本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種三環(huán)苯并嗎啉衍生物及其制備方法。

背景技術(shù)：

光催化氧化反應(yīng)是利用光催化劑在光照作用下催化底物發(fā)生氧化反應(yīng)，這類催化劑自身不發(fā)生反應(yīng)，卻能夠?qū)⒐饽苻D(zhuǎn)換成化學(xué)反應(yīng)所需的能量，產(chǎn)生催化作用，使周圍的氧氣或水分子被激發(fā)形成極具氧化能力的自由基或負(fù)離子。這類反應(yīng)具有條件溫和，能耗低，反應(yīng)速度快且污染小等諸多優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明是通過光催化氧化一步反應(yīng)得到三環(huán)苯并嗎啉類衍生物，制備方法簡單，反應(yīng)條件溫和，能耗低，種類多，收率高，產(chǎn)品純度高，實(shí)用性強(qiáng)。此外，本發(fā)明合成的三環(huán)苯并嗎啉類衍生是一類小分子化合物，相對分子質(zhì)量在500以下，且具有一定的體外抗癌活性，說明本發(fā)明得到的小分子化合物有望用于制備相關(guān)的癌癥治療藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種三環(huán)苯并嗎啉衍生物及其制備方法，所得化合物能夠抑制Hela細(xì)胞以及A549細(xì)胞的生長，具有一定的藥理活性，且制備方法簡單，實(shí)驗(yàn)條件溫和，不要求高溫高壓、強(qiáng)酸強(qiáng)堿等苛刻條件，且反應(yīng)收率高。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種三環(huán)苯并嗎啉衍生物，其特征在于：具有如下結(jié)構(gòu)通式中的一種：

R¹為-COR、-SO₂R，其中R為任意取代的C_1-6烷基，任意取代的芳基或任意取代的雜環(huán)芳烴；R²為任意取代的C_1-6烷基。

三環(huán)苯并嗎啉衍生物的制備方法如下：

將原料色胺衍生物或色醇溶解于醇溶液，加入對甲苯磺酸（TsOH）和光敏劑亞甲蘭，用LED燈照射反應(yīng)1~4h，反應(yīng)經(jīng)光催化氧化得到三環(huán)苯并嗎啉衍生物，反應(yīng)收率一般在60%以上。

所述色胺衍生物的結(jié)構(gòu)具有如下通式：

R¹為-COR、-SO₂R，其中R為任意取代的C_1-6烷基，任意取代的芳基或任意取代的雜環(huán)芳烴。

所得的三環(huán)苯并嗎啉類衍生物對Hela細(xì)胞株以及A549細(xì)胞株有一定的抑制活性，對A549細(xì)胞株的IC₅₀值可達(dá)到50 μmol以下；具有用于制備抗癌藥物的前景。

本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)在于：

（1）本發(fā)明的合成方法簡單，通過常用試劑一步反應(yīng)即可得到目標(biāo)產(chǎn)物，實(shí)驗(yàn)條件溫和，不要求高溫高壓、強(qiáng)酸強(qiáng)堿等苛刻條件，反應(yīng)時間短且收率一般可達(dá)到60%以上，部分化合物的收率可達(dá)到90%以上。

（2）所設(shè)計合成的三環(huán)苯并嗎啉類化合物的分子量較小，一般在500以下，計算脂水分配系數(shù)（cLogP）一般在1左右，且生物實(shí)驗(yàn)證實(shí)該類化合物具有一定得抗癌活性，因此所得的目標(biāo)產(chǎn)物具有用于制備抗癌藥物的前景。

附圖說明

圖1：不同濃度的化合物Ih對肺癌Α549細(xì)胞的細(xì)胞毒性。

圖2：不同濃度的化合物Ii對肺癌Α549細(xì)胞的細(xì)胞毒性。

圖3：不同濃度的化合物Ii對宮頸癌Hela細(xì)胞的細(xì)胞毒性。

具體實(shí)施例

實(shí)施例1

(3aR ,9aS )-3a-methoxy-1-(phenylsulfonyl)-1,2,3,3a,9,9a-hexahydrobenzo[b]pyrrolo[2,3-e ][1,4]oxazine（化合物Ia的制備）

