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錦鯉皰疹病毒抗血清制備方法及其應(yīng)用與流程

文檔序號(hào):12342425閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.錦鯉皰疹病毒抗血清,其特征在于,制備方法包括以下過(guò)程:

(1)、免疫動(dòng)物準(zhǔn)備

選健康錦鯉免疫動(dòng)物,未接種過(guò)錦鯉皰癥病毒病疫苗,體重為150~350g,體長(zhǎng)15~25cm;接種前于室溫環(huán)境下養(yǎng)殖不少于一周,定期少量喂食;

接種前,尾靜脈采血,分離血清,作為陰性血清,冷凍保存?zhèn)溆茫?/p>

(2)、免疫接種

取純化的錦鯉皰癥病毒抗原,含量不低于1mg/mL,50℃水浴1min滅活,與等量不完全佐劑混合,背部皮下多點(diǎn)注射,每條魚注射0.2mL;接種后,定期少量喂食,并保持水體環(huán)境;

接種后第14天,尾靜脈采血,分離血清測(cè)效價(jià),每隔2周,采血測(cè)效價(jià),剔除血清效價(jià)無(wú)變化的錦鯉;

第10~12周,當(dāng)血清效價(jià)達(dá)到頂峰時(shí),心臟或尾靜脈大量采血,分離血清,測(cè)效價(jià),分裝冷凍保存。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的錦鯉皰疹病毒抗血清,其特征在于,所述的血清測(cè)效價(jià)的方法,為間接ELISA測(cè)血清效價(jià),包括以下過(guò)程:

用包被液將純化的錦鯉皰癥病毒抗原稀釋至0.5μg/mL,加入酶標(biāo)板,每孔100μL,37℃2h;包被液包括8.4g/L的NaHCO3、3.56g/L的Na2CO3,pH9.5;

每孔加260μL PBST洗板3次,PBST的pH8.0;

用含10%脫脂奶粉PBST分別將抗血清和陰性血清進(jìn)行10倍倍比稀釋,即分別為1:10、1:100、1:200、1:400、1:800、1:1600、1:3200,每種血清每個(gè)稀釋度加2孔,每孔100μL,25℃環(huán)境下1h,洗板3次;

加入稀釋兔抗鯉魚IgM-HRP,每孔100μL,25℃環(huán)境下1h,洗板3次;

每孔加入底物TMB溶液100μL,25℃孵育20min,每孔加入1N硫酸溶液100μL終止反應(yīng),酶標(biāo)儀測(cè)量OD450;相同稀釋度下,當(dāng)抗血清OD450值不低于1.0,陰性血清OD450值不高于0.2,即為血清效價(jià)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的錦鯉皰疹病毒抗血清,其特征在于,所述的純化的錦鯉皰癥病毒抗原,是通過(guò)密度梯度離心法或者沉淀法、分子篩法獲得。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的錦鯉皰疹病毒抗血清的應(yīng)用,其特征在于,獲得的錦鯉皰疹病毒抗血清,用于IFAT、ELISA免疫學(xué)方法檢測(cè)KHV抗原,或作為KHV抗體檢測(cè)方法的陽(yáng)性血清,或用于制備免疫學(xué)檢測(cè)KHV或KHV抗體的商品化試劑盒。

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