具有Akt抑制活性的取代嘧啶類衍生物及其制備方法與應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種新的具有Akt抑制活性的取代嘧啶類衍生物、它們的制備方法以及包括它們和它們鹽的藥物組合物，以及所述取代嘧啶類衍生物和它們的鹽在制備用于預(yù)防和/或治療腫瘤的藥物中的用途。該化合物的結(jié)構(gòu)式為式(I)或式(II)所示：本發(fā)明的化合物結(jié)構(gòu)新穎，對(duì)Akt的抑制活性效果突出，安全性高，制備成本低廉，在制備治療抗腫瘤的藥物中具有很好的應(yīng)用前景。
【專利說(shuō)明】
具有Akt抑制活性的取代嘧啶類衍生物及其制備方法與應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于有機(jī)化合物合成及醫(yī)藥應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一類具有Akt抑制活 性的取代嘧啶類衍生物及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 腫瘤以其難治愈、復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn)成為威脅人類健康的嚴(yán)重疾病。目前，腫瘤的發(fā) 生機(jī)制，以及抗腫瘤藥物的開(kāi)發(fā)，成為當(dāng)今醫(yī)藥行業(yè)研究的熱點(diǎn)課題。磷酯酰肌醇-3-激酶 (phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase Β,ΡΚΒ,也稱Akt) 信號(hào)通路與細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、存活和凋亡密切相關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)，該通路在多種腫瘤如卵巢 癌、肺癌、乳腺癌、直腸癌等癌細(xì)胞中異常活化，通過(guò)抑制該通路的激活，能夠有效抑制腫瘤 的生長(zhǎng)。Akt作為該通路的中心蛋白，成為抑制該通路激活的重要靶點(diǎn)。
[0003] Akt于1991年被發(fā)現(xiàn)，因?yàn)樗c蛋白激酶A和蛋白激酶C的高度同源性，所以被稱為 蛋白激酶8，屬于六6(：激酶家族。它有三種亞型 :41^1(?仙€〇^肚2(?仙0)^1^3(?仙丫）(^1^1 (ΡΚΒα)分布廣泛，Akt2(PKBi3)存在于胰島素敏感的器官中，Akt3(PKBy)在大腦和睪丸中表 達(dá)。它們由三種獨(dú)立的基因編碼，這三種基因有超過(guò)85%的序列相似性，因此這三種蛋白質(zhì) 產(chǎn)物有相似的結(jié)構(gòu)，在氨基酸水平有超過(guò)80%的同源性。每一種亞型都含有三個(gè)功能域:N 末端的PH±或、激酶催化域、C末端調(diào)節(jié)域。對(duì)不同亞型的生物學(xué)研究表明，Aktl主要控制細(xì)胞 的生長(zhǎng)和增殖，Akt2除控制細(xì)胞的生存增殖分化外，還參與胰島素的糖代謝，Akt3與維持大 腦的正常體積有關(guān)。在腫瘤細(xì)胞中，由于基因及表觀遺傳方面的改變，Akt的表達(dá)大大增加， 導(dǎo)致細(xì)胞抗凋亡，最終發(fā)展成腫瘤。因此，抑制Akt是治療腫瘤的一個(gè)新策略。目前，進(jìn)入臨 床研究的有哌立福新、碰2206^205363、600)068、651(2110183、651(2141795等化合物。
[0004] 因此，發(fā)現(xiàn)新的具有Akt抑制活性的化合物，對(duì)于抗腫瘤藥物的研發(fā)具有十分重要 的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一類具有Akt抑制活性的取代嘧 啶類衍生物及其制備方法與應(yīng)用，該化合物具有結(jié)構(gòu)新穎，對(duì)Akt的抑制活性效果突出，安 全性高，制備成本低廉等優(yōu)勢(shì)，可以作為治療腫瘤的很有前景的藥物。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：
[0007] -種式（I)或式（II)所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，
[0009] 其中，Ri為取代苯基、苯甲酰氨基或?qū)β缺郊柞０被?R2為氯、甲氨基或乙氨基;R3 為取代苯基、芐基或吲哚-3-亞甲基;R4為氨基、羥甲基或N-異丙基-氨甲基;R5為氫、醛基或 醛基〇-甲基聘，R 6為氯或氨基。
[0010] 優(yōu)選的，Ri為對(duì)氟苯基、對(duì)氯苯基、對(duì)溴苯基、2，4-二氯苯基、2，6-二氯苯基、苯甲 酰氨基或?qū)β缺郊柞０被?R 2為氯、甲氨基或乙氨基;R3為苯基、對(duì)氟苯基、對(duì)氯苯基、對(duì)溴苯 基、2,4_二氯苯基、芐基或吲哚-3-亞甲基;R 4為氨基、羥甲基或N-異丙基-氨甲基;R5為氫、醛 基或醛基〇-甲基B，R6為氯或氨基。
[0011] 上述化合物的實(shí)例如下：
[0012] 卜(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-卜基)-2-(4-氟苯基）乙酮(Lai);
[0013] 卜(4-(6-氯嘧啶-4-基）哌嗪-卜基)-2-(4-氯苯基）乙酮(La2);
[0014] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-溴苯基）乙酮(La3);
[0015] 卜(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-卜基)-2-(2,4-二氯苯基）乙酮(La4);
[0016] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氯苯基）乙酮(La5);
[0017] 2-(4-氟苯基)-卜(4-(6-(甲胺基)啼啶-4-基)哌嗪-卜基）乙酮(La6);
[0018] 2-(4-氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(La7);
[0019] 2-(4-溴苯基)-卜(4-(6-(甲胺基)啼啶-4-基)哌嗪-卜基）乙酮(La8);
[0020] 2-(2,4-二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(La9);
[0021] 2-(2,6-二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(LalO);
[0022] 2-(4-氟苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lall);
[0023] 2-(4-氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal2);
[0024] 2-(4-溴苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal3);
[0025] 2-(2,4-二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal4);
[0026] 2-(2,6-二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal5);
[0027] N-(2-(4_(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺(Lal6);
[0028] N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺(Lal7);
[0029] N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺(Lal8);
[0030] n-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(Lal9);
[0031] N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(La20);
[0032] N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(La21);
[0033] 4-氯-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-1-基)嘧啶(Ljl);
[0034] 4-氯-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-1-基)嘧啶(Lj2);
[0035] 4-氯-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-1-基)嘧啶(Lj3);
[0036] 4-氯-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-1-基)嘧啶(Lj4);
[0037] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)-3-羥基-2-苯基丙-1-酮(Lj5);
[0038] 4-(4-(L-色氨酸）哌嗪-1-基)-6-氯嘧啶（Lj6);
[0039] 4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氯嘧啶(Lj7);
[0040] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基）-3-(異丙氨基）丙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲醛 (Lj8)；
[0041] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基）-3-(異丙氨基）丙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲醛 (Lj9)；
[0042] 4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基）-3-(異丙氨基）丙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲醛 (LjlO)；
[0043] 4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(異丙氨基)丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲 醛(Ljll);
[0044] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基）乙?；?哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛(Ljl2);
[0045] 4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛(Ljl3);
[0046] 4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛(Ljl4);
[0047] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(異丙氨基）丙?；?哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟(Ljl5);
[0048] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(異丙氨基）丙酰基)哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟(Ljl6);
[0049] 4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(異丙氨基）丙?；?哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟(Ljl7);
[0050] 4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(異丙氨基)丙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲 醛0-甲基肟(Ljl8);
[0051 ] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基）乙?；?哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛0-甲基肟(Ljl9);
[0052] 4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛0-甲基肟(Lj20);
[0053] 4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛0-甲基肟(Lj21)。
[0054] 上述優(yōu)選的42個(gè)化合物名稱后的括號(hào)中為其相應(yīng)的代號(hào)，為敘述方便和表達(dá)簡(jiǎn) 潔，上述括號(hào)中的代號(hào)在本說(shuō)明書(shū)以下內(nèi)容中將被直接應(yīng)用。
[0055] 本發(fā)明另外提供了制備式（I)和式（II)化合物的方法，它們可以如下面詳述地得 到。
[0056]式（I)所示的化合物的制備方法包括:使式C所示的化合物與式D1、D2或D3所示的 化合物反應(yīng)，得到式(I)所示的化合物；
[0058] 其中，、R2具有如前所述的定義;X為F、C1、Br、2，4-C1或2，6-C1。
[0059] 上述式C所示的化合物的制備方法為：以4,6-二氯嘧啶(A1)為起始原料，與甲胺或 乙胺反應(yīng)，得到中間體化合物A2、A3，中間體A再與1-叔丁氧羰基哌嗪反應(yīng)，得到中間體化合 物B，將中間體化合B溶于HC1二氧六環(huán)溶液，室溫反應(yīng)，即得式C所示的化合物。
[0060] 式（II)所示的化合物的制備方法包括:使式G1、G2或C1所示的化合物與式HI、H2、 H3、H4或H5所示的化合物反應(yīng)，得到式(II)所示的化合物；
