本發(fā)明涉及喹唑啉類化合物，具體地指一種含二氫吲哚啉及類似結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物及其應用。

背景技術(shù)：

癌癥，也被稱為惡性腫瘤，通常是由于細胞增殖機制失常導致的。全球每年新增癌癥病例數(shù)將高達1930萬例，可見癌癥一直是威脅人類健康的一大“殺手”。

表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)是ErbB家族成員之一，具有酪氨酸激酶活性，是一種重要的跨膜受體。EGFR被配體激活后啟動胞內(nèi)信號傳導，經(jīng)過細胞質(zhì)中銜接蛋白、酶的級聯(lián)反應，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子激活基因的轉(zhuǎn)錄，指導細胞遷移、黏附、增殖、分化、凋亡，且與腫瘤的形成和惡化密切相關(guān)。EGFR抑制劑的研發(fā)在分子靶向治療人類癌癥方向已成為熱點。目前已報道了大量的EGFR小分子抑制劑(如下結(jié)構(gòu)式所示)，在這些小分子抑制劑中，文獻(Suda.K,Murakami.I,Katayama.T,et al.Clin.Cancer.Res.16(2010)5489-5498.)報道了阿法替尼在生物細胞活性及抗腫瘤酶活性上具有高效的作用，除此之外，還有很多EGFR小分子抑制劑具有優(yōu)良的抗腫瘤活性，如吉非替尼(Fukuoka.M,Yano.S,Giaccone G,et al.J.Clin.Oncol.21(2003)2237-2246.)、達克米替你(Gonzales.A.J,Hook.K.E,Althaus.I.W,Mol,et al.Cancer.Ther.7(2008)1880-1889.)、LP-7(Lai.Y.S,Pang.J.X,Luo.M.H,C.N.Patent 201510184302,2015)以及本課題組近期設計、合成的喹唑啉類衍生物10k(Yuanbiao T,Yiqiang O.Y,Shan X,et al.Bioorg.Med.Chem.24(2016)1495-1503)等。文獻(Wang,X.F.,et al."Optimization of 4-(N-cycloamino)phenylquinazolines as a novel class of tubulin-polymerization inhibitors targeting the colchicine site."Journal of Medicinal Chemistry 57.4(2014):1390-1402.)報道了一系列新穎的含有2,3-二氫吲哚結(jié)構(gòu)的喹唑啉衍生物，其中化合物A顯示出非常優(yōu)良的抗腫瘤活性。

本發(fā)明在參考文獻的基礎上，設計合成了一系列含二氫吲哚啉及類似結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物，此系列化合物保留了阿法替尼的主體結(jié)構(gòu)的同時引入了酰腙活性基團，設計并合成了多種含有酰腙結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物。而本發(fā)明著重考察的是不同取代的含二氫吲哚啉及類似結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物的抗腫瘤活性，以期篩選出活性與選擇性更佳的抗腫瘤藥物。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就是提供一種含二氫吲哚啉及類似結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物及其制備方法和應用。

本發(fā)明提供如通式I所示的含二氫吲哚啉及類似結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物、其幾何異構(gòu)體及其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物或前藥，結(jié)構(gòu)如下述通式I所示：

其中：

A環(huán)選自含有1～3個相同或者不同R¹取代的芳環(huán)或雜芳環(huán)；

B環(huán)為與A環(huán)稠和的飽和的含氮五元或六元雜環(huán)；

R¹選自氫、鹵素、三氟甲基、氰基、硝基、羥基、氨基、巰基、羧基、三氟甲氧基、(C₁～C₄)烷基、(C₃～C₆)環(huán)烷基、(C₂～C₄)烯基、(C₂～C₄)炔基、(C₁～C₄)烷氧基、疊氮基、(C₁～C₄)烷氧基甲基、(C₁～C₄)烷基?；?C₁～C₄)烷硫基；

R²選自三氟甲基、(C₁～C₄)烷基、(C₃～C₆)環(huán)烷基、(C₂～C₄)烯基、(C₂～C₄)炔基、(C₁～C₄)烷氧基甲基、

R³選自(C₁～C₄)烷基、(C₃～C₆)環(huán)烷基、S-四氫呋喃-3-基、N-甲基哌啶-4-甲基或

R⁴、R⁵相同或不同，分別獨立地選自(C₁～C₆)烷基或(C₃～C₆)環(huán)烷基，且R⁴和R⁵含有1～2個氫、羥基、氨基、鹵素、巰基或羧基取代；或者R⁴和R⁵與和它們所連接的氮原子一起形成5～10元飽和雜環(huán)基，所述飽和雜環(huán)基除了與R⁴和R⁵連接的氮原子外，任選含有1～3個選自O、N和S的雜原子；

n為0～3。

本發(fā)明優(yōu)選涉及如上述通式I的化合物、其幾何異構(gòu)體、及其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物或前藥，其中：

A、B稠和的雜環(huán)選自：

R¹選自氫、鹵素、三氟甲基、氰基、硝基、羥基、氨基、巰基、羧基、三氟甲氧基、甲基、乙基、丙基、丁基、環(huán)丙烷、乙烯、丙烯、乙炔、丙炔、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基或疊氮基；

