6 (d, J=1.Q, 1H), 8.32 (d, ^6.0, 1H), 8.04 (s, 2H), 7.94 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.46 (t,歲7.2，1H), 7.38 (s, 1Η)〇
[0185] 實(shí)施例3 -合成化合物8 (4-(2-氟-苯基乙炔基）-IH-吡咯并[2, 3-b]吡啶）
步驟1:向4-氯-IH-吡咯并[2, 3-b]吡啶（2. 00 g，13. I mmol)和碘化鈉（13. 8 g， 91.8 mmol)在乙腈（25 mL)中的溶液滴加乙酰氯（2.34 mL，2.57 g，32. 8 mmol)和將得 到的混懸液在80°C加熱7天。冷卻后，將反應(yīng)混合物在真空下濃縮，將飽和碳酸鉀水溶液 (50 mL)添加至殘余物中。將混合物用二氯己燒（3 X 50 mL)萃取，合并的有機(jī)相用亞硫 酸氫鈉的飽和溶液（2 X 50 mL)和鹽水（50 mL)洗絳，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾和真空下濃 縮。向殘余物的THF (25 mL)溶液中添加 IN氫氧化鈉的水溶液（15 mL)和將得到的溶液 在室溫下攪拌3 h。然后將反應(yīng)混合物在真空下濃縮，將水（100 mL)添加至殘余物中。將 混合物用二氯甲烷（3 X 50 mL)萃取，合并的有機(jī)相用鹽水（50 mL)洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干 燥，過(guò)濾和真空下濃縮。將殘余物在硅膠柱上使用柱純化，使用己烷/乙酸乙酯作為洗脫 液，得到4-碘-IH-吡咯并[2, 3-b]吡啶（1.26 g，39%)，為黃色固體；LCMS (ESI) 245 (M+H); HPLC 66%，RT: 5.77 min; 1H NMR (400 MHz,氯仿-ο) δ ppm: 11.77 (br s， 1Η), 7.94 (d, ^5.1 Hz, 1H), 7.51 (d, ^5.1 Hz, 1H), 7.44 (d, J=?,.! Hz, 1H), 6· 41 (d，#3. 3 Hz, 1H)。
[0186] 步驟2:在微波管中放置4-碘-IH-吡咯并[2, 3-b]吡啶（100 mg，0. 41 mmol)、 1-乙炔基-2-氟苯（93 μι, 0.82 mmol)、四（三苯基膦）鈀（0) (5.8 mg, 0.01 mmol)、碘 化銅（I) (3.1 mg, 0.02 mmol)、三乙胺（288 μι, 2.05 mmol)和無(wú)水 1,2-二甲氧基乙烷 (2. 00 mL)。將管密封，和將氮?dú)夤呐葜练磻?yīng)混合物中10 min。將反應(yīng)混合物在80°C加熱 2h。將反應(yīng)混合物冷卻，用碳酸氫鈉的飽和溶液稀釋，和用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)相 經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾和真空蒸發(fā)。將殘余物通過(guò)色譜使用己烷/乙酸乙酯（20%-100%) 作為洗脫液純化，得到標(biāo)題化合物4-(2-氟-苯基乙炔基）-1Η-吡咯并[2, 3-b]吡啶（81 mg; 82%)，為黃褐色固體；LCMS (ESI) 237 (M+H); HPLC 98.4%, RT: 4.60 min; 1H NMR (500 MHz, DMS0-4) δ ppm: 11.95 (s, 1H), 8.26 (d, ^4.9, 1H), 7.75 (td, ^7.5, 1.6, 1H), 7.63 (dd, ^3.1, 2.7, 1H), 7.59-7.51 (m, 1H), 7.40 (t, J=9.l, 1H), 7.32(td，^7.6，0.9，lH)，7.23(d，^4.9，lH)，6.60(dd，^3.3，1.9，lH)。
[0187] 表1