[0062] 其中，R3、R4、R5、R 6具有如前所述的定義;X為F、C1、Br或2，4-C1。
[0063] 式(I)和式(II)化合物的具體合成路線如下：
[
[0065]試劑及條件：（la)甲胺溶液，異丙醇，室溫；（lb)乙胺溶液，異丙醇，室溫；（2a)l_叔 丁氧羰基哌嗪，三乙胺，甲醇，50°C ; (2b) 1-叔丁氧羰基哌嗪，三乙胺，DMF，100°C ; (2c) 1-叔 丁氧羰基哌嗪，1，8_二氮雜二環(huán)^^一碳-7-烯(DBU)，碳酸鉀，DMF，100°C ; (3)HC1二氧六環(huán)溶 液，室溫；（4)甘氨酸鹽酸鹽，三乙胺，0-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯（HBTU)，DMF，室 溫；（5)氫氧化鋰，水：甲醇：四氫呋喃（1 :1:3)，室溫；（6)HBTU，N，N-二異丙基乙胺(DIPEA); (7)氨氣，甲苯，室溫；（8)甲氧胺鹽酸鹽，冰醋酸，水，室溫；（9)1-叔丁氧羰基哌嗪，三乙胺， 甲醇，70°C ; (10)HC1二氧六環(huán)溶液，室溫；（11)二碳酸二叔丁酯，水，室溫；（12)HBTU，DIPEA， DMF，室溫；（13) HC1二氧六環(huán)溶液，室溫。
[0066]具體合成步驟如下：
[0067] (1)將4,6_二氯嘧啶(A1)溶解在異丙醇中，慢慢滴入甲胺溶液，室溫反應(yīng)2h，減壓 蒸除溶劑，析出固體，加入適量水?dāng)嚢柽^(guò)濾，濾餅用水洗，真空干燥，得中間體A2，其中起始 原料和甲胺溶液的摩爾比為1;8.25;
[0068] (2)將4，6-二氯嘧啶(A1)溶解在異丙醇中，慢慢滴入乙胺溶液，室溫反應(yīng)2h，減壓 蒸除溶劑，析出固體，加入適量水?dāng)嚢柽^(guò)濾，濾餅用水洗，真空干燥，得中間體A3，其中起始 原料和乙胺溶液的摩爾比為1; 8.25;
[0069] (3)將中間體A1和1-叔丁氧羰基哌嗪溶于甲醇中，加入三乙胺，升溫至50°C回流， 反應(yīng)4h。減壓蒸除溶劑，加入適量水?dāng)嚢柽^(guò)濾，濾餅用水潤(rùn)洗，真空干燥得中間體B1，其中中 間體Al、1-叔丁氧羰基哌嗪、三乙胺的摩爾比為1:1.26:1.26。
[0070] (4)將中間體A2和1-叔丁氧羰基哌嗪溶于DMF中，加入三乙胺，加熱到100°C，反應(yīng) 過(guò)夜，再加入三乙胺，繼續(xù)反應(yīng)48h，將反應(yīng)液倒入30倍量水中，析出固體，過(guò)濾，濾餅用水多 次潤(rùn)洗，真空干燥得中間體B2，其中中間體A2、1 -叔丁氧羰基哌嗪、三乙胺的摩爾比為1: 1.1：2.2〇
[0071 ] (5)將中間體A3溶于DMF中，加入1-叔丁氧羰基哌嗪，碳酸鉀，DBU，加熱到100°C，反 應(yīng)72h，將反應(yīng)液倒入30倍量水中，析出固體，過(guò)濾，濾餅用水反復(fù)潤(rùn)洗，真空干燥得中間體 B3，其中中間體A3、1 -叔丁氧羰基哌嗪、碳酸鉀、DBU的摩爾比為1:1.2:1:1。
[0072] (6)中間體C的制備:將中間體B溶于HC1二氧六環(huán)溶液，室溫反應(yīng)24h，析出固體，過(guò) 濾，濾餅用乙酸乙酯潤(rùn)洗，真空干燥得中間體C。所述中間體C中，R2為氯、甲氨基、乙氨基。 [0073] (7)中間體D3的制備:將對(duì)氯苯甲酸溶于DMF中，加入0-苯并三氮唑-四甲基脲六氟 磷酸酯(HBTU)，攪拌，加入甘氨酸乙酯鹽酸鹽，滴加三乙胺，室溫反應(yīng)過(guò)夜，將反應(yīng)液倒入30 倍量水中，析出固體，過(guò)濾，一次用10%稀鹽酸溶液，飽和碳酸氫鈉溶液，清水洗滌濾餅，真 空干燥得固體，將所得固體溶于THF: MeOH: H20(3:1:1)溶液中，加入氫氧化鋰，室溫反應(yīng)過(guò) 夜。減壓蒸除溶劑，加入適量乙酸乙酯和水萃取，分出水相，水相用10%鹽酸溶液酸化至pH =1，再用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減壓蒸除溶劑得 中間體D3，其中對(duì)氯苯甲酸、甘氨酸鹽酸鹽、三乙胺、HBTU、氫氧化鋰的摩爾比為1:1.1:3 : 1.2:2。
[0074] (8)將中間體D溶于DMF中，加入0-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，攪拌， 加入中間體C，N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，將反應(yīng)液倒入30倍量水中，析出 固體，過(guò)濾，濾餅用水潤(rùn)洗，真空干燥，再用乙酸乙酯重結(jié)晶，得目標(biāo)產(chǎn)物L(fēng)a。上述反應(yīng)中，中 間體D、中間體C、HBTU、DIPEA的摩爾比為1:1:1.13:5。所述目標(biāo)化合物L(fēng)a中R!為對(duì)氟苯基、 對(duì)氯苯基、對(duì)溴苯基、2，4-二氯苯基、2，6-二氯苯基、苯甲酰氨基、對(duì)氯苯甲酰氨基，R2為氯、 甲氨基、乙氨基。
[0075] (9)將4,6_二氯嘧啶-5-甲醛溶于甲苯中，通入氨氣30min，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，過(guò)濾得 固體，柱層析純化(洗脫劑為乙酸乙酯:石油醚=1:3 )，得中間體E1。
[0076] (10)將中間體E1溶于冰醋酸和水的混合溶液中，加入甲氧胺鹽酸鹽，25 °C反應(yīng)過(guò) 夜。TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，向反應(yīng)液中加入適量水，用同體積乙酸乙酯萃取，有機(jī)層依次水洗 3次，10 %氫氧化鈉溶液洗，飽和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減壓蒸除溶劑，柱層析純 化(洗脫劑石油醚：乙酸乙酯= 3:1)，得中間體E2,其中中間體E1、甲氧胺鹽酸鹽的摩爾比為 1:1.8〇
[0077] (11)將中間體E1、E2分別溶于甲醇中，加入1-叔丁氧羰基哌嗪，N，N_二異丙基乙胺 (DIPEA)，加熱至60°C~70°C，回流反應(yīng)3~4h，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)結(jié)束，降至室溫，減壓蒸除溶劑， 加水?dāng)嚢柽^(guò)濾，濾餅用水潤(rùn)洗，真空干燥，得中間體FI、F2。其中，中間體E、1-叔丁氧羰基哌 嗪、N，N-二異丙基乙胺的摩爾比為1:1.1:2。
[0078] (12)中間體G的制備：將中間體F溶于HC1二氧六環(huán)溶液，室溫反應(yīng)24h，析出固體， 過(guò)濾，濾餅用乙酸乙酯潤(rùn)洗，真空干燥得中間體G。
[0079] (13)中間體Η的制備:分別將對(duì)氯苯甘氨酸、L-苯丙氨酸、L-色氨酸分別溶于水中， 加入碳酸鉀，二碳酸二叔丁酯，室溫反應(yīng)過(guò)夜，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液用10 %鹽酸溶液酸 化至ΡΗ=1，再用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓蒸除 溶劑得中間體11、12、13。上述反應(yīng)中，（對(duì)氯苯甘氨酸或1^-苯丙氨酸或1^-色氨酸）、碳酸鉀、 二碳酸二叔丁酯的摩爾比為1:1:1.1。
[0080] (14)將中間體Η溶于DMF中，加入0-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，加入 中間體G或C1，N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，倒入30倍量水中，析出固體，過(guò) 濾，用水潤(rùn)洗濾餅，真空干燥，柱層析純化(洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯= 3:1~乙酸乙酯)得 白色固體，將白色固體溶于HC1二氧六環(huán)溶液中，反應(yīng)24h，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)結(jié)束，減壓蒸除溶 劑，加乙酸乙酯潤(rùn)洗，過(guò)濾，真空干燥得目標(biāo)化合物L(fēng)j。上述反應(yīng)中，中間體G或C1、中間體H、 HBTU、DIPEA的摩爾比為1:1:1.13:5。所述Lj中，R3為取代苯基，芐基，吲哚-3-亞甲基;R4為氨 基，羥甲基，N-異丙基-氨甲基;R 5為氫，醛基，醛基0-甲基肟，R6為氯、氨基。
[0081] 本發(fā)明還提供上述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備預(yù)防和/或治療腫瘤的藥 物中的用途。
[0082] 本發(fā)明還提供一種藥物組合物，該藥物組合物包含上述的化合物或其藥學(xué)上可接 受的鹽。
[0083] 優(yōu)選的，所述藥物組合物還包含一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑和/或稀 釋劑。
[0084]優(yōu)選的，所述藥物組合物包含一種或多種藥學(xué)上或食品學(xué)上可接受的輔料。所用 的輔料可為固態(tài)或液態(tài)。固態(tài)形式的制劑包括粉劑、片劑、分散顆粒、膠囊、藥丸及栓劑。粉 劑及片劑可包含約5%至約95%的活性成分。適當(dāng)?shù)墓腆w輔料可以是碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑 石粉、糖或者乳糖。片劑、粉劑、藥丸及膠囊為適于口服用的固態(tài)劑型。液態(tài)形式的制劑包括 溶液、懸浮液及乳液，其實(shí)施例為非經(jīng)腸注射用水溶液或水-丙二醇溶液，或添加甜味劑及 造影劑的口服溶液。此外，還可制成注射用小水針、注射用凍干粉針、大輸液或小輸液。
[0085] 優(yōu)選的，所述藥物組合物為固體口服制劑、液體口服制劑或注射劑。
[0086] 進(jìn)一步優(yōu)選的，所述藥物組合物為片劑、分散片、腸溶片、咀嚼片、口崩片、膠囊、糖 衣劑、顆粒劑、干粉劑、口服溶液劑、注射用小水針、注射用凍干粉針、大輸液或小輸液。
[0087] 本發(fā)明的化合物是以發(fā)明人前期研究發(fā)現(xiàn)的具有Aktl激酶抑制活性的化合物作 為先導(dǎo)化合物，對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，通過(guò)去除吡咯環(huán)，在嘧啶4上引入取代氨基、氯，同時(shí)將 苯環(huán)換用不同的鹵素取代，得到系列化合物，將得到的系列化合物進(jìn)行分子對(duì)接，對(duì)接結(jié)果 顯示同樣能與Akt蛋白Glu228、Ala230形成氫鍵作用。但是活性結(jié)果顯示，La系列化合物對(duì) Aktl激酶的抑制活性較差。通過(guò)查閱文獻(xiàn)，表明Aktl蛋白中存在Acid hole結(jié)構(gòu)，為了增強(qiáng) 化合物與蛋白的作用，我們?cè)隰驶廖灰霕O性取代基，使其能與Glu234形成氫鍵作用。同 時(shí)，通過(guò)對(duì)蛋白結(jié)構(gòu)分析，我們發(fā)現(xiàn)，在靠近嘧啶5位的地方存在一個(gè)有Thr211和Thr291殘 基親水性口袋，為此我們?cè)卩奏?為引入醛基、醛基甲氧肟取代基，探討其對(duì)化合物活性的 影響。通過(guò)分子對(duì)接表明，本發(fā)明的化合物L(fēng)j9、化合物L(fēng)jl7能與Glu234、Glu228、Ala230、 Thr291形成氫鍵作用，活性結(jié)果顯示，當(dāng)嘧啶5為引入醛基、醛基0-甲基肟取代時(shí)，對(duì)Aktl激 酶的抑制活性明顯提高。
[0088]本發(fā)明的有益效果：
[0089] (1)本發(fā)明的化合物結(jié)構(gòu)新穎，對(duì)Akt的抑制活性效果突出，安全性高，為抗腫瘤藥 物的開(kāi)發(fā)提供了新的化合物來(lái)源。
[0090] (2)本發(fā)明化合物的合成中用到的中間體4,6_二氯嘧啶，1-叔丁氧羰基哌嗪，4,6_ 二氯嘧啶-5-甲醛，0-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，甲氧胺鹽酸鹽及其他試劑 均可從試劑公司購(gòu)得，價(jià)格便宜?；衔锖铣芍?，對(duì)反應(yīng)儀器要求較低，操作簡(jiǎn)單，反應(yīng)條件 溫和，除個(gè)別反應(yīng)需要用油浴鍋加熱外，大部分反應(yīng)都在室溫下進(jìn)行，后處理方便，如由4， 6-二氯嘧啶(A1)生成中間體A2、A3的反應(yīng)中，我們加入過(guò)量的胺，確保原料完全反應(yīng)，由于 反應(yīng)產(chǎn)物在水中溶解性較小，而未反應(yīng)的胺易溶于水，所以后處理時(shí)，只需減壓蒸除反應(yīng)溶 劑，然后加水?dāng)嚢柽^(guò)濾，濾餅用水潤(rùn)洗，就可以得到比較純的中間體A2、A3,產(chǎn)率也較高，同 樣的，由中間體A生成中間體B和中間體E生成中間體F的反應(yīng)中，1-叔丁氧羰基哌嗪易溶于 水，而產(chǎn)物水溶性較差，同樣可以用此方法處理。
【具體實(shí)施方式】
[0091] 結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，應(yīng)該說(shuō)明的是，下述說(shuō)明僅是為了解釋本 發(fā)明，并不對(duì)其內(nèi)容進(jìn)行限定。
[0092] 實(shí)施例中未詳細(xì)描述的方法、試劑等，均為所屬領(lǐng)域常規(guī)方法、試劑。
[0093] 實(shí)施例1:目標(biāo)化合物L(fēng)ai~La21的制備
[0094] (1 )4_取代-6-氯嘧啶的（中間體A)的制備
[0095] 將4,6_二氯嘧啶(20.14mmol，3.0g)(Al)溶解在20ml異丙醇中，慢慢滴入10ml氨水 或甲胺或乙胺，室溫反應(yīng)2h，減壓蒸除溶劑，析出固體，加入20ml水?dāng)嚢柽^(guò)濾，濾餅用水洗， 真空干燥，得中間體A2或A3.