（1）N -(2-(1H -indol-3-yl)ethyl)benzenesulfonamide（中間體FZU-0006-031）的制備：

將1 g的色胺（Tryptamine）溶于15 mL的二氯甲烷中，加入759 mg的三乙胺（Et₃N），冰浴條件下再緩慢滴加1.1 g的甲磺酰氯。撤去冰浴裝置，室溫攪拌反應(yīng)3 h后，向混合液中加入20 mL二氯甲烷稀釋，用蒸餾水萃取3次，收集有機(jī)相；將得到的粗品過硅膠柱分離得到1.8 g中間體IM-Ia，洗脫劑為PE/EtOAc = 2:1，反應(yīng)收率為96%；產(chǎn)物室溫下為淺黃色固體，熔點(diǎn)為78.2-79.6 ^oC；¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.12 (s, 1H), 7.81 – 7.73 (m, 2H), 7.53 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.47 – 7.40 (m, 3H), 7.34 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.19 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 4.65 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.29 (q, J = 6.6 Hz, 2H), 2.92 (t, J = 6.7 Hz, 2H)；¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 139.89, 136.50, 132.66, 129.14, 127.02, 126.99, 122.77, 122.33, 119.61, 118.54, 111.55, 111.48, 43.24, 25.62；

(3aR ,9aS )-3a-methoxy-1-(phenylsulfonyl)-1,2,3,3a,9,9a-hexahydrobenzo[b]pyrrolo[2,3-e ]

[1,4]oxazine（化合物Ia）的制備：

取60 mg中間體IM-Ia溶于20 mL甲醇中，加入34 mg 對甲基苯磺酸（TsOH）和3 mg 美蘭（MB）；用LED燈照射反應(yīng)2 h；反應(yīng)完成后旋干溶劑，用乙酸乙酯和水萃取干燥濃縮后得到粗產(chǎn)物，粗品通過硅膠柱層析分離得到59 mg的目標(biāo)產(chǎn)物Ia，柱層析中的洗脫劑為PE/EtOAc = 2:1, 反應(yīng)收率為86%；產(chǎn)物在室溫下為白色固體，熔點(diǎn)為184.5-185.4 ^oC；¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.78 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.55 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.45 (t, J= 7.7 Hz, 2H), 6.85 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 6.75 – 6.69 (m, 1H), 6.64 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.04 – 4.97 (m, 2H), 3.54 – 3.41 (m, 2H), 3.36 (s, 3H), 2.39 – 2.29 (m, 1H), 1.86 – 1.74 (m, 1H)；¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 140.47, 138.35, 132.99, 129.27, 129.13, 127.33, 122.87, 119.59, 116.96, 115.04, 101.08, 70.51, 51.44, 44.25, 32.07. HRMS (ESI): calcd for C₁₇H₁₈N₂O₄S [M + H]⁺m/z 347.1060, found 347.1081；IR (ATR): 3400.95, 2923.69, 1615.15, 1504.78, 1445.94, 1161.10 cm^-1。

實(shí)施例2

((3aR ,9aS )-3a-methoxy-3,3a,9,9a-tetrahydrobenzo[b ]pyrrolo[2,3-e ][1,4]oxazin-1(2H ) -yl)(phenyl)methanone（化合物Ib）的制備：

（1）中間體FZU-0006-032 (N -(2-(1H -indol-3-yl)ethyl)benzamide)的制備：

色胺（Tryptamine）與苯甲酰氯（benzoyl chloride）按實(shí)施例1中（1）的反應(yīng)條件得到中間體FZU-0006-032 (N -(2-(1H -indol-3-yl)ethyl)benzamide)；

（2）中間體FZU-0006-032按實(shí)施例1中（2）的光催化氧化條件反應(yīng)得到目標(biāo)產(chǎn)物Ib，反應(yīng)收率為65%；Ib在常溫下為黃色固體，熔點(diǎn)為141.5-142.3 ^oC； ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.54 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 7.44 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.42 – 7.35 (m, 2H), 6.92 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.86 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.71 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.65 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 5.42 (s, 2H), 3.88 – 3.78 (m, 1H), 3.56 – 3.48 (m, 1H), 3.46 (s, 3H), 2.49 – 2.39 (m, 1H), 2.11 – 1.99 (m, 1H)；¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 140.18, 135.05, 130.95, 130.29, 128.45, 127.89, 122.93, 118.63, 116.99, 114.45, 101.60, 69.46, 51.37, 47.08, 33.22, 29.80.HRMS (ESI): calcd for C₁₈H₁₈N₂O₃ [M + H]⁺m/z 311.1390, found 311.1385.IR (ATR): 3366.67, 2925.54, 1627.96, 1576.73, 1507.12, 1446.92, 1413.27 cm^-1。