II.生物學(xué)測(cè)定法 用EC20 L-谷氨酸的HEK-293 mGluR4細(xì)朐CAMP測(cè)宙法 使用mGluR4懸浮細(xì)胞形式，使用10 μΜ毛喉素（Forskolin)(終濃度）誘導(dǎo)cAMP的 產(chǎn)生。
[0188] 在EC2tl (對(duì)于mGluR4為2.3 μΜ，和對(duì)于mGluR6為4.3 μΜ) L-谷氨酸，測(cè)試本發(fā) 明化合物的正變構(gòu)活性。
[0189] cAMP dymanic2試劑盒預(yù)期用于直接定量測(cè)定cAMP，其原理基于HTRF技術(shù)。
[0190] 試劑： 細(xì)胞：HEK293T mGluR4 細(xì)胞，來(lái)自 Multispan，cat# C1191a lot# C1191a-040910〇
[0191] 培養(yǎng)基：DMEM + GlutaMAXl + 10%透析FBS，100 mM丙酮酸鈉 ，I ug/ml 嘌呤霉素。
[0192] 谷氨酰胺饑餓培養(yǎng)基：不含GlutaMax的DMEM，用于將細(xì)胞鋪板（谷氨酰胺饑餓過(guò) 夜）。高葡萄糖DMEM，不含酚紅、谷氨酰胺或丙酮酸鈉+ 10%透析FBS，100 mM丙酮酸鈉，1 ug/ml 嗓呤霉素，10 mM Hepes。
[0193] Hank 平衡鹽溶液，HBSS，來(lái)自 Invitrogen0
[0194] Greiner 384孔白色低容量高基板（784075)。
[0195] cAMP dynamic2,來(lái)自 Cisbio Bioassays0
[0196] 谷氨酸：L-谷氨酸，單鈉鹽，一水合物，98%，來(lái)自Sigma-Aldrich。
[0197] 細(xì)胞制備物：分離80%_90%匯合的細(xì)胞。第二天，用不含GlutaMax的DMEM沖洗細(xì) 胞和改變成谷氨酰胺饑餓培養(yǎng)基。孵育過(guò)夜。
[0198] 測(cè)定法： 制備化合物板：進(jìn)行化合物連續(xù)稀釋（使用Matrix 4341板），使用Bravo液體操作平 臺(tái)方案（化合物連續(xù)稀釋），其將DMSO添加至1-24列（除了 3和13列）。以1:3比率連續(xù) 稀釋位于3和13列的化合物；10個(gè)點(diǎn)（10 ul的3 mM化合物至20 ul DMS0)。使用Bravo 液體操作平臺(tái)，將來(lái)自連續(xù)稀釋板的Iul轉(zhuǎn)移至Matrix 4314板，以創(chuàng)建標(biāo)記板（stamp plate)〇
[0199] 制備化合物稀釋緩沖液： 在HBSS緩沖液中稀釋20 mM毛喉素（在DMSO中）儲(chǔ)存溶液以制備20 uM溶液（毛喉 素緩沖液；2x溶液）。向毛喉素緩沖液中添加谷氨酸至8 uM濃度（化合物稀釋緩沖液；2x EC20谷氨酸和毛喉素）。
[0200] 使用多點(diǎn)器（multidrop)，將50 ul/孔的化合物稀釋緩沖液添加至2 ul化合物標(biāo) 記板的1-22列。23和24列接收含有400 uM谷氨酸（EC100谷氨酸；2x溶液）的毛喉素緩 沖液。1和2列接收含有EC20谷氨酸的化合物稀釋緩沖液，其是基礎(chǔ)對(duì)照。
[0201] 添加谷氨酸劑量反應(yīng)至化合物板的P行。通過(guò)以1:3比率在毛喉素緩沖液中連續(xù) 稀釋谷氨酸制備劑量反應(yīng)，自2 mM谷氨酸（2x)開(kāi)始。稀釋谷氨酸9次和轉(zhuǎn)移至化合物板。
[0202] 制備細(xì)胞板： 收獲細(xì)胞：用預(yù)溫的HBSS-IOmM HEPES (不含Ca Mg)沖洗細(xì)胞和并用乙二胺四乙酸從 燒瓶中解離細(xì)胞。離心細(xì)胞，除去上清液，和懸浮于預(yù)溫的HBSS + 10 mM H印es。計(jì)數(shù)細(xì)胞 和離心。除去上清液和在HBSS + Ifepes (含Ca Mg)中懸浮細(xì)胞，密度為400, 000個(gè)細(xì)胞 /ml〇