[0096] 4-甲氨基-6-氯嘧啶（A2)，白色晶體，產(chǎn)率eS^c/H-NMRHOOMHz^MSO-deMbpm): 8.28(s,lH),7.68(s,lH),6.50(s,lH),2.82(s,3H).MS(ESI)m/z:144[M+H]+.
[0097] 4-乙氨基-6-氯嘧啶(A3)，白色晶體，產(chǎn)率92% c/H-NMRHOOMHz ,DMS0-d6)S(ppm): 8.25(s，lH)，7.71(s，lH)，6.47(s，lH)，3.14(s，2H)，1.13(t，J=7.2Hz，3H).MS(ESI)m/z: 158[M+H]+.
[0098] (2)4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯（中間體Bl)的制備
[0099] 將4，6_二氯嘧啶(A1) (12 · 75mmol，1 · 9g)和 1-叔丁氧羰基哌嗪（16 · 13mmol，3 · 0g) 溶于20ml甲醇中，加入2.3ml三乙胺（16.13mmol)，升溫至50°C回流，反應(yīng)4h。減壓蒸除溶劑， 加入20ml水?dāng)嚢柽^(guò)濾，濾餅用水潤(rùn)洗，真空干燥得白色固體。產(chǎn)率83 %。h-NMlU 400MHz， DMS0-d6)5(ppm):8.35(s,lH),6.96(s,lH),3.65(s,4H),3.41(t,J=5.6Hz,4H),1.42(s, 9H).
[0100] (3)4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯（中間體B2)的制備
[0101] 將 4-甲氨基-6-氯嘧啶以2)(8.29111111〇1，1.198)和1-叔丁氧羰基哌嗪（9.12111111〇1， 1.70g)溶于lOmlDMF中，加入1.27ml三乙胺（9.12mmol)，加熱到100°C，反應(yīng)過(guò)夜，再加入 1.27ml三乙胺(9.12mmol)，繼續(xù)反應(yīng)48h，將反應(yīng)液倒入30倍量水中，析出褐色固體，過(guò)濾， 濾餅用水多次潤(rùn)洗，真空干燥得褐色固體。產(chǎn)率44 %。匪R(400MHz，DMS0-d6) δ (卯m): 7.98(s,lH),6.68(s,lH),5.54(s,lH),3.46-3.45(m,4H),3.38-3.36(m,4H),2.72(d,J= 4.8Hz,3H),1.41(s,9H).MS(ESI)m/z:294.5[M+H]+.
[0102] (4)4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯（中間體B3)的制備
[0103] 將4-乙氨基-6-氯嘧啶以3)(3.81臟〇1，0.68)溶于7111101^中，加入1-叔丁氧羰基哌 嗪（4.57謹(jǐn)〇1，0.858)，碳酸鉀（3.81111111〇1，0.538)，081](3.81111111〇1，0.571111)，加熱到100°(：，反 應(yīng)72h，將反應(yīng)液倒入30倍量水中，析出褐色固體，過(guò)濾，濾餅用水反復(fù)潤(rùn)洗，真空干燥得褐 色固體。產(chǎn)率62%。1!1-匪1?(4001!^，015〇-(16)3( ??111):7.99(8，1!〇,6.69(^ = 5.2抱，1!1)， 5.56(s，lH),3.45-3.43(m，4H),3.37-3.36(m，4H)，3.20(m，2H)，1.42(s，9H)，1.09(t，J= 7.2Hz,3H).
[0104] (5) 6-(哌嗪-1 -基)嘧啶-4-取代鹽酸鹽（中間體C)的制備
[0105] 將4-(6-取代-嘧啶-4-基）哌嗪-1-甲酸叔丁酯（中間體幻（12.4111111〇1，3.478)溶于 30ml 4mo 1/L HC1二氧六環(huán)溶液，室溫反應(yīng)24h，析出固體，過(guò)濾，濾餅用乙酸乙酯潤(rùn)洗，真空 干燥得中間體C。
[0106] 6_(哌嗪-1-基)嘧啶-4-氯鹽酸鹽(C1).白色固體，產(chǎn)率96%。
[0107] N-甲基-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-4-胺鹽酸鹽(C2).褐色固體，產(chǎn)率99%。
[0108] N-乙基-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-4-胺鹽酸鹽(C3)，褐色固體，97%。
[0109] (6)(4-氯苯甲?；?甘氨酸（中間體D3)的合成
[0110] 將對(duì)氯苯甲酸（3.19mmol，500mg)溶于5mlDMF中，加入0-苯并三氮唑-四甲基脲六 氟磷酸酯(HBTU) (3.83mmol，1.45g)，攪拌2min，加入甘氨酸乙酯鹽酸鹽（3.51mmol，491mg)， 滴加1.33ml三乙胺(9.58mmo 1)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，將反應(yīng)液倒入30倍量水中，析出固體，過(guò)濾， 分別用10%稀鹽酸溶液，飽和碳酸氫鈉溶液，清水洗滌濾餅，真空干燥得米黃色固體，產(chǎn)率 70% 〇
[0111] 將(4-氯苯甲酰基)甘氨酸乙酯（2.21mmol，0.535g)溶于 15ml THF:Me0H:H20(3:l: 1)溶液中，加入氫氧化鋰(4.43mmo 1，0.106g)，室溫反應(yīng)過(guò)夜。減壓蒸除溶劑，分別加入20ml 乙酸乙酯和水萃取，分出水相，水相用10 %鹽酸溶液酸化至pH = 1，再用20ml乙酸乙酯萃取， 有機(jī)層用飽和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減壓蒸除溶劑得白色固體，產(chǎn)率85%。1!1-NMR(400MHz，DMS0-d6)S(pp m):12.64(br，lH)，8.93(t，J = 6Hz，lH)，7.88(d，J = 8.4Hz，2H)， 7.58(d，J = 8.4Hz，2H)，3.91(d，J = 6Hz，2H).
[0112] (7)目標(biāo)化合物L(fēng)a的制備
[0113] 將取代苯乙酸或(取代苯甲?；?甘氨酸（中間體D) (0.4mmo 1)溶于2mlDMF中，加入 〇-苯并三氮唑_四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU) (0.45mmol，171mg)，攪拌，加入6-(哌嗪-1-基） 嘧啶-4-取代鹽酸鹽（中間體〇(0.4臟〇1，10011^)，11二異丙基乙胺(2臟〇1，0.351111)，室溫 反應(yīng)過(guò)夜，將反應(yīng)液倒入30倍量水中，析出固體，過(guò)濾，濾餅用水潤(rùn)洗，真空干燥，再用乙酸 乙酯重結(jié)晶，得目標(biāo)產(chǎn)物L(fēng)a.
[0114] 所述目標(biāo)化合物L(fēng)a具體如下：
[0115] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基）哌嗪-1-基）-2-(4-氟苯基）乙酮（Lai)，白色固體，產(chǎn)率 56%，mp:15hl54°C<31H-Mffi(400MHz，DMS0-d6)S(pp m):8.36(s，lH)，7.27(d，J = 6Hz，lH)， 7.26(d，J = 6Hz，lH)，7.13(t，J=12.8Hz，2H)，6.98(s，lH)，3.77(s，2H)，3.64-3.56(m，8H) ? 13C-NM R(100MHz，DMS0)S(ppm) :169.56,162.56，161.41((1, J = 241Hz) ,159.58,158.38, 132 ·39(d，J = 3Hz)，131 ·49(d，J = 8Hz，2C)，115·41 (d，J = 21Hz，2C) ,102.37,44.98,44.01， 43.79,41.10,38.86.
