本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種宮內(nèi)膜干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
干細(xì)胞是一類(lèi)具有自我更新能力且在適合微環(huán)境下具有多系分化潛能的原始細(xì)胞。宮內(nèi)膜干細(xì)胞是多能干細(xì)胞，具有增殖能力強(qiáng) 、不導(dǎo)致染色體變異、不導(dǎo)致腫瘤發(fā)生等特征，宮內(nèi)膜干細(xì)胞相對(duì)于其他干細(xì)胞，有較明顯的特點(diǎn)：此類(lèi)干細(xì)胞數(shù)量多，它是骨髓干細(xì)胞的30倍。宮內(nèi)膜干細(xì)胞最早是從刮宮組織中提取，隨著研究深入，人們發(fā)現(xiàn)從女性月經(jīng)血中同樣能分離得到具有再生能力的干細(xì)胞，并且其獲取方式無(wú)侵害性，無(wú)倫理問(wèn)題，方法更簡(jiǎn)單、安全。然而，現(xiàn)有培養(yǎng)技術(shù)條件下，宮內(nèi)膜干細(xì)胞使用培養(yǎng)基成分較多，純度不高。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種宮內(nèi)膜干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基，采用本發(fā)明的一種宮內(nèi)膜干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，具有培養(yǎng)基成分少，宮內(nèi)膜干細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定，純度高的特點(diǎn)。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
一種宮內(nèi)膜干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基，按占總體積百分比計(jì)，包括以下含量組分：
低糖DMEM培養(yǎng)基70-85％
血清替代物5-10％
維生素C 2-10%
L-谷氨酰胺1-5％
葡萄糖 1.25-15%
2- 巰基乙醇1-10%
青鏈霉素雙抗溶液0.8-1.5％
硫酸慶大霉素0.8-1.5％。
維生素C是大部分生物的必需營(yíng)養(yǎng)，是一種抗氧化劑，保護(hù)細(xì)胞組織免于自由基的威脅。
L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)起到很重要的作用。脫掉氨基后，L- 谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝；在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡。
葡萄糖是活細(xì)胞的能量來(lái)源和新陳代謝中間產(chǎn)物，即生物的主要供能物質(zhì)。
2- 巰基乙醇是一種有機(jī)化合物，其化學(xué)式為HOCH2CH2SH，它兼具乙二醇（HOCH2CH2OH）和乙二硫醇（HSCH2CH2SH）的官能團(tuán)，通常用于二硫鍵的還原，保護(hù)二硫鍵，從而使蛋白質(zhì)不被氧化掉而失活。
青鏈霉素雙抗溶液用于抑制細(xì)菌增長(zhǎng)，為宮內(nèi)膜干細(xì)胞提供無(wú)菌的生長(zhǎng)環(huán)境。
硫酸慶大霉素為氨基糖甙類(lèi)廣譜抗生素，對(duì)多種革蘭陰性菌及陽(yáng)性菌都具有抑菌和殺菌作用，為宮內(nèi)膜干細(xì)胞提供無(wú)菌的生長(zhǎng)環(huán)境。
本發(fā)明的有益效果在于：月經(jīng)血樣品自帶較多細(xì)菌，青鏈霉素雙抗溶液與硫酸慶大霉素的雙重殺菌，為宮內(nèi)膜干細(xì)胞提供無(wú)菌的生長(zhǎng)環(huán)境，避免細(xì)菌消耗培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)成品，造成生長(zhǎng)能量不足，導(dǎo)致宮內(nèi)膜干細(xì)胞無(wú)法正常生長(zhǎng)，增殖低的問(wèn)題；維生素C和2-巰基乙醇構(gòu)建了一個(gè)較好的宮內(nèi)膜干細(xì)胞分裂環(huán)境，防止宮內(nèi)膜干細(xì)胞在生長(zhǎng)的過(guò)程中干細(xì)胞的組分被氧化而失掉活性；維生素C、L-谷氨酰胺及葡萄糖為宮內(nèi)膜干細(xì)胞的生長(zhǎng)提供足夠的能量，使新生的細(xì)胞具有活性，由于宮內(nèi)膜干細(xì)胞的自我更新能力強(qiáng)，無(wú)需額外加入生長(zhǎng)因子，只需要提供足夠的能量，便能獲得良好的分裂生長(zhǎng)；本發(fā)明的一種宮內(nèi)膜干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基成分溫和、簡(jiǎn)單，成本低廉，采用本發(fā)明的一種宮內(nèi)膜干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行宮內(nèi)膜干細(xì)胞培養(yǎng)，宮內(nèi)膜干細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定，雜細(xì)胞少，純度高。
優(yōu)選的，一種宮內(nèi)膜干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基按占總體積百分比計(jì)，包括以下含量組分：
低糖DMEM培養(yǎng)基70-85％
血清替代物5-10％
維生素C 2-10%
L-谷氨酰胺1-5％
葡萄糖 1.25-15%
2- 巰基乙醇1-10%
青鏈霉素雙抗溶液0.8-1.5％
硫酸慶大霉素0.8-1.5％。