實(shí)施例3

(3aR ,9aS )-3a-methoxy-1-tosyl-1,2,3,3a,9,9a-hexahydrobenzo[b ]pyrrolo[2,3-e ][1,4]oxazine（化合物Ic）的制備：

（1）色胺衍生物(N -(2-(1H -indol-3-yl)ethyl)benzamide)（中間體FZU-0006-032）的制備：

色胺（Tryptamine）與對甲苯磺酰氯（TsCl）按實(shí)施例1中（1）的反應(yīng)條件得到(N -(2-(1H -indol-3-yl)ethyl)-4-methylbenzenesulfonamide)（中間體FZU-0024-008）；

（2）中間體FZU-0024-008按實(shí)施例1中（2）的光催化氧化條件反應(yīng)得到目標(biāo)產(chǎn)物Ic，反應(yīng)收率為93%；Ic在常溫下為白色固體，熔點(diǎn)為181.2-182.7 ℃；¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.67 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.25 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.91 – 6.79 (m, 2H), 6.76 – 6.69 (m, 1H), 6.65 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 5.02 (s, 1H), 4.97 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 3.50 – 3.40 (m, 2H), 3.36 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 2.36 – 2.30 (m, 1H), 1.82 – 1.71 (m, 1H)；¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 143.87, 140.48, 135.12, 129.87, 129.17, 127.41, 122.77, 119.48, 116.89, 115.06, 101.12, 70.41, 51.39, 44.21, 32.02, 21.58；HRMS (ESI): calcd for C₁₈H₂₀N₂O₄S [M + H]⁺m/z 361.1217, found 361.1221；IR (ATR): 3401.00, 2923.59, 1614.99, 1597.87, 1504.93, 1437.89 cm^-1。

實(shí)施例4

1-((3aR ,9aS )-3a-methoxy-3,3a,9,9a-tetrahydrobenzo[b ]pyrrolo[2,3-e ][1,4]oxazin-1(2H ) -yl)ethanone （化合物Id）的制備：

（1）色胺（Tryptamine）與乙酰氯（acetyl chloride）按實(shí)施例1中（1）的反應(yīng)條件得到 (N -(2-(1H -indol-3-yl)ethyl)acetamide)（中間體FZU-0023-002）；

（2）中間體中間體FZU-0023-002按實(shí)施例1中（2）的光催化氧化反應(yīng)得到目標(biāo)產(chǎn)物Id，反應(yīng)收率為65%； Id在常溫下為黃色固體，熔點(diǎn)為146.5-147.2 ^oC；¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.88 – 6.80 (m, 2H), 6.68 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.62 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 5.42 (s, 1H), 5.17 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 3.68 – 3.55 (m, 2H), 3.44 (s, 3H), 2.51 – 2.44 (m, 1H), 2.14 – 2.04 (m, 1H), 2.00 (s, 3H)；¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 171.48, 140.28, 130.19, 122.85, 118.78, 116.78, 114.62, 102.02, 68.84, 51.29, 44.63, 32.73, 22.22；HRMS (ESI)： calcd for C₁₃H₁₆N₂O₃ [M + H]⁺m/z 249.1234, found 249.1229；IR (ATR): 3357.57, 2925.42, 1635.13, 1616.05, 1505.60, 1446.21 cm^-1。

實(shí)施例5

(3aR,9aS)-3a-methoxy-1-(methylsulfonyl)-1,2,3,3a,9,9a-hexahydrobenzo[b]pyrrolo[2,3-e][1,4]oxazine（化合物Ie）的制備：

（1）色胺（Tryptamine）與甲磺酰氯（methanesulfonyl chloride）按實(shí)施例1中（1）的反應(yīng)條件得到(N -(2-(1H -indol-3-yl)ethyl)methanesulfonamide)（中間體FZU-0006-033），

