:
[0257] NMR:500MHz，Varian Unity Inova FT-NMR儀，溶劑為CD30D;1H和 13C NMR化學(xué)位 移以δ(ppm)表示，分別相對(duì)于內(nèi)標(biāo)物TMS(δ〇. 〇〇)和CD30D(δ49.00)計(jì);在CD30D 1H NMR中未 見有可交換質(zhì)子;在30°C和70°C下在DMS0-d6中采集1H NMR數(shù)據(jù)，以觀測(cè)可交換質(zhì)子的共 振;進(jìn)行g(shù)DQCOSY和gHSQC試驗(yàn)以及T0CSY試驗(yàn);樣品的NMR歸屬顯示如下：

[0261 ] 注:1各位置是參照上面的結(jié)構(gòu)式原子位置標(biāo)注的，
[0262] HR-MS研究使用Waters LCT premier XE儀進(jìn)行，推導(dǎo)的分子式為 C32H41N6Na209P，即 C32H41N609P · 2Na，T0F數(shù)據(jù)見下表：
[0264] B、試驗(yàn)例部分
[0265] 試驗(yàn)例1:藥物口服吸收的比較試驗(yàn)
[0266] 試藥：以實(shí)施例6所得式la化合物和實(shí)施例91所得式I化合物（二鈉鹽)兩者為試 藥，
[0267] 動(dòng)物、分組、及給藥:大鼠，體重200~300g，16只，均分為兩組(分另ljI組和la組），每 組8只，兩種藥物每次給藥劑量均為50ymol/kg體重。以研磨的方式使藥物充分地溶解2% HPMC水溶液中，以單次給藥的方式灌胃給予試藥，分別于0小時(shí)(給藥前）、給藥后1小時(shí)、2小 時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)、15小時(shí)取尾靜脈血。
[0268] 測(cè)試樣品的制備：將用肝素鈉抗凝的血液樣品3000~5000r/min轉(zhuǎn)速離心5~ 30min后，取上層血衆(zhòng)轉(zhuǎn)移至新空白EP管中；加入內(nèi)標(biāo)苯甲酸溶液(0. lmg/ml)10yl，然后按 血漿與沉淀試劑（乙腈-甲醇= 3:2混合液并且添加2%甲酸)體積比為1:5沉淀蛋白，沉淀時(shí) 間3min，禍旋混勾45s后，在5°C恒溫條件下以10000r/min離心10min;將上層液轉(zhuǎn)移至新空 白EP管中，于30~50°C氮?dú)饬鞔蹈?，殘留物?00μ150 %乙腈溶液溶解，禍旋混勻30~60s 后，在0~10°C恒溫條件下以10000~12000r/min離心5~15min，取上清液即為供試品溶液； 另用50%乙腈溶液制備適宜濃度的式la化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液和式I化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液。照本發(fā)明 【HPLC-A】測(cè)定血漿中的式la化合物和式I化合物的濃度。
[0269] 從檢測(cè)結(jié)果看，兩組動(dòng)物均只能檢測(cè)到式la化合物而檢測(cè)不到式I化合物，原因在 于式I化合物被吸收后代謝成式la化合物，因此各組均以式la化合物為計(jì)算目標(biāo)。對(duì)于各組 動(dòng)物，計(jì)算在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度平均值，并計(jì)算在〇~15小時(shí)之間的血藥濃度曲線下面 積AUC，以下式計(jì)算式la化合物組的相對(duì)AUC:
[0270] =[式la化合物組AUC值+式I化合物組AUC值]X 100
[0271] 該相對(duì)AUC越接近100%表明兩種化合物的胃腸道吸收性能越接近，如果該相對(duì) AUC小于100 %則式I a化合物的吸收比式I化合物的胃腸道吸收差，如果該相對(duì)AUC大于 100%則式la化合物的吸收比式I化合物的胃腸道吸收好。結(jié)果表明，在上述大鼠進(jìn)行的口 服給藥中，式la化合物組的相對(duì)AUC僅為13.6 %，表明式la化合物的口服吸收遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于式I 化合物。在補(bǔ)充的試驗(yàn)中，以家兔為動(dòng)物(每個(gè)給藥組6只動(dòng)物)參照上述方法進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié) 果式I a化合物組的相對(duì)AUC僅為9.3 %。在補(bǔ)充的試驗(yàn)中，以比格犬為動(dòng)物(每個(gè)給藥組3只 動(dòng)物)參照上述方法進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果式la化合物組的相對(duì)AUC僅為11.2%。