[0203] 進(jìn)行測(cè)定： 使用Bravo液體操作平臺(tái)，從稀釋化合物板分配5 ul至Greiner低容量細(xì)胞板。使用 具有小管盒（small tubing cassette)的多點(diǎn)器，分配5 ul細(xì)胞（2000個(gè)細(xì)胞/孔）至包 含在低容量板中的化合物上。在培養(yǎng)箱中在37°C 5% 0)2孵育細(xì)胞30分鐘。
[0204] cAMP 測(cè)定： 根據(jù)兩步測(cè)定法的說(shuō)明書（見(jiàn)Cisbio手冊(cè)）制備cAMP-d2和抗-cAMP-Crytate，和使 用多點(diǎn)器添加 10 Ul的混合試劑至測(cè)定板的各孔中。在室溫下孵育60分鐘，和使用mGluR 低容量cAMP HTRF 384孔方案在Envision讀板器中讀數(shù)。讀出是經(jīng)計(jì)算的熒光比率（665 nM/615 nM * 10000)〇
[0205] 本發(fā)明化合物的測(cè)量的半最大有效濃度（EC5tl)顯示在表1中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.式（I)的化合物和其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體， 包括其以所有比例的混合物其中： X"X2、X3彼此獨(dú)立地表示N或CT; V表示環(huán)烴基、雜環(huán)基、芳基或雜芳基，其可任選被一個(gè)或多個(gè)相同或不同的取代基T取代； W表示\雜環(huán)基或雜芳基； Ra、Rb、R。、Rd彼此獨(dú)立地表示T，或R3和Rb和R。和Rd連同它們所連接的碳原子和這些 碳原子之間的C-C鍵一起形成乙炔基（-C=C-); Rl、R2 彼此獨(dú)立地表示H、烴基、鹵素、F、C1、&、I、OH、CN、N02、NYY、CF3、OCF3、C(0) 0Y; 或 R1和R2也可連同它們所連接的原子一起形成環(huán)徑基、雜環(huán)基、芳基或雜芳基，其可任 選被一個(gè)或多個(gè)相同或不同的取代基T取代；或 如果&是CT，則R2和X3也可連同它們所連接的原子一起形成環(huán)烴基、雜環(huán)基、芳基或 雜芳基，其可任選被一個(gè)或多個(gè)相同或不同的取代基T取代； T彼此獨(dú)立地表示H、烴基、環(huán)烴基、環(huán)烴基烴基、芳基、芳基烴基、雜芳基、雜芳基烴基、 鹵素、F、C1、&、I、0H、CN、N02、NYY、CF3、0CF3、烴基-0H、烴基-NYY、烴基-CN、0-烴基、0-環(huán) 烴基、0-烴基-環(huán)烴基、0-芳基、0-烴基-芳基、0-雜芳基、0-烴基-雜芳基、0-烴基-NYY、 C(0) 0Y、C(0)NY-烴基-NYY、C(0)NYY; Y彼此獨(dú)立地表示H、烴基、環(huán)烴基、環(huán)烴基烴基、芳基、芳基烴基、雜芳基、雜芳基烴基； 第一個(gè)前提條件是右至少一個(gè)表示N，或X i、X2、X3*部表示CT，和R1和R2連同它們所連接的原 子一起形成芳基或包含至少一個(gè)氮原子的雜芳基，優(yōu)選包含至少一個(gè)氮原子的雜芳基，其 中芳基和雜芳基可任選被一個(gè)或多個(gè)相同或不同的取代基T取代；和 第二個(gè)前提條件J 玉表示吡咯并[2, 3-b]吡啶-4-基、吡咯并[2, 3-d]嘧啶-4-基、5, 6, 7, 8-四氫-[1，8] 萘啶-4-基、5, 6, 7, 8-四氫[1]苯并噻吩并-[2, 3-d]吡啶-4-基或5, 6, 7, 8-四氫[1]苯 并噻吩并-[2, 3-d]嘧啶-4-基；和 第三個(gè)前提條件是挑驗(yàn)以下化合物：2. 權(quán)利要求1的化合物和其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu) 體，包括其以所有比例的混合物，其中 W表不乙炔基（-C三C-)〇3. 權(quán)利要求1的化合物和其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu) 體，包括其以所有比例的混合物，其中 W表不乙基（_CH2_CH2_ )。4. 