[0116] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基）哌嗪-1-基）-2-(4-氯苯基）乙酮（La2)，白色固體，產(chǎn)率 53%，mp:167-168°C<31H-MMR(400MHz，DMS0-d6)S(pp m):8.36(s，lH)，7.37(d，J = 8.4Hz， 2H),7.26(d ,J = 8.4Hz,2H) ,6.98(s, 1H), 3.78(s , 2H), 3.64-3.56(m,8H). 13C-NMR( 100MHz , DMS0)5(ppm):169.35,162.56,159.58,158.39,135.31,131.59(20,131.52,128.62(2C), 102.38.44.97.44.00. 43.77.41.11.39.02
[0117] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基）哌嗪-1-基）-2-(4-溴苯基）乙酮（La3)，白色固體，產(chǎn)率 47%，mp:183-184°C<31H-MMR(400MHz，DMS0-d6)S(pp m):8.36(s，lH)，7.50(d，J = 8.4Hz， 2H),7.20(d ,J = 8.4Hz,2H) ,6.98(s, 1H), 3.76(s , 2H), 3.64-3.56(m,8H). 13C-NMR( 100MHz , DMS0)5(ppm):169.28,162.55,159.58,158.39,135.74,131.99(2C),131.54(2C),120.00, 102.38.44.97.44.00. 43.77.41.11.39.09.
[0118] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基）哌嗪-1-基)-2-(2,4-二氯苯基）乙酮(La4)，白色固體，產(chǎn) 率69%，1^:166-167。(：。 1!1-匪1?(4001〇^，0150-(16)3(??111):8.37(8，1!〇,7.59((1，了=1.6!^， lH),7.38(dd ,Ji = 8.4Hz ,J2 = 2Hz,1H) ,7.34(d ,J = 8.4Hz,lH) ,7.00(s,lH) ,3.88(s,2H), 3.75-3.57(m，8H).13C-NMR(100MHz，DMS0)S(pp m):168.08，162.58，159.60，158.40，135.23， 134.10,133.75,132.45,128.81,127.53,102.39,44.83,44.02,43.86,41.21,37.30.
[0119] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基）哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氯苯基）乙酮(La5)，白色固體，產(chǎn) 率76%，mp :198-2001:,11-匪R(400MHz，DMS0-d6)S(ppm) :8.38(s，lH)，7.46((1, J = 8Hz， 2H),7.32(dd ,Ji = 7.6Hz ,J2 = 0.8Hz,1H) ,7.02(s,lH) ,4.05(s, 2H), 3.77(s ,4H), 3.67(s, 2H) ,3.59-3.56(m，8H).13C-NMR(100MHz，DMS0)S(ppm) :167.01,162.61,159.61,158.41， 135.89(2C)，133.46,129.66,128.45(2C)，102.43,44.79,44.11,43.91,41.28,36.01.
[0120] 2-(4-氟苯基)-1-(4-(6-(甲胺基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(La6)，褐色固體， 產(chǎn)率24%，m ρ: 172-173Γ</Η-匪R(400MHz，DMS0-d6)S(ppm) :7.99(s，lH)，7.27((1, J = 5.6Hz,lH) ,7.26(d,J = 5.6Hz,lH) ,7.12(t,J = 9.2Hz,2H) ,6.68(q,J = 4Hz,lH) ,5.54(s, lH)，3.75(s，2H)，3.57-3.54(m，4H)，3.45(s，4H)，2.73(d，J=4.8Hz，3H). 13C-NMR(100MHz, DMS0)5(ppm) :169.45,164.26,162.38,161.39(d,J = 241Hz) ,157.60,132.48(d,J = 3Hz), 131.46(d ,J = 8Hz,2C),115.42(d ,J = 21Hz,2C),45.23,44.00,43.73,41.26,38.91,28.04.
[0121] 2-(4-氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(La7)，褐色固體， 產(chǎn)率54%，m ρ: 174-175Γ</Η-匪R(400MHz，DMS0-d6)S(ppm) :8.00(s，lH)，7.34((1, J = 8.4Hz,2H) ,7.26(d,J = 8.4Hz,2H),6.69(q,J = 4Hz,lH) ,5.55(s,lH),3.77(s,2H) ,3.57- 3.53(m,4H),3.346(s,4H),2.73(d,J=4.8Hz,3H).13C-NMR(100MHz,DMS0)5(ppm):169.22, 164.29,162.39,157.61,135.40,131.55(20,131.49,128.62(20,45.23,44.00,43.73, 41.29.39.08.28.04.
[0122] 2-(4-溴苯基)-1-(4-(6-(甲胺基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(La8)，褐色固體， 產(chǎn)率55%，m ρ: 183-184Γ</Η-匪R(400MHz，DMS0-d6)S(ppm) :7.99(s，lH)，7.50((1, J = 8.4Hz,2H) ,7.21(d,J = 8.4Hz,2H),6.67(q,J = 4Hz,lH) ,5.54(s,lH),3.75(s,2H) ,3.56-3.53(m，4H)，3.45(s，4H)，2.72(d，J = 4.4Hz，3H).13C-NMR(100MHz，DMS0)S(ppm) :169.15， 164.29,162.39,157.61,135.82,131.95(20,131.54(20,119.97,45.23,44.00,43.73, 41.29.39.15.28.05.
[0123] 2-(2,4-二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(La9)，類白色 固體，產(chǎn)率63 %，mp: 199-200 Γ。匪R( 400MHz，DMS0-d6 )S(ppm):8.00(s，lH)，7.59(d，J = 2Hz,lH) ,7.37(dd ,Ji = 8.4Hz ,J2 = 2Hz,1H) ,7.35(d ,J = 8.4Hz,lH),6.69(q ,J = 4Hz,lH), 5.57(s,lH),3.86(s,2H),3.66-3.48(m,8H) ,2.73(d,J = 4.8Hz,3H) ,13C-NMR(100MHz,DMS 0)5(ppm):167.96,164.30,162.41,157.63,135.21,134.17,133.74,132.42,128.80, 127.52.45.08.44.01.43.81.41.40.37.32.28.05.
[0124] 2-(2,6-二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(LalO)，類白 色固體，產(chǎn)率70%，mp:231-233°C< 31H-NMR(400MHz，DMS0-d6)S(ppm):8.02(s，lH)，7.46(d，J = 8Hz,2H),7.32(dd ,Ji = 7.6Hz ,J2 = 0.8Hz,1H) ,6.70(d ,J = 4.8Hz , lH), 5.58(s , lH) ,4.04 (s,2H),3.73-3.72(m,2H),3.62(m,2H),3.55-3.54(m,2H),3.50-3.48(m,2H),2.74(d,J= 4.8Hz , 3H). 13C-NMR(100MHz,DMS0)δ(ppm):166.86,164.32,162.42,157.64,135.89(2C), 133.53,129.64,128.45(20,45.05,44.12,43.89,41.49,40.20,36.02,28.05.
[0125] 2-(4-氟苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lall)，褐色固體， 產(chǎn)率41%，mp:162-164cC<31H-NMR(400MHz，DMS0-d6)S(pp m):7.99(s，lH)，7.27(s，2H)，7.14 (t，J = 8.4Hz，2H)，6.71(s，lH)，5.56(s，lH)，3.75(s，2H)，3.53(d，J=14Hz，4H)，3.43(s， 4H)，3.20(m，2H)，1.09(t，J=6.4Hz，3H). 13C-NMR(100MHz，DMS0)S(ppm):169.46,163.54， 162.36,161.40(d,J = 241Hz) ,157.71,132.48(d,J = 3Hz), 131.45(d,J = 8Hz,2C),115.41 (d,J = 21Hz, 2C),45.22,44.02,43.74,41.26,38.92,35.53,15.11.
[0126] 2-(4-氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal2)，褐色固體， 產(chǎn)率 90 %，mp: 171-173 Γ,Η-匪 R(400MHz，DMS0-d6) δ (ppm) :7.99( s，lH)，7.36((1, J = 8.4Hz，2H)，7.26(d，J = 8.4Hz，2H)，6.70(t，J = 5.6Hz，lH)，5.56(s，lH)，3.76(s，2H)，3.57-3.52(m，4H)，3.45-3.43(m，4H)，3.20(m，2H)，1.09(t，J = 7.2Hz，3H).13C-NMR(100MHz，DMS0) 5(ppm):169.21,163.54,162.35,157.71,135.39,131.55(20,131.49,128.62(2C),45.22, 44.01.43.74.41.28.39.08.35.53.15.11.
[0127] 2-(4-溴苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal3)，褐色固體， 產(chǎn)率81 %，mp: 178-179 Γ,Η-匪 R(400MHz，DMS0-d6) δ (ppm) :7.99( s，lH)，7.50((1, J = 8.4Hz，2H)，7.20(d，J = 8.4Hz，2H)，6.70(t，J = 5.2Hz，lH)，5.56(s，lH)，3.75(s，2H)，3.57-3.52(m，4H)，3.45-3.43(m，4H)，3.20(m，2H)，1.09(t，J = 7.2Hz，3H).13C-NMR(100MHz，DMS0) 5(ppm):169.14,163.54,162.35,157.71,135.83,131.95(20,131.54(2C),119.97,45.22, 44.01.43.74.41.28.39.15.35.53.15.11.
[0128] 2-(2，4-二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal4)，褐色 固體，產(chǎn)率 96 %，mp: 224-226 Γ。匪R( 400MHz，DMS0-d6 )S(ppm):8.01(s，lH)，7.58(d，J = 2Hz,lH) ,7.37(dd ,Ji = 8Hz j2 = 2Hz,lH),7.34(d ,J = 8.4Hz,lH) ,6.72(t ,J = 5.6Hz , 1H), 5.59(s,lH),3.86(s,2H),3.64-3.62(m,2H),3.55(m,4H),3.47-3.46(m,2H),3.19(m,2H), 1.09(t，J = 6.4Hz，3H) .13C-匪R(100MHz，DMS0)S(ppm) :167.96,163.56,162.35,157.73, 135.21,134.18,133.75,132.42,128.80,127.53,45.07,44.02,43.81,41.40,37.32, 35.53,15.12.
[0129] 2-(2,6-二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal5)，褐色 固體，產(chǎn)率61 %，mp: 183-185 Γ。h-NMlK 400MHz，DMS0-d6 )S(ppm):8.02(s，lH)，7.46(d，J = 8Hz,2H),7.32(dd ,Ji = 7.6Hz j2=1.2Hz,lH),6.72(t ,J = 5.6Hz,lH),5.60(s,lH),4.04(s, 2H),3.73(m,2H),3.60(m,2H),3.56(m,2H),3.47(m,2H),3.22(m,2H),1.10(t,J=7.2Hz, 3H). 13C-NMR(100MHz,DMS0)5(ppm):166.85,163.57,162.37,157.74,135.89(2C),133.53, 129.63,128.44(20,45.05,44.13,43.89,41.48,36.02,35.55,15.13.
