%，將得到的產(chǎn)物進行X-射線粉末衍射，結果表明該產(chǎn) 物為化合物I晶型D，X-RH)圖譜見圖7所示。
[0142] 實施例6:N-(4-(3-氟芐氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亞砜基）乙基氨基）甲 基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二甲苯磺酸鹽(化合物I)晶型B的制備
[0143] 將化合物I晶型D 2g在80°C條件下烘干1小時，得黃色結晶性粉末，將得到的產(chǎn)物 進行X-射線粉末衍射，結果表明該產(chǎn)物為化合物I晶型B，X-RH)圖譜見圖4所示;DSC檢測數(shù) 據(jù)顯示晶型B在239.11~254.49°C熔融分解;DSC圖譜見圖5所示。
[0144] (注：由于化合物I晶型C、D高溫(60°C以上)會轉(zhuǎn)化為化合物I晶型A、B，因此未進行 DSC檢測。）
[0145] 本發(fā)明對化合物I無定形物、晶型A、B、C、D的穩(wěn)定性進行了研究，于溫度25 ± 2 °C， 濕度60 % ± 10 % ;溫度40 ± 2 °C，濕度75 % ± 5 %條件下對穩(wěn)定性考察6個月。試驗結果顯示， 化合物I無定形物有明顯的降解，說明化合物I無定形物穩(wěn)定性較差;晶型A、B、C、D最大單質(zhì) 和總雜質(zhì)均未見明顯增加，并將上述考察后的樣品經(jīng)X-射線粉末衍射等分析測試方法驗證 化合物I晶型A、B、C、D均穩(wěn)定。試驗結果見表2。
[0146] 表2化合物I無定形物、晶型A、B、C、D的穩(wěn)定性試驗結果
[0147]
[0148] 本發(fā)明對化合物II、化合物I無定形物、晶型A、B、C、D的溶解度進行了研究。取擬檢 測化合物，置250ml的碘量瓶中，加水，于25°C±2°C，每間隔5分鐘強力振搖30秒鐘，觀察30 分鐘內(nèi)的溶解情況。試驗結果見表3。
[0149] 表3化合物II、化合物I無定形物、晶型A、B、C、D在水中溶解度試驗結果 「01501
[0151 ]結果表明：化合物II在水中不溶，化合物I無定形物、晶型A、B、C、D在水中微溶，說 明晶型A、B、C、D比化合物II更有利于藥物在體內(nèi)的溶出。
[0152] 生物學實驗
[0153] 可以使用以下實驗來測定本發(fā)明所述化合物對erbB酪氨酸激酶的活性作用以及 在體外作為N87細胞和BT474細胞抑制劑的作用。
[0154] A)蛋白酪氨酸激酶磷酸化測定
[0155] 體外激酶分析用Cell Signaling Technology公司的HTScan EGF Receptor Kinase Assay Kit(#7909)和HTScan HER2/ErbB2Kinase Assay Kit(#7058)檢測。操作步 驟參照試劑盒說明書，該方法在體外檢測待測化合物對EGFR或Her2受體酪氨酸激酶對底物 肽磷酸化的抑制作用。室溫下激酶反應緩沖液中溫育ATP和底物肽以及待測化合物，孵育一 段時間后，加入終止液終止反應并將樣品轉(zhuǎn)移到鏈霉親和素包被的96孔板中，洗板并用HRP 標記的抗底物磷酸化抗體檢測底物肽上的磷酸化水平，用TMB顯色，2M硫酸中止反應。檢測 450nm吸收波長，計算IC5Q值(μΜ)。結果見表4所示。
[0156] Β)細胞增值抑制
[0157] 參考Rusnak等，Cel 1 Prol if，2007，40，580-594中描述的方法進行試驗。細胞增殖 抑制試驗采用人乳腺癌細胞BT474和人胃癌細胞系NCI-N87，BT474高表達Her2受體，N87高 表達EGFR和Her2受體。
[0158] 在含10%胎牛血清、2mM谷氨酰胺和非必需氨基酸的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基 (DMEM)中，在37°C、5%C0 2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細胞，應用胰蛋白酶/乙二胺四乙酸(EDTA)從 細胞培養(yǎng)瓶中收獲細胞。細胞以4000/孔(0. lml培養(yǎng)基)加入96孔細胞培養(yǎng)板貼壁過夜，加 入0. lml待測化合物的稀釋液，DMS0的最終濃度為0.25 %，將細胞培養(yǎng)板在37 °C，5 %的⑶2 條件下溫育72h。然后在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)的變化，然后每孔加入50% (質(zhì)量/體積）的 三氯乙酸(TCA)50yl固定細胞。TCA的終濃度為10%，靜置5min后在4°C冰箱中放置lh，培養(yǎng) 板各孔用去離子水沖洗5遍，以去除TCA，甩干，空氣干燥至無濕跡。每孔加0.4% (質(zhì)量/體 積）的SRBlOOyl，室溫放置10min，棄去各孔內(nèi)液體后用1 %乙酸沖洗5遍，空氣干燥后用pH為 10.5，10mM Tris base(三羥甲基氨基甲烷）150μ1萃取，檢測540nm的吸收波長。結果1(：50值 (μΜ)見表4所示。