權(quán)利要求1的化合物和其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu) 體，包括其以所有比例的混合物，其中 W表示其中n彼此獨(dú)立地為1或2。5. 權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的化合物和其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、互變異構(gòu)體 和立體異構(gòu)體，包括其以所有比例的混合物，其中 R1和R2連同它們所連接的原子一起形成可任選被一個(gè)或多個(gè)相同或不同的取代基T取代的雜環(huán)基、芳基或雜芳基，優(yōu)選可任選被一個(gè)或多個(gè)相同或不同的取代基T取代的四 氫吡啶、苯基、吡啶、吡咯或呋喃基。6. 權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的化合物和其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、互變異構(gòu)體 和立體異構(gòu)體，包括其以所有比例的混合物，其中 Rl、R2 彼此獨(dú)立地表示H、烴基、鹵素、F、C1、&、I、OH、CN、N02、NYY、CF3、OCF3、C(0) 0Y; 優(yōu)選扎見(jiàn)12或甲基。7. 權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的化合物和其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、互變異構(gòu)體 和立體異構(gòu)體，包括其以所有比例的混合物，其中 (a) 父1是01'，父2是(：1'和X3是N，或 (b) 父1是01'，父2是(：1'和父3是(：1'，或 (c) 乂1是1乂2是(：1'和X3是CT，或 (d) X1是CT，X2是N和X3是CT，或 (e) 乂丨是N，X2是CT和X3是N。8. 權(quán)利要求5-7中任一項(xiàng)的化合物和其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、互變異構(gòu)體 和立體異構(gòu)體，包括其以所有比例的混合物，其中表示喹啉基、喹啉-3-基、喹啉-4-基、喹啉-5-基、氰基-喹啉基、8-氰基-喹啉-4-基、 異喹啉基、異喹啉-1-基、異喹啉-4-基、異喹啉-5-基、甲基-呋喃并[3, 2-b]吡啶基、2-甲 基-呋喃并[3, 2-b]吡啶-7-基、芐基-四氫-吡啶并[4, 3-d]嘧啶基、6-芐基-5, 6, 7, 8-四 氫-吡啶并[4, 3-d]嘧啶-4-基、萘基、吡啶基、吡啶-4-基、氨基-吡啶基、2-氨基-吡 啶-4-基、甲基-苯基-嘧啶基或6-甲基-2-苯基-嘧啶-4-基。9. 選自以下的化合物和其生理學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu) 體，包括其以所有比例的混合物：10.制備式（I)的化合物的方法，包括以下步驟： (a)將式（II)的化合物與式（III)的化合物反應(yīng)得到式（I)的化合物 其中Hal表示F、Cl、Br、I，和 Xi、X2、X3、Rl、R2如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所定義， H-ff-V(III) 其中 W、V如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所定義，其中 XPHRUR2U如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所定義， 或者 (b)將式（IV)的化合物與式（V)的化合物反應(yīng)得到式（I)的化合物其中 XPHRUR2J如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所定義， Hal-V(V) 其中 Hal表示F、Cl、Br、I，和V如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所定義，其中 