（2）中間體FZU-0006-033按實(shí)施例1中（2）的光催化氧化反應(yīng)得到目標(biāo)產(chǎn)物Ie，反應(yīng)收率為72%；Ie在常溫下為黃色固體，熔點(diǎn)為157.3-158.6 ^oC。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.95 – 6.83 (m, 2H), 6.78 – 6.71 (m, 1H), 6.68 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.13 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.91 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 3.67 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 3.49 – 3.43 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 2.79 (s, 3H), 2.52 – 2.44 (m, 1H), 2.20 – 2.09 (m, 1H)；¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 140.16, 129.14, 123.05, 119.60, 117.35, 114.66, 100.44, 70.63, 51.38, 43.60, 40.29, 31.81；HRMS (ESI): calcd for C₁₂H₁₆N₂O₄S [M + H]⁺m/z 285.0904, found 285.0901；IR (ATR): 3393.15, 2922.46, 1614.96, 1505.43, 1313.20, 1151.36 cm^-1。

實(shí)施例6

(3aR ,9aS )-3a-methoxy-1-(propylsulfonyl)-1,2,3,3a,9,9a-hexahydrobenzo[b]pyrrolo[2,3-e ][1,4]oxazine（化合物If）的制備：

（1）色胺（Tryptamine）與丙磺酰氯（propane-1-sulfonyl chloride）按實(shí)施例1中（1）的反應(yīng)條件得到(N -(2-(1H -indol-3-yl)ethyl)propane-1-sulfonamide)（中間體FZU-0024-002），

（2）中間體FZU-0024-002按實(shí)施例1中（2）的光催化氧化反應(yīng)得到目標(biāo)產(chǎn)物If，反應(yīng)收率為82%； If在常溫下為無色油狀物；¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.92 – 6.83 (m, 2H), 6.77 – 6.71 (m, 1H), 6.66 (dd, J = 7.7, 1.4 Hz, 1H), 5.16 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 4.88 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 3.77 – 3.69 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.41 – 3.35 (m, 1H), 2.92 – 2.80 (m, 2H), 2.50 – 2.41 (m, 1H), 2.20 – 2.09 (m, 1H), 1.70 – 1.57 (m, 2H), 0.82 (t, J = 7.5 Hz, 3H)；¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 140.34, 128.96, 122.91, 119.61, 117.26, 114.71, 100.34, 70.20, 56.14, 51.44, 43.65, 31.84, 16.99, 12.87；HRMS (ESI): calcd for C₁₄H₂₀N₂O₄S [M + H]⁺m/z 313.1217, found 313.1217；IR (ATR): 3388.48, 2964.37, 1615.36, 1505.09, 1311.69, 1126.28 cm^-1。

實(shí)施例7

(3aR ,9aS )-1-(ethylsulfonyl)-3a-methoxy-1,2,3,3a,9,9a-hexahydrobenzo[b ]pyrrolo[2,3-e ][1,4]oxazine（化合物Ig）的制備：

（1）色胺（Tryptamine）與乙磺酰氯（ethanesulfonyl chloride）按實(shí)施例1中（1）的反應(yīng)條件得到(N -(2-(1H -indol-3-yl)ethyl)ethanesulfonamide)（中間體FZU-0024-001），

（2）中間體FZU-0024-001按實(shí)施例1中（2）的光催化氧化反應(yīng)得到目標(biāo)產(chǎn)物Ig，反應(yīng)收率為82%； Ig在常溫下為無色油狀物；¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.92 – 6.83 (m, 2H), 6.76 – 6.70 (m, 1H), 6.65 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.18 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.90 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 3.74 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.41 – 3.35 (m, 1H), 2.98 – 2.87 (m, 2H), 2.50 – 2.43 (m, 1H), 2.20 – 2.10 (m, 1H), 1.15 (t, J = 7.4 Hz, 3H)；¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 140.24, 128.97, 122.94, 119.52, 117.27, 114.66, 100.27, 70.22, 51.43, 48.79, 43.71, 31.86, 7.91；HRMS (ESI): calcd for C₁₃H₁₈N₂O₄S [M + H]⁺m/z 299.1060, found 299.1061.IR (ATR): 3390.02, 2939.57, 1614.84, 1504.80, 1438.26, 1377.00 cm^-1。