R²選自三氟甲基、甲基、乙基、丙基、丁基、乙烯、異丁烯、環(huán)丙烷、環(huán)丁烷、環(huán)戊烷、環(huán)己烷、乙烯、丙烯、丁烯、乙炔、丙炔、丁炔、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、

R³選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、環(huán)丙基、S-四氫呋喃-3-基、N-甲基哌啶-4-甲基或

選自：

n為0～3。

本發(fā)明中，所述通式I的含二氫吲哚啉及類似結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物為選自下列化合物中的一種，但這些化合物并不意味著對本發(fā)明的任何限制：

N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-乙酰胺、

N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-乙酰胺、

N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-異丙氧基喹唑啉-6-基)-乙酰胺、

N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)-喹啉-6-基)-乙酰胺、

N-(7-丁氧基-4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-喹唑啉-6-基)-乙酰胺、

N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-丙酰胺、

N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-甲基丙烯酰胺、

N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-甲基丙烯酰胺、

N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-丙烯酰胺、

N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-2-二甲基氨基-乙酰胺、

2-二乙氨基-N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-乙酰胺、

N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-2-吡咯烷-1-基-乙酰胺、

N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)-喹啉-6-基)-2-哌啶-1-基-乙酰胺、

N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-2-嗎啉-4-基-乙酰胺、

N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)-喹啉-6-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)-乙酰胺、

5-二甲氨基戊-3-烯酸(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-酰胺的合成、

5-二甲氨基戊-3-烯酸(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-酰胺、

5-吡咯烷-1-基-戊-3-烯酸(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)-喹唑啉-6-基)-酰胺、

5-哌啶-1-基-戊-3-烯酸(7-丁氧基-4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-喹唑啉-6-基)-酰胺、

5-嗎啉-4-基-戊-3-烯酸(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-異丙氧基喹唑啉-6-基)-酰胺、

5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-戊-3-烯酸(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-酰胺、

N-(4-(6-溴-2,3,4-二氫-(1,8)萘啶-1-基)-7-(哌啶-4-基甲氧基)-喹啉-6-基)-2-(4-甲磺?；?哌嗪-1-基)-乙酰胺、

環(huán)戊烷甲酸(4-(2-甲基-5,6,7-二氫-吡啶并(2,3-d)嘧啶-8-基)-7-三氟甲基-喹啉-6-基)-酰胺、

N-(4-(5-乙氧基-2,3,4-二氫-(1,7)萘啶-1-基)-7-丙氧基-喹唑啉-6-基)-2,2,2-三氟乙酰胺、

4-二甲基氨基-丁-2-烯酸(4-(5-溴-2,3-二氫-吡咯并(2,3-b)吡啶-1-基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)-喹啉-6-基)-酰胺。

下面的合成路線描述了本發(fā)明通式I的喹唑啉類化合物的制備，所有的原料都是通過合成路線中描述的方式、通過有機化學領域普通技術(shù)人員熟知的方法制備的或者可商購。本發(fā)明的全部最終的喹唑啉類化合物都是通過合成路線中描述的方法或通過與其類似的方法制備的，這些方法是有機化學領域普通技術(shù)人員熟知的。合成路線中應用的全部可變因數(shù)如下文的定義或如權(quán)利要求中的定義。

以N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-乙酰胺為例，合成方法如下所示，所有原料均為市售分析純。

以N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-2-嗎啉-4-基-乙酰胺為例，合成方法如下所示，所有原料均為市售分析純。

以4-二甲基氨基-丁-2-烯酸(4-(5-溴-2,3-二氫-吡咯并(2,3-b)吡啶-1-基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)-喹啉-6-基)-酰胺為例，合成方法如下所示，所有原料均為市售分析純。

本發(fā)明首先合成中間體VII，再經(jīng)與不同取代的小分子酰氯對接或其他方式得到目標化合物。

按照本發(fā)明所屬領域的一些通常方法，本發(fā)明中上述通式I的喹唑啉類化合物可以與酸生成藥學上可接受的鹽?？伤幱眉映甥}包括無機酸和有機酸加成鹽，與下列酸加成的鹽是特別優(yōu)選的：鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、三氟乙酸、馬來酸、檸檬酸、富馬酸、草酸、酒石酸、苯甲酸等。

此外，本發(fā)明還包括本發(fā)明衍生物的前藥。本發(fā)明衍生物的前藥是上述通式I的衍生物，它們自身可能具有較弱的活性甚至沒有活性，但是在給藥后，在生理條件下(例如通過代謝、溶劑分解或另外的方式)被轉(zhuǎn)化成相應的生物活性形式。

本發(fā)明可以含有上述通式I的喹唑啉類化合物，及其藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑化物作為活性成份，與藥學上可接受的載體或賦型劑混合制備成組合物，并制備成臨床上可接受的劑型，上述藥學上可接受的賦型劑是指任何可用于藥學領域的稀釋劑、輔助劑和/或載體。本發(fā)明的衍生物可以與其他活性成份組合使用，只要它們不產(chǎn)生其他不利的作用，例如過敏反應。

