相關(guān)申請本申請要求2014年10月9日遞交的名稱為“indolinonecompoundsandusesthereof”的第62/062086號美國臨時申請的權(quán)益，該臨時申請通過引用以其整體并入本文。提供用作ews-fli1轉(zhuǎn)錄因子抑制劑的吲哚酮衍生物化合物。還提供了吲哚酮衍生物的藥物組合物、其合成方法、使用其治療的方法和用于鑒定ews-fli1癌蛋白抑制劑的試驗。
背景技術(shù)：
：在十多年前，存在于各種不同的尤文氏肉瘤家族腫瘤(esft)中的ews-fli轉(zhuǎn)錄因子被表征。在兒童和青少年中為第二最常見的骨腫瘤的尤文氏肉瘤的治療進(jìn)展，已改善了局限性腫瘤患者的生存。然而，轉(zhuǎn)移的患者仍然情況不佳，并且治療帶來短期和長期的毒性。尤文氏肉瘤家族腫瘤(esft)的特征在于在致癌融合轉(zhuǎn)錄因子上產(chǎn)生ews-fli1的染色體易位，ews-fli1的持續(xù)表達(dá)被認(rèn)為對于esft細(xì)胞存活是關(guān)鍵的(balamuth，nj，womer，rb.，lancetoncology11，184-192(2010))。體外和體內(nèi)的研究已經(jīng)證明，抑制癌蛋白ews-fli1與rna解旋酶a(rha)的結(jié)合導(dǎo)致esft細(xì)胞系增殖的減少和腫瘤體積的減小。ews-fli1缺乏酶活性，然而，rna解旋酶a(rha)和ews-fli1之間的蛋白-蛋白相互作用調(diào)節(jié)癌發(fā)生，因此對于維持腫瘤生長是必需的(hyariyenerkizan等naturemedicine15(7)750-756(2009))。破壞關(guān)鍵蛋白質(zhì)相互作用的范例可用于治療包括具有類似易位的肉瘤和具有mll易位的白血病的疾病((helmanlj，meltzerp.mechanismsofsarcomadevelopment.natrevcancer2003；3(9)：685-94)；和puich等，nengljmed2004；350(15)：1535-48)。此外，無序蛋白基于其固有的生物化學(xué)性質(zhì)，可以是優(yōu)異的治療靶標(biāo)(chengy，legallt，oldfieldcj等，trendsbiotechnol2006；24(10)：435-42)。技術(shù)實現(xiàn)要素：盡管多年的針對ews-fli1的反義rna和sirna的體外和異種移植研究，但是迄今為止，基于不充分的遞送和穩(wěn)定性，這些作為人類療法也都是不切實際的。因此，需要改進(jìn)的治療例如esft的疾病的療法。fli-1是ets家族轉(zhuǎn)錄因子的成員，ets家族轉(zhuǎn)錄因子通常在發(fā)育中的胚胎中是有活性的，但在出生后不具有活性。該家族轉(zhuǎn)錄因子有29個成員，其中四個fli-1、etv1、etv4和erg，已與廣泛的癌癥相關(guān)聯(lián)。靶向抑制fli1、etv1、etv4或erg的致癌融合蛋白或轉(zhuǎn)錄因子本身的結(jié)合的治療性化合物將用于治療癌癥，包括尤文氏肉瘤家族腫瘤、胰腺癌、前列腺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、非小細(xì)胞肺癌和一些其他癌癥。優(yōu)選的實施方式滿足這些需求，并且還提供其他優(yōu)點。本文公開的一些實施方式涉及式(i)的化合物，包括例如立體異構(gòu)體、游離形式、其藥學(xué)上可接受的鹽或酯、溶劑化物的形式或這些形式的組合，其中a、d、r1、r2、r3、r4、r5、r6和r12如本文所定義。本文公開的一些實施方式涉及用于治療哺乳動物中的癌癥的方法，包括向哺乳動物施用有效量的一種或多種式(i)的化合物，其包括例如立體異構(gòu)體、游離形式或其藥學(xué)上可接受的鹽的形式；或包括一種或多種式(i)的化合物的藥物組合物，該式(i)的化合物包括例如立體異構(gòu)體、游離形式或其藥學(xué)上可接受的鹽的形式。本文所述的其它實施方式涉及在制備用于治療癌癥的藥物中，使用一種或多種式(i)的化合物，其包括例如立體異構(gòu)體、游離形式或其藥學(xué)上可接受的鹽的形式。本文還描述的其它實施方式涉及用于治療癌癥的式(i)的化合物，其包括例如立體異構(gòu)體、游離形式或其藥學(xué)上可接受的鹽的形式，其中所述癌癥選自由尤文氏肉瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、急性髓性白血病、乳腺癌、頭頸癌、黑色素瘤、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌、前列腺癌和子宮癌構(gòu)成的組。下面更詳細(xì)地描述這些和其他實施方式。具體實施方式下面的描述和實施例詳細(xì)說明了本發(fā)明的優(yōu)選實施方式。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到，本發(fā)明存在由其范圍所涵蓋的許多變化和修改。因此，優(yōu)選實施方式的描述不應(yīng)被視為限制本發(fā)明的范圍。產(chǎn)生致癌轉(zhuǎn)錄因子的染色體易位是多種腫瘤的標(biāo)志，包括許多肉瘤。尤文氏肉瘤家族腫瘤(esfts)的特征在于t(11；22)(q24；q12)易位，其產(chǎn)生負(fù)責(zé)這種腫瘤的高度惡性表型的尤文氏肉瘤斷裂點區(qū)1和佛氏白血病病毒整合蛋白1(ews-fli1)融合轉(zhuǎn)錄因子。ews-fli1的持續(xù)表達(dá)被認(rèn)為是esft細(xì)胞存活的關(guān)鍵。ews-fli1因為其惡性細(xì)胞特異性，是尤文氏肉瘤的有吸引力的治療靶標(biāo)。此外，實驗證據(jù)表明ews/fli表達(dá)對尤文氏肉瘤腫瘤細(xì)胞是必需的。利用反義寡脫氧核苷酸及rna干擾(rnai)體外靶向ews-fli1抑制尤文氏肉瘤細(xì)胞活力、生長、和致癌性轉(zhuǎn)化，支持ews-fli1減弱作為潛在的治療方式。優(yōu)選實施方式的治療劑對更多的腫瘤具有廣泛的適用性，并且可用作治療其它致癌轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)的惡性腫瘤、如化療耐藥性肉瘤和白血病以及難以治療的腫瘤如尤文氏肉瘤的療法。定義除非另有定義，否則本文使用的所有技術(shù)術(shù)語和科學(xué)術(shù)語具有與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義相同的含義。除非另有說明，否則本文引用的所有專利、申請、公開申請和其它出版物通過引用以其整體并入。在本文術(shù)語存在多個定義的情況下，除非另有說明，否則以本部分中的定義為準(zhǔn)。如本文所用，任何“r”基團(tuán)，例如但不限于r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10、r11和r12代表可連接至所指的原子的取代基。r基團(tuán)可以是取代的或未取代的。如果兩個“r”基團(tuán)被描述為“結(jié)合在一起”，則r基團(tuán)和它們連接的原子可以形成環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基、雜芳基或雜環(huán)。例如但不限于，如果nrarb基團(tuán)的ra和rb被指明為“結(jié)合在一起”，則意味著它們彼此共價鍵合以形成環(huán)：此外，如果兩個“r”基團(tuán)被描述為與它們連接的原子“結(jié)合在一起”形成環(huán)作為替代，r基團(tuán)可以不限于前面定義的變量或取代基。如本文所用，“烷基”是指包含完全飽和(無雙鍵或三鍵)烴基的直鏈或支鏈烴鏈。烷基可以具有1個至20個碳原子(每當(dāng)它在本文出現(xiàn)時，例如“1至20”的數(shù)值范圍是指給定范圍內(nèi)的每個整數(shù)；例如，“1個至20個碳原子”是指烷基可以包括1個碳原子、2個碳原子、3個碳原子等，多至并包括20個碳原子，盡管本定義也涵蓋沒有指定數(shù)值范圍的術(shù)語“烷基”的發(fā)生)。烷基還可以是具有1個至10個碳原子的中等尺寸的烷基。烷基還可以是具有1個至6個碳原子的低級烷基?；衔锏耐榛梢员恢付椤癱1-c6烷基”或類似的名稱。僅作為舉例，“c1-c6烷基”表示在烷基鏈中有1個至6個碳原子，即烷基鏈選自甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基和叔丁基、戊基(直鏈的和支鏈的)和己基(直鏈的和支鏈的)。典型的烷基包括但決不限于甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基(直鏈的和支鏈的)和己基(直鏈的和支鏈的)。烷基可以是取代的或未取代的。如本文所用，“環(huán)烷基”是指完全飽和的(無雙鍵或三鍵)單環(huán)或多環(huán)的烴環(huán)系統(tǒng)。當(dāng)由兩個或更多個環(huán)組成時，這些環(huán)可以以稠合的方式連接在一起。環(huán)烷基可以在環(huán)中含有3個至10個原子或在環(huán)中含有3個至8個原子。環(huán)烷基可以是未取代的或取代的。典型的環(huán)烷基包括但決不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和環(huán)辛基。如本文所用，“芳基”是指遍及所有的環(huán)具有完全離域π電子體系的碳環(huán)的(全碳)單環(huán)或多環(huán)芳香環(huán)體系(包括兩個碳環(huán)共用化學(xué)鍵的稠環(huán)體系)。芳基中的碳原子數(shù)可以變化。例如，芳基可以是c6-c14芳基、c6-c10芳基或c6芳基。芳基的實例包括但不限于苯、萘和薁。芳基可以是取代的或未取代的。如本文所用，“雜芳基”是指單環(huán)或多環(huán)芳環(huán)體系(具有完全離域的π電子體系的環(huán)體系)，其含有一個或多個雜原子(例如，1個至5個雜原子)，即除碳以外的元素，包括但不限于氮、氧和硫。雜芳基的環(huán)中的原子數(shù)可以變化。例如，雜芳基可以在環(huán)中含有4個至14個原子，在環(huán)中含有5個至10個原子，或在環(huán)中含有5個至6個原子。此外，術(shù)語“雜芳基”包括稠環(huán)體系，其中兩個環(huán)，例如至少一個芳環(huán)和至少一個雜芳環(huán)，或至少兩個雜芳環(huán)，共用至少一個化學(xué)鍵。雜芳環(huán)的實例包括但不限于呋喃、呋咱、噻吩、苯并噻吩、酞嗪、吡咯、惡唑、苯并惡唑、1，2，3-惡二唑、1，2，4-惡二唑、噻唑、1，2，3-噻二唑、1，2，4-噻二唑、苯并噻唑、咪唑、苯并咪唑、吲哚、吲唑、吡唑、苯并吡唑、異惡唑、苯并異惡唑、異噻唑、三唑、苯并三唑、噻二唑、四唑、吡啶、噠嗪、嘧啶、吡嗪、嘌呤、喋啶、喹啉、異喹啉、喹唑啉、喹喔啉、噌啉和三嗪。雜芳基可以是取代的或未取代的。如本文所用，雜環(huán)烷基是指三元、四元、五元、六元、七元、八元、九元、十元、多至18元的單環(huán)、雙環(huán)和三環(huán)體系，其中碳原子與1個至5個雜原子一起構(gòu)成所述環(huán)系。雜環(huán)可以任選地含有一個或多個存在的不飽和鍵，然而，該不飽和鍵使得完全離域的π電子體系不遍及所有的環(huán)發(fā)生。雜原子是除碳以外的元素，包括但不限于氧、硫和氮。雜環(huán)可以進(jìn)一步含有一個或多個羰基或硫代羰基官能團(tuán)，以使定義包括氧代體系和硫代體系，例如內(nèi)酰胺、內(nèi)酯、環(huán)狀酰亞胺、環(huán)狀硫代酰亞胺和環(huán)狀氨基甲酸酯。當(dāng)由兩個或更多個環(huán)組成時，這些環(huán)可以以稠合的方式連接在一起。另外，雜環(huán)烷基中的任何氮可以被季銨化。雜環(huán)烷基可以是未取代的或取代的。這種雜環(huán)烷基的實例包括但不限于1，3-二惡英、1，3-二氧六環(huán)、1，4-二氧六環(huán)、1，2-二氧戊環(huán)、1，3-二氧戊環(huán)、1，4-二氧戊環(huán)、1，3-氧硫雜環(huán)己烷、1，4-氧硫雜環(huán)己二烯、1，3-氧硫雜環(huán)戊烷、1，3-二硫雜環(huán)戊二烯、1，3-二硫戊環(huán)、1，4-氧硫雜環(huán)己烷、四氫-1，4-噻嗪、2h-1，2-惡嗪、馬來酰亞胺、琥珀酰亞胺、巴比妥酸、硫代巴比妥酸、二氧代哌嗪、乙內(nèi)酰脲、二氫尿嘧啶、三氧雜環(huán)己烷、六氫-1，3，5-三嗪、咪唑啉、咪唑烷、異惡唑啉、異惡唑烷、惡唑啉、惡唑烷、惡唑烷酮、噻唑啉、噻唑烷、嗎啉、環(huán)氧乙烷、哌啶n-氧化物、哌啶、哌嗪、吡咯烷、吡咯烷酮、吡咯烷(pyrrolidione)、4-哌啶酮、吡唑啉、吡唑烷、2-氧代吡咯烷、四氫吡喃、4h-吡喃、四氫噻喃、硫代嗎啉、硫代嗎啉亞砜、硫代嗎啉砜及其苯并稠合的類似物(例如苯并咪唑烷酮、四氫喹啉和3，4-亞甲二氧基苯基)。