[0130] N-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺(Lal6)，淡黃色固體， 產(chǎn)率58 %，mp: 200-202 Γ。匪R(400MHz，DMS0-d6) δ (ppm): 8 · 60 (t，J = 5 · 6Hz，1H)，8 · 38 (s,lH) ,7.88(d,J = 7.2Hz,2H) ,7.55(t,J = 7.2Hz,lH) ,7.48(t,J = 7.6Hz,2H) ,7.01 (s, 1H) ,4.19(d，J = 5.6Hz，2H) ,3 ·75-3·57(ι?，8H) .13C-匪R(101MHz，DMS0)S(ppm): 167.85， 166.81,162.57,159.60,158.41,134.57,131.78,128.79(20,127.70(20,102.40,43.84 (2C),41.45(2C),41.25.
[0131] N-(2-(4-(6-(甲氨基）嘧啶-4-基）哌嗪-1-基)-2-氧乙基）苯甲酰胺(Lal7)，淡褐 色固體，產(chǎn)率60 %，mp : 204-206 °C。匪R(400MHz，DMS0-d6) δ (ppm): 8 · 59 (t，J = 5 · 6Hz， 1H)，8.02(s，lH)，7.88(d，J = 7.6Hz，2H)，7.55(t，J = 7.2Hz，lH)，7.48(t，J = 7.6Hz，2H)， 6.72(d，J = 4.8Hz，lH)，5.58(s，lH)，4.19(d，J = 5.2Hz，2H)，3.58-3.51(m，8H)，2.74(d，J = 4 · 8Hz，3H) .13C-匪R(101MHz，DMS0)δ(ppm):167.74,166.81,164.18,162.37,157.51, 134·60，131·78，128·80(2C)，127·71(2C)，43·99(2C)，43·77(2C)，41·45，28·07
[0132] N-(2-(4-(6_(乙氨基）嘧啶-4-基）哌嗪-1-基)-2-氧乙基）苯甲酰胺(Lal8)，褐色 固體，產(chǎn)率52 %，mp: 202-204Γ。匪R(400MHz，DMS0-d6) δ(ppm): 8 · 59(t，J = 5 · 6Hz，1H)， 8.02(s,lH) ,7.88(d,J = 7.2Hz,2H) ,7.55(t,J = 7.2Hz,lH) ,7.48(t,J = 7.6Hz,2H) ,6.75 (t ,J = 5.2Hz,lH) ,5.60(s,lH) ,4.18(d,J = 5.6Hz,2H) ,3.58-3.48(m,8H) ,3.21(m,2H), 1.10(t，J = 7.2Hz，3H) .13C-匪R(101MHz，DMS0)S(ppm) :167.73,166.80,163.42,162.31, 157.60,134.60,131.78,128.80(2C),127.71(2C),44.01(2C),43.78(2C),41.44,35.56, 15.11.
[0133] N-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(Lal9)，黃色固 體，產(chǎn)率69%，mp: 177-17%~</Η-匪R(400MHz，DMS0-d6)S(ppm) :8.73(t，J = 5.6Hz，lH)， 8.38(s,lH) ,7.90(d,J = 8.6Hz,2H) ,7.56(d,J = 8.6Hz,2H) ,7.01(s,lH) ,4.19(d,J = 5·7Ηζ，2Η),3.75-3.57(m，8H) .13C-匪R(101MHz，DMS0)S(ppm):167.73,165.84,162.58, 159.62,158.42,136.62,133.33,129.68(20,128.91 (20,102.41,43.84(2C),41.47(2C), 41.25.
[0134] N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(La20)， 褐色固體，產(chǎn)率55 %，mp: 224-227 °C。h-NMR(400MHz，DMS0-d6) δ (ppm): 8 · 70 (t，J = 5 · 6Hz， 1H) ,8.02(s,lH),7.90(d ,J = 8.6Hz,2H) ,7.56(d ,J = 8.5Hz,2H) ,6.69(d ,J = 4.8Hz , 1H), 5.58(s，lH)，4.18(d，J = 5.7Hz，2H)，3.58-3.51(m，8H)，2.74(d，J = 4.6Hz，3H) .13C-匪R (101MHz,DMS0)5(ppm):167.60,165.82,164.24,162.38,157.56,136.61,133.34,129.67 (2C),128.90(2C),43.98(2C),43.76(2C),41.47,28.06.
[0135] N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(La21)， 淡黃色固體，產(chǎn)率45%，1^:208-210°(：。 1!1-匪1?(4001〇^，0150-(16)5(??111):8.71(^ = 5.6Hz,lH),8.01(s,lH),7.90(d ,J = 8.6Hz,2H),7.56(d ,J = 8.6Hz,2H),6.72(t ,J = 5.3Hz, lH),5.59(s,lH),4.18(d ,J = 5.7Hz,2H),3.57-3.48(m,8H),3.26-3.16(m,2H),1.10(t ,J = 7. lHz，3H) .13C-匪R(101MHz，DMS0)δ(ppm):167.58,165.80,163.57,162.35,157.73, 136.59,133.35,129.66(20,128.89(2C),43.99(20,43.75(2C),41.46,35.53,15.12.
[0136] 實(shí)施例2目標(biāo)化合物L(fēng)jl~Lj21的制備
[0137] (1 )4-氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛（中間體El)的制備
[0138] 將4,6-二氯啼啶-5-甲醛（16.951111]1〇1，38)溶于2〇1111甲苯中，通入氨氣3〇111；[11，室溫 攪拌過(guò)夜，過(guò)濾得黃色固體，柱層析純化(洗脫劑為乙酸乙酯：石油醚=1:3)，得白色固體， 產(chǎn)率60%。 1!1-匪1?(40冊(cè)!^，0150-(16)3(??111):10.25(8，1!1)，8.72(1^，1!1)，8.56(1^，1!1)， 8.40(s,lH).
[0139] (2)4-氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛0-甲基肟（中間體E2)的制備
[0140] 將4-氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛$1)(7.62111111〇1，1.28)溶于251111冰醋酸和41111水的混 合溶液中，加入甲氧胺鹽酸鹽（13.7lmmo 1，1.14g)，25°C反應(yīng)過(guò)夜。TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，向 反應(yīng)液中加入20ml水，用50ml乙酸乙酯萃取，有機(jī)層依次水洗3次，10 %氫氧化鈉溶液洗，飽 和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減壓蒸除溶劑，柱層析純化(洗脫劑石油醚：乙酸乙酯 =3:1)，得白色固體，產(chǎn)率99%。 1!1-匪1?(40冊(cè)!^，0150-(16)3(??111):8.49(8,2!1)，8.26(8， 1H)，7.80(s，1H)，3.98(s，3H).
[0141 ] (3)4-(6-氨基-5-取代嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯（中間體F)的制備
[0142] 將4-氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛（F1)，4_氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛0-甲基肟（F2) (9.65mmol)分別溶于20ml甲醇中，加入1-叔丁氧羰基哌嗪（10.61mmol，1.98g)，N，N-二異丙 基乙胺（19.29臟〇1，3.41111)，加熱至60°(：~70°(：，回流反應(yīng)3~411，11(：監(jiān)測(cè)反應(yīng)結(jié)束，降至室 溫，減壓蒸除溶劑，加20ml水?dāng)嚢柽^(guò)濾，濾餅用水潤(rùn)洗，真空干燥，得中間體F。
[0143] 4-(6-氨基-5-醛基嘧啶-4-基）哌嗪-1-甲酸叔丁酯，白色固體（中間體F1)，產(chǎn)率 77 % . ^-N MR(400MHz,DMS〇-d6)δ(ppm):9.76(s,1H),8.28(br,1H),8.08(s,1H),7.83(br, 1H)，3·61-3·58(m，4H)，3·44(m，4H)，1·42(s，9H)·
[0144] 4-(6-氨基-5-((甲氧亞胺基）甲基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯，白色固體（中 間體F2)，產(chǎn)率72% ,Η-匪R(400MHz，CDCl3)S(ppm):8.20(s，lH)，8.12(s，lH)，3.96(s，3H)， 3.55-3.53(m，4H),3.35-3.33(m，4H)，l.48(s，9H).
[0145] (4) 4-氨基-6-(哌嗪-1 -基)啼啶-5-取代鹽酸鹽（中間體G)的制備
[0146] 將4-(6-氨基-5-取代嘧啶-4-基）哌嗪-1-甲酸叔丁酯（中間體G) (4.45mmol)溶于 10ml4m ol/LHCl二氧六環(huán)溶液中，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，析出白色固體，過(guò)濾，濾餅用乙酸乙酯潤(rùn) 洗，真空干燥得白色固體。
[0147] 4-氨基-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛鹽酸鹽（中間體G1)，白色固體，產(chǎn)率89%。
[0148] 4-氨基-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛0-甲基肟鹽酸鹽（中間體G2)，白色固體，產(chǎn)率 89% 〇
[0149] (5)中間體H1、H2、H3的制備
[0150] 將對(duì)氯苯甘氨酸、L-苯丙氨酸、L-色氨酸(2.45mmol，500mg)分別溶于10ml水中，加 入碳酸鉀（2 · 45mmol，338 · 37mg)，二碳酸二叔丁酯（2 · 69mmol，587 · 76mg)，室溫反應(yīng)過(guò)夜， TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全。反應(yīng)液用10 %鹽酸溶液酸化至pH = 1，用20ml乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽 和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓蒸除溶劑得中間體H1、H2、H3。
[0151] 2-((叔丁氧羰基)氨基)-2-(4-氯苯基）乙酸（中間體!11)，白色固體，產(chǎn)率78%。 1!1-NMR(400MHz，DMS0-d6)S(ppm): 12.88(br，lH)，7.64((1,J = 8Hz，lH)，7.41(s，4H)，5.12((1,J = 8.4Hz,lH)1.38(s,9H).