[0272] 可見，在以式I化合物為活性成分的藥用原料藥或者其制成的制劑中，式I化合物 轉(zhuǎn)化成式la化合物對(duì)于維持藥物的給藥劑量是不利的。
[0273] 試驗(yàn)例2:原料藥的穩(wěn)定性
[0274] 直接取本發(fā)明制備的相應(yīng)物料，或者使用一定量的式la化合物(實(shí)施例6產(chǎn)物)和/ 或式lb化合物(實(shí)施例7產(chǎn)物)與式I化合物(實(shí)施例95產(chǎn)物)通過充分研磨混合組配得到的 不同雜質(zhì)含量的混合組配物。
[0275] 使這些物料用玻璃瓶密封，再在40°C條件下密封、避光放置5個(gè)月，用【HPLC-A】測(cè) 定各樣品并計(jì)算在此條件下處置5個(gè)月后某雜質(zhì)相對(duì)于0月時(shí)的含量增加百分?jǐn)?shù)，以及式I 化合物相對(duì)于〇月時(shí)的殘余百分?jǐn)?shù)（即物料中5月時(shí)式I化合物的含量除以0月時(shí)式I化合物 的含量再乘以100%所得百分?jǐn)?shù)）。結(jié)果如下：
[0276]
[0277]
[0278] 注：*初始組成指物料中0月時(shí)用【HPLC-A】測(cè)定得到的該物料中各種化合物的含 量，其中純度是式I化合物的面積歸一化法的純度，式la化合物含量是照【HPLC-A】測(cè)定的相 對(duì)于式I化合物的百分量，式lb化合物含量是照【HPLC-A】測(cè)定的相對(duì)于式I化合物的百分 量。
[0279] 從表中結(jié)果可見，本發(fā)明的藥用原料藥是穩(wěn)定的，即使其中混雜有一定量的雜質(zhì) la和/或雜質(zhì)lb。
[0280] 試驗(yàn)例3:原料藥與糖的組合物的穩(wěn)定性
[0281] 分別將試驗(yàn)例2中的30個(gè)樣品或組配物與等量的糖(乳糖)充分研磨均勻，形成與 糖的組合物。使這些組合物用玻璃瓶密封，再在40°C條件下密封、避光放置5個(gè)月，用【HPLC-A】測(cè)定各樣品并計(jì)算在此條件下處置5個(gè)月后某雜質(zhì)相對(duì)于0月時(shí)的含量增加百分?jǐn)?shù)，以及 式I化合物相對(duì)于〇月時(shí)的殘余百分?jǐn)?shù)（即物料中5月時(shí)式I化合物的含量除以0月時(shí)式I化合 物的含量再乘以100%所得百分?jǐn)?shù)）。結(jié)果如下：
[0283]
[0284] 從以上結(jié)果可見，使用不同原料與糖制備成的組合物，其中雜質(zhì)lb含量顯著影響 組合物中雜質(zhì)la的增長以及活性成分的下降，特別是當(dāng)lb含量>0.5%時(shí)，這種原料與糖所 得組合物在模擬長期留樣的高溫條件下處理后，其中的雜質(zhì)la會(huì)顯著增加，并且增加程度 與lb含量呈正相關(guān)，同樣地活性成分的殘余含量亦會(huì)相應(yīng)地降低。然而完全無法解釋的是， 無論原料中雜質(zhì)lb含量是高還是低，其本身在長期貯藏過程中卻并未呈現(xiàn)雜質(zhì)la那樣的顯 示增加。
[0285] 此外，照本試驗(yàn)例3的方法，不同的是將其中的乳糖用量改為原料藥的0.2倍或20 倍，亦進(jìn)行上面的試驗(yàn)，結(jié)果顯示不同原料藥制成的組合物在"I殘余/%" "la增加 /%"、"Ib 增加/%"三者方面均與上表結(jié)果基本一致，即乳糖量在活性成分的0.2~20倍范圍內(nèi)均會(huì) 呈現(xiàn)上述結(jié)果。
[0286] 試驗(yàn)例31:原料藥與糖的組合物的穩(wěn)定性
[0287] 參照試驗(yàn)例3的方法，不同的僅是將其中的乳糖替換為蔗糖。結(jié)果顯示出基本上與 試驗(yàn)例3相同的結(jié)果，例如配制的No. 21組合物I殘余/%為91.8%、la增加/%為273%、lb增 加/%為61 % ;又例如配制的No. 22組合物I殘余/%為〈85%、la增加/%為>500 %、Ib增 加/%為63%。
[0288] 試驗(yàn)例32:原料藥與糖的組合物的穩(wěn)定性