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指對所施用的生物體不引起顯著刺激，并且不消除化合物的生物活性和性質(zhì)的化合物的鹽。在一些實施方式中，鹽是化合物的酸加成鹽。藥物鹽可以通過使化合物與無機(jī)酸、例如氫鹵酸(例如鹽酸或氫溴酸)、硫酸、硝酸和磷酸反應(yīng)而獲得。藥物鹽也可以通過使化合物與有機(jī)酸反應(yīng)而獲得，該有機(jī)酸例如脂肪族或芳香族的羧酸或磺酸，例如甲酸、乙酸、琥珀酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、煙酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸或萘磺酸。藥物鹽也可以通過使化合物與堿反應(yīng)形成鹽，例如銨鹽、堿金屬鹽(如鈉鹽或鉀鹽)、堿土金屬鹽(如鈣鹽或鎂鹽)、有機(jī)堿的鹽(例如二環(huán)己胺、n-甲基-d-葡糖胺、三(羥甲基)甲胺、c1-c7烷基胺、環(huán)己胺、三乙醇胺、乙二胺的鹽)、以及與氨基酸、如精氨酸和賴氨酸的鹽。應(yīng)當(dāng)理解，本文所描述的具有一個或多個手性中心的任何化合物中，如果沒有明確指出絕對立體化學(xué)，則每個中心可以獨立地為r-構(gòu)型或s-構(gòu)型或其混合物。因此，本文提供的化合物可以是對映體純的、對映體富集的、外消旋混合物、非對映體純的、非對映體富集的或立體異構(gòu)體的混合物。此外，應(yīng)當(dāng)理解，在本文所描述的具有一個或多個產(chǎn)生可以被定義為e或z的幾何異構(gòu)體的雙鍵的任何化合物中，每個雙鍵可以獨立地為e或z或其混合物。應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)本文公開的化合物具有未填充的化合價時，則該化合價將用氫或其同位素、例如氫-1(氕)和氫-2(氘)填充。應(yīng)當(dāng)理解，本文所描述的化合物可以同位素標(biāo)記。用同位素(例如氘)取代可提供由更大的代謝穩(wěn)定性(諸如，增加的體內(nèi)半衰期)或降低的劑量需求引起的某些治療優(yōu)勢。在化合物結(jié)構(gòu)中表示的每個化學(xué)元素可以包括所述元素的任何同位素。例如，在化合物結(jié)構(gòu)中，氫原子可以明確地公開或理解為存在于化合物中。在化合物的可以存在氫原子的任何位置處，氫原子可以是氫的任何同位素，包括但不限于氫-1(氕)和氫-2(氘)。因此，本文中提及化合物包括所有潛在的同位素形式，除非上下文明確地另有規(guī)定。應(yīng)當(dāng)理解，本文所描述的方法和組合包括結(jié)晶形式(也稱為多晶型，其包括化合物的相同元素組成的不同晶體堆積排列)、無定形相、鹽、溶劑化物和水合物。在一些實施方式中，本文所描述的化合物以與藥學(xué)上可接受的溶劑(例如水、乙醇等)的溶劑化形式存在。在其它實施方式中，本文所描述的化合物以非溶劑化形式存在。溶劑化物含有化學(xué)計量的量或非化學(xué)計量的量的溶劑，并且可以在用藥學(xué)上可接受的溶劑(例如水、乙醇等)結(jié)晶的過程中形成。當(dāng)溶劑是水時形成水合物，或當(dāng)溶劑是醇時形成醇化物。此外，本文提供的化合物可以以非溶劑化形式以及溶劑化形式存在。通常，出于本文提供的化合物和方法的目的，溶劑化形式被認(rèn)為等同于非溶劑化形式。在提供值的范圍的情況下，應(yīng)當(dāng)理解，上限和下限以及該范圍的上限和下限之間的每個居中值包括在實施方式之內(nèi)。化合物在第一方面，提供一種化合物，該化合物為具有式(i)的物質(zhì)，或其立體異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物：其中，r1、r2、r3和r4獨立地選自由h、cl、-cn和-cf3構(gòu)成的組；其中a選自由h和c1-6烷基構(gòu)成的組；其中d選自由-oh和-o(c1-6烷基)構(gòu)成的組；其中r5和r6獨立地選自由h、f和c1-6烷基構(gòu)成的組，或其中r5和r6一起形成取代的或未取代的環(huán)烷基環(huán)；其中r12獨立地選自由c3-8環(huán)烷基和構(gòu)成的組；其中r7、r8、r9、r10和r11獨立地選自由h、鹵素、cn、cf3、c1-6烷基、芳基、雜芳基、-o(芳基)、-o(雜芳基)、-co2h、-co2(c1-6烷基)、-nhso2(c1-6烷基)、-nhso2(芳基)、-nhconh(c1-6烷基)、-nhcon(c1-6烷基)2、-n(c1-6烷基)conh2、-n(c1-6烷基)conh(c1-6烷基)、-n(c1-6烷基)con(c1-6烷基)2、-so2(c1-6烷基)、-so2nh2、-so2nh(c1-6烷基)、-so2n(c1-6烷基)2、c3-8環(huán)烷基和c3-8雜環(huán)烷基構(gòu)成的組。在第一方面的一個實施方式中，r1、r2、r3和r4獨立地選自由氫和cl構(gòu)成的組。在第一方面的一實施方式中，r5和r6一起形成取代的或未取代的環(huán)烷基環(huán)。在第一方面的一個實施方式中，a是h。在第一方面的一個實施方式中，d是oh。在第一方面的一個實施方式中，a是h且d是oh。在第一方面的一個實施方式中，r9選自由氮雜環(huán)丙烷基(aziridinyl)、氮雜環(huán)丁烷基(azetidinyl)、吡咯烷基和嗎啉基構(gòu)成的組。在第一方面的一個實施方式中，r9選自由異丙基和環(huán)丙基構(gòu)成的組。在第一方面的一個實施方式中，化合物為具有式(ia)的結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，或其立體異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物：其中，r1、r2、r3和r4獨立地選自由h和cl構(gòu)成的組；其中r7、r8、r10和r11獨立地選自由h和鹵素構(gòu)成的組；并且其中r9獨立地選自由c3-8環(huán)烷基和c3-8雜環(huán)烷基構(gòu)成的組。在第一方面的一個實施方式中，r1和r4為cl且r2和r3為h。在第一方面的一個實施方式中，式(i)的化合物選自由以下構(gòu)成的組：或其立體異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽、酯或溶劑化物。在第一方面的一個實施方式中，化合物選自由以下構(gòu)成的組：或其立體異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽、酯或溶劑化物。在第二方面，提供了包括第一方面或其任何實施方式的任何實施方式的化合物和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。在第三方面，提供了包括第一方面或其任何實施方式的任何實施方式的化合物和藥學(xué)上可接受的賦形劑的藥物組合物。在第四方面，藥物組合物包括第一方面或其任何實施方式的任何實施方式的化合物和至少一種另外的藥物活性劑。在第五方面，提供了治療癌癥的方法，其包括向有需要的受試者施用有效量的第一方面或其任何實施方式的化合物。在第五方面的一個實施方式中，受試者是哺乳動物。在第五方面的一個實施方式中，受試者是人。在第五方面的一個實施方式中，癌癥選自由尤文氏肉瘤、前列腺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、急性髓性白血病、乳腺癌、頭部癌、頸部癌、黑色素瘤、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌和子宮癌構(gòu)成的組。在第六方面，提供了殺滅或抑制贅生性細(xì)胞生長的方法，包括使細(xì)胞與有效量的第一方面或其任何實施方式的化合物接觸。在第六方面的一個實施方式中，細(xì)胞是哺乳動物細(xì)胞。在第六方面的一個實施方式中，細(xì)胞是人細(xì)胞。在第六方面的一個實施方式中，細(xì)胞為體外(invitro)細(xì)胞。在第六方面的一個實施方式中，細(xì)胞為體內(nèi)細(xì)胞。在第六方面的一個實施方式中，細(xì)胞是癌細(xì)胞，該癌選自由尤文氏肉瘤、前列腺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、急性髓性白血病、乳腺癌、頭部癌、頸部癌、黑色素瘤、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌和子宮癌構(gòu)成的組。在第七方面，一種用于抑制細(xì)胞增殖的方法，其中該細(xì)胞過表達(dá)ets基因或包含ets融合基因，該方法包括使該細(xì)胞與有效量的第一方面或其任何實施方式的化合物接觸。在第七方面的一個實施方式中，ets基因或ets融合基因選自由fli1、erg、etv1和etv4構(gòu)成的組。在第七方面的一個實施方式中，細(xì)胞是哺乳動物細(xì)胞。在第七方面的一個實施方式中，細(xì)胞是人細(xì)胞。在第七方面的一個實施方式中，細(xì)胞為體外細(xì)胞。在第七方面的一個實施方式中，細(xì)胞為體內(nèi)細(xì)胞。在第七方面的一個實施方式中，細(xì)胞是癌細(xì)胞，該癌選自由尤文氏肉瘤、前列腺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、急性髓性白血病、乳腺癌、頭頸癌、黑色素瘤、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌和子宮癌構(gòu)成的組。合成方法本文所描述的式(i)的化合物可以各種方式制備。在本文中示出和描述了式(i)的化合物的常見合成路線。本文示出和描述的路線僅是說明性的且不是針對性的，且它們也不被解釋為以任何方式限制權(quán)利要求的范圍。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠基于本文的公開內(nèi)容來識別所公開的合成的修改并設(shè)計替代路線；所有這些修改和替代路線都在權(quán)利要求的范圍內(nèi)。根據(jù)存在的取代基，小分子抑制劑可以是藥學(xué)上可接受的鹽的形式。本文所用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是廣泛的術(shù)語，并且對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言，被賦予其一般含義和通常含義(并且不限于特定含義或自定義的含義)，并且是指但不限于由藥學(xué)上可接受的無毒的酸或無毒的堿制備的鹽。合適的藥學(xué)上可接受的鹽包括金屬鹽(例如鋁鹽、鋅鹽)、堿金屬鹽(例如鋰鹽、鈉鹽和鉀鹽)、堿土金屬鹽(例如鈣鹽和鎂鹽)；有機(jī)鹽，例如賴氨酸鹽、n，n'-二芐基乙二胺鹽、氯普魯卡因鹽、膽堿鹽、二乙醇胺鹽、乙二胺鹽、葡甲胺鹽(n-甲基葡糖胺鹽)、普魯卡因鹽和三羥甲基氨基甲烷鹽；游離酸的鹽和游離堿的鹽；無機(jī)鹽，例如硫酸鹽、鹽酸鹽和氫溴酸鹽；以及目前在廣泛的藥物使用中，并且列在本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的來源(例如“默克索引(merckindex)”)中的其它鹽。可以選擇任何合適的組分來制備本文所討論的治療劑的鹽，條件是其是無毒的并且基本上不干擾所需的活性。優(yōu)選實施方式的化合物可以包括異構(gòu)體、外消旋體、光學(xué)異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、互變異構(gòu)體和順式/反式構(gòu)象異構(gòu)體。所有這些異構(gòu)形式包括其混合物都包括在優(yōu)選實施方式中。如上所描述，優(yōu)選實施方式的化合物可以具有手性中心，例如，它們可以含有不對稱碳原子，并且因此可以以對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體及其混合物(例如外消旋體)的形式存在。不對稱碳原子可以以(r)-構(gòu)型或(s)-構(gòu)型存在，或者可以以(r)-形式和(s)-形式的混合物存在。以下是式(i)化合物的異構(gòu)體形式：化合物可以是無定形形式或結(jié)晶形式。優(yōu)選實施方式的化合物的結(jié)晶形式可以以多晶型物存在，該多晶型物包括在優(yōu)選實施方式中。此外，一些優(yōu)選實施方式的化合物還可以與水或其它有機(jī)溶劑形成溶劑化物。這些溶劑化物也類似地包括在優(yōu)選實施方式的范圍內(nèi)。某些藥物組合物通常優(yōu)選以靜脈內(nèi)或皮下的單位劑型施用優(yōu)選實施方式的抑制劑；然而，也考慮其它施用途徑。所考慮的施用途徑包括但不限于口服、腸胃外、靜脈內(nèi)和皮下。優(yōu)選實施方式的抑制劑可以配制成用于例如口服施用的液體制劑。合適的形式包括混懸劑、糖漿劑、酏劑等。用于口服施用的特別優(yōu)選的單位劑型包括片劑和膠囊劑。配置為每天一次施用的單位劑型是特別優(yōu)選的；然而，在某些實施方式中，可以期望將單位劑型配置為每天兩次或更多次施用。優(yōu)選實施方式的藥物組合物優(yōu)選地與接受者的血液或其他體液等滲?？