本發(fā)明上述通式I的喹唑啉類化合物用于患者的臨床劑量可以根據(jù)：活性成分在體內(nèi)的治療功效和生物利用度、它們的代謝和排泄速率和患者的年齡、性別、疾病期來進行適當調(diào)整，不過成人的每日劑量一般應當為10～500mg，優(yōu)選為50～300mg。因此，當本發(fā)明的藥物組合物被制成單位劑型時，考慮到上述有效劑量，每單位制劑應當含有10～500mg上述通式I的喹唑啉類化合物，優(yōu)選為50～300mg。按照醫(yī)生或藥師的指導，這些制劑可以以一定間隔分若干次給藥(優(yōu)選為一至六次)。

本發(fā)明的藥用組合物可配制成若干種劑型，其中含有藥物領域中一些常用的賦形劑。如上所述的若干種劑型可以采用注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑、軟膏劑等劑型藥物。

用于本發(fā)明藥物組合物的載體是藥物領域中可得到的常見類型，包括：粘合劑、潤滑劑、崩解劑、助溶劑、稀釋劑、穩(wěn)定劑、懸浮劑、無色素、矯味劑、防腐劑、加溶劑和基質(zhì)等。藥物制劑可以經(jīng)口服或胃腸外方式(例如靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)或局部)給藥，如果某些藥物在胃部條件下不穩(wěn)定的，可將其配制成腸衣片劑。

本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)上述含二氫吲哚啉及類似結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物在制備治療和/或預防增生性疾病藥物中的應用。本發(fā)明的活性化合物或其可藥用鹽及其溶劑化物可作為唯一的抗增生性藥物單獨使用，或者可以與現(xiàn)已上市的抗增生性藥物聯(lián)合使用，用于治療和/或預防增生性疾病，如牛皮癬、良性前列腺肥大、動脈粥樣硬化和再狹窄。

本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)上述含二氫吲哚啉及類似結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物在制備治療和/或預防癌癥的藥物中的應用。本發(fā)明化合物體外具有抑制腫瘤細胞生長活性，因此，它可以用作制備治療和/或預防癌癥的藥物，如乳腺、肺、肝臟、腎臟、結(jié)腸、直腸、胃、前列腺、膀胱、子宮、胰腺、骨髓、睪丸、卵巢、淋巴、軟組織、頭頸、甲狀腺、食道的癌和白血病、成神經(jīng)細胞瘤等。

本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)上述含二氫吲哚啉及類似結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物在制備治療和/或預防前列腺癌、肺癌和宮頸癌、乳腺癌的藥物中的應用。

通過體外抑制肺癌細胞A549、人前列腺癌細胞PC-3、人乳腺癌細胞MCF-7和宮頸癌細胞Hela活性試驗，本發(fā)明化合物對肺癌細胞、前列腺癌細胞、乳腺癌細胞以及宮頸癌細胞具有顯著抑制作用，特別用于制備治療和/或預防前列腺癌、肺癌和宮頸癌的藥物。

通過對EGFR和VEGFR2/KDR激酶活性測試發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明化合物具有顯著的抑制EGFR和VEGFR2/KDR激酶活性，對EGFR高表達的肺癌細胞、人前列腺癌細胞、乳腺癌細胞以及宮頸癌細胞等有較強的抑制作用，特別用于制備治療和/或預防肺癌的藥物。

本發(fā)明的活性化合物或其可藥用鹽及其溶劑化物可作為唯一的抗腫瘤藥物單獨使用，或者可以與現(xiàn)已上市的抗腫瘤藥物(如鉑類藥物順鉑、喜樹堿類藥物伊立替康、長春花堿類藥物諾維本、脫氧胞昔類藥物吉西他濱、足葉乙甙、紫杉醇等)聯(lián)合使用。聯(lián)合治療通過將各個治療組分同時、順序或隔開給藥來實現(xiàn)。

本發(fā)明經(jīng)體外對多種EGFR抑制劑高表達細胞株進行抗腫瘤活性篩選，結(jié)果表明具有較強的抗腫瘤活性和選擇性，許多化合物還進行了EGFR和VEGFR2/KDR激酶的體內(nèi)活性測試。實驗表明某些化合物具有高效的抗腫瘤活性。

具體實施方式

為了更好地解釋本發(fā)明，以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明，但它們不對本發(fā)明構(gòu)成限定。

實施例旨在闡述而不是限制本發(fā)明的范圍。衍生物的核磁共振氫譜用Bruker ARX-400測定，質(zhì)譜用Agilent 1100 LC/MSD測定；所用試劑均為分析純或化學純。

通式I的含二氫吲哚啉及類似結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物：

本發(fā)明實施例1～25的結(jié)構(gòu)式如下表1所示。

表1實施例1～25的結(jié)構(gòu)式

步驟A 7-氟喹唑啉-4-酮(II)的合成

依次向裝有300mL無水乙醇的三頸瓶中加入50.0g的4-氟-2-氨基苯甲酸和67.0g醋酸甲脒，混合物加熱回流反應24h。反應完畢，減壓蒸干大部分溶劑，將反應液倒入1000mL氯化鈉水溶液中攪拌30min，抽濾，濾餅用60％的乙醇水溶液洗滌，干燥，得51.0g白色固體，即7-氟喹唑啉-4-酮(II)，收率：96.4％。

mp 260.1-261.0，¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.35(s,1H),8.17(d,J＝6.8Hz,1H),8.14(d,J＝7.2Hz,1H),7.43(d,J＝9.8Hz,1H),7.37(t,J＝8.8Hz,1H).