實(shí)施例8:

(3aR ,9aS )-3a-ethoxy-1-tosyl-1,2,3,3a,9,9a-hexahydrobenzo[b ]pyrrolo[2,3-e ][1,4]oxazine（化合物Ih）的制備：

將實(shí)施例3的中間體FZU-0024-008在乙醇（EtOH）溶液中按實(shí)施例1中（2）的光催化氧化反應(yīng)得到目標(biāo)產(chǎn)物Ih，反應(yīng)收率為72%； Ih在常溫下為無色油狀物； ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.66 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.25 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 6.88 – 6.78 (m, 2H), 6.71 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.65 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.99 (s, 1H), 4.96 (s, 1H), 3.82 – 3.71 (m, 1H), 3.62 – 3.51 (m, 1H), 3.44 (dd, J = 9.7, 4.0 Hz, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.36 – 2.29 (m, 1H), 1.85 – 1.73 (m, 1H), 1.08 (t, J = 7.1 Hz, 3H)；¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 143.86, 140.76, 135.13, 129.88, 129.19, 127.45, 122.61, 119.48, 116.81, 115.12, 101.03, 70.51, 59.76, 44.26, 32.65, 21.62, 15.43；HRMS (ESI): calcd for C₁₉H₂₂N₂O₄S [M + H]⁺m/z 375.1373, found 375.1377.IR (ATR): 3401.74, 2925.37, 1614.89, 1597.82, 1504.44, 1438.64 cm^-1。

實(shí)施例9：(3aR,9aS)-3a-isopropoxy-1-tosyl-1,2,3,3a,9,9a-hexahydrobenzo[b]pyrrolo[2,3-e][1,4]

oxazine（化合物Ii）的制備：

將實(shí)施例3的中間體FZU-0024-008在異丙醇（2-propanol）溶液中按實(shí)施例1中（2）的光催化氧化條件反應(yīng)得到目標(biāo)產(chǎn)物Ii，反應(yīng)收率為64%；Ii在常溫下為白色固體，熔點(diǎn)為149.7-150.3 ^oC；¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.65 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.24 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 6.86 – 6.77 (m, 2H), 6.74 – 6.68 (m, 1H), 6.64 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.99 (s, 1H), 4.94 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 4.22 – 4.13 (m, 1H), 3.47 – 3.36 (m, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.37 – 2.31 (m, 1H), 1.87 – 1.76 (m, 1H), 1.11 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 1.03 (d, J = 6.2 Hz, 3H)；¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 143.80, 140.83, 135.32, 129.84, 129.05, 127.44, 122.50, 119.47, 116.87, 115.12, 100.86, 70.75, 67.87, 44.19, 32.96, 24.12, 23.93, 21.61；HRMS (ESI): calcd for C₂₀H₂₄N₂O₄S [M + H]⁺m/z 389.1530, found 389.1530；IR (ATR):3401.51, 2973.49, 2925.55, 1615.32, 1598.10, 1505.30 cm^-1。

實(shí)施例10：

(3aR ,9aS)-3a-methoxy-3,3a,9,9a-tetrahydro-2H -benzo[b ]furo[2,3-e ][1,4]oxazine （化合物Ij）的制備：

取32 mg色醇（Tryptophol）溶于20 mL甲醇（MeOH）中，加入34 mg 對甲基苯磺酸（TsOH）和3 mg 亞甲蘭（MB）；用LED燈照射反應(yīng)2.5 h；反應(yīng)完成后旋干溶劑，用乙酸乙酯和水萃取干燥濃縮后得到粗產(chǎn)物，粗品通過硅膠柱層析分離得到32 mg的目標(biāo)產(chǎn)物Ij，柱層析中的洗脫劑為PE/EtOAc = 2:1, 反應(yīng)收率為78%；產(chǎn)物在室溫下為淡黃色油狀物；¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.90 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.85 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.73 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 6.64 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.97 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.11 – 4.02 (m, 1H), 4.01 – 3.95 (m, 1H), 3.44 (s, 3H), 2.49 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 2.33 – 2.22 (m, 1H)；¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 140.33, 129.12, 122.57, 119.29, 117.30, 114.54, 100.27, 83.70, 77.38, 77.06, 76.74, 62.37, 51.94, 33.73；HRMS (ESI): calcd for C₁₁H₁₃NO₃ [M + H]⁺m/z 208.0968, found 208.0969. IR (ATR): 3368.02, 2937.14, 1614.98, 1504.97, 1437.39, 1387.55 cm^-1。