梢允褂镁剖徕c、丙二醇或其它無機(jī)溶質(zhì)或有機(jī)溶質(zhì)來獲得組合物的等滲性。氯化鈉是特別優(yōu)選的?？梢岳镁彌_劑，例如乙酸和鹽、檸檬酸和鹽、硼酸和鹽、以及磷酸和鹽。胃腸外媒介物包括氯化鈉溶液、葡萄糖林格氏液、葡萄糖和氯化鈉、乳酸林格氏液或固定油。靜脈內(nèi)媒介物包括流體和營養(yǎng)補(bǔ)充劑、電解質(zhì)補(bǔ)充劑(例如基于葡萄糖林格氏液的那些)等。使用藥學(xué)上可接受的增稠劑可以將藥物組合物的粘度保持在選定的水平。甲基纖維素是優(yōu)選的，因為它容易且經(jīng)濟(jì)地可購得并且易于使用。其它合適的增稠劑包括，例如黃原膠、羧甲基纖維素、羥丙基纖維素、卡波姆等。增稠劑的優(yōu)選濃度將取決于所選擇的增稠劑。優(yōu)選使用將達(dá)到選定粘度的量。粘性組合物通常通過加入這種增稠劑由溶液制備?？梢岳盟帉W(xué)上可接受的防腐劑來增加藥物組合物的保存期限。苯甲醇可以是合適的，盡管也可以采用多種防腐劑，包括例如對羥基苯甲酸酯、硫柳汞、氯丁醇或苯扎氯銨?；诮M合物的總重量，防腐劑的合適濃度通常為約0.02％至約2％，盡管根據(jù)所選擇的試劑，可以期望更大或更小的量。如上所描述的還原劑可以有利地用于保持制劑的良好的保存期限。根據(jù)施用途徑和所需的制劑，優(yōu)選實施方式的抑制劑可以與合適的載體、稀釋劑或賦形劑(例如無菌水、生理鹽水、葡萄糖等)混合，并且可以含有輔助物質(zhì)，例如潤濕劑或乳化劑、ph緩沖劑、增凝劑或增粘劑、防腐劑、調(diào)味劑、著色劑等。參見例如“remington：thescienceandpracticeofpharmacy”，lippincottwilliams&wilkins；第20版(2003年6月1日)和“remington'spharmaceuticalsciences”，mackpub.co.；第18版和第19版(分別為1985年12月和1990年6月)。這樣的制劑可以包括絡(luò)合劑、金屬離子、聚合物(例如聚乙酸、聚乙醇酸、水凝膠、葡聚糖等)、脂質(zhì)體、微乳液、膠束、單層囊泡或多層囊泡、紅細(xì)胞血影或球狀細(xì)胞。用于脂質(zhì)體制劑的合適的脂質(zhì)包括但不限于甘油單酯、甘油二酯、硫苷脂、溶血卵磷脂、磷脂、皂苷、膽汁酸等。這樣的另外的組分的存在會影響物理狀態(tài)、溶解度、穩(wěn)定性、體內(nèi)釋放速率和體內(nèi)清除速率，并且因此根據(jù)預(yù)期的應(yīng)用來選擇，使得載體的特征適應(yīng)于選定的施用途徑。對于口服施用，藥物組合物可以作為片劑、水性混懸劑或油性混懸劑、可分散的粉末或可分散的顆粒、乳劑、硬膠囊或軟膠囊、糖漿劑或酏劑提供。用于口服使用的組合物可以根據(jù)本領(lǐng)域已知的用于制備藥物組合物的任何方法制備，并且可以包括一種或多種以下試劑：甜味劑、調(diào)味劑、著色劑和防腐劑。水性混懸劑可以含有與適用于制備水性混懸劑的賦形劑混合的活性成分。用于口服使用的制劑還可以作為硬明膠膠囊(其中活性成分與惰性固體稀釋劑、例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合)或作為軟明膠膠囊提供。在軟膠囊中，可以將抑制劑溶解或懸浮在合適的液體中，例如水或油介質(zhì)(例如花生油、橄欖油、脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇)中。也可以使用配制用于口服施用的穩(wěn)定劑和微球。膠囊可以包括由明膠制成的推入式(push-fit)膠囊，以及由明膠和增塑劑(例如甘油或山梨醇)制成的軟的密封膠囊。推入式膠囊可以含有與填充劑(例如乳糖)、粘合劑(例如淀粉)和/或潤滑劑(例如滑石或硬脂酸鎂)和可選的穩(wěn)定劑混合的活性成分。片劑可以是未包衣的，或通過已知的方法包衣的，以延緩胃腸道中的崩解和吸收，從而在更長的時間段內(nèi)提供持續(xù)的作用。例如，可以使用延時材料，例如單硬脂酸甘油酯。當(dāng)以固體形式(例如片劑)施用時，固體形式通常包含約0.001重量％或更少至約50重量％或更多的活性成分，優(yōu)選約0.005重量％、0.01重量％、0.02重量％、0.03重量％、0.04重量％、0.05重量％、0.06重量％、0.07重量％、0.08重量％、0.09重量％、0.1重量％、0.2重量％、0.3重量％、0.4重量％、0.5重量％、0.6重量％、0.7重量％、0.8重量％、0.9重量％或1重量％至約2重量％、3重量％、4重量％、5重量％、6重量％、7重量％、8重量％、9重量％、10重量％、15重量％、20重量％、25重量％、30重量％、35重量％、40重量％或45重量％。片劑可以含有與無毒的藥學(xué)上可接受的賦形劑(包括惰性材料)混合的活性成分。例如，可以通過，可選地與一種或多種另外的成分壓縮或模制，來制備片劑。可以通過在合適的機(jī)器中壓制自由流動形式的活性成分(例如粉末或顆粒)，可選地與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、表面活性劑或分散劑混合的活性成分，來制備壓縮片?？梢酝ㄟ^在合適的機(jī)器中模制用惰性液體稀釋劑潤濕的粉末狀抑制劑的混合物來制備模制片。優(yōu)選地，每個片劑或膠囊含有約1mg或更少至約1000mg或更多的優(yōu)選實施方式的抑制劑，更優(yōu)選約10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg或100mg至約150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg或900mg。最優(yōu)選地，片劑或膠囊以一定劑量的范圍提供，以允許施用分次劑量。因此，可以方便地選擇適合于患者的劑量和每天施用的劑量的次數(shù)。在某些實施方式中，優(yōu)選將兩種或更多種待施用的治療劑并入單一片劑或其它劑型(例如，在聯(lián)合療法中)；然而，在其它實施方式中，優(yōu)選以分開的劑型提供治療劑。合適的惰性材料包括稀釋劑，例如碳水化合物、甘露醇、乳糖、無水乳糖、纖維素、蔗糖、改性葡聚糖、淀粉等，或無機(jī)鹽，例如三磷酸鈣、磷酸鈣、磷酸鈉、碳酸鈣、碳酸鈉、碳酸鎂和氯化鈉。崩解劑或制粒劑可以包括在制劑中，例如淀粉(例如玉米淀粉)、海藻酸、羧基乙酸淀粉鈉、安伯萊特(amberlite)、羧甲基纖維素鈉、超支鏈淀粉、海藻酸鈉、明膠、橙皮、酸性羧甲基纖維素、天然海綿和膨潤土、不溶性陽離子交換樹脂、粉末狀樹膠，例如瓊脂、刺梧桐膠或黃蓍膠、或海藻酸或其鹽。粘合劑可用于形成硬片劑。粘合劑包括來自天然產(chǎn)物的材料，例如阿拉伯膠、黃蓍膠、淀粉和明膠、甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等。潤滑劑，例如硬脂酸或其鎂鹽或鈣鹽、聚四氟乙烯、液體石蠟、植物油和植物蠟、月桂醇硫酸鈉、月桂醇硫酸鎂、聚乙二醇、淀粉、滑石、熱解硅石、水合硅鋁酸鹽等，可以包括在片劑制劑中。還可以使用表面活性劑，例如陰離子洗滌劑，如月桂醇硫酸鈉、二辛基磺基琥珀酸鈉和二辛基磺酸鈉；陽離子洗滌劑，例如苯扎氯銨或芐索氯銨；或非離子洗滌劑，例如聚氧乙烯氫化蓖麻油、單硬脂酸甘油酯、聚山梨酯、蔗糖脂肪酸酯、甲基纖維素或羧甲基纖維素?？梢圆捎每蒯屩苿?，其中將氨磷汀或其類似物并入允許通過擴(kuò)散機(jī)制或浸出機(jī)制釋放的惰性基質(zhì)中。緩慢降解的基質(zhì)也可以并入制劑中。其他遞送系統(tǒng)可以包括定時釋放遞送系統(tǒng)、延遲釋放遞送系統(tǒng)或持續(xù)釋放遞送系統(tǒng)?？梢允褂冒?，例如非腸溶性材料，如甲基纖維素、乙基纖維素、羥乙基纖維素、甲基羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚維酮和聚乙二醇等，或者腸溶性材料，例如鄰苯二甲酸酯?？商砑尤玖匣蝾伭嫌糜阼b定或表征不同組合的抑制劑劑量。當(dāng)以液體形式口服施用時，可以向活性成分中加入液體載體，例如水、石油、動物或植物來源的油(例如花生油、礦物油、大豆油或芝麻油)或合成油。生理鹽水溶液、葡萄糖溶液或其他糖溶液、或二醇類(例如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇)也是合適的液體載體。藥物組合物還可以是水包油乳液的形式。油相可以是植物油(例如橄欖油或花生油)、礦物油(例如液體石蠟)或其混合物。合適的乳化劑包括天然存在的樹膠(例如阿拉伯樹膠和黃蓍膠)、天然存在的磷脂(例如大豆卵磷脂)、衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯(例如山梨醇酐單油酸酯)、以及這些偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物(例如聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯)。乳液還可以含有甜味劑和調(diào)味劑。也可以采用肺部遞送?；衔镌谖霑r被遞送至肺部并穿過整個肺上皮內(nèi)層到血流?？梢圆捎糜糜诜尾窟f送治療產(chǎn)品的各種機(jī)械裝置，包括但不限于噴霧器、定量吸入器和粉末吸入器，所有這些都是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的。這些裝置使用適于分配化合物的制劑。通常，每種制劑對所用裝置的類型是特異性的，并且除了可用于治療的稀釋劑、佐劑和/或載體外，還可以包括使用合適的推進(jìn)劑材料。用于肺部遞送的化合物和/或其它可選的活性成分有利地制備成平均粒徑為0.1μm或更小至10μm或更大的顆粒形式，該平均粒徑更優(yōu)選為約0.2μm、0.3μm、0.4μm、0.5μm、0.6μm、0.7μm、0.8μm或0.9μm至約1.0μm、1.5μm、2.0μm、2.5μm、3.0μm、3.5μm、4.0μm、4.5μm、5.0μm、5.5μm、6.0μm、6.5μm、7.0μm、7.5μm、8.0μm、8.5μm、9.0μm或9.5μm。用于肺部遞送抑制劑的藥學(xué)上可接受的載體包括碳水化合物，例如海藻糖、甘露醇、木糖醇、蔗糖、乳糖和山梨醇。用于制劑中的其他成分可以包括dppc、dope、dspc和dopc?？梢允褂锰烊槐砻婊钚詣┗蚝铣傻谋砻婊钚詣ň垡叶己推暇厶?例如環(huán)葡聚糖)。還可以使用膽汁鹽和其它相關(guān)的增強(qiáng)劑，以及纖維素和纖維素衍生物以及氨基酸。也可以使用脂質(zhì)體、微膠囊、微球、包合物和其它類型的載體。適用于噴射噴霧器或者超聲波噴霧器的藥物制劑通常包含以以下濃度溶解或懸浮在水中的抑制劑，該濃度為每毫升溶液約0.01mg或更少至100mg或更多的抑制劑，優(yōu)選每毫升溶液約0.1mg、1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg或10mg至約15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg或90mg的抑制劑。制劑還可以包括緩沖劑和簡單的糖(例如，用于蛋白質(zhì)穩(wěn)定化和調(diào)節(jié)滲透壓)。噴霧器制劑還可以含有表面活性劑，以減少或防止由形成氣溶膠的溶液霧化引起的表面誘導(dǎo)的抑制劑聚集。與定量吸入器裝置使用的制劑通常包含含有借助表面活性劑懸浮在推進(jìn)劑中的活性成分的細(xì)微粉末。推進(jìn)劑可以包括常規(guī)的推進(jìn)劑，例如氯氟烴、氫氯氟烴、氫氟烴和烴。優(yōu)選的推進(jìn)劑包括三氯氟甲烷、二氯二氟甲烷、二氯四氟乙醇、1，1，1，2-四氟乙烷及其組合。合適的表面活性劑包括山梨醇酐三油酸酯、大豆卵磷脂和油酸。用于從粉末吸入器裝置分配的制劑通常包含細(xì)微干粉末，該細(xì)微干粉末含有抑制劑，可選地包括有助于將粉末從該裝置中分散的量的填充劑，例如乳糖、山梨醇、蔗糖、甘露醇、海藻糖或木糖醇，通常為制劑的約1重量％或更少至99重量％或更多，優(yōu)選為制劑的約5重量％、10重量％、15重量％、20重量％、25重量％、30重量％、35重量％、40重量％、45重量％或50重量％至約55重量％、60重量％、65重量％、70重量％、75重量％、80重量％、85重量％或90重量％。當(dāng)優(yōu)選實施方式的化合物通過靜脈內(nèi)、腸胃外或其它注射施用時，其優(yōu)選為無熱原、腸胃外可接受的水劑或油質(zhì)混懸劑的形式。混懸劑可以根據(jù)本領(lǐng)域熟知的方法使用合適的分散劑或潤濕劑以及助懸劑來配制。具有合適ph、等滲性、穩(wěn)定性等的可接受的水劑的制備在本領(lǐng)域的技術(shù)范圍內(nèi)。優(yōu)選的用于注射的藥物組合物優(yōu)選含有等滲媒介物，例如1，3-丁二醇、水、等滲氯化鈉溶液、林格氏液、葡萄糖溶液、葡萄糖和氯化鈉溶液、乳酸林格氏液或其他本領(lǐng)域已知的媒介物。此外，無菌固定油可以常規(guī)用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為此，可以使用任何溫和的固定油，包括合成的單甘油酯或甘油二酯。此外，脂肪酸，例如油酸同樣可以用于形成可注射制劑。