1.一種誘導(dǎo)羊膜間充質(zhì)干細胞向心肌樣細胞分化的誘導(dǎo)液,其特征在于,該誘導(dǎo)液為包括胎牛血清、5-氮雜胞苷、血管緊張素II和轉(zhuǎn)錄生長因子β1的DMEM/F12培養(yǎng)液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述誘導(dǎo)液,其特征在于,該誘導(dǎo)液為包括10%胎牛血清、5-10μmol/L 5-氮雜胞苷、5-10μmol/L血管緊張素II和5-10μg/L轉(zhuǎn)錄生長因子β1的DMEM/F12培養(yǎng)液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述誘導(dǎo)液,其特征在于,該誘導(dǎo)液為包括10%胎牛血清、5μmol/L 5-氮雜胞苷、5μmol/L血管緊張素II和5μg/L轉(zhuǎn)錄生長因子β1的DMEM/F12培養(yǎng)液;或包括10%胎牛血清、10μmol/L 5-氮雜胞苷、5μmol/L血管緊張素II和10μg/L轉(zhuǎn)錄生長因子β1的DMEM/F12培養(yǎng)液;或包括10%胎牛血清、10μmol/L 5-氮雜胞苷、10μmol/L血管緊張素II和5μg/L轉(zhuǎn)錄生長因子β1的DMEM/F12培養(yǎng)液;或包括10%胎牛血清、5μmol/L 5-氮雜胞苷、5μmol/L血管緊張素II和10μg/L轉(zhuǎn)錄生長因子β1的DMEM/F12培養(yǎng)液。
4.權(quán)利要求1-3任意一項所述誘導(dǎo)液在誘導(dǎo)羊膜間充質(zhì)干細胞向心肌樣細胞分化和/或制備誘導(dǎo)羊膜間充質(zhì)干細胞向心肌樣細胞分化的誘導(dǎo)試劑中的應(yīng)用。
5.一種誘導(dǎo)羊膜間充質(zhì)干細胞向心肌樣細胞分化的方法,其特征在于,將羊膜間充質(zhì)干細胞先進行貼壁培養(yǎng),然后更換權(quán)利要求1-3任意一項所述誘導(dǎo)液誘導(dǎo)培養(yǎng),期間定期更換誘導(dǎo)液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述方法,其特征在于,將羊膜間充質(zhì)干細胞按1×104cells/mL密度接種于含10%胎牛血清DMEM/F12培養(yǎng)液中貼壁培養(yǎng)24h,然后更換權(quán)利要求1-3任意一項所述誘導(dǎo)液,在37℃、5%CO2、飽和濕度環(huán)境下靜置誘導(dǎo)培養(yǎng)4周,期間2-3天換液一次。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述方法,其特征在于,所述羊膜間充質(zhì)干細胞為人羊膜間充質(zhì)干細胞。
8.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述方法,其特征在于,所述羊膜間充質(zhì)干細胞由以下方法制備獲得:
用剪刀將羊膜從胎盤上剪下并清洗,然后剪成小塊加入胰蛋白酶消化,消化后再次剪碎,加入I型膠原酶消化,消化后過篩,加入含10%FBS的DMEM/F12完全培養(yǎng)基重懸細胞并進行培養(yǎng),至細胞長滿80-90%傳代,定期更換新鮮的含10%FBS的DMEM/F12完全培養(yǎng)基。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述方法,其特征在于,所述傳代按照如下方法進行:
待原代細胞長滿80-90%,用吸管吸棄舊培養(yǎng)液,加入胰蛋白酶消化,鏡下觀察細胞收縮變圓時,立即加入含10%FBS的DMEM/F12培養(yǎng)液終止消化,離心收集細胞,加入適量含10%FBS的DMEM/F12完全培養(yǎng)基傳代培養(yǎng),每隔3-4天傳代一次。