步驟B 7-氟-6-硝基喹唑啉-4-酮(III)的合成

將50.0g的7-氟喹唑啉-4-酮在冰浴下緩慢加入到103mL濃硫酸和105mL發(fā)煙硝酸配成的混酸中，室溫攪拌1h后加熱至110℃反應3h。反應完畢，冷卻至室溫，將反應液倒入1000mL冰水混合物中強烈攪拌，抽濾，濾餅用500mL的水洗滌，干燥后的濾餅用300mL的乙醇加熱回流30min，趁熱抽濾，干燥，得淡黃色固體48.5g，即7-氟-6-硝基喹唑啉-4-酮(III)，收率：76.1％。

mp 277.3-278.5，ESI-MS[M-H]m/z:208，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.77(s,1H),8.68(dd,J＝8.2,2.7Hz,1H),8.28(s,1H),7.73(dd,J＝12.2,2.8Hz,1H).

步驟C 7-氟-6-硝基-4-氯喹唑啉(IV)的合成

將48.0g的7-氟-6-硝基喹唑啉-4-酮加入到407.0mL氯化亞砜和75.0mL三氯氧磷混合液中，向混合液滴加2.4mL的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，80℃加熱回流3h，反應液變黃色澄清后再110℃加熱回流6h。反應完畢，減壓蒸干多余溶劑，用甲苯帶走少量的溶劑，固體粉末緩慢倒入冰的碳酸氫鈉水溶液中攪拌1h，抽濾，水洗，干燥，得50.7g黃色固體，即7-氟-6-硝基-4-氯喹唑啉，收率：97.0％。

mp 118.2-119.3℃，ESI-MS[M+H]m/z:228.5,¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.66(dd,J＝8.2,1.2Hz,1H),8.41(s,1H),7.75(d,J＝12.2Hz,1H).

步驟D 4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-氟-6-硝基-喹唑啉(V)的合成

依次向400mL的異丙醇中加入50.0g的7-氟-6-硝基-4-氯喹唑啉、38.4g的2,3-二氫吲哚，向反應液中滴加32.6mL三乙胺，常溫攪拌1.5h。反應完畢，抽濾，濾餅用異丙醇和水洗滌，干燥，濾液加大量水攪拌析出固體，抽濾，水洗，干燥，合并，得60.0g深黃色固體，即4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-氟-6-硝基-喹唑啉(V)，收率：88.6％。

mp 261.4-262.5，ESI-MS[M+H]m/z:313.0,¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.02(d,J＝8.1Hz,1H),8.74(s,1H),7.90(d,J＝8.1Hz,1H),7.85(d,J＝12.5Hz,1H),7.36(d,J＝7.3Hz,1H),7.20(t,J＝7.8Hz,1H),7.08(t,J＝7.4Hz,1H),4.59(t,J＝7.8Hz,2H),3.21(t,J＝7.7Hz,2H).

步驟E 4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基-6-硝基-喹唑啉(VI₁)的合成

將11.37g的4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-氟-6-硝基-喹唑啉加入到227mL甲醇和15mL的50％氫氧化鈉水溶液中，加熱回流1.5h，反應完畢后冷卻至室溫，倒入200mL冰水中強烈攪拌30min，抽濾，水洗，干燥，得11.2g黃色固體，即4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基-6-硝基-喹唑啉，收率：94.9％。

m.p.292.3-293.0℃.ESI-MS m/z:[M+H]323.0，¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.50(s,1H),7.27(d,J＝7.1Hz,1H),7.17(s,1H),7.03(d,J＝7.4Hz,1H),7.00(s,1H),6.87(s,2H),4.23(t,J＝7.6Hz,2H),3.98(s,3H),3.15(d,J＝8.1Hz,2H).

步驟F 4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基胺(VII₁)的合成

將21.4g的4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基-6-硝基-喹唑啉加入到700mL乙醇中，加熱至60℃時加入15.0g活性炭、4.2g三氯化鐵，升至80℃時緩慢滴加24.5mL的80％水合肼，繼續(xù)加熱回流1.5h。反應完畢，趁熱抽濾，濾渣用乙酸乙酯沖洗，減壓旋蒸濾液，旋至10％溶劑時加入500mL水，強烈攪拌，抽濾，干燥，得17.3g灰白色固體，即4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基胺，收率：87.3％。

mp 139.3-140.1，[M+H]m/z:293.0,¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.41(s,1H),8.38(s,1H),8.17(t,J＝12.6Hz,1H),7.88–7.73(m,1H),7.38(dd,J＝17.2,8.2Hz,2H),7.05(s,1H),5.41(s,2H),5.20(s,1H),4.00–3.87(m,3H),3.77(dd,J＝12.6,7.8Hz,1H),2.29(td,J＝14.2,7.2Hz,1H),2.19–2.06(m,1H).