藥物組合物還可以含有穩(wěn)定劑、防腐劑、緩沖劑、抗氧化劑或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它添加劑。注射的持續(xù)時間可以根據(jù)各種因素進(jìn)行調(diào)節(jié)，并且可以包括在幾秒或更少的過程內(nèi)施用的單次注射，至0.5小時、0.1小時、0.25小時、0.5小時、0.75小時、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、11小時、12小時、13小時、14小時、15小時、16小時、17小時、18小時、19小時、20小時、21小時、22小時、23小時或24小時或更多的連續(xù)靜脈內(nèi)施用。優(yōu)選實施方式的化合物可以額外地以其領(lǐng)域建立的方式并以其領(lǐng)域確定的水平使用通常在藥物組合物中發(fā)現(xiàn)的輔助成分。因此，例如組合物可以含有用于組合治療的額外的相容的藥學(xué)活性物質(zhì)(例如輔助抗菌劑、止癢劑、收斂劑、局部麻醉劑、抗炎劑、還原劑、化學(xué)治療劑等)，或者可以含有用于物理性配制優(yōu)選實施方式的各種劑型的材料，例如賦形劑、染料、增稠劑、穩(wěn)定劑、防腐劑或抗氧化劑?？梢耘c優(yōu)選實施方式的化合物組合使用的抗癌劑包括但不限于長春堿類，例如長春堿和長春新堿；蒽環(huán)類，例如多柔比星、柔紅霉素、表柔比星；蒽類，例如比生群和米托蒽醌；表鬼臼毒素，例如依托泊苷(etoposide)和替尼泊苷(teniposide)；以及其他抗癌藥，例如放線菌素d、絲裂霉素c、光輝霉素、甲氨喋呤、多西紫杉醇、依托泊苷(vp-16)、紫杉醇、多西紫杉醇和阿霉素(adriamycin))；以及免疫抑制劑(例如，環(huán)孢菌素a、他克莫司)。在一些實施方式中，本文提供的化合物、組合物和方法可以與組蛋白脫乙酰酶抑制劑(hdac)、極光激酶抑制劑、去甲基化劑(例如5-aza胞苷)、用自然殺傷細(xì)胞的免疫治療、igf-ir抗體、尤文氏抗原抗體、免疫抑制藥物和羥基脲組合。組蛋白脫乙酰酶抑制劑的實例包括伏林司他(vorinostat)、羅米地辛(romidepsin)、帕比司他(panobinostat)、丙戊酸、貝利司他(belinostat)、英西司他(mocetinostat)、吉維司他(givinostat)和曲古抑菌素a。極光激酶抑制劑的實例包括zm447439、橙皮素(hesperadin)和vx-680。去甲基化劑的實例包括5-氮雜胞苷、5-氮雜脫氧胞苷和普魯卡因。免疫抑制藥物的實例包括6-巰基嘌呤和硫唑嘌呤。某些試劑盒優(yōu)選實施方式的化合物可以以試劑盒的形式提供給施用醫(yī)師或其他保健專業(yè)人員。該試劑盒是一個容納容器的包裝，該容器含有在合適的藥物組合物中的化合物，以及將藥物組合物施用于受試者的說明書。試劑盒還可以可選地含有一種或多種另外的治療劑，例如目前用于治療本文所描述的肉瘤的化學(xué)治療劑。例如，可以提供含有一種或多種包含優(yōu)選實施方式的化合物與一種或多種另外的化學(xué)治療劑的組合物的試劑盒，或者可以單獨地提供含有優(yōu)選實施方式的抑制劑的藥物組合物和另外的治療劑。試劑盒還可以含有用于連續(xù)施用或順序施用的單獨劑量的優(yōu)選實施方式的化合物。試劑盒可以可選地含有一個或多個診斷工具和使用說明。試劑盒可以含有合適的遞送裝置(例如注射器等)以及用于施用抑制劑和任何其它治療劑的說明書。試劑盒可以任選地含有儲存、復(fù)溶(reconstitution，如果適用)和包含的任何或所有治療劑的施用的說明書。試劑盒可以包括反映給予受試者的施用次數(shù)的多個容器。使用方法本文提供的一些實施方式涉及治療尤文氏肉瘤家族腫瘤(esft)的方法。esft含有獨特的融合蛋白ews-fli1。esft影響3歲至40歲的患者，大多數(shù)病例發(fā)生在第二個十年。雖然esft衍生的胚胎細(xì)胞類型是未知的，但是腫瘤通常生長在非常接近骨骼的位置，但可以作為軟組織塊發(fā)生。超過40％的存在局部腫瘤的患者將發(fā)展出復(fù)發(fā)性疾病，這些中的大部分將死于esft，而75％至80％的存在轉(zhuǎn)移性esft的患者即使高劑量化療也將在5年內(nèi)死亡(grierhe，krailomd，tarbellnj等，additionofifosfamideandetoposidetostandardchemotherapyforewing'ssarcomaandprimitiveneuroectodermaltumorofbone.nengljmed2003；348(8)：694-701)。甚至在增強(qiáng)劑量化療后，這些生存率在過去20年也沒有改善。為了改善生存并減少治療相關(guān)的發(fā)病率，可以采用如優(yōu)選實施方式中所提供的治療esft患者的新靶向策略。esft的特征在于位于染色體22上的ews基因(尤文氏肉瘤)的中央外顯子與ets家族基因(位于染色體11上的fli1(佛氏白血病插入)、或位于染色體21上的erg)的中央外顯子之間的發(fā)生在95％的腫瘤中的易位(t(11；22)或t(21；22))。ews-fli1融合轉(zhuǎn)錄物編碼具有兩個主要結(jié)構(gòu)域的55kda蛋白(約68kd的電泳遷移)。ews結(jié)構(gòu)域是有效的轉(zhuǎn)錄激活因子，而fli1結(jié)構(gòu)域含有高度保守的etsdna結(jié)合結(jié)構(gòu)域(maywa，lessnicksl，braunbs等，theewing'ssarcomaews/fli-1fusiongeneencodesamorepotenttranscriptionalactivatorandisamorepowerfultransforminggenethanfli-1。molcellbiol1993；13(12)：7393-8)；所得到的ews-fli1融合蛋白作為異常轉(zhuǎn)錄因子。小鼠成纖維細(xì)胞的ews-fli1轉(zhuǎn)化需要ews功能結(jié)構(gòu)域和fli1功能結(jié)構(gòu)域兩者都是完整的(maywa，gishizkyml，lessnicksl等ewingsarcoma11；22translocationproducesachimerictranscriptionfactorthatrequiresthedna-bindingdomainencodedbyfli1fortransformation.procnatlacadsciusa1993；90(12)：5752-6)。ews-fli1是一種突出的治療靶標(biāo)，因為它僅在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，并且是維持esft細(xì)胞系的生長所需要的。使用反義寡脫氧核苷酸(odn)(toretskyja，connelly，neckersl，bhatnk.inhibitionofews-fli-1fusionproteinwithantisenseoligodeoxynucleotides.jneurooncol1997；31(1-2)：9-16；tanakak，iwakumat，harimayak，satoh，iwamotoy.ews-fli1antisenseoligodeoxynucleotideinhibitsproliferationofhumanewing'ssarcomaandprimitiveneuroectodermaltumorcells.jclininvest1997；99(2)：239-47)或小干擾rna(sirna)(ouchidam，ohnot，fujimuray，raovn，reddyes.lossoftumorigenicityofewing'ssarcomacellsexpressingantisensernatoews-fusiontranscripts.oncogene1995；11(6)：1049-54；maksimenkoa，malvyc，lambertg等oligonucleotidestargetedagainstajunctiononcogenearemadeefficientbynanotechnologies.pharmres2003；20(10)：1565-7；kovarh，aryeedn，jugg等ews/fli-1antagonistsinducegrowthinhibitionofewingtumorcellsinvitro.cellgrowthdiffer1996；7(4)：429-37)的ews-fli1表達(dá)水平的降低引起裸鼠中的esft細(xì)胞系增殖減少和腫瘤消退。納米技術(shù)的最新進(jìn)展已經(jīng)改善了sirna的遞送和控釋，但是利用目前的技術(shù)，人類ews-fli1的反義odn降低和sirna降低兩者都不可能(maksimenkoa，malvyc，lambertg等oligonucleotidestargetedagainstajunctiononcogenearemadeefficientbynanotechnologies。pharmres2003；20(10)：1565-7；lambertg，bertrandjr，fattale等ewsfli-1antisensenanocapsulesinhibitsewingsarcoma-relatedtumorinmice。biochembiophysrescommun2000；279(2)：401-6)。ews-fli1靶向的一個有趣的途徑是使用sirna降低的ews-fli1和小分子文庫之間的比較表達(dá)，導(dǎo)致了ara-c的臨床試驗(stegmaierk，wongjs，rosskn等signature-basedsmallmoleculescreeningidentifiescytosinearabinosideasanews/flimodulatorinewingsarcoma.plosmedicine2007；4(4)：e122)。鑒定ara-c的這種方法還表明多柔比星和嘌呤霉素會降低ews-fli1水平。目前，多柔比星作為esft患者的標(biāo)準(zhǔn)療法，但是生存率遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能接受(grierhe，krailomd，tarbellnj等additionofifosfamideandetoposidetostandardchemotherapyforewing'ssarcomaandprimitiveneuroectodermaltumorofbone.nengljmed2003；348(8)：694-701)。目前，正在ii期試驗中評估ara-c在esft患者中的使用。雖然希望這代表了所需要的臨床突破，但是它肯定表明ews-fli1的小分子靶向的重要性。優(yōu)選的實施方式提供從關(guān)鍵蛋白伙伴中破壞ews-fli1的小分子蛋白-蛋白相互作用抑制劑(smppii)，從而實現(xiàn)ews-fli1的腫瘤特異性和更精確的靶向。ews-fli1是一種很好的治療靶標(biāo)，因為它僅在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)；然而，靶向該腫瘤特異性癌基因的能力以前還未成功。朝向小分子發(fā)展的挑戰(zhàn)之一是ews-fli1缺乏任何已知的酶結(jié)構(gòu)域，并且酶結(jié)構(gòu)域被認(rèn)為對靶向治療是關(guān)鍵的。此外，ews-fli1是一種無序蛋白，表明它不顯示可用于基于結(jié)構(gòu)的藥物設(shè)計的剛性結(jié)構(gòu)(urena，tcherkasskayao，toretskyja.recombinantews-fli1oncoproteinactivatestranscription。biochemistry2004；43(42)：13579-89)。事實上，ews-fli1的無序性質(zhì)對于其轉(zhuǎn)錄調(diào)控是關(guān)鍵的(ngkp，potikyang，savenero，dennyct，uverskyvn，leeka.multiplearomaticsidechainswithinadisorderedstructurearecriticalfortranscriptionandtransformingactivityofewsfamilyoncoproteins.procnatlacadsciusa2007；104(2)：479-84)。特別是因為它們的生物化學(xué)無序性質(zhì)，無序蛋白被認(rèn)為是小分子蛋白-蛋白相互作用抑制劑的更有吸引力的靶標(biāo)(chengy，legallt，oldfieldcj等rationaldrugdesignviaintrinsicallydisorderedprotein.trendsbiotechnol2006；24(10)：435-42)。ews-fli1在體外和體內(nèi)結(jié)合rna解旋酶a。據(jù)認(rèn)為ews-fli1的蛋白-蛋白相互作用會有助于其致癌潛力；因此已經(jīng)尋求了與ews-fli1直接相互作用并功能性調(diào)控ews-fli1的新型蛋白。