[0152] (叔丁氧羰基）-L-苯丙氨酸（中間體H2)，無(wú)色油狀物，產(chǎn)率99 %。匪R(400MHz， DMS0-d6)5(ppm):12.58(br,lH),7.30-7.18(m,5H),7.11(d,J=8.4Hz,lH),4.12-4.06(m, 1H)，3·03-2·99(m，1H)，2·85-2·79(m，1H)，1·32(s，9H)。
[0153] (叔丁氧羰基）-L-色氨酸（中間體H3)，白色固體，產(chǎn)率80 %。匪R( 400MHz，DM S0-d6)5(ppm):12.53(s,lH),10.83(s,lH),7.51(d,J = 8Hz,lH),7.32(d,J = 8Hz,lH) ,7.14 (s,lH),7.06(t ,J = 7.6Hz,lH),6.98(t ,J = 7.6Hz,2H),4.17-4.12(m,lH),3.15-3.10(m, 1H),3.00-2.94(m,1H),1.33(s,9H)〇
[0154] (6)目標(biāo)化合物L(fēng)j的制備
[0155] 將中間體H(0.357mmol)溶于3mlDMF中，加入0-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯 (H BTU)(0.403mmol，153mg)，4-氨基-6-(哌嗪-1-基）嘧啶-5-取代鹽酸鹽（中間體G)或6-(哌嗪-1-基）嘧啶-4-氯鹽酸鹽（中間體Cl)(0·357mmol)，N，N-二異丙基乙胺（l·78mmol， 0.3 lml )，室溫反應(yīng)過(guò)夜，倒入30倍量水中，析出固體，過(guò)濾，用水潤(rùn)洗濾餅，真空干燥，柱層 析純化(洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯=3:1~乙酸乙酯)得產(chǎn)物，將產(chǎn)物溶于10ml4mo 1/LHC1 二氧六環(huán)溶液，反應(yīng)24h，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)結(jié)束，減壓蒸除溶劑，加乙酸乙酯潤(rùn)洗，過(guò)濾，真空干 燥得目標(biāo)化合物L(fēng)j。
[0156] 4-氯-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(異丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶鹽酸鹽，黃綠 色固體(Ljl)，產(chǎn)率 16%</H-NMR(400MHz，D2〇)S(ppm):8.16(s，lH)，7.26(dd，J = 8.4,5.2Hz， 2H)，7.07(t，J = 8.7Ηζ，2Η)，6·67(s，lH)，4.35(dd，J = 8.3，5·0Ηζ，1Η) ,3.88-3.71(m，2H)， 3.56-3.32(m,7H) ,3.22(dd,J=12.7,4.8Hz,lH) ,2.88(s,lH) ,1.22(dd,J = 6.4,4.2Hz, 6H) .13C-匪R(101MHz,D2〇)S(ppm) :170.54,162 · 46( J = 245Hz) ,161.58,155.03,154.68, 130.23(J = 3Hz),129.89(J = 9Hz,2C),116.62(J = 22Hz,2C),102.64,51.65,47.06,45.06, 44.01,43.37,43.25,41.24,18.00,17.89.MS(ESI)m/z:406[M+H]+.
[0157] 4-氯-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(異丙氨基)丙酰基)哌嗪-i-基)嘧啶鹽酸鹽，黃綠 色固體〇^_2)，產(chǎn)率11%。1!1-匪1?(4001!^，〇2〇)3(??111):8.22(8，1!〇,7.36((1，了 = 8.4!^，2!〇， 7.22(dJ = 8.5Hz,2H),6.74(s,lH),4.33(dd,J = 8.4,4.9Hz,lH),3.92-3.74(m,2H),3.56-3.32(m,7H) ,3.22(dd,J=12.7,4.9Hz,lH) ,2.97-2.93(m,lH) ,1.21(dd,J = 6.5,4.3Hz, 6H).13C-NMR(101MHz，D2〇)S(ppm):170.37，161.65，154.88，154.35，134.19，132.88，129.80 (2C),129.45(2C),102.73,51.65,46.90,45.22,43.97,43.42,43.16,41.17,17.96, 17.85,MS(ESI)m/z:422[M+H]+.
[0158] 4-氯-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(異丙氨基）丙?；┻哙?1-基）嘧啶鹽酸鹽，白色 固體（1^_3)，產(chǎn)率39%。 1!1-匪1?(40冊(cè)泡，〇2〇)3(??111):8.22(8，1!1)，7.48((1，了 = 8.4!^，2!1)， 7.15(dJ = 8.5Hz,2H),6.75(s,lH),4.31(dd,J = 8.5,4.8Hz,lH),3.90-3.73(m,2H),3.56-3.32(m,7H),3.21(dd,J = 12.7,4.8Hz,lH),2.94(s,lH),1.21(dd,J = 6.5,4.2H z,6H).13C-MMR(101MHz，D2〇)S(ppm):170.22，161.48，154.28，154.16，133.40，132.76(2C)，129.72 (2C),122.29,102.72,51.65,46.81,45.28,43.92,43.54,43.25,41.12,17.97,17.83. MS (ESI)m/z:466[M+H]+.
[0159] 4-氯-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)- 3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-i-基)嘧啶鹽酸鹽， 棕色固體（1^_4)，產(chǎn)率40%。1!1-匪1?(40冊(cè)!^，〇2〇)3( ??111):8.24(8，1!〇,7.56((1，了 = 1.9泡， 1H) ,7.27(dd ,J = 8.4,1.9Hz,lH) ,7.12(d ,J = 8.4Hz,lH),6.77(s,lH) ,4.63(dd ,J = 9.2, 3.6Hz,lH),3.94-3.77(m,2H),3.58-3.36(m,7H),3.16(dd,J=12.6,3.7Hz,lH),3.02(s, 1H) ,1.24(dd,J = 6.3,4.5Hz,6H) .13C-NMR(101MHz,D2〇)5(ppm): 169.93,161.55,154.45, 153.62,135.12,133.80,130.49,130.12,129.55,128.55,102.72,51.76,45.14,43.77, 43.48,43.08,42.54,41.19,18.00,17.83.MS(ESI)m/z:456[M+H]+.
[0160] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)-3-羥基-2-苯基丙-1-酮，無(wú)色油狀物(Lj5)，產(chǎn)率46%。 4-匪1?(4001〇^，0150-(16)3( ??111):8.32(8，1!〇,7.32((1，了 = 4.3泡，4!1)，7.24(七(1，了 = 8.3， 3.9Hz,lH) ,6.91(s,lH),4.74(t ,J = 5.3Hz,lH) ,4.15(dd ,J = 7.9,5.6Hz , 1H), 4.04-3.94 (m,lH),3.72-3.56(m,5H),3.55-3.40(m,3H),3.18(s, 1H). 13C-NMR(101MHz,DMS0)5(ppm): 170.86,162.53,159.56,158.34,138.07,129.04(20,128.56(20,127.41,102.35,64.78, 50.59,44.71,43.96,43.77,41.23.MS(ESI)m/z:347[M+H]+.
[0161] 4-(4-(L-色氨酸）哌嗪-1-基）-6-氯嘧啶鹽酸鹽，褐色固體（Lj6)，產(chǎn)率49%。 [a]D25:+44.10° (cl, MeOH)。1!!-匪 R(400MHz，D2〇)S(ppm) :8.17(s，lH) ,7.39-7 ·34(ι?，1H)， 7.24-7.16(m，2H)，7.00(m，2H)，6.50(s，lH)，4.62(dd，J=10·7,5·2Hz，lH)，3.51(m，lH)， 3.25(m,6H) ,2.77(ddd, J=10.5,5.7,4.0Hz, 1H) ,2.64(s, 1H) ,2.18(s, 1H) ,13C-NMR (101MHz,D2〇)5(ppm):168.88,160.55,152.53,150.55,135.65,126.68,125.22,122.09, 119.61,117.83,111.80,106.32,102.67,62.45,50.40,43.60,42.51,40.72,27.11.MS (ESI)m/z:385[M+H]+.
[0162] 4-(4-(L-苯丙氨酸）哌嗪-1-基）-6-氯嘧啶鹽酸鹽，白色固體（Lj7)，產(chǎn)率57%。 [a]D25:+21.60。（c Ι,ΜθΟΗ)。1!!-匪R(400MHz，D2〇)S(ppm):8.27(s，lH)，7.30(t，J = 7.5Hz， 2H),7.25-7.18(m,3H),6.76(s,lH),3.75-3.71(m,2H),3.59-3.34(m,5H),3.22(dd,J= 13·3,5·6Ηζ，1Η)，3.06-2.96(m，2H)，2.81(s，lH) .13C-匪R(101MHz，D2〇)S(ppm) :168.14, 161.52，154.94，154.43，133.45,129.67(2C),129.21(2C),128.15,102.82,50.90,44.06， 43.21,42.88,41.13,37.10.MS(ESI)m/z:346[M+H]+.
[0163] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(異丙氨基)丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛鹽 酸鹽，白色固體（!^_8)，產(chǎn)率93%。 1!1-匪1?(4001取，〇2〇)3(??111):8.01(8，1!1)，7.26((1(1，了 = 8.7,5.2Hz,2H),7.09(t ,J = 8.8Hz,2H) ,4.34(dd ,J = 8.4,5.0Hz , 1H), 3.86-3.80(m, 1H), 3.79-3.69(m,lH),3.61-3.32(m,7H),3.22(dd,J=12.7,5.0Hz,lH),2.95-2.83(m,lH), 1.21(dd，J = 6.5,4.1Hz，6H).13C-MMR(101MHz，D2〇)S(ppm):174.65，170.58，162.45(J = 245Hz),160.32,154.47,148.28,130.19(J = 3Hz),129.87(J = 8Hz,2C),116.60(J = 22Hz, 2C),80.95,51.61,47.03,45.05,44.01,43.24,43.17,41.27,17.95,17.86.MS(ESI)m/z: 387[M+H-CO]+.
[0164] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(異丙氨基)丙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲醛鹽 酸鹽，淡黃色固體(Lj9)，產(chǎn)率 79%<31H-NMR(400MHz，D2〇W(ppm):8.00(s，lH)，7.35(d，J = 8.4Hz,2H) ,7.21 (d,J = 8.4Hz,2H),4.31 (dd,J = 8.4,4.9Hz, 1H) ,3.89-3.80(m,lH) ,3.71 (m,lH),3.55-3.31(m,7H),3.20(dd ,J=12.7,4.7Hz,lH),2.96-2.86(m,lH),1.20(dd ,J = 6 · 4,4 · 1Hz，6H) · 13C-匪R( 101MHz，D2〇)S(ppm): 174 · 65，170 · 37，160 · 29，154· 43，148 · 26， 134.13,132.91,129.76(20,129.45(20,80.91,51.64,46.88,45.20,43.97,43.26, 42.96.41.13.17.96.17.84. MS(ESI)m/z:403[M+H-C0]+.