步驟G N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-乙酰胺的合成

0.1g的4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基胺和6滴N,N-二異丙基乙胺加入到8.0mL的1,4-二氧六環(huán)中，再加入6滴乙酰氯，室溫攪拌1小時，反應完成后，抽濾，干燥，得到白色固體0.081g，即N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-乙酰胺，收率：70.8％。

實施例1

N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-乙酰胺

先按照步驟A～C合成7-氟-6-硝基-4-氯喹唑啉(IV)，再由中間體IV通過步驟D合成4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-氟-6-硝基-喹唑啉(V)，再通過步驟E合成4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基-6-硝基-喹唑啉(VI₁)；

通過步驟F合成4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基胺(VII₁)，最后通過步驟G得到N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-乙酰胺。

mp 229.8-231.0，[M+H]m/z:335.3，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.21(s,1H),9.86(s,1H),9.13(s,1H),9.00(s,1H),8.51(s,1H),8.09(d,J＝6.3Hz,1H),8.03(s,1H),7.85–7.75(m,3H),7.42(s,1H),7.33(s,1H),7.28(t,J＝8.5Hz,2H),5.45(s,1H),4.04(s,2H),3.95(s,1H),3.87(d,J＝4.9Hz,1H),2.42(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H),2.19–2.10(m,1H).

按照實施例1的方法，分別以不同取代基的中間體VII₂、VII₃、VII₄和VII₅與乙酰氯反應制得實施例2～5化合物。

實施例2 N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-乙酰胺

mp 239.8-241.0，[M+H]m/z:349.1 ¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.61(s,1H),9.18(s,1H),8.85(s,1H),8.06(d,J＝7.7Hz,1H),7.42(d,J＝7.2Hz,2H),7.29(t,J＝7.6Hz,1H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),4.67(t,J＝7.3Hz,2H),4.40–4.32(m,2H),3.27(s,2H),2.20(s,3H),1.51(t,J＝6.7Hz,3H).

實施例3 N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-異丙氧基喹唑啉-6-基)-乙酰胺

mp 235.8-237.0，[M+H]m/z:363.4 ¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.48(s,1H),9.18(s,1H),8.85(s,1H),8.08(d,J＝8.2Hz,1H),7.57(s,1H),7.42(d,J＝7.1Hz,1H),7.30(t,J＝7.4Hz,1H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),4.92–4.84(m,1H),4.67(t,J＝7.0Hz,2H),3.59(s,2H),3.27(s,2H),2.21(s,3H),1.47(s,3H),1.46(s,3H).

實施例4 N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)-喹啉-6-基)-乙酰胺

mp 299.8-301.0，[M+H]m/z:391.0 ¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.25(s,1H),8.89(s,1H),8.60(s,1H),7.38(d,J＝7.8Hz,1H),7.33–7.26(m,2H),7.10(s,1H),6.96(d,J＝7.5Hz,1H),5.32(s,1H),4.37(s,2H),4.04(s,2H),3.95(d,J＝7.5Hz,1H),3.80(s,1H),3.19(d,J＝7.0Hz,2H),2.35(s,1H),2.21(s,1H),2.16(s,3H).

實施例5 N-(7-丁氧基-4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-喹唑啉-6-基)-乙酰胺

mp 260-262.0，[M+H]m/z:377.5，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.56(s,1H),9.13(s,1H),8.85(s,1H),8.05(d,J＝7.9Hz,1H),7.43(s,1H),7.41(s,1H),7.29(t,J＝7.7Hz,1H),7.20(t,J＝7.3Hz,1H),4.67(t,J＝7.4Hz,2H),4.29(t,J＝6.5Hz,2H),3.26(d,J＝7.0Hz,2H),2.19(s,3H),1.92–1.85(m,2H),1.52(dd,J＝15.0,7.6Hz,2H),0.98(t,J＝7.4Hz,3H).

實施例6 N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-丙酰胺

將0.1g的4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基胺(VII₁)和6滴N,N-二異丙基乙胺加入到8.0mL的1,4-二氧六環(huán)中，再加入6滴丙酰氯，室溫攪拌1小時，反應完成后，抽濾，干燥，得到白色固體0.081g，即N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-丙酰胺，收率：70.8％。

mp 179.8-181.0，[M+H]m/z:349.4，

實施例7 N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-甲基丙烯酰胺

將0.1g的4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基胺(VII₁)和6滴N,N-二異丙基乙胺加入到8.0mL的1,4-二氧六環(huán)中，再加入6滴甲基丙烯酰氯，室溫攪拌1小時，反應完成后，抽濾，干燥，得到白色固體0.085g，即N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-甲基丙烯酰胺，收率：68.9％。

mp 200.1-204.0，[M+H]m/z:361.1，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.27(s,1H),8.81(s,1H),8.66(s,1H),7.49(d,J＝7.9Hz,1H),7.37(s,1H),7.32(d,J＝6.9Hz,1H),7.13(t,J＝7.7Hz,1H),6.99(t,J＝7.4Hz,1H),4.42(t,J＝7.8Hz,2H),3.21(s,2H),2.21–2.13(m,1H),1.96(d,J＝19.7Hz,1H),1.63(s,3H),1.61(s,3H).