轉(zhuǎn)錄活躍的重組ews-fli1(urena，tcherkasskayao，toretskyja.recombinantews-fli1oncoproteinactivatestranscription.biochemistry2004；43(42)：13579-89)用作篩選商業(yè)噬菌體展示肽庫的靶標(biāo)。從噬菌體測序鑒定了與ews-fli1差異化結(jié)合的28種新型肽。國家生物技術(shù)信息中心數(shù)據(jù)庫搜索與這些肽同源的人類蛋白，鑒定了與人類rna解旋酶a的aa823-832(rha，基因庫序列號a47363)同源的肽(toretskyja，erkizanv，levensona等oncoproteinews-fli1activityisenhancedbyrnahelicasea.cancerres2006；66(11)：5574-81)。雖然ews-fli1對esft細(xì)胞是非常特異性的，但是ews和rha是普遍表達(dá)的。ews-fli1和rha之間的區(qū)域被可能具有特異性的分子治療劑靶向；因為ews-fli1僅在腫瘤中表達(dá)并且與rha的相互作用點會是唯一的。本文提供了治療劑，即小分子蛋白-蛋白相互作用抑制劑，以抑制ews-fli1的功能。大多數(shù)易位融合蛋白肉瘤預(yù)示著不良預(yù)后，包括esft。導(dǎo)致獨特的和關(guān)鍵的融合蛋白ews-fli1的染色體易位t(11；22)是一個完美的癌癥靶標(biāo)。許多其他肉瘤共用類似的易位變體(表2，來自helmanlj，meltzerp.mechanismsofsarcomadevelopment.natrevcancer2003；3(9)：685-94)。已經(jīng)報道了胰腺實性假乳頭狀瘤中的ews-fli1易位(maitraa.等detectionoft(11；22)(q24；q12)translocationandews-fli-1fusiontranscriptinacaseofsolidpseudopapillarytumorofthepancreas.pediatrdevpathol2000；3：603-605)，然而ews-fli1在所有實性假乳頭狀瘤中的作用仍有待解決(katharinatiemann等solidpseudopapillaryneoplasmsofthepancreasareassociatedwithfli-1expression，butnotwithews/fli-1translocation)。ews同系物或fli1同系物是發(fā)生在廣泛的肉瘤和白血病中的易位伙伴。ews或其同系物tls或fus參與透明細(xì)胞肉瘤、粘液樣脂肪肉瘤、促結(jié)締組織增生性小圓細(xì)胞腫瘤、軟骨肉瘤和急性髓性白血病的染色體易位。fli1屬于ets基因家族。在大約10％的尤文氏肉瘤和20％的急性髓性白血病中，fli1同源物erg被易位。這提示ews-fli1可以作為影響大量患者的家族疾病(由易位伙伴相關(guān))的模式系統(tǒng)(urena.，tcherkasskayao和toretskyj.a.recombinantews-fli1oncoproteinactivatestranscription.biochemistry43(42)13579-89(2004))。erg也在前列腺癌中易位，其中tmprss2：erg融合暗示可以定義疾病進(jìn)展風(fēng)險的獨特分子亞型(f.demichelis等，tmprss2：erggenefusionassociatedwithlethalcancerinawatchfulwaitingcohort.oncogene(2007)26，4596-4599)。觀察到ews家族成員或fli1家族成員易位的其他疾病包括前列腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、急性髓性白血病、乳腺癌、頭頸癌、黑色素瘤、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌和子宮癌(janknecht，ralf；shin，sook和oh，sangphil，etv1，4and5：anoncogenicsubfamilyofetstranscriptionfactors.biochim.biophys.acta1826(1)，1-12(2012))。因此，優(yōu)選實施方式的治療劑具有應(yīng)用于許多其它腫瘤的潛力。更廣泛地，一些不易治療的白血病也具有涉及混合譜系白血病基因(mll，11q23)的易位產(chǎn)生的融合蛋白，我們的工作可以作為一個非常耐治療的癌癥組的范例(puich，chessellsjm，camittab等clinicalheterogeneityinchildhoodacutelymphoblasticleukemiawith11q23rearrangements.leukemia2003；17(4)：700-6)。因此，實施方式包括其中發(fā)生易位的癌癥。易位融合基因列于表1。表1許多疾病包括ets基因的過表達(dá)或ets基因融合，即包含ets基因的基因易位。這樣的ets基因的實例包括fli1、erg、etv1和etv4。融合基因的實例包括ews-fli、tmprss2-erg。表1a列出了其中一個或多個ets基因家族成員過表達(dá)和/或被重排的一些癌癥。表1a適應(yīng)癥本文提供的某些化合物、組合物和方法可用于治療多種疾病，例如包含易位基因融合的腫瘤或腫瘤細(xì)胞，例如表1所列的那些，尤文氏肉瘤、前列腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、急性髓性白血病、乳腺癌、頭頸癌、黑色素瘤、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌和子宮癌。本文提供的方法的一些實施方式包括抑制細(xì)胞增殖的方法。在一些實施方式中，細(xì)胞過表達(dá)ets基因。在一些實施方式中，過表達(dá)的ets基因可以包括fli1、erg、etv1或etv4。在一些實施方式中，細(xì)胞包含ets融合基因。在一些實施方式中，ets融合基因可以包括ets基因，例如fli1、erg、etv1和etv4。實施例式(i)的化合物的制備根據(jù)本文提出的合成方案制備式(i)的化合物。在甲醇(5ml)中，在二乙胺(10滴)存在下，將式(ii)的酮(4.0當(dāng)量)與式(iii)的靛紅衍生物(1.0當(dāng)量)縮合，并將混合物在室溫攪拌24小時。將反應(yīng)混合物濃縮并用使用二氯甲烷/甲醇作為洗脫劑的快速色譜純化，得到純的產(chǎn)物。通過用甲醇重結(jié)晶進(jìn)行進(jìn)一步純化。選擇酮上和靛紅衍生物上的取代基，以得到以下標(biāo)記為實施例1至實施例23的式(i)的化合物。對由此獲得的實施例1至實施例26的化合物，使用varian-400光譜儀(400mhz)記錄1hnmr圖譜。化學(xué)位移以四甲基硅烷為內(nèi)標(biāo)以ppm為單位低場給出，并且耦合常數(shù)(j值)以赫茲(hz)為單位給出。通過將異構(gòu)體混合物溶解在甲醇/二氯甲烷(4/1)混合物或純甲醇中進(jìn)行手性分離，并使用chiralpakia柱(250mm×4.6mm；粒徑5μm)通過超臨界流體色譜(sfc)進(jìn)行分離，并使用甲醇/二氧化碳(50/50)的混合物洗脫。在真空條件下除去溶劑，得到純對映異構(gòu)體。在一些實施方式中，可以根據(jù)以下合成方案制備化合物。在這些方案中，將酮(4.0當(dāng)量)和催化量的二乙胺(10滴)加入到取代的靛紅(1.0當(dāng)量)在甲醇(5ml)中的溶液中。將混合物在室溫下攪拌直到起始材料(取代的靛紅)完全消失。將所得溶液濃縮并用于用己烷/乙酸乙酯洗脫的快速色譜，以定量收率得到純產(chǎn)物。用己烷/乙酸乙酯重結(jié)晶進(jìn)行進(jìn)一步純化。通過以上方案合成的示例化合物包括：4，7-二氯-3-羥基-3-[2-(4-甲氧基苯基-2-氧代乙基)]-1，3-二氫吲哚-2-酮：白色固體，熔點149-151℃；1hnmr(dmso，400mhlz)δ10.93(s，1h)，7.86(d，2h，j＝9.2hz)，7.26(d，1h，j＝8.8hz)，6.98(d，2h，j＝8.8hz)，6.86(d，1h，j＝8.4hz)，6.39(s，1h)，4.31(d，1h，j＝18.0hz)，3.80(s，3h)，3.61(d，1h，j＝18.0hz)。在一些實施方式中，可以根據(jù)以下合成方案制備化合物。在這樣的實施方式中，可以在催化量的二乙胺的存在下將適當(dāng)?shù)谋揭彝?，7-二氯靛紅縮合，以定量收率制備所需化合物。示例性合成包括以下：將4，7-二氯靛紅(4,7-dichloroisotin)(30.05g，139.1mmol，1.0當(dāng)量，alfaaesar批號10173559)和meoh(450ml，15體積)加入到裝配有氮氣管線、頂置式機(jī)械攪拌器和溫度探頭的2l三頸圓底燒瓶中。在3分鐘內(nèi)加入二乙胺(3.25g，0.32當(dāng)量，sigma-aldrich批號shbd5313v)(漿液變成深紅色)。觀察到溫度的非常輕微的升高(從17.5℃到18.8℃)。然后通過塑料漏斗加入1-[4-(二甲基氨基)苯基]乙酮2(44.3g，1.95當(dāng)量，arkpharm批號0000197-130717000)，并且將漏斗用meoh(75ml，2.5體積)沖洗。觀察到反應(yīng)溫度降低至15.1℃。在攪拌幾分鐘后，得到具有少量未溶解顆粒的深紅色溶液。將該溶液在環(huán)境溫度下攪拌，并定期取樣用于通過hplc的過程控制(ipc)。反應(yīng)23小時后，通過注射器加入另外的二乙胺(1.42g，0.14當(dāng)量)，并在環(huán)境溫度下繼續(xù)攪拌。在40.5小時后，形成輕質(zhì)漿液。對總共4.47當(dāng)量的苯乙酮2，固體2分批加入(54.1g，2.38當(dāng)量，arkpharm批號0000197-130717000和3.2g，0.14當(dāng)量，tci批號gk01-brah)。在反應(yīng)88小時后，通過hplc的ipc顯示小于1％auc的靛紅1存在于反應(yīng)混合物中。形成了重質(zhì)沉淀。4.5天后，將反應(yīng)混合物在減壓(水浴<40℃)下濃縮，然后在高真空下濃縮，得到約84g固體混合物，批號bio-w-22-11。將固體溶于二氯甲烷(385ml)和meoh(140ml)的混合物中，并吸附在100g硅膠上。在減壓下除去溶劑，并將干燥的產(chǎn)物/二氧化硅混合物裝載到含有硅膠(1kg，預(yù)先填充有庚烷)的柱子上進(jìn)行快速色譜純化。用含10％乙酸乙酯的庚烷溶液開始洗脫，并施加直至100％乙酸乙酯的梯度，然后轉(zhuǎn)換為含10％甲醇的乙酸乙酯溶液。收集500ml直至2l的級分。將含產(chǎn)物的級分(其中產(chǎn)物已經(jīng)開始沉淀)合并，并濃縮至約1l。將所得沉淀濾出，在etoac/meoh(75：25比例，200ml)中重新成漿、過濾并用meoh清洗，得到第一批化合物。將第一濾液濃縮至低體積，加入meoh以沉淀第二批化合物。將來自兩批的分離的濾液合并、濃縮至低體積、溶于25mlmeoh中，并將所得固體過濾，得到第三批化合物。所有三批在高真空下在環(huán)境溫度下干燥一天，在40℃下干燥四天?？偟暮喜⒅亓繛?0.03g，相當(dāng)于化合物產(chǎn)率為76％(未經(jīng)純度或溶劑含量校正)。固體是灰白色(帶有非常淡的黃色至桃色的陰影)。另一個示例合成包括以下：將4，7-二氯靛紅(4.26g，19.7mmol，1當(dāng)量，alfaaesar批號10173559)和meoh(70ml，16.4體積)加入到裝配有氮氣管線、頂置式機(jī)械攪拌器和溫度探頭的250ml三頸圓底燒瓶中。在1分鐘內(nèi)通過注射器加入二乙胺(0.43g，0.30當(dāng)量，sigma-aldrich批號shbd5313v)(漿液變成深紅色)。在15分鐘內(nèi)通過塑料漏斗分批加入1-[4-(甲基氨基)苯基]乙酮3(11.4g，3.9當(dāng)量，sigma-aldrich批號01129hhv)。漏斗用meoh(2×15ml，7.0體積)沖洗。將反應(yīng)物在環(huán)境溫度(約18-20℃)下攪拌，并定期取樣用于通過hplc的過程控制(ipc)。反應(yīng)40小時后，通過注射器將另外的二乙胺(0.16g，0.11當(dāng)量)加入到反應(yīng)中，并在環(huán)境溫度下繼續(xù)攪拌。64小時后，形成輕質(zhì)漿液。通過注射器將另外的二乙胺(0.13g，0.09當(dāng)量)加入到反應(yīng)中，并在環(huán)境溫度下繼續(xù)攪拌。反應(yīng)92小時后，通過hplc分析的ipc顯示2.1％auc的靛紅1存在于反應(yīng)混合物中。通過注射器將另外的二乙胺(0.07g，0.05當(dāng)量)加入到反應(yīng)中，總共0.55當(dāng)量堿，并在環(huán)境溫度下持續(xù)攪拌過周末?？偣财咛旌?，將反應(yīng)物在減壓(水浴<40℃)下濃縮，固體殘余物在30℃下溶于二氯甲烷(450ml)和meoh(50ml)的混合物中，并吸附在20g硅膠上。