[0289]參照試驗(yàn)例3的方法，不同的僅是將其中的乳糖替換為甘露醇。結(jié)果顯示出基本上 與試驗(yàn)例3相同的結(jié)果，例如配制的No.21組合物I殘余/%為91.1 %、Ia增加/%為253%、Ib 增加/%為67% ;又例如配制的No. 22組合物I殘余/%為〈85%、la增加/%為>500%、lb增 加/%為65%。
[0290] 試驗(yàn)例33:原料藥與糖的組合物的穩(wěn)定性
[0291]參照試驗(yàn)例3的方法，不同的僅是將其中的乳糖替換為山梨醇。結(jié)果顯示出基本上 與試驗(yàn)例3相同的結(jié)果，例如配制的No.21組合物I殘余/%為91.4%、Ia增加/%為271 %、Ib 增加/%為63% ;又例如配制的No. 22組合物I殘余/%為〈85%、la增加/%為>500%、lb增 加/%為62%。
[0292]以上結(jié)果表明，具有不同雜質(zhì)lb含量的藥用原料藥與藥劑學(xué)上常用的糖類配合來 制備藥物制劑時(shí)，其中雜質(zhì)la會(huì)因原料中雜質(zhì)lb含量的不同而呈現(xiàn)明顯不同的增長量。盡 管這種現(xiàn)象未在原料藥本身中發(fā)現(xiàn)，然而當(dāng)雜質(zhì)lb含量較高時(shí)將大大限制藥用原料藥在制 備制劑時(shí)的輔料選擇范圍，因?yàn)樯鲜龅倪@些糖類是制劑學(xué)上常用、廉價(jià)、性能優(yōu)越的藥用輔 料，不使用這些糖類而改用其它藥用輔料時(shí)將可能引發(fā)其它廣泛的問題例如成本、片劑性 能、選擇范圍等。
[0293] 試驗(yàn)例4:原料藥制備的藥物組合物(片劑)的穩(wěn)定性
[0294] 分別以試驗(yàn)例2中的30個(gè)樣品或組配物為藥用原料藥，以下面的片劑配方制備片 劑:藥用原料藥15mg、淀粉15mg、乳糖10 Omg、明膠1 mg、硬脂酸鎂1 mg。制法:將明膠用水制成 溶液作為粘合劑;將原料藥、淀粉、乳糖充分混合均勻，用粘合劑制軟材，制濕顆粒，干燥;將 干顆粒與硬脂酸鎂混合均勻，壓片，每片含藥用原料藥15mg。使這些片劑用玻璃瓶密封，再 在40°C條件下密封、避光放置5個(gè)月，用【HPLC-A】測(cè)定各樣品并計(jì)算在此條件下處置5個(gè)月 后某雜質(zhì)相對(duì)于〇月時(shí)的含量增加百分?jǐn)?shù)，以及式I化合物相對(duì)于〇月時(shí)的殘余百分?jǐn)?shù)。結(jié)果 顯示出基本上與試驗(yàn)例3相同的結(jié)果，例如No. 21片劑的I殘余/%為91.8%、la增加/%為 292%、讓增加/%為65%;又例如吣.22片劑的1殘余/%為〈85%、1&增加/%為>500%、113增 加/%為69 %。
[0295] 產(chǎn)業(yè)適用性
[0296] 本發(fā)明提供了抗病毒藥物及其藥物組合物，其可作為逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶抑制劑的 藥物，該逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶抑制劑具有式I所示的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種藥用原料藥，其活性成分為以下式I化合物：2. 根據(jù)權(quán)利要求1的藥用原料藥，其中還含有（例如痕量的）作為雜質(zhì)存在的以下式Ia 化合物： ·.〇3. 根據(jù)權(quán)利要求1的藥用原料藥，其中還含有（例如痕量的）作為雜質(zhì)存在的以下式Ib 化合物：4. 一種藥物組合物，其是由權(quán)利要求1所述藥用原料藥和藥用輔料一起制備得到的。5. 根據(jù)權(quán)利要求4的藥物組合物，其中還含有（例如痕量的）作為雜質(zhì)存在的以下式Ia 化合物：6. 根據(jù)權(quán)利要求18的藥物組合物，其中還含有(例如痕量的）作為雜質(zhì)存在的以下式I b 化合物：7. 如下式Ia化合物在制備用于檢測(cè)以如下式I化合物為活性成分的藥用原料藥 I·· 或者以該式I化合物為活性成分制成的（例如由該藥用原料藥制成的）藥物組合物的對(duì) 照品中的應(yīng)用。8. 如下式Ib化合物在制備用于檢測(cè)以如下式I化合物為活性成分的藥用原料藥或者以該式I化合物為活性成分制成的（例如由該藥用原料藥制成的）藥物組合物的對(duì) 照品中的應(yīng)用。9. 控制藥品質(zhì)量的方法，所述的藥品是以式I化合物為活性成分的藥用原料藥或者由 該藥用原料藥制備成的藥物組合物，該方法包括使該藥品中的雜質(zhì)式Ib化合物控制在一定 范圍內(nèi)，以使該藥品在長期貯藏過程中雜質(zhì)式Ia化合物呈現(xiàn)低的增長。