XPHRUR2U如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所定義， 或者 (c) 將式（I)的化合物水化其中 Xi、X2、X3、Rl、R2、V如權(quán)利要求1、2和5-8中任一項(xiàng)所定義和W是乙炔基（-C三C-)， 得到式（I)的化合物其中 父1、父2、乂3、1?1、1?2、￥如權(quán)利要求1、3和5-8中任一項(xiàng)所定義和1是乙基（-〇1 2-〇12-)， 或者 (d) 將式（VI)的化合物與式（IV)的化合物反應(yīng)得到式（I)的化合物其中 Hal表示F、Cl、Br、I，和V如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所定義，其中 如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所定義，其中 XpX2、X3、Rl、R2、V如權(quán)利要求1和4-8中任一項(xiàng)所定義和W是異噁唑， 和任選地 (e)將式（I)的化合物的堿或酸轉(zhuǎn)化成其鹽。11. 權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的化合物用于調(diào)節(jié)代謝型谷氨酸受體亞型4 (mGluR4)和/ 或改變谷氨酸水平或谷氨酸能信號(hào)傳導(dǎo)的用途，優(yōu)選所述化合物另外包含權(quán)利要求1的所 述排除的化合物。12. 包含權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的至少一種化合物的藥物，優(yōu)選所述化合物另外包含 權(quán)利要求1的所述排除的化合物。13. 包含權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的至少一種化合物的藥物，其用于治療和/或預(yù)防選 自以下的生理學(xué)和/或病理生理學(xué)病況："受mGluR4變構(gòu)調(diào)節(jié)劑的神經(jīng)調(diào)節(jié)作用影響或促 進(jìn)的病況、中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥、成癮、耐受或依賴；情感障礙，例如焦慮癥、廣場(chǎng)恐怖癥、一般 焦慮癥（GAD)、強(qiáng)迫性神經(jīng)失調(diào)（OCD)、驚恐性障礙、創(chuàng)傷后精神緊張性障礙（PTSD)、社交恐 怖癥、其它恐怖癥、物質(zhì)誘導(dǎo)的焦慮障礙和急性緊張障礙、心境障礙、雙相型障礙（I和II)、 循環(huán)情感性障礙、抑郁癥、精神抑郁癥、嚴(yán)重的抑郁性障礙和物質(zhì)誘導(dǎo)的心境障礙；精神病， 例如精神失調(diào)癥和注意力缺乏/多動(dòng)癥；帕金森氏病和運(yùn)動(dòng)障礙例如運(yùn)動(dòng)過(guò)慢、僵硬、張力 障礙、藥物誘導(dǎo)的帕金森綜合征、運(yùn)動(dòng)障礙、遲發(fā)性運(yùn)動(dòng)障礙、L-DOPA-誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙、多 巴胺激動(dòng)劑-誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙、運(yùn)動(dòng)過(guò)度的運(yùn)動(dòng)障礙、GillesdelaTourette綜合征、靜 止性震顫、動(dòng)作性震顫、運(yùn)動(dòng)不能、運(yùn)動(dòng)不能-強(qiáng)直綜合征、靜坐不能、手足徐動(dòng)癥、撲翼樣 震顫、抽搐、姿勢(shì)不穩(wěn)、腦炎后的帕金森綜合征、肌肉強(qiáng)直、舞蹈病和舞蹈病型運(yùn)動(dòng)、痙攣狀 態(tài)、肌陣攣、偏側(cè)投擲癥、進(jìn)行性核上性麻痹、多動(dòng)腿綜合征和周期性四肢運(yùn)動(dòng)障礙；認(rèn)知障 