[0159] 表4本發(fā)明化合物I的晶型A、Β、C、D對EGFR和Her 2的抑制活性分析
[0160]
[0161] 注："++++"指IC5Q值<0·025μΜ; "+++"指IC5Q值為0·025-0·10μΜ。
[0162] 在作為評價化合物生物學活性的一個重要的"細胞增殖抑制試驗"中可以看到，本 發(fā)明化合物I的晶型A、B、C、D均具有較好的生物學活性。
[0163] 結果表明，本發(fā)明的化合物I的晶型A、B、C、D都是有效的酪氨酸激酶抑制劑。
【主權項】
1. 化合物I的多晶型物，其特征在于，所述多晶型物為晶型B或者晶型C2. 根據(jù)權利要求1所述的多晶型物，其特征在于，所述晶型B，使用化-Κα福射，Κ2Θ角度 表示的X-射線粉末衍射圖譜在4.6° ±0.2° ,8.3° ±0.2° ,9.1° ±0.2° ,12.0° ±0.2° ,13.9° ±0.2°，15.0° ±0.2° ,15.8° ±0.2° ,17.6° ±0.2° ,18.7° ±0.2° ,19.7° ±0.2°，20.8° ± 0.2° ,22.2° ±0.2° ,22.8° ±0.2°，26.0° ±0.2°處有特征峰;優(yōu)選地，所述晶型Β具有基本如 同圖4所示出的X-射線粉末衍射圖譜。3. 根據(jù)權利要求1所述的多晶型物，其特征在于，所述晶型Β在239.11~254.49°C烙融 分解，優(yōu)選地，所述晶型B具有如圖5所示的差示掃描量熱圖譜。4. 根據(jù)權利要求1所述的多晶型物，其特征在于，所述晶型C，使用化-Κα福射，Κ2Θ角度 表示的X-射線粉末衍射圖譜在4.4° ±0.2° ,9.5° ±0.2° ,12.7° ±0.2° ,14.9° ±0.2° ,16.1° ±0.2°，17.1° ±0.2° ,19.4° ±0.2° ,19.8° ±0.2° ,20.9° ±0.2° ,21.4° ±0.2°，23.7° ± 0.2° ,26.8° ±0.2°處有特征峰;優(yōu)選地，所述晶型C具有基本如同圖6所示出的X-射線粉末 衍射圖譜。5. 權利要求1-4任一項所述多晶型物的制備方法，包括如下步驟： (1) 化合物I晶型C的制備，其包括W下步驟： 將化合物I在加熱回流條件下溶于四氨巧喃/水體系中，降溫析晶，過濾，驚干，得化合 物I晶型C;或者， (2) 化合物I晶型Β的制備，其包括W下步驟： 將化合物I在加熱回流條件下溶于乙醇/水體系中，降溫析晶，過濾，驚干，得化合物I晶 型D，將化合物I晶型D在60~150°C下烘干，得化合物I晶型Β。6. -種藥物組合物，其包含權利要求1-4任一項所述的多晶型物，W及任選的一種或多 種藥學可接受的賦形劑。7. 權利要求1-4任一項所述的多晶型物在制備用于治療和/或預防哺乳動物(包括人） 與受體酪氨酸激酶相關的疾病或病癥的藥物中的用途。8. 權利要求1-4任一項所述的多晶型物在制備用于治療或輔助治療和/或預防哺乳動 物(包括人）由受體酪氨酸激酶介導的腫瘤或由受體酪氨酸激酶驅(qū)動的腫瘤細胞的增殖和 遷移的藥物中的用途。9. 根據(jù)權利要求7或8所述的用途，其特征在于，所述與受體酪氨酸激酶相關的疾病或 病癥、由受體酪氨酸激酶介導的腫瘤、或由受體酪氨酸激酶驅(qū)動的腫瘤細胞的增殖和遷移 包括erbB受體酪氨酸激酶敏感癌癥，如EGFR或化r2高表達及EGF驅(qū)動的腫瘤，包括實體腫瘤 如膽管、骨、膀脫、腦/中樞神經(jīng)系統(tǒng)、乳房、結直腸、子宮內(nèi)膜、胃、頭和頸、肝、肺、神經(jīng)元、食 道、卵巢、膜腺、前列腺、腎臟、皮膚、睪丸、甲狀腺、子宮和外陰等的癌癥，和非實體腫瘤如白 血病、多發(fā)性骨髓瘤或淋己瘤。
【專利摘要】4-(取代苯胺基)喹唑啉衍生物二甲苯磺酸鹽的多晶型物及其制備方法和用途，本發(fā)明涉及作為酪氨酸激酶抑制劑N-(4-(3-氟芐氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((2-(甲基亞砜基)乙基氨基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺二甲苯磺酸鹽(化合物I)的多晶型物。具體而言，本發(fā)明涉及化合物I的晶型A、B、C和D。本發(fā)明還涉及化合物I的多晶型物的制備方法，包括它的藥物組合物以及它們的制藥用途。本發(fā)明化合物I的多晶型物是有效的酪氨酸激酶抑制劑。
【IPC分類】A61P35/00, C07D405/04, A61K31/517, A61P35/02
【公開號】CN105566305
【申請?zhí)枴緾N201610092050
【發(fā)明人】王晶翼, 范傳文, 冷傳新, 張進, 林棟 , 王丙忠, 王會成
【申請人】齊魯制藥有限公司
【公開日】2016年5月11日
【申請日】2012年3月6日
【公告號】CN103304544A, CN103304544B, WO2013131465A1