[0165] 4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(異丙氨基)丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛鹽 酸鹽，白色固體（!^_10)，產(chǎn)率92%。 1!1-匪1?(40冊(cè)!^，020)3(??111):8.01(8，1!1)，7.50((1，了 = 8.4Hz,2H) ,7.15(d,J = 8.4Hz,2H),4.31(dd,J = 8.5,4.9Hz,lH) ,3.89-3.81(m,lH) ,3.71 (m,lH),3.44(m,7H) ,3.21(dd,J=12.7,4.8Hz,lH),2.98-2.89(m,lH) ,1.21(dd,J = 6.5, 4.0Hz，6H).13C-NMR(101MHz，D2〇)S(ppm):174.64，170.29，160.29，154.42，148.27，133.43， 132·75(2C)，129.72(2C),122.28,80.90,51.64,46.81,45.27,43.97,43.28,42.92,41.11， 17.97.17.84. MS(ESI)m/z:447[M+H-C0]+.
[0166] 4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲 醛鹽酸鹽，白色固體(Ljll)，產(chǎn)率 88^4-^1^(40010^,020)6(^^):8.02(8,111),7.57((13 = 2.1Hz,lH),7.28(dd,J = 8.4,2.1Hz, 1H),7.11 (d,J = 8.5Hz,lH) ,4.61(dd,J = 9.3,3.8H z,lH),3.91-3.83(m,lH),3.74(m,lH),3.58-3.36(m,7H),3.15(dd,J=12.7,3.6Hz,lH), 3.03-2.92(m，lH)，1.23(dd，J = 6.5,4.3Hz，6H).13C-Mffi(101MHz，D2〇)S(ppm):174.66， 169.97,160.33,154.45,148.30,135.11,133.81,130.55,130.13,129.57,128.55,80.92， 51.77,45.16,43.83,43.26,42.86,42.55,41.23,18.02,17.85.MS(ESI)m/z:437[M+H-C0] + .
[0167] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基）乙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲醛鹽酸鹽，白色固體 (1^_12)，產(chǎn)率57%。1!1-匪1?(40冊(cè)抱，〇2〇)3(??111):8.02(8，1!〇,7.44((1，了 = 8.5!^，2!1)，7.37 (d,J=8.6Hz,2H),5.47(s,lH),3.83(m,lH),3.78-3.70(m,lH),3.56-3.41(m,4H),3.29 (ddd,J=13.5,6.1,3.9Hz,lH) ,3.01-2.92(m,lH).13C-NMR(101MHz,D2〇)5(pp m) :176.61, 166.43,160.37,154.47,148.29,136.21,130.08(20,129.92(2C),129.44,81.02,54.54, 43.84,43.19,42.88,41.53.MS(ESI)m/z:347[M+H-C0]+.
[0168] 4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛鹽酸鹽，灰白色固體(Ljl3)，產(chǎn) 率94%。[0]。 25:+29.20。（(：1，]^0!〇。1!1-匪1?(4001!^，〇2〇)3(??111):7.93(8，1!〇,7.40((1，了 = 7.6Hz,lH),7.28-7.21(m,2H),7.09-6.99(m,2H),4.63(dd,J=10.6,5.2Hz,lH),3.54(d d, J = 14.1,7.0Hz,2H) ,3.35(dd,J=13.9,5.1Hz,2H) ,3.21(m,4H) ,2.83-2.72(m,lH) ,2.65 (s，lH) ,2.27(s，lH) .13C-匪R(101MHz，D20)S(ppm): 174.66,168.88,159.60,154.22, 148.02,135.81,126.72,125.16,122.09,119.62,117.82,111.85,106.31,80.87,61.68， 50.42,43.82,42.53,41.95,40.78,27.09.MS(ESI)m/z:366[M+H-C0]+.
[0169] 4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛鹽酸鹽，白色固體(Ljl4)，產(chǎn) 率72%。[0]。25:+23.90。（c l，Me0H)<31H-NMR(400MHz，D20)S(ppm):8.04(s，lH)，7.28(t，J = 7.3Hz，2H)，7.21(t，J = 7.5Hz，3H)，4.66(dd，J = 9.7,5.8Hz，lH)，3.72-3.61(m，2H)，3.49-3·31(m，4H)，3·19(dd，J=13.3,5.7Hz，1H),3.04-2.90(m，2H),2.79(s，1H). 13C-NMR (101MHz，D2〇)S(ppm):168.10,160.13,154.44,148.28,133.39,129.62,129.16,128.11， 81.00,50.86,44.05,42.99,42.70,41.15,37.04.MS(ESI)m/z:327[M+H-C0]+.
[0170] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(異丙氨基）丙酰基)哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟鹽酸鹽，淡黃色固體（Ljl5)，產(chǎn)率 55%</Η-匪 R(400MHz，D20W(ppm):8.01(s，lH)， 7.86(s，lH)，7.24(dd，J = 8.7,5.2Hz，2H)，7.08(t，J = 8.8Hz，2H)，4.32(dd，J = 8.3,5.0Hz， 1H),3.85(s,3H),3.78-3.69(m,lH),3.63-3.32(m,8H),3.21(dd,J=12.7,5.ΙΗζ,ΙΗ), 2.94-2.84(m,lH) ,1.20(dd,J = 6.5,3.9Hz,6H) .13C-NMR(101MHz,D20)5(p pm) :170.63, 162.48( J = 245Hz) ,161.92,153.15,146.76,145.21,130.23( J = 4Hz) ,129.83( J = 8Hz, 2C),116.63(J=22Hz,2C),88.07,62.28,51.60,48.13,47.69,46.99,44.99,44.40,41.87, 17.94,17.85.MS(ESI)m/z:444[M+H]+.
[0171] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(異丙氨基）丙?；?哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟鹽酸鹽，白色固體(Ljl6)，產(chǎn)率 87%</H-NMR(400MHz，D20)S(ppm):8.01(s，lH)，7.84 (s,lH),7.35(d ,J = 8.2Hz,2H),7.19(d ,J = 8.3Hz,2H) ,4.31 (dd ,J = 8.0,4.7Hz , 1H), 3.86 (s,3H),3.73-3.69(m,lH),3.59-3.56(m,2H),350-3.34(m,6H),3.19(dd,J=12.6,4.6Hz, lH),2.92-2.83(m,lH),1.20(dd ,J = 6.2,3.8Hz,6H).13C-NMR(101MHz,D2〇)5(ppm):170.42, 161.96,153.16,146.82,145.14,134.22,132.96,129.80(20,129.38(20,88.05,62.29, 51.63.48.11.47.51.46.85.45.13.44.25.41.81.17.94.17.82. MS(ESI)m/z:460[M+H]+.
[0172] 4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(異丙氨基）丙?；?哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟鹽酸鹽，白色固體(Ljl7)，產(chǎn)率 70%</H-NMR(400MHz，D20)S(ppm):8.01(s，lH)，7.83 (s,lH),7.50(d ,J = 8.4Hz,2H),7.13(d ,J = 8.5Hz,2H) ,4.30(dd ,J = 8.5,4.9Hz , 1H), 3.86 (s,3H),3.74-3.66(m,lH),3.61-3.32(m,8H),3.19(dd,J=12.7,4.9Hz,lH),2.91-2.82(m, 1H) ,1.20(dd,J = 6.5,3.9Hz,6H) .13C-NMR(101MHz,D2〇)5(ppm): 170.34,162.01,153.24, 146.95,145.14,133.48,132.79(20,129.65(20,122.38,88.11,62.30,51.63,48.17, 47.45.46.79.45.22.44.23.41.83.17.95.17.82. MS(ESI)m/z:504[M+H]+.
[0173] 4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(異丙氨基)丙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲 醛 〇-甲基肟鹽酸鹽，黃色固體(Ljl8)，產(chǎn)率 55%<3iH-NMR(4〇〇MHZ，D 2〇W(ppm):8.07(s，lH)， 7.90(s，lH)，7.61(d，J=1.7Hz，lH)，7.31(dd，J = 8.4,2.1Hz，lH)，7.13(d，J = 8.4Hz，lH)， 4.64(dd J = 9.2,3.7Hz,lH),3.91(s,3H),3.81-3.73(m,lH),3.69-3.38(m,7H),3.26(dt ,J = 9.2,4.3Hz,lH) ,3.17(dd,J=12.8,3.8Hz,lH) ,3.00-2.91(m,lH) ,1.27(dd,J = 6.3, 4.1Hz,6H). 13C-NMR( 101MHz ,D2〇)5(ppm): 170.09,162.07,153.30,147.01,145.23,135.24, 133.85,130.69,130.26,129.72,128.61,88.17,62.39,51.84,48.08,47.51,45.20,44.17, 42.63,42.01,18.08,17.91.MS(ESI)m/z:494[M+H]+.
[0174] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基）乙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟鹽酸鹽， 淡黃色固體(L jl9)，產(chǎn)率62%<31H-NMR(400MHz，D2〇)S(ppm):8.03(s，lH)，7.85(s，lH)，7.44 (d,J = 8.5Hz,2H) ,7.35(d,J = 8.6Hz,2H) ,5.48(s,lH) ,3.86(s,3H) ,3.78-3.69(m,lH), 3.64-3.41(m,5H),3.34(dt,J = 9.5,4.4Hz,lH),2.97-2.88(m,lH).13C-NMR(101M Hz,D20)5 (ppm):166.50,162.04,153.18,146.84,145.12,136.29,130.11,129.87,129.49,88.27, 62.32,54.49,47.93,47.55,44.15,42.19.MS(ESI)m/z:404[M+H]+.
[0175] 4-(4_(L-色氨酸）哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛0-甲基肟鹽酸鹽，灰白色固體 (1^20)，產(chǎn)率56%。[0]。 25:+34.70。（(：1，]\^0!1)。1!1-匪1?(4001!^，020)3(??111):7.92(8，1!1)， 7.51(s，lH)，7.35(dd，J=17.7,8.0Hz，2H)，7.23(s，lH)，7· ll-6.99(m，2H)，4.63(dd，J = 10.6，5·1Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.53-3.45(m，2H)，3.33(dd，J=13·9,5·2Ηζ，1Η),3.24-3.12 (m，5H) ,2.82-2.72 (m，1H)，2 ·69-2·61(ι?，1H) .13C-匪 R(101MHz，D20) δ (ppm): 168.71， 161.18,152.95,146.53,144.94,135.79,126.75,125.22,122.23,119.69,117.86,111.96， 106.41，87.94,62.33,50.30,47.22,47.01,44.58,41.85,27.15.MS(ESI)m/z:423[M+H]+.