優(yōu)選的，一種宮內(nèi)膜干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基按占總體積百分比計(jì)，包括以下含量組分：
低糖DMEM培養(yǎng)基70％
血清替代物5％
維生素C 2%
L-谷氨酰胺1％
葡萄糖 1.25%
2- 巰基乙醇1%
青鏈霉素雙抗溶液0.8％
硫酸慶大霉素0.8％。
優(yōu)選的，一種宮內(nèi)膜干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基按占總體積百分比計(jì)，包括以下含量組分：
低糖DMEM培養(yǎng)基80％
血清替代物7％
維生素C 6%
L-谷氨酰胺3％
葡萄糖 5%
2- 巰基乙醇6%
青鏈霉素雙抗溶液1％
硫酸慶大霉素1％。
具體實(shí)施方式
為了便于理解本發(fā)明，下面將對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更全面的描述。但是，本發(fā)明可以以許多不同的形式來(lái)實(shí)現(xiàn)，并不限于本文所描述的實(shí)施例。相反地，提供這些實(shí)施例的目的是使對(duì)本發(fā)明的公開(kāi)內(nèi)容的理解更加透徹全面。
除非另有定義，本文所使用的所有的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)與屬于本發(fā)明的技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員通常理解的含義相同。本文中在本發(fā)明的說(shuō)明書(shū)中所使用的術(shù)語(yǔ)只是為了描述具體的實(shí)施例的目的，不是旨在于限制本發(fā)明。
實(shí)施例1
本實(shí)施例的一種宮內(nèi)膜干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基，按占總體積百分比計(jì)，包括以下含量組分：
低糖DMEM培養(yǎng)基70-85％
血清替代物5-10％
維生素C 2-10%
L-谷氨酰胺1-5％
葡萄糖 1.25-15%
2- 巰基乙醇1-10%
青鏈霉素雙抗溶液0.8-1.5％
硫酸慶大霉素0.8-1.5％。
實(shí)施例2
本實(shí)施例的一種宮內(nèi)膜干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基，按占總體積百分比計(jì)，包括以下含量組分：
低糖DMEM培養(yǎng)基70％
血清替代物5％
維生素C 2%
L-谷氨酰胺1％
葡萄糖 1.25%
2- 巰基乙醇1%
青鏈霉素雙抗溶液0.8％
硫酸慶大霉素0.8％。
實(shí)施例3
本實(shí)施例的一種宮內(nèi)膜干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基，按占總體積百分比計(jì)，包括以下含量組分：
低糖DMEM培養(yǎng)基80％
血清替代物7％
維生素C 6%
L-谷氨酰胺3％
葡萄糖 5%
2- 巰基乙醇6%
青鏈霉素雙抗溶液1％
硫酸慶大霉素1％。
對(duì)照試驗(yàn)
采集經(jīng)血及子宮內(nèi)膜組織，洗滌，去除肉眼可見(jiàn)的血管和纖維部分，清洗若干次至洗出液清亮，加入膠原酶消化，獲得宮內(nèi)膜干細(xì)胞群，將宮內(nèi)膜干細(xì)胞群重懸浮，將宮內(nèi)膜干細(xì)胞群重懸液置于培養(yǎng)瓶，加入實(shí)施例1至3的一種宮內(nèi)膜干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基，以后每24小時(shí)更換培養(yǎng)液一次，更換五次，使宮內(nèi)膜干細(xì)胞群獲得足夠養(yǎng)分充分生長(zhǎng)，傳代第5代，在培養(yǎng)瓶中加0.25％胰酶-EDTA進(jìn)行消化獲得培養(yǎng)后的宮內(nèi)膜干細(xì)胞。
以普通一種宮內(nèi)膜干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基采用上述方法培養(yǎng)宮內(nèi)膜干細(xì)胞，并與采用實(shí)施例1至3宮內(nèi)膜干細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)的宮內(nèi)膜干細(xì)胞進(jìn)行對(duì)照，分別于培養(yǎng)的第24小時(shí)及第120小時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行記數(shù)，結(jié)果如表1。
表1普通宮內(nèi)膜干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基與實(shí)施例1至3宮內(nèi)膜干細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)的宮內(nèi)膜干細(xì)胞進(jìn)行對(duì)照
形態(tài)特征觀察：分別將實(shí)施例1至3的細(xì)胞培養(yǎng)瓶放置于倒置顯微鏡下，顯微鏡連接攝像裝置，調(diào)整細(xì)胞視野并拍照，細(xì)胞呈長(zhǎng)梭型，成簇排列。
由上述對(duì)照試驗(yàn)可知，實(shí)施例1至3的宮內(nèi)膜干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基比普通無(wú)血清培養(yǎng)基得到的宮內(nèi)膜干細(xì)胞生長(zhǎng)純度高，且生長(zhǎng)形態(tài)良好，增殖能力強(qiáng)。
最后應(yīng)當(dāng)說(shuō)明的是，以上實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)地說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。