實施例8 N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-甲基丙烯酰胺

按照實施例7的方法，以中間體VII₂與甲基丙烯酰氯反應制得實施例8化合物。

mp 305.4-307.0，[M+H]m/z:417.5，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.32(s,1H),8.85(s,1H),8.70(s,1H),7.61(d,J＝7.6Hz,1H),7.36(s,1H),7.33(s,1H),7.17(t,J＝7.5Hz,1H),7.04(t,J＝7.3Hz,1H),4.48(t,J＝8.0Hz,2H),4.37–4.31(m,2H),3.23(s,2H),2.18(dd,J＝17.9,13.0Hz,1H),1.98(dd,J＝18.2,11.9Hz,1H),1.64(s,3H),1.61(s,3H).

實施例9 N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-丙烯酰胺

將0.1g的4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基胺(VII₁)和6滴N,N-二異丙基乙胺加入到8.0mL的1,4-二氧六環(huán)中，再加入6滴丙烯酰氯，室溫攪拌1小時，反應完成后，抽濾，干燥，得到白色固體0.083g，即，N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-丙烯酰胺的合成，收率：70.0％。

mp 237.0-238.0，[M+H]m/z:347.1，

實施例10 N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-2-二甲基氨基-乙酰胺

將0.1g的4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基胺(VII₁)和0.2克碳酸氫鈉加入到8.0mL的1,4-二氧六環(huán)中，再加入6滴氯乙酰氯，室溫攪拌1小時，反應完成后，抽濾，干燥，得到白色固體0.09g。產(chǎn)品烘干后，加入到8.0mL的1,4-二氧六環(huán)中，在滴加10滴二甲胺水溶液，80℃下反應2小時，反應完成后，加入到30mL水中。有固體析出，抽濾，干燥，得到白色固體0.081g，即N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-2-二甲基氨基-乙酰胺，收率：56.4％。

mp 283.8-285.0，[M+H]m/z:478.5

按照實施例10的方法，先用中間體VII₁、VII₂和VII₅與氯乙酰氯反應，再分別于不同的小分子胺反應制得實施例11～15化合物。

實施例11 2-二乙氨基-N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-乙酰胺

mp 305.5-307.0，[M+H]m/z:406.5，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.27(s,1H),9.07(s,1H),8.60(s,1H),7.39–7.32(m,2H),7.30(d,J＝7.5Hz,1H),7.10(t,J＝7.7Hz,1H),6.94(t,J＝7.3Hz,1H),4.36(dt,J＝13.6,7.3Hz,4H),3.19(d,J＝12.1Hz,4H),2.60(dd,J＝13.9,6.7Hz,4H),1.48(t,J＝6.7Hz,3H),1.06(t,J＝6.9Hz,6H).

實施例12 N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-2-吡咯烷-1-基-乙酰胺

mp 323.5-325.0，[M+H]m/z:404.5

實施例13 N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)-喹啉-6-基)-2-哌啶-1-基-乙酰胺

mp 301.8-303.0，[M+H]m/z:474.3

實施例14 N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-2-嗎啉-4-基-乙酰胺

mp 319.3-321.0，[M+H]m/z:476.4，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.04(s,1H),9.02(s,1H),8.63(s,1H),7.37(d,J＝8.3Hz,2H),7.31(d,J＝6.7Hz,1H),7.10(s,1H),6.95(s,1H),4.39(s,2H),4.11(s,3H),3.69(s,4H),3.19(s,4H),2.57(s,4H).

實施例15 N-(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)-喹啉-6-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)-乙酰胺

mp 339.6-341.0，[M+H]m/z:489.5

實施例16 4-二甲基氨基-丁-2-烯酸(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基-喹唑啉-6-基)-酰胺的合成

將0.1g的4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基胺(VII₁)和0.15克的二乙基磷乙酸縮合，得到白色固體0.09g。再與0.2克的(二甲氨基)乙醛縮二乙醇縮合，得到白色固體0.081g，即4-二甲基氨基-丁-2-烯酸(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基-喹唑啉-6-基)-酰胺，收率：58.7％。

mp 310.0-312.0，[M+H]m/z:404.5，¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.29(s,1H),8.67(s,1H),8.13(s,1H),7.65(d,J＝8.0Hz,1H),7.29(s,1H),7.19(t,J＝7.5Hz,1H),7.00(d,J＝7.0Hz,1H),6.98–6.93(m,1H),6.30(d,J＝15.3Hz,1H),4.55(t,J＝8.0Hz,2H),4.07(s,3H),3.28(d,J＝5.8Hz,2H),3.23(t,J＝7.9Hz,2H),2.41(s,6H),1.25(s,1H).