10. 制備權(quán)利要求1所述藥用原料藥的方法，該方法包括以下步驟： (1)向N-喹啉?；?L-天門冬氨酸、3-異丙基-3-[ (2S，3S)-2-羥基-3-(苯基甲氧基羰 基)氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯、苯并三唑-1 -基氧三(二甲基氨基)鱗氟磷酸鹽和1 -羥基苯并三唑的無水二甲基甲酰胺的攪拌溶液中加入N，N-二異丙基乙胺，在室溫下攪拌使 反應(yīng)完全，反應(yīng)物用乙酸乙酯稀釋，并用水、2%硫酸氫鉀、5%碳酸氫鈉和飽和氯化鈉水溶 液洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，減壓蒸發(fā)溶劑，用硅膠柱色譜以乙酸乙酯提純，得到3-異丙基-3-[ (2S，3S)-2-羥基-3-(N-喹啉?；?L-天門冬酰基）氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯 (即式Ia化合物）(2) 在室溫、氣氣氛下，使二環(huán)己基碳化二亞胺、3-異丙基-3-[ (2S，3S)_2_羥基-3-(N-喹啉?；?L-天門冬酰基)氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯（即式Ia化合物）、無水亞磷酸 在無水吡啶中混合，在60°C攪拌反應(yīng)后，減壓蒸發(fā)溶劑，以碳酸氫鈉水溶液處理，于室溫下 激烈攪拌1小時(shí)，濾出沉淀物，以水洗滌，以濃鹽酸酸化濾液至約PHI. 5;以乙酸乙酯萃取吸 收產(chǎn)物，有機(jī)物經(jīng)無水硫酸鎂脫水，溶劑蒸發(fā)，得到3-異丙基-3-[ (2S，3S)-2-次膦羧氧基-3-(N-喹啉?；?L-天門冬酰基)氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯（即式Ib化合物）(3) 使3-異丙基-3-[(2S，3S)-2-次膦羧氧基-3-(N-喹啉酰基-L-天門冬?；?氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯（即式Ib化合物)在六甲基二硅胺烷中的懸浮液于120±5°C下攪 拌使反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)呈均質(zhì)化，添加雙（三甲硅烷基）過氧化物，接著在上述溫度下攪拌1小 時(shí)；反應(yīng)混合物冷卻至室溫后，真空蒸發(fā)至干;殘余物溶于甲醇中，減壓蒸發(fā)至干，再溶于 〇. IM碳酸氫鈉水溶液中，所得混合物以濃鹽酸酸化至約pHl .5,經(jīng)氯化鈉飽和，以乙酸乙酯 萃取;合并的有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鎂脫水，蒸發(fā)至干，得到3-異丙基-3-[(2S，3S)-2-膦羧氧 基-3-(N-喹啉?；?L-天門冬?；?氨基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯(4) 在室溫下將3_異丙基_3_[ (2S，3S)_2_勝駿氧基_3_(N_卩奎琳醜基-L-天門冬醜基)氛 基-4-苯基丁基]肼基甲酸叔丁酯加至碳酸氫鈉水溶液中，攪拌直至溶液變澄清;加異丙醇， 攪拌混合物，過濾;所得濾液在55-60°C真空下蒸餾去除溶劑;使物料冷卻至25-35Γ，添加 異丙醇，升溫至55-60°C，真空蒸餾除溶劑，干燥，所得固體用異丙醇洗滌，再在70-75Γ的真 空下蒸發(fā)至干燥，即得式I所示二鈉鹽化合物為3-異丙基-3-[(2S，3S)-2-膦羧氧基-3-(N-喹啉酰基-L-天門冬?；?氨基-4-苯基丁基肼基甲酸叔丁酯二鈉(5) 純化:使步驟(4)所得產(chǎn)物加至庚烷：乙酸乙酯=10:3的混合溶劑中，在70-75°C下 攪拌1-3小時(shí)，冷卻至室溫，濾出固體析出物，用庚烷20ml分2次洗滌，再在60°C、真空下蒸發(fā) 至干燥，即得;任選地根據(jù)需要重復(fù)本步驟(5)。
【文檔編號(hào)】A61P31/18GK105884826SQ201610257359
【公開日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2014年8月14日
【發(fā)明人】夏桂民, 楊東元, 韓潔
【申請(qǐng)人】赫斯（西安）生物科技有限公司