[0176] 4-(4_(L-苯丙氨酸）哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛0-甲基肟鹽酸鹽，黃色固體 (1^21)，產(chǎn)率58%。[0]。 25:+17.70。（(：1，]\^0!1)。1!1-匪1?(4001!^，020)3(??111):8.06(8，1!1)， 7.86(s,lH) ,7.31 (d,J = 7.4Hz,2H) ,7.21 (d,J = 6.5Hz,3H) ,3.89( s,3H) ,3.56-3.31 (m, 7H)，3.19(dd，J=13.2,5.7Hz，lH)，3.04-2.96(m，2H)，2.68-2.60(m，lH). 13C-NMR(101MHz, D20)5(ppm):168.00,161.79,153.28,146.88,145.25,133.46,129.69(2C),129.25(20, 128.21,88.35,62.35,50.81,47.87,47.68,44.80,42.06,37.05.MS(ESI)m/z:384[M+H]+.
[0177] 實(shí)施例3:化合物的生物活性(Aktl激酶的抑制活性)測(cè)定
[0178] 化合物對(duì)Aktl激酶的抑制活性采用時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移(TR-FRET)的方法 進(jìn)行測(cè)定。
[0179] (1)待測(cè)藥物溶液的配置：用萬(wàn)分之一天平精密稱取化合物，用生化級(jí)DMS0將化合 物配制成濃度為2X10~4ym 〇l/L，作為儲(chǔ)備液，使用前，將儲(chǔ)備液用生化級(jí)DMS0稀釋到200μ mol/L，再用激酶緩沖溶液將其濃度稀釋至2.5ymol/L作為待測(cè)液，低溫保存，待測(cè)液需隨用 隨配，活性實(shí)驗(yàn)中DMS0的濃度不得高于0.5%。
[0180] (2)工作液的配制：
[0181] ①1 X激酶緩沖溶液：用移液槍移取三蒸水2590.5yL，加入5 X激酶緩沖液660yL， DTT溶液33yL，MgCl 2溶液16.5yL，混勻后插入冰中保存。
[0182] ②Aktl激酶工作液：用移液槍移取1 X激酶緩沖液149.72yL，激酶Aktl母液0.28μ L，混勻，插入冰中保存。
[0183] ③底物工作溶液：用移液槍移取IX激酶緩沖液146.25yL，加入底物母液3.75yL， 混勻，插入冰中保存。
[0184] ④ATP工作溶液：用移液槍移取1 X激酶緩沖液147.99yL，加入ATP母液2. OlyL，混 勻，插入冰中保存。
[0185] (3)檢測(cè)溶液的配制：用移液槍移取檢測(cè)緩沖液295.50yL，加入鏈酶親和素 XL665 母液4.50yL，混勻，插入冰中保存。（使用前20分鐘配制）
[0186] 試驗(yàn)中設(shè)定測(cè)試組(S)、背景組(C)、空白組(B)。測(cè)試組為待測(cè)化合物，按4μ!7孔將 待測(cè)化合物溶液加入到384孔板中，然后加入ΑΤΡ溶液2yL/孔;背景組不加化合物，加4yLl X 激酶緩沖液代替，其他與測(cè)試組相同；空白組中不加化合物和Aktl，用6yLl X激酶緩沖液代 替，其他與測(cè)試組相同。將上述各組于37°C孵育40min，加入檢測(cè)液（ΙΟμL孔），37°C孵育2h。 使用PerkinElmer公司的EnSpire多標(biāo)記微孔板檢測(cè)儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)為330nm，發(fā)射波長(zhǎng)為 620nm和665nm。檢測(cè)結(jié)果用Ratio值表示，計(jì)算抑制率。 其中S表示測(cè)試組，C表示背景組，B表示空白 組。
[0188] 本發(fā)明化合物的活性試驗(yàn)數(shù)據(jù)如表1所示：
[0189] 表1化合物的活性試驗(yàn)數(shù)據(jù)





[0197]活性數(shù)據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本發(fā)明的6-哌嗪基-取代嘧啶類衍生物對(duì)Aktl激酶均有 一定的抑制活性。Lj系列中，當(dāng)R3為對(duì)氯苯基或?qū)︿灞交鶗r(shí)活性優(yōu)于芐基和吲哚-3-亞甲 基，嘧啶4位氨基取代好于氯取代，R 4為N-異丙基-氨甲基時(shí)活性較氨基要好，嘧啶5位取代 對(duì)活性影響很大，為醛基甲氧肟時(shí)最好?；衔風(fēng) j9、L j 16、L j 17有明顯的Akt 1抑制活性，在1 μΜ濃度下對(duì)Aktl激酶抑制率分別為79%、82%、98% j-89是最早發(fā)現(xiàn)的具有Akt抑制活性 的化合物，它對(duì)Akt的半數(shù)抑制濃度為2.2μΜ，本發(fā)明的化合物L(fēng)j9、Ljl6、Ljl7的抑制活性均 優(yōu)于H-89。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種式(I)或式(II)所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中，R:為取代苯基、苯甲酰氨基或?qū)β缺郊柞０被?R2為氯、甲氨基或乙氨基;R3為取 代苯基、芐基或吲哚-3-亞甲基;R4為氨基、羥甲基或N-異丙基-氨甲基;R5為氫、醛基或醛基 〇-甲基肟，R6為氯或氨基。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其特征在于，所述心為對(duì)氟苯 基、對(duì)氯苯基、對(duì)溴苯基、2，4-二氯苯基、2，6-二氯苯基、苯甲酰氨基或?qū)β缺郊柞０被?R 2 為氯、甲氨基或乙氨基;R3為苯基、對(duì)氟苯基、對(duì)氯苯基、對(duì)溴苯基、2,4_二氯苯基、芐基或吲 哚-3-亞甲基;R 4為氨基、羥甲基或N-異丙基-氨甲基;R5為氫、醛基或醛基0-甲基肟，R6為氯 或氨基。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其特征在于，其是選自下 列化合物： 1-(4-(6_氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4_氟苯基）乙酮； 1-(4-(6_氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4_氯苯基）乙酮； 1-(4-(6_氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4_溴苯基）乙酮； 1-(4-(6_氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,4_二氯苯基）乙酮； 1- (4-(6_氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6_二氯苯基）乙酮； 2_(4_氟苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2_(4_氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2_(4_溴苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2- (2,4_二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2-(2,6_二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2_(4_氟苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2_(4_氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2_(4_溴苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2-(2,4_二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2-(2,6_二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； N-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2_氧乙基)苯甲酰胺； N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2_氧乙基)苯甲酰胺； N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2_氧乙基)苯甲酰胺； N-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2_氧乙基)-4_氯苯甲酰胺； N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2_氧乙基)-4_氯苯甲酰胺； N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2_氧乙基)-4_氯苯甲酰胺； 4-氯-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-1-基)啼啶； 4-氯-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-1-基)啼啶； 4-氯-6- (4- (2- (4-溴苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-1 -基)嘧啶； 4-氯-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-1-基)啼啶； 1-(4-(6_氯嘧啶-4-基)-3_羥基-2-苯基丙-1-酮； 4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6_氯嘧啶； 4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6_氯嘧啶； 4-氨基-6- (4- (2- (4-氟苯基)-3-(異丙氨基)丙酰基)哌嗪-1 -基)嘧啶-5-甲醛； 4-氨基-6- (4- (2- (4-氯苯基)-3-(異丙氨基)丙酰基)哌嗪-1 -基)嘧啶-5-甲醛； 4-氨基-6- (4- (2- (4-溴苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-1 -基)嘧啶-5-甲醛； 4-氨基-6- (4- (2- (2，4-二氯苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-1 -基)嘧啶-5-甲醛； 4-氨基-6- (4- (2- (4-氯苯基）乙酰基)哌嗪-1 -基)嘧啶-5-甲醛； 4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6_氨基嘧啶-5-甲醛； 4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6_氨基嘧啶-5-甲醛； 4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(異丙氨基）丙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基 肟； 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(異丙氨基）丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基 肟； 4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(異丙氨基）丙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基 肟； 4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(異丙氨基）丙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟； 4-氨基-6- (4- (2- (4-氯苯基）乙?；?哌嗪-1 -基)嘧啶-5-甲醛0-甲基肟； 4- (4- (L-色氨酸)哌嗪-1 -基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛0-甲基月虧； 4- (4- (L-苯丙氨酸)哌嗪-1 -基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛0-甲基肟。4. 權(quán)利要求1-3中的任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備Akt抑制劑中 的用途。5. 權(quán)利要求1-3中的任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備預(yù)防和治療腫 瘤的藥物中的用途。6. -種權(quán)利要求1-3中的任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的制備方法，其 特征在于，式（I)所示的化合物的制備方法包括:使式〇所示的化合物與式D1、D2或D3所示的 化合物反應(yīng)，得到式(I)所示的化合物；其中，辦、1?2具有如權(quán)利要求1所述的定義;X為F、Cl、Br、2,4-C^2,6-Cl; 式（II)所示的化合物的制備方法包括:使式G1、G2或C1所示的化合物與式HI、H2、H3、H4 或H5所示的化合物反應(yīng)，得到式(II)所示的化合物；其中，R3、R4、R5、R6具有如權(quán)利要求l所述的定義;X為F、Cl、Br或2,4-Cl。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，式C所示的化合物的制備方法為：以4， 6-二氯嘧啶(A1)為起始原料，與甲胺或乙胺反應(yīng)，得到中間體化合物A2或A3，中間體A再與 1-叔丁氧羰基哌嗪反應(yīng)，得到中間體化合物B，將中間體化合B溶于HC1二氧六環(huán)溶液，室溫 反應(yīng)，即得式C所示的化合物。8. -種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的的化合物或其藥學(xué)上可接受 的鹽。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物還包括一種或多種 藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑和/或稀釋劑。10. 根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物為固體口服制 劑、液體口服制劑或注射劑。
【文檔編號(hào)】C07D403/12GK106045918SQ201610494647
【公開(kāi)日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年6月28日
【發(fā)明人】趙桂森, 陸錦杰, 王冠杰, 楊德志, 張震, 景永奎
【申請(qǐng)人】山東大學(xué)