按照實施例16的方法，分別以不同取代基的中間體VII₂、VII₃、VII₄、VII₅和VII₁與二乙基磷乙酸縮合，再與不同的(氨基)乙醛縮二乙醇縮合反應制得實施例17～21化合物。

實施例17 4-二甲基氨基-丁-2-烯酸(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-乙氧基-喹啉-6-基)-酰胺

mp 342.9-345.0，[M+H]m/z:446.1

實施例18 4-吡咯烷-1-基-丁-2-烯酸(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)-喹唑啉-6-基)-酰胺

mp 329.8-331.0，[M+H]m/z:483.5

實施例19 4-哌啶-1-基-丁-2-烯酸(7-丁氧基-4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-喹唑啉-6-基)-酰胺

mp 292.1-294.0，[M+H]m/z:486.4

實施例20 4-嗎啉-4-基-丁-2-烯酸(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基-7-異丙氧基喹唑啉-6-基)-酰胺

mp 282.6-284.0，[M+H]m/z:474.5

實施例21 4-(4-甲基哌嗪-1-基)-丁-2-烯酸(4-(2,3-二氫-吲哚-1-基)-7-甲氧基-喹啉-6-基)-酰胺

mp 296.9-299.0，[M+H]m/z:459.9

實施例22 N-(4-(6-溴-2,3,4-二氫-(1,8)萘啶-1-基)-7-(哌啶-4-基甲氧基)-喹啉-6-基)-2-(4-甲磺?；?哌嗪-1-基)-乙酰胺

中間體IV與6-溴-2,3,4-二氫-(1,8)二氮雜萘反應得到Ⅴ_a，再與哌啶-4-基-甲醇反應，得到深黃色固體Ⅵ_a。將中間體Ⅵ_a用活性炭，三氯化鐵和水合肼還原，得灰白色固體Ⅶ_a。再將Ⅶ_a與氯乙酰氯縮合，得到化合物Ⅷ_a，在與1-甲基磺?；?哌嗪縮合，得到目標化合物。收率：48.6％。

mp 375.0-377.0，[M+H]m/z:673.7。

實施例23 環(huán)戊烷甲酸(4-(2-甲基-5,6,7-二氫-吡啶并(2,3-d)嘧啶-8-基)-7-三氟甲基-喹啉-6-基)-酰胺

中間體IV與2-甲基-5,6,7-二氫-吡啶并(2,3-d)嘧啶反應得到Ⅴ_b，再與三氟甲醇反應，得到深黃色固體Ⅵ_b。將中間體Ⅵ_b用活性炭，三氯化鐵和水合肼還原，得灰白色固體Ⅶ_b。再將Ⅶ_b與環(huán)戊烷碳酰氯縮合，得到目標化合物。收率：48.7％。

mp 303.0-305.0，[M+H]m/z:473.5。

實施例24 N-(4-(5-乙氧基-2,3,4-二氫-(1,7)萘啶-1-基)-7-丙氧基-喹唑啉-6-基)-2,2,2-三氟乙酰胺

中間體IV與5-甲氧基-2,3,4-二氫-(1,7)二氮雜萘反應得到Ⅴ_c，再與正丙醇反應，得到深黃色固體Ⅵ_c。將中間體Ⅵ_c用活性炭，三氯化鐵和水合肼還原，得灰白色固體Ⅶ_c。再將Ⅶ_c與三氟乙酰氯縮合得到目標化合物。收率：51.7％。

mp 280.0-282.3，[M+H]m/z:476.5。

實施例25 4-二甲基氨基-丁-2-烯酸(4-(5-溴-2,3-二氫-吡咯并(2,3-b)吡啶-1-基)-7-((四氫呋喃-3-基)氧基)-喹啉-6-基)-酰胺

中間體IV與5-溴-2,3-二氫-1H-吡咯并(2,3-b)吡啶反應得到Ⅴ_d，再與(S)-3-羥基四氫呋喃反應，得到深黃色固體Ⅵ_d。將中間體Ⅵ_d用活性炭，三氯化鐵和水合肼還原，得灰白色固體Ⅶ_d。再將Ⅶ_d與二乙基磷乙酸縮合，得到化合物Ⅷ_d，在與(二甲氨基)乙醛縮二乙醇縮合，得到目標化合物。收率：48.7％。

mp 309.0-311.0，[M+H]m/z:539.4。

本發(fā)明產(chǎn)物的藥理研究

體外細胞毒活性

對本發(fā)明通式I的含二氫吲哚啉及類似結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物進行了體外抑制肺癌細胞A549、前列腺癌PC-3、乳腺癌細胞MCF-7、宮頸癌細胞Hela活性篩選，對照品阿法替尼按照專利文獻(WO2007085638A1)所述方法制備得到。

1)細胞復蘇并傳代2～3次穩(wěn)定后，用胰蛋白酶溶液(0.25％)使其從培養(yǎng)瓶底部消化下來。將細胞消化液倒入離心管中后，之后加入培養(yǎng)液以終止消化。將離心管在800r/min下離心10min，棄去上清液后加入5mL培養(yǎng)液，吹打混勻細胞，吸取10μL細胞混懸液加入細胞計數(shù)板中計數(shù)，調(diào)整細胞濃度為10⁴個/孔。96孔板中除A1孔為空白孔不加細胞外，其余皆加入100μL細胞混懸液。將96孔板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。