在具有redisep一次性閃蒸220g硅膠柱(目錄號69-2203-422)的combiflashcompaniontmxl系統(tǒng)中進(jìn)行純化。用二氯甲烷(約20柱體積)完成殘余的起始材料3的洗脫，而產(chǎn)物tk-202用含10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫。將含產(chǎn)物的級分(其中產(chǎn)物已經(jīng)開始沉淀)合并成兩個不同的批次并在減壓下部分濃縮。過濾得到的漿液，并用meoh洗滌固體塊狀物，得到兩個級分，該兩個級分在高真空下在環(huán)境溫度下干燥24小時，然后在50℃下干燥24小時，得到批號bio-w-30-17和批號bio-w-30-18。將兩次結(jié)晶的濾液合并并進(jìn)行第二次色譜純化(在40gredisepgold柱上，目錄號69-2203-347)，使用二氯甲烷至含5％甲醇的二氯甲烷溶液的梯度洗脫。合并含有產(chǎn)物的級分(純度高于通過hplc的99％auc)，并使產(chǎn)物在2小時內(nèi)沉淀。濾出固體，用甲醇洗滌，并在50℃下在高真空下干燥24小時，得到批號biow-30-19。合并含有通過hplc的大約95％auc純度的產(chǎn)物的第二組級分，將固體濾出，再溶解在二氯甲烷中，并加入20％甲醇沉淀過夜。將沉淀的tk-202過濾并用甲醇洗滌，然后在50℃下在高真空下干燥24小時，得到批號bio-w-30-16?？偟暮喜⒅亓繛?.99g，相當(dāng)于化合物產(chǎn)率為83％。固體是灰白色(帶有非常淺的桃色至棕褐色的陰影)。4，7-二氯-3-羥基-3-(2-(4-(甲基磺?；?苯基)-2-氧代乙基)吲哚-2-酮(實施例1)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ3.28(s，3h)，3.81(d，1h，j＝16hz)，4.42(d，1h，j＝16hz)，6.53(s，1h)，6.92(d，1h，j＝8hz)，7.32(d，1h，j＝8hz)，8.05(d，2h，j＝8hz)，8.17(d，2h，j＝8hz)，11.04(s，1h)。3-(2-(4-(氮雜環(huán)丙烷基-1-基)苯基)-2-氧代乙基)-4，7-二氯-3-羥基吲哚-2-酮(實施例2)：向4，7-二氯吲哚-2，3-二酮(a)(300mg，1.39mmol)的15ml甲醇溶液中加入1-(4-((氮雜環(huán)丙烷-1-基)苯基)乙酮(b)(0.9g，5.5mmol)和10滴二乙胺(2)。將反應(yīng)物在50℃下攪拌24小時。除去溶劑，并將殘余物用快速色譜(0-5％甲醇/ch2cl2)純化，得到灰白色固體。3-(2-(4-(氮雜環(huán)丙烷-1-基)苯基)-2-氧代乙基)-4，7-二氯-3-羥基吲哚-2-酮(實施例2)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ2.16(s，4h)，3.64(d，1h，j＝16hz)，4.32(d，1h，j＝16hz)，6.41(s，1h)，6.89(d，1h，j＝8hz)，7.05(d，2h，j＝8hz)，7.30(d，1h，j＝8hz)，7.80(d，2h，j＝8hz)，10.95(s，1h)。4，7-二氯-3-羥基-3-(2-(4-異丙基苯基)-2-氧代乙基)吲哚-2-酮(實施例3)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ1.21(d，6h，j＝4hz)，2.95(m，1h)，3.69(d，1h，j＝16hz)，4.39(d，1h，j＝16hz)，6.45(s，1h)，6.90(d，1h，j＝8hz)，7.29(d，1h，j＝8hz)，7.38(d，2h，j＝8hz)，7.85(d，2h，j＝8hz)，10.98(s，1h)。4，7-二氯-3-(1-(4-(二甲基氨基)苯基)-1-氧代丙-2-基)-3-羥基吲哚-2-酮(實施例4)：1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ1.48(d，3h，j＝8hz)，3.00(s，6h)，4.78(m，1h)，6.35(s，1h)，6.66(d，j＝8hz)，6.76(d，1h，j＝8hz)，7.17(d，1h，j＝8hz)，7.69(d，2h，j＝8hz)，10.74(s，1h)。4，7-二氯-3-(2-(4-環(huán)丙基苯基)-2-氧代乙基)-3-羥基吲哚-2-酮(實施例7)：向4，7-二氯吲哚-2，3-二酮(a)(300mg，1.39mmol)的15ml甲醇溶液中加入1-(4-環(huán)丙基苯基)乙酮(b)(0.9g，5.5mmol)和10滴二乙胺(2)。將反應(yīng)物在50℃下攪拌24小時。除去溶劑，并將殘余物用快速色譜(0-5％甲醇/ch2cl2)純化，得到灰白色固體。4，7-二氯-3-(2-(4-環(huán)丙基苯基)-2-氧代乙基)-3-羥基吲哚-2-酮(實施例7)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ0.76(m，2h)，1.06(m，2h)，2.0(m，1h)，3.65(d，1h，j＝16hz)，4.35(d，1h，j＝16hz)，6.43(s，1h)，6.89(d，1h，j＝8hz)，7.19(d，2h，j＝8hz)，7.30(d，1h，j＝8hz)，7.79(d，2h，j＝8hz)，10.97(s，1h)。3-(2-(4-(1h-吡唑-1-基)苯基)-2-氧代乙基)-4，7-二氯-3-羥基吲哚-2-酮(實施例8)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ3.72(d，1h，j＝16hz)，4.41(d，1h，j＝16hz)，6.47(s，1h)，6.62(d，1h，j＝4hz)，6.90(d，1h，j＝8hz)，7.31(d，1h，j＝8hz)，7.84(d，1h，j＝4h)，7.99(d，2h，j＝8hz)，8.06(d，2h，j＝8hz)，8.66(d，1h，j＝4hz)，10.98(s，1h)。4，7-二氯-3-羥基-3-(2-氧代-2-(4-(吡咯烷-1-基)苯基)乙基)吲哚-2-酮(實施例10)：向4，7-二氯吲哚-2，3-二酮(a)(12.5g，0.06mol)的800ml甲醇溶液中加入1-(4-(吡咯烷-1-基)苯基)乙酮(b)(45g，0.24mol)和0.5ml二乙胺(2)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌24小時。除去溶劑，并將殘余物用快速色譜(0-5％甲醇/ch2cl2)純化，得到13.5g棕色固體。用使用乙酸乙酯/己烷的快速色譜再次純化，得到11.5g灰白色固體。以相同尺度重復(fù)反應(yīng)得到另外11.5g產(chǎn)物。將兩批產(chǎn)物合并，并從甲醇中重結(jié)晶，得到20.5g灰白色固體。4，7-二氯-3-羥基-3-(2-氧代-2-(4-(吡咯烷-1-基)苯基)乙基)吲哚-2-酮(實施例10)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ1.96(m，4h)，3.30(m，4h)，3.65(d，1h，j＝16hz)，4.29(d，1h，j＝16hz)，6.34(s，1h)，6.53(d，2h，j＝8hz)，6.88(d，1h，j＝8hz)，7.28(d，1h，j＝8hz)，7.72(d，2h，j＝8hz)，10.97(s，1h)。在以下條件下進(jìn)行手性分離。準(zhǔn)備方法采用以下：regiscell柱l：250mm，is：50mm，粒徑：5μm；流動相：甲醇/co2，比例：35/65，檢測波長：254nm，流速：325g/min，共溶劑流速113.75ml/min。將19.72g溶解在1000ml甲醇中，濃度為0.020g/ml。注射體積為25.00ml，總量為0.500g/注射。產(chǎn)量為(+)：9.73g，在20℃的旋光度為+247且(-)：9.26g。4-(2-(4，7-二氯-3-羥基-2-氧代吲哚-3-基)乙?；?苯磺酰胺(實施例11)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ3.78(d，1h，j＝16hz)，4.41(d，1h，j＝16hz)，6.51(s，1h)，6.90(d，1h，j＝8hz)，7.31(d，1h，j＝8hz)，7.56(s，2h)，7.91(d，2h，j＝8hz)，8.11(d，2h，j＝8hz)，10.98(s，1h)。4，7-二氯-3-(2-(3-氟-4-(吡咯烷-1-基)苯基)-2-氧代乙基)-3-羥基吲哚-2-酮(實施例12)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ1.91(m，4h)，3.46(m，4h)，3.57(d，1h，j＝16hz)，4.27(d，1h，j＝16hz)，6.36(s，1h)，6.71(t，1h，j＝4hz，j＝8hz)，7.29(d，1h，j＝8hz)，7.46(d，1h，j＝8hz)，7.61(d，1h，j＝4hz)，7.64(d，1h，j＝8hz)，11.01(s，1h)。3-(2-(4-(氮雜環(huán)丁烷-1-基)苯基)-2-氧代乙基)-4，7-二氯-3-羥基吲哚-2-酮(實施例13)向4，7-二氯吲哚-2，3-二酮(a)(300mg，1.39mmol)的15ml甲醇溶液中加入1-(4-(氮雜環(huán)丁烷-1-基)苯基)乙基-1-酮(b)(972mg，5.5mmol)和幾滴二乙胺(2)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌24小時。除去溶劑，并將殘余物用快速色譜(0-5％甲醇/ch2cl2)純化，得到灰白色固體。3-(2-(4-(氮雜環(huán)丁烷-1-基)苯基)-2-氧代乙基)-4，7-二氯-3-羥基吲哚-2-酮(實施例13)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ2.32(m，2h)，3.51(d，1h，j＝16hz)，3.95(m，4h)，4.30(d，1h，j＝16hz)，6.35(s，1h)，6.36(d，2h，j＝8hz)，6.87(d，1h，j＝8hz)，7.28(d，1h，j＝8hz)，7.73(d，2h，j＝8hz)，10.89(s，1h)。4，7-二氯-3-羥基-3-(2-(4-甲氧基環(huán)己基)-2-氧代乙基)吲哚-2-酮(實施例14)：灰白色固體；1hnmr(cdcl3，400mhz)δ1.24(m，4h)，1.92(m，2h)，2.08(m，2h)，2.32(m，1h)，3.06(m，1h)，3.26(s，3h)，3.33(d，1h，j＝16hz)，3.69(s，1h)，3.70(d，1h，j＝16hz)，6.91(d，1h，j＝8hz)，7.20(d，1h，j＝8hz)，7.61(s，1h)。4，7-二氯-3-羥基-3-(2-(4-甲氧基雙環(huán)[2.2.2]辛-1-基)-2-氧代乙基)吲哚-2-酮(實施例15)：灰白色固體；1hnmr(cdcl3，400mhz)δ1.59(m，12h)，3.16(s，3h)，3.22(d，1h，j＝16hz)，3.58(s，1h)，4.14(d，1h，j＝16hz)，6.90(d，1h，j＝8hz)，7.23(d，1h，j＝8hz)，7.67(s，1h)。4，7-二氯-3-(2-(4-(二甲基氨基)雙環(huán)[2.2.2]辛-1-基)-2-氧代乙基)-3-羥基吲哚-2-酮(實施例16)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ1.59(m，12h)，2.5(s，3h)，3.18(d，1h，j＝16hz)，3.85(d，1h，j＝16hz)，6.31(s，1h)，6.90(d，1h，j＝8hz)，7.30(d，1h，j＝8hz)，10.95(s，1h)。4，7-二氯-3-(2-(4-環(huán)丙基-3-氟苯基)-2-氧代乙基)-3-羥基吲哚-2-酮(實施例17)：向4，7-二氯吲哚-2，3-二酮(a)(261mg，1.21mmol)的15ml甲醇溶液中加入1-(4-環(huán)丙基-3-氟苯基)乙酮(b)(280mg，1.57mmol)和10滴二乙胺(2)。將反應(yīng)物在50℃下攪拌24小時。除去溶劑并將殘余物用快速色譜(0-5％甲醇/ch2cl2)純化，得到灰白色固體。4，7-二氯-3-(2-(4-環(huán)丙基-3-氟苯基)-2-氧代乙基)-3-羥基吲哚-2-酮(實施例17)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ0.83(m，2h)，1.08(m，2h)，2.11(m，1h)，3.68(d，1h，j＝16hz)，4.34(d，1h，j＝16hz)，6.43(s，1h)，6.90(d，1h，j＝8hz)，7.11(m，1h)，7.30(d，1h，j＝8hz)，7.60(d，1h，j＝8hz)，7.68(d，1h，j＝8hz)，10.96(s，1h)。通過與上述方法基本相似的方法進(jìn)行手性分離。