實(shí)施例11：

(3aR ,9aS )-3a-ethoxy-3,3a,9,9a-tetrahydro-2H -benzo[b ]furo[2,3-e ][1,4]oxazine（化合物Ik）的制備：

合成方法條件與實(shí)施例10中化合物Ij的合成相同：色醇（Tryptamine）在乙醇（EtOH）溶液中經(jīng)光催化氧化反應(yīng)得到目標(biāo)產(chǎn)物Ik，反應(yīng)收率為57%； Ik在常溫下為淡黃色油狀物。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.91 – 6.80 (m, 2H), 6.75 – 6.68 (m, 1H), 6.66 – 6.60 (m, 1H), 4.97 (s, 1H), 4.83 (s, 1H), 4.09 – 3.95 (m, 2H), 3.92 – 3.82 (m, 1H), 3.69 – 3.60 (m, 1H), 2.54 – 2.46 (m, 1H), 2.32 – 2.23 (m, 1H), 1.14 (t, J = 7.1 Hz, 3H)； ¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 140.68, 129.23, 122.46, 119.31, 117.29, 114.66, 100.16, 83.90, 62.56, 60.40, 34.50, 15.56； HRMS (ESI): calcd for C₁₂H₁₅NO₃ [M + H]⁺m/z 222.1125, found 222.1121；IR (ATR): 3365.64, 2976.52, 2928.29, 2892.29, 1614.99, 1505.71, 1438.39, 1384.45 cm^-1。

實(shí)施例12：

(3aR ,9aS )-3a-isopropoxy-3,3a,9,9a-tetrahydro-2H -benzo[b ]furo[2,3-e ][1,4]oxazine （化合物Il）的制備：

合成方法條件與實(shí)施例10中化合物Ij的合成相同； 色醇（Tryptamine）在異丙醇（2-propanol）溶液中經(jīng)光催化氧化反應(yīng)得到目標(biāo)產(chǎn)物Il，反應(yīng)收率為49%； Il在常溫下為淡黃色油狀物；¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.91 – 6.78 (m, 2H), 6.71 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.94 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 4.80 (s, 1H), 4.29 – 4.18 (m, 1H), 4.08 – 3.95 (m, 2H), 2.57 – 2.47 (m, 1H), 2.35 – 2.25 (m, 1H), 1.19 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 1.08 (d, J = 6.1 Hz, 3H)； ¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 140.77, 128.93, 122.31, 119.34, 117.37, 114.73, 99.93, 83.82, 68.64, 62.55, 34.71, 24.24, 23.89.HRMS (ESI): calcd for C₁₃H₁₇NO₃ [M + H]⁺m/z 236.1281, found 236.1281。

應(yīng)用實(shí)施例1：化合物Ih對Α549腫瘤細(xì)胞增殖和存活的抑制作用

材料：肺癌細(xì)胞株Α549；

受試藥物：0、5 μΜ、10 μΜ、25 μΜ、50 μΜ、100μΜ的6個濃度的化合物；

細(xì)胞培養(yǎng)方法：取出液氮中凍存的A549 細(xì)胞，在37℃的溫水中解凍，將細(xì)胞懸液移入1.5 mL 離心管中，置于離心機(jī)中，1500 rpm 離心5 min，棄去上清液，加入1 mL RPMI 1640 完全培養(yǎng)液，輕輕吹打均勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加3 mL RPMI 1640 完全培養(yǎng)液，將培養(yǎng)皿置于5% CO₂、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)：將A549 細(xì)胞以8×10³ 個細(xì)胞/ 孔的密度接種到96 孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24 h 后，吸棄舊的培養(yǎng)基，并于每孔中加入200 μL含有不同濃度化合物Ih的培養(yǎng)基，另設(shè)溶劑對照組和空白對照組，在培養(yǎng)箱中孵育72h后，吸棄孔中溶液，用PBS 洗滌3 遍，加入新鮮培養(yǎng)液90 μL，同時每孔加入10 μL MTT 溶液（5 mg/mL），繼續(xù)在37 ℃、5% CO₂（相對濕度90%）培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h 后，終止培養(yǎng)，小心吸棄上清液，每孔加入150 μL DMSO，避光振蕩10 min 使結(jié)晶物充分溶解；以酶標(biāo)儀檢測570 nm 處的吸收度（A），按照以下公式計算：細(xì)胞存活率%=（試驗(yàn)組平均A 值/ 空白對照組平均A 值）×100%；化合物Ih的細(xì)胞毒性結(jié)果如圖1所示。