2)用50μL二甲基亞砜溶解受試樣品，然后加入適量培養(yǎng)液，使樣品溶解成2mg/mL藥液，然后在24孔板中將樣品稀釋為20、4、0.8、0.16、0.032μg/mL。

每個濃度加入3孔，其中周圍兩行兩列細胞長勢受環(huán)境影響較大，只和為空白細胞孔使用。將96孔板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。

3)將96孔板中帶藥培養(yǎng)液棄去，用磷酸緩沖溶液(PBS)將細胞沖洗兩遍，在每孔中加入MTT(四氮唑)(0.5mg/mL)100μL放入培養(yǎng)箱中4h后，棄去MTT溶液，加入二甲基亞砜100μL。在磁力振蕩器上振蕩使存活細胞與MTT反應產(chǎn)物甲臜充分溶解，放入酶標儀中測定結(jié)果。通過Bliss法可求出藥物IC₅₀值。

化合物的乳腺癌細胞MCF-7、肺癌細胞A549、前列腺癌PC-3活性結(jié)果見表2。

EGFR、VEGFR酶活性實驗

以阿法替尼為陽性對照，利用HTRF技術(shù)，測試新合成化合物對EGFR或VEGFR激酶的抑制作用，并測試部分化合物對EGFR或VEGFR激酶抑制作用的IC₅₀值。

具體方法：配制所需濃度的ATP、TK Substrate-biotin(TK-底物生物素)、Kinase buffer(激酶緩沖液)的工作液，ATP、TK Substrate-biotin、Kinase buffer按體積比例2:2:2取液混勻；用Kinase buffer稀釋藥物配制為所需濃度；配制EGFR、VEGFR酶工作液。在白色384孔板中，每孔加入6μL混勻液，2μL藥物，2μL激酶，混勻，置于37℃下反應30min。然后加入5μL鏈激酶素標記的XL-665及5μL結(jié)合了Eu3+的穴狀化合物抗體，混勻。室溫放置30min后于酶標儀314nm激發(fā)，檢測665、620nm波長處的熒光，計算激酶抑制率。

抑制率(％)＝(Ratio665/620對照孔－Ratio665/620給藥孔)/Ratio665/620對照孔×100％

實驗結(jié)果如表2所示。表2中IC₅₀>＝80％，以“+++”表示，80％>IC₅₀>＝60％，以“++”表示，60％>IC₅₀>＝40％，以“+”表示，IC₅₀<＝40％，以“-”表示，“NA”表示無活性，“ND”表示未測試。

表2目標化合物酶活性和體外抗腫瘤活性

從上述試驗結(jié)果可以清楚地看出，本發(fā)明所要保護的通式I的含二氫吲哚啉及類似結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物，具有良好的體外抗腫瘤活性。

本發(fā)明中通式I的含二氫吲哚啉及類似結(jié)構(gòu)的喹唑啉類化合物可單獨施用，但通常是和藥用載體混合物給予，所述藥用載體的選擇要根據(jù)所需用藥途徑和標準藥物實踐，下面分別用該類化合物的各種藥物劑型，例如片劑、膠囊劑、注射劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑和軟膏劑的制備方法，說明其在制藥領域中的新應用。

應用例1：片劑

以實施例2化合物5g，按照藥劑學一般壓片法加輔料10g混勻后，壓制成100片，每片重150mg。

應用例2：膠囊劑

以實施例8化合物10g，按照藥劑學膠囊劑的要求將輔料20g混勻后，裝入空心膠囊，每個膠囊重150mg。

應用例3：注射劑

以實施例9化合物10g，按照藥劑學常規(guī)方法，進行活性炭吸附，經(jīng)0.65μm微孔濾膜過濾后，填入氮氣罐制成水針制劑，每只裝2mL，共灌裝100瓶。

應用例4：氣霧劑

以實施例12化合物10g，用適量丙二醇溶解后，加入蒸餾水及其他輻料后，制成500mL的澄清溶液即得。

應用例5：栓劑

以實施例15化合物10g，將之研細加入甘油適量，研勻后加入已熔化的甘油明膠，研磨均勻，傾入已涂潤滑劑的模型中，制得栓劑50顆

應用例6：膜劑

以實施例17化合物5g，將聚乙烯醇、藥用甘油、水等攪拌膨脹后加熱溶解，80目篩網(wǎng)過濾，再將實施例12化合物加入到濾液中攪拌溶解，涂膜機制膜50片。

應用例7：滴丸劑

以實施例18化合物15g，與明膠等基質(zhì)50g加熱熔化混勻后，滴入低溫液體石蠟中，共制得滴丸1000丸。

應用例8：外用搽劑

以實施例20化合物10g，按照常規(guī)藥劑學方法與乳化劑等輔料2.5g混合研磨，再加蒸餾水至200mL制得。

應用例9：軟膏劑

以實施例24化合物5g，研細后與凡士林等油性基質(zhì)250g研勻制得。

盡管已經(jīng)通過特定實施方案描述了本發(fā)明，但修改和等價變化對于精通此領域的技術(shù)人員而言是顯見的，且它們都包含在本發(fā)明范圍之內(nèi)。