使用柱：ad-h，250mm×4.6mm，5μm，己烷/乙醇(65/35)，1.5ml/min，進(jìn)樣體積：10.0μl，壓力：102.9巴，進(jìn)行l(wèi)c篩選。峰1：保留時間：5.40分鐘，寬度：0.171分鐘，面積：4502.21，面積百分比：50.08。峰2：保留時間：7.23分鐘，寬度：0.239分鐘，面積：4488.43，面積百分比：49.92。4，7-二氯-3-(2-(4-環(huán)丙基-2-氟苯基)-2-氧代乙基)-3-羥基吲哚-2-酮(實施例18)：向4，7-二氯吲哚-2，3-二酮(a)(261mg，1.21mmol)的15ml甲醇溶液中加入1-(4-環(huán)丙基-2-氟苯基)乙酮(b)(280mg，1.57mmol)和10滴二乙胺(2)。將反應(yīng)物在50℃下攪拌24小時。除去溶劑，并將殘余物用快速色譜(0-5％甲醇/ch2cl2)純化，得到灰白色固體。4，7-二氯-3-(2-(4-環(huán)丙基-2-氟苯基)-2-氧代乙基)-3-羥基吲哚-2-酮(實施例18)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ0.82(m，2h)，1.07(m，2h)，2.01(m，1h)，3.66(d，1h，j＝16hz)，4.26(d，1h，j＝16hz)，6.44(s，1h)，6.91(d，1h，j＝8hz)，7.01(m，2h)，7.31(d，1h，j＝8hz)，7.57(m，1h)，10.96(s，1h)。通過與上述方法基本相似的方法進(jìn)行手性分離。通過柱：regiscell，250mm×4.6mm，5μm，己烷/ipa(80/20)，1.5ml/min，進(jìn)樣體積：2.0μl，壓力：51.5巴，進(jìn)行l(wèi)c篩選。峰1：保留時間：5.16分鐘，寬度：0.238分鐘，面積：3716.20，面積百分比：49.78。峰2：保留時間：6.49分鐘，寬度：0.324分鐘，面積：3749.55，面積百分比：50.22。4-氯-7-氟-3-羥基-3-(2-(4-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)吲哚-2-酮(實施例19)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ3.63(d，1h，j＝16hz)，3.84(s，3h)，4.36(d，1h，j＝16hz)，6.38(s，1h)，6.88(d，1h，j＝8hz)，7.02(d，2h，j＝8hz)，7.16(m，1h)，7.89(d，2h，j＝8hz)，11.01(s，1h)。4，7-二氯-3-羥基-3-(2-(4-嗎啉代苯基)-2-氧代乙基)吲哚-2-酮(實施例20)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ3.28(m，4h)，3.53(d，1h，j＝16hz)，3.71(m，4h)，4.33(d，1h，j＝16hz)，6.37(s，1h)，6.87(d，1h，j＝8hz)，6.97(d，2h，j＝8hz)，7.30(d，1h，j＝8hz)，7.77(d，2h，j＝8hz)，10.95(s，1h)。4，7-二氯-3-羥基-3-(2-氧代-2-(吡啶-4-基)乙基)吲哚-2-酮(實施例21)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ3.78(d，1h，j＝16hz)，4.39(d，1h，j＝16hz)，6.53(s，1h)，6.92(d，1h，j＝8hz)，7.32(d，1h，j＝8hz)，7.79(d，2h，j＝4hz)，8.80(d，2h，j＝4hz)，11.03(s，1h)。4，7-二氯-3-羥基-3-(2-氧代-2-(吡啶-3-基)乙基)吲哚-2-酮(實施例22)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ3.78(d，1h，j＝16hz)，4.39(d，1h，j＝16hz)，6.50(s，1h)，6.90(d，1h，j＝8hz)，7.30(d，1h，j＝8hz)，7.57(m，1h)，8.28(d，1h，j＝4hz)，8.80(d，1h，j＝4hz)，9.09(s，1h)，11.03(s，1h)。4，7-二氯-3-羥基-3-(2-氧代-2-(吡啶-2-基)乙基)吲哚-2-酮(實施例23)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ3.78(d，1h，j＝16hz)，4.68(d，1h，j＝16hz)，6.50(s，1h)，6.90(d，1h，j＝8hz)，7.30(d，1h，j＝8hz)，7.70(d，1h，j＝4hz)，7.81(d，1h，j＝4hz)，7.98(m，1h)，8.76(s，1h)，11.01(s，1h)。4-(2-(4，7-二氯-3-羥基-2-氧代吲哚-3-基)乙酰基)苯甲酰胺(實施例24)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ3.74(d，1h，j＝16hz)，4.42(d，1h，j＝16hz)，6.49(s，1h)，6.92(d，1h，j＝8hz)，7.31(d，1h，j＝8hz)，7.57(s，1h)，7.95(d，2h，j＝8hz)，7.97(d，2h，j＝8hz)，8.10(s，1h)，11.01(s，1h)。4，7-二氯-3-羥基-3-(2-(4-羥基苯基)-2-氧代乙基)吲哚-2-酮(實施例25)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ3.60(d，1h，j＝16hz)，4.30(d，1h，j＝16hz)，6.39(s，1h)，6.82(d，2h，j＝8hz)，6.90(d，1h，j＝8hz)，7.30(d，1h，j＝8hz)，7.80(d，2h，j＝8hz)，10.45(s，1h)，10.93(s，1h)。4，7-二氯-3-(2-(3，4-二氟苯基)-2-氧代乙基)-3-羥基吲哚-2-酮(實施例26)：灰白色固體；1hnmr(dmso-d6，400mhz)δ3.70(d，1h，j＝16hz)，4.37(d，1h，j＝16hz)，6.48(s，1h)，6.91(d，1h，j＝8hz)，7.30(d，1h，j＝8hz)，7.56(m，1h)，7.96(m，1h)，8.01(m，1h)，11.01(s，1h)?；衔锏纳锘钚詼y定了表2中列出的某些化合物的生物活性。表2化合物的活性用使用cck-8試劑盒(sigma-aldrich；stlouis，mo)的改進(jìn)的四唑鎓鹽試驗來測量人腫瘤細(xì)胞生長的抑制。將腫瘤細(xì)胞(每孔5000-7500)加入到96孔板中并使其附著4小時至5小時。將化合物序列地稀釋并以0.02μm至5μm的濃度一式三份加入。包含dmso作為溶媒對照。細(xì)胞在化合物存在下孵育3天。孵育后，向各孔中加入cck-8試劑并孵育2小時至4小時。在450nm的波長下用分光光度法定量活細(xì)胞。每個樣品的存活百分比由a450值計算如下：％存活率＝(a450nm樣品/a450nmdmso處理的細(xì)胞×100)。ic50定義為導(dǎo)致50％的細(xì)胞存活抑制的濃度。使用skes細(xì)胞(尤文氏肉瘤細(xì)胞系)測定特定化合物的ic50活性。結(jié)果匯總在表3中。使用表4中列出的細(xì)胞系測定特定化合物的ic50活性。表3表4細(xì)胞系腫瘤類型ets家族重排skes尤文氏肉瘤ews-fli12型a4573尤文氏肉瘤ews-fli13型tc71尤文氏肉瘤ews-fli11型lncap前列腺重排的etv1pc3前列腺無mda-mb-231乳腺增加的etv1mcf7乳腺無bxpc3胰腺增加的fli1panc1胰腺無某些化合物的ic50的結(jié)果匯總?cè)缦拢夯衔?：skes：c；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?：skes：b；a4573：b；tc71：b；lncap：b；pc3：a；mda-mb-231：b；mcf7：a；bxpc3：b；和panc1：a。化合物3：skes：c；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c。化合物4：skes：a；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c。化合物5：skes：c；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c。化合物6：skes：c；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?：skes：c；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?：skes：b；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?：skes：a；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c。化合物10：skes：a；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?1：skes：b；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c。化合物12：skes：c；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?3：skes：a；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c。化合物14：skes：b；a4573：b；tc71：b；lncap：b；pc3：a；mda-mb-231：b；mcf7：a；bxpc3：b；和panc1：a?；衔?5：skes：c；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c。化合物16：skes：a；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?7：skes：a；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?8：skes：b；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c。化合物19：skes：c；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?0：skes：a；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?1：skes：a；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c。化合物22：skes：b；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c。化合物23：skes：a；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c。化合物24：skes：a；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?5：skes：a；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?6：skes：b；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?7：skes：b；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?8：skes：a；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?9：skes：a；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?0：skes：a；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?1：skes：a；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?2：skes：a；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?3：skes：a；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c。化合物34：skes：a；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?5：skes：a；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?6：skes：c；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c?；衔?7：skes：c；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c。