1.一種采用新型雙熒光標記方法的21個短串聯(lián)重復序列復合擴增檢測試劑盒,其特征在于,包括:
21對特異性引物的復合引物組、復合擴增21個基因座、反應混合液以及熱啟動Taq酶;
所述復合擴增21個基因座包括Amelogenin,D3S1358,vWA,D7S820,CSF1PO,D8S1179,D21S11,D16S539,TH01,D13S317,TPOX,D18S51,D5S818,F(xiàn)GA,D2S1338,D19S433,D1S1656,D12S391,Penta D,Penta E和D6S1043;
所述反應混合液的組成為:MgCl2 5mM、Tris-HCl 125mM pH8.3 25℃,KCl 125mM,dNTPs 0.5mM,BSA 1.5g/L;所述dNTPs為dATP、dTTP、dCTP、dGTP的等摩爾混合物;
所述21對特異性引物的復合引物組的21個基因座的引物對的序列包括SEQ ID NO.01-SEQ ID NO.42;
所述21對特異性引物的復合引物組的各STR基因座采用分別位于該基因座核心重復區(qū)兩側(cè)的一對引物擴增,其中每對引物中至少有一條引物采用新型雙熒光染料標記方法進行標記;
所述21對特異性引物的復合引物組的21個基因座的引物對分為四組采用新型雙熒光染料標記方法進行標記;所述四組包括第一組:D3S1358,vWA,D7S820,CSF1PO,PentaE;SEQ ID NO.01-SEQ ID NO.10;第二組:D8S1179,D21S11,D16S539,D2S1338,Penta D;SEQ ID NO.11-SEQ ID NO.20;第三組:D19S433,TH01,D13S317,TPOX,D18S51,D6S1043;SEQ ID NO.21-SEQ ID NO.32;第四組:Amelogenin,D1S1656,D5S818,D12S391,F(xiàn)GA;SEQ ID NO.33-SEQ ID NO.42。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用新型雙熒光標記方法的21個短串聯(lián)重復序列復合擴增檢測試劑盒,其特征在于:所述新型雙熒光標記方法包括在引物5’端第一個堿基用FAM、HEX、TAMRA、ROX中的一種進行標記;其中,用FAM、TAMRA和ROX標記的引物,引物5’和3’中間一個堿基用FAM進行標記;用HEX標記的引物,引物5’和3’中間一個堿基用HEX進行標記。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用新型雙熒光標記方法的21個短串聯(lián)重復序列復合擴增檢測試劑盒的使用方法,其特征在于,包括以下步驟:將試劑盒內(nèi)試劑與樣品DNA混合、裝入PCR擴增管,置于熱循環(huán)儀上,進行PCR擴增,擴增程序為:95℃3min;94℃5s、60℃1min,26-28個循環(huán);60℃終延伸10min;4-16℃保持;得到擴增產(chǎn)物,將擴增產(chǎn)物在遺傳分析儀上進行熒光檢測,再用片段分析軟件分析基因測序儀上檢測到的數(shù)據(jù);所述樣品DNA包括利用Chelex100法、磁珠提取法或有機抽提法中任意一種方法提取的人基因組DNA(提取檢材的來源包括人的血液、血痕、精液、唾液、體液、毛發(fā)、肌肉或組織器官),或者利用免提取的濾紙、FTA卡、棉簽、紗布中任意一種載體收集的人類血液或口腔細胞。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用新型熒光染料標記方法的21個短串聯(lián)重復序列復合擴增檢測試劑盒,其特征在于:所述試劑盒可應用于中國人群的個體識別、親子鑒定、DNA建庫等方面。