由圖1可知，細(xì)胞的存活率與化合物Ih的濃度存在濃度依賴關(guān)系，隨著化合物濃度增大，細(xì)胞存活率逐漸下降，表明化合物Ih可有效抑制腫瘤細(xì)胞增殖，半數(shù)有效抑制濃度IC₅₀值約為10 μmol/L。

應(yīng)用實(shí)施例2：化合物Ii對Α549腫瘤細(xì)胞增殖和存活的抑制作用

材料：肺癌細(xì)胞株Α549

受試藥物：0、5 μΜ、10 μΜ、25 μΜ、50 μΜ、100μΜ的6個濃度的化合物；

細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)過程如應(yīng)用實(shí)施例1；化合物Ii的Α549腫瘤細(xì)胞毒性結(jié)果如圖2所示。由圖2可知，細(xì)胞的存活率與化合物Ii的濃度存在濃度依賴關(guān)系，隨著化合物濃度增大，細(xì)胞存活率逐漸下降，表明化合物Ii可有效抑制腫瘤細(xì)胞增殖，半數(shù)有效抑制濃度IC₅₀值約為25μmol/L。

實(shí)施例3：化合物Ii對Hela腫瘤細(xì)胞增殖和存活的抑制作用

材料：宮頸癌細(xì)胞株Hela

受試藥物：0、5 μΜ、10 μΜ、25 μΜ、50 μΜ、100μΜ的6個濃度的化合物

細(xì)胞培養(yǎng)方法：取出液氮中凍存的Hela 細(xì)胞，在37℃的溫水中解凍，將細(xì)胞懸液移入1.5 mL 離心管中，置于離心機(jī)中，1500 rpm 離心5 min，棄去上清液，加入1 mL DMEM完全培養(yǎng)液，輕輕吹打均勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加3 mL DMEM完全培養(yǎng)液，將培養(yǎng)皿置于5% CO₂、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)：將Hela細(xì)胞以8×10³ 個細(xì)胞/ 孔的密度接種到96 孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24 h 后，吸棄舊的培養(yǎng)基，并于每孔中加入200 μL含有不同濃度化合物Ii的培養(yǎng)基，另設(shè)溶劑對照組和空白對照組，在培養(yǎng)箱中孵育72h后，吸棄孔中溶液，用PBS 洗滌3 遍，加入新鮮培養(yǎng)液90 μL，同時每孔加入10 μL MTT 溶液（5 mg/mL），繼續(xù)在37 ℃、5% CO₂（相對濕度90%）培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h 后，終止培養(yǎng)，小心吸棄上清液，每孔加入150 μL DMSO，避光振蕩10 min 使結(jié)晶物充分溶解。以酶標(biāo)儀檢測570 nm 處的吸收度（A），按照以下公式計算：細(xì)胞存活率%=（試驗(yàn)組平均A 值/ 空白對照組平均A 值）×100%；化合物Ii的宮頸癌細(xì)胞株Hela毒性結(jié)果如圖3所示，對于Hela細(xì)胞，Ii同樣表現(xiàn)出有效的腫瘤細(xì)胞增殖抑制能力，隨著Ii濃度增加，腫瘤細(xì)胞生存率下降，其半數(shù)有效抑制濃度IC₅₀值約為30μmol/L。

上述實(shí)施例所的三環(huán)苯并嗎啉衍生物的活性參數(shù)如表1所示：表中M.W.為對應(yīng)化合物的相對分子質(zhì)量，TPSA為拓?fù)錁O性表面積參數(shù)，cLogP為計算脂水分配系數(shù)，存活率為濃度為10μmol/L化合物A549細(xì)胞72小時后，細(xì)胞的存活率。

表1. 各實(shí)施例所得化合物的活性參數(shù)

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。