化合物38：skes：c；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c。化合物39：skes：c；a4573：c；tc71：c；lncap：c；pc3：c；mda-mb-231：c；mcf7：c；bxpc3：c；和panc1：c。a表示ic50>5μm；b表示ic50<5μm；并且c表示不確定。在異種移植研究中，將a4573腫瘤細(xì)胞移植入小鼠。用某些化合物(口服，一天兩次)處理小鼠。在不同時間測量a4573腫瘤的平均體積。相對于溶媒對照，化合物14以100mg/kg(一天兩次)顯示出57％的腫瘤生長抑制(tgi)，化合物2以200mg/kg(一天兩次)未顯示出tgi。在類似的大鼠異種移植研究中，分別與溶媒對照相比，化合物2顯示出87％的tgi，并且化合物14顯示出53％的tgi。某些化合物的代謝活性使用nadph再生系統(tǒng)和標(biāo)準(zhǔn)方案用肝微粒體測定某些化合物的代謝活性。簡言之，將化合物與分離的人肝微粒體、大鼠肝微粒體、犬肝微粒體或小鼠肝微粒體孵育。通過在96孔板中加入nadph再生系統(tǒng)(β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸酯；異檸檬酸和異檸檬酸脫氫酶)開始反應(yīng)。在5分鐘、10分鐘、20分鐘、30分鐘和60分鐘用冷丙烯腈淬滅反應(yīng)，搖動并在4000rpm下離心20分鐘。使用具有l(wèi)c：shimadzulc20-ad、ms：api4000，自動進(jìn)樣器：ctcpal的lc/ms/ms分析含有檢測到的分析物化合物的上清液；使用的柱子包括chiralpakas-rh150*4.6mm，5μm部件號：asrhcd-kk008和ace5phenyl，50×2.1mm，部件號ace-125-0502。數(shù)據(jù)分析：使用一級動力學(xué)方程計算t1/2和cl：ct＝c0*e-kt；ct＝(1/2)*c0；t1/2＝in2/k＝0.693/k；cl＝vd*k；且vd＝2ml/mg。表5至表8匯總了結(jié)果。在表5至表8中：r2是確定動力學(xué)常數(shù)的線性回歸的相關(guān)系數(shù)；t1/2是半衰期；ncf表示沒有輔因子。表5表6表7表8某些化合物的代謝穩(wěn)定性用人肝微粒體和人肝細(xì)胞測定某些化合物的半衰期和清除率。將化合物在人肝微粒體(或人肝細(xì)胞)存在下，在95％濕度孵育箱中以5％co2孵育以開始反應(yīng)。在每個時間點(0分鐘、5分鐘、15分鐘、30分鐘、60分鐘、90分鐘)停止反應(yīng)、渦旋并離心。將上清液冷凍直至lc/ms/ms分析。人肝微粒體和人肝細(xì)胞的結(jié)果分別匯總于表9和表10中。表9表10在另一項研究中，檢查了來自各種物種的肝細(xì)胞中化合物的代謝。肝細(xì)胞與化合物接觸，并測定化合物的半衰期。結(jié)果匯總在表11中。表11用人肝微粒體(hlm)和人肝細(xì)胞測定某些化合物并檢測代謝物。簡言之，在一個ta濃度(例如1μm)下重復(fù)測試代謝穩(wěn)定性。在含nadph的hlm(0.5mg/ml)和不含nadph的hlm(0.5mg/ml)中于0分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘、30分鐘和45分鐘和在肝細(xì)胞(0.5×106個細(xì)胞/ml)中于0分鐘、15分鐘、30分鐘、60分鐘、120分鐘和240分鐘時評估測試物隨時間的損失。包括陽性對照(雙氯芬酸)和陰性對照(煮沸的hlm或熱滅活的肝細(xì)胞)。在與測試物相似的孵育時間監(jiān)測雙氯芬酸，而在hlm中于0分鐘和45分鐘和在肝細(xì)胞中于0分鐘和240分鐘測量陰性對照。將孵育物保存并用于代謝物鑒定(使用lc/ms/ms)。使用時間＝0時的峰面積比值作為100％，將母體分析物/內(nèi)標(biāo)峰面積比轉(zhuǎn)化為剩余藥物百分比。通過線性回歸擬合確定剩余百分?jǐn)?shù)的對數(shù)與孵育時間關(guān)系的線性回歸斜率(-k)。從單獨的剩余百分?jǐn)?shù)的對數(shù)時間曲線中，報告平均半衰期和內(nèi)在清除率。對真實的測試物進(jìn)行uhplc-hrms或uhplc-ms/ms實驗，以檢查可能的常見碎片離子。使用選自0分鐘、10分鐘、20分鐘和45分鐘等份試樣的微粒體樣品，以及0分鐘、60分鐘、120分鐘和240分鐘等份試樣的肝細(xì)胞孵育物，用于初步代謝物鑒定?；谄滟|(zhì)譜峰面積總結(jié)代謝物。表12、表13和表14分別匯總了化合物1、化合物12和化合物7的結(jié)果。表12表13表14某些化合物的藥代動力學(xué)測定用于靜脈施用和口服施用的某些化合物在體內(nèi)的某些藥代動力學(xué)參數(shù)。簡言之，配制化合物且使用靜脈推注、連續(xù)靜脈輸注或口服施用來施用該化合物。在24小時內(nèi)的多個時間點收集血液，并加工成血漿。對于母體，使用lc/ms/ms對血漿進(jìn)行分析。重復(fù)一次，獲得某些化合物的某些參數(shù)。表15匯總了化合物14在大鼠或犬中連續(xù)輸注研究的結(jié)果。表16匯總了balb/c小鼠或spraguedawley大鼠研究的結(jié)果。表15表16雖然已經(jīng)在附圖和前述描述中詳細(xì)地說明和描述了本公開，但是這樣的說明和描述將被認(rèn)為是說明性的或示例性的而不是限制性的。本公開不限于所公開的實施方式。本領(lǐng)域技術(shù)人員通過研究附圖、公開內(nèi)容和所附權(quán)利要求，實踐所要求保護(hù)的公開，可以理解和實現(xiàn)對所公開的實施方式的變化。本文引用的所有參考文獻(xiàn)通過引用其整體并入本文。在通過引用并入的出版物和專利或?qū)＠暾埮c說明書中包含的公開內(nèi)容相矛盾的范圍內(nèi)，本說明書旨在取代和/或優(yōu)先于任何這種矛盾的材料。除非另有定義，否則對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言，所有術(shù)語(包括技術(shù)術(shù)語和科學(xué)術(shù)語)將被賦予它們的一般含義和通常含義，并且不限于特殊含義或自定義的含義，除非在本文中明確定義。應(yīng)當(dāng)注意，在描述本公開的某些特征或方面時使用特定術(shù)語不應(yīng)被認(rèn)為意味著該術(shù)語在本文中被重新定義為限制于包括與該術(shù)語相關(guān)的本公開的特征或方面的任何具體特征。在提供值的范圍的情況下，可以理解，上限和下限以及該范圍的上限和下限之間的每個中間值包含在實施方式之內(nèi)。本申請中使用的術(shù)語和短語及其變型，特別是在所附權(quán)利要求中，除非另有明確說明，否則應(yīng)解釋為開放性的，而不是限制性的。作為上述的示例，術(shù)語“包括(including)”應(yīng)被理解為“包括，無限制地”、“包括但不限于”等；本文使用的術(shù)語“包含(comprising)”與“包括(including)”、“含有(containing)”或“以…為特征”同義，并且是包容性的或開放性的，并且不排除另外的、未被引用的元素或方法步驟；術(shù)語“具有(having)”應(yīng)被解釋為“至少具有”；術(shù)語“包括(includes)”應(yīng)被解釋為“包括但不限于”；術(shù)語“實施例”用于提供討論中的項目的示例性實例，不是其詳盡的或限制性的清單；形容詞例如“已知的(known)”、“正常的(normal)”、“標(biāo)準(zhǔn)的(standard)”和類似含義的術(shù)語，不應(yīng)被解釋為將描述的項目限制在給定時間段內(nèi)或者在給定時間內(nèi)可用的項目，而應(yīng)該被理解為包括現(xiàn)在或在將來的任何時間可用或被得知的已知、正?；驑?biāo)準(zhǔn)的技術(shù)；并且使用術(shù)語例如“優(yōu)選地”、“可優(yōu)選的”、“期望的(desired)”或“需要的(desirable)”以及具有相似意義的詞語，不應(yīng)被理解為暗示某些特征對于本發(fā)明的結(jié)構(gòu)或功能是關(guān)鍵的、必要的或甚至重要的，而是僅僅旨在突出在本發(fā)明的特定實施方式中可以使用或可以不使用的替代特征或附加特征。同樣地，用連詞“和”連接的一組項目不應(yīng)被理解為要求這些項目中的每一個都存在于組中，而應(yīng)該被理解為“和/或”，除非另有明確說明。同樣，用連詞“或”連接的一組項目不應(yīng)被理解為要求該組之間相互排他性，而應(yīng)被理解為“和/或”，除非另有明確說明。對于本文中使用的基本上任何復(fù)數(shù)術(shù)語和/或單數(shù)術(shù)語，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以從復(fù)數(shù)轉(zhuǎn)換為單數(shù)和/或從單數(shù)轉(zhuǎn)換為復(fù)數(shù)，只要對上下文和/或應(yīng)用是合適的。為了清楚起見，可以在本文明確闡述各種單數(shù)/復(fù)數(shù)排列。不定冠詞“一個(a)”或“一個(an)”不排除多個。在相互不同的從屬權(quán)利要求中記載某些措施的事實并不表示這些措施的組合不能有利地使用。權(quán)利要求中的任何引用標(biāo)記不應(yīng)被解釋為限制范圍。本領(lǐng)域技術(shù)人員將進(jìn)一步理解，如果意圖敘述一個引用的權(quán)利要求的具體數(shù)量，這種意圖將在權(quán)利要求書中明確地敘述，并且在沒有這種敘述的情況下，不存在這樣的意圖。例如，作為對理解的幫助，以下所附權(quán)利要求可以含有介紹性短語“至少一個”和“一個或多個”的使用，以引入權(quán)利要求的敘述。然而，這些短語的使用不應(yīng)被解釋為意味著通過不定冠詞“一個(a)”或“一個(an)”引入權(quán)利要求敘述將含有這樣引入的權(quán)利要求敘述限制在僅包含一個這種敘述的實施方式，即使該同一權(quán)利要求包括介紹性短語“一個或多個”或“至少一個”以及不定冠詞例如“一個(a)”或“一個(an)”(例如，“一個(a)”和/或“一個(an)”通常應(yīng)該被解釋為意味著“至少一個“或”一個或多個“)；對于用于引入權(quán)利要求的敘述的定冠詞的使用也是如此。此外，即使明確地敘述了引入的權(quán)利要求敘述的特定數(shù)量，本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到，這種敘述通常應(yīng)被解釋為至少表示所敘述的數(shù)字(例如，“兩個敘述”的簡單描述，沒有其他修飾，通常意味著至少兩個敘述，或兩個或更多個敘述)。此外，在使用類似于“a，b和c等中的至少一個”的慣例的那些情況下，通常這種闡述意圖以本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解該慣例的意義(例如，“具有a、b和c中的至少一個的體系”將包括但不限于只具有a、只具有b、只具有c、a和b一起、a和c一起、b和c一起、和/或a、b和c一起等的系統(tǒng))。在使用類似于“a、b或c等中的至少一個”的慣例的那些情況下，通常這種闡述意圖以本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解該慣例的意義(例如“具有a、b或c中的至少一個的體系”將包括但不限于只具有a、只具有b、只具有c、a和b一起、a和c一起、b和c一起、和/或a、b和c一起等的系統(tǒng))。本領(lǐng)域技術(shù)人員將進(jìn)一步理解，實際上，無論在說明書、權(quán)利要求書或附圖中，呈現(xiàn)出兩個或更多個替代術(shù)語的任何轉(zhuǎn)折性詞語和/或短語應(yīng)被理解為考慮包括術(shù)語之一、任何一個術(shù)語，或兩個術(shù)語的可能性。例如，短語“a或b”將被理解為包括“a”或“b”或“a和b”的可能性。在本說明書中使用的表示成分的量、反應(yīng)條件等的所有數(shù)字將被理解為在所有情況下都被術(shù)語“約”修飾。因此，除非另有指示，否則本文指出的數(shù)值參數(shù)是近似值，其可以根據(jù)尋求獲得的期望性質(zhì)而變化。至少且并不是試圖限制等同原則對于在要求本申請優(yōu)先權(quán)的任何申請中的任何權(quán)利要求的范圍的應(yīng)用性，每個數(shù)值參數(shù)應(yīng)根據(jù)有效數(shù)字的數(shù)量和普通的四舍五入方法來解釋。此外，雖然為了清楚和理解的目的，已經(jīng)通過說明和實施例詳細(xì)地描述了上述內(nèi)容，但是對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是可以進(jìn)行某些改變和修改。因此，該描述和實施例不應(yīng)被解釋為將本發(fā)明的范圍限制于本文所描述的具體實施方案和實施例，而是還涵蓋與本發(fā)明的真實范圍和精神相關(guān)的所有修改和替代。當(dāng)前第1頁12