礙例如精神錯(cuò)亂、物質(zhì)誘導(dǎo)的持續(xù)性精神錯(cuò)亂、癡呆、HIV疾病引起的癡呆、由亨廷頓氏病引 起的癡呆、由帕金森氏病引起的癡呆、帕金森氏病-ALS癡呆綜合癥、阿爾茨海默型癡呆、物 質(zhì)誘導(dǎo)的持續(xù)性癡呆和輕度認(rèn)知缺損；神經(jīng)學(xué)病癥，例如神經(jīng)變性、神經(jīng)毒性或缺血，例如 中風(fēng)、脊髓損傷、大腦缺氧、顱內(nèi)血腫、記憶缺陷、阿爾茨海默氏病、癡呆、震顫性譫妄、其它 形式的神經(jīng)變性、神經(jīng)毒性和缺血、炎癥和/或由創(chuàng)傷性腦損傷引起的神經(jīng)變性；炎性中樞 神經(jīng)系統(tǒng)病癥，例如多發(fā)性硬化形式，例如良性多發(fā)性硬化、復(fù)發(fā)-減輕性多發(fā)性硬化、繼 發(fā)性進(jìn)行性多發(fā)性硬化、原發(fā)性進(jìn)行性多發(fā)性硬化和進(jìn)行性-復(fù)發(fā)性多發(fā)性硬化；偏頭痛、 癲癇癥和震顫、顳葉性癲癇、由其它疾病或損傷例如慢性腦炎、創(chuàng)傷性腦損傷、中風(fēng)或缺血 繼發(fā)的癲癇；成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、炎性或神經(jīng)病性疼痛、與谷氨酸功能障礙有關(guān)的代謝病癥、2 型糖尿病、視網(wǎng)膜的疾病或病癥、視網(wǎng)膜變性或黃斑變性；胃腸道的疾病或病癥包括胃食管 反流疾病（GERD)、下食管括約肌疾病或病癥、胃腸運(yùn)動(dòng)性疾病、結(jié)腸炎、克羅恩病或腸易激 綜合征（IBS)、癌癥，優(yōu)選所述化合物另外包含權(quán)利要求1的所述排除的化合物。14. 權(quán)利要求12-13中任一項(xiàng)的藥物，其中所述藥物包含至少一種另外的藥理學(xué)活性 物質(zhì)。15. 權(quán)利要求12-13中任一項(xiàng)的藥物，其中在用至少一種另外的藥理學(xué)活性物質(zhì)治療 之前和/或期間和/或之后施用所述藥物。16. 藥物組合物，包含治療有效量的權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的至少一種化合物，任選 還包含至少一種選自以下的另外的化合物：生理學(xué)上可接受的賦形劑、助劑、輔劑、稀釋劑、 載體和/或非權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的化合物的另外的藥學(xué)活性物質(zhì)。17. 藥盒，包含治療有效量的權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的至少一種化合物和/或權(quán)利要 求16的至少一種藥物組合物和治療有效量的非權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的化合物的至少一 種另外的藥理學(xué)活性物質(zhì)。
【專利摘要】本發(fā)明涉及作為用于調(diào)節(jié)代謝型谷氨酸受體亞型4(mGluR4)和/或改變谷氨酸水平或谷氨酸能信號(hào)傳導(dǎo)的正變構(gòu)調(diào)節(jié)劑的新的乙炔衍生物。
【IPC分類】A61K31/4709, C07D409/06, A61K31/4745, C07D215/06, C07D471/04, A61P25/00, A61K31/47
【公開(kāi)號(hào)】CN104955809
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480007890
【發(fā)明人】T.E.理查森, N.布魯格, J.波特尼克
【申請(qǐng)人】默克專利股份公司
【公開(kāi)日】2015年9月30日
【申請(qǐng)日】2014年1月15日
【公告號(hào)】CA2900300A1, EP2953933A1, WO2014121883A1